Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích kháng phòng trừ nấm gây bệnh hại hạt giống lúa

Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A PHẦ MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Lúa (Oryza sativa L.) lương thực nửa dân số giới, tập trung nước châu Á, châu Phi châu Mỹ La tinh Lúa gạo có vai trò quan trọng việc đảm bảo an ninh lương thực ổn định xã hội Theo dự báo FAO (Food and Agricuture Organization), giới có nguy thiếu hụt lương thực dân số tăng nhanh, sức mua lương thực, thực phNm nhiều nước tăng, biến đổi khí hậu tồn cầu gây hiểm họa khơ hạn, bão lụt, q trình thị hố làm giảm đất trồng lúa, nhiều nước phải dành đất, nước để trồng nhiên liệu sinh học khan nguồn nhiên liệu cần thiết cho nhu cầu đời sống cơng nghiệp phát triển Chính vậy, an ninh lương thực vấn đề cấp thiết hàng đầu giới tương lai Vấn đề bệnh lúa vấn đề có ảnh hưởng khơng nhỏ tới suất phNm chất lúa, nhóm bệnh hại nấm đối tượng gây hại đáng quan tâm sản xuất lúa Để phịng trừ bệnh này, biện pháp hóa học phổ biến Tuy nhiên, biện pháp nhiều hạn chế, mặt đặc điểm phát triển nấm bệnh, mặt khác nông dân sử dụng thuốc bệnh nặng, ngồi biện pháp cịn gây nhiễm mơi trường để lại dư lượng nông sản Biện pháp sử dụng giống kháng bệnh gặp trở ngại nấm bệnh dễ phát sinh nịi phá vỡ tính kháng (Kiyosawa S, 1989; Way Heong, 1994; Noda ctv, 1998) Hiện tượng kích thích tính kháng bệnh lưu dẫn (system acquired resistanca, SAR), gọi tắt kích kháng, giúp kích thích phản ứng tự vệ Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A chống lại bệnh hại, nhà khoa học giới nghiên cứu từ năm 1933 (Chester, 1933) đến nhà khoa học hiểu nhiều chế tính kích kháng (Phạm Văn Kim, 2006) với nhiều kết khả quan Kích kháng sử dụng tác nhân, vi sinh vật hóa chất khơng gây nhiễm mơi trường, tác động lên phận thuộc giống nhiễm, qua kích thích hoạt động chế kháng bệnh có kịp thời giúp kháng lại bệnh bị mầm bệnh công Trên lúa, nghiên cứu kích kháng giúp lúa kháng với bệnh đạo ôn nghiên cứu tập trung vào lĩnh vực: (i) tìm tác nhân kích kháng, (ii) nghiên cứu chế kích kháng tác nhân có triển vọng khía cạnh mơ học, (iii) nghiên cứu chế kích kháng tác nhân có triển vọng khía cạnh sinh học Hiện nhiều nước giới nghiên cứu ứng dụng chất kháng clorua đồng Oxalic Acid dịch chiết thực vật, kết hợp với việc sử dụng gen kháng để tạo hiệu phòng trừ bệnh nấm hại lúa có hiệu Xuất phát từ nhu cầu thực tế sản xuất tiến hành nghiên cứu đề tài: “ghiên cứu ảnh hưởng chất kích kháng phòng trừ nấm gây bệnh hại hạt giống lúa” 1.2 Mục đích-Yêu cầu 1.2.1 Mục đích Xác định thành phần bệnh nấm hại hạt giống lúa thu thập năm 2010 khu vực Hà Nội phụ cận Thử nghiệm số chất kích kháng nhằm tạo miễn dịch phịng chống bệnh nấm hại hạt giống lúa điều kiện nhà lưới phịng thí nghiệm 1.2.2 u cầu - Xác định thành phần bệnh nấm hại mẫu hạt giống lúa thu thập năm 2010 khu vực Hà Nội phụ cận Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A - Thử nghiệm số chất kích kháng clorua đồng nồng độ 0.05mM, oxalic acid nồng độ 1mM, 2mM, 4mM Bion nồng độ 200ppm nhằm hạn chế số nấm gây bệnh hạt lúa - Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích kháng đến tỷ lệ nảy mầm sức sống mạ - Xác định