Nghiên cứu chiết xuất hoạt chất sinh học trong một số loại thảo dược

TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LÂM NGHIỆP - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT HOẠT CHẤT SINH HỌC TRONG MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Như Ngọc Họ Và Tên :Nguyễn Anh Dũng Lớp :K64-CNSH Mã sinh viên :1953071220 Hà Nội, 2023 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực và hồn thiện đề tài khóa luận tốt nghiệp, em nhận giúp đỡ tận tình từ thầy/cơ giáo thuộc Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - trường Đại học Lâm nghiệp Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Như Ngọc là giảng viên trực tiếp hướng dẫn, Th.S Nguyễn Thị Hồng Nhung giúp đỡ đóng góp ý kiến quý báu để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn quý thầy (cô) Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, trường Đại học Lâm nghiệp tận tình truyền đạt kiến thức năm học tập Với vốn kiến thức q trình học khơng tảng cho q trình nghiên cứu mà cịn hành trang q báu để bước vào đời cách vững tự tin Thơng qua q trình thực đề tài, em học nhiều điều hay rút nhiều học kinh nghiệm quý giá Do kiến thức thân hạn chế thiếu kinh nghiệm thực tiễn nên nội dung khóa luận khó tránh thiếu sót Vì vậy, em kính mong nhận ý kiến đóng góp q báu thầy/cơ giáo Em xin chân thành cảm ơn! i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC .ii Ký hiệu viết tắt .iv Danh mục bảng v Danh mục hình ảnh vi Đặt vấn đề Chương Tổng quan vấn đề nghiên cứu 1.1 Khái niệm dược liệu 1.2 Tình hình sử dụng dược liệu giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sử dụng phân bố dược liệu Việt Nam 1.2.2 Tình hình sử dụng phân bố dược liệu giới 1.3 Một số loài dược liệu Việt Nam .5 1.3.1 Dây thìa canh 1.3.2 Xuyên tâm liên .8 1.3.3 Cây Khơi tía 11 Chương Mục tiêu nội dung phương pháp nghiên cứu 14 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 14 2.2 Nội dung nghiên cứu .14 2.2.1 Nghiên cứu, chiết xuất số hoạt chất sinh học có số loại thảo dược .14 2.2.2 Nghiên cứu, xác định số hoạt tính dịch chiết cao dược liệu 14 2.3 Dụng cụ vật liệu nghiên cứu .14 2.3.1 Hóa chất 14 2.3.2 Dụng cụ thiết bị .15 2.3.3 Vật liệu nghiên cứu 15 ii 2.3.4 Môi trường 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Tách chiết xác định hàm lượng Polyphenol tổng số 16 2.4.2 Tách chiết xác định hàm lượng Flavonoid tổng số 18 2.4.3 Tách chiết xác định hàm lượng Saponin 19 2.4.4 Tách chiết xác định hàm lượng Alkaloid 21 2.4.5 Xác định hoạt tính chống oxy hóa 23 2.4.6 Xác định hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết dược liệu 25 Chương Kết thảo luận .27 3.1 Chiết xuất hoạt chất dược liệu .27 3.1.1 Cây Xuyên tâm liên 32 3.1.2 Cây Dây thìa canh 33 3.1.3 Cây Khơi tía 34 3.2 Xác định hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết dược liệu 35 3.2.1 Vi khuẩn Salmonella 36 3.2.2 Vi khuẩn E coli 37 3.2.3 Vi khuẩn Shigella 38 3.2.4 Vi khuẩn Streptococcus thermophilus 39 3.2.5 Vi khuẩn Bacillus cereus 40 Chương Kết luận – tồn – kiến nghị .42 4.1 Kết luận 42 4.2 Tồn - Kiến nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO .43 Phụ lục 45 iii KÝ HIỆU VIẾT TẮT STT Ký hiệu chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ CNSH Công nghệ sinh học ĐC Đối chứng g Gram l Lít mg Milligram ml Milliliter nm Nanometer OD Optical Density µg Microgram 10 µl Microliter 11 µm Micrometres 12 DPPH 2,2-Diphenyl-1 picrylhydrazyl 13 BCG Bromocresol Green 14 MeOH Methanol 15 NA Nutrient Agar 16 DMSO Dimethyl Sulfoxide iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Dụng cụ thiết bị sử dụng nghiên cứu 15 Bảng 2.2 Các vi khuẩn kiểm định thí nghiệm 16 Bảng 2.3 Thành phần môi trường dinh dưỡng NA 16 Bảng 3.1 Tỷ lệ hoạt chất mẫu dược liệu 27 Bảng 3.2 Hàm lượng Polyphenol tổng số dược liệu Vạn thọ 28 Bảng 3.3 Hàm lượng Flavonoid toàn phần dược liệu Vạn thọ .29 Bảng 3.4 Hàm lượng Saponin toàn phần Môn ngứa 30 Bảng 3.5 Chỉ số IC50 mẫu cao chiết dược liệu Vạn thọ .32 Bảng 3.6 Hàm lượng hoạt chất Xuyên tâm liên .32 Bảng 3.7 Hàm lượng hoạt chất Dây thìa canh 33 Bảng 3.8 Hàm lượng họt chất Khơi tía 34 Bảng 3.9 Đường kính vịng vơ khuẩn (cm) dịch chiết cao dược liệu35 Bảng 4.1 Kết đo OD765nm hoạt chất Polyphenol .45 Bảng 4.2 Kết đo OD510nm Flavonoid .46 Bảng 4.3 Kết đo OD544nm hoạt chất Saponin 47 Bảng 4.4 Kết đo OD470nm Alkaloid 48 Bảng 4.5 Kết đo OD517nm DPPH 49 v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây Dây thìa canh Hình 1.2 Cây Xuyên tâm liên .10 Hình 1.3 Cây khơi tía 13 Hình 3.1 Tỷ lệ Polyphenol (theo % chất khơ) 28 Hình 3.2 Tỷ lệ Flavonoid (theo % chất khô) .29 Hình 3.3 Tỷ lệ Saponin (theo % chất khơ) 30 Hình 3.4 Tỷ lệ Alkaloid (theo % chất khô) .31 Hình 3.5 Mẫu tươi bột Xuyên tâm liên 33 Hình 3.6 Mẫu tươi bột Dây thìa canh 34 Hình 3.7 Mẫu tươi bột Khơi tía .35 Hình 3.8 Vịng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Salmonella 36 Hình 3.9 Vòng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn E coli 37 Hình 3.10 Vòng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Shigella 38 Hình 3.11 Vòng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Streptococcus thermophilus .39 Hình 3.12 Vịng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Bacillus cereus .40 Hình 4.1 Đồ thị đường chuẩn Polyphenol với Folin – Ciocalteu .45 Hình 4.2 Đồ thị đường chuẩn Flavonoid 46 Hình 4.3 Đồ thị đường chuẩn hoạt chất Saponin .47 Hình 4.4 Đồ thị đường chuẩn Alkaloid .48 Hình 4.5 Đường chuẩn DPPH 49 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Dược liệu yếu tố có vai trị định đến tồn phát triển ngành Y, đặc biệt nèn y học cổ truyền – y học vận dụng loại thuốc từ thiên nhiên Theo đó, thuốc phòng bệnh chữa bệnh điều chế từ nguồn dược liệu hóa chất tổng hợp Chỉ tính riêng thảo dược, theo thống kê chưa đầy đủ Tổ chức Y tế giới (WHO) cho thấy có 21.000 lồi cỏ dân tộc giới dùng làm thuốc Không nước châu Á, mà nước phương Tây tiêu thụ lượng lớn dược liệu Theo thống kê nước có cơng nghiệp phát triển có khoảng 1/4 số thuốc thống kê đơn thuốc có hoạt chất từ thảo dược Thực tế loại thuốc tự nhiên sử dụng đảm bảo an toàn, hiệu quả, mang đến tác dụng điều trị tốt Tuy có loại thuốc tổng hợp từ hóa dược y học đại, thực tế cho thấy thuốc thiên nhiên an toàn có tác dụng điều trị cho số loại bệnh nan y mà thuốc tổng hợp điều trị ung thư vài bệnh mãn tính khác Nhiều hoạt chất quan trọng quinin, morphin, emetin… tạo từ chất hóa học mà phải