Nghiên cứu điều kiện ổn định đồng thời hba1c, glucose và các chỉ số lipid trong mẫu máu toàn phần và huyết tương ứng dụng thiết kế các mẫu nội kiểm cho xét nghiệm glucose huyết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ VÂN DUNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN ỔN ĐỊNH ĐỒNG THỜI HbA1c, GLUCOSE VÀ CÁC CHỈ SỐ LIPID TRONG MẪU MÁU TOÀN PHẦN VÀ HUYẾT TƯƠNG - ỨNG DỤNG THIẾT KẾ CÁC MẪU NỘI KIỂM CHO XÉT NGHIỆM GLUCOSE HUYẾT LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ VÂN DUNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN ỔN ĐỊNH ĐỒNG THỜI HbA1c, GLUCOSE VÀ CÁC CHỈ SỐ LIPID TRONG MẪU MÁU TOÀN PHẦN VÀ HUYẾT TƯƠNG - ỨNG DỤNG THIẾT KẾ CÁC MẪU NỘI KIỂM CHO XÉT NGHIỆM GLUCOSE HUYẾT NGÀNH : KIỂM NGHIỆM THUỐC – ĐỘC CHẤT MÃ SỐ : 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN THỊ MINH THUẬN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu chúng tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Tác giả luận văn Nguyễn Thị Vân Dung LỜI CẢM ƠN Với kính trọng lịng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Thị Minh Thuận người thầy ln quan tâm, tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn hỗ trợ tập thể nhân viên y tế Trung tâm xét nghiệm Buôn Ma Thuột thời gian nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới lãnh đạo Trường đại học Tây Nguyên, khoa Y – Dược cán bộ môn Xét nghiệm tạo điều kiện giúp đỡ thời gian học tập công tác Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, bạn bè ln ủng hộ, khích lệ hết lịng giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn! TP Hồ Chí Minh, ngày 09 tháng 12 năm 2022 Học viên Nguyễn Thị Vân Dung Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 2020 – 2022 Ngành: Kiểm nghiệm Thuốc - Độc chất – Mã số: 8720210 NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN ỔN ĐỊNH ĐỒNG THỜI HbA1c, GLUCOSE VÀ CÁC CHỈ SỐ LIPID TRONG MẪU MÁU TOÀN PHẦN VÀ HUYẾT TƯƠNG - ỨNG DỤNG THIẾT KẾ CÁC MẪU NỘI KIỂM CHO XÉT NGHIỆM GLUCOSE HUYẾT Nguyễn Thị Vân Dung Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Minh Thuận TÓM TẮT Mở đầu: Xét nghiệm (XN) glucose HbA1c có ý nghĩa quan trọng chẩn đoán theo dõi hiệu điều trị đái tháo đường Sự thay nồng độ HbA1c, glucose số lipid điều kiện bảo quản, việc không thường xuyên thực nội kiểm tra chất lượng phòng xét nghiệm (PXN) ảnh hưởng độ xác kết XN Mục tiêu: Nghiên cứu điều kiện ổn định đồng thời HbA1c, glucose số lipid mẫu máu toàn phần (MTP) huyết tương (HT), thiết kế mẫu nội kiểm cho XN glucose huyết Phương pháp nghiên cứu: 10 ml MTP HT 10 người tình nguyện chống đơng K2EDTA chia vào ống nghiệm vô khuẩn bảo quản mức nhiệt độ 20-25°C, 2-8°C -20°C Nồng độ HbA1c mẫu máu toàn phần đo phương pháp enzym (EA) miễn dịch (IA) Nồng độ glucose lipid mẫu MTP HT đo phương pháp đo quang Xác định điều kiện bảo quản tốt cho glucose để xây dựng mẫu nội kiểm cho XN glucose huyết Kết quả: HbA1c với phương pháp IA (HbA1c-IA) ổn định 20-25°C 24 giờ, 2-8°C ngày -20°C 30 ngày, HbA1c với phương pháp EA (HbA1c-EA) ổn định ngắn Nồng độ glucose MTP thấp mẫu HT, khơng có khác biệt đáng kể nồng độ triglycerid, cholesteroltp, HDLcholesterol MTP HT điều kiện bảo quản Bộ mẫu nội kiểm glucose huyết đạt độ đồng nhất, độ ổn định -20oC 30 ngày Kết luận: HbA1c-IA ổn định HbA1c-EA Glucose lipid ổn định HT MTP, lâu -20 oC Bộ mẫu nội kiểm cho XN glucose huyết sử dụng để nâng cao chất lượng XN glucose PXN Từ khóa: HbA1c, glucose, lipid, độ ổn định, nội kiểm Master’s Thesis – Acedemic course: 2020 – 2022 Specialty: Drug Quality Control and Toxicology – Code: 8720210 SIMULTANEOUS STABILITY STUDY OF HBA1C, GLUCOSE AND LIPID IN HUMAN WHOLE BLOOD AND PLASMA - APPLICATIONS TO ESTABLISH INTERNAL QUALITY CONTROL PANELS FOR BLOOD GLUCOSE TESTING Nguyễn Thị Vân Dung Supervisor: Dr Nguyen Thi Minh Thuan ABSTRACT Background: Glucose and HbA1c tests are important in diagnosing and monitoring the effectiveness of diabetes treatment Changes in the concentration of HbA1c, glucose and lipid indices under storage conditions, and the infrequent performance of laboratory quality checks will affect the accuracy of the test results Objectives: The purpose of this study was to evaluate the stability of HbA1c, glucose and lipid indices in whole blood (WB) and plasma samples, and design internal control samples for blood glucose testing Materials and methods: 10 ml of WB and plasma collected from 10 healthy volunteers anticoagulated with K2EDTA were divided into