Khảo sát khả năng kích thích miễn dịch và gây độc tế bào ung thư vú mcf 7 của bài thuốc thanh hao miết giáp thang

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO NGHIỆM THU KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH MIỄN DỊCH VÀ GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ VÚ MCF-7 CỦA BÀI THUỐC THANH HAO MIẾT GIÁP THANG (Chủ nhiệm: NGUYỄN THÁI HỒNG TÂM) CƠ QUAN CHỦ TRÌ: TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRẺ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 03/ 2015 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO NGHIỆM THU KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH MIỄN DỊCH VÀ GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ VÚ MCF-7 CỦA BÀI THUỐC THANH HAO MIẾT GIÁP THANG CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 03/ 2015 TÓM TẮT ĐỀ TÀI Định hướng nhóm nghiên cứu xác định sở khoa học mức độ tế bào phân tử dược liệu hay thuốc Y học cổ truyền sử dụng điều trị/hỗ trợ điều trị ung thư số Bệnh viện YHCT nước Một số cơng trình nghiên cứu trước nhóm cho thấy thuốc Thanh hao miết giáp thang (THMGT) có hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư nuôi cấy thông qua chế apoptosis (chết theo chương trình), kích thích hoạt động sống/tăng sinh tế bào miễn dịch; hai số đích nhắm việc điều trị/hỗ trợ điều trị ung thư Đề tài kế thừa phát triển kết trước thuốc THMGT, với mục tiêu xác định vai trò phối hợp vị thành phần tạo nên hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư kích thích miễn dịch thuốc THMGT mức độ in vitro Những kết đề tài góp phần cung cấp thêm chứng khoa học tiềm điều trị/hỗ trợ điều trị ung thư thuốc Thanh hao miết giáp thang Đề tài gồm 02 nội dung chính: (1) Khảo sát vai trị gây độc lên tế bào ung thư MCF-7 nguyên bào sợi phân lập từ người khỏe mạnh (2) Khảo sát vai trị kích thích miễn dịch vị thành phần đóng góp cho thuốc THMGT Kết đề tài cho thấy: (1) Hoạt tính gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 thuốc THMGT có từ phối hợp hoạt tính gây độc tế bào vị: Thanh hao (TH), Tri mẫu (TM), Sinh địa (SĐ) Đan Bì (ĐB) Trong đó, ĐB-TM tạo hoạt tính gây độc tế bào TH-SĐ có tác động hỗ trợ tăng cường hoạt tính gây độc tế bào ĐB-TM Miết giáp khơng có vai trị tạo hoạt tính gây độc tế bào thuốc (2) Hoạt tính kích thích miễn dịch thơng qua tăng cường hoạt động sống/tăng sinh quần thể tế bào máu đơn nhân ngoại vi (PBMC) người thuốc THMGT có từ hoạt tính vị: MG TH Trong vị SĐ, TM, ĐB khơng có vai trị tạo hoạt tính miễn dịch cho THMGT ABSTRACT Aims of this in vitro research proposed the contributed activity of each ingredients to the cytotoxic and immuno-stimulative effects of the THMGT formula In this topic, we conducted the following: (1) Study of cytotoxic effect on cancer cells, MCF-7, and human primary fibroblasts; and (2) immuno-stimulative effect on human PBMC from the combinative components of THMGT The results of this subject indicated: (1) The cytotoxic activity of THMGT formula on cancer cells comes from the combinations of four components: Herba Artemisia apaiacea (HbA), Radix Rehmanniae (RdR), Rhizoma Anemarrhenae (RzA) and Moutan Cortex (MC) Main of this effect is composed from RzA and MC HbA and RdR enhances the cytotoxicity of RzA-MC Carapax Trionycis (CT) is not a cytotoxic component (2) The combination of HbA and CT contributed to immuno-stimulative activity of the formula on human PBMC Other components had no the immunomodulative effect I MỤC LỤC Tóm tắt đề tài/dự án (gồm tiếng Việt tiếng Anh) Mục lục Danh sách chữ viết tắt Danh sách bảng Danh sách hình Bảng tốn 2.1 2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.3 2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.4 PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài/dự án: Khảo sát khả kích thích miễn dịch gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 thuốc Thanh hao miết giáp thang Chủ nhiệm đề tài/dự án:ThS Nguyễn Thái Hoàng Tâm Cơ quan chủ trì: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Thời gian thực hiện: 12 tháng Kinh phí duyệt: 80 triệu Kinh phí cấp: theo TB số: TB-SKHCN ngày / Mục tiêu Nội dung ……………………………………………… Sản phẩm đề tài/dự án …………………………………… CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU CHƯƠNG II: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Xác định thông tin nguyên vật liệu bột đông khô Khả gây độc lên tế bào ung thư Nuôi cấy tế bào Thử nghiệm SRB Thử nghiệm xCELLigence Khả kích thích miễn dịch Thu nhận ni cấy PBMC Thử nghiệm MTT Thử nghiệm miễn dịch (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) Phân tích số liệu Trang I II IV IV IV 8 10 11 11 12 CHƯƠNG III: KẾT QỦA VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thông tin nguyên vật liệu 3.2 Khả gây độc tế bào nuôi cấy 13 3.2.1 Khả gây độc lên tế bào ung thư vú MCF-7 17 3.2.2 Khả gây độc lên nguyên bào sợi người nuôi cấy sơ cấp 23 II 3.3 Khả kích thích miễn dịch 3.3.1 Khả kích thích tăng sinh PBMC 25` 3.3.2 Khả biểu cytokine IL-2 28 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ PHỤ LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO III 30 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT ĐC TN PBMC SỐ 2.1 2.2 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 SỐ 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 THUẬT NGỮ TIẾNG VIẾT Đối chứng Thí nghiệm Tế bào máu đơn nhân ngoại vi DANH SÁCH BẢNG TÊN BẢNG SỐ LIỆU Chương trình chạy phân tích HPLC Bảng cơng thức tổ hợp “thuốc” sử dụng Nồng độ dịch chiết lỏng, hiệu suất đông khô hàm lượng endotoxin thành phần nguyên liệu thuốc Thanh hao Miết giáp thang Nồng độ endotoxin nguyên liệu nồng độ 3,5% 0,5% Tác động gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 tổ hợp thành phần tham gia đóng góp thuốc THMGT 3,5% 48 Tác động gây độc nguyên bào sợi tổ hợp thành phần tham gia đóng góp thuốc THMGT 3,5% 48 Tác động kích thích tăng sinh PBMC thành phần tham gia đóng góp thuốc THMGT 0,5% 48 (thử nghiệm MTT) Biểu IL-2 quần thể PBMC tác động tổ hợp thuốc THMGT 0,5% sau 48 cảm ứng DANH SÁCH HÌNH TÊN HÌNH ẢNH Sắc ký đồ HPLC bột Thanh hao (A), Miết giáp (B), Tri mẫu (C), Sinh địa (D) Đan bì (E) Đồ thị biểu diễn tác động gây độc tổ hợp khả giảm tính bám trải (xCELLigence) khả giảm sinh tổng hợp protein (SRB) quần thể MCF-7 cảm ứng sau 48 Tác động 31 tổ hợp theo thời gian lên tế bào MCF-7 Đồ thị biểu thị tác động kích thích tăng trưởng quần thể tế bào PBMC 31 tổ hợp thuốc Thanh hao miết giáp thang nồng độ 0,5% (v/v) cảm ứng sau 