chiết xuất từ dược liệu Ngồi ra, dược liệu cịn biết đến nguồn cung cấp nguyên liệu cho công việc bán tổng hợp số loại thuốc chữa bệnh Chẳng hạn để bán tổng hợp loại thuốc steroid hàng năm giới cần khoảng 100.000 củ mài có chứa diosgenin Bên cạnh đó, dược liệu cung cấp khung để tổng hợp loại thuốc mới, mở đường cho ngành hóa dược phát triển CHƯƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Khái niệm dược liệu Theo Ds.CKI Nguyễn Quốc Trung Trường Cao đẳng Y Dược Pasteur cho biết: Từ cổ xưa, ông cha ta biết cách dùng loại cây, vật hay thứ tự nhiên để làm thuốc phòng chữa trị bệnh Với kinh nghiệm lưu truyền, chọn lọc qua thời gian nghiên cứu tìm kiếm chứng khoa học đáng tin cậy, rõ ràng Theo Luật Dược số 105/2016/QH13: Dược liệu nguyên liệu làm thuốc có nguồn gốc từ tự nhiên từ thực vật, động vật, khoáng vật đạt tiêu chuẩn làm thuốc Hiểu đơn giản dược liệu tồn bộ phận cây, vật vài phận chúng Những sản phẩm chiết tách từ cây, vật tinh dầu, dầu mỡ, gơm, sáp, dùng làm thuốc thuộc phạm vi dược liệu Theo quan điểm việc nghiên cứu dược liệu không dừng lại ngun liệu thơ mà cịn mở rộng phạm vi tinh chất chiết từ dược liệu, chẳng hạn hoa Hịe rutin, dương Địa hồng digitalin, rễ Ba gạc reserpin, Dừa cạn vinblastin [5] 1.2 Tình hình sử dụng dược liệu giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sử dụng phân bố dược liệu Việt Nam Hiện nay, việc sử dụng thuốc dược liệu phòng chữa bệnh trở thành xu hướng phát triển mạnh, không nước ta mà nhiều nước giới Vì thuốc dược liệu khơng có tác dụng chữa bệnh tốt, mà cịn có tác dụng điều hòa, cân hoạt động phận, quan thể để trì sức khỏe cải thiện chất lượng sống Ngoài ra, hầu hết chúng có độ an tồn cao sử dụng khoang thời gian dài, gây tác dụng phụ dễ sử dụng Mỗi loại dược liệu có nhiều cách sử dụng khác để phát huy hết tác dụng mang đến hiệu mong muốn Tuỳ vào mục đích dùng, ta sử dụng dược liệu theo cách thức chế biến y học cổ truyền như: + Chưng hay đồ (đun cách thủy) + Sắc lấy nước hay Hãm trà uống + Sao (rang), vàng, đen, cháy tùy dược liệu + Ngâm rượu, ngâm muối, ngâm mật ong + Tẩm gừng, tẩm giấm Theo tin tức y dược cách chế biến, bào chế dược liệu phát triển theo thời gian để vừa tiện lợi dùng vừa đảm bảo cơng dụng Các dạng dùng thường thấy trà túi lọc, dược liệu thô, chiết xuất dược liệu (như cồn thuốc, rượu thuốc, tinh dầu) Trường hợp thuốc dược liệu bào chế theo kỹ thuật đại tân tiến cho dạng dùng thuốc tân dược, gồm viên nén, viên nang, thuốc tiêm, dung dịch/ hỗn dịch uống [5] Theo thống kê sơ bộ, nước ta có tới gần 12.000 lồi thực vật bậc cao có mạch thuộc 2.256 chi, 305 họ (chiếm 4% tổng số loài, 15% tổng số chi, 75% tổng số họ thực vật tồn giới) Khơng có vai trị phổi xanh điều hịa khí hậu, hệ thực vật rừng cịn mang đến tiềm to lớn tài nguyên thuốc nói riêng với tài nguyên dược liệu nói chung Tại Việt Nam, việc nghiên cứu thuốc tiến hành từ sớm, gắn liền với tên tuổi nhiều danh y tiếng như: Thiền sư Tuệ Tĩnh với “Nam Dược Thần Hiệu” viết 499 vị thuốc Nam, có 241 vị thuốc có nguồn gốc từ thực vật Hải Thượng Lãn Ông Lê Hữu Trác với “Lĩnh Nam Bản Thảo” gồm quyển: thượng chép 496 kế thừa Tuệ Tĩnh, hạ ghi 305 vị bổ sung công dụng phát thêm [1] Thời kỳ Pháp thuộc, nhà thực