hiệu chất kích kháng phịng trừ bệnh nấm hại hạt giống lúa Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A PHẦ 2.TỔG QUA TÀI LIỆU 2.1 Cơ chế kháng bệnh thực vật Đến kiến thức nhân loại tiến sâu vào lĩnh vực miễn dịch thực vật bệnh Bên cạnh việc tiến sâu vào khía cạnh phân tử gen kháng bệnh, nhà khoa học sâu dần vào chế kháng bệnh để từ đưa biện pháp kích thích tính kháng bệnh tự nhiên trồng Sau tìm hiểu chế kháng bệnh thực vật người ta phân thành hai nhóm: Nhóm chế thuộc sinh hóa học nhóm chế thuộc cấu trúc mơ học Cơ chế kháng bệnh thuộc sinh hóa học Sau bị vi sinh vật công để gây bệnh, nơi bị xâm nhiễm tiết loạt hợp chất chống vi sinh vật, protein liên quan đến bệnh, enzim để làm giảm hoạt động mầm bệnh nhiều chất khác Về hợp chất chống vi sinh vật chia nhóm: Nhóm phytoanticipins nhóm phytoaleuxins Phytoaleuxins ký chủ tiết để chống lại với mầm bệnh, phytoanticipins ký chủ trực tiếp tiết mà tương tác chất ký sinh ký chủ tạo Hai nhóm tìm thấy giống có tính kháng bệnh cao Bên cạnh loạt protein có liên quan đến bệnh tế bào tiết Các protein có vai trị làm giảm phát triển mầm bệnh cách tác động lên vách tế bào, màng nguyên sinh chất lên ribosom vi sinh vât Các protein xếp vào 18 họ protein 12 protein biết đến với tên PR-1, PR-2, PR-3, PR-4, PR-5, PR-8, PR-11, protein bất hoạt ribosom, protein chuyển hóa chất béo nsLTPs, AMPs , thionins, Vai trò protein tóm lược sau: PR-2 (β-1,3glucanase) có vai trị phân hủy thành β-1,3glucan β-1,6 glucan Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A vách tế bào vi sinh vật Hai nhóm enzim β-1,3-glucanase chitinase có tác động hỗ trợ làm tăng hiệu phân hủy vách tế bào mầm bệnh Bên cạnh loạt enzim khác hình thành tế bào bị nấm bệnh xâm nhiễm với vai trị chuyển hóa chất độc mầm bệnh tiết trung hòa độc tính chất tế bào tiết phản ứng lại mầm bệnh, chất nồng cao gây hại cho tế bào Trong kể đến enzim có liên quan đến bệnh PAL (phenylalanine ammonia lyase), peroxidase PAL có vai trị thúc đNy sinh tổng hợp hợp chất polyphenol, chất quan trọng chống bệnh trồng Cịn peroxidase có nhiều vai trị có vai trị khử H2O2 vai trò phối hợp với PAL việc giúp lignin hóa vách tế bào bị cơng qua ngăn cản học lan xa nấm gây bệnh H2O2 tích tụ tế bào với nhiệm vụ oxy hóa chất độc nấm tiết ra, Oxy hóa polyphenol làm cho polyphenol khơng độc tế bào, H2O2 với nồng độ cao lại gây hại cho tế bào Do Peroxidase làm giảm bớt tính độc H2O2 tế bào ký chủ Bên cạnh tăng hoạt tính enzim cịn xuất tín hiệu kích kháng gợi lên Các tín hiệu bao gồm: salycilic acid, Jasmonic acid etylen Cơ chế kháng bệnh thuộc cấu trúc mơ học Có chế kháng bệnh mặt mô học, tùy thuộc vào cách xâm nhập nấm gây bệnh - Sự tạo lớp vách tế bào chung quanh vết thương để bao vây ngăn cản xâm nhập nấm có tính ký sinh yếu, xâm nhập qua vết thương - Sự rắn hóa vách tế bào cách lignin hóa vách tế bào bị nấm xâm nhiễm Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A - Sự hình thành papillae (vách dầy) bên đĩa áp để ngăn cản xâm nhập nấm gây bệnh - Tích tụ hợp chất phenol đưa đến phản ứng tự chết tế bào để cô lập nấm gây bệnh Là phản ứng kháng bệnh mức cao thực vật * Quan sát thay đổi mô để đánh giá hiệu kích kháng - Để khảo sát tăng cường lignin hóa