Đồ án tốt nghiệp tìm hiểu về vi khuẩn nitrat hóa, phương pháp tăng sinh, phân lập, xác định hoạt tính của vi khuẩn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP HCM H o C ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP hi M h in TÌM HIỂU VỀ VI KHUẨN NITRAT HOÁ, PHƯƠNG PHÁP TĂNG SINH, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA VI KHUẨN ity C rs ve ni U CÔNG NGHỆ SINH HỌC ity Ngành: Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC of ch Te l no MSSV: 1191111033 : Hồ Thị Hạnh Nguyên y Sinh viên thực og Giảng viên hướng dẫn : ThS: Huỳnh Văn Thành Lớp: 11hsh02 TP Hồ Chí Minh, 2013 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     LỜI MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Các chế phẩm vi sinh vật sử dụng loại bỏ hàm lượng chất C, N, P…dư thừa nước theo trình khác như: tạo sinh khối tế bào vi sinh vật, oxy hoá chất thành sản phẩm cuối CO2 H2O, chuyển hoá Nitơ dạng hữu vơ thành dạng khí Nitơ ngồi mơi trường, tích tụ P H o thể tế bào…Quá trình loại bỏ Nitơ dư thừa nước hồ diễn chủ yếu C q trình amon hố, nitrat hố, phản nitrat hố Trong đó, nitrat hố q hi trình hiếu khí, NH4+ oxy hố thành nitrit NO2-, sau nitrit NO2- in M chuyển hố thành nitrat NO3-, biến đổi thực vi khuẩn h Nitrosomonas Nitrobacter Tiếp nitrit, nitrat chuyển thành Nitơ phân tử phát ity C tán vào khơng khí nhờ tác dụng vi khuẩn phản Nitrat hoá Ngày nay, việc ứng dụng chế phẩm vi sinh vật để xử lý nước hồ bị ô U ni nhiễm sử dụng ngày phổ biến Khác với phương pháp vật lý, hoá lý… ve việc bổ sung chế phẩm vi sinh vào hồ giúp tăng cường khả phục hồi rs thúc đẩy trình tự làm hệ sinh thái hồ Do vậy, phương ity pháp có tính ổn định cao hướng thân thiện với môi trường of Ngành công nghiệp chế biến thủy sản nước ta phát triển không ngừng Te năm gần ngành mũi nhọn việc thúc đẩy phát triển ch kinh tế nước nhà, mang lại nhiều lợi nhuận kinh tế cho đất nước, tạo l no nhiều công ăn việc làm cho người dân … Tuy nhiên, bên cạnh mặt tích cực og ấy, cịn nhiều cơng ty, nhà máy xí nghiệp chế biến thủy hải sản nước ta y chưa có đầu tư vận hành hệ thống xử lý nước thải; nước thải chế biến thủy sản thải với lượng lớn ngồi mơi trường, gây nhiễm môi trường nghiêm trọng, đặc biệt môi trường nước Chính để khắc phục tình trạng nhiễm có nhiều biện pháp xử lý khác nhằm hạn chế giảm bớt hàm lượng chất thải hữu có chứa nitơ hệ thống xử lý nước thải trước nước thải Và phương pháp sử dụng phổ biến xử lý phương pháp sinh học để xử lý nước thải chế biến thủy sản, với việc bổ sung vi sinh vật 1  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     phân lập nuôi cấy từ bên vào hệ thống xử lý nước thải nhằm tăng cường hiệu xử lý trước nước thải Dựa vào điểm này, nên em định chọn đề tài “Tìm hiểu vi khuẩn nitrat hoá: Nitrosomonas Nitrobacter, phương pháp tăng sinh, phân lập, xác định hoạt tính ứng dụng chúng việc xử lý nước thải” với mục đích biết rõ vi khuẩn nitrat hố, q trình tăng sinh, phân lập chủng vi khuẩn nitrate hóa, khả xử lý nitơ từ nguồn nước thải H o Tình hình nghiên cứu: C hi 2.1 Trên giới: M Sự phân lập vi khuẩn nitrate hóa mơi trường ni cấy khiết in h thực thành công Winogradsky (1890) Sự thành công ity C ông biết đến vài năm trước trình nitrate hóa tìm sinh vật sống thực (Schloesing & Muntz, 1877) cố gắng ni U Frankland cộng (1890) để phân lập sinh vật ve phương pháp vi khuẩn học thường dùng gặp thất bại ity rs Năm 1950, phương pháp cải tiến từ phương pháp Winogradsky, Jane Meiklejohn thành công việc phân lập chủng Nitrosomonas europaea of từ nuôi cấy khiết Và nghiên cứu này, bà tìm Te mơi trường thích hợp (có bổ sung thành phần vi lượng cần thiết) để trì hoạt ch tính chủng vi khuẩn nitrate hóa (qua nhiều lần cấy chuyển mơi trường để l no tăng sinh mà khơng bị hoạt tính ban đầu bà vấp phải bắt đầu og nghiên cứu) Năm 1960, Watson cộng mở kỉ nguyên y việc phân lập nuôi cấy loại vi khuẩn này, họ phát đặt tên cho 16 chủng vi khuẩn oxi hóa NH3 khác Năm 1968, S.Soriano N.Walker thành công việc phân lập tinh Nitrosomonas spp.và Nitrosocystis spp việc sử dụng môi trường agar tinh chế phương pháp thu nhận tập đoàn với pipet mao quản thủy tinh hoạt động máy vi thao tác đơn trước mô tả Soriano (1935) 2  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     2.2 Tại Việt Nam: Trần Liên Hà, Phạm Tuấn Anh, Nguyễn Thị Thanh (2007) phân lập chủng vi khuẩn nitrate hóa ứng dụng vào xử lý nước hồ bị nhiễm Hồng Phương Hịa, Trần Văn Nhị, Phạm Việt Cường, Nguyễn Thị Kim Cúc (2008) phân lập chủng vi khuẩn nitrate hóa từ nước lợ nuôi tôm ứng dụng xử lý nitơ ao nước ni tơm H o Mục đích nghiên cứu: C hi Tìm hiểu q trình nitrat hố yếu tố ảnh hưởng đến trình M Qui trình tăng sinh, phân lập, cách xác định hoạt tính vi khuẩn in h Nitrosomonas spp Nitrobacter spp C ity Biết phương pháp định lượng nitrite amoni mẫu nước thải rs ve Nhiệm vụ nghiên cứu ni U Tìm hiểu ứng dụng vi khuẩn nitrat hoá nghành cơng nghiệp ity Tìm hiểu qui trình tăng sinh, phân lập, xác định hoạt tính vi khuẩn Nitrosomonas spp Nitrobacterspp có nguồn gốc từ mẫu nước thải of ch Te Tìm hiểu ứng dụng vi khuẩn nitrat hố nghành cơng nghiệp y og l no 3  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M CHƯƠNG 1: ity C ity rs ve ni U TỔNG QUAN TÀI LIỆU of ch Te y og l no 4  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     1.1 Những ảnh hưởng chất thải có chất nitơ đến mơi trường sống nước thải: Sự diện chất thải có chất nitơ chất thải có chứa nitơ nước thải cuối hệ thống nước thải nhà máy hay xí nghiệp thải ra, tác động bất lợi gây nhiễm đến chất lượng nguồn nước tiếp nhận (các nguồn nước mặt như: sông, suối, ao, hồ…) Nguồn gốc H chất thải có chất nitơ gây nhiễm nguồn nước nhận ion NH4+, o NO2- NO3- Những tác động gây ô nhiễm quan trọng có liên quan tới C diện chất thải có chất nitơ bao gồm: cạn kiệt oxi hịa tan hi (DO), độc tính (Toxicity), thiếu oxi nước (Eutrophications) làm M h in khả vận hành oxi máu (Methemoglobinemia) C Để giảm bớt ảnh hưởng bất lợi chất thải có chất nitơ ity cho nguồn nước tiếp nhận, hệ thống xử lý nước thải (Hệ thống bùn hoạt tính) U phải đảm bảo yêu cầu xử lý giảm lượng chất thải có chất nitơ xuống ve ni mức cho phép tiêu chuẩn xả thải nước thải đầu hệ thống xử lý nước thải Hệ thống xử lý nước thải (Hệ thống bùn hoạt tính) phải đảm rs bảo q trình oxi hóa nitơ (nitrify) trình khử nitơ (denitrify) chất thải ity có chất nitơ xảy hồn tất trình hoạt động hệ thống Yêu cầu of q trình nitrate hóa (nitrification) thường đưa giới hạn thải Te NH3 yêu cầu trình phản nitrate (denitrification) thường đưa ch giới hạn Tổng nitơ hay Tổng nitơ Kjeldahl (TKN) og l no 1.1.1 Sự cạn kiệt oxi hòa tan (DO): y Việc thải chất thải có chất nitơ vào nguồn nước nhận kết cạn kiệt nguồn oxi hòa tan nguồn nước nhận Sự cạn kiệt xảy thơng qua tiêu thụ oxi hịa tan hoạt động vi khuẩn Đầu tiên, NH4+ oxi hóa thành NO2- NO2- oxi hóa thành NO3bên nguồn nước tiếp nhận Q trình oxi hóa ion xảy oxi hòa tan di chuyển từ nguồn nước tiếp nhận vào vi khuẩn gia tăng thêm NH4+ NO2- Tiếp theo, NH4+, NO2- NO3- đáp ứng nguồn nitơ dinh dưỡng cho 5  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     tăng trưởng thực vật sống nước, chủ yếu loài tảo Khi thực vật chết đi, oxi hòa tan di chuyển từ nguồn nước tiếp nhận vào vi khuẩn để phân hủy thực vật chết + O2 + + O2 - NO3- NO2 NH4 1.1.2 Độc tính (Toxicity): H o Ba ion có chất nitơ (NH4+, NO2- & NO3-) độc chất cho C hi sống loài thủy sinh vật, đặc biệt cá Những ion NH4+ NO2- in M vô độc Và NO2- độc loại ion có chất nitơ h Mặc dù NH4+ nguồn dinh dưỡng nitơ ưa thích cho phần lớn sinh vật sống thủy sinh vật ity C sống, NH4+ biến đổi thành NH3 với tăng lên pH gây độc cho U ve ni 1.1.3 Sự thiếu oxi nước (Eutrophication): Trong phosphate (PO42-) nguồn gốc yếu thiếu oxi rs nhiễm nước ity nước chất thải có chất nitơ góp phần quan trọng cho vấn đề ô of Te Sự thiếu oxi nước nói đến thải chất dinh dưỡng thực ch vật (chủ yếu là: phốt nitơ) vào nước (như: hồ ao) Sự diện l no chất dinh dưỡng kích thích tăng trưởng nhanh chóng hay hoa thực vật thủy sinh, bao gồm tảo Khi thực vật thủy sinh già og chết đi, xác chúng làm cho nguồn nước thiếu oxi trình hoạt động y phân hủy hiếu khí vi sinh vật diễn Sự thiếu oxi nước dẫn đến lão hóa nhanh chóng nguồn nước chúng nhiều oxi cho phân hủy Và tích lũy xác thực vật thủy sinh ngày nhiều dẫn đến khả phân hủy nguồn nước bị giảm đến mức chúng phân hủy nữa, khơng tự làm dẫn đến nguồn nước bị ô nhiễm 6  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     1.1.4 Sự làm khả vận hành oxi máu (Methemoglobinemia): Từ “Methemoglobinemia” hay “Hội chứng da xanh trẻ em” nói đến bệnh đứa trẻ nhỏ (dưới tháng tuổi) ăn uống phải nước ngầm nhiễm bẩn NO3- Khi đứa bé ăn uống thứ làm từ nước ngầm bị nhiễm bẩn NO3- ion dễ dàng biến đổi thành NO2- đường tiêu hóa đứa bé Ion NO2- xâm nhập vào hệ tuần hoàn đứa trẻ H nhanh chóng liên kết với Fe nhân Hemoglobin hay tế bào hồng o cầu C hi Sự diện NO2- nhân ngăn cản Hemoglobin thu oxi M qua phổi đứa trẻ Sự thiếu oxi thể đứa trẻ dẫn đến da đứa h in trẻ trở nên xanh xao, có thuật ngữ “Blue baby syndrome” Nếu thiếu oxi ity C não đứa trẻ, chứng liệt hay chết xuất Methemoglobinemia thường xuất vùng nông thôn, nơi mà nước ni U dùng để uống thu từ nước ngầm Methemoglobinemia khơng có dấu hiệu để ve cảnh báo xuất với người trưởng thành, rs độc nhiều với đứa trẻ sơ sinh pH thể chúng thấp ity trọng lượng thể chúng thấp so sánh với người trưởng thành Và Te lứa tuổi of ion NO3- nồng độ cao làm