Đồ án tốt nghiệp thử nghiệm quy trình sản xuất sinh khối bào tử vi nấm phân hủy cellulose và protein

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP HCM o H hi C ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP h in M ity C THỬ NGHIỆM QUY TRÌNH SẢN XUẤT SINH KHỐI BÀO TỬ VI NẤM PHÂN HUỶ CELLULOSE VÀ PROTEIN ve ni U Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC ity rs Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC of Te Giảng viên hướng dẫn : Ts Nguyễn Hoài Hương Lớp: 11HSH02 lo no MSSV: 1191111022 : Kha Tôn Huy ch Sinh viên thực gy TP Hồ Chí Minh, 2013 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết của đề tài o H Trong những năm gần đây, cùng với xu hướng phát triển một nền nông nghiệp sạch và bền vững, các loại phân bón bảo vệ thực vật hữu hoặc có nguồn gốc sinh hi C học được đề cao, tập trung nghiên cứu và phát triển Trong đó, phổ biến và hiệu quả nhất là việc sử dụng chế phẩm sinh học có chứa vi nấm Trichoderma sp., là loại vi M nấm có tác dụng cao việc thúc đẩy quá trình phân huỷ chất hữu cơ, h in Ngày nay, theo sự phát triển của khoa học, công nghệ sinh học, việc sử dụng chế phẩm Trichoderma sp ủ phân hữu để bón cho trồng sẽ giúp tăng cường ity C hệ vi sinh vật có ích đất, phân giải nhanh các chất hữu thành dạng dễ tiêu, phân huỷ cellulose thành các acid mùn, cung cấp dinh dưỡng cho cây, phòng một số ni U bệnh hại cho trồng, chất lượng phân được cao Các chế phẩm sinh học chứa nấm Trichoderma sp này còn là chế phẩm sạch, ve tạo các sản phẩm trồng an toàn cho người tiêu dùng, không làm mất quần rs thể thiên địch có ích tự nhiên, không gây ảnh hưởng đến sức khoẻ người ity Vì những lý trên, nên em chọn đề tài: “Thử nghiệm quy trình sản xuất sinh khối bào tử vi nấm phân huỷ cellulose và protein” of Mục đích nghiên cứu Te Sản xuất sinh khối bào tử vi nấm Trichoderma sp và Aspergillus sp SD4 ch Mục tiêu nghiên cứu no Thử nghiệm quy trình lên men thể rắn thu bào tử vi nấm Trichoderma sp và lo Aspergillus sp SD4 phân huỷ cellulose và protein gy Nhiệm vụ nghiên cứu Xác định hoạt tính enzyme ngoại bào Xác định độ ẩm nguyên liệu Lên men thu sinh khối bào tử Kiểm tra chất lượng thu được o H Phương pháp nghiên cứu 5.1 Phương pháp luận hi C Trước bắt đầu thực hiện đồ án, đã tham khảo các nghiên cứu từ trước đến về nấm Trichoderma sp cũng các ứng dụng và lợi ích mà nó mang lại, và M đã chọn môi trường lên men xốp sản xuất bào tử Trichoderma sp và Aspergillus h in sp SD4 để thực hiện đồ án C 5.2 Phương pháp xử lý số liệu ity Sử dụng phần mềm Excel để tính toán và vẽ đồ thị biểu diễn ni U 5.3 Các kết quả đạt được Xác định quy trình sản xuất bào tử Trichoderma sp và Aspergillus sp SD4 ve Chế phẩm bào tử Trichoderma sp đạt mật độ 3,63.107 ± 1,28.106 (bào tử/g) và rs Aspergillus sp SD4 đạt mật độ 2,98.1011 ± 4,31.109 (bào tử/g) có khả nảy mầm ity tương đương giống gốc of 5.4 Kết cấu ĐATN Chương 3: Kết quả lo Chương 4: Kết