vật học phương Tây thống kê tồn Đơng Dương có 1.350 thuốc thuộc 160 họ thực vật khác Mãi 3.2.1 Vi khuẩn Salmonella Hình 3.11 Vịng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Salmonella Chú thích: + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Xuyên tâm liên + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Dây thìa canh + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Khơi tía + Vị trí số nhỏ đối chứng nước cất vô trùng Từ hình 3.8 cho ta thấy kích thước vịng kháng khuẩn mẫu dịch chiết đĩa thạch có vi khuẩn Salmonella lớn Xuyên tâm liên với đường kính vịng kháng khuẩn 2.3 cm nồng độ 4171,3 mg/ml Dịch chiết Khơi tía với đường kính vòng kháng khuẩn 2.2 cm nồng độ 3374 mg/ml dịch chiết dây thìa canh cm nồng độ 2727,1 mg/ml 36 3.2.2 Vi khuẩn E coli Hình 3.12 Vịng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn E coli Chú thích: + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Xuyên tâm liên + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Dây thìa canh + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Khơi tía + Vị trí số nhỏ đối chứng nước cất vơ trùng Từ hình 3.9 cho ta thấy kích thước vịng kháng khuẩn mẫu dịch chiết đĩa thạch có vi khuẩn E coli lớn Khơi tía với đường kính vịng kháng khuẩn 3.5 cm nồng độ 3374 mg/ml Dịch chiết xuyên tâm liên với đường kính vịng kháng khuẩn 1.7 cm nồng độ 4171,3 mg/ml dịch chiết dây thìa canh 1.5 cm nồng độ 2727,1 mg/ml 37 3.2.3 Vi khuẩn Shigella Hình 3.13 Vịng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Shigella Chú thích: + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Xuyên tâm liên + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Dây thìa canh + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Khơi tía + Vị trí số nhỏ đối chứng nước cất vơ trùng Từ hình 3.10 cho ta thấy kích thước vịng kháng khuẩn mẫu dịch chiết đĩa thạch có vi khuẩn Shigella lớn Khơi tía với đường kính vịng kháng khuẩn 3.5 cm nồng độ 3374 mg/ml Dịch chiết xuyên tâm liên với đường kính vịng kháng khuẩn cm dịch chiết dây thìa canh cm 38 3.2.4 Vi khuẩn Streptococcus thermophilus Hình 3.14 Vịng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Streptococcus thermophilus Chú thích: + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Xuyên tâm liên + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Dây thìa canh + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Khơi tía + Vị trí số nhỏ đối chứng nước cất vơ trùng Từ hình 3.11 cho ta thấy kích thước vòng kháng khuẩn mẫu dịch chiết đĩa thạch có vi khuẩn Streptococcus thermophilus lớn dịch chiết xun tâm liên với đường kính vịng kháng khuẩn 1.3 cm dịch chiết dây thìa canh 1.2 cm 39 3.2.5 Vi khuẩn Bacillus cereus Hình 3.15 Vịng kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu vi khuẩn Bacillus cereus Chú thích: + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Xuyên tâm liên + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Dây thìa canh + Vị trí số nhỏ dịch chiết cao Khơi tía + Vị trí số nhỏ đối chứng nước cất vơ trùng Từ hình 22 cho ta thấy kích thước vịng kháng khuẩn mẫu dịch chiết đĩa thạch có vi khuẩn Bacillus cereus lớn xuyên tâm liên với đường kính vịng kháng khuẩn 2.5 cm, dịch