vách tế bào, nơi bị mầm bệnh xâm nhiếm, số vách tế bào phát sáng đếm kính hiển vi huỳnh quang: + Lúa sau lây bệnh nhân tạo 24h 48h: cắt đoạn ngắn -5 cm sau tNy diệp lục tố dung dịch ethanol – acid acetic (3:1) tồn trữ trong lactoglyceron (lactic acid: 1; glyceron: 1; nước cất: 1) mẫu quan sát dung dịch Evans blue 0,01% quan sát kính hiển vi huỳnh quang bước sóng 400 – 440 nm + Các tiêu quan sát: Dưới kính hiển vi huỳnh quang, tế bào có phản ứng phát sáng có màu vàng sáng Các tiêu quan sát bao gồm phần trăm phát sáng đơn đa tế bào, diện tích số vách tế bào phát sáng trung bình đĩa áp mức độ phát sáng tế bào (+, ++, +++) ( 2002) Sự so sánh số liệu thí nghiệm kích kháng đối chứng giúp thấy chế tăng cường lignin hóa kích kháng gợi - Khảo sát tích tụ polyphenol Thí nghiệm nhằm khảo sát phản ứng tế bào thông qua tổng hợp polyphenol Thí nghiệm bố trí tương tự thí nghiệm khảo sát phản ứng phát sáng tế bào mô tả phần Mẫu quan sát vào thời điểm 24, 48, 72, 96h sau lây bệnh nhân tạo Hợp chất phenol thị màu xanh sau nhuộm với Toluidine Blue O (0,05% ph 6,8) nhiệt độ 400C 4h quan sát kính hiển vi thường Chỉ tiêu ghi nhận bao gồm số lượng đĩa áp có tích tụ Polyphenol, diện Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A tích vùng tế bào có tích tụ polyphenol tính theo cơng thức tính diện tích hình chữ nhật - Khảo sát tích tụ H2O2: Bố trí thí nghiệm tương tự thí nghiệm Mẫu thu thập thời điểm 4h trước nấm xâm nhiễm thời điểm 0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 36 48h sau nấm xâm nhiễm, sau nhuộm với dung dịch 0,05% DAB (3,3’ – diaminobenzidine, D – 8001, Sigma) Theo phương pháp Thordal – Christensen et al (1997) Ghi nhận phần trăm đĩa áp tích tụ H2O2, diện tích vùng tế bào có tích tụ H2O2 mức độ tích tụ * Quan sát gia tăng hoạt tính enzim có liên quan đến kích kháng - Sự tăng cường enzim PAL (phenylalanine ammonia lyase), beta – 1,3- glucannase, peroxidase catalase 2.2 Sự kích thích tính kháng bệnh trồng 2.2.1 Khái niệm Kích thích tính kháng bệnh thực vật thường gọi tắt “kích kháng”, phương pháp giúp cho giống trồng bị nhiễm trở nên có khả kháng bệnh mức độ sau xử lý chất kích kháng Kích kháng khơng tác động trực tiếp đến mầm bệnh mà kích thích chế tự vệ tự nhiên mô Chất kích kháng lồi vi sinh vật khơng gây bệnh, khơng mang tính độc trồng loại hóa chất khơng độc khơng có tác động trực tiếp diệt mầm bệnh hóa chất dùng nơng dược (Phạm Văn Kim, 2002) Theo Tuzun Kuc (1991) Ngơ Thành Trí ctv (2004) cho kích thích tính kháng tìm thấy 25 loại trồng khác khả kích kháng biểu mặt cấu trúc hay sinh hóa, tác động chỗ hay lưu dẫn đến phận khác (Agrios, 1997) Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A 2.2.2 Cơ chế kích kháng Ở trồng, tế bào có gen giúp tế bào tiết chất có khả kháng lại với loại bệnh Trong điều kiện bình thường, gen ln bị gen ức chế nằm bên cạnh ức chế Khi ta tác động tác nhân gây kích kháng cách ngâm hạt, rễ, hay phun lên lá, tác nhân tác động lên bề mặt lá, kích thích thụ thể tạo tín hiệu (là dịng ion hay tín hiệu điện tử cây) (Steiner, 1995) sau đó, chuyển tín hiệu vào nhân tế bào tác động vào gen ức chế, làm cho gen ức chế khơng cịn ức chế gen giúp tế bào tiết chất kháng bệnh Nhờ chất kháng