luận và kiến nghị no Chương 2: Vật liệu và phương pháp ch Chương 1: Tổng quan về tài liệu Te Kết cấu ĐATN có chương gờm: gy CHƯƠNG 1: TỞNG QUAN TÀI LIỆU o H 1.1 Tổng quan về ủ compost 1.1.1 Khái niệm khoa học về ủ compost hi C h in M ity C ity rs ve ni U of lo no ch Te Hình 1.1 Chu trình ủ compost gy Ủ compost được hiểu là quá trình phân hủy sinh học hiếu khí các chất thải hữu được biến đổi thành các chất mùn ổn định hoạt động của các tổ chức có thể sống điều kiện tự nhiên hiện diện chất thải Các tổ chức này bao gồm các loại vi sinh vật, vi khuẩn, nấm, chất thải hữu được phân huỷ ban đầu từ sinh vật tiêu thụ bậc một vi khuẩn, nấm Quá trình diễn chủ yếu giống phân hủy tự nhiên, được tăng cường và tăng tốc bởi tối ưu hóa các điều kiện môi trường cho hoạt động của vi sinh vật o H Lịch sử quá trình ủ compost đã có từ rất lâu, từ khai sinh của nông hi C nghiệp hàng nghìn năm trước Công nguyên, ghi nhận tại Ai Cập từ 3000 năm trước Công nguyên là một quá trình xử lý chất thải nông nghiệp đầu tiên thế giới Người Trung Quốc đã ủ chất thải từ cách 4000 năm, người Nhật đã sử dụng M compost làm phân bón nông nghiệp từ nhiều thế kỷ Tuy nhiên đến năm 1943, h in quá trình ủ compost mới được nghiên cứu một cách khoa học và báo cáo bởi Giáo sư người Anh, Sir Albert Howard thực hiện tại Ấn Độ Đến đã có nhiều tài liệu viết C về quá trình ủ compost và nhiều mô hình công nghệ ủ compost quy mô lớn được phát ity triển thế giới Compost là sản phẩm giàu chất hữu và có hệ vi sinh vật dị U dưỡng phong phú, ngoài còn chứa các nguyên tố vi lượng có lợi cho đất và ni trồng Sản phẩm compost được sử dụng chủ yếu làm phân bón hữu nông ve nghiệp hay các mục đích cải tạo đất và cung cấp dinh dưỡng trồng Ngoài ra, compost còn được biết đến nhiều ứng dụng, là các sản phẩm sinh học rs việc xử lý ô nhiễm môi trường, hay các sản phẩm dinh dưỡng, chữa bệnh cho vật nuôi ity và trồng of Phương pháp ứng dụng vi sinh vật rất quan trọng quá trình ủ compost Te Thực tế, hệ vi sinh vật cần thiết cho quá trình ủ compost đã có sẵn vật liệu hữu cơ, tự thích nghi và phát triển theo từng giai đoạn của quá trình ủ compost Các thành ch phần bổ sung thông thường có thể là sản phẩm sau ủ compost hay các thành phần no giúp điều chỉnh dinh dưỡng (C/N) Việc bổ sung các chế phẩm có bản chất là vi sinh lo vật ngoại lai hay enzyme là không cần thiết mà có thể ủ compost thành công gy Kiểm soát tốt các điều kiện môi trường ảnh hưởng tới hoạt động của vi sinh vật chính là nhân tố quyết định sự thành công của quá trình ủ compost Kiểm soát tốt quá trình ủ compost cũng giúp giảm phát sinh mùi ô nhiễm và loại bỏ các mầm vi sinh vật gây bệnh Vì vậy các giải pháp kỹ thuật công nghệ ủ compost hiện đại đều hướng tới mục tiêu kiểm soát tối ưu các điều kiện môi trường cùng với khả vận hành thuận tiện o H Đặc điểm cần lưu ý đối với ủ compost từ chất thải rắn đô thị là phân loại để loại bỏ các kim loại nặng hay các hóa