0873 nghiên cứu một số phương pháp tổng hơp ̣ pregnan và một số dẫn xuất của chúng từ 9α hydroxy androstendion luận văn tốt nghiệp

Phươngpháptổnghợp mạchbênpregnane

Phươngphápcyanohydrintổng hợpmạchbênpregnane

Phương pháp rất có ý nghĩa thực tiễn tổng hợp mạch bên pregnane là phươngpháp cyanohydrin, bao gồm tương tác của các hợp chất 17-ketosteroid với acetonecyanohydrin (hay HCN) và alkyl hoá tiếp theo hợp chất 17α-hydroxy-17β- cyano vừanhận được Phương pháp cyanohydrin xây dựng mạch bên pregnane từ AD và 9-OHAD có hàng loạt ưu điểm: tính chọn lọc cao của phản ứng hydrocyan hoá vào nhóm17-keto, tác nhân acetone cyanohydrin dồi dào, giá thành thấp Trong tổng hợp cácpregnane từ AD các tác giả đã chỉ ra tính hiệu quả cao của phản ứng này [6]. Phươngpháp cyanohydrin xây dựng mạch bên pregnane từ chất đầu AD cũng đã được đề xuấtbởicáctácgiảNhật[7].

Trong sáng chế của hãng Upjohn [8], phương pháp cyanohydrin được áp dụng đểmô hình hoá các dẫn xuất khác nhau của AD Tuy nhiên việc sử dụng 9α-OH AD làchất đầu đã được tuyên bố nhưng chưa được mô tả trong các ví dụ Để tránh chuyển vịkhông mong muốn với sự tham gia của nhóm 9-hydroxy bậc ba và vòng A, một cáchtiện lợi sẽ chuyển hoá nó đến dẫn xuất∆ 9(11) , chức này bền vững hơn trong điều kiệncác phản ứng tiếp theo. Hãng Mitsubishi của Nhật đã đề xuất điều chế dẫn xuất 17β-cyano-17α-hydroxy bằng cách hydrocyano hóa AD hay là∆ 9(11) -AD Tuy nhiên phảnứng của∆ 9(11) -AD với acetone cyanohydin trong các điều kiện được tác giả mô tả xảyra với sự tạo thành chỉ dẫn xuất không mong muốn 17α-cyano-17β-hydroxy, trong khiphản ứng với sự cómặt nhóm 9α-hydroxy ởchính các điềukiệnn à y c h ỉ c h o đ ồ n g phânepimermongmuốn17β-cyano-17α-hydroxy.Đồngphân17β-cyano-17- hydroxy-∆ 9(11) có thể nhận được bằng cách epimer hóa 17α-cyano-17-hydroxy-

(Et3N.HCN) trong dung môi alcohol bậc thấp [9] Tác giả sáng chế [10] đã điều chếthành công đồng phân 17β-cyano-17α-hydroxy xuất phát từ∆ 9 -AD với hiệu suất 93%trong môi trường alcohol/nước khi sử dụng phương pháp epimer hoá mà bản chất củaphương pháp này là kết tủa dần dần đồng phân1 7β-cyano-17α-hydroxy bằng cáchthayđổinồngđộnước.