tăng nguy gây ung thư dày ch 1.2 Chu trình nitơ nước thải (The Wastewater Nitrogen Cycle): y og l no 7  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M ity C ni U ity rs ve Hình 1.1: Chu trình nitơ nước thải of Có nhiều hợp chất có chất nitơ tồn môi trường sống hệ thống xử lý nước thải Phần lớn nitơ tìm thấy mơi trường sống tồn Te dạng nitơ phân tử (N2) bầu khí (chúng chiếm tới 76% ch bầu khí so với khí khác) l no og Mặc dù cấu thành không nhiều nitơ sinh khối so với carbon hay oxi nitơ yếu tố thiết yếu tất sống sinh vật Nó kết hợp y chặt chẽ nguyên liệu tế bào dùng cho tăng trưởng, tạo enzyme thông tin di truyền học Tuy nhiên, nitơ phân tử cấu tạo từ nguyên tử nitơ nối với dây nối N N, khó để hầu hết sinh vật bẻ gãy May thay, nitơ phân tử tạo sẵn có cho sống sinh vật mà liên kết bị bẻ gãy nhóm vi khuẩn cố định lại hay biến đổi thành NH4+ 8  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     Những vi khuẩn biến đổi nitơ phân tử thành NH4+ vi khuẩn cố định nitơ Những vi khuẩn sống tự đất xung quanh rễ thực vật hay tăng trưởng cộng sinh rễ họ đậu Sự cố định nitơ tức chuyển đổi nitơ phân tử thành NH4+, hồn thành enzyme nitrogenase tìm thấy vi khuẩn cố định nitơ Trước sử dụng phân bón nitơ lan rộng, thực vật tăng trưởng nốt sần H hay họ đậu cung cấp nitơ cho đất Ví dụ họ đậu bao gồm: Cỏ o linh lăng, Cỏ ba Đậu nành C hi Một vài loài tảo sử dụng nitơ phân tử để sản xuất amino acid M protein Tảo lấy nitơ phân tử từ khơng khí đồng hóa chúng thành phân h in tử hữu Cuối cùng, phân tử hữu với nitơ liên kết thành cấu trúc C chúng tiêu thụ suốt chiều dài chuỗi thức ăn; tảo ity tiêu thụ dạng sống cao ni U Sự di chuyển nitơ thay đổi trạng thái oxi hóa từ ve khơng khí sang sinh vật sống đến hệ thống xử lý nước thải (Hệ thống bùn hoạt rs tính) trở lại vào khơng khí chu trình nitơ nước thải Chu trình ity liên kết với hợp chất có chất nitơ then chốt liên tiếp như: nitơ phân of tử (N2), amino acid, protein, urea, NH4+, NH3, NO2- NO3- Trong đó, amino acid ch NO3- dạng vô nitơ Te protein dạng hữu nitơ; nitơ phân tử (N2), NH4+, NH3, NO2- l no Sự sản sinh NO2- NO3- hệ thống cống rãnh thấy Những og điều kiện hệ thống cống rãnh không phù hợp cho tạo hay q trình y nitrate hóa ion Những điều kiện bất lợi hệ thống cống rãnh ngăn cản q trình nitrate hóa bao gồm: thiếu oxi thích hợp, quần thể vi khuẩn nitrate hóa nhỏ thời gian nước giữ lại ngắn Tuy nhiên, lượng lớn NO2và NO3- tìm thấy hệ thống cống rãnh chúng thải từ nguồn nước thải công nghiệp có ion này, nước thải nhà máy thép Những amino acid protein mô thực vật, rễ, hạt từ thịt vật nuôi thải trực tiếp vào hệ thống cống rãnh (rác vứt bỏ đi, nước thải chế 9  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     Bước đầu tìm hiểu tổng quan q trình nitrat hố, vi khuẩn tham gia trực tiếp đến q trình nitrat hố, chế hoạt động vi khuẩn nitrat hoá.  