Tổng hợp và thiết lập tạp chất đối chiếu a và b của amitriptylin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ BỘ GIÁO DỤC VÀHỌC ĐÀOY TẠO ĐẠI DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ Y HUỲNH THỊ MỸ DUYÊN HUỲNH THỊ MỸ DUYÊN TỔNG TỔNG HỢP HỢP VÀ THIẾT LẬP ĐỐI CHIẾU ABVÀ B VÀ THIẾT LẬPTẠP TẠP CHẤT CHẤT ĐỐI CHIẾU A VÀ CỦA CỦAAMITRIPTYLIN AMITRIPTYLIN ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2021 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HUỲNH THỊ MỸ DUYÊN TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHẤT ĐỐI CHIẾU A VÀ B CỦA AMITRIPTYLIN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN PGS.TS TRƯƠNG NGỌC TUYỀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả Huỳnh Thị Mỹ Duyên LỜI CẢM ƠN Để bày tỏ trân trọng lịng biết ơn thân, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến tất người quan tâm, giúp đỡ, hỗ trợ suốt thời gian thực luận văn Với kính trọng lịng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới GS TS Nguyễn Đức Tuấn PGS.TS Trương Ngọc Tuyền, người thầy ln quan tâm, tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Q Thầy Cơ mơn Hố hữu cơ, mơn Phân tích – Kiểm nghiệm ln tạo điều kiện cho thời gian thực nghiên cứu truyền đạt cho nhiều kiến thức chuyên sâu, quý giá suốt thời gian năm học tập Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Trần Việt Hùng – Viện kiểm nghiệm thuốc TP HCM TS Lê Nguyễn Bảo Khánh – Bộ mơn Hố hữu cho tơi góp ý để hồn thiện luận văn Tơi xin cảm ơn đến ban giám hiệu Thầy cô, anh chị em đồng nghiệp trường Cao đẳng Y tế Bình Định tạo điều kiện thuận lợi, quan tâm, động viên để tơi n tâm hồn thành khố học năm vừa qua Tôi biết ơn ThS Trịnh Hoàng Dương, Phạm Lê Ngọc Yến, Nguyễn Tiến Dũng, Tô Trần Bảo Ngọc, Bùi Từ Khuê, Nguyễn Nhật Khánh, Lê Nguyễn Trung Nguyên, Lê Thanh Hoàng, Nguyễn Hoàng Khởi, Nguyễn Ái Vy hỗ trợ trình nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin dành tất lịng biết ơn đến gia đình nguồn động lực giúp tơi vượt qua khó khăn Học viên Huỳnh Thị Mỹ Duyên Luận văn thạc sĩ Khoá 2020 – 2022 Ngành: Kiểm nghiệm Thuốc Độc chất – Mã số: 8720210 TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHẤT ĐỐI CHIẾU A VÀ B CỦA AMITRIPTYLIN Huỳnh Thị Mỹ Duyên Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Đức Tuấn PGS.TS Trương Ngọc Tuyền Từ khóa: Tạp chất amitriptylin, 10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d][7]annulen-5on, dibenzosuberon, 3-(5H-dibenzo[a,d][7]annulen-5-yliden)-N,N-dimethylpropan1-amin, cyclobenzaprin Mở đầu: Tạp A tạp B amitriptylin có nguồn gốc từ trình tổng hợp phân hủy amitriptylin Trong chuyên luận nguyên liệu thành phẩm amitriptylin dược điển Việt Nam V dược điển tham chiếu có quy định kiểm tra tạp A tạp B Tuy nhiên, danh mục chất chuẩn quốc gia chưa có tạp A tạp B chuẩn Cho đến nay, chưa có nghiên cứu nước cơng bố quy trình tổng hợp tạp A tạp B amitriptylin Mục tiêu: Tổng hợp thiết lập tạp chất đối chiếu A B amitriptylin Phương pháp nghiên cứu: Tạp A tổng hợp từ amitriptylin phản ứng oxy hóa khử với kali permanganat môi trường acid sulfuric tinh chế phương pháp sắc ký cột Tạp B tổng hợp từ amitriptylin phản ứng dehydro hóa với dibutyl maleat mơi trường natri hydroxyd với xúc tác Pd/C tinh chế phương pháp kết tinh isopropanol sắc ký cột Sản phẩm tinh chế xác định cấu trúc phương pháp phổ nghiệm, xác định độ tinh khiết HPLC-PDA thiết lập chất đối chiếu Sau cùng, sử dụng hai tạp chất thiết lập chất đối chiếu để kiểm tra tạp A tạp B số nguyên liệu thành phẩm amitriptylin theo BP 2022 Kết quả: Tạp A tạp B tổng hợp với hiệu suất tồn quy trình 62,84% (2,87 g) 62,68% (2,79 g) Sản phẩm tổng hợp có độ tinh khiết sắc ký 98% tính theo nguyên trạng, đủ điều kiện thiết lập chất đối chiếu Kết kiểm tra tạp A tạp B số mẫu nguyên liệu thành phẩm amitriptylin cho thấy mẫu thành phẩm không đạt giới hạn cho phép Kết luận: Tạp A tạp B amitriptylin tổng hợp thiết lập chất đối chiếu, đạt yêu cầu sử dụng kiểm tra tạp chất amitriptylin Master thesis Class of 2020 – 2022 Specialty: Drug Quality control and Toxicology – Code: 8720210 SYNTHESIS AND STANDARDIZATION OF AMITRIPTYLINE IMPURITY A AND B Huynh Thi My Duyen Supervisor: Prof Dr Nguyen Duc Tuan Assoc Prof Dr Truong Ngoc Tuyen Keywords: Amitriptyline impurity, 10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d][7]annulen-5one, dibenzosuberone, 3-(5H-dibenzo[a,d][7]annulen-5-ylidene)-N,Ndimethylpropan-1-amine, cyclobenzaprine Introduction: Amitriptyline impurity A and impurity B are process-related and degradation product impurities The Vietnamese V and reference Pharmacopoeias require testing impurity A and impurity B in amitriptyline pharmaceutical substances and finished products However, the reference standards of impurity