Chuyển hoá xa hơn hợp chất 17β-cyano-17α-hydroxy- đến 20-ketopregnane đãđược thực hiện bằng phản ứng với CH 3 Li hay CH3MgBr, trong đó các nhóm 3-keto và17α-hydroxyđãđược bảovệ[7,11-13]. Đểt ạ o r a h ợ p c h ấ t∆ 16(17) -c ó t h ể s ử d ụ n g đ ồ n g p h â n 1 7α-cyano-17β- hydroxyhoặc 17β-cyano-17α-hydroxy, hoặc hỗn hợp của chúng Ban đầu người ta ester hoánhóm 17-hydroxy bằng phản ứng với methanesulfonyl chloride (CH 3 SO2Cl), sau đó17-cyano-17-methanesulfonyloxysteroid tạo thành được xử lí bằng tác nhân dehydrathoá Alkyl hoá tiếp theo∆ 16(17) -17-nitrile bằng tác nhân Grignard cho phép chuyển hoácác dẫn xuất androstane đến 20-ketopregnane với hiệu suất cao [14] Phương pháp đãđược hoàn thiện và áp dụng đối với các trường hợp 3-acetoxy-∆ 5 -17-ketoandrostane vàAD[15]. Để điều chế 17-acetylsteroid từ 17-oxosteroid có thể sử dụng các tác nhân đặcbiệt gọi là “tác nhân acetyl che chắn” làm thay đổi hoạt tính của nhóm carbonyl. Cácnguyên tắc và ứng dụng của khái niệm này đã được xem xét lại bởi Seebach [16],Grobel & Seebach [17] Trong sựcómặt của các basem ạ n h “ t á c n h â n a c e t y l c h e chắn” tạo thành dạng anion bền vững dễ dàng phản ứng với nguyên tử C nhómcarbonyl của 17-oxosteroid và tạo ra hợp chất trung gian dễ bị thủy phân thành nhómacetyl,dẫntới17- acetylsteroid.Các“tácnhânacetylchechắn”cóthểđượcsửdụngđể tạo ra mạch bên pregnane [18,19] Rất ưa dùng loại này là alkyl hoặc các aryl vinylether,a l k y l h o ặ c a r y l v i n y l t h i o e t h e r h o ặ c 1 , 1 - t r i m e t h y l e n e d i t h i o e t h a n e …

Phươngphápnày cóthểđượcápdụngđểchuyểnhoácác9α-hydroxy-17- ketoandrostaneđến9α,17α-dihydroxy-20-ketopregnane. Áp dụng phương pháp “tác nhân acetyl che chắn” có kết quả tốt đối với trườnghợp 9-hydroxysteroid có vòng D chứa “X” là O hoặc S, “R” là nhóm alkyl (1- 6C)hoặc aryl; sau khi xử lý với acid nhận được 17-acetyl-17β-hydroxysteroid tương ứng.Để nhận được đồng phân epimer 17-acetyl mong muốn có thể dehydrat hóa nó đến16,17- dehydrosteroidtươngứng.

Các hợp chất 9α-hydroxysteroid với nhóm chức 3-keto và 17-hydroxy đã đượcbảov ệ , n h ó m 1 7β-cyanođ ư ợ c c h u y ể n h ó a t ớ i 1 7β- acetylt ư ơ n g ứ n g q u a h ợ p c h ấ t trunggian17-(1-imineethyl) màkhôngcầnphânlậpiminetrunggian [22].

Phươngphápacetylenetổnghợpmạchbênpregnane

Ethynyl hoá 17-ketosteroid ở điều kiện khống chế nhiệt động xảy ra từ phíacủa phân tử, tạo thành dẫn xuất 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-ethynyl-17-hydroxy Thông báo đầu tiên 17-ethynyl hoá 3-hydroxyandrosterone-17 bằng acetylene trong ammoniac(NH3) lỏngxuất hiện vào năm 1937, cho đếnnhững năm 1970 đã được xem như là sự khẳng địnhvề tính chất đặc thù lập thể của quá trình này, không phụ thuộc vào điều kiện ngưng tụacetylene Theo một phương pháp cổ điển (Favorskii) 17-ketosteroid(AD, ADD) tácdụng với acetylene, có mặt base (potassium alkoxide, lithium diisopropylamide v.v ),phản ứng xảy ra mà không đụng chạm đến nhóm chức 3- keto, cho hiệu suất cao (9596%)17-ethynylcarbinol[7,23].

Thử nghiệm ở chính các điều kiện này, ngưng tụ với 9-OH AD phát hiện thấyđồng phân hoá bộ khung [24] và chỉ khi bảo vệ nhóm 3-keto bằng cách enol ether hóavà sử dụng tác nhân là phức chất lithium acetylide với ethylenediamine [24-26] chophépthựchiệnchuyểnhoávớihiệusuất30%.

