Chế tạo chế phẩm bạc nano polyvinyl alcohol kháng khuẩn bằng phương pháp chiếu xạ phục vụ xử lý môi trường ương nuôi cá tra

SỞ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU ĐỀ TÀI CƠ SỞ CẤP TRUNG TÂM CHẾ TẠO CHẾ PHẨM BẠC NANO/POLYVINYL ALCOHOL KHÁNG KHUẨN BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ PHỤC VỤ XỬ LÝ MÔI TRƯỜNG ƯƠNG NI CÁ TRA Đơn vị chủ trì đề tài: phòng CNSH Vật liệu Nano Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Lê Quang Luân Cán tham gia: ThS Đặng Hoàng Việt CN Nguyễn Thanh Vũ CN Phạm Trần Hải Thương ThS Hàng Khánh Linh CN Nguyễn Thị Ngọc Anh CN Huỳnh Gia Hòa KS Lê Văn Hậu Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2018 MỤC LỤC Mục lục i Danh mục từ viết tắt iii Danh mục hình iv Danh mục bảng biểu vi Tóm tắt vii Phần Thông tin chung Phần Nội dung khoa học I Tổng quan tài liệu 1.1 Giới thiệu về bạc nano 1.1.1 Đặc tính kháng khuẩn của bạc nano 1.1.2 Các phương pháp phân tích hạt bạc nano 1.1.3 Ứng dụng của công nghệ xạ chế tạo bạc nano 1.1.4 Sử dụng PVA làm chất ổn định chế tạo bạc nano 1.1.5 Độc tính của bạc nano 1.2 Sơ lược về chủng vi sinh vật gây bệnh thủy sản 1.2.1 Vibrio parahaemolyticus 1.2.2 Edwardsiella ictaluri 1.3 Tình hình nghiên cứu nước 10 1.3.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 11 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 12 II Vật liệu – phương pháp nghiên cứu 13 2.1 Vật liệu 13 2.2 Phương pháp 13 2.2.1 Chế tạo dung dịch AgNPs/PVA phương pháp xạ 13 2.2.2 Ảnh hưởng của nồng độ PVA đến kích thước của hạt nano 15 2.2.3 Ảnh hưởng của thời gian lưu giữ đến độ ổn định của dung dịch AgNPs/PVA 15 2.2.4 Khả kháng khuẩn của dung dịch AgNPs/PVA in vitro 15 2.2.5 Xây dựng quy trình chế tạo thử nghiệm dung dịch AgNPs/PVA phương pháp xạ với quy mô 100 lít/mẻ 16 2.2.6 Xây dựng tiêu chuẩn sở cho chế phẩm AgNPs/PVA 16 i 2.2.7 Khả xử lý vi khuẩn E ictaluri môi trường ương nuôi cá tra của chế phẩm quy mô phịng thí nghiệm 17 2.2.8 Các kỹ thuật sử dụng 21 III Kết - thảo luận 21 3.1 Chế tạo dung dịch AgNPs/PVA phương pháp xạ 21 3.1.1 Liều xạ chuyển hóa bão hịa của dung dịch AgNPs theo nồng độ Ag+ 22 3.2 Ảnh hưởng của nồng độ PVA đến kích thước của AgNPs 24 3.3 Độ ổn định của chế phẩm AgNPs/PVA theo thời gian lưu trữ 26 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn của dung dịch AgNPs điều kiện in vitro 27 3.4.1 Ảnh hưởng của kích thước AgNPs lên phát triển của vi khuẩn V parahaemolyticus E ictaluri điều kiện in vitro 27 3.4.2 Ảnh hưởng của nồng độ AgNPs lên phát triển của vi khuẩn V parahaemolyticus E ictaluri điều kiện in vitro 31 3.5 Thiết lập quy trình chế tạo chế phẩm AgNPs/PVA phương pháp chiếu xạ quy mơ 100 lít/mẻ 35 3.6 Khả xử lý vi khuẩn E ictaluri môi trường ương nuôi cá tra của chế phẩm quy mơ phịng thí nghiệm 37 3.6.1 Khả xử lý vi khuẩn của chế phẩm môi trường ương nuôi cá tra với điều kiện không thay nước bể nuôi 38 3.6.2 Khả xử lý vi khuẩn của chế phẩm môi trường ương nuôi cá tra với điều kiện thay nước định kỳ bể nuôi 43 IV Kết luận 47 V Kiến nghị 48 Phần Sản phẩm khoa học công nghệ 48 Phần Tài liệu tham khảo 49 Phụ lục 54 ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT  Gamma  Khả kháng khuẩn Ag+ Bạc ion Ag0 Bạc nguyên tử AgNP Bạc nano BHI Brain Heart Infusion agar BYT Bộ y tế CFU Colony Forming Units Co-60 Đồng vị cobalt 60 Ctv Cộng tác viên ĐC Đối chứng E ictaluri Edwardsiella ictaluri Gy Gray ICP-AES Phổ phát xạ nguyên tử (Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectroscopy) NT Nghiệm thức OD Optical Density PCR Polymerase Chain