THUYẾT MINH ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐẶT VẤN ĐỀ Cefuroxim là một kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin, được chứng minh là tương đối an toàn, được sử dụng rộng rãi trong điều trị những bệnh nhiễm trùn[.]
ĐẶT VẤN ĐỀ Cefuroxim kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin, chứng minh tương đối an toàn, sử dụng rộng rãi điều trị bệnh nhiễm trùng vi khuẩn gram dương vi khuẩn gram âm kể chủng vi khuẩn sản sinh betalactamase gây Cefuroxim thường định sử dụng nhiễm khuẩn hô hấp dưới/ trên; nhiễm khuẩn niệu, sinh dục; nhiễm khuẩn da mô mềm Bột pha hỗn dịch dạng thuốc có nhiều ưu điểm Vì dạng bào chế rắn nên dễ phân liều xác, dễ vận chuyển, bảo quản, khắc phục tính bền số dược chất điều chế dạng lỏng, đặc biệt kháng sinh Khi sử dụng, bột phân tán vào chất lỏng thích hợp (thường nước) nên dạng chế phẩm thích hợp cho trẻ em bệnh nhân khó uống thuốc dạng rắn Bào chế bột để pha hỗn dịch kỹ thuật tương đối đơn giản so với kỹ thuật bào chế dạng thuốc rắn khác Tuy nhiên, cefuroxim chất có vị đắng kéo dài, khó uống dạng lỏng phân tán thành hỗn dịch Vì vậy, nhà bào chế phải có biện pháp kỹ thuật để che vị đắng khó chịu phải đảm bảo yêu cầu mặt kiểm nghiệm có sinh khả dụng cao để đảm bảo hiệu trị liệu thuốc, giá thành phù hợp đáp ứng nhu cầu thuốc trị bệnh Trong trình điều chế, vị đắng cefuroxim khắc phục độ hịa tan thuốc bị ảnh hưởng, vậy, hấp thu thuốc bị ảnh hưởng [19], [20] Đề tài thực nhằm giải tình trạng nghĩa điều chế bột cefuroxim đắng đảm bảo mặt hòa tan hấp thu Những tá dược che vị đắng dùng nhiều nước Việt Nam việc ứng dụng tá dược Nếu kết nghiên cứu đạt dự kiến tạo chế phẩm trị bệnh với chất lượng cao, góp phần làm phong phú dạng thuốc sản xuất nước, đặc biệt dạng thuốc dùng cho trẻ em Mục tiêu đề tài nghiên cứu xây dựng công thức qui trình bào chế bột cefuroxim pha hỗn dịch uống đắng, đạt sinh khả dụng cao (so sánh với thuốc đối chiếu Zinnat GlaxoSmithkline) có tuổi thọ năm Nội dung thực hiện: Xây dựng qui trình định lượng cefuroxim chế phẩm dịch sinh học Xây dựng cơng thức, qui trình bào chế bột cefuroxim pha hỗn dịch uống Xây dựng tiêu chuẩn sản phẩm Nâng cấp cỡ lô từ lô qui mô labo lên qui mô pilot (10 kg thành phẩm tương ứng 3000 gói thuốc bột cefuroxim) Theo dõi độ ổn định, xác định tuổi thọ thuốc Đánh giá sinh khả dụng so sánh với Zinnat 1 TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỘC LĨNH VỰC CỦA ĐỀ TÀI 1.1.1 TÌNH HÌNH NGỒI NƯỚC Cefuroxim axetil este ethyl cefuroxim có tên khoa học (RS)-1hydroxyethyl (6R,7R)-7-[2-(2-furyl)glyoxyl-amido]-3-(hydroxymethyl)-8-oxo-5- thia-1-azabicyclo[4.2.0]-oct-2-ene-2-carboxylate,7-(Z)-(O-methyl-oxime),1-acetate 3-carbamate, cơng thức phân tử: C20H22N4O10S Bột tinh thể trắng, không mùi, vị đắng Tan alcol, tan nước Cefuroxim kháng sinh diệt khuẩn thuộc nhóm cephalosporin, khơng bị tác động hoạt tính hầu hết betalactamase, ưu điểm lớn cefuroxim Cơ chế tác động cefuroxim ức chế sinh tổng hợp màng tế bào vi khuẩn cách gắn kết vào protein đích thiết yếu [15] Dạng muối cefuroxim axetil hấp thu tốt qua đường tiêu hóa Sau uống, cefuroxim axetil hấp thu bị thủy phân niêm mạc ruột máu để giải phóng cefuroxim Cefuroxim axetil hấp thu tốt uống sau bữa ăn [9], [11] Chế phẩm dạng rắn chứa cefuroxim axetil nhiều hảng dược phẩm giới sản xuất phân phối, chẳng hạn, Viên nén CEFTIN 250 mg 500 mg (Glaxo), hỗn dịch CEFTIN 125 mg/ ml (Glaxo), bột pha hỗn dịch ZINNAT 125 mg (Glaxo), CEFUROXIME tablets, CEFUROXIME for Oral Suspension, Hiệu lâm sàng đặc điểm dược động học chế phẩm đánh giá 1.1.2 TÌNH HÌNH TRONG NƯỚC Chế phẩm dạng rắn chứa cefuroxim axetil số sở dược nước sản xuất viên Zinmax 250 mg 500 mg (Domesco), bột Zinmax 125 mg (Domesco), bột Quincef 125 mg (Mekophar), bột Haginat (Hậu Giang), Tuy nhiên, vấn đề mà sở đối mặt độ hòa tan chế phẩm bột pha hỗn dịch uống 1.2 TỔNG QUAN VỀ CEFUROXIM Công thức phân tử : C20H22N4O10S Khối lượng phân tử : 510,48 Công thức hóa học : Hình 1.1 Cơng thức hóa học cefuroxim axetil 1.2.1 TÍNH CHẤT Cefuroxim axetil hỗn hợp đồng phân quang học không đối quang (đồng phân A B) Bột trắng, tan hoàn toàn aceton; tan chloroform, ethyl acetat, methanol; không tan ether nước 1.2.2 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ Cefuroxim axetil tiền chất cefuroxim, kháng sinh nhóm cephalosporin hệ thứ Cefuroxim ức chế tổng hợp thành tế bào vi khuẩn, kể vi khuẩn đề kháng với beta-lactamase, có phổ kháng khuẩn rộng (tác động hầu hết vi khuẩn gram dương mở rộng sang vi khuẩn gram âm) Cefuroxim có hoạt tính với vi khuẩn sau: Vi khuẩn hiếu khí, gram âm: Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Klebsiella spp, Neisseria gonorrhoeae, Proteus mirabilis, Procidencia sp, Proteus rettgeri, Haemophilus parainfluenzae, Branhamella catarrhalis, Moraxella catarrhalis, Borrelia burgdorferi, Providencia rettgeri Vi khuẩn hiếu khí, gram dương: Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae Vi khuẩn kỵ khí: cầu khuẩn gram dương gram âm (gồm Peptococcus Peptostreptococcus spp.) Trực khuẩn gram dương bao gồm Clostridium sp trực khuẩn gram âm bao gồm Bacteroides Fusobacterium spp Những vi khuẩn không nhạy cảm với cefuroxime: Clostridium difficile, Pseudomonas