Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm mỡ trăn python reticulatus thu tại trại đồng tâm, tiền giang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÙI TỪ KHUÊ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM MỠ TRĂN PYTHON RETICULATUS THU TẠI TRẠI ĐỒNG TÂM, TIỀN GIANG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÙI TỪ KHUÊ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM MỠ TRĂN PYTHON RETICULATUS THU TẠI TRẠI ĐỒNG TÂM, TIỀN GIANG NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN THỊ NGỌC DUNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 iii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan danh dự cơng trình nghiên cứu khoa học kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố cơng trình TP Hồ Chí Minh, ngày 12 tháng 12 năm 2022 Tác giả luận văn Bùi Từ Khuê iv LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn cao học, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến Cô TS Nguyễn Thị Ngọc Dung Cảm ơn cô tận tình hướng dẫn em suốt thời gian thực đề tài Em chân thành cảm ơn Quý Thầy Cơ mơn Phân tích – Kiểm nghiệm quan tâm hỗ trợ em thời gian em nghiên cứu thực luận văn Em xin cảm ơn Hội đồng phản biện dành thời gian đọc, phản biện góp ý để đề tài em hồn thiện Cảm ơn bạn Tơ Trần Bảo Ngọc, bạn Phạm Lê Ngọc Yến, bạn Đinh Thị Lan Linh lắng nghe, chia sẻ, động viên Cảm ơn em Thân Thị Thùy Trang em Nguyễn Thanh Thy lớp DCQ2018, Nguyễn Ái Vy lớp DCQ2019 hỗ trợ chị lúc khó khăn q trình thực luận văn Con xin dành tất lòng biết ơn đến Cha Mẹ, Cha Mẹ nguồn động lực giúp vượt qua tất khó khăn, giúp hồn thành tốt chặng đường năm Đại học năm Cao học Sự ủng hộ Cha Mẹ giúp tự tin để tiếp tục đam mê mình, bước tiếp đường nghiên cứu khoa học Một lần em xin chân thành cảm ơn tất người Học viên Bùi Từ Khuê v Luận văn thạc sĩ Dược học 2020-2022 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM MỠ TRĂN PYTHON RETICULATUS THU TẠI TRẠI ĐỒNG TÂM, TIỀN GIANG Bùi Từ Khuê Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Ngọc Dung Đặt vấn đề: Mỡ trăn dược liệu sử dụng rộng rãi Việt Nam với khả trị bỏng, trị sẹo hiệu Dược điển Việt Nam V chưa có quy định tiêu chuẩn chất lượng cho mỡ trăn Cần thiết xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm chất lượng mỡ trăn Mục tiêu: Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm mỡ trăn Python reticulatus thu trại Đồng Tâm, Tiền Giang Đối tượng phương pháp: Đối tượng nghiên cứu: mỡ trăn Python reticulatus thu trại Đồng Tâm, Tiền Giang Phương pháp nghiên cứu: Định tính, định lượng dạng ester acid palmitic, acid stearic, acid oleic acid linoleic phương pháp GC – FID Xác định tiêu cảm quan, tỷ trọng, giới hạn nhiễm khuẩn số liên quan theo hướng dẫn Dược điển Việt Nam V Kết quả: Đã xác định điều kiện chiết acid béo phương pháp Soxhlet (tỷ lệ nguyên liệu – dung môi 1:10, thời gian chiết giờ, nhiệt độ chiết 80ºC điều kiện khuấy trộn liên tục); xác định điều kiện sắc ký tối ưu cho phương pháp định lượng dạng ester acid béo GC – FID (chương trình nhiệt với nhiệt độ bắt đầu 170ºC, tốc độ dịng khí mang 1,1 mL/min, thể tích tiêm mẫu 1,0 µL tỷ lệ chia dịng 150:1) Quy trình định lượng có tính đặc hiệu, đạt độ xác (RSD ≤ 2%), đạt độ với tỷ lệ thu hồi từ 95 – 105 % (RSD ≤ 2%), khoảng tuyến tính methyl palmitat 1000 – 5000 µg/mL, với methyl stearat 1000 – 5000 µg/mL, với methyl oleat 2000 – 10000 µg/mL, với methyl linoleat 100 – 350 µg/mL Xác định hàm lượng acid palmitic khoảng 11,38 vi %, acid stearic khoảng 6,99 %, acid oleic khoảng 29,03% acid linoleic khoảng 0,76% chế phẩm Xây dựng tiêu cảm quan, tỷ trọng tương đối 20ºC khoảng 0,897, số liên quan bao gồm số acid 5,58 – 5,60, số ester 4,59 – 4,61, số iod 70,83 – 70,85, số peroxid 16,98 – 17,00, số xà phòng 10,18 – 10,20 Kết thử giới hạn nhiễm khuẩn đạt giới hạn cho phép Kết luận: Đã xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm mỡ trăn Python reticulatus thu trại Đồng Tâm, Tiền Giang cảm quan, tỷ trọng, giới hạn nhiễm khuẩn, định tính, định lượng, số liên quan Từ khóa: mỡ trăn, Python reticulatus, acid béo, sắc ký khí vii Master's Thesis in Pharmacology 2020-2022 DEVELOPMENT OF THE STANDARDIZATION FOR ANALYZING PYHON FATS OF PYTHON RETICULATUS, COLLECTED AT DONG TAM FARM, TIEN GIANG Bui Tu Khue Supervisor: Dr Nguyen Thi Ngoc Dung Introduction: Python fat is widely used in Vietnam for an effective treatment of burn scars Vietnam Pharmacopoeia V does not have regulations on quality standards for python fat It is necessary to develop the standardization for analyzing python fat Objective: Develop the standardization for analyzing python fat (Python reticulatus) collected at Dong Tam farm, Tien Giang Objects and methods: Objects: Python reticulatus fat collected at Dong Tam farm, Tien Giang Methods: Qualitative and quantitative determination of ester forms of palmitic acid, stearic acid, oleic acid and linoleic acid by GC – FID method Determination of sensory quality, density, microbial limits tests and related index according to the guidance of Vietnam Pharmacopoeia V Results: The extraction conditions by the Soxhlet method for fatty acids were determined (material-solvent ratio is 1:10, extraction time is hours, extraction temperature is 80ºC and extraction with continuous stirring); the optimal chromatographic conditions for quantifying fatty acid esters by GC-FID were determined (starting at 170ºC, carrier gas flow rate 1.1 mL/min, sample injection volume 1.0 µL and split ratio 150:1) The quantification procedure is specific, accurate (RSD ≤ 2%), accurate with a recovery rate of 95 - 105 % (RSD ≤ 2%), the linear range of methyl palmitate is 1000 - 5000 µg/mL, methyl stearate 1000 - 5000 µg/mL, methyl oleate 2000 - 10000 µg/mL, methyl linoleate 100 - 350 µg/mL Content of palmitic acid is about 11.37 %, viii stearic acid about 6.99%, oleic acid about 29.04% and linoleic acid about 0.75% Sensory criteria and some other quality criteria were established, like as relative density at 20ºC about 0.897, acid value of 5.58 - 5.60, ester value of 4.59 - 4.61, iodine value of 70.83 - 70.85, peroxide value of 16.98 - 17.00, saponification value of 10.18 - 10.20 Microbial limits tests gave the results in an acceptable range Conclusion: The standardization for analyzing python fat (Python reticulatus) collected at Dong Tam farm, Tien Giang was etablished in terms of sensory, density, microbial limits, qualitative and quantitative criteria, and some related index Keywords: Python fats, Python reticulatus, fatty acid, gas chromatography ix MỤC LỤC MỤC LỤC .ix DANH MỤC KÝ HIỆU, TỪ VIẾT TẮT .xi DANH MỤC BẢNG xiii DANH MỤC HÌNH xv MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Trăn Python reticulatus 1.2 Mỡ trăn 1.3 Acid béo 12 1.4 Các phương pháp định lượng acid béo 23 1.5 Các cơng trình nghiên cứu định lượng acid béo sản phẩm có nguồn gốc động vật 27 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Đối tượng nghiên cứu 29 2.2 Hóa chất, dung môi, trang thiết bị 29 2.3 Phương pháp nghiên cứu 31 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 52 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 53 3.1 Xây dựng quy trình định lượng acid béo mỡ trăn phương pháp GC-FID 53 3.2 Chỉ tiêu cảm quan 78 x 3.3 Tỷ trọng tương đối 79 3.4 Các số liên quan 79 3.5 Giới hạn nhiễm khuẩn 81 3.6 Định tính 81 3.7 Dự thảo tiêu chuẩn kiểm nghiệm mỡ trăn Python reticulatus thu trại Đồng Tâm, Tiền Giang 82 3.8 Ứng dụng kiểm nghiệm chất lượng số mẫu mỡ trăn thị trường 85 CHƯƠNG BÀN LUẬN 89 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 102 5.1 Kết luận 102 5.2 Kiến nghị 102 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Mẫu thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu thử Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Mẫu thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu thử Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Độ xác trung gian Mẫu thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu thử Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Mẫu thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu thử 10 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Mẫu thử 11 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu thử 12 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Độ 80_1 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 80_2 80_3 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 100_1 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 100_2 100_3 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 120_1 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 120_2 120_3 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Mẫu thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Ứng dụng phương pháp để kiểm tra mẫu mỡ trăn thị trường Mẫu thu chợ Phạm Văn Hai Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu mua Shopee Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Kết kiểm giới hạn nhiễm khuẩn Kết đếm tổng số vi khuẩn hiếu khí Mơi trường Số đĩa Độ pha lỗng 10-1 TSA Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 10-2 10-3 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Kết đếm tổng số nấm men mấm mốc Mơi trường Số đĩa Độ pha lỗng 10-1 SA Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 10-2 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chứng âm TSA SA Phát Vi khuẩn Gram âm dung nạp mật Môi trường Chứng âm VRBA Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu + Vi khuẩn Phân lập Mẫu Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 0,1g 0,01g 0,001g VRBA Phát Escherichia coli Môi trường Chứng âm Mac Agar Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu + Vi khuẩn Phân lập Mẫu Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phát Staphylococcus aureus Môi trường Chứng âm Mẫu + Vi khuẩn Phân lập Mẫu MSA Phát Salmonella Môi trường Chứng âm XLD Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Mẫu + Vi khuẩn Phân lập Mẫu