bệnh mà trồng từ nhiễm bệnh trở thành kháng bệnh (Phạm Văn Kim, 2002) 2.2.3 Các loại kích kháng Kích kháng chỗ (local induced restance) Hiệu kích thích tính kháng xảy vị trí xử lý tác nhân kích kháng Có nghiên cứu tượng phong phú nhiều loại trồng khác Xử dụng chất syringolin tiết từ vi khuNn Pseudomonas syringae pv syringae kích thích tính kháng chỗ với nấm gây bệnh cháy lúa Pyricularia oryzae (Waspi U ctv., 2000) Phun monopotassium phosphat (KH2PO4) 1% lên ớt kích thích tính kháng với bệnh phấn trắng Leveillula taurica (Reuveni ctv, 1998) Kích kháng lưu dẫn (systemic acquired resistance: SAR) Tính kháng khơng thể vị trí xử lý tác nhân kích kháng mà cịn truyền đến mơ cách xa nơi xử lý kích kháng (Ryal ctv, 1996) Những tác nhân có tác nhân sinh học sinh học Khi xử lý kích kháng biện pháp ngâm hạt có khả tự vệ kháng lại bệnh thể kích kháng lưu dẫn Kích kháng lưu dẫn khác với kích kháng chỗ tín hiệu có khả truyền đến mơ khác cách xa điểm xử lý kích kháng làm nâng Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A cao khả tự vệ (Van Loon ctv, 1998) Manandhar ctv (1998) kích thích tính kháng lưu dẫn chống bệnh cháy lúa cách sử dụng dòng nấm Pyricularia oryzae khơng độc tính nấm Bipolaris sorokiniana khơng làm giảm bệnh đạo ơn mà cịn làm tăng suất lúa 2.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng kích thích tính kháng bệnh trồng 2.3.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước Kỹ thuật kích kháng tính kháng lưu dẫn trồng kỹ thuật sử dụng lồi vi sinh vật khơng gây hại cho mơi trường hóa chất khơng có tác dụng diệt vi sinh vật gây bệnh không gây ô nhiễm môi trường có tác dụng kích thích trồng tạo tính kháng bệnh Kỹ thuật nghiên cứu ứng dụng thành cơng giới số lồi trồng dưa leo, cà chua, lúa mạch, lúa (Hammerschmidt at al., 1995; Ozeretskovskaya, 1995; Jorgensen et al., 1990; Manandhar et al., 1998) Trên giới việc nghiên cứu kích thích tính kháng bệnh bắt đầu nghiên cứu từ năm 1936 (Mauch-Mani Metraux, 1997; Van loon, 2001) sau nhiều tác giả nghiên cứu sâu vào chế kích kháng bệnh nhiều lồi ngắn ngày phát nhiều tác nhân kích kháng khác Thông thường mầm bệnh thuộc chủng yếu giống ấy, thường tạo phản ứng kích kháng (Fink ctv.,1990) nhiều tác giả sử dụng nghiên cứu kích kháng Tuy nhiên tác nhân để nghiên cứu áp dụng được, chủng mầm bệnh trở nên độc giống khác có ngồi sản xuất Theo Ebrahim Schonbeck (1985) Trịnh Ngọc Thúy (2000) trích dẫn cho chủng nấm Erysiphe graminis lúa mạch, sau ngày có tính kháng nấm Erysiphe graminis f.sp hordei gây bệnh phấn trắng Khoa ông học-Trường ĐHH Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A Theo Ouyang ctv (1987), xử lý mạ độc tố nấm Magnaporthe grisea làm cho hoạt động enzyme phenylalanine ammonia lyase CoA lyase tăng, giúp tạo tính kháng Magnaporthe grisea Theo Sengupta Sinha (1987), xử lý hạt với cupric chloride kiểm soát tốt bệnh cháy mùa vụ khác Sawati ctv (1988), chủng Acrocylindirum oryzae vào lúa làm tăng hoạt động enzyme peroxidase polyphenol oxydase giúp có khả hạn chế bệnh Theo Doubrava et al (1988), thấy oxalic acid có khả kích kháng bệnh C.lagenarium dưa leo Pelcz (1989), chủng vào lúa mạch dòng nấm Erysiphe 75202 khơng đọc, tạo tính kháng dòng nấm