sp, Campylobacter sp, Acinetobacter calcoacetinus, chủng đề kháng methicilline Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis, Streptococcus faecalis, Morganella morganii, Proteus vulgaris, Enterobacter sp, Citrobacter sp, Serratia sp, Bacteroides fragilis [9], [36] 1.2.3 DƯỢC ĐỘNG HỌC Sau uống cefuroxim axetil hấp thu qua đường tiêu hóa nhanh chóng bị thủy phân niêm mạc ruột máu để phóng thích cefuroxim Phần axetil bị chuyển hóa thành acetaldehyd acid acetic Thuốc hấp thu tốt uống bữa ăn (sinh khả dụng tuyệt đối cefuroxim axetil dạng viên nén tăng khoảng 37-52%) Nồng độ tối đa huyết (2-3 mg/ l cho liều 125 mg; 4-6 mg/ l cho liều 250 mg; 5-8 mg/ l cho liều 500 mg 9-14 mg/ l cho liều 1g) đạt vào khoảng 2-3 sau uống thuốc bữa ăn Thời gian bán hủy huyết từ 1-1,5 AUC từ 6,7-50 μg.h/ ml Mức độ gắn kết với protein thể khác từ 3350% tùy theo phương pháp dùng [9] Cefuroxim đào thải qua nước tiểu dạng không đổi, người lớn gần 50% liều dùng tìm thấy nước tiểu khoảng 12 Thời gian bán thải kéo dài bệnh nhân suy thận 1.2.4 PHẢN ỨNG PHỤ Dị ứng thuốc, từ ban đỏ đến sốc phản vệ Tuy nhiên, phản ứng gặp so với penicilin Độc thận: viêm thận kẽ, hoại tử ống thận Buồn nơn, ói mửa, tiêu chảy, đau bụng, viêm lưỡi, khó tiêu Cần theo dõi phản ứng dị ứng, chức thận, số lượng tiểu cầu, bội nhiễm 1.2.5 CHỈ ĐỊNH Cefuroxim thường định trường hợp sau: Nhiễm trùng xương khớp, nhiễm trùng da, nhiễm trùng đường tiết niệu nhiễm trùng khác đường hô hấp dưới, lậu Viêm màng não, viêm tai giữa, viêm họng, viêm xoang, viêm phế quản cấp mạn, viêm phúc mạc Mụn nhọt, mủ da, chốc lở Dự phòng nhiễm trùng phẫu thuật 1.2.6 CHỐNG CHỈ ĐỊNH Quá mẫn với cephalosporin penicilin 1.2.7 MỘT SỐ CHẾ PHẨM CHỨA CEFUROMIM Chế phẩm Hàm lượng Dạng dùng Nhà sản xuất Doroxime 125 mg 250 mg 500 mg 125 mg 125 mg 125 mg 125 mg 250 mg 500 mg 125 mg 125 mg 250 mg 500 mg 500 mg 250 mg 500 mg 125 mg 250 mg 250 mg 500 mg 250 mg 500 mg Viên nén bao phim Viên nén bao phim Viên nén bao phim Bột pha hỗn dịch uống Bột pha hỗn dịch uống Bột pha hỗn dịch uống Viên nén Viên nén Viên nén Bột pha hỗn dịch uống Bột pha hỗn dịch uống Viên nén bao phim Viên nén bao phim Viên nén Viên nén bao phim Viên nén bao phim Viên nén Viên nén Viên nén Viên nén Viên nén bao phim Viên nén bao phim Domesco HG.Pharm Mekophar Vidipha GlaxoSmithKline GlaxoSmithKline Tenamyd Canada Pymepharco/Stada Ranbaxy Pymepharco Sandoz - Zinmax Haginat Quincef Zaniat Zinnat Ceftin Cefurobiotic Cefuroxim Stada Ceroxim Negacef Xorimax 1.3 TỔNG QUAN VỀ THUỐC BỘT Thuốc bột dạng thuốc rắn, gồm hạt nhỏ, khô tơi, có độ mịn xác định, có chứa hay nhiều hoạt chất Ngồi hoạt chất, thuốc bột cịn có thêm tá dược chất tạo hương, vị, chất màu, tá dược độn, … Thuốc bột dùng để uống, tiêm dùng ngồi Thuốc bột để uống sử dụng sau hòa tan phân tán nước chất lỏng thích hợp Thuốc nuốt trực tiếp Thuốc bột để uống trình bày theo chế phẩm liều hay chế phẩm nhiều liều Thuốc bột dạng bào chế có nhiều ưu điểm, trước hết nói kỹ thuật điều chế thuốc bột đơn giản, khơng địi hỏi trang thiết bị phức tạp, dễ đóng gói vận chuyển Điểm quan trọng thuốc bột thích hợp với trẻ em người lớn tuổi, đối tượng khó uống thuốc dạng viên nén hay viên nang Do dạng rắn nên xảy tương kỵ hóa học thành phần, đó, phối hợp nhiều loại dược chất khác công thức, bền vững mặt hóa học chế phẩm dạng lỏng Ngồi thuốc bột để uống chế phẩm tan nước cịn có ưu điểm có tốc độ hịa tan nhanh thuốc viên nén hay viên nang Tuy nhiên, thuốc bột dạng bào chế khơng thích hợp với dược chất có mùi vị khó chịu, dược chất bị hoạt tính mơi trường dày Để điều chế thuốc bột áp dụng phương pháp trộn đơn giản phương pháp tạo hạt (xát hạt khô, xát hạt ướt, ) Phương pháp trộn đơn giản: Nguyên liệu ban đầu nghiền, trộn, đóng gói, không qua giai đoạn tạo hạt Phương pháp đơn giản, dễ thực Tuy nhiên, hỗn hợp bột điều chế phương pháp có độ chảy thấp, dễ bay bụi, khó đóng gói Phương pháp xát hạt khơ: Nghiền mịn rây hoạt chất tá dược để có độ mịn thích hợp Hoạt chất, tá dược độn tồn phần phần tá dược dính, rã dạng bột trộn đến đồng Nếu bột khó chảy phối hợp phần tá dược trơn vào giai đoạn Ép qua trục để tạo “bánh viên” dập viên tạm thời nhằm làm dính tiểu phân bột thành khối Nghiền tạo hạt, rây qua rây thích hợp Trộn nhẹ nhàng hạt với tá dược trơn chảy (nếu cần) Phương pháp xát hạt ướt: Chuẩn bị nguyên liệu trộn bột kép, làm ẩm hỗn hợp bột tá dược dính lỏng Cũng sử dụng tá dược dính dạng bột trộn đồng với thành phần khác công thức phun từ từ dung môi (nước, cồn, ) đủ tạo khối ẩm Khối bột ẩm ép qua cỡ rây thích hợp để tạo cốm Cốm làm khô cách sấy tĩnh tủ sấy sấy tầng sơi nhiệt độ thích hợp Cốm sau làm khô đến độ ẩm định sửa hạt trộn hoàn tất với tá dược cịn lại Ngồi phương pháp xát hạt nêu cịn có phương pháp tạo hạt khác tạo hạt sấy phun sương, tạo hạt nhiệt nóng chảy tá dược, … Nguyên tắc phương pháp tạo hạt sấy phun sương dùng máy sấy phun sương để làm hạt Hoạt chất tá dược hòa tan hay phân tán thành hỗn hợp dịch với nồng độ thích hợp sấy khơ tạo hạt qua thiết bị sấy phun sương Hạt thuốc đạt kích thước đồng nhất, có dạng cầu, chảy tốt Áp dụng cho hoạt chất ổn định enzym, dịch chiết dược thảo, Nguyên tắc phương pháp tạo hạt nhiệt nóng chảy tá