chiết khơi tía với đường kính vịng kháng khuẩn 2.2 cm dịch chiết dây thìa canh 1.5 cm 40 So với kết nghiên cứu “Nghiên cứu khảo sát tác dụng kháng khuẩn, xác định hàm lượng polyphenol hoạt tính chống oxy hóa dược liệu xun tâm liên nhóm tác giả Trần Thị Hồng, Phạm Thị Huế, Nguyễn Thị Thanh Hà, Nguyễn Thanh Hải – Học viện Nơng nghiệp Việt Nam” với đường kính vịng kháng khuẩn dịch chiết Xuyên tâm liên nồng độ khác vi khuẩn Bacillus subtilis ATCC 6633; Geobacillus stearothermophilus ATCC 7953; Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; Staphylococcus aureus ATCC 25023; Staphylococcus aureus ATCC 25923; Escherichia coli ATCC 85922; Escherichia coli ATCC 35218; Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella ATCC 13311, đường kính vịng kháng khuẩn dịch chiết mẫu dược liệu Xuyên tâm liên, Dây thìa canh Khơi tía thu cho kết tốt với đường kính vịng kháng khuẩn lớn [7] 41 CHƯƠNG KẾT LUẬN – TỒN TẠI – KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ mẫu dược liệu Xun tam liên, Dây thìa canh Khơi tía thu thập Thái Nguyên tiến hành phân tích tỷ lệ hợp chất: Polyphenol, flavonoid, Saponin, Alkaloid tổng số; khả chống oxy hóa hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu, kết đạt sau: - Tỷ lệ Polyphenol tống số thấp mẫu Dây thìa canh (2,85%) cao mẫu Khơi tía (8,33%), tỷ lệ trung bình mẫu 5,23% - Tỷ lệ Flavonoid tổng số thấp mẫu Dây thìa canh (5,49%) cao mẫu Khơi tía (12,65%) tỷ lệ trung bình 9,59% - Tỷ lệ Saponin tổng số mẫu dao động từ 1,89% Dây thìa canh đến 4,40% Khơi tía tỷ lệ Saponin trung bình mẫu 3,33% - Tỷ lệ Alkaloid tổng số mẫu dược liệu thu thập Thái Nguyên chiếm tỷ lệ từ 16,09% Xuyên tâm liên đến 70,55% Dây thìa canh tỷ lệ Alkaloid trung bình mẫu 35,85% - Với hoạt tính chống oxy hóa, mẫu thuộc nhóm (yếu/khơng có khả chống oxy hóa) số IC 50 mẫu Xun tâm liên, Dây thìa canh Khơi tía 257,57; 1797,48; 232,38 lớn 200 μg/ml - Với hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết cao dược liệu: Dịch chiết cao khơi tía cho đường kính vịng vơ khuẩn lớn 3.5 cm nồng độ 3374 mg/ml Dịch chiết cao xuyên tâm liên dây thìa canh có tác dụng loại vi khuẩn 4.2 Tồn - Kiến nghị Vì thời gian thí nghiệm bị gián đoạn kế hoạch học tập khác nên báo cáo khơng tránh khỏi có thiếu sót hạn chế kết thí nghiệm Để đề tài nghiên cứu hoàn thiện tơi xin có số kiến nghị sau: - Nghiên cứu thêm phương pháp tách chiết hoạt chất sinh học có dược liệu cho tách chiết tối đa lượng hoạt chất - Tiếp tục xác định hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết cao xuyên tâm liên, dây thìa canh khơi tía lên vi khuẩn gây bệnh khác 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO DR Hoa Súng (2017) [Cây thuốc] Đa dạng sinh học tiềm to lớn thuốc Việt Nam Nguyễn Trang (2019) Nâng tầm Việt Nam đồ dược liệu giới Tạp chí điện tử Nhà đầu tư Nguyễn Trọng Tường, Huỳnh Duy Khang, Nguyễn Minh Quang Học, Trì Kim Ngọc Huỳnh Ngọc Trung Dung (2020) Xác định hàm lượng Polyphenol, Flavonoid hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết từ Vạn Thọ (Tagetes erecta L.) Hoa Vàng Hoa Cam Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Nguyễn Thanh Nhật Phương, Phạm Tấn Phương, Nguyễn Hồng Trí Tài, Trần Hồng Đức Nguyễn Đức