phổ biến Kunoh ctv (1989), chủng nấm Erysiphe pisi vào lúa mạch trước nấm Erysiphe graminis với khoảng thời gian 30 phút, giờ, làm giảm độ độc nấm Erysiphe graminis 35%, 22% 5,8% Theo Gregerson Smedegaad (1989) Ngơ thành Trí ctv (2004) trích dẫn thấy lồi nấm hoại sinh Cladosporium macrocarpum có khả gây kích kháng, giúp lúa mạc chống lại bệnh phấn trắng Theo Vilich Neltrien (1990) Trịnh Ngọc Thúy (2000) trích dẫn, chủng hợp Erysiphe graminis f.sp avenae Puccinia coronata f.sp avenae vào lúa mạch, làm giảm độ độc nấm Erysiphe graminis f.sp hordei 38% Yamada ctv (1990), sử dụng methanol trích từ hạt lúa mì lúa mạch để chống nấm Pyricularia oryzae mạnh Yokoyama ctv (1991), chủng nấm Erysiphe graminis f.sp hordei vào lúa mạch, làm lúa mạch tạo papilla bên đĩa áp nấm gây bệnh, giúp chống lại xâm nhập nấm Khoa ông học-Trường ĐHH 10 Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A 19 Ngơ Thành Trí ; Phạm Văn Kim ; Trần Vũ Phến Cơ chế sinh hố học tính kích kháng lưu dẫn lúa chống lại bệnh đạo ôn `(Pyricularia grisea (Cooke) Sacc.) xử lý với clorua đồng, acibenzolar - S - methyl nấm Sporothrix sp Kỷ yếu Hội thảo quốc gia Bệnh sinh học phân tử, lần thứ - Đại học Nông nghiệp I Hà Nội 20 Nguyễn Văn Tuất (1996) ‘Nghiên cứu xác định nguyên nhân gây bệnh thối hạt phương pháp khác nhau’, Tạp chí BVTV số 4/1994 21 Nguyễn Văn Tuất (1997) Phương pháp chuLn đoán giám định nấm vi khuLn gây bệnh hại trồng nông nghiệp, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 22 Nguyễn Kim Vân cộng (2004), ‘Thành phần bệnh hại hạt giống số trồng vùng Hà Nội’, Tạp chí BVTV số 195 (3/2004) Tài liệu Tiếng Anh Abo, M.E Sy, A.A (1988),”Rice virus diseases”, Seed pathology and microbiology 10, pp.1 OU.S.H (1995), Rice diseases, CAB, Kew Tài liệu tham khảo từ internet http://www.caltexmoldservices.com/section/mold_library/alternaria/ http://www.forestryimages.org/browse/detail.cfm?imgnum=5390551 http://luagao.blogspot.com/2009/04/phong-tru-benh-lem-lep-hat-lua Khoa ông học-Trường ĐHH 54 Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A PHỤ LỤC 1.1 Xử lý kích kháng giống Q5 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KK FILE QUYNHN 29/12/** 9:42 PAGE VARIATE V003 KK LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 532.667 106.533 35.31 0.000 NL 136.867 34.2167 11.34 0.000 * RESIDUAL 20 60.3334 3.01667 * TOTAL (CORRECTED) 29 729.867 25.1678 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE QUYNHN 29/12/** 9:42 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ OA 4mM OA 2mM OA 1mM Bion CuCl2 ?C NOS 5 5 5 DF KK 17.0000 16.2000 11.4000 15.4000 9.20000 22.4000 SE(N= 5) 0.776746 5%LSD 20DF 2.29138 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 6 6 KK 16.8333 14.0000 13.0000 18.6667 13.8333 SE(N= 6) 0.709069 5%LSD 20DF 2.09173 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE QUYNHN 29/12/** 9:42 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KK GRAND MEAN (N= 30) NO OBS 30 15.267 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 5.0168 1.7369 11.4 0.0000 |NL | | | 0.0001 | | | | 1.2 Xử lý kích kháng giống Khang dân BALANCED ANOVA FOR VARIATE KK FILE KICHK 29/12/** 11: PAGE VARIATE V003 KK LN SOURCE OF