dược lợi dụng tính chất nước kết tinh sấy đun tới nhiệt độ thích hợp tạo thành khối ẩm tá dược ngậm nước kết tinh Khối ẩm ép qua rây để tạo hạt Các acid dùng viên sủi bọt (acid citric, acid tartric, …) áp dụng phương pháp nhiệt độ khoảng 95 – 115% Về tá dược điều chế thuốc bột, ngồi hoạt chất thành phần thuốc bột cịn có nhiều loại tá dược Tá dược độn hay pha lỗng làm tăng thể tích, khối lượng hạt pha lỗng trường hợp dược chất có hoạt tính mạnh Các tá dược độn thường dùng tinh bột, tinh bột biến tính, lactose, glucose, saccharose, mannitol, sorbitol, cellulose, … Tá dược dính giúp cho tiểu phân rắn liên kết lại với tạo thành hạt có độ cứng thích hợp Tá dược dính dùng dạng bột mịn pha thành dung dịch hỗn dịch Một số tá dược dính thơng dụng gôm arabic, hồ tinh bột, gelatin, methyl cellulose, polyvinyl pyrrolidon, … Tá dược trơn làm tăng lưu tính hạt, giúp đạt độ đồng khối lượng Một số tá dược trơn thường dùng talc, aerosil, acid boric, magnesi stearat, calci stearat, Tá dược màu tạo hình thức đẹp, hấp dẫn cho sản phẩm Các chất màu dùng màu thiên nhiên, màu vô cơ, màu hữu tổng hợp (tan nước không tan nước) Tá dược mùi sử dụng để che lấp mùi không dễ chịu hoạt chất chất có lưu huỳnh, chế phẩm acid amin, số kháng sinh, … dùng phối hợp với chất màu, chất điều vị để tạo hiệu hấp dẫn người dùng Các chất thơm từ thiên nhiên hay tổng hợp tinh dầu (bạc hà, cam, chanh, dâu, …) vanilin, mùi cacao, mùi chocola, … Kỹ thuật điều chế thuốc bột ngày không đơn giản trộn hoạt chất với tá dược theo cách thông thường, phải qua giai đoạn xử lý để làm tăng độ tan hoạt chất, tăng độ ổn định hoạt chất, che vị đắng hoạt chất,… 1.4 TỔNG QUAN VỀ NHỮNG PHƯƠNG PHÁP CHE VỊ ĐẮNG Vị đắng thuốc nguyên nhân khiến người bệnh không tuân thủ điều trị Đối với dạng thuốc dùng cho người lớn, việc che vị đắng thuốc tương đối đơn giản Thuốc điều chế dạng viên nén bao đường bao phim hay đóng vào nang cứng Đối với trẻ em - đối tượng sợ khó uống thuốc, thuốc thường điều chế dạng lỏng bột pha dung dịch hay hỗn dịch uống Do đó, việc xử lý vị đắng thuốc thách thức nhà bào chế kỹ thuật xử lý vị đắng thuốc thường ảnh hưởng đến tính chất chế phẩm, đặc biệt độ hòa tan thuốc Dưới số kỹ thuật thường áp dụng để che vị đắng thuốc - Kỹ thuật bao: Bao kỹ thuật hữu ích nhiều ứng dụng lĩnh vực dược phẩm Bằng cách phối hợp nhiều chất bao thích hợp che hồn tồn vị đắng thuốc khơng ảnh hưởng nhiều đến độ hịa tan thuốc Bất kỳ polyme khơng độc, có độ tan thích hợp chấp nhận sử dụng việc che vị đắng Nhiều nguyên liệu bao có tính trơ tinh bột, povidon, gelatin, acid stearic, methylcellulose, ethylcellulose, … sử dụng để bao tiểu phân dược chất Một phương pháp bao hiệu kỹ thuật tầng sơi Bột có kích thước tiểu phân khoảng 50 μm “thổi” buồng sấy nhờ luồng khí nén có gia nhiệt, tiểu phân dược chất bao cách phun dịch bao từ xuống Hạt làm khơ khơng khí nóng - Tạo phức bắt giữ: phân tử dược chất gắn vào khoang rỗng tác nhân tạo phức Tác nhân tạo phức che vị đắng thuốc cách làm giảm độ tan thuốc uống làm giảm lượng tiểu phân dược chất tiếp xúc trực tiếp với nơi cảm nhận vị đắng Beta-cyclodextrin tác nhân tạo phức “bắt giữ” sử dụng phổ biến Đối với beta-cyclodextrin, áp dụng phương pháp trộn khô, trộn ướt, đồng kết tủa,… để tạo phức với dược chất Những phương pháp tương đối đơn giản, dễ ứng dụng triển khai - Tạo phức phân tử thuốc chất hóa học khác: Tính tan hấp thu thuốc thay dổi cách tạo phức phân tử Việc tạo phức phân tử làm giảm tính tan thuốc nên làm giảm cường độ đắng thuốc Higuchi Pitman báo cáo cafein tạo phức với acid hữu tan xanthan, dùng để làm giảm tính đắng cafein - Tạo hệ phân tán rắn: Phân tán rắn phân tán hay nhiều hoạt chất vào chất mang hay khung trơ trạng thái rắn điều chế phương pháp dung mơi nóng chảy hay dung môi khuếch tán Hệ phân tán rắn gọi đồng kết tủa phương pháp thực phương pháp dung môi, chẳng hạn, đồng kết tủa sulphathiazole povidone Tạo hệ phân tán rắn cách dùng khung không tan khung trắng áp dụng để che vị đắng thuốc Chúng sử dụng chất mang làm tăng độ ổn định số thuốc - Vi nang hóa: Theo Bokan, vi nang hóa phương pháp bao tiểu phân rắn, giọt chất lỏng kích thước nhỏ Phương pháp ứng dụng để che vị đắng thuốc Những tá dược dùng bao gồm: gelatin, povidon, HPMC, EC, sáp ong, sáp carnauba, acrylics shellac Thuốc có vị đắng bao lại tạo thành vi nang chảy tự Những vi nang trộn với tá dược khác để dập thành viên nén đóng vào nang cứng Việc vi nang hóa thực phương pháp nhỏ giọt đông tụ (coacervation), tách pha (phase separation), phun sương, dùng nồi bao, bay dung môi, kỹ thuật ly tâm có vịi phun (multiorifice centrifugation techniques) - Sử dụng lyposome: Cách khác để che vị đắng thuốc bắt giữ chúng vào lyposome Thí dụ: việc gắn giữ vào lyposome điều chế từ phosphatidyl choline trứng môi trường đệm pH 7.2 che vị đắng chloroquine phosphate - Tạo tiền dược: Tiền dược thuốc ban đầu biến đổi cấu trúc hóa học khơng có tác dụng Tiền dược biến đổi dịch sinh học để giải phóng thuốc gốc có tác dụng trị liệu Việc tạo tiền dược cải thiện vị thuốc Thí dụ chloramphenicol palmitat tiền dược chloramphenicol, triamcinolon diacetat tiền dược triamcinolon - Dùng nhựa trao đổi ion: Một phương pháp che vị đắng phổ biến khác dùng nhựa