Bài phúc trình Thực tập Vi sinh vật đại cương MI302C Ngành Công nghệ sinh học Trường Đại học Cần Thơ. Trình bày toàn bộ các thao tác và cũng như giải đáp các câu hỏi trong quá trình tham gia môn học của nhóm.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÀI PHÚC TRÌNH THỰC TẬP VI SINH VẬT ĐẠI CƯƠNG MÃ HỌC PHẦN: MI302C GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN NHÓM ThS GIANG Lớp CNSH TT K45 Cần Thơ, 5/2021 h a MỤC LỤC Bài 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC Bài 2: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VÀ CÁC NGUỒN VI SINH VẬT Bài 3: QUAN SÁT VI SINH VẬT Bài 4: NHUỘM VI SINH VẬT Bài 5: KỸ THUẬT GIEO CẤY (CHUYỂN) VÀ PHÂN LẬP (TÁCH RÒNG) VI SINH VẬT 11 Bài 6: ĐO VÀ ĐẾM VI SINH VẬT 13 Bài 7: SỰ LÊN MEN RƯỢU VÀ SỰ LÊN MEN GIẤM 15 Bài 8: SỰ LÊN MEN SỮA CHUA (YAOURT) 17 Bài 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC I THỰC HÀNH Hình 1.1 Nấm mốc quan sát vật kính 10X 40X Chồi nấm men Hình 1.2 Nấm men quan sát vật kính 40X Vi khuẩn hình que Vi khuẩn hình cầu Hình 1.3 Vi khuẩn quan sát vật kính 40X II CÂU HỎI Vai trò dầu cadre sử dụng vật kính X100: Khi sử dụng vật kính X100 phải sử dụng giọt dầu dầu giúp tạo môi trường đồng chiết suất nên ánh sáng bị khúc xạ tập trung vào độ vật kính X100 nên quan sát ảnh rõ Cách bảo quản vật kính X100 sau nhỏ dầu: - Bước 1: Đầu tiên dùng giấy sạch, mềm lau qua lớp dầu cèdre dính vật kính X100 - Bước 2: Dùng tờ giấy sạch, mềm thứ thấm xylol (dung mơi hữu cơ) hay hỗn hợp cồn cao độ + ether lau cho hết dầu cịn sót lại vật kính X100 - Bước 3: Cuối cùng, dùng tờ giấy thứ lau lại cho dầu xylol hay cồn + ether hai loại làm tan lớp keo dán thấu kính ống kính vật kính X100 Phân loại vật dụng khử trùng: - Khử trùng NHIỆT KHÔ: kim loại, thủy tinh Khử trùng NHIỆT ƯỚT: kim loại, thủy tinh, cao su, nước cất, môi trường nuôi cấy 4 Tại bắt đầu khử trùng với nồi khử trùng nhiệt ướt phải xả hết khơng nồi ra? - Khi khử trùng với nồi khử trùng nhiệt ướt với nồi khử trùng nhiệt ướt phải xả hết khơng khí nồi để nâng áp suất lên 1kg/cm2 nhiệt độ lên 121oC Nếu không xả hết khơng khí nhiệt độ áp suất nồi không tăng lên Nếu môi trường lịng nên KHỬ TRÙNG thiết bị cho phù hợp? Tại sao? Nếu môi trường lỏng nên khử trùng nồi khử trùng nhiệt ướt Vì khử trùng nhiệt ướt không làm cho môi trường lỏng bị bốc nước không làm biến tính mơi trường Bài 2: MƠI TRƯỜNG NI CẤY VÀ CÁC NGUỒN VI SINH VẬT THỰC HÀNH I Nắp giấy Hình 2.1 Dụng cụ CÂU HỎI II Cho biết công dụng agar