VARIATION Khoa ông học-Trường ĐHH DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER 55 Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 371.500 74.3000 9.75 0.000 NL 280.867 70.2167 9.22 0.000 * RESIDUAL 20 152.333 7.61667 * TOTAL (CORRECTED) 29 804.700 27.7483 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KICHK 29/12/** 11: PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ OA 4mM OA 2mM OA 1mM Bion CuCl2 ?C NOS 5 5 5 KK 14.8000 11.8000 9.20000 12.0000 7.00000 17.8000 SE(N= 5) 1.23423 5%LSD 20DF 3.64095 -MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 6 6 KK 13.1667 10.3333 7.50000 12.8333 16.6667 SE(N= 6) 1.12670 5%LSD 20DF 3.32372 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KICHK 29/12/** 11: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KK GRAND MEAN (N= 30) NO OBS 30 12.100 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 5.2677 2.7598 22.8 0.0001 |NL | | | 0.0002 | | | | 1.2 Sự phát triển nấm Alternaria padwickii môi trường khác BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTN1 FILE QUYNH 12/ 1/** 19: PAGE Su phat trien cua nam Alternaria padwickii tren cac moi truong VARIATE V003 DKTN1 LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= Khoa ông học-Trường ĐHH DF 56 Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A CT$ 38.2424 19.1212 ****** 0.000 * RESIDUAL 160015E-01 266692E-02 * TOTAL (CORRECTED) 38.2584 4.78230 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTN2 FILE QUYNH 12/ 1/** 19: PAGE Su phat trien cua nam Alternaria padwickii tren cac moi truong VARIATE V004 DKTN2 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 222.685 111.343 5.55 0.043 * RESIDUAL 120.321 20.0536 * TOTAL (CORRECTED) 343.006 42.8758 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTN3 FILE QUYNH 12/ 1/** 19: PAGE Su phat trien cua nam Alternaria padwickii tren cac moi truong VARIATE V005 DKTN3 LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 617.732 308.866 567.38 0.000 * RESIDUAL 3.26622 544370 * TOTAL (CORRECTED) 620.998 77.6248 - Khoa ông học-Trường ĐHH DF 57 Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTN4 FILE QUYNH 12/ 1/** 19: PAGE Su phat trien cua nam Alternaria padwickii tren cac moi truong VARIATE V006 DKTN4 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1569.05 784.524 ****** 0.000 * RESIDUAL 3.82059 636766 * TOTAL (CORRECTED) 1572.87 196.609 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE DKTN5 FILE QUYNH 12/ 1/** 19: PAGE Su phat trien cua nam Alternaria padwickii tren cac moi truong VARIATE V007 DKTN5 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3448.62 1724.31 ****** 0.000 * RESIDUAL 2.64113 440189 * TOTAL (CORRECTED) 3451.26 431.408 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE QUYNH 12/ 1/** 19: PAGE Su phat trien cua nam Alternaria padwickii tren cac moi truong MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ WA PGA PCA SE(N= 5%LSD 3) 6DF CT$ WA PGA PCA NOS 3 NOS 3 DKTN1 0.000000 5.02000 2.04000 DKTN2 3.01333 14.0067 13.0600 DKTN3 9.36000 29.5467 17.6533 DKTN4 17.1667 48.7933 27.1200 0.298157E-01 0.103137 2.58544 8.94346 0.425977 1.47352 0.460712 1.59368 DKTN5 21.3200 68.9067 50.2067 