trao đổi ion Nhựa trao đổi ion chất rắn đa điện giải phân tử lượng cao khơng hịa tan trao đổi ion hoạt động chúng với môi trường xung quanh để cân điện tích Sự trao đổi ion thuận nghịch tỉ lượng với thay ion với ion khác Nhựa trao đổi ion tổng hợp dùng nhiều ngành y dược để che vị kiểm sốt phóng thích thuốc từ năm 1950 Là polyme phân tử lượng cao không tan nước nên nhựa chất trơ không hấp thu Tính an tồn lâu dài nhựa trao đổi ion sử dụng liều lớn, chẳng hạn, dùng cholestyramine để giảm cholesterol ưu điểm lớn nhựa trao đổi ion, tác động nhóm chức mang điện tích (-) (+) công vào khung (backbone) polyme không tan nước Sực hấp phụ thuốc có vị đắng nhựa trao đổi ion tổng hợp để đạt hiệu che vị chứng minh Nhựa trao đổi ion Amberlite CG 50 sử dụng để che vị đắng pseudoephedrin viên nhai chống nghẹt mũi 10 Bảng 3.60 Tóm tắt kết thơng số dược động học thuốc bột nghiên cứu đối chiếu (Zinnat) Thông số dược động học Thuốc bột nghiên cứu Thuốc bột zinnat TB ± SD Khoảng (min-max) TB ± SD Khoảng (min-max) Cmax (μg/ ml) 3,093 ± 0,600 2,21-4,32 2,387 ± 0,571 1,49-3,72 AUC0-8 (μg.giờ/ ml) 10,008 ± 2,106 6,55-14,02 8,731 ± 1,629 6,60-11,78 AUC0-∞ (μg.giờ/ ml) 10,356 ± 2,230 6,73-14,54 9,106 ± 1,704 6,75-12,18 Tmax (giờ) 1,458 ± 0,402 1,00-2,25 2,156 ± 0,802 1,00-5,00 T1/2 (giờ) 1,500 ± 0,202 1,07-1,91 1,488 ± 0,227 1,18-2,12 Ke 0,470 ± 0,07 0,36-0,65 0,475 ± 0,07 0,33-0,59 3.4.6 Phân tích thống kê Những thơng số sinh khả dụng phân tích phương sai để xác định nguồn ảnh hưởng đến kết thử nghiệm trình bày Bảng 3.61 Bảng 3.62 Kết phân tích phương sai cho thấy trình tự thử giai đoạn thử khơng ảnh hưởng đến kết thông số sinh khả dụng (Cmax, AUC0-8 AUC0-∞) cefuroxim cá thể (người tình nguyện) thuốc thử nghiệm ảnh hưởng rõ đến kết 87 Bảng 3.61 Giá trị dạng logarit thông số sinh khả dụng NTN 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 TB SD Ln Cmax Thuốc NC 1,064 1,145 1,396 0,801 0,831 1,064 0,823 1,462 1,363 0,996 1,063 1,140 1,084 1,313 1,131 1,383 1,248 1,042 0,949 0,981 0,791 1,265 1,109 1,225 1,111 0,194 Zinnat 0,766 0,933 1,191 0,401 0,436 0,943 0,558 1,314 1,247 0,950 0,780 0,837 0,792 0,738 0,729 1,131 1,058 0,647 0,657 0,943 0,730 0,875 0,786 0,804 0,844 0,233 Ln AUC0-8 Thuốc NC 2,461 2,191 2,527 1,879 2,180 2,047 1,933 2,528 2,480 2,257 1,980 2,054 2,112 2,388 2,327 2,641 2,534 2,423 2,347 2,258 2,019 2,418 2,493 2,273 2,281 0,217 Ln AUC0-∞ Zinnat 2,084 2,346 2,466 1,907 2,060 1,949 2,010 2,449 2,352 2,359 2,068 2,052 1,887 2,072 2,025 2,374 2,421 2,038 2,199 2,113 1,932 2,242 2,146 2,070 2,151 0,181 Thuốc NC 2,506 2,213 2,568 1,907 2,229 2,056 1,957 2,545 2,502 2,299 2,010 2,075 2,142 2,415 2,366 2,677 2,598 2,477 2,373 2,284 2,062 2,466 2,530 2,292 2,314 0,222 Zinnat 2,123 2,420 2,500 1,969 2,126 1,967 2,039 2,467 2,373 2,409 2,119 2,076 1,910 2,108 2,073 2,407 2,474 2,095 2,265 2,180 1,960 2,291 2,181 2,093 2,193 0,183 Bảng 3.62 Kế phân tích phương sai thơng số sinh khả dụng Thông số Cmax AUC0-8 AUC0-∞ Nguồn biến thiên Thuốc Cá thể Giai đoạn trình tự Thuốc Cá thể Giai đoạn Trình tự Thuốc Cá thể Giai đoạn trình tự Tổng bình phương 0,859 1,903 0,0148 0,0002 0,204 1,563 0,110 0,027 0,1780 1,6024 0.177 0,0334 Bậc tự 23 1 23 1 23 1 Bình phương trung bình 0,8592 0,0828 0,0148 0,0002 0,204 0,068 0,110 0,027 0,178 0,070 0,178 0,033 88 Giá trị thống kê P-value F crit 93,134 8,970 0,228 0,002 17,044 5,679 2,623 0,611 13.493 5,282 2,729 0,748 1,489.10-9 8,203.10-7 0,635 0,958 0,000409 0,000048 0,112 0,438 0,00124 0,00009 0,105 0,392 4,279 2,014 4,051 4,051 4,279 2,014 4,051 4,051 4,279 2,014 4,051 4,051 3.4.7 So sánh sinh khả dụng thuốc nghiên cứu đối chiếu Sinh khả dụng thuốc đánh giá theo phương pháp trắc nghiệm bên kép cách tính khoảng tin cậy 90% số liệu sinh khả dụng trung bình thu từ thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu Nếu khoảng tin cậy 90% giá trị trung bình thơng số sinh khả dụng nằm giới hạn 80-125% giá trị trung bình thông số sinh khả dụng (số liệu chuyển sang log) thuốc nghiên cứu xem tương đương sinh học với thuốc đối chiếu Kết khoảng tin cậy 90% thông số sinh khả dụng trình bày Bảng 3.63 Kết cho thấy khoảng tin cậy 90% giá trị AUC0-8 = 108,7 119,31% AUC0-∞ = 108,7 - 119,31% nằm khoảng 80-125%; khoảng tin cậy 90% Cmax = 124,53 - 136,96% nằm giới hạn Vậy giá trị AUC thuốc nghiên cứu tương đương với thuốc đối chiếu giá trị Cmax cefuroxim từ thuốc nghiên cứu (3,093±0,60 μg/ ml) cao từ thuốc đối chiếu (2,387±0,57 μg/ ml) Mặc dù, Cmax thuốc bột nghiên cứu cao thuốc bột đối chiếu không gây ảnh hưởng bất lợi cho người sử dụng thuốc giá trị nằm khoảng giá trị Cmax cefuroxim sử dụng liều dạng bào chế (4-6 μg/ ml) công bố [9], [35] Bảng 3.63 Kết khoảng tin cậy 90% giá trị trung bình thơng số sinh khả dụng Dữ liệu µt µc |μT - μC| t (0,05) S Cmax 1,111 0,844 0,267 1,717 0,096 N = 24 AUC0-8 2,281 2,151 0,130 1,717 0,094 AUC0-∞ 2,314 2,193 0,121 1,717 0,115 Khoảng tin cậy 90% Cmax AUC0-8 AUC0-∞ 124,53 136,96% 108,7 119,31% 106,6 119,48% Giá trị Tmax so sánh phương pháp thống kê phi tham số, kết trình bày Bảng 3.64 Kết phân tích thống kê cho thấy Tmax thuốc nghiên cứu (1,458 ± 0,40 giờ) ngắn Tmax thuốc bột zinnat (2,156 ± 0,80 giờ) khoảng 30 phút Điều