chất độc hại khác vì chúng cản trở quá trình chuyển hi C hóa và có nguy gây ô nhiễm cho sản phẩm compost 1.1.2 Mục đích của quá trình compost M Ổn định chất thải: các phản ứng sinh học xảy quá trình compost sẽ h in chuyển hoá các chất hữu dễ thối rửa sang dạng ổn định chủ yếu là các chất vô ít gây ô nhiễm môi trường thải đất hoặc nước C Làm mất hoạt tính vi sinh vật: nhiệt của chất thải sinh từ quá trình phân huỷ ity sinh học có thể đạt khoảng 50-60oC, đủ để làm mất hoạt tính của vi khuẩn gây bệnh, U virus có hại nếu nhiệt độ này được trì ít nhất ngày Do đó, các sản phẩm ve dưỡng cho đất ni của quá trình compost có thể loại bỏ an toàn đất sử dụng làm chất bổ sung dinh rs Thu hồi dinh dưỡng và cải tạo đất: các chất dinh dưỡng (N, P, K) có chất ity thải ở dạng hữu phức tạp, trồng khó hấp thụ Sau quá trình compost các chất này được chuyển hoá thành các chất vô NO3- và PO4 thích hợp cho trồng of Sử dụng sản phẩm của quá trình chế biến compost bổ sung dinh dưỡng vô tồn tại Te chủ yếu ở dạng không tan Thêm vào đó, lớp đất trồng cũng được cải tiến nên giúp rễ phát triển tốt ch Tăng khả kháng bệnh cho trồng: đã có nhiều nghiên cứu thế giới no chứng minh cho khả kháng bệnh của được trồng đất có bón compost lo Cho đến nay, ở Việt Nam compost chưa được ứng dụng rộng rãi nộng nghiệp gy Với hàm lượng dinh dưỡng cao dễ hấp thụ và chũng loại vi sinh vật đa dạng, phân hữu không những làm tăng suất trồng mà còn có khả kháng bệnh cao 1.1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến ủ compost Hiệu quả của quá trình ủ compost phụ thuộc vào nhóm các tổ chức cư ngụ và o H làm ổn định chất thải hữu Do đó quá trình ủ sẽ không đạt kết quả mong muốn mà nguyên nhân chính là sự mất cân bằng về thành phần hoá học và điều hi C kiện lý học quá trình ủ Chính vì vậy cần chú ý đến các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình ủ compost nhiệt độ, độ ẩm, pH, vi sinh vật, oxy, tỷ lệ C/N và các cấu trúc chất thải M h in 1.1.3.1 Các yếu tố vật lý Các yếu tố vật lý ảnh hưởng đến quá trình ủ gồm: nhiệt độ, độ ẩm, kích thước ity C nguyên liệu, độ rỗng, thổi khí a Nhiệt độ ni U Nhiệt độ là một yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hoạt tính của vi sinh vật quá trình chế biến phân hữu và cũng là một các thông số giám sát và điều ve khiển quá trình ủ CTR Trong luống ủ, nhiệt độ cần trì là 55-65oC , vì ở nhiệt độ rs này, quá trình chế biến phân hiểu quả và mầm bệnh bị tiêu diệt Khi nhiệt độ tăng ity lên ngưỡng này sẽ ức chế hoạt động của VSV Ở nhiệt độ thấp hơn, phân hữu không đạt tiêu chuẩn về mầm bệnh Nhiệt độ luống ủ có thể điều chỉnh bằng of nhiều cách khác hiệu chỉnh tốc độ thổi khí và độ ẩm, cô lập khối ủ với môi ch b Độ ẩm Te trường bên ngoài bằng cách che phủ hợp lý no Độ ẩm là một yếu tố cần thiết cho hoạt động của VSV quá trình chế biến phân hữu Vì nước cần thiết cho quá trình hoà tan chất dinh dưỡng vào nguyên lo sinh chất của tế bào gy Độ ẩm tối ưu cho quá trình ủ phân CTR nằm khoảng 50-60oC Các VSV đóng vai trò quyết định quá trình phân huỷ CTR thường tập trung tại lớp nước mỏng bề mặt của phân tử CTR Nếu độ ẩm quá nhỏ (65%) thì quá trình phân huỷ sẽ chậm lại, sẽ chuyển sang chế độ phân huỷ kỵ khí vì quá trình thổi khí bị cản trở hiện tưởng bít kín các khe rỗng không cho không khí qua, gây mùi hôi, rò rĩ chất dinh dưỡng và lan truyền o H VSV gây bệnh hi C Độ ẩm ảnh hưởng đến quá trình thay đổi nhiệt độ quá trình ủ vì nước có nhiệt dung riêng cao tất cả các vật liệu khác M Trong trường hợp độ ẩm của khối ủ thấp, có thể điều chỉnh bằng cách thêm h in nước vào Còn độ ẩm của khối ủ cao có thể điều chỉnh bằng cách trộn với vật liệu độn có độ ẩm thấp mạt cưa, rơm rạ… C Độ ẩm của phân bắc, bùn, phân động vật thường cao giá trị tối ưu, đó ity cần bổ sung thêm các chất phụ gia để giảm độ ẩm đến giá trị cần thiết Đối với hệ thống làm compost vận hành liên tục, độ ẩm có thể được khống chế bằng cách tuần ni U hoàn sản phẩm compost ve c Kích thước nguyên liệu rs Kích thước nguyên liệu ảnh hưởng rất lớn đến tốc độ phân huỷ Quá trình phân ity huỷ hiếu khí xảy bề mặt hạt, hạt có kích thước nhỏ sẽ có tổng diện tích bề mặt lớn nên sẽ tăng sự tiếp xúc với oxy, gia tăng vận tốc phân huỷ Tuy nhiên, nếu kích of thước hạt quá nhỏ và hạn chế sự lưu thông khí đống ủ, điều này sẽ làm giảm Te oxy cần thiết cho các VSV đống ủ và giảm mức độ hoạt động của VSV Ngược lại, hạt có kích thước quá lớn sẽ có độ xốp cao và tạo các rãnh khí làm cho sự phân ch bố khí không đều, không có lợi cho quá trình chế biến phân hữu no Đường kính hạt tối ưu cho quá trình chế biến khoảng 3-50mm Kích thước hạt lo tối ưu có thể đạt được bằng nhiều cách cắt, nghiền và sàng vật liệu thô ban đầu gy d Độ rỗng Độ rỗng của khối vật liệu ủ là một yếu tố quan trọng quá trình chế biến o H phân hữu Độ rỗng tối ưu sẽ thay đổi tuỳ loại vật liệu chế biến phân Thông thường, để quá trình chế biến diễn tốt khoảng 35-60%, tối ưu là 32-36% hi C Độ rỗng của CRT ảnh hưởng trực tiếp đến quá trình cung cấp oxy cần thiết cho sự trao đổi chất, hô hấp của VSV hiếu khí và sự oxy hoá các phân tử hữu hiện diện M lớp vật liệu ủ Độ rỗng thấp sẽ hạn chế sự vận chuyển oxy, nên hạn chế sự giải h in phóng nhiệt và làm tăng nhiệt độ khối ủ Ngược lại, độ rỗng cao có thể dẫn đến nhiệt độ khối ủ thấp, mầm bệnh không bị tiêu diệt trộn hợp lý ity C Độ rỗng có thể được điều chỉnh bằng cách sử dụng vật liệu cấu trúc với tỷ lệ ni U e Thổi khí Khối ủ được cung cấp không khí từ môi trường xung quanh để VSV sử dụng ve cho sự phân huỷ chất hữu cơ, cũng làm bay nước và giải phóng nhiệt Nếu ity mùi môi rs khí không được cung cấp đầy đủ thì khối ủ có thể có những vùng kỵ khí, gây of Lượng khí cung cấp cho khối phân hữu có thể được thực hiện bằng cách: đảo trộn, sử dụng ống khí, đổ chất thải từ tầng lưu chất cao xuống thấp, thổi khí Te Quá trình đảo trộn cung cấp khí không đủ theo cân bằng tỷ lệ Điều kiện hiếu ch khí thoả mãn đối với lớp cùng, các lớp bên hoạt động môi trường no tuỳ tiện hoặc kỵ khí Do đó, tốc độ phân huỷ giảm và thời gian cần thiết để quá trình ủ phân hoàn tất bị kéo dài lo gy Cấp khí bằng phương pháp thổi khí đạt hiệu quả phân huỷ cao nhất Tuy nhiên, lưu lượng khí phải khống chế thích hợp Nếu cấp quá nhiều khí sẽ dẫn đến chi phí quá cao và gây mất nhiệt của khối phân, kéo theo sản phẩm không đảm bảo an toàn vì có thể chứa VSV gây bệnh Khi pH của môi trường khối phân lớn 7, cùng với quá trình thổi khí sẽ làm thất thoát nito dưới dạng NH3 Trái lại, nếu thổi khí ít quá môi trường bên khối phân trở thành kỵ khí Vận tốc thổi khí cho quá trình ủ compost thường khoảng 5-10m3 khí/ tấn nguyên liệu/ giờ o H 1.1.3.2 Các yếu tố hoá sinh hi C a Tỷ lệ C/N Có rất nhiều nguyên tố ảnh hưởng đến quá trình phân huỷ VSV, đó C M và N là cần thiết nhất, tỷ lệ C/N là thông số dinh dưỡng quan trọng nhất, quan trọng h in kế tiếp là nguyên tố photpho, lưu huỳnh, canxi Các nguyên tố vi lượng khác cũng đóng vai trò quan trọng trao đổi chất tế bào C Khoảng 20-40% của chất thải hữu cần thiết cho quá trình đồng hoá thành tế ity bào mới, phần còn lại chuyển hoá thành CO2, C cung cấp lượng và sinh khối U bản để tạo khoảng 50% khối lượng tế bào VSV N là thành phần chủ yếu của ve động của tế bào ni protein, axit nucleic, axit amin, enzyme, co-enzyme cần thiết cho sự phát triển và hoạt rs Tỷ lệ C/N tối ưu cho quá trình ủ phân khoảng 30:1 Ở tỷ lệ thấp hơn, N sẽ thừa ity và sinh khí NH3 gây mùi khai Ở mức tỷ lệ cao hạn chế sự phất triển của VSV thiếu N Chúng phải trải qua nhiều chu kỳ chuyển hoá, oxy hoá phần dư C of cho đến đạt tỷ lệ C/N thích hợp Do đó, thời gian cần thiết cho quá trình làm phân Te bị kéo dài và sản phầm thu được chứa ít mùn Theo nghiên cứu cho thấy nếu tỷ lệ C/N ban đầu là 20, thời gian cần thiết cho quá trình làm phân là 12 ngày, nếu tỷ ch lệ này dao động khoảng 20-50, thời gian cần thiết là 14 ngày và nếu tỷ lệ C/N no là 78, thời gian cần thiết sẽ là 21 ngày Mặc dù vậy, tỷ lệ này cũng có thể được hiệu gy tới các vật liệu ủ có hàm lượng lignin cao lo chỉnh theo giá trị sinh học của vật liệu ủ, đó quan trọng nhất là cần quan tâm Khi bắt đầu quá trình ủ phân, tỷ lệ C/N là 30:1 và giảm dần còn 15:1 ở các sản phẩm cuối cùng 2/3 C được giải phóng tạo CO2 các hợp chất này bị phân huỷ bởi VSV Với độ ẩm là 72% Đầu tiên ta kiểm tra độ ẩm nguyên liệu là cám o H 3.2.1 Xác định độ ẩm nguyên liệu hi C 3.2.1.1 Kết quả đo được Khối Cốc+nắp Cốc+nắp Cốc Nắp Cốc Nắp Cốc nắp 22,101 41,154 21,461 38,051 22,033 35,514 ity lượng (g) Cốc+nắp C h in M Bảng 3.2 Khối lượng cốc chưa có mẫu và nắp trước sấy U Cốc+nắp ve ni Bảng 3.3 Khối lượng cốc và nắp sau sấy lần Cốc+nắp Cốc+nắp ity rs Khối 60,420 65,231 lượng (g) 62,865 of ch Te Bảng 3.4 Khối lượng cốc và nắp sau sấy lần no Cốc+nắp Cốc+nắp 60,412 65,223 62,862 lo Cốc+nắp lượng (g) 58 gy