Độ (2017) Khảo sát hàm lượng Flavonoid, Alkaloid khả kháng khuẩn cao chiết cỏ Mần Chầu (Eleusine indica) Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Ds.CKI Nguyễn Quốc Trung Thuốc từ dược liệu vai trò dược liệu phòng chữa bệnh Thuocviet.edu.vn (2022) Nguyễn Văn Băn, Huỳnh Thanh Duy, Trần Hải Dương, Trần Thị Tuyết Nhung, Thạch Trọng Nghĩa, Nguyễn Đức Độ, Huỳnh Ngọc Thanh Tâm (2018) Khảo sát hàm lượng polyphenol, saponin, hoạt tính kháng oxy hóa kháng khuẩn từ cao chiết bẹ củ rễ mơn ngứa (colocasia esculenta) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ nông nghiệp Trần Thị Hồng, Phạm Thị Huế, Nguyễn Thị Thanh Hà, Nguyễn Thanh Hải Nghiên cứu khảo sát tác dụng kháng khuẩn, xác định hàm lượng polyphenol hoạt tính chống oxy hóa dược liệu xun tâm liên Học viện Nông nghiệp Việt Nam (2022) TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9745-1:2013/ ISO 14502-1:2005 CHÈ - XÁC ĐỊNH CÁC CHẤT ĐẶC TRƯNG CỦA CHÈ XANH VÀ CHÈ ĐEN - PHẦN 1: HÀM LƯỢNG POLYPHENOL TỔNG SỐ TRONG CHÈ PHƯƠNG PHÁP ĐO MÀU DÙNG THUỐC THỬ FOLIN-CIOCALTEU 43 Phân tích hoạt chất dược liệu phục vụ đề tài khoa học và công nghệ cấp tỉnh: Đánh giá thực trạng và đề xuất giải pháp, lập kế hoạch bảo tồn và phát triển một số loài dược liệu có hiệu quả kinh tế cao tại tỉnh Thái Nguyên Viện Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp – Trường Đại học Lâm nghiệp (2022) 10 Vân Anh Xu hướng trị bệnh toàn giới: Thuốc thảo dược ngày “lên ngôi” Từ điển bệnh học 44 PHỤ LỤC Bảng 4.13 Kết đo OD765nm hoạt chất Polyphenol Nồng độ (ug/ml) OD765nm 0 10 0,4 20 0,674 30 0,996 40 1,35 50 1,563 Đường chuẩn Polyphenol với Folin – Ciocalteu 1.8 1.6 f(x) = 0.031391428571429 x + 0.045714285714286 R² = 0.994870499259642 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 10 20 30 40 50 60 Hình 4.16 Đồ thị đường chuẩn Polyphenol với Folin – Ciocalteu Kết dựng đường chuẩn phần mềm excel thu đường chuẩn Polyphenol có giá trị: y = 0,0314x+ 0,0457 45 Bảng 4.14 Kết đo OD510nm Flavonoid Nồng độ (ug/ml) OD510nm 0 20 0,22 40 0,45 60 0,76 80 0,98 100 1,25 Đường chuẩn Flavonoid 1.4 1.2 f(x) = 0.01295 x − 0.045 R² = 0.997813411078717 0.8 0.6 0.4 0.2 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 Hình 4.17 Đồ thị đường chuẩn Flavonoid Kết dựng đường chuẩn phần mềm excel thu đường chuẩn Flavonoid có giá trị: y = 0,023x - 0,045 46 Bảng 4.15 Kết đo OD544nm hoạt chất Saponin Nồng độ (ug/ml) OD544nm 0 100 0,4 200 0,75 300 1,1 400 500 1,78 Hình 4.18 Đồ thị đường chuẩn hoạt chất Saponin Kết dựng đường chuẩn phần mềm excel thu đường chuẩn Saponin có giá trị: y = 0,0035x+ 0,0276 47 Bảng 4.16 Kết đo OD470nm Alkaloid Nồng độ (ug/ml) 40 60 80 100 120 OD470nm 0,22 0,32 0,45 0,55 0,65 Hình 4.19 Đồ thị đường chuẩn Alkaloid Kết dựng đường chuẩn phần mềm excel thu đường chuẩn Alkaloid có giá trị: y = 0,0055x+ 0,0007 48 Bảng 4.17 Kết đo OD517nm DPPH Nồng độ (ug/ml) OD517nm I% 0,99 0,86 13,13131 0,76 23,23232 0,65 34,34343 0,52 47,47475 10 0,4 59,59596 I% 70 60 f(x) = 5.85858585858587 x + 0.404040404040352 R² = 0.997627520759193 50 I% Linear (I%) 40 30 20 10 0 10 12 Hình 4.20 Đường chuẩn DPPH Kết dựng đường chuẩn phần mềm excel thu đường chuẩn DPPH có giá trị: y = 5,8586x+ 0,404 49 50