Reaction PVA Polyvinyl alcohol PVP Polyvinyl pyrrolidone TCBS Thiosulphate Citrate Bile Salt agar TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TEM Kính hiển vi điện tử truyền qua (Transmission Electron Microscope) TSA Trytone Soya Agar TVKHK Tổng vi khuẩn hiếu khí UV-vis Ultraviolet–Visible spectroscopy - quang phổ tử ngoại khả kiến V parahaemolyticus Vibrio parahaemolyticus λmax Bước sóng hấp thụ cực đại iii DANH MỤC HÌNH Hình Cơ chế diệt kh̉n của bạc nano thông qua tương tác với thành tế bào, bào quan DNA Hình Hình chụp TEM của hạt bạc nano .4 Hình Phổ UV-vis của dung dịch bạc nano kích thước hạt nano khác Hình Cơ chế ổn định nano bạc của PVA Hình Vi khuẩn Vibrio Hình Một số sản phẩm điều trị bệnh gan thận mủ E ictaluri gây cá tra 11 Hình Dung dịch AgNPs 21 Hình UV-vis của dung dịch AgNPs trước sau chiếu xạ 22 Hình Sự thay đổi mật độ quang của dung dịch theo nồng độ Ag+ liều xạ 22 Hình 10 Đặc trưng phổ UV-vis, ảnh TEM phân bố kích thước hạt của AgNPs theo nồng độ Ag+ 23 Hình 11 Phổ UV-vis của dung dịch AgNPs nồng độ PVA khác sau chiếu xạ 24 Hình 12 Ảnh TEM phân bố kích thước AgNPs của chế phẩm AgNPs/PVA theo nồng độ PVA 25 Hình 13 Phổ UV- vis biểu diễn độ ổn định của dung dịch AgNPs 10 mM /PVA 2% theo thời gian 26 Hình 14 Mật độ quang của dung dịch AgNPs theo thời gian lưu giữ 27 Hình 15 Ảnh hưởng của kích thước AgNPs lên phát triển của vi khuẩn V parahaemolyticus môi trường lỏng 28 Hình 16 Ảnh hưởng của kích thước AgNPs lên phát triển của vi khuẩn V parahaemolyticus môi trường rắn 28 Hình 17 Hiệu lực diệt khuẩn V parahaemolyticus theo kích thước AgNPs 29 Hình 18 Hiệu lực diệt khuẩn E ictaluri theo kích thước AgNPs 30 Hình 19 Ảnh hưởng của kích thước hạt AgNPs lên phát triển của vi khuẩn E ictaluri môi trường lỏng 30 iv Hình 20 Ảnh hưởng của kích thước hạt AgNPs lên phát triển của vi khuẩn E ictaluri môi trường rắn 30 Hình 21 Hiệu lực diệt khuẩn V parahaemolyticus theo nồng độ AgNPs 31 Hình 22 Ảnh hưởng của nồng độ AgNPs lên phát triển của vi khuẩn V parahaemolyticus môi trường lỏng 32 Hình 23 Ảnh hưởng của nồng độ AgNPs lên phát triển của vi khuẩn V parahaemolyticus môi trường rắn 32 Hình 24 Hiệu lực diệt khuẩn E ictaluri theo nồng độ AgNPs 33 Hình 25 Ảnh hưởng của nồng độ AgNPs lên phát triển của vi khuẩn E ictaluri môi trường lỏng 34 Hình 26 Ảnh hưởng của nồng độ AgNPs lên phát triển của vi khuẩn E ictaluri môi trường rắn 34 Hình 27 Sơ đồ quy trình chế tạo AgNPs/PVA phương pháp chiếu xạ 36 Hình 28 Mật độ quang, ảnh TEM phân bố kích thước AgNPs của chế phẩm AgNPs/PVA 37 Hình 29 Hệ thống bể ni thí nghiệm 38 Hình 30 Khả tăng trọng của cá thí nghiệm 39 Hình 31 Cá xuất huyết nhiễm bệnh 40 Hình 32 Tỷ lệ chết của cá thí nghiệm 40 Hình 33 Kết điện di khuẩn lạc phân lập từ mẫu gan cá 40 Hình 34 Mật độ TVKHK bể ni 43 Hình 35 Khả tăng trọng của cá thí nghiệm 43 Hình 36 Tỷ lệ chết của cá thí nghiệm 45 Hình 37 Kết điện di khuẩn lạc phân lập từ mẫu gan cá 46 v DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Thành phần phản ứng PCR 19 Bảng Chu trình nhiệt của phản ứng PCR 19 Bảng Bố trí thí nghiệm cá tra 20 Bảng Bố trí thí nghiệm cá tra 20 Bảng Các đặc trưng cấu trúc của AgNPs ổn định PVA 2% 23 Bảng Giá trị OD của chế phẩm AgNPs/PVA với nồng độ PVA khác 25 Bảng Kích thước AgNPs AgNPs/PVA theo nồng độ PVA 26 Bảng Độ ổn định của dung dịch AgNPs theo thời gian lưu trữ 27 Bảng Hiệu lực diệt khuẩn V parahaemolyticus theo kích thước AgNPs 28 Bảng 10 Hiệu lực diệt khuẩn E ictaluri theo kích thước AgNPs 29 Bảng 11 Hiệu lực diệt khuẩn V parahaemolyticus