48 (thử nghiệm MTT) Sự thay đổi biểu IL-2 quần thể PBMC tác động tổ hợp THMGT 0,5% sau 48 IV TRANG 13 16 17 23 26 28 TRANG 15 20 21 27 29 PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH MIỄN DỊCH VÀ GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ VÚ MCF-7 CỦA BÀI THUỐC THANH HAO MIẾT GIÁP THANG Chủ nhiệm đề tài: Th.S Nguyễn Thái Hồng Tâm Cơ quan chủ trì: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Thời gian thực đề tài: 12/2013-12/2014 Kinh phí duyệt: 80 triệu đồng Kinh phí cấp: theo TB số : TB-SKHCN ngày Mục tiêu: Mục tiêu tổng quát: Chứng minh vai trò phối hợp in vitro vị thành phần việc góp phần tạo nên hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư kích thích miễn dịch thuốc tổng THMGT Mục tiêu cụ thể: - Xác định khả gây độc tế bào ung thư nuôi cấy (MCF-7) với tế bào thường nguyên bào sợi sơ cấp phối hợp vị thuốc thành phần thuốc Thanh hao miết giáp thang - Xác định khả kích thích miễn dịch phối hợp vị thuốc thành phần thuốc Thanh hao miết giáp thang Nội dung: Công việc dự kiến Công việc thực Thu nhận xác định thông tin Thu nhận gửi xác định thông tin bột nguyên liệu bột đông khô nguyên liệu dạng đông khô thuốc thuốc Thanh hao Miết giáp thang THMGT, vị thuốc (TH, MG, ĐB, SĐ, vị Thanh hao, Miết giáp, Đan TM) bì, Tri mẫu Sinh địa Đánh giá cơng việc: hoàn thành 100% Khảo sát tác động gây độc lên tế Xác định khả gây độc tế bào MCF-7 bào ung thư nuôi cấy tế bào nguyên bào sợi THMGT 30 tổ hợp thường thuốc Thanh hao “thuốc” nồng độ 3,5% (v/v) miết giáp thang tổ hợp Đánh giá cơng việc: hồn thành 100% “thuốc” Khảo sát tác động kích thích miễn Xác định khả kích thích tăng sinh dịch thuốc Thanh hao miết PBMC THMGT 30 tổ hợp “thuốc” giáp thang tổ hợp “thuốc” nồng độ 0,5% (v/v) Xác định thay đổi biểu IL-2 quần thể PBMC tăng sinh Đánh giá cơng việc: hồn thành 100% Viết báo cáo nghiệm thu đề Báo cáo nghiệm thu đề tài đăng 01 báo khoa học tài -1- CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Năm 2012, giới có 8,4 triệu ca tử vong ung thư dự đoán số tiếp tục tăng đến 14 triệu thập kỷ tới (WHO – Tổ chức Sức Khỏe Thế giới) Bên cạnh phương thức trị liệu cho ung thư phẫu thuật, xạ/hóa trị liệu hay sử dụng tác nhân điều trị trúng đích (target therapy); việc điều trị/hỗ trợ điều trị ung thư liệu pháp Y học cổ truyền (YHCT) hướng quan tâm phát triển nghiên cứu chuyên sâu Mục đích điều trị bệnh YHCT điều chỉnh thể mắc bệnh, hồi phục cân “âm-dương” (âm – có quan hệ với mặt vật chất thể vi sinh vật, chất dịch, chất dinh dưỡng; dương – quan hệ với mặt chức năng) chức “tạng phủ” (hệ thống quan chức thể: tuần hồn, tiêu hóa, … ) khơng loại trừ tác nhân gây bệnh Từ xưa, việc sử dụng thuốc YHCT vào “tính vị” (đặc tính), “qui kinh” (vị trí tác động thuốc) tác dụng theo tính chất bệnh lý YHCT khơng dựa vào hoạt chất cụ thể thuốc Việc áp dụng dược liệu cổ truyền điều trị không đơn giản việc kê loại thuốc cho loại bệnh trường hợp thuốc Tây y; thông thường, dược liệu thấy nhiểu cơng thức trị bệnh khác hay công thức gồm nhiều dược liệu sử dụng cho nhiều bệnh khác hay bệnh nhân mắc loại bệnh lại kê thuốc có cơng thức khác Cách phối hợp vị thuốc thuốc YHCT thường thiết lập theo “quân – thần – tá – sứ” Vị thuốc “quân” vị thuốc có tác động mong muốn chủ chốt thuốc; vị “thần” có tác động tăng cường tác động vị “quân”; vị “tá” thường có vai trị giảm tác dụng phụ khơng mong muốn vị “sứ” thường hỗ trợ đưa tác động đến vị trí Những cơng thức dược liệu thuốc cho thấy hiệu tốt hay khơng xuất tác dụng phụ điều trị thuốc Tây y nhiều bệnh Câu hỏi đặt là: hay làm mà tác động công thức lại tốt hơn?[1,2] YHCT giới dần “hiện đại hóa”, nhà khoa học sử dụng công cụ khoa học kỹ thuật đại nhằm làm sáng tỏ khái niệm học thuyết YHCT Những dược liệu hay công thức thuốc (thang) sử dụng YHCT chứng minh thành phần hóa học, hoạt chất hay kiểm tra chất lượng kỹ thuật hóa phân tích (sắc ký lớp mỏng – TCL, sắc ký lỏng cao áp – HPLC, chạy khối phổ - GC-MS,…) Bên cạnh đó, với “thâm nhập” sinh học phân tử ứng dụng kỹ thuật sinh học đa kỹ đại điện di DNA, TUNEL, lai phân tử, RT realtime-PCR, ELISA,…cho phép nhà khoa học nghiên cứu tác động sinh học (như kháng ung thư (anti-cancer), chống -2- lão hóa (anti-aging), kháng viêm (anti-inflammation),… ) mơ hình động vật, tế bào phân tử nhằm làm sáng tỏ chế, cách thức tác động dược liệu/bài thuốc trước nghe theo kinh nghiệm điều trị…[3] Hiện nay, giới có nhiều cơng trình nghiên cứu liên quan đến khả điều trị hay hỗ trợ điều trị số dược liệu hay thuốc YHCT [4–9] Đa phần nghiên cứu tập trung theo hướng nghiên cứu hoạt tính sinh học, chế phân tử hay xác định hoạt chất có tác động kháng ký sinh trùng sốt rét, kháng khuẩn, kháng viêm, tác động lên miễn dịch kháng phân bào lên dòng tế bào ung thư người … thuốc hay loại dược liệu riêng lẻ Trong đó, nghiên cứu chứng minh vai trị khoa học việc phối hợp vị thành phần thuốc YHCT lại chưa có cơng trình Ở Việt Nam, Quyết định số 222/2003/QD-TTG ngày 03 tháng 11 năm 2003 việc phê duyệt sách quốc gia y dược học cổ truyền đến năm 2010 góp phần thúc đẩy phát triển YHCT năm gần Nhưng việc phát triển tập trung mở rộng việc điều trị bệnh YHCT thơng qua việc mở rộng bệnh viện, phịng khám, nhà thuốc YHCT; cịn việc nghiên cứu tính khoa học đại hóa YHCT Tây y cịn hạn chế Những năm gần đây, nước ta có nhiều cơng trình tập trung nghiên cứu hoạt tính sinh học dược liệu [10–14], công dụng kháng ung thư số thuốc cổ truyền [15,16] Góp phần “hiện đại hóa” YHCT nước, nhóm nghiên cứu có số nghiên cứu cho thấy tác động thuốc YHCT mức tế bào phân tử [17,18] Năm 2011-2013, với đề tài “Nghiên cứu tác dụng phối hợp thuốc dân gian/cổ truyền điều trị ung thư mức in vitro”, kết cho thấy thuốc Thanh hao miết giáp thang (THMGT) có hiệu tác động gây độc cảm ứng tế bào ung thư nuôi cấy chết theo chương trình (apoptosis), kháng oxi hóa tăng trưởng tế bào máu đơn nhân ngoại vi người THMGT thuốc cổ truyền, gồm vị: Thanh hao, Miết giáp, Sinh địa, Tri mẫu, Đan bì; BV Y học cổ truyền TpHCM sử dụng việc hỗ trợ điều trị cho bệnh nhân ung thư bệnh nhân sốt dai dẳng Kết sơ khởi từ đề tài với mục đích điều trị THMGT (YHCT tập trung đến hoạt động hệ miễn dịch), nhóm nhận thấy khả gây độc tế bào THMGT có vị thành phần ngoại trừ Miết giáp; hay khả kích thích tăng trưởng tế bào miễn dịch THMGT khảo sát thấy Thanh Hao, Miết giáp Tri mẫu, nhiên tác động thấy số nồng độ khảo sát khác Trên giới, cơng trình nghiên cứu liên quan đến THMGT dừng lại từ cơng trình nghiên cứu riêng lẻ dược liệu thành phần liên