Khối Bảng 3.5 Khối lượng cốc và nắp sau sấy lần o H hi C Khối Cốc+nắp Cốc+nắp Cốc+nắp 60,400 65,217 62,861 lượng (g) h in M 3.2.1.2 Tính toán kết quả Dựa vào công thức ở phần 2.3.3 xác định độ ẩm nguyên liệu ta tính được kết C quả độ ẩm ở bảng dưới: ity ni U rs ve Bảng 3.6 Kết quả tính phầm trăm độ ẩm sấy lần ity 71,95 73,84 72,19 72,03 73,92 72,22 sấy lần 72,15 73,98 72,23 of trung bình của lần sấy 72,04 73,91 72,21 72,72 lo no ch Te % độ ẩm cốc % độ ẩm cốc % độ ẩm cốc % Độ ẩm trung bình của cốc sấy lần gy 59 3.2.2 Bào tử vi nấm thu được 3.2.2.1 Trichoderma sp o H hi C h in M ity C ity rs ve ni U of Hình 3.6 Bào tử Trichoderma sp Te Kết quả thu được bào tử Trichoderma sp mọc đầy bình tam giác lo no ch gy 60 3.2.2.2 Aspergillus sp SD4 o H hi C h in M ity C rs ve ni U ity Hình 3.7 Bào tử Aspergillus sp SD4 of lo no ch Te Kết quả thu được bào tử Aspergillus sp SD4 mọc đầy bình tam giác gy 61 3.3 Kiểm tra chất lượng bào tử thu được bằng phương pháp lên men xốp Sau đã thu được bào tử vi nấm bằng phương pháp lên men xốp, ta tiến hành o H kiểm tra chất lượng bào tử thu được bằng phương pháp đo mật độ quang 3.3.1 Đường chuẩn hi C Dựa vào đường chuẩn ta tính mật độ bào tử có Trichoderma sp và Aspergillus sp SD4 h in M C 0.7 y = 1E-06x + 0.0292 R² = 0.9804 ity 0.6 0.5 0.4 U OD OD 600 ni 0.3 0.2 0 rs ve 0.1 50000 100000 150000 200000 250000 300000 350000 400000 450000 ity bào tử/g of Hình 3.8 Đường chuẩn bào tử Trichoderma sp lo no ch Te gy 62 3.3.2 Tính toán kết quả 3.3.2.1 Trichoderma sp o H Trichoderma sp pha loãng lần (10-2) được kết quả bảng dưới Bảng 3.7 Kết quả và tính toán số liệu đo mật độ quang của Trichoderma sp hi C Trung bình h in 0,415 0,394 0,391 3,57.105 3,54.105 3,57.107 3,54.107 M Số lần lặp lại ml bao tử đo ở OD 600 (y) C (x) ity Bào tử/ml pha loãng 3,78.105 U đầu 3,78.107 3,63.107 ity rs Độ lệch chuẩn ve (x*1E2 (102)) ni Bào tử/ml mẫu ban 1,28.106 of lo no ch Te Kết quả = Trung bình ± Độ lệch chuẩn (bào tử/g) = 3,63.107 ± 1,28.106 (bào tử/g) gy 63 3.3.2.2 Aspergillus sp SD4 Aspergillus sp SD4 pha loãng lần (10-6) được kết quả bảng dưới o H Bảng 3.8 Kết quả và tính toán số liệu đo mật độ quang của Aspergillus sp SD4 hi C Trung bình Số ml bào tử M + dịch pha loãng h in OD 600 (y) C Bào tử/ml pha 4ml 0,257 0,3 0,33 2,23.105 2,65.105 2,94.105 3,02*1011 2,94*1011 bào tử)) rs Độ lệch chuẩn 2,98*1011 ve (x* 106*(4/số ml 2,97*1011 ni ban đầu U Bào tử/ml mẫu 3,5 ml + 0,5 ml ity loãng (x) 3ml + ml 4,31.109 ity of Kết quả = Trung bình ± Độ lệch chuẩn (bào tử/g) = 2,98.1011 ± 4,31.109 (bào tử/g) Te ch 3.3.3 Giá thành thành của sản phẩm Giá thành của sản phẩm được trình bày ở bảng 3.9 lo no Dựa vào giá của từng các loại nguyên liệu dùng để lên men để tính giá gy 64 Bảng 3.9 Giá thành của sản phẩm Số lượng 500g (VNĐ) dùng Cám 5000 21g 210 Trấu 10000 9g 180 NaNO3 49500 3g 297 K2HPO4 49500 1g 99 MgSO4 43736 1g 87,5 h in FeSO4 30800 0,1g Saccharose 