theo nồng độ AgNPs 31 Bảng 12 Hiệu lực diệt khuẩn E ictaluri theo nồng độ AgNPs 33 Bảng 13 Khả tăng trọng của cá thí nghiệm 38 Bảng 14 Tỷ lệ chết của cá thí nghiệm 40 Bảng 15 Mật độ TVKHK bể nuôi 42 Bảng 16 Khả tăng trọng của cá thí nghiệm 44 Bảng 17 Tỷ lệ chết của cá thí nghiệm 45 Bảng 18 Mật độ TVKHK bể nuôi 48 vi TÓM TẮT Đề tài “Chế tạo chế phẩm bạc nano/polyvinyl alcohol kháng khuẩn phương pháp chiếu xạ phục vụ xử lý môi trường ương nuôi cá tra” thực 18 tháng (từ 6/2016 đến 11/2017) nhằm chế tạo chế phẩm bạc nano/PVA cho hiệu lực diệt khuẩncao ứng dụng xử lý nước môi trường ương nuôi cá tra Một số kết đạt nghiên cứu sau: - Đã chế tạo thành công chế phẩm AgNPs sử dụng chất ổn định PVA 2% có nồng độ AgNPs khác 5, 10 20 mM, tương ứng liều xạ bão hịa 12, 22 35 kGy Kích thước AgNPs mẫu giảm dần tăng liều xạ nồng độ PVA - Chế phẩm AgNPs/PVA có độ ổn định tốt lưu trữ điều kiện bình thường vịng 12 tháng - Hiệu lực diệt khuẩn V parahaemolyticus E ictaluri của chế phẩm AgNPs/PVA điều kiện in vitro tăng dần gia tăng nồng độ chế phẩm giảm dần kích thước AgNPs chế phẩm tăng - Kết thử nghiệm in vivo ương ni cá tra giống cho thấy chế phẩm AgNPs/PVA có khả ức chế vi khuẩn E ictaluri tổng vi kh̉n hiếu khí mơi trường ương ni cá tra giống (4 tháng tuổi) nồng độ sử dụng thích hợp ppm Từ kết cho thấy chế phẩm AgNPs/PVA chế tạo phương pháp chiếu xạ gamma (Co-60) sản phẩm ứng dụng cơng nghệ cao có tiềm thương mại hóa, nhằm đáp ứng nhu cầu xử lý diệt vi sinh vật gây bệnh nuôi thủy sản vii ` PHẦN THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Chế tạo chế phẩm bạc nano/polyvinyl alcohol kháng khuẩn phương pháp chiếu xạ phục vụ xử lý môi trường ương nuôi cá tra Mã số: NN02/16-17 Đơn vị chủ trì: Phịng CNSH Vật liệu Nano Đơn vị phối hợp Chủ nhiệm nhiệm vụ: PGS.TS Lê Quang Luân Cán tham gia thực hiện: Từ 6/2016-11/2017: KS Lê Văn Hậu (thành viên) Từ 6/2016-6/2017: ThS Đặng Hồng Việt (thành viên chính), CN Phạm Trần Hải Thương (thành viên chính), CN Nguyễn Thanh Vũ (thành viên) Từ 6/2017-11/2017: ThS Hàng Khánh Linh (thành viên chính), CN Nguyễn Thị Ngọc Anh (thành viên chính), CN Huỳnh Gia Hòa (thành viên) Thời gian thực hiện: 18 tháng (từ 6/2016 đến 11/2017) Kinh phí: - Tổng dự tốn: 300 triệu đồng - Kinh phí sử dụng: 300 triệu đồng Mục tiêu nhiệm vụ: Mục tiêu tổng quát Sản xuất chế phẩm bạc nano xạ gamma Co-60 sử dụng chất ổn định PVA cho hiệu lực diệt khuẩncao ứng dụng xử lý nước môi trường ương nuôi cá tra Mục tiêu cụ thể - Xây dựng quy trình chế tạo chế phẩm AgNPs/PVA phương pháp chiếu xạ tia gamma Co-60 - Khảo sát đặc trưng cấu trúc hiệu lực diệt khuẩncủa chế phẩm AgNPs/PVA in vitro - Khảo sát hiệu lực diệt khuẩn của chế phẩm việc xử lý nước môi trường ương nuôi cá tra quy mơ phịng thí nghiệm - Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm Các nội dung công việc thực so với đăng ký Thời gian STT Nội dung đăng ký Xây dựng đề cương Nội dung 1: Chế tạo dung dịch AgNPs/PVA phương pháp xạ Nội dung 2: Khảo sát hiệu lực diệt khuẩn của dung dịch AgNPs/PVA in vitro Nội dung 3: Thiết lập quy trình chế tạo thử nghiệm dung dịch AgNPs/PVA phương pháp xạ với quy mơ 100 lít/mẻ Nội dung 4: Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm Nội dung 5: Thử nghiệm khả xử lý vi khuẩn môi trường ương nuôi cá tra của chế phẩm quy mơ phịng thí nghiệm Viết báo cáo nghiệm thu đề tài (bắt đầu - kết thúc) tháng Nội dung thực Đánh giá Đã hoàn thiện đề cương chi tiết (5/2016) - Đã chế tạo thành công dung dịch AgNPs/PVA với nồng độ AgNPs khác tháng (6-9/2016) tháng - Đã xác