quan, như: Thanh hao (Herba Artemisiae apiaceae) có khả bắt gốc tự do, làm giảm MDA (Malondialdehyde – sản phẩm trình peroxyde hóa) tăng hoạt tính -3- enzyme kháng oxy hóa superoxyde dismutase, catalase, glutathione peroxydase gan chuột [19,20] Miết giáp (Carapax Trionycis - phần mai loài ba ba có tên khoa học Trionyx sinensis Wiegmann) cho thấy khả bảo vệ, ngăn tổn thương hay chống xơ gan (Gao JR et al., 2010) Sinh địa (Rehmanniae Radix) có khả tăng cường hoạt động lưới nội mô [21], tăng cường tế bào T gây độc [22] Han cs (2012) chứng minh 2,5-Dihydroxyacetophenone (DHAP) phân lập từ Sinh địa có khả ức chế đáp ứng viêm tế bào macrophage RAW264.7 thông qua việc ức chế tế bào sản xuất tác nhân trung gian gây viêm NO, kìm hãm biểu iNOS (inducible NO synthase) giảm cytokines tiền viêm TNF-α, IL-6 Baek cs (2012) chứng minh Sinh địa nồng độ 0,1mg/ml (10%) làm tăng khả kháng oxy hóa tế bào THP-1 (tế bào ung thư máu người) Tri mẫu (Rhizoma Anemarrhenae) có chứa nhiều chất có hoạt tính sinh học: sarsasapogenin có khả làm dừng chu trình phân bào pha G2(M) cảm ứng apoptosis tế bào Hep G2 [25]; timosaponin A-III có khả kháng ung thư ruột mức in vitro (tế bào HCT-15) in vivo (trên mơ hình chuột ung thư) thơng qua khả kháng phân bào - cảm ứng trình apoptosis [26] [27] hay giết chết tế bào khối u thông qua ức chế mTOR cảm ứng “ERStress” [28]; timosaponin E1 E2 ức chế trình sinh superoxyde cảm ứng fMLP (N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalaine-induced superoxyde generation) tế bào bạch cầu trung tính (người) [29]; anemarsaponin B có tác dụng kháng viêm tế bào macrophage chuột RAW 264.7 thông qua việc điều hịa âm đường tín hiệu NF-kB p38 [30] Cao chiết Đan bì (Cortex Paeoniae suffruticosae) hợp chất chiết xuất từ Đan bì suffruticosides A, B, C, D, E galloyl-oxypaeoniflorin, suffruyabiosides A, B cho thấy có hoạt tính kháng oxy hóa mạnh [31–33,19] Những kết từ nhóm cơng trình giới chứng minh cách riêng rẽ tác động THMGT vị riêng rẻ (ở nồng độ định), chưa cho thấy vai trò vị Thanh hao (TH), Miết giáp (MG), Sinh địa (SĐ), Tri mẫu (TM) Đan bì (ĐB) tham gia đóng góp thực thuốc THMGT (tỉ lệ tham gia vào thuốc vị khác 3TH:3MG:4SĐ:5TM:3ĐB phần cho thấy tồn ý nghĩa phối hợp vai trò vị thành phần) Đề tài kế thừa kết đề tài trước với mục tiêu tìm hiểu vai trị vị thành phần thuốc với hỗ trợ lẫn tác động: gây độc tế bào ung thư, kích thích miễn dịch mức in vitro Tính đề tài không nằm việc sử dụng thêm kỹ thuật nghiên cứu đại (xCELLigence) để tìm hiểu sở khoa học cách điều trị theo y học cổ truyền mà cách tiếp cận nghiên cứu tìm hiểu vai trị đóng góp thật thuốc tổng vị thuốc thành phần Kết đề -4- 412 SD-TM vs TH-TM-DB -102.3 19.66 Yes *** -132.7 to -71.84 413 SD-TM vs TH-SD-DB -100.5 19.33 Yes *** -130.9 to -70.12 414 SD-TM vs TH-SD-TM-DB -105.6 20.31 Yes *** -136.0 to -75.22 415 SD-TM vs MG-SD-TM-DB -98.29 18.9 Yes *** -128.7 to -67.88 416 SD-DB vs TM-DB -33.87 6.512 Yes * -64.28 to -3.456 417 SD-DB vs TM-SD-DB -37.48 7.207 Yes ** -67.90 to -7.071 418 SD-DB vs THMGT -40.62 7.809 Yes ** -71.03 to -10.20 419 SD-DB vs MG-SD-TM -14.79 2.843 No ns -45.20 to 15.63 420 SD-DB vs MG-TM-DB -34.45 6.624 Yes * -64.87 to -4.041 421 SD-DB vs MG-SD-DB -4.8 0.9229 No ns -35.21 to 25.61 422 SD-DB vs TH-SD-TM -18.81 3.616 No ns -49.22 to 11.61 423 SD-DB vs TH-TM-DB -36.48 7.014 Yes ** -66.89 to -6.066 424 SD-DB vs TH-SD-DB -34.76 6.683 Yes * -65.17 to -4.346 425 SD-DB vs TH-SD-TM-DB -39.86 7.663 Yes ** -70.27 to -9.441 426 SD-DB vs MG-SD-TM-DB -32.52 6.251 Yes * -62.93 to -2.101 427 TM-DB vs TM-SD-DB -3.615 0.695 No ns -34.03 to 26.80 428 TM-DB vs THMGT -6.745 1.297 No ns -37.16 to 23.67 429 TM-DB vs MG-SD-TM 19.09 3.669 No ns -11.33 to 49.50 430 TM-DB vs MG-TM-DB -0.585 0.1125 No ns -31.00 to 29.83 431 TM-DB vs MG-SD-DB 29.07 5.589 No ns -1.344 to 59.48 432 TM-DB vs TH-SD-TM 15.06 2.896 No ns -15.35 to 45.48 433 TM-DB vs TH-TM-DB -2.61 0.5018 No ns -33.02 to 27.80 434 TM-DB vs TH-SD-DB -0.89 0.1711 No ns -31.30 to 29.52 435 TM-DB vs TH-SD-TM-DB -5.985 1.151 No ns -36.40 to 24.43 436 TM-DB vs MG-SD-TM-DB 1.355 0.2605 No ns -29.06 to 31.77 437 TM-SD-DB vs THMGT -3.13 0.6018 No ns -33.54 to 27.28 22.7 4.364 No ns -7.714 to 53.11 439 TM-SD-DB vs MG-TM-DB 3.03 0.5826 No ns -27.38 to 33.44 440 TM-SD-DB vs MG-SD-DB 32.69 6.284 Yes * 2.271 to 63.10 441 TM-SD-DB vs TH-SD-TM 18.68 3.591 No ns -11.73 to 49.09 442 TM-SD-DB vs TH-TM-DB 1.005 0.1932 No ns -29.41 to 31.42 443 TM-SD-DB vs TH-SD-DB 2.725 0.5239 No ns -27.69 to 33.14 444 TM-SD-DB vs TH-SD-TM-DB -2.37 0.4557 No ns -32.78 to 28.04 438 TM-SD-DB vs MG-SD-TM 445 TM-SD-DB vs MG-SD-TM-DB 4.97 0.9555 No ns -25.44 to 35.38 446 THMGT vs MG-SD-TM 25.83 4.966 No ns -4.584 to 56.24 447 THMGT vs MG-TM-DB 6.16 1.184 No ns -24.25 to 36.57 448 THMGT vs MG-SD-DB 35.82 6.886 Yes ** 5.401 to 66.23 449 THMGT vs TH-SD-TM 21.81 4.193 No ns -8.604 to 52.22 450 THMGT vs TH-TM-DB 4.135 0.795 No ns -26.28 to 34.55 451 THMGT vs TH-SD-DB 5.855 1.126 No ns -24.56 to 36.27 452 THMGT vs TH-SD-TM-DB 0.76 0.1461 No ns -29.65 to 31.17 453 THMGT vs MG-SD-TM-DB 8.1 1.557 No ns -22.31 to 38.51 454 MG-SD-TM vs MG-TM-DB -19.67 3.782 No ns -50.08 to 10.74 455 MG-SD-TM vs MG-SD-DB 9.985 1.92 No ns -20.43 to 40.40 456 MG-SD-TM vs TH-SD-TM -4.02 0.7729 No ns -34.43 to 26.39 457 MG-SD-TM vs TH-TM-DB -21.7 4.171 No ns -52.11 to 8.719 458 MG-SD-TM vs TH-SD-DB -19.98 3.84 No ns -50.39 to 10.44 459 MG-SD-TM vs TH-SD-TM-DB -25.07 4.82 No ns -55.48 to 5.344 460 MG-SD-TM vs MG-SD-TM-DB -17.73 3.409 No ns -48.14 to 12.68 29.66 5.702 No ns -0.7592 to 60.07 461 MG-TM-DB vs MG-SD-DB 462 MG-TM-DB vs TH-SD-TM 15.65 3.009 No ns -14.76 to 46.06 463 MG-TM-DB vs TH-TM-DB -2.025 0.3893 No ns -32.44 to 28.39 464 MG-TM-DB vs TH-SD-DB -0.305 0.0586 No ns -30.72 to 30.11 465 MG-TM-DB vs TH-SD-TM-DB -5.4 1.038 No ns -35.81 to 25.01 466 MG-TM-DB vs MG-SD-TM-DB 1.94 0.373 No ns -28.47 to 32.35 467 MG-SD-DB vs TH-SD-TM -14.01 2.693 No ns -44.42 to 16.41 468 MG-SD-DB vs TH-TM-DB -31.68 6.091 Yes * -62.09 to -1.266 469 MG-SD-DB vs TH-SD-DB -29.96 5.76 No ns -60.37 to 0.4542 470 MG-SD-DB vs TH-SD-TM-DB -35.06 6.74 Yes * -65.47 to -4.641 471 MG-SD-DB vs MG-SD-TM-DB -27.72 5.329 No ns -58.13 to 2.699 472 TH-SD-TM vs TH-TM-DB -17.68 3.398 No ns -48.09 to 12.74 473 TH-SD-TM vs TH-SD-DB -15.96 3.068 No ns -46.37 to 14.46 474 TH-SD-TM vs TH-SD-TM-DB -21.05 4.047 No ns -51.46 to 9.364 475 TH-SD-TM vs MG-SD-TM-DB -13.71 2.636 No ns -44.12 to 16.70 1.72 0.3307 No ns -28.69 to 32.13 477 TH-TM-DB vs TH-SD-TM-DB -3.375 0.6489 No ns -33.79 to 27.04 478 TH-TM-DB vs MG-SD-TM-DB 3.965 0.7623 No ns -26.45 to 34.38 479 TH-SD-DB vs TH-SD-TM-DB -5.095 0.9796 No ns -35.51 to 25.32 480 TH-SD-DB vs MG-SD-TM-DB 2.245 0.4316 No ns -28.17 to 32.66 7.34 1.411 No ns -23.07 to 37.75 476 TH-TM-DB vs TH-SD-DB 481 TH-SD-TM-DB vs MG-SD-TM-DB Phụ lục 05 NHÓM KẾT QUẢ THÔ CỦA THỬ NGHIỆM SRB TRÊN FIBROBLAST %I STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Tên TH TH-MG TH-SD TH-TM TH-DB MG MG-SD MG-TM MG-DB TH-MG-SD TH-MG-TM TH-MG-DB TH-MG-SD-TM TH-MG-TM-DB TH-MG-SD-DB SD TM DB SD-TM SD-DB TM-DB TM-SD-DB THMGT MG-SD-TM MG-TM-DB MG-SD-DB TH-SD-TM TH-TM-DB TH-SD-DB TH-SD-TM-DB MG-SD-TM-DB Lần Lần 3.59 6.54 4.25 2.94 27.78 -4.25 -9.48 -7.19 22.22 2.94 2.94 28.1 0.65 27.12 28.1 -14.05 -3.27 26.14 -4.9 26.8 22.22 18.95 16.67 -2.94 26.47 27.78 0.65 28.76 26.14 27.12 22.22 Lần 10.99 11.83 9.3 9.86 29.58 -0.85 -7.61 5.92 27.32 11.27 10.14 29.58 6.76 30.42 29.58 -1.69 1.69 25.92 -0.56 28.17 26.2 22.82 20.85 1.69 27.61 25.63 6.2 31.83 30.14 27.61 24.23 6.25 5.59 3.29 7.24 32.24 -1.97 -8.55 0.99 29.61 10.2 6.58 34.21 6.25 33.88 31.91 -2.96 0.99 34.87 1.32 28.62 30.92 25.33 21.05 0.66 27.3 27.3 7.89 29.28 29.61 29.28 23.36 Phụ lục 06 SO SÁNH THỐNG KÊ NHÓM KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM SRB/FIBROBLAST STT Tukey's Multiple ComparisonTest Significant? P < 0.05? Summary 95% CI of diff -1.043 0.5433 No ns -11.77 to 9.685 18 TH vs TH-SD 1.33 0.6926 No ns -9.398 to 12.06 19 TH vs TH-TM 0.2633 0.1371 No ns -10.46 to 10.99 20 TH vs TH-DB -22.92 11.94 Yes *** -33.65 to -12.20 17 TH vs TH-MG 21 TH vs MG Mean Diff q 4.843 No ns -1.428 to 20.03 22 TH vs MG-SD 15.49 9.3 8.067 Yes *** 4.762 to 26.22 23 TH vs MG-TM 7.037 3.665 No ns -3.692 to 17.76 24 TH vs MG-DB -19.44 10.12 Yes *** -30.17 to -8.712 25 TH vs TH-MG-SD -1.193 0.6215 No ns -11.92 to 9.535 26 TH vs TH-MG-TM 0.39 0.2031 No ns -10.34 to 11.12 27 TH vs TH-MG-DB -23.69 12.34 Yes *** -34.41 to -12.96 1.245 No ns -8.338 to 13.12 28 TH vs TH-MG-SD-TM 2.39 29 TH vs TH-MG-TM-DB -23.53 12.25 Yes *** -34.26 to -12.80 30 TH vs TH-MG-SD-DB -22.92 11.94 Yes *** -33.65 to -12.19 31 TH vs SD 13.18 6.862 Yes ** 2.448 to 23.90 32 TH vs TM 7.14 3.718 No ns -3.588 to 17.87 33 TH vs DB -22.03 11.47 Yes *** -32.76 to -11.31 34 TH vs SD-TM 8.323 4.335 No ns -2.405 to 19.05 35 TH vs SD-DB -20.92 10.89 Yes *** -31.65 to -10.19 36 TH vs TM-DB -19.5 10.16 Yes *** -30.23 to -8.775 37 TH vs TM-SD-DB -15.42 8.032 Yes *** -26.15 to -4.695 38 TH vs THMGT -12.58 6.551 Yes ** -23.31 to -1.852 39 TH vs MG-SD-TM 7.14 3.718 No ns -3.588 to 17.87 40 TH vs MG-TM-DB -20.18 10.51 Yes *** -30.91 to -9.455 41 TH vs MG-SD-DB -19.96 10.39 Yes *** -30.69 to -9.232 42 TH vs TH-SD-TM 2.03 1.057 No ns -8.698 to 12.76 43 TH vs TH-TM-DB -23.01 11.98 Yes *** -33.74 to -12.29 44 TH vs TH-SD-DB -21.69 11.29 Yes *** -32.41 to -10.96 45 TH vs TH-SD-TM-DB -21.06 10.97 Yes *** -31.79 to -10.33 46 TH vs MG-SD-TM-DB -16.33 8.503 Yes *** -27.05 to -5.598 2.373 1.236 No ns -8.355 to 13.10 48 TH-MG vs TH-TM 1.307 0.6805 No ns -9.422 to 12.03 49 TH-MG vs TH-DB -21.88 11.39 Yes *** -32.61 to -11.15 50 TH-MG vs MG 10.34 5.387 No ns -0.3849 to 21.07 51 TH-MG vs MG-SD 16.53 *** 5.805 to 27.26 52 TH-MG vs MG-TM 8.08 4.208 No ns -2.648 to 18.81 53 TH-MG vs MG-DB -18.4 9.581 Yes *** -29.12 to -7.668 47 TH-MG vs TH-SD 8.61 Yes 54 TH-MG vs TH-MG-SD -0.15 0.07812 No ns -10.88 to 10.58 55 TH-MG vs TH-MG-TM 1.433 ns -9.295 to 12.16 56 TH-MG vs TH-MG-DB -22.64 11.79 Yes *** -33.37 to -11.92 57 TH-MG vs TH-MG-SD-TM 3.433 1.788 No ns -7.295 to 14.16 58 TH-MG vs TH-MG-TM-DB -22.49 11.71 Yes *** -33.21 to -11.76 59 TH-MG vs TH-MG-SD-DB -21.88 11.39 Yes *** -32.60 to -11.15 60 TH-MG vs SD 14.22 7.406 Yes *** 3.492 to 24.95 61 TH-MG vs TM 8.183 4.262 No ns -2.545 to 18.91 0.7465 No 62 TH-MG vs DB -20.99 10.93 Yes *** -31.72 to -10.26 63 TH-MG vs SD-TM 9.367 4.878 No ns -1.362 to 20.09 64 TH-MG vs SD-DB -19.88 10.35 Yes *** -30.60 to -9.148 65 TH-MG vs TM-DB -18.46 9.614 Yes *** -29.19 to -7.732 66 TH-MG vs TM-SD-DB -14.38 7.489 Yes *** -25.11 to -3.652 67 TH-MG vs THMGT -11.54 6.008 Yes * -22.26 to -0.8085 68 TH-MG vs MG-SD-TM 8.183 4.262 No ns -2.545 to 18.91 69 TH-MG vs MG-TM-DB -19.14 9.968 Yes *** -29.87 to -8.412 70 TH-MG vs MG-SD-DB -18.92 9.851 Yes *** -29.64 to -8.188 71 TH-MG vs TH-SD-TM 3.073 1.601 No ns -7.655 to 13.80 72 TH-MG vs TH-TM-DB -21.97 11.44 Yes *** -32.70 to -11.24 73 TH-MG vs TH-SD-DB -20.64 10.75 Yes *** -31.37 to -9.915 74 TH-MG vs TH-SD-TM-DB -20.02 10.42 Yes *** -30.74 to -9.288 75 TH-MG vs MG-SD-TM-DB -15.28 7.959 Yes *** -26.01 to -4.555 76 TH-SD vs TH-TM -1.067 ns -11.79 to 9.662 77 TH-SD vs TH-DB -24.25 0.5555 No 12.63 Yes *** -34.98 to -13.53 7.97 4.151 No ns -2.758 to 18.70 14.16 7.374 Yes *** 3.432 to 24.89 80 TH-SD vs MG-TM 5.707 2.972 No ns -5.022 to 16.43 81 TH-SD vs MG-DB -20.77 10.82 Yes *** -31.50 to -10.04 82 TH-SD vs TH-MG-SD -2.523 1.314 No ns -13.25 to 8.205 83 TH-SD vs TH-MG-TM -0.94 0.4895 No 84 TH-SD vs TH-MG-DB -25.02 78 TH-SD vs MG 79 TH-SD vs MG-SD ns -11.67 to 9.788 13.03 Yes *** -35.74 to -14.29 0.552 No ns -9.668 to 11.79 85 TH-SD vs TH-MG-SD-TM 1.06 86 TH-SD vs TH-MG-TM-DB -24.86 12.95 Yes *** -35.59 to -14.13 87 TH-SD vs TH-MG-SD-DB -24.25 12.63 Yes *** -34.98 to -13.52 11.85 6.17 Yes * 1.118 to 22.57 88 TH-SD vs SD 89 TH-SD vs TM 5.81 3.026 No ns -4.918 to 16.54 90 TH-SD vs DB -23.36 12.17 Yes *** -34.09 to -12.64 91 TH-SD vs SD-TM 6.993 3.642 No ns -3.735 to 17.72 92 TH-SD vs SD-DB -22.25 11.59 Yes *** -32.98 to -11.52 93 TH-SD vs TM-DB -20.83 10.85 Yes *** -31.56 to -10.11 94 TH-SD vs TM-SD-DB -16.75 8.725 Yes *** -27.48 to -6.025 95 TH-SD vs THMGT -13.91 7.244 Yes ** -24.64 to -3.182 3.026 No ns -4.918 to 16.54 11.2 Yes *** -32.24 to -10.79 11.09 Yes *** -32.02 to -10.56 ns -10.03 to 11.43 96 TH-SD vs MG-SD-TM 5.81 97 TH-SD vs MG-TM-DB -21.51 98 TH-SD vs MG-SD-DB -21.29 99 TH-SD vs TH-SD-TM 0.7 100 TH-SD vs TH-TM-DB -24.34 12.68 Yes *** -35.07 to -13.62 101 TH-SD vs TH-SD-DB -23.02 11.99 Yes *** -33.74 to -12.29 102 TH-SD vs TH-SD-TM-DB -22.39 11.66 Yes *** -33.12 to -11.66 103 TH-SD vs MG-SD-TM-DB -17.66 9.195 Yes *** -28.38 to -6.928 104 TH-TM vs TH-DB 0.3645 No -23.19 12.08 Yes *** -33.91 to -12.46 105 TH-TM vs MG 9.037 4.706 No ns -1.692 to 19.76 106 TH-TM vs MG-SD 15.23 *** 4.498 to 25.95 107 TH-TM vs MG-TM 6.773 3.527 No ns -3.955 to 17.50 108 