52800 30g 3168 30800 0,5g 30,8 o H Giá bán cho STT Nguyên liệu hi C M C KCl ity Giá (VNĐ) Tổng giá thành 4078,3 ve ni U Bảng 3.10 So sánh giá thành sản phẩm Sản phẩm ity rs STT Mật độ bào tử 5×106 bào tử/gam Nolatri 107 bào tử /gam 11 55000 5,5 4078,3 3,7 3,63.107 ± 1,28.106 (bào tử/g) 2,98.1011 ± 4,31.109 65 4078,3 0,0004 gy (bào tử/g) lo Aspergillus sp SD4 55000 no Trichoderma sp (VND) ch 106 bào tử/g Te Bima Giá (VND) of Giá tính cho Sản phẩm Trichoderma sp và Aspergillus sp SD4 vừa lên men có giá tính ở 106 bào tử/g có giá thấp giá của các sản phẩm Bima và Nolatri có thị trường o H 3.4 Kiểm tra khả nảy mầm hi C 3.4.1 Trichoderma sp Ta thực hiện thí nghiệm và theo dõi liên tục ngày bảng dưới h in M Bảng 3.11 Khả nảy mầm của Trichoderma sp Đối chứng Thí nghiệm Ngày C Mặt trước Mặt trước Mặt sau Mặt sau ity ity rs ve ni U of ch Te lo no gy 66 o H hi C h in M Ngày Ngày Ngày C Thí nghiệm Ngày Đối chứng ity Hình 3.9 Đường kính khuẩn lạc nảy mầm của bào tử Trichoderma sp ve ni U ity rs Dựa vào bảng 3.11 và đồ thị hình 3.9 ta thấy: Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm chênh lệch of 1cm (đối chứng là 2,5 cm, thí nghiệm là 3,5 cm) 2cm (đối chứng là 6,5 cm, thí nghiệm là 4,5 cm) ch Te Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm chênh lệch Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm bằng là no cm lo Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm bằng là gy cm Như vậy bằng phương pháp lên men xốp ta có thể thu được bào tử Trichoderma sp có khả nảy mầm hầu không đổi so với bào tử gốc 67 3.4.2 Aspergillus sp SD4 Ta thực hiện thí nghiệm và theo dõi liên tục ngày bảng dưới o H Bảng 3.12 Khả nảy mầm của Aspergillus sp SD4 hi C Ngày Đối chứng Mặt trước Thí nghiệm Mặt trước Mặt sau Mặt sau h in M ity C ity rs ve ni U of Te lo no ch gy 68 o H hi C h in M Ngày Ngày Ngày C Thí nghiệm Ngày Đối chứng ity Hình 3.10 Đường kính khuẩn lạc nảy mầm của bào tử Aspergillus sp SD4 ve ni U ity rs Dựa vào bảng 3.12 và đồ thị hình 3.10 ta thấy: Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm gần bằng of (đối chứng là 1,4cm, thí nghiệm là 1,3cm) (đối chứng là 3,5 cm, thí nghiệm là 3cm) ch Te Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm gần bằng Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm bằng là no cm lo Sau ngày: khuẩn lạc đĩa đối chứng và đĩa thí nghiệm bằng là 7,5 gy cm Như vậy bằng phương pháp lên men xốp ta có thể thu được bào tử Aspergillus sp SD4 có khả nảy mầm hầu không đổi so với bào tử gốc 69 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận o H Trichoderma sp và Aspergillus sp SD4có hình thái khuẩn lạc và hình nấm đặc trưng cho các nấm thuộc giống Trichoderma sp và có hoạt tính phân huỷ cellulose hi C và protein Môi trường lên men thu bào tử Trichoderma sp đạt mật độ 3,63.107 ± 1,28.106 M (bào tử/g) và SD4 đạt mật độ 2,98.1011 ± 4,31.109 (bào tử/g), là môi trường dựa h in chất cám (độ ẩm 72%), bổ sung giá thể trấu với tỷ lệ trấu:cám là 4:7, độ ẩm 40% và bổ sung khoáng là môi trường Czapek C Bào tử Trichoderma sp và Aspergillus sp SD4 thu được bằng phương pháp lên ity men có khả nảy mầm tương đương giống gốc (thạch nghiêng) ni U 4.2 Kiến nghị ve Tối ưu hoá thành phần môi trường và điều kiện nuôi cấy (độ ẩm môi trường, độ ẩm không khí…) bằng quy hoạch thực nghiệm rs ity Tăng quy mô thí nghiệm, sử dụng các thiết bị khác of lo no ch Te gy 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu là sách o H Burgess LW., Knight TE., Tesoriero L., Phan HT., Diagnostic manual for plant Diseases in Vietnam Australian Centre for International Agricultural Research hi C Canberra 2008 Nguyễn Ngọc Tú, Nguyễn Cửu Thị Hương Giang, (1997) Bảo vệ trồng M bằng các chế phẩm từ vi nấm NXB Nông nghiệp TP.HCM h in Lê Hùng (2011) Hoàn thiện môi trường lên men xốp sản xuát bào tử ity nghệ TPHCM C Trichoderma T40 đối kháng nấm bệnh Rhizoctonia solani Đại học kỹ thuật công U Tài liệu là bài báo tạp chí ve ni Asran-Amal A., Abd-Elsalam KA , Omar MR., Aly AA Antagonistic potential of Trichoderma spp against Rhizoctonia solani and use of M13 microsatellite-primed ity Protection, 2005, 112 (6), 550–561 rs PCR to evaluate the antagonist genetic variation Journal of Plant Diseases and Benistez T., Rincosn AM., Limón MC., Codosn AC Biocontrol mechanisms of of Trichoderma strains INTERNATIONAL MICROBIOLOGY (2004) 7:249-260 Te Bailey B A & Lumsden R D., 1998 Direct effects of Trichoderma & ch Glioladium Volume 2: 185 – 201 no Cook R.J., and Baker K F 1983 The Nature and Practice of Biological Coltrol of plant Pathogens American Phythopathological Society, St Paul, MN 539 pp lo gy Degenkolb T, , Graefenhan T., Berg A., Nirenberg HI., Gams W., Brueckner H Peptaibiomics: Screening for Polypeptide Antibiotics (Peptaibiotics) from PlantProtective Trichoderma Species CHEMISTRY & BIODIVERSITY – Vol (2006) 71 Ghildiyal A and A Pandey A Isolation of Cold Tolerant Antifungal Strains of Trichoderma spp from Glacial Sites of Indian Himalayan Region Research Journal of Microbiology, 2008, Vol 3, 559-564 o H Hadar Y, Harman G E., Tavlor A G (1984) Evaluation of Trichoderma hi C koningii and T harzianum from New York soils for biological control of seed rot caused by Pythium spp Phytopathology 74, 106-110 M Newsham et al Arbuscular mycorrhizae protect an annual grass from root h in pathogenic fungi in the field, J Ecol 1995, 83:991-1000 Pieterse CMJ., Leon-Reyes A., Van der Ent S & Van Wees SCM Networking ity 308 – 316 C by small-molecule hormones in plant immunity Nature Chemical Biology, 2009, 5, U Rachid Lahlali & Mohamed Hijri Screening, identicationand evaluation of ni potential biocontrol fungal endophytes against Rhizoctonia solani AG3 on potato ity rs Tài liệu trích dẫn từ Internet: ve plants FEMS Microbiol Lett 311 (2010) 152–159 http://www.mycobank.org/ of lo no ch Te gy 72