Đi sâu vào tìm hiểu hai giống vi khuẩn có mối quan hệ mật thiết với nhau: Nitrosomonas Nitrobacter Đầu tiên, NH4+ chuyển hóa thành NO2- vi khuẩn Nitrosomonas, sau vi khuẩn Nitrobacter chuyển hóa NO2- thành NO3- NO3- thực vật thủy sinh sử dụng nguồn dinh dưỡng H bị chuyển hóa tiếp thành khí nitơ (N2) qua hoạt động vi khuẩn o yếm khí Pseudomonas… C hi Tìm hiểu trình tăng sinh, phân lập, đồng thời xác định hoạt tính vi in M khuẩn Nitrosomonas Nitrobacter h Với tình trạng nhiễm nước thải nay, việc ứng dụng giống vi khuẩn ity C nitrat hoá lựa chọn đắn hàng đầu cho ngành thuỷ sản Việt Nam Tuy nhiên, xét tồn diện chu trình nitơ, tồn vi khuẩn nitrat hố ni U qui trình xử lý từ NH4+ đến NO3-, qui trình hồn thiện có   ity   rs ve góp mặt nhiều loại vi khuẩn khác of ch   Te   l no og   y           64  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tài liệu Tiếng Việt: [1] Trần Liên Hà, Phạm Tuấn Anh, Nguyễn Thị Thanh (2007) Phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn nitrat hóa để ứng dụng xử lý nước hồ ô nhiễm Tạp chí Khoa Học Và Công Nghệ Tập 45, số 3, 2007 Tr.95 – 100 [2] Hoàng Phương Hòa, Trần Văn Nhị, Phạm Việt Cường, Nguyễn Thị Kim Cúc H (2008) Đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn nitrat hóa phân lập từ nước lợ o ni tơm Qng Bình Hà Tĩnh Khoa Học Công Nghệ Nông Nghiệp Và C hi Phát Triển Nông Thôn – Số – Tháng 2/2008 M [3]Egorov Thực tập vi sinh vật học NXB Đại học quốc gia Moscow in [4] Nguyễn Văn Phước (2005) Thí nghiệm Hóa Kỹ Thuật Mơi Trường – Phần I: h Phân tích chất lượng nước, NXB ĐHQG TP.Hồ Chí Minh C Hà Nội Bollmann, Elizabeth French, and ve [6]Annette ni Tài liệu Tiếng Anh: U B ity [5] TS Trần Cẩm Vân (2001) Giáo trình Vi sinh vật học mơi trường, NXB ĐHQG Hendrikus J.Laanbroek ity rs (2011).Isolation, Cultivation, and Characterization of Ammonia-Oxidizing Bacteria and Archaea Adapted to low Ammonium Concentrations Methods in of Enzymology, Volume 486 ch and Wastewater, 20th Edition – Method 4500-N Te [7] AWWA/APHA/WEF (1999) Standard Methods for the Examination of Water og McGraw−HillCompanies l no [8]Benson (2001) Microbiological Applications Lab Manual Eighth Edition The y [9] Eva Spieck and Andre Lipski (2011).Cultivation, Growth Physiology, and Chemotaxonomy of Nitrite-Oxidizing Bacteria Methods in Enzymology, Volume 486 [10] Gray NF (2004) BIOLOGY OF WASTEWATER TREATMENT (2nd Edition) Imperial College Press, London 1439p [11] Jane Meiklejohn (1950) The Isolation of Nitrosomonas europaea in Pure Culture Journal of General Microbiology, Vol.4, No.2 65  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     [12]Jane Meiklejohn (1953) Iron and the Nitrifying Bacteria J.gen.Microbiol 8, 58 – 65 [13]Kh.Elbanna1,2, R.M.El-Shahawy1, K.M.Atalla1 (2011) A new simple method for the enumeration of nitrifying bacteria in different environments PLANT SOIL ENVIRON., 58, 2012 (1): 49 – 53 [14] Koops HP, Purkhold U, Pommerening-röser A, Timmermann G Wagner M (2006) The Lithoautotrophic Ammonia-Oxidizing Bacteria in The Prokaryotes T H 5, Third Edition Springer o C [15]Martin Hesselsøe and Jan Sørensen (1998) Microcolony formation as a hi viability index for ammonia-oxidizing bacteria: Nitrosomonas europaea and in M Nitrosospira sp FEMS Microbiology Ecology 28 (1999) 383 – 391 [16]Michael H.Gerardi (2002) Nitrification and Denitrification in the Activated h ity Magazine Series C Sludge Process Wastewater Microbiology Series, Environmental