môi trường nuôi cấy Thử phân loại môi trường khoai tây – agar thuộc loại mơi trường gì? − Trong ni cấy vi sinh: Mơi trường agar đổ đĩa tạo điều kiện cho loại vi sinh vật bám trụ Agar khó tiêu hóa vi sinh vật khơng ảnh hưởng đến lượng thạch nuôi vi sinh Các thành phần dinh dưỡng khác bổ sung vào agar để cung cấp chất cần thiết cho vi sinh vật Bảo đảm môi trường agar tiệt trùng trước cấy vi sinh vật vào đĩa Làm giá đỡ cho q trình ni cấy, với đặc tính đặc chất dinh dưỡng, hạn chế thất thoát đảm bảo cách ly với vi sinh vật bên ngồi − Phân loại theo mơi trường ni cấy, ta có: + Phân theo trạng thái vật lý: mơi trường khoai tây-agar thuộc môi trường đặc + Phân theo nguồn gốc vật liệu: thuộc môi trường thiên nhiên + Phân theo công dụng: thuộc môi trường Nếu môi trường khoai tây-agar khử trùng tủ khử trùng nhiệt khơ 121oC, có khơng? Tại sao? - Không thể khử trùng môi trường khoai tây-agar khử trùng nhiệt khơ 121oC Vì xảy bốc nước gây biến tính hư mơi trường, đồng thời nhiệt độ khơng tiêu diệt vi sinh vật Tại phải mở cửa, mở quạt máy thí nghiệm lấy vi sinh vật từ khơng khí? - Mở cửa, mở quạt máy để khơng khí phịng xáo trộn mang theo nhiều lồi vi sinh vật bám vào môi trường Bài 3: QUAN SÁT VI SINH VẬT I THỰC HÀNH Quan sát mô tả khuẩn lạc đĩa petri chứa môi trường đặc khuẩn lạc vi khuẩn – nấm men Dạng: Trịn kích thước lớn Độ nổi: Mơ Bìa: Ngun Hình 3.1 Nấm men quan sát vật kính 40X 2 khuẩn lạc nấm mốc Dạng: Trịn kích thước lớn Độ nổi: Lài Bìa: Sợi Nấm mốc Hình 3.2 Nấm mốc quan sát vật kính 40X Bài 4: NHUỘM VI SINH VẬT I THỰC HÀNH Mẫu nhuộm đơn Nấm men sau nhuộm Hình 4.1 Mẫu nhuộm đơn (nấm men) quan sát vật kính 40X Mẫu nhuộm kép Vi khuẩn Gram dương Hình 4.2 Mẫu nhuộm kép (vi khuẩn) quan sát vật kính 40X II CÂU HỎI Nếu sau trải vi sinh vật không cố định mẫu vật trước nhuộm, kết nào? - Kết rửa vi sinh vật trôi Cho biết ích lợi việc nhuộm đơn? - Nhuộm đơn giúp ta dễ quan sát mẫu vật kính hiển vi Cho biết ích lợi việc nhuộm kép? - Nhuộm kép giúp ta xác định mẫu vật nghiên cứu Gram âm hay Gram dương Có kết luận vi sinh vật nhuộm phần thực hành (Gram âm hay Gram dương) - Vi khuẩn Gram dương: tế bào vi sinh vật có màu tím xanh có thành peptidoglycan dày, Crystal violet bám vào nhiều - Vi khuẩn Gram âm: tế bào vi sinh vật có màu hồng đỏ có thành peptidoglycan mỏng, Crystal violet bám vào 10 Bài 5: KỸ THUẬT GIEO CẤY (CHUYỂN) VÀ PHÂN LẬP (TÁCH RÒNG) VI SINH VẬT I THỰC HÀNH Thảo My Yến Nhi Thanh Hình 5.1 Phân lập mẫu khuẩn Lạc II CÂU HỎI Có