TH-TM vs MG-DB -19.7 10.26 Yes *** -30.43 to -8.975 7.93 Yes 109 TH-TM vs TH-MG-SD -1.457 0.7586 No ns -12.18 to 9.272 110 TH-TM vs TH-MG-TM 0.1267 0.06597 No ns -10.60 to 10.85 111 TH-TM vs TH-MG-DB -23.95 *** -34.68 to -13.22 12.47 Yes 112 TH-TM vs TH-MG-SD-TM 2.127 1.108 No ns -8.602 to 12.85 113 TH-TM vs TH-MG-TM-DB -23.79 12.39 Yes *** -34.52 to -13.07 114 TH-TM vs TH-MG-SD-DB -23.18 12.07 Yes *** -33.91 to -12.46 115 TH-TM vs SD 12.91 6.725 Yes ** 2.185 to 23.64 116 TH-TM vs TM 6.877 3.581 No ns -3.852 to 17.60 117 TH-TM vs DB -22.3 11.61 Yes *** -33.02 to -11.57 118 TH-TM vs SD-TM 8.06 4.197 No ns -2.668 to 18.79 119 TH-TM vs SD-DB -21.18 11.03 Yes *** -31.91 to -10.46 120 TH-TM vs TM-DB -19.77 10.29 Yes *** -30.49 to -9.038 121 TH-TM vs TM-SD-DB -15.69 8.169 Yes *** -26.41 to -4.958 122 TH-TM vs THMGT -12.84 6.689 Yes ** -23.57 to -2.115 123 TH-TM vs MG-SD-TM 6.877 3.581 No ns -3.852 to 17.60 124 TH-TM vs MG-TM-DB -20.45 10.65 Yes *** -31.17 to -9.718 125 TH-TM vs MG-SD-DB -20.22 10.53 Yes *** -30.95 to -9.495 126 TH-TM vs TH-SD-TM 1.767 0.92 No ns -8.962 to 12.49 127 TH-TM vs TH-TM-DB -23.28 12.12 Yes *** -34.00 to -12.55 128 TH-TM vs TH-SD-DB -21.95 11.43 Yes *** -32.68 to -11.22 129 TH-TM vs TH-SD-TM-DB -21.32 11.1 Yes *** -32.05 to -10.60 130 TH-TM vs MG-SD-TM-DB -16.59 8.64 Yes *** -27.32 to -5.862 131 TH-DB vs MG 32.22 16.78 Yes *** 21.50 to 42.95 132 TH-DB vs MG-SD 38.41 20 Yes *** 27.69 to 49.14 133 TH-DB vs MG-TM 29.96 15.6 Yes *** 19.23 to 40.69 134 TH-DB vs MG-DB 3.483 1.814 No ns -7.245 to 14.21 135 TH-DB vs TH-MG-SD 21.73 11.32 Yes *** 11.00 to 32.46 12.14 Yes *** 12.59 to 34.04 ns -11.49 to 9.965 *** 14.59 to 36.04 0.3159 No ns -11.33 to 10.12 0.003334 0.00174 No ns -10.72 to 10.73 18.8 Yes *** 25.37 to 46.83 15.66 Yes *** 19.34 to 40.79 ns -9.838 to 11.62 136 TH-DB vs TH-MG-TM 23.31 137 TH-DB vs TH-MG-DB -0.7633 138 TH-DB vs TH-MG-SD-TM 139 TH-DB vs TH-MG-TM-DB 140 TH-DB vs TH-MG-SD-DB 25.31 -0.6067 141 TH-DB vs SD 36.1 142 TH-DB vs TM 30.06 143 TH-DB vs DB 0.89 0.3975 No 13.18 Yes 0.4635 No 144 TH-DB vs SD-TM 31.25 16.27 Yes *** 20.52 to 41.97 145 TH-DB vs SD-DB 2.003 1.043 No ns -8.725 to 12.73 146 TH-DB vs TM-DB 3.42 1.781 No ns -7.308 to 14.15 7.5 3.906 No ns -3.228 to 18.23 148 TH-DB vs THMGT 10.34 5.387 No ns -0.3849 to 21.07 149 TH-DB vs MG-SD-TM 30.06 15.66 Yes *** 19.34 to 40.79 150 TH-DB vs MG-TM-DB 2.74 1.427 No ns -7.988 to 13.47 151 TH-DB vs MG-SD-DB 2.963 1.543 No ns -7.765 to 13.69 152 TH-DB vs TH-SD-TM 24.95 *** 14.23 to 35.68 153 TH-DB vs TH-TM-DB -0.09 0.04687 No ns -10.82 to 10.64 154 TH-DB vs TH-SD-DB 1.237 0.644 No ns -9.492 to 11.96 155 TH-DB vs TH-SD-TM-DB 1.863 0.9704 No ns -8.865 to 12.59 156 TH-DB vs MG-SD-TM-DB 6.597 3.435 No ns -4.132 to 17.32 157 MG vs MG-SD 6.19 3.224 No ns -4.538 to 16.92 158 MG vs MG-TM -2.263 1.179 No ns -12.99 to 8.465 159 MG vs MG-DB -28.74 14.97 Yes *** -39.47 to -18.01 160 MG vs TH-MG-SD -10.49 5.465 No ns -21.22 to 0.2349 161 MG vs TH-MG-TM -8.91 4.64 No ns -19.64 to 1.818 147 TH-DB vs TM-SD-DB 13 Yes 162 MG vs TH-MG-DB -32.99 17.18 Yes *** -43.71 to -22.26 163 MG vs TH-MG-SD-TM -6.91 3.599 No ns -17.64 to 3.818 164 MG vs TH-MG-TM-DB -32.83 17.1 Yes *** -43.56 to -22.10 165 MG vs TH-MG-SD-DB -32.22 16.78 Yes *** -42.95 to -21.49 166 MG vs SD 3.877 2.019 No ns -6.852 to 14.60 167 MG vs TM -2.16 1.125 No ns -12.89 to 8.568 16.32 Yes *** -42.06 to -20.61 ns -11.70 to 9.752 15.74 Yes *** -40.95 to -19.49 168 MG vs DB -31.33 169 MG vs SD-TM -0.9767 170 MG vs SD-DB -30.22 171 MG vs TM-DB 0.5086 No -28.8 15 Yes *** -39.53 to -18.08 172 MG vs TM-SD-DB -24.72 12.88 Yes *** -35.45 to -14.00 173 MG vs THMGT -21.88 11.39 Yes *** -32.61 to -11.15 174 MG vs MG-SD-TM -2.16 1.125 No ns -12.89 to 8.568 175 MG vs MG-TM-DB -29.48 15.35 Yes *** -40.21 to -18.76 176 MG vs MG-SD-DB -29.26 15.24 Yes *** -39.99 to -18.53 177 MG vs TH-SD-TM -7.27 3.786 No ns -18.00 to 3.458 178 MG vs TH-TM-DB -32.31 16.83 Yes *** -43.04 to -21.59 179 MG vs TH-SD-DB -30.99 16.14 Yes *** -41.71 to -20.26 180 MG vs TH-SD-TM-DB -30.36 15.81 Yes *** -41.09 to -19.63 181 MG vs MG-SD-TM-DB -25.63 13.35 Yes *** -36.35 to -14.90 182 MG-SD vs MG-TM -8.453 4.402 No ns -19.18 to 2.275 183 MG-SD vs MG-DB -34.93 18.19 Yes *** -45.66 to -24.20 184 MG-SD vs TH-MG-SD -16.68 8.688 Yes *** -27.41 to -5.955 185 MG-SD vs TH-MG-TM -15.1 7.864 Yes *** -25.83 to -4.372 186 MG-SD vs TH-MG-DB -39.18 20.4 Yes *** -49.90 to -28.45 187 MG-SD vs TH-MG-SD-TM -13.1 6.822 Yes ** -23.83 to -2.372 188 MG-SD vs TH-MG-TM-DB -39.02 20.32 Yes *** -49.75 to -28.29 189 MG-SD vs TH-MG-SD-DB -38.41 20 Yes *** -49.14 to -27.68 190 MG-SD vs SD -2.313 1.205 No ns -13.04 to 8.415 191 MG-SD vs TM -8.35 4.349 No ns -19.08 to 2.378 192 MG-SD vs DB -37.52 19.54 Yes *** -48.25 to -26.80 193 MG-SD vs SD-TM -7.167 3.732 No ns -17.89 to 3.562 194 MG-SD vs SD-DB -36.41 18.96 Yes *** -47.14 to -25.68 195 MG-SD vs TM-DB -34.99 18.22 Yes *** -45.72 to -24.27 196 MG-SD vs TM-SD-DB -30.91 16.1 Yes *** -41.64 to -20.19 197 MG-SD vs THMGT -28.07 14.62 Yes *** -38.80 to -17.34 198 MG-SD vs MG-SD-TM -8.35 4.349 No ns -19.08 to 2.378 199 MG-SD vs MG-TM-DB -35.67 18.58 Yes *** -46.40 to -24.95 200 MG-SD vs MG-SD-DB -35.45 18.46 Yes *** -46.18 to -24.72 201 MG-SD vs TH-SD-TM -13.46 7.01 Yes ** -24.19 to -2.732 202 MG-SD vs TH-TM-DB -38.5 20.05 Yes *** -49.23 to -27.78 203 MG-SD vs TH-SD-DB -37.18 19.36 Yes *** -47.90 to -26.45 204 MG-SD vs TH-SD-TM-DB -36.55 19.03 Yes *** -47.28 to -25.82 205 MG-SD vs MG-SD-TM-DB -31.82 16.57 Yes *** -42.54 to -21.09 206 MG-TM vs MG-DB -26.48 13.79 Yes *** -37.20 to -15.75 207 MG-TM vs TH-MG-SD -8.23 4.286 No ns -18.96 to 2.498 208 MG-TM vs TH-MG-TM -6.647 3.461 No ns -17.37 to 4.082 209 MG-TM vs TH-MG-DB -30.72 *** -41.45 to -20.00 210 MG-TM vs TH-MG-SD-TM -4.647 2.42 No ns -15.37 to 6.082 211 MG-TM vs TH-MG-TM-DB -30.57 15.92 Yes *** -41.29 to -19.84 16 Yes 212 MG-TM vs TH-MG-SD-DB *** -40.68 to -19.23 3.198 No ns -4.588 to 16.87 214 MG-TM vs TM 0.1033 0.05381 No ns -10.62 to 10.83 215 MG-TM vs DB -29.07 *** -39.80 to -18.34 ns -9.442 to 12.01 213 MG-TM vs SD -29.96 6.14 15.6 Yes 15.14 Yes 216 MG-TM vs SD-TM 1.287 217 MG-TM vs SD-DB -27.96 14.56 Yes *** -38.68 to -17.23 218 MG-TM vs TM-DB -26.54 13.82 Yes *** -37.27 to -15.81 219 MG-TM vs TM-SD-DB -22.46 11.7 Yes *** -33.19 to -11.73 220 MG-TM vs THMGT -19.62 10.22 Yes *** -30.34 to -8.888 221 MG-TM vs MG-SD-TM 0.1033 0.05381 No ns -10.62 to 10.83 222 MG-TM vs MG-TM-DB -27.22 14.18 Yes *** -37.95 to -16.49 223 MG-TM vs MG-SD-DB -27 14.06 Yes *** -37.72 to -16.27 224 MG-TM vs TH-SD-TM -5.007 2.607 No ns -15.73 to 5.722 225 MG-TM vs TH-TM-DB -30.05 15.65 Yes *** -40.78 to -19.32 226 MG-TM vs TH-SD-DB -28.72 14.96 Yes *** -39.45 to -18.00 227 MG-TM vs TH-SD-TM-DB -28.1 14.63 Yes *** -38.82 to -17.37 228 MG-TM vs MG-SD-TM-DB -23.36 12.17 Yes *** -34.09 to -12.64 18.25 9.503 Yes *** 7.518 to 28.97 230 MG-DB vs TH-MG-TM 19.83 10.33 Yes *** 9.102 to 30.56 231 MG-DB vs TH-MG-DB -4.247 2.212 No ns -14.97 to 6.482 232 MG-DB vs TH-MG-SD-TM 21.83 11.37 Yes *** 11.10 to 32.56 233 MG-DB vs TH-MG-TM-DB -4.09 2.13 No ns -14.82 to 6.638 234 MG-DB vs TH-MG-SD-DB -3.48 1.812 No ns -14.21 to 7.248 235 MG-DB vs SD 32.62 16.99 Yes *** 21.89 to 43.34 236 MG-DB vs TM 26.58 13.84 Yes *** 15.85 to 37.31 237 MG-DB vs DB -2.593 1.351 No ns -13.32 to 8.135 27.76 14.46 Yes *** 17.04 to 38.49 0.7708 No ns -12.21 to 9.248 -0.06333 0.03298 No ns -10.79 to 10.66 229 MG-DB vs TH-MG-SD 238 MG-DB vs SD-TM 239 MG-DB vs SD-DB 240 MG-DB vs TM-DB 241 MG-DB vs TM-SD-DB 242 MG-DB vs THMGT -1.48 0.6701 No 4.017 2.092 No ns -6.712 to 14.74 6.86 3.573 No ns -3.868 to 17.59 243 MG-DB vs MG-SD-TM 26.58 13.84 Yes *** 15.85 to 37.31 244 MG-DB vs MG-TM-DB -0.7433 0.3871 No ns -11.47 to 9.985 245 MG-DB vs MG-SD-DB -0.52 0.2708 No ns -11.25 to 10.21 246 MG-DB vs TH-SD-TM 21.47 11.18 Yes *** 10.74 to 32.20 247 MG-DB vs TH-TM-DB -3.573 1.861 No ns -14.30 to 7.155 248 MG-DB vs TH-SD-DB -2.247 1.17 No ns -12.97 to 8.482 249 MG-DB vs TH-SD-TM-DB -1.62 0.8437 No ns -12.35 to 9.108 250 MG-DB vs MG-SD-TM-DB 3.113 1.621 No ns -7.615 to 13.84 251 TH-MG-SD vs TH-MG-TM 1.583 0.8246 No ns -9.145 to 12.31 252 TH-MG-SD vs TH-MG-DB -22.49 11.71 Yes *** -33.22 to -11.77 253 TH-MG-SD vs TH-MG-SD-TM 3.583 1.866 No ns -7.145 to 14.31 254 TH-MG-SD vs TH-MG-TM-DB -22.34 11.63 Yes *** -33.06 to -11.61 255 TH-MG-SD vs TH-MG-SD-DB -21.73 11.31 Yes *** -32.45 to -11.00 14.37 7.484 Yes *** 3.642 to 25.10 256 TH-MG-SD vs SD 257 TH-MG-SD vs TM 8.333 4.34 No ns -2.395 to 19.06 258 TH-MG-SD vs DB -20.84 10.85 Yes *** -31.57 to -10.11 259 TH-MG-SD vs SD-TM 9.517 4.956 No ns -1.212 to 20.24 260 TH-MG-SD vs SD-DB -19.73 10.27 Yes *** -30.45 to -8.998 261 TH-MG-SD vs TM-DB -18.31 9.535 Yes *** -29.04 to -7.582 262 TH-MG-SD vs TM-SD-DB -14.23 7.411 Yes *** -24.96 to -3.502 263 TH-MG-SD vs THMGT -11.39 5.93 Yes * -22.11 to -0.6585 264 TH-MG-SD vs MG-SD-TM 8.333 4.34 No ns -2.395 to 19.06 265 TH-MG-SD vs MG-TM-DB -18.99 9.89 Yes *** -29.72 to -8.262 266 TH-MG-SD vs MG-SD-DB -18.77 9.773 Yes *** -29.49 to -8.038 267 TH-MG-SD vs TH-SD-TM 3.223 1.679 No ns -7.505 to 13.95 268 TH-MG-SD vs TH-TM-DB -21.82 11.36 Yes *** -32.55 to -11.09 269 TH-MG-SD vs TH-SD-DB -20.49 10.67 Yes *** -31.22 to -9.765 270 TH-MG-SD vs TH-SD-TM-DB -19.87 10.35 Yes *** -30.59 to -9.138 271 TH-MG-SD vs MG-SD-TM-DB -15.13 7.881 Yes *** -25.86 to -4.405 272 TH-MG-TM vs TH-MG-DB -24.08 12.54 Yes *** -34.80 to -13.35 1.042 No ns -8.728 to 12.73 273 TH-MG-TM vs TH-MG-SD-TM 274 TH-MG-TM vs TH-MG-TM-DB -23.92 12.46 Yes *** -34.65 to -13.19 275 TH-MG-TM vs TH-MG-SD-DB -23.31 12.14 Yes *** -34.04 to -12.58 12.79 6.659 Yes ** 2.058 to 23.51 277 TH-MG-TM vs TM 6.75 3.515 No ns -3.978 to 17.48 278 TH-MG-TM vs DB -22.42 11.68 Yes *** -33.15 to -11.70 279 TH-MG-TM vs SD-TM 7.933 4.132 No ns -2.795 to 18.66 280 TH-MG-TM vs SD-DB -21.31 11.1 Yes *** -32.04 to -10.58 281 TH-MG-TM vs TM-DB -19.89 10.36 Yes *** -30.62 to -9.165 282 TH-MG-TM vs TM-SD-DB -15.81 8.235 Yes *** -26.54 to -5.085 283 TH-MG-TM vs THMGT -12.97 6.755 Yes ** -23.70 to -2.242 3.515 No ns -3.978 to 17.48 10.71 Yes *** -31.30 to -9.845 10.6 Yes *** -31.08 to -9.622 ns -9.088 to 12.37 12.19 Yes *** -34.13 to -12.68 276 TH-MG-TM vs SD 284 TH-MG-TM vs MG-SD-TM 6.75 285 TH-MG-TM vs MG-TM-DB -20.57 286 TH-MG-TM vs MG-SD-DB -20.35 287 TH-MG-TM vs TH-SD-TM 1.64 288 TH-MG-TM vs TH-TM-DB -23.4 289 TH-MG-TM vs TH-SD-DB -22.08 11.5 Yes *** -32.80 to -11.35 290 TH-MG-TM vs TH-SD-TM-DB -21.45 11.17 Yes *** -32.18 to -10.72 291 TH-MG-TM vs MG-SD-TM-DB -16.72 8.706 Yes *** -27.44 to -5.988 26.08 13.58 Yes 292 TH-MG-DB vs TH-MG-SD-TM 0.8541 No *** 15.35 to 36.80 293 TH-MG-DB vs TH-MG-TM-DB 0.1567 0.08159 No ns -10.57 to 10.88 294 TH-MG-DB vs TH-MG-SD-DB 0.7667 ns -9.962 to 11.49 0.3993 No 295 TH-MG-DB vs SD 36.86 19.2 Yes *** 26.14 to 47.59 296 TH-MG-DB vs TM 30.83 16.05 Yes *** 20.10 to 41.55 297 TH-MG-DB vs DB 1.653 0.861 No ns -9.075 to 12.38 298 TH-MG-DB vs SD-TM 32.01 16.67 Yes *** 21.28 to 42.74 299 TH-MG-DB vs SD-DB 2.767 1.441 No ns -7.962 to 13.49 300 TH-MG-DB vs TM-DB 4.183 2.179 No ns -6.545 to 14.91 301 TH-MG-DB vs TM-SD-DB 8.263 4.303 No ns -2.465 to 18.99 302 TH-MG-DB vs THMGT 11.11 5.784 Yes * 0.3785 to 21.83 303 TH-MG-DB vs MG-SD-TM 30.83 16.05 Yes *** 20.10 to 41.55 304 TH-MG-DB vs MG-TM-DB 3.503 1.824 No ns -7.225 to 14.23 305 TH-MG-DB vs MG-SD-DB 3.727 1.941 No ns -7.002 to 14.45 306 TH-MG-DB vs TH-SD-TM 25.72 13.39 Yes *** 14.99 to 36.44 307 TH-MG-DB vs TH-TM-DB 0.6733 0.3507 No ns -10.05 to 11.40 308 TH-MG-DB vs TH-SD-DB 1.042 No ns -8.728 to 12.73 2.627 1.368 No ns -8.102 to 13.35 7.36 3.833 No ns -3.368 to 18.09 *** -36.65 to -15.19 309 TH-MG-DB vs TH-SD-TM-DB 310 TH-MG-DB vs MG-SD-TM-DB 311 TH-MG-SD-TM vs TH-MG-TM-DB -25.92 13.5 Yes 312 TH-MG-SD-TM vs TH-MG-SD-DB -25.31 13.18 Yes *** -36.04 to -14.58 313 TH-MG-SD-TM vs SD 10.79 5.617 Yes * 0.05848 to 21.51 314 TH-MG-SD-TM vs TM 4.75 2.474 No ns -5.978 to 15.48 315 TH-MG-SD-TM vs DB -24.42 12.72 Yes *** -35.15 to -13.70 316 TH-MG-SD-TM vs SD-TM 5.933 3.09 No ns -4.795 to 16.66 317 TH-MG-SD-TM vs SD-DB -23.31 12.14 Yes *** -34.04 to -12.58 318 TH-MG-SD-TM vs TM-DB -21.89 11.4 Yes *** -32.62 to -11.17 319 TH-MG-SD-TM vs TM-SD-DB -17.81 9.277 Yes *** -28.54 to -7.085 320 TH-MG-SD-TM vs THMGT -14.97 7.796 Yes *** -25.70 to -4.242 321 TH-MG-SD-TM vs MG-SD-TM 4.75 2.474 No ns -5.978 to 15.48 322 TH-MG-SD-TM vs MG-TM-DB -22.57 11.76 Yes *** -33.30 to -11.85 323 TH-MG-SD-TM vs MG-SD-DB -22.35 11.64 Yes *** -33.08 to -11.62 324 TH-MG-SD-TM vs TH-SD-TM -0.36 ns -11.09 to 10.37 325 TH-MG-SD-TM vs TH-TM-DB -25.4 13.23 Yes *** -36.13 to -14.68 326 TH-MG-SD-TM vs TH-SD-DB -24.08 12.54 Yes *** -34.80 to -13.35 327 TH-MG-SD-TM vs TH-SD-TM-DB -23.45 12.21 Yes *** -34.18 to -12.72 328 TH-MG-SD-TM vs MG-SD-TM-DB -18.72 9.747 Yes *** -29.44 to -7.988 329 TH-MG-TM-DB vs TH-MG-SD-DB 0.61 ns -10.12 to 11.34 0.1875 No 0.3177 No 330 TH-MG-TM-DB vs SD 36.71 19.12 Yes *** 25.98 to 47.43 331 TH-MG-TM-DB vs TM 30.67 15.97 Yes *** 19.94 to 41.40 332 TH-MG-TM-DB vs DB 1.497 ns -9.232 to 12.22 333 TH-MG-TM-DB vs SD-TM 31.85 16.59 Yes *** 21.13 to 42.58 334 TH-MG-TM-DB vs SD-DB 2.61 1.359 No ns -8.118 to 13.34 335 TH-MG-TM-DB vs TM-DB 4.027 2.097 No ns -6.702 to 14.75 336 TH-MG-TM-DB vs TM-SD-DB 8.107 4.222 No ns -2.622 to 18.83 337 TH-MG-TM-DB vs THMGT 10.95 5.703 Yes * 0.2218 to 21.68 338 TH-MG-TM-DB vs MG-SD-TM 30.67 15.97 Yes *** 19.94 to 41.40 339 TH-MG-TM-DB vs MG-TM-DB 3.347 1.743 No ns -7.382 to 14.07 340 TH-MG-TM-DB vs MG-SD-DB 3.57 1.859 No ns -7.158 to 14.30 341 TH-MG-TM-DB vs TH-SD-TM 25.56 13.31 Yes *** 14.83 to 36.29 342 TH-MG-TM-DB vs TH-TM-DB 0.5167 0.2691 No ns -10.21 to 11.24 343 TH-MG-TM-DB vs TH-SD-DB 1.843 0.96 No ns -8.885 to 12.57 344 TH-MG-TM-DB vs TH-SD-TM-DB 2.47 1.286 No ns -8.258 to 13.20 345 TH-MG-TM-DB vs MG-SD-TM-DB 7.203 3.751 No 0.7794 No ns -3.525 to 17.93 346 TH-MG-SD-DB vs SD 36.1 18.8 Yes *** 25.37 to 46.82 347 TH-MG-SD-DB vs TM 30.06 15.65 Yes *** 19.33 to 40.79 348 TH-MG-SD-DB vs DB 0.8867 ns -9.842 to 11.61 16.27 Yes *** 20.52 to 41.97 1.042 No ns -8.728 to 12.73 351 TH-MG-SD-DB vs TM-DB 3.417 1.779 No ns -7.312 to 14.14 352 TH-MG-SD-DB vs TM-SD-DB 7.497 3.904 No ns -3.232 to 18.22 353 TH-MG-SD-DB vs THMGT 10.34 5.385 No ns -0.3882 to 21.07 354 TH-MG-SD-DB vs MG-SD-TM 30.06 15.65 Yes *** 19.33 to 40.79 355 TH-MG-SD-DB vs MG-TM-DB 2.737 1.425 No ns -7.992 to 13.46 356 TH-MG-SD-DB vs MG-SD-DB 2.96 1.542 No ns -7.768 to 13.69 24.95 12.99 Yes *** 14.22 to 35.68 ns -10.82 to 10.63 349 TH-MG-SD-DB vs SD-TM 31.24 350 TH-MG-SD-DB vs SD-DB 357 TH-MG-SD-DB vs TH-SD-TM 358 TH-MG-SD-DB vs TH-TM-DB 359 TH-MG-SD-DB vs TH-SD-DB 0.4618 No -0.09333 0.04861 No 1.233 0.6423 No ns -9.495 to 11.96 360 TH-MG-SD-DB vs TH-SD-TM-DB 1.86 0.9687 No ns -8.868 to 12.59 361 TH-MG-SD-DB vs MG-SD-TM-DB 6.593 3.434 No ns -4.135 to 17.32 362 SD vs TM -6.037 3.144 No ns -16.76 to 4.692 363 SD vs DB -35.21 18.34 Yes *** -45.94 to -24.48 364 SD vs SD-TM -4.853 2.528 No ns -15.58 to 5.875 365 SD vs SD-DB -34.1 17.76 Yes *** -44.82 to -23.37 366 SD vs TM-DB -32.68 17.02 Yes *** -43.41 to -21.95 -28.6 14.89 Yes *** -39.33 to -17.87 368 SD vs THMGT -25.76 13.41 Yes *** -36.48 to -15.03 369 SD vs MG-SD-TM -6.037 3.144 No ns -16.76 to 4.692 370 SD vs MG-TM-DB -33.36 17.37 Yes *** -44.09 to -22.63 371 SD vs MG-SD-DB -33.14 17.26 Yes *** -43.86 to -22.41 372 SD vs TH-SD-TM -11.15 5.805 Yes * -21.87 to -0.4185 373 SD vs TH-TM-DB -36.19 18.85 Yes *** -46.92 to -25.46 374 SD vs TH-SD-DB -34.86 18.16 Yes *** -45.59 to -24.14 375 SD vs TH-SD-TM-DB -34.24 17.83 Yes *** -44.96 to -23.51 376 SD vs MG-SD-TM-DB -29.5 15.36 Yes *** -40.23 to -18.78 15.19 Yes *** -39.90 to -18.45 ns -9.545 to 11.91 367 SD vs TM-SD-DB 377 TM vs DB -29.17 378 TM vs SD-TM 1.183 379 TM vs SD-DB -28.06 14.61 Yes *** -38.79 to -17.33 380 TM vs TM-DB -26.64 13.88 Yes *** -37.37 to -15.92 381 TM vs TM-SD-DB -22.56 11.75 Yes *** -33.29 to -11.84 382 TM vs THMGT -19.72 10.27 Yes *** -30.45 to -8.992 383 TM vs MG-SD-TM 0.6163 No ns -10.73 to 10.73 384 TM vs MG-TM-DB -27.32 14.23 Yes *** -38.05 to -16.60 385 TM vs MG-SD-DB -27.1 14.11 Yes *** -37.83 to -16.37 386 TM vs TH-SD-TM -5.11 2.661 No ns -15.84 to 5.618 387 TM vs TH-TM-DB -30.15 15.7 Yes *** -40.88 to -19.43 388 TM vs TH-SD-DB -28.83 15.01 Yes *** -39.55 to -18.10 389 TM vs TH-SD-TM-DB -28.2 14.69 Yes *** -38.93 to -17.47 390 TM vs MG-SD-TM-DB -23.47 12.22 Yes *** -34.19 to -12.74 391 DB vs SD-TM 30.36 15.81 Yes *** 19.63 to 41.08 392 DB vs SD-DB 1.113 0.5798 No ns -9.615 to 11.84 393 DB vs TM-DB 2.53 1.318 No ns -8.198 to 13.26 394 DB vs TM-SD-DB 6.61 3.442 No ns -4.118 to 17.34 395 DB vs THMGT 9.453 4.923 No ns -1.275 to 20.18 396 DB vs MG-SD-TM 29.17 15.19 Yes *** 18.45 to 39.90 397 DB vs MG-TM-DB 1.85 0.9634 No ns -8.878 to 12.58 398 DB vs MG-SD-DB 2.073 1.08 No ns -8.655 to 12.80 399 DB vs TH-SD-TM 24.06 12.53 Yes *** 13.34 to 34.79 400 DB vs TH-TM-DB -0.98 0.5104 No ns -11.71 to 9.748 401 DB vs TH-SD-DB 0.3467 0.1805 No ns -10.38 to 11.07 402 DB vs TH-SD-TM-DB 0.9733 0.5069 No ns -9.755 to 11.70 403 DB vs MG-SD-TM-DB 5.707 2.972 No ns -5.022 to 16.43 404 SD-TM vs SD-DB -29.24 15.23 Yes *** -39.97 to -18.52 405 SD-TM vs TM-DB -27.83 14.49 Yes *** -38.55 to -17.10 406 SD-TM vs TM-SD-DB -23.75 12.37 Yes *** -34.47 to -13.02 10.89 Yes *** -31.63 to -10.18 ns -11.91 to 9.545 407 SD-TM vs THMGT 1.49E-08 7.8E-09 No -20.9 408 SD-TM vs MG-SD-TM -1.183 0.6163 No 409 SD-TM vs MG-TM-DB -28.51 14.85 Yes *** -39.23 to -17.78 410 SD-TM vs MG-SD-DB -28.28 14.73 Yes *** -39.01 to -17.56 411 SD-TM vs TH-SD-TM -6.293 3.277 No ns -17.02 to 4.435 412 SD-TM vs TH-TM-DB -31.34 16.32 Yes *** -42.06 to -20.61 413 SD-TM vs TH-SD-DB -30.01 15.63 Yes *** -40.74 to -19.28 414 SD-TM vs TH-SD-TM-DB -29.38 15.3 Yes *** -40.11 to -18.66 415 SD-TM vs MG-SD-TM-DB -24.65 12.84 Yes *** -35.38 to -13.92 416 SD-DB vs TM-DB 1.417 0.7378 No ns -9.312 to 12.14 417 SD-DB vs TM-SD-DB 5.497 2.863 No ns -5.232 to 16.22 418 SD-DB vs THMGT 8.34 4.343 No ns -2.388 to 19.07 419 SD-DB vs MG-SD-TM 28.06 14.61 Yes *** 17.33 to 38.79 420 SD-DB vs MG-TM-DB 0.7367 0.3836 No ns -9.992 to 11.46 421 SD-DB vs MG-SD-DB 0.96 0.4999 No ns -9.768 to 11.69 422 SD-DB vs TH-SD-TM 22.95 11.95 Yes *** 12.22 to 33.68 423 SD-DB vs TH-TM-DB -2.093 1.09 No ns -12.82 to 8.635 424 SD-DB vs TH-SD-DB -0.7667 0.3993 No ns -11.49 to 9.962 425 SD-DB vs TH-SD-TM-DB -0.14 0.07291 No ns -10.87 to 10.59 426 SD-DB vs MG-SD-TM-DB 4.593 2.392 No ns -6.135 to 15.32 427 TM-DB vs TM-SD-DB 4.08 2.125 No ns -6.648 to 14.81 428 TM-DB vs THMGT 6.923 3.606 No ns -3.805 to 17.65 429 TM-DB vs MG-SD-TM 26.64 13.88 Yes *** 15.92 to 37.37 430 TM-DB vs MG-TM-DB -0.68 0.3541 No ns -11.41 to 10.05 431 TM-DB vs MG-SD-DB -0.4567 0.2378 No ns -11.18 to 10.27 432 TM-DB vs TH-SD-TM 21.53 11.21 Yes *** 10.81 to 32.26 433 TM-DB vs TH-TM-DB -3.51 1.828 No ns -14.24 to 7.218 434 TM-DB vs TH-SD-DB -2.183 1.137 No ns -12.91 to 8.545 435 TM-DB vs TH-SD-TM-DB -1.557 0.8107 No ns -12.28 to 9.172 436 TM-DB vs MG-SD-TM-DB 3.177 1.654 No ns -7.552 to 13.90 437 TM-SD-DB vs THMGT 2.843 1.481 No ns -7.885 to 13.57 438 TM-SD-DB vs MG-SD-TM 22.56 11.75 Yes *** 11.84 to 33.29 439 TM-SD-DB vs MG-TM-DB -4.76 2.479 No ns -15.49 to 5.968 440 TM-SD-DB vs MG-SD-DB -4.537 2.363 No ns -15.26 to 6.192 441 TM-SD-DB vs TH-SD-TM 17.45 9.089 Yes *** 6.725 to 28.18 442 TM-SD-DB vs TH-TM-DB -7.59 3.953 No ns -18.32 to 3.138 443 TM-SD-DB vs TH-SD-DB -6.263 3.262 No ns -16.99 to 4.465 444 TM-SD-DB vs TH-SD-TM-DB -5.637 2.935 No ns -16.36 to 5.092 445 TM-SD-DB vs MG-SD-TM-DB -0.9033 0.4704 No ns -11.63 to 9.825 446 THMGT vs MG-SD-TM 19.72 10.27 Yes *** 8.992 to 30.45 447 THMGT vs MG-TM-DB -7.603 3.96 No ns -18.33 to 3.125 448 THMGT vs MG-SD-DB -7.38 3.843 No ns -18.11 to 3.348 449 THMGT vs TH-SD-TM 14.61 7.609 Yes *** 3.882 to 25.34 450 THMGT vs TH-TM-DB -10.43 5.433 No ns -21.16 to 0.2949 451 THMGT vs TH-SD-DB -9.107 4.743 No ns -19.83 to 1.622 452 THMGT vs TH-SD-TM-DB -8.48 4.416 No ns -19.21 to 2.248 453 THMGT vs MG-SD-TM-DB -3.747 1.951 No ns -14.47 to 6.982 454 MG-SD-TM vs MG-TM-DB -27.32 14.23 Yes *** -38.05 to -16.60 455 MG-SD-TM vs MG-SD-DB -27.1 14.11 Yes *** -37.83 to -16.37 456 MG-SD-TM vs TH-SD-TM -5.11 2.661 No ns -15.84 to 5.618 457 MG-SD-TM vs TH-TM-DB -30.15 15.7 Yes *** -40.88 to -19.43 458 MG-SD-TM vs TH-SD-DB -28.83 15.01 Yes *** -39.55 to -18.10 -28.2 14.69 Yes *** -38.93 to -17.47 12.22 Yes *** -34.19 to -12.74 ns -10.50 to 10.95 459 MG-SD-TM vs TH-SD-TM-DB 460 MG-SD-TM vs MG-SD-TM-DB -23.47 461 MG-TM-DB vs MG-SD-DB 0.2233 0.1163 No 462 MG-TM-DB vs TH-SD-TM 22.21 11.57 Yes *** 11.49 to 32.94 463 MG-TM-DB vs TH-TM-DB -2.83 1.474 No ns -13.56 to 7.898 464 MG-TM-DB vs TH-SD-DB -1.503 0.7829 No ns -12.23 to 9.225 465 MG-TM-DB vs TH-SD-TM-DB -0.8767 0.4566 No ns -11.60 to 9.852 466 MG-TM-DB vs MG-SD-TM-DB 3.857 2.008 No ns -6.872 to 14.58 467 MG-SD-DB vs TH-SD-TM 21.99 11.45 Yes *** 11.26 to 32.72 468 MG-SD-DB vs TH-TM-DB -3.053 1.59 No ns -13.78 to 7.675 469 MG-SD-DB vs TH-SD-DB -1.727 0.8992 No ns -12.45 to 9.002 -1.1 0.5729 No ns -11.83 to 9.628 470 MG-SD-DB vs TH-SD-TM-DB 471 MG-SD-DB vs MG-SD-TM-DB 3.633 1.892 No ns -7.095 to 14.36 472 TH-SD-TM vs TH-TM-DB -25.04 13.04 Yes *** -35.77 to -14.32 473 TH-SD-TM vs TH-SD-DB -23.72 12.35 Yes *** -34.44 to -12.99 474 TH-SD-TM vs TH-SD-TM-DB -23.09 12.02 Yes *** -33.82 to -12.36 475 TH-SD-TM vs MG-SD-TM-DB -18.36 9.56 Yes *** -29.08 to -7.628 476 TH-TM-DB vs TH-SD-DB 1.327 0.6909 No ns -9.402 to 12.05 477 TH-TM-DB vs TH-SD-TM-DB 1.953 1.017 No ns -8.775 to 12.68 478 TH-TM-DB vs MG-SD-TM-DB 6.687 3.482 No ns -4.042 to 17.41 479 TH-SD-DB vs TH-SD-TM-DB 0.6267 0.3264 No ns -10.10 to 11.35 5.36 2.791 No ns -5.368 to 16.09 4.733 2.465 No ns -5.995 to 15.46 480 TH-SD-DB vs MG-SD-TM-DB 481 TH-SD-TM-DB vs MG-SD-TM-DB Phụ lục 07 NHÓM KẾT QUẢ THÔ THỬ NGHIỆM TĂNG SINH TRÊN PBMC STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Tên H20 TH TH-MG TH-SD TH-TM TH-DB MG MG-SD MG-TM MG-DB THMG-SD THMG-TM THMG-DB THMG-SDTM THMG-TMDB THMG-SDDB SD TM DB SD-TM SD-DB TM-DB TM-SD-DB mTHMGT MG-SDTM MG-TMDB MG-SDDB TH-SDTM TH-TMDB TH-SDDB TH-SDTMDB MG-SDTMDB Lần -2.86 42.16 50 38.24 32.35 64.71 59.8 46.08 36.27 50.98 36.27 36.27 45.1 31.37 43.14 45.1 -5.88 -0.98 0.98 1.96 1.96 -3.92 9.8 24.51 10.78 34.31 39.22 13.73 35.29 47.06 4.72 22.05 %G Lần Lần 12.28 6.33 25 15.48 37.5 20.24 18.75 11.9 20.31 17.86 51.56 23.81 50 27.38 43.75 15.48 23.44 20.24 39.06 21.43 25 8.33 18.75 10.71 37.5 25 18.75 13.1 35.94 14.29 29.69 21.43 -1.56 11.9 4.69 -4.76 1.56 3.57 -6.25 -15.48 1.56 5.95 31.25 -3.57 -3.13 -1.19 28.12 29.66 6.25 -7.14 6.25 16.67 28.12 15.48 -3.13 -2.38 17.19 19.05 3.13 20.24 2.86 -13.27 8.57 -7.14 Elsevier Editorial System(tm) for Journal of Ethnopharmacology Manuscript Draft Manuscript Number: JEP-D-15-00873 Title: Components of Sweet Wormwood and Tortoise Shell Decoction (Thanh Hao Miet Giap Thang) had synergistic effect and selective cytotoxicity for MCF-7 cells over fibroblasts Article Type: Research Paper Keywords: Thanh Hao Miet Giap Thang; Traditional Chinese Medicine; selective cytotoxicity; synergy; xCELLigence Corresponding Author: Dr Thuy Duong Ho Huynh, Ph.D Corresponding Author's Institution: University of Science First Author: Hoang Tam Nguyen Thai Order of Authors: Hoang Tam Nguyen Thai; My Nuong T Nguyen; Thuy Duong Ho Huynh, Ph.D Abstract: Ethnopharmacological relevance: Thanh Hao Miet Giap Thang (THMGT), an herbal formula composed of five ingredients, is traditionally used to treat feverish symptoms It is used in complementary and supportive care in Vietnam, for patients underwent conventional cancer treatment Aim of the study: This study was to investigate the overall effect of the formula and possible interactions among different ingredients in term of anti-proliferative activity and selective cytotoxicity of THMGT toward tumor cells Methods: Chemical fingerprints of THMGT and its five ingredients were determined by HPLC analysis Cytotoxicity of the formula and ingredients was assessed by SRB assay on fibroblasts, MCF-7, Hep G2 and NCI-H460 cells The Chou-Talalay method was used to establish synergistic, additive or antagonistic interactions of ingredients on a tumor cell line (MCF-7) and normal fibroblasts SRB assay in concert with xCELLigence analysis were used to assess and characterize anti-proliferative activity of all possible combinations of ingredients Results: THMGT and four components, Herba Artemisia apiacea, Rhizoma Anemarrhenae, Radix Rehmanniae, Moutan Cortex, exhibited cytotoxicity on MCF-7, Hep G2 and NCI-H460 cells The fifth ingredient, Carapax Trionycis showed no cytotoxic effect on all cell lines tested Analysis of all possible combinations of ingredients simultaneously by SRB assay and xCELLigence system showed different anti-proliferative profiles, suggesting different modes of action of THMGT ingredients on cell proliferation Based on anti-proliferative profiles, combinations can be classified into three groups: those containing Moutan Cortex exhibited concurrent high detaching and killing activity, those containing Rhizoma Anemarrhenae showed high detaching though low killing effect and the third group, free of Moutan Cortex and Rhizoma Anemarrhenae, exhibited no anti-proliferative effect THMGT and combinations containing Moutan Cortex exhibited significant higher cytotoxicity toward MCF-7 cells over fibroblasts At IC50 of THMGT, combined ingredients expressed synergistic interaction on MCF-7 cells and antagonistic effect on fibroblasts Conclusions: THMGT had cytotoxic activity in vitro, possibly through synergistic interaction of four of its ingredients The formula showed in vitro selective cytotoxicity toward MCF-7 cells over normal cells