sterile test tubes and stored at the following temperatures: 20-25 oC, 2-8 oC and -20 oC The concentration of HbA1c in WB samples was determined simultaneously using enzymatic assay (EA) and immunoassay (IA) Glucose and lipid concentrations in WB and plasma samples were measured by spectrophotometry The best storage conditions for glucose were determined to establish internal control samples for blood glucose testing Results: %HbA1c measured by IA (HbA1c-IA) was stable for 24 hours at 20-25 °C, for less than days at 2-8 °C and for more than 30 days at -20 °C, while %HbA1c measured by EA (HbA1c-EA) was shorter stable HbA1c-IA Glucose concentrations in WB were lower than in plasma samples, while the significant difference in concentrations of triglycerides, cholesterol, HDL-cholesterol was not found between WB and plasma samples under the same storage conditions The internal control samples for blood glucose testing achieved homogeneity, stability at -20 oC for 30 days Conclusion: HbA1c-IA appears to be more stable than HbA1c-EA Glucose and lipids are stable for the longest time at -20°C in plasma than in WB The internal control samples for blood glucose testing can be used to improve the quality of glucose testing in laboratories Keywords: HbA1c, glucose, lipid, stability, internal control MỤC LỤC Trang Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt i Danh mục bảng iii Danh mục hình, sơ đồ iv ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chất phân tích 1.2 Một số nghiên cứu độ ổn định HbA1c, glucose số lipid huyết 11 1.3 Tổng quan nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm 13 1.4 Tình hình thực nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm glucose huyết 20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Hóa chất – Thiết bị, dụng cụ 23 2.3 Nơi thực đề tài 24 2.4 Phương pháp nghiên cứu 24 2.5 Phân tích số liệu 35 2.6 Đạo đức nghiên cứu 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ 37 3.1 Khảo sát độ ổn định HbA1c máu toàn phần mức nhiệt độ bảo quản 37 3.2 Khảo sát độ ổn định đồng thời glucose số lipid mẫu máu toàn phần huyết tương 44 3.3 Đánh giá chất lượng mẫu nội kiểm glucose 51 3.4 So sánh độ ổn định mẫu nội kiểm nghiên cứu với mẫu thương mại 56 CHƯƠNG BÀN LUẬN 58 4.1 Độ ổn định chất phân tích HbA1c, glucose số lipid mẫu máu toàn phần mẫu huyết tương ảnh hưởng thời gian nhiệt độ bảo quản 58 4.2 Đánh giá chất lượng mẫu nội kiểm glucose huyết 62 4.3 Hạn chế đề tài 63 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ Từ nguyên viết tắt 4AAP 4-amino antipyrine AC Affinity chromatography Nghĩa tiếng Việt Sắc ký lực Bộ Y tế BYT Điện di mao quản CE Cappillary electrophoresis CHE Cholesterol esterase CHO Cholesterol oxidase CHOLTP CholesterolTP Cholesterol toàn phần CLIA Clinical Laboratory Quy định cải tiến phòng xét Improvement Amendments nghiệm lâm sàng Clinical and Laboratory Viện tiêu chuẩn lâm sàng Standards Institute xét nghiệm Hoa Kỳ CLSI Cộng CS CVA Analytical Coefficient of Hệ số biến thiên phân tích variation Within-subject biologic variation Biến thiên sinh học cá CVI thể DAP Dihydroxy acetone phosphate DCCT Diabetes Control and Thử nghiệm kiểm soát Complications Trial biến chứng bệnh đái tháo đường ĐTĐ Đái tháo đường FVO Fructosyl peptide oxidase Hb Hemoglobin HbA Adult hemoglobin HbF Fetal hemoglobin ii Ký hiệu, chữ Từ nguyên viết tắt HDL High Density Lipoprotein HDL-C High Density Lipoprotein Nghĩa tiếng Việt Lipoprotein tỉ trọng cao Cholesterol HPLC High pressure liquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography IA Immunoassay Xét nghiệm miễn dịch IEC Ion exchange chromatography Sắc ký trao đổi ion IQC Internal Quality Control Nội kiểm tra chất lượng ISO International Organization Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc for Standardization tế GK Glycerol kinase GLU Glucose GPO Glycerol phosphate oxidase LDL Low density lipoprotein LDL-C Low density lipoprotein Lipoprotein tỷ trọng thấp Cholesterol LPL Lipoprotein lipase NGSP National Glycohemoglobin Standardization Program PEGME Polyethylene glycol methyl ether PVS Polyvinyl sulfonic acid Phòng xét nghiệm PXN QA Quality assurance Đảm bảo chất lượng QC Quality Control Kiểm tra chất lượng SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn VLDL Very low density lipoprotein Lipoprotein tỷ trọng thấp WHO World Health Organization Tổ chức y tế giới Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 34 P(T