giải thích thuốc bột nghiên cứu tan tốt 89 hai môi trường acid kiềm, sử dụng thuốc tan môi trường acid dày, sẵn sàng cho hấp thu xuống ruột Trong thuốc bột đối chiếu Zinnat xuống ruột tan hấp thu Bảng 3.64 So sánh giá trị Tmax theo phương pháp thống kê phi tham số NTN 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Tmax Thuốc NC 2,25 1,00 1,50 1,00 1,50 1,50 1,75 1,50 1,75 1,50 1,00 1,00 1,00 1,00 1,50 2,25 2,00 1,50 2,00 1,00 1,00 1,50 1,50 1,50 Chênh lệch Zinnat 2,25 1,00 2,00 3,50 5,00 1,50 1,50 2,00 2,25 1,50 2,00 2,00 1,50 2,00 1,50 2,00 2,25 3,00 3,00 1,75 1,75 2,00 2,50 2,00 + 0,50 2,50 3,50 0,50 0,50 1,00 1,00 0,50 1,00 - Thứ tự - 0,25 - 0,25 0,25 1,50 1,00 0,75 0,75 0,50 1,00 0,50 Tổng + 6,5 18 19 6,5 6,5 14 14 6,5 14 - - - 2 17 14 10,5 10,5 6,5 14 6,5 186 Giả thuyết: H0: Tmax thuốc bột nghiên cứu zinnat không khác có ý nghĩa HA: Tmax thuốc bột nghiên cứu zinnat khác có ý nghĩa T(+) = 186 T(-) = Ttest = (186; 4) = Tra bảng Wilcoxon ta T0,05 (19) = 46 ⇒ Ttest < T0,05, bác bỏ giả thuyết H0 Vậy Tmax thuốc thử thuốc đối chiếu khác có ý nghĩa thơng kê Tmax thuốc nghiên cứu ngắn thuốc đối chiếu 90 BÀN LUẬN 4.1 PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG 4.1.1 ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT TRONG CHẾ PHẨM Phương pháp định lượng cefuroxim chế phẩm thuốc viên, thuốc bột nêu dược điển Mỹ Tuy nhiên, qui trình định lượng phụ thuộc nhiều vào loại tá dược sử dụng chế phẩm, đặc biệt, cefuroxim chất có vị đắng điều chế dạng thuốc bột, nhà bào chế phải dùng tá dược để che vị đắng, tá dược ảnh hưởng nhiều đến qui trình kết định lượng Vì vậy, hai phương pháp định lượng cefuroxim xây dựng thẩm định Trong đó, phương pháp quang phổ tử ngoại (UV) áp dụng trình nghiên cứu, phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao áp dụng trình theo dõi độ ổn định thuốc Cả hai phương pháp đơn giản, xác, đạt yêu cầu cho việc định lượng cefuroxim chế phẩm Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp HPLC định lượng cefuroxim đạt tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu, độ tuyến tính khoảng nồng độ 10-100 µg/ ml, phương trình hồi qui có dạng yˆ = 53504,5x; P < 0,0005 (hệ số Bo = -8675,15 khơng có ý nghĩa, P = 0,695) Phương pháp đạt độ xác độ đúng; độ phân tán liệu CV% = 1% < 2%; tỉ lệ phục hồi nằm khoảng 98-102% (100,04%), độ lệch thực nghiệm B = 0,20% Phương pháp quang phổ tử ngoại (UV) Phương pháp UV đạt độ tuyến tính khoảng nồng độ 4-20 µg/ ml cho hai mơi trường acid hydrocloric 0,1N dệm phosphat pH 7, phương trình hồi qui yˆ = 0,049x; P < 0,0006 (hệ số Bo = -0,002 khơng có ý nghĩa, P = 0,618) cho môi trường acid yˆ = 0,050x; P < 0,0004 (hệ số Bo = 0,0008 khơng có ý nghĩa, 91 P = 0,93) cho môi trườn pH Phương pháp đạt độ xác độ đúng; độ phân tán liệu CV% = 0,84% (môi trường acid) 0,77% < 2% (môi trường pH 7); tỉ lệ phục hồi nằm khoảng 98-102% (100,51% 100,64%) Độ lệch thực nghiệm B = 0,57 0,56% 4.1.2 ĐỊNH LƯỢNG CEFUROXIM TRONG HUYẾT THANH Phương pháp định lượng Phương pháp HPLC với đầu dò UV xây dựng thẩm định qui định [40], [42], [43], [44], [45] Phương pháp đạt tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu cho việc định lượng cefuroxim huyết Phương pháp đạt độ tuyến tính khoảng nồng độ 0,125-6,250 µg/ ml, phương trình hồi qui có dạng yˆ = 0,272x; P < 0,0007 (hệ số Bo = -0,017 ý nghĩa, P = 0,385) Phương pháp đạt yêu cầu độ xác độ ngày ngày mức nồng độ (thấp, trung bình cao) (CV% nhỏ 10%, độ lệch thực nghiệm nhỏ 10%) Kết giá trị định lượng đạt ngày suốt q trình lưu trữ phân tích mẫu xác Độ phục hồi phương pháp lớn 80% Kết phân tích cefuroxim nồng độ 0,125 µg/ ml cho tín hiệu rõ, đạt độ xác độ theo qui định mẫu thử sinh học Vì vậy, nồng độ giới hạn định lượng phương pháp Độ ổn định mẫu dịch sinh học Độ ổn định sau chu kỳ đông-rã đông: Cefuroxim ổn định huyết sau chu kỳ đông - rã đơng nồng độ 0,375 µg/ ml (P = 0,213) µg/ ml (P = 0,390) Như sau rã đơng lý mẫu chưa phân tích nên giữ đông lại cho định lượng sau Độ ổn định ngắn hạn: So với nồng độ ban đầu, mẫu ổn định sau bảo quản nhiệt độ phịng cho nồng độ 0,375 µg/ ml (P = 0,238) µg/ ml 92 (P = 0,303) sau xử lý 12 (P = 0,754 cho nồng độ 0,375 µg/ ml; P = 0,207 cho nồng độ µg/ ml) Vậy mẫu ổn định khoảng thời gian phân tích ngày Độ ổn định dài hạn: So với nồng độ ban đầu, mẫu ổn định sau 45 ngày bảo quản -20 oC (P = 0,065 cho nồng độ 0,375 µg/ml P = 0,090 cho nồng độ µg/ml) Vậy mẫu ổn định khoảng thời gian tồn trữ phân tích 4.2 KỸ THUẬT BÀO CHẾ 4.2.1 XÂY DỰNG CƠNG THỨC Hai tá dược che vị (tá dược B S) khảo sát nhằm đánh giá khả che vị ảnh hưởng đến độ hòa tan thuốc Với tá dược B, thuốc bột cefuroxim đạt tất tiêu đề Đặc biệt độ đắng thuốc giảm đáng kể, gần khơng đắng Tuy nhiên, độ hịa tan thuốc đạt mức chất lượng (không 60%) cịn mức thấp (63,43%) Vì vậy, tá dược S nghiên cứu Cùng với tá dược S, tá dược T C đưa vào công thức nhằm cải thiện vị thuốc xem biến số cần khảo sát Mơ hình thực nghiệm 14 công thức thiết kế phần mềm Design Expert, tá dược S T khảo sát mức nồng độ, tá dược C mức nồng độ, tá dược khác giữ cố định ngoại trừ đường saccarose vừa đủ Mười bốn công thức điều chế điều kiện, đánh giá độ hòa tan độ đắng theo phương pháp chọn Công thức giá trị