A and impurity B are not in the national list of reference standards There have been no published local studies on chemical synthesis of impurity A and impurity B so far Objectives: Synthesis and standardization of amitriptyline impurity A and B Methods: Impurity A was synthesized by the oxidation reaction of amitriptyline and potassium permanganate in sulfuric acid medium, and purified by column chromatography Impurity B was synthesized by dehydrogenation reaction between amitriptyline and dibutyl maleate in sodium hydroxide medium with Pd/C catalyst and purified by crystallization in isopropanol and by column chromatography The products were structurally determined by spectroscopic techniques, and purified by HPLC-PDA, and established as reference standard Finally, impurities A and B in several amitriptyline raw materials and corresponding pharmaceuticals were tested according to BP 2022, using the established reference standards Results: Impurity A and impurity B were synthesized and purified with total yield of 62.84% (2.87 g) and 62.68% (2.79 g), respectively The products had HPLC purity over 98% on the basis and conformed to establish reference substance The results of impurities A and B testing showed that one drug product sample was out of acceptable limit Conclusion: Amitriptyline impurities A and B were successfully synthesized and established as the reference standards, that satisfied for using in impurities testing of amitriptyline MỤC LỤC Trang Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt i Danh mục bảng iii Danh mục hình .vi Danh mục sơ đồ .viii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan amitriptylin hydroclorid .3 1.2 Tổng quan tạp A amitriptylin theo BP 2022 DĐVN V 13 1.3 Tổng quan tạp B amitriptylin theo BP 2022 DĐVN V 14 1.4 Kiểm nghiệm tạp A tạp B nguyên liệu thành phẩm amitriptylin hydroclorid 18 1.5 Chất chuẩn đối chiếu 22 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng nghiên cứu .26 2.2 Nguyên vật liệu .26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ 44 3.1 Tổng hợp tạp A .44 3.2 Tổng hợp tạp B .56 3.3 Hiệu suất tổng hợp tinh chế tạp A tạp B 67 3.4 Xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết tạp A tạp B HPLC-PDA 70 3.5.Đánh giá tạp A tạp B 77 3.6 Thiết lập chất đối chiếu tạp A tạp B 80 3.7 Kiểm tra tạp A tạp B nguyên liệu viên nén amitriptylin .91 CHƯƠNG BÀN LUẬN 94 4.1 Tổng hợp tinh chế tạp A tạp B .94 4.2 Xác định cấu trúc tạp A B 97 4.3 Xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết tạp A tạp B HPLC-PDA 99 4.4 Thiết lập chất đối chiếu tạp A tạp B 100 4.5 Kiểm tra tạp A tạp B nguyên liệu viên nén amitriptylin .100 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 101 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết Từ nguyên tắt 5-HT2 5-hydroxytryptamine AMT Amitriptyline BP British Pharmacopoeia (Dược điển Anh) BPCRS British Pharmacopoeia Chemical Reference Standard (Chuẩn đối chiếu Dược điển Anh) CAS Chemical Abstracts Services CĐC Chất đối chiếu DCM Dichloromethane DDC Dung dịch chuẩn DDT Dung dịch thử DĐVN Dược điển Việt Nam DMSO Dimethyl sulfoxide DSC Differential scanning calorimetry (Phân tích nhiệt quét vi sai) EA Ethyl acetate EP European Pharmacopoeia (Dược điển Châu Âu) EPCRS European Pharmacopoeia Chemical Reference Standard (Chuẩn đối chiếu Dược điển Châu Âu) ESI Electrospray Ionization (Ion hóa tia điện) GLP Good Laboratory Practice (Thực hành tốt phòng thí nghiệm) High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng HPLC hiệu cao) ICH International Conference on Harmonization (Hội nghị quốc tế đồng thuận) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-63 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-64 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-65 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-66 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-67 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-68 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-69 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-70 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-71 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-72 Phụ lục 15 Sắc ký đồ kiểm tra tạp A tạp B nguyên liệu thành phẩm amitriptylin - Nguyên liệu (NL) o Dung dịch chuẩn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-73 o Dung dịch chuẩn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-74 Mẫu thử nguyên liệu (NL1) - Thành phẩm o Chuẩn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-75 o Thành phẩm (TP1)  Dung dịch thử  Dung dịch thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-76 o Thành phẩm  Dung dịch thử  Dung dịch thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn