Khảo sát đột biến precore và basal core promoter ở bệnh nhân viêm gan siêu vi b mạn đại học y dược tp hồ chí minh

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM BỘ Y TẾ SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐH Y DƯỢC TP HCM BÁO CÁO NGHIỆM THU KHẢO SÁT ĐỘT BIẾN PRECORE VÀ BASAL CORE PROMOTER Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN SIÊU VI B MẠN PGS.TS PHẠM THỊ LỆ HOA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 01/2016 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM BỘ Y TẾ ĐH Y DƯỢC TP HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU KHẢO SÁT ĐỘT BIẾN PRECORE VÀ BASAL CORE PROMOTER Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN SIÊU VI B MẠN CHỦ NHIỆMĐỀ TÀI PGS.TS PHẠM THỊ LỆ HOA CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 01/2016 MỤC LỤC Trang TÓM TẮT ABSTRACT DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH, BIỂU ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm dịch tễ học nhiễm HBV Việt Nam 1.1.1 Tỉ lệ nhiễm HBV giới 1.1.2 Tình hình nhiễm HBV Việt Nam 1.1.3 Phân bố dịch tễ genotype HBV giới Việt Nam 1.1.4 Gánh nặng bệnh tật nhiễm HBV 1.2 Bốn giai đoạn diễn tiến tự nhiên nhiễm HBV mạn 10 1.2.1 Giai đoạn dung nạp miễn dịch 11 1.2.2 Giai đoạn miễn dịch thải trừ siêu vi hay viêm gan B mạn HBeAg dương 12 1.2.3 Giai đoạn mang HBV khơng hoạt tính 12 1.2.4 Giai đoạn viêm gan B tái hoạt hay viêm gan B mạn HBeAg âm 13 1.3 Cấu trúc hình thái gen HBV 14 1.3.1 Đặc điểm hình thái 14 1.3.2 Đặc điểm gen HBV 15 1.3.3 Các đột biến HBV 17 1.4 Các kỹ thuật chẩn đoán đột biến 21 1.4.1 PCR- RFLP 21 1.4.2 Amplifications refractory mutation system (ARMS- PCR) 22 1.4.3 Kỹ thuật giải trình tự gen 22 1.4.4 Real time PCR sử dụng mẫu dò DNA (probe) 24 1.4.5 Multiplex ligation- dependent probe amplification (MLPA) 24 1.5 Đột biến Precore đột biến Basal Core Promoter 24 1.5.1 Sơ lược trình nhận biết đột biến PC BCP 24 1.5.2 Đặc điểm đột biến Precore 25 1.5.3 Đặc điểm đột biến Basal core promoter 27 1.5.4 Ảnh hưởng đột biến PC BCP 29 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 40 3.1 Đặc điểm dân số nghiên cứu 40 3.2 Phân bố đột biến vùng Precore, Basal core promoter Core 42 3.3 Phân bố đột biến A1896G (PC) A1762T/G1764A (BCP) theo giai đoạn diễn tiến tự nhiên 43 3.4 Các yếu tố liên quan với phân bố đột biến PC (A1896G) BCP 44 (A1762T/G1764A) 3.4.1 Phân bố đột biến theo tuổi 44 3.4.2 Phân bố đột biến PC, BCP theo genotype HBV 45 3.5 Phân bố trạng thái HBeAg nhóm có khơng có đột biến PC/ BCP 45 3.6 Phân bố mật độ HBV DNA theo tình trạng đột biến PC, BCP 48 3.7 Phân bố mật độ HBsAg theo tình trạng đột biến PC, BCP giai đoạn diễn biến tự nhiên 51 3.8 Đặc điểm ALT nhóm có khơng có đột biến PC, BCP 56 3.9 Các yếu tố liên quan với diện đột biến PC/ BCP 58 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 60 HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI 76 KẾT LUẬN 77 KIẾN NGHỊ 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu ALT antiHBe antiHBs ARMS-PCR BCP CHBeCI ĐLC DNA EN HBcAg HBeAg HBsAg HBV HCC HCV HDV HIV IC IDU IU MLPA mRNA OR ORF PC PCR RFLP RT-PCR rcDNA SD SNP TB XG Chú thích tiếng Anh Alanine transferase Anti Hepatitis B e Antigen anti hepatitis B surface Antigen Amplifications refractory mutation system PCR Basal core promoter Chronic Hepatitis B e negative Confidence interval Standard deviation DeoxyRibo Nucleic acid Enhance Hepatitis B core antigen Hepatitis B e antigen Hepatitis B virus surface antigen Hepatitis B virus Hepato Cellular Carcinoma Hepatitis C virus Hepatitis D virus Human Immunodeficiency virus Inactive carrier Intravenous drug user International unit Multiplex ligation-dependent probe amplification Messenger RiboNucleic acid Odd Ratio Open reading frame Precore Polymerase chain reaction Restriction fragment length polymorphism Real time PCR relaxed circular DNA Standard deviation Single nucleotide polymorphism Mean Cirrhosis Chú thích tiếng Việt Kháng thể chống kháng nguyên e Kháng thể chống kháng nguyên S Đột biến vùng basal core promoter Viêm gan B mạn, HBeAg âm Khoảng tin cậy Độ lệch chuẩn Yếu tố gây hưng phấn Kháng nguyên lõi HBV Kháng nguyên e HBV Kháng nguyên S HBV Siêu vi viêm gan B Ung thư biểu mô tế bào gan Siêu vi viêm gan C Siêu vi viêm gan D Siêu vi HIV Mang siêu vi không hoạt tính Người tiêm chích ma tuý Đơn vị quốc tế RNA thông tin Tỉ số chênh Khung đọc mã mở Đột biến vùng tiền lõi Phản ứng khuếch đại chuỗi gen Kỹ thuật enzym cắt đoạn Phản ứng PCR thời gian thực DNA vịng thẳng Độ lệch chuẩn Tính đa hình nucleotide Số trung bình Xơ gan DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 3.1: Đặc điểm tuổi, giớI 40 Bảng 3.2: Phân bố giai đoạn nhiễm HBV mạn 40 Bảng 3.3: Đặc điểm nhiễm HBV dân số nghiên cứu 41 Bảng 3.4: Phân bố đột biến vùng Basal core promoter 42 Bảng 3.5: Phân bố đột biến vùng Precore Core 43 Bảng 3.6: Ảnh hưởng đột biến A1762T/G1764A, T1753V hay 44 kết hợp A1762T/G1764A với T1753V diễn biến HCC Bảng 3.7: Phân bố đột biến PC BCP theo nhóm tuổi 45 Bảng 3.8: Phân bố đột biến PC BCP theo genotype 45 Bảng 3.9: Phân bố trạng thái HBeAg theo đột biến PC BCP 46 Bảng 3.10: Phân bố trạng thái HBeAg theo tình trạng đột biến PC phân 46 tầng theo đột biến BCP Bảng 3.11: Mật độ HBV DNA theo giai đoạn diễn tiến tự nhiên nhiễm 49 HBV Bảng 3.12: Phân bố mật độ HBV DNA nhóm có khơng có đột biến PC 50 Bảng 3.13: Phân bố mật độ HBV DNA theo tình trạng đột biến BCP 50 Bảng 3.14: Phân bố mật độ HBV DNA theo số lượng đột biến 50 Bảng 3.15: Mật độ HBsAg giai đoạn diễn tiến tự nhiên 51 Bảng 3.16: So sánh ALT nhóm có khơng có đột biến PC hay BCP 57 Bảng 3.17: Phân bố đột biến PC BCP thể viêm gan bệnh nhân 57 viêm gan có hoạt tính Bảng 3.18: Phân bố đột biến PC thể viêm gan bệnh nhân viêm 58 gan có hoạt tính phân tầng theo đột biến BCP Bảng 3.19: Các yếu tố liên quan với đột biến Precore 58 Bảng 3.20: Các yếu tố liên quan với đột biến Basal core promoter 59 DANH MỤC HÌNH Tên hình Trang Hình 1: Phân bố địa lý nhiễm HBV giới Hình 2: Phân bố genotype HBV giới Hình 3: Diễn tiến tự nhiên nhiễm HBV mạn 11 Hình 4: Cấu trúc HBV 14 Hình 5: Tổ chức gen HBV 15 Hình 6: Kỹ thuật RFLP 21 Hình 7: Kỹ thuật ARMS-PCR 22 Hình 8: Kết giải trình tự gen tìm đột biến Precore 23 Hình 9: Kỹ thuật giải trình tự gen tìm đột biến basal core promoter 23 Hình 10: Liên quan đột biến precore genotype HBV 26 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Tên biểu đồ Trang Biểu đồ 3.1: Phân bố nhóm tuổi dân số theo giai đoạn diễn tiến tự nhiên 41 Biểu đồ 3.2: Phân bố đột biến PC, BCP theo giai đoạn diễn tiến tự nhiên 43 Biểu đồ 3.3: Phân bố tính chất HBeAg tầng có đột biến PC và/ BCP 47 Biểu đồ 3.4: Phân bố giá trị HBeAg (S/CO) theo tình trạng đột biến PC BCP 47 Biểu đồ 3.5: Mật độ HBV DNA giai đoạn diễn tiến tự nhiên 48 Biểu đồ 3.6: Phân bố HBV DNA nhóm có khơng có đột biến PC 49 Biểu đồ 3.7: HBV DNA trung bình nhóm có khơng có đột biến PC 50 Biểu đồ 3.8: Mật độ HBsAg theo giai đoạn diễn tiến tự nhiên 51 Biểu đồ 3.9: Phân bố mật độ HBsAg nhóm có khơng có đột biến PC 52 Biểu đồ 3.10: HBsAg trung bình nhóm có khơng có đột biến PC 52 Biểu đồ 3.11: Phân bố mật độ HBsAg nhóm có khơng có đột biến BCP 52 Biểu đồ 3.12: HBsAg trung bình nhóm có khơng có đột biến BCP 52 Biểu đồ 3.13: HBsAg trung bình nhóm có khơng có PC nhóm 53 dung nạp miễn dịch Biểu đồ 3.14: HBsAg trung bình nhóm có khơng có BCP nhóm 53 dung nạp miễn dịch Biểu đồ 3.15: HBsAg trung bình nhóm có khơng có PC nhóm 54 viêm gan B mạn HBeAg dương Biểu đồ 3.16: HBsAg trung bình nhóm có khơng có BCP nhóm viêm 54 gan B mạn HBeAg dương Biểu đồ 3.17: HBsAg trung bình nhóm có khơng có PC nhóm nhiễm 54 HBV giai đoạn kiểm sốt miễn dịch Biểu đồ 3.18: HBsAg trung bình nhóm có khơng có PC nhóm nhiễm 54 HBV giai đoạn kiểm sốt miễn dịch Biểu đồ 3.19: HBsAg trung bình nhóm có khơng có PC nhóm viêm gan 55 B mạn HBeAg âm Biểu đồ 3.20: HBsAg trung bình nhóm có khơng có BCP nhóm viêm 55 gan B mạn HBeAg âm Biểu đồ 3.21: HBsAg trung bình nhóm có khơng có PC nhóm xơ gan 56 HCC Biểu đồ 3.22: HBsAg trung bình nhóm có khơng có BCP nhóm xơ gan 56 HCC PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài, dự án: KHẢO SÁT ĐỘT BIẾN PRECORE VÀ BASAL CORE PROMOTER Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN SIÊU VI B MẠN Cơ quan chủ trì: Đại diện: PGS TS.TRẦN DIỆP TUẤN Chức vụ: Hiệu trưởng Đại Học Y Dược TP HCM Điện thoại: (84-8) 38558411 Fax: (84-8) 38552304 Chủ nhiệm đề tài, dự án: Họ tên: TS PHẠM THỊ LỆ HOA Năm sinh: Chức vụ: 1959 Nam/Nữ: Nữ Nguyên Trưởng môn Nhiễm Phụ trách phòng khám Viêm gan ĐHYD TP HCM Tên quan công tác: Bộ môn Nhiễm, Đại học Y Dược TPHCM Thời gian thực hiện: 30 tháng Từ tháng 7/2013 đến: tháng 01/2016 Kinh phí duyệt: 580.000.000 VNĐ Kinh phí cấp: 520.000.000 VNĐ Kinh phí cấp đợt (8/2013): 200.000.000 VNĐ theo thơng báo số:108/TB-SKHCN Kinh phí cấp đợt (7/2014): 320.000.000 VNĐ theo thông báo số: 91/TB-SKHCN Mục tiêu: Mơ tả tình hình phân bố đột biến precore basal core promoter bệnh nhân nhiễm siêu vi viêm gan B mạn thuộc giai đoạn nhiễm HBV mạn Nội dung: Từ triển khai nghiên cứu đề tài đến hơm ( /01/2016) nhóm nghiên cứu thực hoàn tất nội dung đề cương nghiên cứu sau đây: Nội dung 1: Thu nhận mẫu nghiên cứu • Thiết kế bệnh án mẫu nghiên cứu thử, chỉnh sửa bệnh án (CRF) • Thu thập lưu mẫu nghiên cứu thử, điều chỉnh quy trình lầy mẫu máu phù hợp với thực tế công việc khoa: khám bệnh BV ĐHYD, Labo Sinh Học phân tử tiến độ cung cấp kinh phí • Thu nhập bệnh nhân (445 bệnh), thực ngày tuần; lấy phiếu đồng thuận Điền CRF Lưu trữ mẫu • Theo dõi bệnh tái khám ghi nhận diễn biến tình trạng nhiễm HBV để xác nhận phân nhóm bệnh nhân hay điều chỉnh phân nhóm bệnh Nội dung 2: Phân tích mẫu máu • Thuê tách chiết HBVDNA; Theo dõi kết tách chiết DNA Lấy mẫu bổ sung cho mẫu tách HBVDNA thất bại • Thuê định lượng HBVDNA kỹ thuật Real time PCR • Thuê thực HBsAg định lượng kỹ thuật miễn dịch điện hoá phát quang ECLIA • Thuê thực PCR nested để xác định genotype • Giải trình tự xác định đột biến PC, BCP Nội dung 3: Sản phẩm báo sản phẩm đào tạo: báo đăng tạp chí Y học TPHCM thực luận văn Thạc sĩ BÀI BÁO: Đột biến precore basal core promoter bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn đợt bùng phát Nguyễn thị Phương Thảo, Nguyễn thị Cẩm Hường, Phạm thị Lệ Hoa Y học TP HCM, tập 19 phụ số1 năm 2015 Đột biến precore basal core promoter người Việt Nam nhiễm siêu vi viêm gan B mạn phân bố theo genotype Nguyễn Thị Cẩm Hường, Phạm thị Lệ Hoa, Đỗ thị Thanh Thuỷ, Nguyễn Hữu Chí Y học TP HCM, tập 19 phụ số1 năm 2015 Đặc điểm HBeAg, HBV DNA ALT bệnh nhân viêm gan B mạn ó đột biến precore basal core promoter Nguyễn Thị Cẩm Hường, Phạm thị Lệ Hoa, Hoàng Anh Vũ, Phạm Thị Hảo Y học TP HCM, tập 19 phụ số1 năm 2015 Mô tả đặc điểm đột biến basal core promoter bệnh nhân xơ gan HCC nhiễm HBV mạn Nguyễn Thị Cẩm Hường Đã nhận đăng Y Học TP HCM tháng 3/2016 Liên quan đột biếnbasal core promoter biến chứng Xơ gan, Ung thư gan bệnh nhân nhiễm HBV mạn Nguyễn Thị Cẩm Hường, Phạm thị Lệ Hoa Đã nhận đăng Y Học TP HCM tháng 3/2016 LUẬN VĂN CAO HỌC VÀ NỘI TRÚ Đột biến precore basal core promoter bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn đợt bùng phát Nguyễn thị Phương Thảo, năm 2014 Giá trị HBsAg định lượng để phân biệt người mang HBV khơng hoạt tính viêm gan siêu vi B mạn tái hoạt Võ Triều Lý, năm 2014 Nội dung 4: Phân tích kết viết báo cáo nghiệm thu     HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI Nghiên cứu tiến hành theo thiết kế cắt ngang, có theo dõi bệnh nhân tối thiểu tháng để xác định xác giai đoạn diễn tiến nhiễm HBV mạn chọn bệnh nhân có HBVDNA > log copies/ml để tách chiết HBVDNA cho yêu cầu xác định genotype đột biến gen Vì có số hạn chế sau: Kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp, phát đột biến tỷ lệ chủng đột biến chiến 20% quần thể virus chung Vì có trường hợp có đột biến chưa hồn tồn chiếm thiểu số nên không phát hạn chế kỹ thuật giải trình tự Chúng tơi chưa phân tích kịp tính chất đột biến hồn tồn khơng hồn tồn biểu lâm sàng chúng Chúng chưa phân tích thêm ảnh hưởng lâm sàng cộng hợp yếu tố đột biến PC, đột biến BCP, genotype, giới, HBVDNA, … không đủ thời gian kết cục khác với mục tiêu nghiên cứu Thiết kế cắt ngang cho phép xác định liên quan, chưa thể kết luận mối quan hệ nhân quả, với diễn biến xơ gan, bùng phát viêm gan HCC Những hạn chế tiếp tục thực công bố tiếp dựa sở liệu sẵn có   76       KẾT LUẬN Qua khảo sát phân bố đột biến PC BCP 445 trường hợp nhiễm HBV mạn điều trị khoa khám bệnh BV ĐH Y Dược khoa Nhiễm A BV Bệnh Nhiệt Đới đưa kết luận sau: Tỷ lệ đột biến BCP (A1762T/G1764A) 42% Có 20% có diện đồng thời đột biến A1762T/G1764A với T1753V (C/A/G) Tỷ lệ đột biến PC (G1896A) 43,8% Đột biến PC/BCP thấp giai đoạn dung nạp miễn dịch (PC 9,7%, BCP 13,9%) Tỷ lệ PC BCP tăng giai đoạn viêm gan B mạn HBeAg dương (PC 42% BCP 40,5%) giai đoạn viêm gan B mạn HBeAg âm (PC 60,3%, BCP 53,8%) Ở nhóm mang HBV khơng hoạt tính, tỷ lệ đột biến PC cịn tăng thêm tương đương với nhóm viêm gan B mạn HBeAg âm (62,2%) Ngược lại, tỷ lệ đột biến BCP lại tương đương với giai đoạn viêm gan B mạn HBeAg dương Ở nhóm bệnh nhân Xơ gan tỷ lệ PC BCP không thay đổi so với nhóm viêm gan khác Ở nhóm bệnh nhân HCC, tỷ lệ PC (52%) không khác với nhóm cịn lại ngược lại tỷ lệ BCP cao (70%) Đột biến PC tăng theo tuổi liên quan với genotype Tỷ lệ 29,3% nhóm tuổi 50 Đột biến BCP tăng theo tuổi (29,3%, 44% 54,6% ba nhóm tuổi tương ứng) Đột biến PC ưu người nhiễm HBV genotype B (54,1%) Đột biến BCP ưu genotype C (72,2%) Mật độ HBV DNA HBsAg nhóm có đột biến PC BCP có khuynh hướng thấp nhóm khơng có đột biến giai đoạn viêm gan có hoạt tính (viêm gan B mạn HBeAg dương viêm gan B mạn HBeAg âm) Phân bố ALT nhóm có đột biến PC ưu phía ALT tăng >5 ULN (24% so với 14% nhóm khơng có PC Khơng có khác biệt ý nghĩa phân bố ALT nhóm có khơng có BCP Có thể có liên quan tích lũy đột biến phản ứng thải trừ miễn dịch với HBV gan cần nghiên cứu tiếp Đột biến PC liên quan với tình trạng HBeAg âm (OR=2,9, KTC 95% 1,9- 4,4), genotype B (OR=5,1, KTC 3- 8,5) Đột biến BCP liên quan với nhóm tuổi >30 (nhóm tuổi 30-50 OR=2,3, KTC 95% 1,3-4,3; nhóm tuổi >50 OR=5,3, KTC 95% 2,7- 10,4) genotype C (OR=9,6,   77       KTC 95% 5,8- 16) Đột biến PC BCP khơng phải diễn biến có lợi q trình nhiễm HBV Đột biến PC có liên quan với tiến triển bùng phát viêm gan B mạn (PC 57,1% vs 44,1% nhóm VG B mạn đợt cấp) Đột biến BCP thường gặp bệnh nhân HCC có tăng nguy diễn biến ung thư gan có đột biến BCP lúc A1762T/G1764A T1753V   78       KIẾN NGHỊ Tiếp tục theo dõi diễn biến đoàn hệ có khơng có đột biến PC, BCP để có thêm kết luận giá trị ảnh hưởng bệnh lý chủng đột biến lâm sàng Phân tích ảnh hưởng lâm sàng đột biến khác thuộc vùng basal core promoter đột biến T1753V ảnh hưởng tổ hợp đột biến Nghiên cứu ứng dụng đột biến BCP PC quản lý bệnh nhân nhiễm HBV mạn, đặc biệt để phân tầng mức nguy viêm gan tái hoạt, xơ gan HCC; lập thang điểm để định điều trị đặc hiệu theo dõi bệnh nhân   79     Kết  quả  giải  trình  tự  gen  và  đột  biến  vùng  PC/BCP       Đột  biến  G1896  A/G   (B517-­‐ID  687)       Đột  biến  T1753  C/T   (B527  –  ID  573)                                                     Đột  biến  T1753  C  ,    A1762  T  và  G1764  A   (B  506  –  ID  180)                     Đột  biến     A1762  T/A,  G1764  A/G,  C1766  T/C   (B  133  –  ID  PC  040)                       TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Thị Lệ Hoa, Huỳnh Trung Triệu, Nguyễn Thị Cẩm Hường, et al (2010) Đột biến Precore Core Promoter bệnh nhân Viêm gan B mạn Bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới Y Học TP Hồ Chí Minh, 14(1): 440 - 446 Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Thị Cẩm Hường, Phạm Thị Lệ Hoa (2015) Đột biến precore basal core promoter bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn đợt bùng phát Y Học TP Hồ Chí Minh, 19(1): 336- 341 Lê Cẩm Tú, Bùi Hữu Hoàng (2010) Đột biến Precore Core Promoter bệnh nhân xơ gan ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm virút viêm gan B Y Học TP Hồ Chí Minh, 14(1): 1- Alexandra A., P K (2014) HBeAg negative variants and their role in the natural history of chronic hepatitis B infections World J Gastroenterol, 20(24): 7644-7652 Alexopoulou A (2009) Mutants in the precore, core promoter, and core regions of Hepatitis B virus, and their clinical relevance Annals of gastroenterology, 22(1):13- 23 Amini-Bavil-Olyaee S., Herbers U., Sheldon J.,et al (2009) The rtA194T polymerase mutation impacts viral replication and susceptibility to tenofovir in hepatitis B e antigen-positive and hepatitis B e antigen-negative hepatitis B virus strains Hepatology, 49(4): 1158-1165 Buckwold V E., Xu Z., Chen M et al (1996) Effects of a naturally occurring mutation in the hepatitis B virus basal core promoter on precore gene expression and viral replication J Virol, 70(9): 5845-5851 Buckwold V E., Xu Z., Yen T S et al (1997) Effects of a frequent doublenucleotide basal core promoter mutation and its putative single-nucleotide precursor mutations on hepatitis B virus gene expression and replication J Gen Virol, 78 ( Pt 8): 2055-2065 Carman W F., Jacyna M R., Hadziyannis S et al (1989) Mutation preventing formation of hepatitis B e antigen in patients with chronic hepatitis B infection Lancet, 2(8663): 588-591 10 Chan H L., Tse C H., Ng E Y et al (2006) Phylogenetic, virological, and clinical characteristics of genotype C hepatitis B virus with TCC at codon 15 of the precore region J Clin Microbiol, 44(3): 681-687 11 Chang M H., Hsu H Y., Hsu H C., Ni Y H et al (1995) The significance of spontaneous hepatitis B e antigen seroconversion in childhood: with special emphasis on the clearance of hepatitis B e antigen before years of age Hepatology, 22(5):1387-1392 12 Chen C H., Hung C H., Lee C M et al (2007) Pre-S deletion and complex mutations of hepatitis B virus related to advanced liver disease in HBeAg-negative patients Gastroenterology, 133(5): 1466-1474 13 Chen C H., Lee C M., Hung C H et al (2007) Clinical significance and evolution of core promoter and precore mutations in HBeAg-positive patients with HBV genotype B and C: a longitudinal study Liver Int, 27(6): 806-815 14 Chen C H., Lee C M., Lu S N., Changchien C S et al (2005) Clinical significance of hepatitis B virus (HBV) genotypes and precore and core promoter mutations affecting HBV e antigen expression in Taiwan J Clin Microbiol, 43(12): 6000-6006 15 Chen Q Y., Harrison T J., Sabin C A., et al (2014) The Effect of HBV Genotype C on the Development of HCC Differs Between Wild-Type Viruses and Those With BCP Double Mutations (T(1762)A(1764)) Hepat Mon, 14(2): e16214 16 Chen Y M., Wu S H., Qiu C N et al (2013) Hepatitis B virus subgenotype C2- and B2-associated mutation patterns may be responsible for liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma, respectively Braz J Med Biol Res, 46(7): 614-622 17 Christine M H , J M M., Marchelle I A., Lynn D C (2000) Clinical Relevance of Hepatitis B Viral Mutations Hepatology, 31(5): 1037-1044 18 Chu C J., Keeffe E B., Han S H., Perrillo R P et al (2003) Prevalence of HBV precore/core promoter variants in the United States Hepatology, 38(3): 619628 19 Chu C M (2000) Natural history of chronic hepatitis B virus infection in adults with emphasis on the occurrence of cirrhosis and hepatocellular carcinoma J Gastroenterol Hepatol, 15 Suppl: E25-30 20 Chu C M., Chen Y C., Tai D I & Liaw, Y F (2010) Level of hepatitis B virus DNA in inactive carriers with persistently normal levels of alanine aminotransferase Clin Gastroenterol Hepatol, 8(6): 535-540 21 Chu C M., Lin C C., Chen Y C et al (2012) Basal core promoter mutation is associated with progression to cirrhosis rather than hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis B virus infection Br J Cancer, 107(12): 2010-2015 22 Chun Y K., Kim J Y., Woo H J., Oh S M., Kang I., Ha J., et al (2000) No significant correlation exists between core promoter mutations, viral replication, and liver damage in chronic hepatitis B infection Hepatology, 32(5): 1154-1162 23 Chun-Hui Yan, C.-Y Z., Hai Ding (2012) Hepatitis B virus basal core promoter mutations A1762T/G1764A are asssociated with genotype C and low serum HBsAg level in chronically-infected HBeAg-positive Chinese patients Antiviral Research, 96: 108-114 24 Datta S., Ghosh A., Dasgupta D., Ghosh A et al (2014) Novel point and combo-mutations in the genome of hepatitis B virus-genotype D: characterization and impact on liver disease progression to hepatocellular carcinoma PLoS One, 9(10): e110012 25 Dunford L., Carr M J., Dean J., Nguyen L T et al (2012) A multicentre molecular analysis of hepatitis B and blood-borne virus coinfections in Viet Nam PLoS One, 7(6): e39027 26 Elizabeth W H., R C (2011) Global Epidemiology of Hepatitis B Virus (HBV) Infection North American Journal of Medicine and Science, 4(1): 7-13 27 Fang Z L., Sabin C A., Dong B Q., Ge L Y et al (2008) HBV A1762T, G1764A mutations are a valuable biomarker for identifying a subset of male HBsAg carriers at extremely high risk of hepatocellular carcinoma: a prospective study Am J Gastroenterol, 103(9): 2254-2262 28 Fattovich G (2003) Natural history of hepatitis B J Hepatol, 39 Suppl 1: S50-58 29 Fattovich G., Bortolotti F & Donato F (2008) Natural history of chronic hepatitis B: special emphasis on disease progression and prognostic factors J Hepatol, 48(2): 335-352 30 Fattovich G., Olivari N., Pasino M., et al (2008) Long-term outcome of chronic hepatitis B in Caucasian patients: mortality after 25 years Gut, 57(1): 8490 31 Fattovich G., Stroffolini T., Zagni I & Donato F (2004) Hepatocellular carcinoma in cirrhosis: incidence and risk factors Gastroenterology, 127 (Suppl 1): S35-50 32 Fukuda R., Mohammad R., Hamamoto S., Ishimura N., Ishihara S., Akagi S., et al (2001) Clinical relevance of precore and basal core promoter variants of hepatitis B virus during natural hepatitis B e antigen seroconversion may be overstated J Pediatr Gastroenterol Nutr, 33(3): 301-306 33 Funk M L., Rosenberg D M., Lok A S (2002) World-wide epidemiology of HBeAg-negative chronic hepatitis B and associated precore and core promoter variants J Viral Hepat, 9(1): 52-61 34 Gao S., Duan Z P., Coffin C S (2015) Clinical relevance of hepatitis B virus variants World J Hepatol, 7(8): 1086-1096 35 Gerlich W H (2013) Medical virology of hepatitis B: how it began and where we are now Virol J, 10: 239 36 Hasegawa K., Huang J., Rogers S A., Blum H E., Liang T J (1994) Enhanced replication of a hepatitis B virus mutant associated with an epidemic of fulminant hepatitis J Virol, 68(3): 1651-1659 37 Hsu Y S., Chien R N., Yeh C T., Sheen I S et al (2002) Long-term outcome after spontaneous HBeAg seroconversion in patients with chronic hepatitis B Hepatology, 35(6): 1522-1527 38 Hu F., Sheng Bi, Huadong Yan, Yu Shi, and Jifang Shen (2015) Associations between hepatitis B virus basal core promoter/pre-core region mutations and the risk of acute-on-chronic liver failure: a meta-analysis Virol J , 12 (87) 39 Hunt C M., McGill J M., Allen M I., Condreay L D (2000) Clinical relevance of hepatitis B viral mutations Hepatology, 31(5): 1037-1044 40 Huu, A B (2000) Cấu trúc siêu vi viêm gan B Viêm gan siêu vi B từ cấu trúc siêu vi đến điều trị: Nhà xuất Đà Nẵng: 9-23 41 Huy T T., N T T., Kenji Abe (2008) New Complex Recombinant Genotype of Hepatitis B Virus Identified in Vietnam Journal of virology, 82(11): 5657- 5663 42 Huy T T., Ushijima H., Quang V X., Ngoc T T et al (2004) Characteristics of core promoter and precore stop codon mutants of hepatitis B virus in Vietnam J Med Virol, 74(2): 228-236 43 Iloeje U H., Yang H I., Jen C L., Su J., Wang L Y., You S L., et al (2007) Risk and predictors of mortality associated with chronic hepatitis B infection Clin Gastroenterol Hepatol, 5(8): 921-931 44 Jalali M V., A S M (2006) Hepatitis B e Antigen-Negative Chronic Hepatitis B Hepatitis Monthly 6(1) 45 Jammeh S., Tavner F., Watson R., Thomas H C., Karayiannis, P (2008) Effect of basal core promoter and pre-core mutations on hepatitis B virus replication J Gen Virol, 89(Pt 4): 901-909 46 Kamijo N., Akihiro Matsumoto, Takeji Umemura, Soichiro Shibata, Yuki Ichikawa, et al (2015) Mutations of pre-core and basal core promoter before and after hepatitis B e antigen seroconversion World J Gastroenterol, 21(2): 541–548 47 Kao J H (2007) Role of viral factors in the natural course and therapy of chronic hepatitis B Hepatol Int, 1(4): 15-430 48 Kao J H (2011) Molecular epidemiology of hepatitis B virus Korean J Intern Med, 26(3): 255-261 49 Kao J H., Chen P J., Chen, D S (2010) Recent advances in the research of hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma: epidemiologic and molecular biological aspects Adv Cancer Res, 108: 21-72 50 Kao J H., Chen P J., Lai M Y., Chen D S (2003) Basal core promoter mutations of hepatitis B virus increase the risk of hepatocellular carcinoma in hepatitis B carriers Gastroenterology, 124(2): 327-334 51 Karayiannis P (2012) Serum hepatitis B surface antigen levels and their utility as a predictor of sustained virological response after antiviral treatment Hepat Mon, 12(7): 420-422 52 Karayiannis P., C W F., Thomas H.C (2014) Molecular variants of the precore, core, and core promoter regions of hepatitis B virus, and their clinical significance In Viral hepatitis 4th edition (pp 127-142): John Wiley & Sons 53 Kim D W., Lee S A., Hwang E S., Kook Y H., Kim, B J (2012) Naturally occurring precore/core region mutations of hepatitis B virus genotype C related to hepatocellular carcinoma PLoS One, 7(10): e47372 54 Kitab B., Essaid El Feydi A., Afifi R., Trepo C et al (2012) Variability in the precore and core promoter regions of HBV strains in Morocco: characterization and impact on liver disease progression PLoS One, 7(8): e42891 55 Kramvis A & Kew M C (2005) Relationship of genotypes of hepatitis B virus to mutations, disease progression and response to antiviral therapy J Viral Hepat, 12(5): 456-464 56 Kreutz C (2002) Molecular, immunological and clinical properties of mutated hepatitis B viruses J Cell Mol Med, 6(1): 113-143 57 Laskus T., Rakela J., Nowicki M J & Persing D H (1995) Hepatitis B virus core promoter sequence analysis in fulminant and chronic hepatitis B Gastroenterology, 109(5): 1618-1623 58 Liang T J., Hasegawa K., Rimon N., Wands J R (1991) A hepatitis B virus mutant associated with an epidemic of fulminant hepatitis N Engl J Med, 324(24): 1705-1709 59 Liao Y., Hu X., Chen J., Cai B et al (2012) Precore mutation of hepatitis B virus may contribute to hepatocellular carcinoma risk: evidence from an updated meta-analysis PLoS One, 7(6): e38394 60 Liaw Y F., Lin D Y., Chen T J & Chu C M (1989) Natural course after the development of cirrhosis in patients with chronic type B hepatitis: a prospective study Liver, 9(4): 235-241 61 Lin C L., Kao J H (2011) The clinical implications of hepatitis B virus genotype: Recent advances J Gastroenterol Hepatol, 26 Suppl 1: 123-130 62 Lin C L., Liao L Y., Wang C S., Chen P J., Lai M Y., Chen D S., et al (2005) Basal core-promoter mutant of hepatitis B virus and progression of liver disease in hepatitis B e antigen-negative chronic hepatitis B Liver Int, 25(3): 564570 63 Lin J., Wu J F., Zhang Q., Zhang H W., Cao, G W (2014) Virus-related liver cirrhosis: molecular basis and therapeutic options World J Gastroenterol, 20(21): 6457-6469 64 Liu Y., Zhong Y., Zou Z., Xu Z., Li B., Ren, X., et al (2010) Features and clinical implications of hepatitis B virus genotypes and mutations in basal core promoter/precore region in 507 Chinese patients with acute and chronic hepatitis B2010 J Clin Virol, 47(3): 243-247 65 Lok A S., Akarca U & Greene S (1994) Mutations in the pre-core region of hepatitis B virus serve to enhance the stability of the secondary structure of the pre-genome encapsidation signal Proc Natl Acad Sci U S A, 91(9): 4077-4081 66 Long H N., Ha N B., Vutien P., Ha N B et al (2009) Prevalence of hepatitis B virus genotype B in Vietnamese patients with chronic hepatitis B Hepatol Int, 3(3): 461-467 67 Mahdieh N & Rabbani B (2013) An overview of mutation detection methods in genetic disorders Iran J Pediatr, 23(4): 375-388 68 Mandell D., B S (Ed.) (2010) Principles and practice of infectious diseases (seventh edition ed Vol 2) Chronic Viral hepatitis Jules L dienstag: 1593-1595 69 Moucari R & Marcellin P (2011) Quantification of hepatitis B surface antigen: a new concept for the management of chronic hepatitis B Liver Int, 31 Suppl 1: 122-128 70 Naito H., Hayashi S & Abe K (2001) Rapid and specific genotyping system for hepatitis B virus corresponding to six major genotypes by PCR using type-specific primers J Clin Microbiol, 39(1): 362-364 71 Nakata S., Song P., Duc D D., Nguyen X Q., Murata K., Tsuda F., et al (1994) Hepatitis C and B virus infections in populations at low or high risk in Ho Chi Minh and Hanoi, Vietnam J Gastroenterol Hepatol, 9(4): 416-419 72 Okamoto H., Tsuda F., Akahane Y., et al (1994) Hepatitis B virus with mutations in the core promoter for an e antigen-negative phenotype in carriers with antibody to e antigen J Virol, 68(12): 8102-8110 73 Peng X M., Huang G M., Li J G., Huang Y S., et al (2005) High level of hepatitis B virus DNA after HBeAg-to-anti-HBe seroconversion is related to coexistence of mutations in its precore and basal core promoter World J Gastroenterol, 11(20): 3131-3134 74 Perrillo R P (2001) Acute flares in chronic hepatitis B: the natural and unnatural history of an immunologically mediated liver disease Gastroenterology, 120(4): 1009-1022 75 Pivert A., Servant-Delmas A., Lunel-Fabiani F., Le Guillou-Guillemette H et al (2014) Correlation between the promoter basal core and precore mutations and HBsAg quantification in French blood donors infected with hepatitis B virus J Med Virol, 87(3): 529-535 76 Qin Y., Zhang J., Mao R., Guo H et al (2009) Prevalence of basal core promoter and precore mutations in Chinese chronic hepatitis B patients and correlation with serum HBeAG titers J Med Virol, 81(5): 807-814 77 Ren X., Xu Z., Liu Y., Li X., Bai S., Ding N., et al (2010) Hepatitis B virus genotype and basal core promoter/precore mutations are associated with hepatitis B-related acute-on-chronic liver failure without pre-existing liver cirrhosis J Viral Hepat, 17(12): 887-895 78 Rezende R E., Fonseca B A., Ramalho L N., Zucoloto S et al (2005) The precore mutation is associated with severity of liver damage in Brazilian patients with chronic hepatitis B J Clin Virol, 32(1): 53-59 79 Sato S., Suzuki K., Akahane Y., Akamatsu K., et al (1995) Hepatitis B virus strains with mutations in the core promoter in patients with fulminant hepatitis Ann Intern Med, 122(4): 241-248 80 Sonneveld M J., Rijckborst V., Zwang L., Zeuzem S et al (2013) Hepatitis B e antigen levels and response to peginterferon: influence of precore and basal core promoter mutants Antiviral Res, 97(3): 312-317 81 Tabernero D., Sanchez M J., Homs M., Rodriguez-Frias F., Jardi R., Schaper M.et al (2010) Main mutations in the hepatitis B virus basic core promoter (A1762T/G1764A) before HBeAg loss are markers that identify patients who will require long-term treatment Aliment Pharmacol Ther, 32(1): 97-104 82 Tacke F., Gehrke C., Luedde T., Heim A., Manns M P et al (2004) Basal core promoter and precore mutations in the hepatitis B virus genome enhance replication efficacy of Lamivudine-resistant mutants J Virol, 78(16): 8524-8535 83 Takahashi K., Aoyama K., Ohno N., Iwata K., et al (1995) The precore/core promoter mutant (T1762A1764) of hepatitis B virus: clinical significance and an easy method for detection J Gen Virol, 76 ( Pt 12): 3159-3164 84 Tatematsu K., Tanaka Y., Kurbanov F., Sugauchi F., Mano S., Maeshiro T., et al (2009) A genetic variant of hepatitis B virus divergent from known human and ape genotypes isolated from a Japanese patient and provisionally assigned to new genotype J J Virol, 83(20): 10538-10547 85 Tong S., Kim K H., Chante C., Wands J and Li J (2005) Hepatitis B Virus e Antigen Variants Int J Med Sci, 2(1): 2-7 86 Truong B X., Seo Y., Yano Y., Ho P T., et al (2007) Genotype and variations in core promoter and pre-core regions are related to progression of disease in HBV-infected patients from Northern Vietnam Int J Mol Med, 19(2), : 293-299 87 Tsai W L., Lo G H., Hsu P I., Lai K H et al (2008) Role of genotype and precore/basal core promoter mutations of hepatitis B virus in patients with chronic hepatitis B with acute exacerbation Scand J Gastroenterol, 43(2):196-201 88 Tseng T-C, L C.-J., Yang H-C, et al (2015) Higher proportion of viral basal core promoter mutant increases the risk of liver cirrhosis in hepatitis B carriers Gut 64: 292-302 89 Tu W H., Lv Y., Zhang Y M., Hou W., Wang J Y., Zhang Y J., et al (2015) Precore/basal core promoter mutants quantification throughout phases of hepatitis B virus infection by Simpleprobe World J Gastroenterol, 21(21): 66396648 90 Van Nguyen T.T., L M G., Dore G.J (2008) An enormous hepatitis B virus-related liver disease burden projected in Vietnam by 2025 Liver international, 28(4): 525-531 91 Viet L., Lan N T., Ty P X., Bjorkvoll B., Hoel H., Gutteberg T., et al (2012) Prevalence of hepatitis B & hepatitis C virus infections in potential blood donors in rural Vietnam Indian J Med Res, 136(1): 74-81 92 Wen W., Zhang L & Xiao H (2001) The transcription and expression of IL-18 gene in HBV infectors Zhonghua Yi Xue Za Zhi, 81(11): 655-658 93 WHO.(7/2015) Hepatitis B Fact sheet N°204 http://www.who.int/mediacenter 94 Yan C H., Zhao C Y., Ding H., Peng Y Q., et al (2012) Hepatitis B virus basal core promoter mutations A1762T/G1764A are associated with genotype C and a low serum HBsAg level in chronically-infected HBeAg-positive Chinese patients Antiviral Res, 96(2): 108-114 95 Yang H I., Yeh S H., Chen P J., Iloeje U H., Jen C L., et al (2008) Associations between hepatitis B virus genotype and mutants and the risk of hepatocellular carcinoma J Natl Cancer Inst, 100(16):1134-1143 96 Yang Y., Sun J W., Zhao L G., Bray F & Xiang Y B (2015) Quantitative evaluation of hepatitis B virus mutations and hepatocellular carcinoma risk: a meta-analysis of prospective studies Chin J Cancer Res, 27(5): 497-508 97 Yapali S., Talaat N & Lok A S (2014) Management of hepatitis B: our practice and how it relates to the guidelines Clin Gastroenterol Hepatol, 12(1): 16-26 98 Yim, H J & Lok, A S (2006) Natural history of chronic hepatitis B virus infection: what we knew in 1981 and what we know in 2005 Hepatology, 43(2 Suppl 1), S173-181 99 Yim S Y., Um S H., Young Jung J., Kim T H., Kim J D., et al (2014) Clinical Significance of HBV Precore and Core Promoter Variants in Korean Patients With Chronic Hepatitis B J Clin Gastroenterol, 49(1): 61-8 100 Yin J , Z H., Li C et al (2008) Role of hepatitis B virus genotype mixture, subgenotypes C2 and B2 on hepatocellular carcinoma: compared with chronic hepatitis B and asymptomatic carrier state in the same area Carcinogenesis, 29, 1685-1691 101 Yotsuyanagi H., Hino K., Tomita E., Toyoda J., Yasuda K & Iino S (2002) Precore and core promoter mutations, hepatitis B virus DNA levels and progressive liver injury in chronic hepatitis B J Hepatol, 37(3): 355-363 102 Yuen M F., Sablon E., Yuan H J., Hui C K., et al (2002) Relationship between the development of precore and core promoter mutations and hepatitis B e antigen seroconversion in patients with chronic hepatitis B virus J Infect Dis, 186(9): 1335-1338 103 Zhang J., Xu W J., Wang Q., Zhang Y & Shi M (2009) Prevalence of the precore G1896A mutation in Chinese patients with e antigen negative hepatitis B virus infection and its relationship to pre-S1 antigen Braz J Microbiol, 40(4): 965971 104 Zhang Q., Yin J., Zhang Y., Deng Y., Ji X., Du Y., et al (2013) HLA-DP polymorphisms affect the outcomes of chronic hepatitis B virus infections, possibly through interacting with viral mutations J Virol, 87(22): 12176-12186 105 Zoulim F & Locarnini S (2009) Hepatitis B virus resistance to nucleos(t)ide analogues Gastroenterology, 137(5): 1593-1608