tối ưu dự đoán phần mềm INForm, kết phù hợp với kết thực nghiệm kiểm chứng 4.2.2 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG Những tiêu chất lượng đề cảm quan, độ đồng khối lượng, định tính, độ mịn, hàm lượng nước, pH, độ hòa tan hàm lượng hoạt chất Những phương pháp để đánh giá tiêu Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Tp HCM thẩm định phê duyệt Thành phẩm thuốc bột cefuroxim từ lô pilot đạt tất tiêu đề ra, đáp ứng yêu cầu cho nghiên cứu độ ổn định sinh khả dụng thuốc 93 4.2.3 NÂNG CẤP CỠ LƠ Việc nâng cấp cỡ lơ nhằm xác định hiệu việc xây dựng qui trình sản xuất, giảm thiểu khác biệt tính chất sản phẩm lô labo lô pilot Trong q trình nâng cấp cỡ lơ từ qui mơ labo lên qui mô pilot, tỉ lệ thành phần chất công thức không đổi so với lô labo khối lượng lớn 10 lần Những thiết bị dùng sản xuất qui mô labo dùng cho qui mô pilot, khác thiết bị trộn dùng qui mô pilot lớn so với qui mơ labo Do đó, giai đoạn nâng cấp cỡ lô cần khảo sát thời gian trộn hoàn tất Kết thời gian trộn hoàn tất ngắn để độ phân tán hàm lượng cefuroxim không lớn 2% phút Thuốc bột từ lô sản xuất qui mô pilot đạt tiêu chuẩn chất lượng đề khơng khác có ý nghĩa so với thuốc bột từ lơ labo 4.2.4 ĐỘ HỊA TAN Kết độ hịa tan mơi trường đệm phosphat pH thời điểm thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu tương tự với giá trị f2 = 94,52 Ngồi ra, độ hịa tan thuốc nghiên cứu so sánh với chế phẩm thuốc bột khác chứa cefuroxim có thị trường TP.HCM Thuốc bột nghiên cứu có độ hịa tan vượt trội so với chế phẩm A1, A2, A4 A5 4.2.5 ĐỘ ỔN ĐỊNH Độ ổn định thuốc bột cefuroxim nghiên cứu theo qui định ICH Sau tháng bảo quản điều kiện 40 ± oC/ 75 ± 5% RH tuổi thọ thuốc ước tính theo nguyên tắc Van’t Hoff năm Sau năm bảo quản điều kiện 30 ± oC/ 75 ± 5% RH , thuốc bột nghiên cứu từ lô đạt tiêu hàm lượng nước, pH, hàm lượng hoạt chất độ hòa tan, nhiên, cảm quan thuốc bột từ lô 230908 đạt lô 110908 lơ 130908 thuốc có màu ngà Ở điều kiện 25 oC ± oC/ 75 ± 5% RH , thuốc bột từ lô đạt tất tiêu đề Vì tuổi thọ thuốc đề nghị năm bảo quản nhiệt độ 30 oC 94 4.2.6 SINH KHẢ DỤNG CỦA THUỐC Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng thực Viện Kiểm Nghiệm thuốc Tp.HCM với đầy đủ thủ tục pháp lý Tại đây, sở vật chất trang thiết bị đạt tiêu chuẩn đáp ứng yêu cầu cho việc lấy mẫu, lưu trữ mẫu phân tích mẫu Hai mươi bốn người tình nguyện Việt Nam khỏe mạnh (18 nam, nữ) tham gia vào nghiên cứu Tất 24 người tình nguyện khơng hút thuốc, không nghiện rượu, nghiện thuốc Các thông số sinh học chức gan, thận người tình nguyện nằm giới hạn bình thường Người tình nguyện có chế độ sinh hoạt giống nhau, cung cấp thức ăn uống suốt thời gian thử nghiệm Mẫu máu thu thập sau người tình nguyện uống thuốc xử lý bảo quản yêu cầu Qui trình định lượng cefuroxim huyết thẩm định qui định Kết phân tích phương sai thơng số sinh khả dụng AUC Cmax cho thấy trình tự thử giai đoạn thử không ảnh hưởng đến kết thông số sinh khả dụng (Cmax, AUC0-8 AUC0-∞) cefuroxim cá thể (người tình nguyện) thuốc thử nghiệm ảnh hưởng rõ đến kết Những kết chứng minh phương pháp nghiên cứu xác định sinh khả dụng thuốc bột cefuroxim đáng tin cậy Kết khoảng tin cậy 90% giá trị AUC0-8 = 108,7 - 119,31% AUC0-∞ = 108,7 - 119,31% nằm khoảng 80-125%; khoảng tin cậy 90% Cmax = 124,53 - 136,96% nằm giới hạn Vậy giá trị AUC thuốc nghiên cứu tương đương với thuốc đối chiếu giá trị Cmax cefuroxim từ thuốc nghiên cứu (3,093±0,60 μg/ ml) cao từ thuốc đối chiếu (2,387±0,57 μg/ ml) Mặc dù, Cmax thuốc bột nghiên cứu cao thuốc bột đối chiếu không gây ảnh hưởng bất lợi cho người sử dụng thuốc giá trị nằm khoảng giá trị Cmax cefuroxim sử dụng liều dạng bào chế (4-6 μg/ ml) công bố [9], [35] Thời gian đạt nồng độ tối đa (Tmax) thuốc nghiên cứu ngắn thuốc đối chiếu 30 phút 95 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Sau năm (từ 8/ 2009 – 8/ 2010), nhóm nghiên cứu hồn thành mục tiêu đề ra, cụ thể sau: 4.1.1 Về xây dựng qui trình định lượng chế phẩm dịch sinh học Đã xây dựng thẩm định qui trình định lượng cefuroxim chế phẩm: qui trình định lượng phương pháp HPLC qui trình phương pháp UV Cả qui trình thẩm định đạt yêu cầu độ xác, độ đúng, độ tuyến tính, tính đặc hiệu, … áp dụng để định lượng cefuroxim chế phẩm phép thử độ hòa tan Đã xây dựng thẩm định qui trình định lượng cefuroxim huyết người phương pháp HPLC Qui trình đạt u cầu độ tuyến tính, độ xác độ ngày ngày Mẫu dịch sinh học có độ ổn định phù hợp cho qui trình phân tích lưu trữ mẫu 4.1.2 Về xây dựng cơng thức qui trình bào chế Đã ứng dụng phần mềm thông minh thiết kế mơ hình thực nghiệm tối ưu hóa cơng thức Đã xây dựng công thức thuốc bột cefuroxim với hệ tá dược: tá dược che vị B tá dược che vị S Cả công thức đạt yêu cầu độ đắng độ hòa tan Tuy nhiên, với tá dược B, uống vị ngon, gần không đắng hậu đắng kéo dài độ hòa tan cao mức qui định (63,43%, qui định ≥ 60%); với tá dược S, vị không ngon với tá dược B hậu đắng, hết nhanh độ hịa tan cao nhiều so với tá dược B (77,71 % so với 63,43%) Vì vậy, cơng thức thuốc bột cefuroxim với tá dược S dùng để nâng cấp cỡ lô phục vụ cho việc nghiên cứu độ ổn định đánh giá sinh khả dụng thuốc 96 Đã xây dựng qui trình bào chế thuốc bột cefuroxim tương ứng với