SE(N= 3) 0.383053 5%LSD 6DF 1.32504 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE QUYNH 12/ 1/** 19: PAGE Su phat trien cua nam Alternaria padwickii tren cac moi truong Khoa ông học-Trường ĐHH 58 Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DKTN1 DKTN2 DKTN3 DKTN4 DKTN5 GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 2.3533 10.027 18.853 31.027 46.811 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.1868 0.51642E-01 2.2 0.0000 6.5480 4.4781 44.7 0.0434 8.8105 0.73781 3.9 0.0000 14.022 0.79798 2.6 0.0000 20.770 0.66347 1.4 0.0000 Khoa ông học-Trường ĐHH | | | | 59 Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A LỜI CAM ĐOA Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu chuyên đề trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Khoa ông học-Trường ĐHH i Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A LỜI CẢM Ơ Để hoàn thành đề tài này, ngồi cố gắng nỗ lực thân, tơi nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, bạn bè người thân Trước tiên, xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành lịng biết ơn sâu sắc tới giáo PGS.TS &gơ Bích Hảo tận tình bảo, giúp đỡ động viên tơi q trình thực đề tài hồn thành chun đề Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy, cô giáo Khoa &ông học-Đại học &ông nghiệp Hà &ội- người trực tiếp giảng dạy, trang bị kiến thức bổ ích suốt thời gian vừa qua Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tất người thân, bạn bè, gia đình người bên cạnh động viên, giúp đỡ tơi q trình học tập thực đề tài Hà &ội, ngày tháng năm 2010 Tác giả thực đề tài: &guyễn Thị Quỳnh Khoa ông học-Trường ĐHH ii Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích-Yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN 2.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cơ chế kháng bệnh thực vật 2.2 Sự kích thích tính kháng bệnh trồng 2.2.1 Khái niệm 2.2.2 Cơ chế kích kháng 2.2.3 Các loại kích kháng 2.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng kích thích tính kháng bệnh trồng 2.3.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 13 PHẦN ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Vật liệu nghiên cứu 21 3.1.1 Giống lúa: 21 3.1.2 Chất kích kháng: 21 3.1.3 Các hóa chất dùng nghiên cứu: 24 3.1.4 Dụng cụ thí nghiệm: 24 3.1.5 Môi trường nuôi cấy: 24 3.2 Địa điểm nghiên cứu 24 3.3 Nội dung nghiên cứu 24 3.3.1 Nghiên cứu phòng: 24 3.3.2 Nghiên cứu nhà lưới: 25 Khoa ông học-Trường ĐHH iii Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A 3.4 Phương pháp nghiên cứu 25 3.4.1 Phương pháp nghiên cứu phòng: 25 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu nhà lưới 27 3.4.2 Chỉ tiêu theo dõi 28 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 28 3.6 Cơng thức tính tốn 28 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Thành phần nấm bệnh hạt giống lúa năm 2010 30 4.2 Mức độ nhiễm nấm phổ biến giống lúa Q5 Khang dân vụ Thu-Đông năm 2010 31 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích kháng đến bệnh cháy lúa Alternaria padwickii 41 4.3.1 Ảnh hưởng nấm Alternaria padwickii đến tỷ lệ nảy mầm giống lúa Q5 41 4.3.2 Khảo sát khả truyền bệnh từ hạt giống mang nấm gây bệnh sang mạ Q5 42 