thể xác định độ (rịng) vi sinh vật mắt khơng? - Khơng có đủ khả để xác định độ (ròng) vi sinh vật mắt thường mà phải thơng qua kính hiển vi quang học độ phóng đại cao 11 Tại phân lập phải vẽ thành nhiều đường? - Khi phân lập phải vẽ thành nhiều đường đề phân lập vi khuẩn thành dòng riêng biệt Tại phải hơ lửa kim cấy trước đưa vào dĩa petri? - Hơ lửa kim cấy trước đưa vào dĩa petri để cấy thành nhiều đường làm giảm mật số từ từ không bị lẫn với dòng ban đầu 12 Bài 6: ĐO VÀ ĐẾM VI SINH VẬT I THỰC HÀNH Nấm men Hình 6.1 Đếm vi sinh vật (Nấm men) phương pháp đếm trực tiếp kính mang vật II CÂU HỎI Cho biết kích thước trung bình tế bào nấm men Lần đo Trung bình lần đo Kích thước trung bình tế bào nấm men Chiều dài (𝜇𝑚) 3 3 3 Chiều rộng (𝜇𝑚) 2 2,5 2,5 2,2 7,5 5,5 13 - Số tế bào đếm được: + Lần 1: 17 + Lần 2: 35 + Lần 3: 20 + Lần 4: 17 + Lần 5: 17 - Trung bình lần đếm 21,2 tế bào - Số tế bào/1mL = số trung bình cộng tế bào x Số tế bào/1mL = 21,2 x 100 x (22 𝑥 103 )2 3,14 𝑥 3002 1000 𝜇𝐿 10 𝜇𝐿 x 𝑑𝑖ệ𝑛 𝑡í𝑐ℎ 𝑣𝑢ơ𝑛𝑔 𝑑𝑖ệ𝑛 𝑡í𝑐ℎ 𝑡ℎị 𝑡𝑟ườ𝑛𝑔 = 1,4 x 107 CFU/mL Cho biết lý khác biệt mật số cho phương pháp đếm gián tiếp trực tiếp? − Trực tiếp: Cho số liệu nhiều đếm bao gồm tế bào sống tế bào chết − Gián tiếp: Cho số liệu có tế bào sống Cho biết công dụng thước trắc vi vật kính? - Thước trắc vi vật kính dùng để đo kích thước vi sinh vật 14 Bài 7: SỰ LÊN MEN RƯỢU VÀ SỰ LÊN MEN GIẤM I THỰC HÀNH Hình 7.1 Mẫu Cái Giấm quan sát vật kính 40X Nấm men Hình 7.2 Mẫu cơm rượu quan sát vật kính 40X 15 II CÂU HỎI Nấm men lên men rượu nhằm mục đích gì? Viết phản ứng lên men rượu − Nấm men lên men rượu để lấy lượng cần thiết cho hoạt động sống chúng − Phương trình phản ứng: Glucose + Nấm men (khơng có oxi) 2C2H5OH + 2CO2 + 2ATP Cho biết cấu tạo Cái giấm? − Giấm hay acid acetic sản phẩm oxy hóa rượu vi khuẩn giấm tạo nhóm vi khuẩn giấm quan trọng thuộc nhóm Acetobacter, nhóm vi khuẩn hiếu khí bắt buộc, tức chứng cần oxy trình biến dưỡng chúng bắt buộc sống bề mặt môi trường để nhận oxy dễ dàng Chính vậy, chúng tổng hợp sợi cenllulose trước sợi đan với thành Cái giấm lên môi trường nhẹ nước 16 Bài 8: SỰ LÊN MEN SỮA CHUA (YAOURT) I THỰC HÀNH Hình 8.1 Mẫu sữa chua Vinamilk quan sát vật kính 40X Hình 8.2 Mẫu sữa chua gia đình quan sát vật kính 40X CÂU HỎI Vai trị nhóm vi khuẩn acid lactic lên men sữa - Trong yaourt, nhóm vi khuẩn lactic chuyển hóa lactose thành acid lactic, làm casein sữa đông lại thành cục sữa (caseum) làm dịch sữa đông đặc lại dễ tiêu hóa II 17