định ảnh hưởng của nồng độ PVA đến kích thước AgNPs Khi nồng độ PVA tăng kích thước AgNPs giảm Đã xác định nồng độ tối ưu của chế phẩm cho hiệu lực diệt khuẩn tốt in vitro (10/201601/2017) tháng (02-4/2017) tháng (02-4/2017) tháng (5-10/2017) tháng Đã xây dựng quy trình chế tạo thử nghiệm dung dịch AgNPs/PVA phương pháp xạ với quy mơ 100 lít/mẻ Hồn thành tiêu ch̉n sở cho chế phẩm AgNPs/PVA Đã xác định nồng độ tốt của chế phẩm AgNPs/PVA cho khả xử lý vi khuẩn môi trường ương nuôi cá tra Báo cáo tổng kết đề tài (11/2017) Đúng tiến độ Phụ lục Bảng xử lý thống kê phần mềm SPSS 16.0 Hiệu lực diệt khuẩn V parahaemolyticus theo kích thước AgNPs Môi trường rắn ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 177,355 ,010 59,118 F Sig 4,928E4 ,000 ,001 Total 177,364 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 3 9,9700 10,0200 0,7100 8,3800 Sig 1,000 1,000 ,115 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Môi trường lỏng ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 194,191 ,020 64,730 ,002 Total 194,211 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7100 9,9600 10,0200 3 10,0200 Sig 1,000 ,195 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 58 F 2,609E4 ,000 Sig Hiệu lực diệt vi khuẩn E ictaluri theo kích thước AgNPs Môi trường rắn ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 185,360 Mean Square ,024 F 61,787 Sig 2,097E4 ,000 ,003 Total 185,383 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 3 9,3900 9,9000 10,0200 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Môi trường lỏng ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 189,375 Mean Square ,029 63,125 ,004 Total 189,404 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 ,7100 3 9,9300 10,0200 Sig 9,6900 1,000 1,000 ,106 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 59 F 1,729E4 ,000 Sig Hiệu lực diệt khuẩn V parahaemolyticus theo nồng độ AgNPs Môi trường lỏng ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 182,338 Mean Square ,663 36,468 F Sig 660,447 ,000 12 ,055 Total 183,001 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7100 3 9,8800 10,0200 7,2900 7,9300 9,0600 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 ,480 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Môi trường rắn ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 173,064 Mean Square ,053 34,613 F Sig 7,896E3 ,000 12 ,004 Total 173,116 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 Sig 6,7600 7,4000 8,3800 9,6500 10,0200 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 60 1,000 1,000 1,000 Hiệu lực diệt khuẩn E ictaluri theo nồng độ AgNPs Môi trường lỏng ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 180,512 Mean Square ,014 F 36,102 Sig 3,051E4 ,000 12 ,001 Total 180,526 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 3 7,0700 7,8300 8,9800 9,8000 10,0200 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Môi trường rắn ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 174,309 Mean Square ,019 F 34,862 Sig 2,202E4 ,000 12 ,002 Total 174,328 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 Sig 6,4500 7,6000 8,5600 9,5400 10,0200 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 61 1,000 1,000 1,000 Khả xử lý vi khuẩn chế phẩm môi trường ương nuôi cá tra với điều kiện không thay nước bể nuôi Khả tăng trọng cá thí nghiệm Thời gian sau ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Between Groups Within Groups 514,500 102,900 12,000 12 1,000 Total 526,500 17 Sig 102,900 ,000 