4.3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Alternaria padwickii 43 4.3.4 Ảnh hưởng chất kích kháng đến tỷ lệ nấm Alternaria padwickii hạt giống lúa Q5 Khang dân 45 4.4.5 Ảnh hưởng chất kích kháng tới tỷ lệ nảy mầm 47 4.4 Ảnh hưởng chất kích kháng đến khả phát triển mạ 48 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ N GHN 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Đề nghị: 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 Khoa ông học-Trường ĐHH iv Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A DAH MỤC BẢG BIỂU Bảng 3.1 Thành phần chất kích kháng thu thập 21 Bảng 4.1 Thành phần nấm bệnh mẫu lúa giống 30 vụ Thu Đông năm 2010 30 Bảng 4.2 Tỷ lệ nhiễm mức độ phổ biến loài nấm hai giống Q5 Khang dân 31 Bảng 4.3 Kết giám định nấm bệnh hạt giống lúa vụ Thu Đông năm 2010 34 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nấm Alternaria padwickii đến tỷ lệ nảy mầm giống lúa Q5 42 Bảng 4.5 Khả truyền bệnh từ hạt giống mang nấm sang mạ Q5 43 Bảng 4.6 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Alternaria padwickii nhiệt độ 30-35oC 44 Bảng 4.7 Ảnh hưởng chất kích kháng đến tỷ lệ nhiễm nấm Alternaria padwickii hạt giống lúa Q5 Khang dân 46 Bảng 4.8 Ảnh hưởng chất kích kháng tới tỷ lệ nảy mầm 47 hạt giống lúa Q5 47 Khoa ông học-Trường ĐHH v Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A DAH MỤC HÌH Hình 3.1: Cơng thức cấu tạo Acidbenzolar-S-methyl 21 Hình 3.2 : Cấu trúc tinh thể đồng khan (II) clorua 22 Hình 3.3, 3.4: Dạng khan cơng thức cấu tạo Oxalic acid 23 Hình 4.1: Kiểm nghiệm bệnh nấm hại hạt giống lúa Q5 36 Hình 4.2: Hạt nhiễm nấm Alternaria padwickii 37 Hình 4.3:Hạt nhiễm nấm Tilletia barclayana 37 Hình 4.4: Hạt nhiễm nấm Sarocladium oryzae 38 Hình 4.5: Hạt nhiễm nấm Aspegilus ssp 38 Hình 4.6: Hạt nhiễm nấm Microdochium oryzae 39 Hình 4.7: Bào tử nấm Alternaria padwickii 39 Hình 4.8: Bào tử nấm Curvularia lunata 40 Hình 4.9: Bào tử nấm Rhizopus ssp 40 Hình 4.10:Bào tử nấm Tilletia barclayana 41 Hình 4.11: Ảnh hưởng mơi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Alternaria padwickii 44 Hình 4.12: Curvularia lunata sau ngày ni cấy mơi trường PGA 45 Hình 4.13: Alternaria padwickii sau ngày nuôi cấy môi trường PGA 45 Hình 4.14 : Ảnh hưởng chất kích kháng đến tỷ lệ nấm Alternaria padwickii giống lúa 46 Hình 4.15: Ảnh hưởng chất kích kháng đến tỷ lệ nảy mầm 47 giống lúa Q5 47 Hình 4.16: Ảnh hưởng chất kích kháng đến sức sống mầm 49 Hình 4.17: Mầm hạt lúa bị chết nhiễm nấm Alternaria padwickii 50 Hình 4.18: Hạt lúa bị nhiễm nấm Alternaria padwickii 50 Khoa ông học-Trường ĐHH vi Chuyên đề tốt nghiệp guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A DAH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ CÁC KÝ HIỆU A.p : Alternaria padwickii BVTV: Bảo vệ thực vật BTPS: Bào tử phân sinh CDR: Chiều dài rễ CDM: Chiều dài mầm CMBT: Cây mầm bình thường CMBBT: Cây mầm bất bình thường CSB: Chỉ số bệnh KN M: Không nảy mầm STT: Số thứ tự TLB: Tỷ lệ bệnh TB: Trung bình Khoa ơng học-Trường ĐHH vii Chuyên đề tốt nghiệp Khoa ông học-Trường ĐHH guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A Chuyên đề tốt nghiệp Khoa ông học-Trường ĐHH guyễn Thị Quỳnh-Lớp BVTV52A