Protection U [17] Patrick Chain, Jane Lamerdin, Frank Larimer, Warren Regala, Victoria Lao, ve ni Miriam Land, Loren Hauser, Alan Hooper, Martin Klotz, Jeanette Norton, Luis Sayavedra-Soto, Dave Arciero, Norman Hommes, Mark Whittaker and Daniel Arp rs ity (2003) Complete Genome Sequence of the Ammonia-Oxidizing Bacterium and Obligate Chemolithoautotroph Nitrosomonas europaea Journal of Bacteriology, of May 2003, p 2759 – 2773 Te [18]R.F.Lewis and D.Pramer (1958) Isolation of Nitrosomonas in Pure Culture ch Paper of the Journal Series, New Jersey Agricultural Experiment Station, Rutgers, l no The State University, Department of Agricultural Microbiology, New Brunswick, og N.J y [19] Speck E and Bock E.(2005) The Lithoautotrophic Nitrite-Oxidizing Bacteria Bergey manual of systematic bacteriology, Springer 2005 [20] S.Soriano and N.Walker(1968) Isolation of Ammonia-oxidizing Autotrophic Bacteria Soriano, S & Walker, N (1968) J appl Bact 31, 493 – 497 [21] Verhagen.F.J.M., and Laanbroek.H.J.(1991) Competition for ammonium between nitrifying and heterotrophic bacteria in dual energy limited chemostats Appl Environ Microbiol.57, 3255 – 3263 66  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     C Tài liệu Internet: [22]http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/phuongphapthucnghiemdinhtenvk03.htm [23]http://www.agroviet.gov.vn/Pages/news_detail.aspx?NewsId=14063 [24]http://vanban.chinhphu.vn/ THÔNG TƯ Số: 12/2010/TT-BNNPTNT ngày 11.03.2010 Ban hành “Danh mục bổ sung sản phẩm xử lý, cải tạo môi trường nuôi trồng thuỷ sản phép lưu hành Việt Nam” H o   C hi   h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 67  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH         H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 68  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M ity   of ch Te   ity   rs   ve ni U   C   y og l no 69  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 70  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M ity C rs ve ni   U   ity   of ch Te y og l no 71  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 72  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 73  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN     ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH         H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 74  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN   ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH   H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 75  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN   ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH   H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 76  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN   ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH   H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 77  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN   ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP – GVHD: ThS HUỲNH VĂN THÀNH     H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of ch Te y og l no 78  SVTH: HỒ THỊ HẠNH NGUYÊN