hệ tá dược qui trình bào chế cỡ lơ pilot Những qui trình bào chế có tính lặp lại 4.1.3 Về xây dựng tiêu chuẩn sản phẩm Đã xây dựng tiêu chuẩn sản phẩm Bản tiêu chuẩn Viện Kiểm Nghiệm thuốc TP.HCM thẩm định phê duyệt 4.1.4 Về nâng cấp cỡ lô từ lô qui mô labo lên qui mô pilot Đã điều chế lô pilot (10 kg thành phẩm tương ứng 3000 gói thuốc bột cefuroxim/ lơ) từ công thức tối ưu với tá dược che vị S Thành phẩm từ lô pilot đạt tất yêu cầu chất lượng đề tương tự thành phẩm từ công thức tối ưu lô labo Vây công thức tối ưu qui trình điều chế có tính lặp lại 4.1.5 Về theo dõi độ ổn định xác định tuổi thọ thuốc Đã theo dõi độ ổn định thuốc điều kiện bảo quản 40 ± oC/ 75 ± 5% RH tháng, 30 ± oC/ 75 ± 5% RH 25 ± oC/ 75 ± 5% RH 24 tháng Tuổi thọ thuốc xác định 24 tháng bảo quản điều kiện 30oC 4.1.6 Về đánh giá sinh khả dụng Đã đánh giá sinh khả dụng thuốc nghiên cứu 24 người tình nguyện so sánh với thuốc đối chiếu Zinnat Giá trị AUC thuốc nghiên cứu tương đương với thuốc đối chiếu giá trị Cmax cefuroxim từ thuốc nghiên cứu (3,093±0,60 μg/ ml) cao từ thuốc đối chiếu (2,387±0,57 μg/ ml) Thời gian đạt nồng độ tối đa (Tmax) thuốc nghiên cứu ngắn thuốc đối chiếu 30 phút 4.2 ĐỀ NGHỊ Với kết đạt cho thấy thuốc bột cefuroxim đầy đủ liệu cho việc đăng ký sản xuất Qui trình sản xuất triển khai xí nghiệp dược phẩm nước Thuốc bột cefuroxim nghiên cứu thay trị liệu theo qui định thuốc generic Đề nghị Sở Khoa Học Công Nghệ hỗ trợ việc đăng ký triển khai đề tài 97 TLTK-1 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Phạm ngọc Bùng (1996), “Độ ổn định thuốc cách xác định”, Chuyên đề kỹ thuật bào chế sinh dược học, Tài liệu sau đại học, tr 1-14 Đặng Văn Giáp (2002), Thiết kế tối ưu hóa cơng thức quy trình, NXB Y học Tp HCM., tr 1-97 Đặng Văn Giáp (2003), Phân tích thống kê kiểm nghiệm Dược phẩm, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh, tr 36- 44, 50- 62 Đặng Văn Giáp (2003), Trắc nghiệm giả thuyết nghiên cứu khoa học, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh, tr 16-26, 36-46, 55-61 Trịnh Văn Lẩu (1997), “Phương pháp nghiên cứu độ ổn định thuốc”, Tài liệu Tập huấn kỹ thuật kiểm nghiệm thuốc nhiều thành phần, Bộ Y Tế, tr 61-77 Trịnh Văn Lẩu (2003), "Xác định tuổi thọ hạn dùng thuốc", Thông báo kiểm nghiệm, Viện kiểm nghiệm – Bộ Y tế, tr 1-6 TIẾNG ANH A Faure, P York, R.S Rowe (2001), “Process control and scale-up of pharmaceutical wet granulation processes”, Eur J Pharm and Biopharm., 52, pp 269-277 A Pryde and M.T Gilbert (1990), Applications of High Performance Liquid Chromatography, Chapman and Hall, London and New York, pp 6-11, 61-67 American Society of Health, Drug Information (2006), pp 140, 230 10 Anna Jelińska, Izabela Dudzińska, Marianna Zając and Irena Oszczpowicz (2006), The stability of the amorphous form of cefuroxime axetil in solid state, J Pharm and Biomedical Analysis, 41(3), pp 1075-1081 11 A Rastegar lari, F Alinejad, M Rahmani, H Mohamadi, H Mostafavi, G Farzandy and R Alaghehbandan (2007), Comparison of cefuroxime and amoxicillin/clavulanate in the treatment of acute sinusitis in a sample of Iranian population, Int J of Antimcrobial Agents, 29(2), S672 12 Asean guideline for drug product stability study (2004), pp 1-30 13 Ebi K Kimanani, Jean Lavigne and Diane Potvin (2000), “Numerical methods of the evaluation of individual bioequivalence criteria”, Statistics in Medicine, (19), pp.27752795 14 FormRules v3.01 (2004), Intelligensys Ltd., Belasis Business Centre, Belasis Hall Technology Park, Billingham, Teesside TS23 4EA, UK 15 G C Palacios, S N Gonzalez, F L Perez, S F Cuevas and S F Solorzano (2002), Cefuroxime vs a Dicloxacillin/Chloramphenicol Combination for the Treatment of TLTK-2 Parapneumonic Pleural Effusion and Empyema in Children, Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 15(1), pp 17-23 16 Geoff G.Z Zhang, Devalina Law, Eric A Schmitt, Yihong Qiu (2004), “Phase transformation considerations during process development and manufacture of solid oral dosage forms”, Advanced Drud Delivery Reviews, 56, pp 371-390 17 Graham Buckton (2002), “Solid-state properties”, Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design, Churchill Livingstone, London, 2nd, pp 141-151 18 Henry J Malinowski (2000), “Bioavailability and Bioequivalence Testing”, The science and practice of pharmacy, Vol I, 20th, pp 995-1004 19 H.J Robson, D.Q.M Ciaig, D Deutsh (1999), An investigation into the release of cefuroxim axetil from tast-masked stearic acid microspheres Part 1: The influence of the dissolution medium on the drug release profile and the physical integrity of the microspheres, Int J Pharm 190, pp 183-192 20 H.J Robson, D.Q.M Ciaig, D Deutsh (2000), An investigation into the release of cefuroxim axetil from tast-masked stearic acid microspheres Part 2: The effects of buffet composition on drug release, Int J Pharm., 195, pp 137-145 21 ICH Harmonised Tripartite guideline (2003), Stability Testing of new Drug Substances and Products, QI A, pp 1-25 22 ICH Harmonised Tripartite guideline (2003), Stability data package for registration applications in climatic zones III and IV, Q1F 23 ICH Harmonised Tripartite guideline (2000), Stability