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1,0000 3 2,0000 5,0000 5,0000 Sig 2,0000 3,0000 17,0000 ,244 ,244 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 10 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square Between Groups Within Groups 830,250 276,750 8,000 1,000 Total 838,250 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 22,0000 22,0000 Sig 7,0000 30,0000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 62 F 276,750 ,000 Sig Thời gian sau 15 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square Between Groups Within Groups 54,000 27,000 6,000 1,000 Total 60,000 F Sig 27,000 ,001 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 35,0000 38,0000 41,0000 Sig 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 20 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square Between Groups Within Groups 338,000 169,000 6,000 1,000 Total 344,000 F Sig 169,000 ,000 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 39,0000 47,0000 54,0000 Sig 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 25ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square Between Groups Within Groups 882,000 441,000 6,000 1,000 Total 888,000 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 42,0000 57,0000 63 F 441,000 ,000 Sig 66,0000 Sig 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 30 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Between Groups Within Groups 896,000 448,000 6,000 1,000 Total 902,000 Sig 448,000 ,000 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 49,0000 65,0000 73,0000 Sig 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Tỷ lệ chết cá thí nghiệm Thời gian sau ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 225,183 Mean Square ,004 F 45,037 12 ,000 Total 225,187 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 ,7100 ,7100 3 3 Sig 6,2300 8,0900 8,5900 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 64 1,000 1,501E5 ,000 Sig Thời gian sau 10 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 276,908 Mean Square ,032 F 55,382 Sig 2,103E4 ,000 12 ,003 Total 276,940 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7100 ,7100 3 10,0200 3 10,0200 5,5200 7,9900 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 15 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 274,747 Mean Square ,150 F 54,949 Sig 4,402E3 ,000 12 ,012 Total 274,897 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7100 3 10,0200 3 10,0200 10,0200 Sig 1,9600 5,9600 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 20 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups 255,594 df Mean Square 51,119 65 F 4,510E4 ,000 Sig Within Groups ,014 12 ,001 Total 255,607 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7100 3 10,0200 3 10,0200 10,0200 2,6800 6,3600 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 25 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 242,844 Mean Square ,002 F 48,569 Sig 2,914E5 ,000 12 ,000 Total 242,846 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7100 3 10,0200 3 10,0200 10,0200 3,2400 6,4900 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 30 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total 228,829 ,004 df Mean Square 45,766 12 ,000 228,833 17 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets 66 F 1,373E5 ,000 Sig Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7100 3 10,0200 3 10,0200 10,0200 3,9400 6,8700 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Khả xử lý vi khuẩn chế phẩm môi trường ương nuôi cá