Testing: Photostability testing of new Drug Substances and Products, QIB, pp 1-8 24 INForm v3.3 (2004), Intelligensys Ltd., Belasis Business Centre, Belasis Hall Technology Park, Billingham, Teesside TS23 4EA, UK 25 Intelligensys Ltd Homepage, Artificial Intelligence for Formulation and Processing http://www.intelligensys.co.uk 26 Ivanovic Ivana, Zivanovic Ljiljana and Zecevic Mira (2006), A stability indicating assay method for cefuroxime axetil and its application to analysis of tablets exposed to accelerated stability test conditions, 1119 (1-2), pp 209-215 27 Jame Wells (2002), “Pharmaceutical preformulation: the physicochemical properties of drug subtances”, Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design, Churchill Livingstone, London, 2nd, pp 113-138 28 J Blondeau and S Borsos (2007), Comparative minimum inhibitory concentration and mutant prevention concentration of azithromycin, cefuroxime, gemifioxacin, moxifioxacin and telithromycin against clinical isolates of Haemophilus infiuenzae, Int J of Antimcrobial Agents, 29(2), S184 29 Joseph B Schwartz, Robert E O’Connor (1996) “Optimization Techniques in Pharmaceutical formulation and processing”, Modern Pharmaceutics: Drug and the pharmaceutical sciences, Marcel Dekker, 3rd, Vol 72, pp 727-752 30 K Kachrimanis, V Karamyan, S Malamataris (2003), “Artificial neural networks (ANNs) and modeling of powder flow”, Inter J Pharm., 250, pp 13-23 TLTK-3 31 Marianne Ashford (2002), “Assessment of biopharmaceutical properties”, Pharmaceutics: The science of dosage form design, Churchill Livingstone, 2nd, pp 253-274 32 Marianna Zaj, Anna Jelinska, Leszek Dobrowolski and Irena Oszczapowicz (2003), Evaluation of stability of cefuroxime axetil in solid state, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 32(6), pp 1181-1187 33 Mendyk A and Jachowicz R Neural network as a decision support system in the development of pharmaceutical formulation – focus on solid dispersions (2005), Expert Systems with Applications, 28, pp 285-294 34 Nafiz Ư Can, Gưksel Altiokka and Hassan Y Aboul-Enein (2006), Determination of cefuroxime axetil in tablets and biological fluids using liquid chromatography and flow injection analysis, Analytic Chimica Acta, 576(2), pp 246-252 35 One-Kyun Choi, Yong-Se Song (1996), Determination of cefuroxim levels in human serum by micellar electrokinetic capillary chromatography with direct sample injection, J Pharm and Biomedical Analysis, 15, pp 1265 1270 36 Patrick Petitpretz, Claudie Chonộ, Franỗois Trộmoliốres and the Investigator Study Group (2006), Levofloxacin 500 mg once daily versus cefuroxime 250 mg twice daily in patients with acute exacerbations of chronic obstructive bronchitis: clinical efficacy and exacerbation-free interval, Int J of Antimcrobial Agents, 30(1), pp 52-59 37 Peter Simon, Miroslav Veverka, Jozef Okuliar (2004), “New screening method for the determination of stability of pharmaceuticals”, Inter J Pharm., 270, pp 21-26 38 Plumb A P., Rowe R C., York P and Brown M., Optimisation of the predictive ability of artificial neural network (ANN) models: (2005): A comparison of three ANN programs and four classes of training algorithm, Eur J Pharm Sci.,25, pp 395-405 39 P Ruiz-Carretero, M Merino-Sanjuán, A Nácher and V G Casabó (2004), Pharmacokinetic models for the saturable absorption of cefuroxime axetil and saturable elimination of cefuroxime, Eur J Pharmaceutical Sciences, 21(2-3), pp 217-223 40 Rasma Chereson, Umesh Banakar (1999), “Bioavailability, Bioequivalence and Drug Selection”, Basis Pharmacokinetics, pp 8.1-8.51 41 S Agatonovic-Kustrin, R Beresford (2000), “Basic concepts of artificial neural network (ANN) modeling and its application in pharmaceutical research”, J Pharm and Biomed Anal., 22, pp 717-727 42 The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products Evaluation of Medicines for Human Use (2001), “Note for guidance on the investigation of bioavailability and bioequivalence”, pp 1-18 43 US Department of Health and Human Services – Food ang Drug Administration (2003), Guidance for Industry: Average, Population, and Individual Approaches to Establishing Bioequivalence, pp.1-17 44 US Department of Health and Human Services – Food ang Drug Administration (2003), Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation, pp 1-25 TLTK-4 45 US Department of Health and Human Services – Food ang Drug Administration (2003), Guidance for Industry: Bioavailability and Bioequivalence Studies for orally Administered Drug Products, pp 1-23 46 US Department of Health and Human Services – Food ang Drug Administration (2003), Guidance for Industry: Stability Testing of Drug substances and Drug Products, pp 1-5 47 US Department of Health and Human Services – Food ang Drug Administration (2003), Guidance for Industry: Statistical Approaches to Establishing Bioequivalence, pp 1-20 48 US Department of Health and Human Services – Food ang Drug Administration (2003), Guidance for Industry: Waiver of In Vivo Bioavailability and Bioequivalence Studies for Immediate-Realease Solid Oral Dosage Forms Based on a Biopharmaceutics Classification System, pp 1-12