tra với điều kiện thay nước bể nuôi Khả tăng trọng cá thí nghiệm Thời gian sau ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df 26,712 Mean Square ,088 8,904 F Sig 810,024 ,000 ,011 Total 26,800 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 ,7071 4,1822 3 4,3001 3,9356 Sig 1,000 1,000 ,206 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 10 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total 56,982 ,046 df Mean Square 18,994 ,006 57,028 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets 67 F 3,312E3 ,000 Sig Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N ,7071 3 3 5,5222 5,7004 5,9578 Sig 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 15 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square Between Groups Within Groups ,079 ,040 ,034 ,006 Total ,114 F Sig 6,959 ,027 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 6,5189 3 6,5952 6,5952 Sig 6,7451 ,263 ,051 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 20 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares df Mean Square Between Groups Within Groups ,344 ,172 ,026 ,004 Total ,370 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 7,6483 7,7780 Sig 7,3142 1,000 ,053 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 68 F 39,409 ,000 Sig Thời gian sau 25 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 1,005 ,503 ,022 F Sig 136,109 ,000 ,004 Total 1,027 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 8,4556 8,5146 7,7780 Sig 1,000 ,280 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 30 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 1,700 ,850 ,019 F Sig 263,145 ,000 ,003 Total 1,720 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 3 9,1377 9,1377 8,2157 Sig 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Tỷ lệ chết cá thí nghiệm Thời gian sau ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total 136,539 ,001 df Mean Square 45,513 ,000 136,541 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan 69 F 2,601E5 ,000 Sig Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 ,7100 ,7100 8,5000 Sig 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 10 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 195,021 ,000 Total 65,007 F Sig 2,600E6 ,000 ,000 195,021 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 ,7100 ,7100 10,0200 Sig 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 15 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 195,021 ,000 Total 65,007 ,000 195,021 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 ,7100 ,7100 Sig 10,0200 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 70 F 2,600E6 ,000 Sig Thời gian sau 20 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 195,021 ,000 Total 65,007 F Sig 2,600E6 ,000 ,000 195,021 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 ,7100 ,7100 10,0200 Sig 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 25 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups df Mean Square 195,021 ,000 Total 65,007 F Sig 2,600E6 ,000 ,000 195,021 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 ,7100 ,7100 10,0200 Sig 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Thời gian sau 30 ngày theo dõi ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total 195,021 ,000 df Mean Square 65,007 ,000 195,021 11 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Duncan 71 F 2,600E6 ,000 Sig Subset for alpha = 0.05 NT N 1 ,7100 3 ,7100 ,7100 Sig 10,0200 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 72