Tính chất không bền vững của 9-OH AD [27] và do đó hiệu suất sản phẩm17- ethynylandrosta-4-en-9,17-diol-3-one là thấp, hiện tại không thể xem hợp chấttrunggian nàylàcótriểnvọngtrongtổnghợpcorticosteroidthế ở cácvịtrí9,11.

Một con đường lựa chọn khác tỏ ra đáng lưu ý hơn là ứng dụng phản ứng 17- ethynyl hoá [28] hợp chất 9 -AD [29-33] Ngưng tụ 9 -AD với acetylene có mặtt- BuOKxảy ravới hiệusuất 90% và không đòi hỏi bảo vệ nhóm 3-keto-

Lần đầu tiên vào năm 1979 Kanojia và cộng sự [34] đã chỉ ra khả năng điều chế17-ethynylcarbinol bằng cách ethynyl hoá trực tiếp 17-ketosteroid Trong trường hợpngưngtụ3-methoxyestronevớiacetylenetrongN-methyl-2-pyrrolidone/KOHđãnhận được17-ethynylcarbinol(mestranol)nhưdựđoán,cùngvớiepimer17-ethynylcarbinol (epimestranol) (87% và 13% tương ứng theo đánh giá bằngS K B M hay7%epimestranolđãđượctáchrabằngsắckýbảnmỏng điều chế).

Năm 1986, hãng Upjoin (Mỹ) đã lần đầu tiên giới thiệu phương pháp tổng hợp17-ethynylcarbinol như sau [35]: 17-ketosteroid được ngưng tụ với nguồn acetylene(C 2 H2, calcium carbide, potassium carbide hay những tác nhân khác sinh ra acetylenein situ), có mặt base mạnh (KOH,t-BuOK v.v ) và dung môi amine epimer hoá(ethylenediamine; 1,3-propylenediamine; 1,2-diaminopropane; 1,2- diaminocyclohexane v.v không dưới 5%); đồng dung môi là THF, Et2O, dioxane đãkhẳng định chắc chắn rằng vắng mặt dung môi epimer phản ứng xảy ra chỉ từ vùngvà chỉ tạo thành 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(- ethynylcarbinol Tuy nhiên, nếu để hỗn hợp phản ứng trong mộtkhoảng thời gian dài (24 ngày) có thể làm tăng thêm một lượng nhỏ sản phẩm 17- ethynyl.Thêmdungmôiepimer(5%)làmthayđổitỉlệ17-ethynyl/17-ethynylcarbinol (tùy thuộc vào chất đầu được sử dụng) từ 90/10 đến 75/25 (%). Vớimụcđ í c h đ i ề u c h ế , c á c t á c g i ả đ ề n g h ị t i ế n h à n h p h ả n ứ n g t r o n g d u n g m ô i 1 0 0 % amine, khiđó hiệus u ấ t 1 7-ethynylcarbinol đạt 50% Thực tế, hãng Gist- Brocadescủa New Zealand đã xây dựng bằng phát minh “phương pháp đặc thù lập thể

17-ethynyl hoá 14-hydroxy-17-ketoandrostane” Thêm vào đó, các tác giả khẳng địnhrằng: có mặt nhóm chức 14-hydroxy trong phân tử không làm thay đổi hướng lập thểcủa phản ứng này [19] Về nguyên tắc, phương pháp này ít khác biệt so với phươngpháptrướcđây,cóchăngk h i đ ó đ ể e t h y n y l h o á đ ã s ử d ụ n g p h ứ c c h ấ t c ủ a lithium acetylide với ethylenediamine là một sản phẩm thương mại bền vững dạng bộtdễ kiếm [26,36] Có khả năng, chính yếu tố 17-ethynylcarbinol được đưa ra khỏi môitrường phản ứng (dioxane), do vậy hiệu suất rất cao (92%) là chi tiết quan trọng củasángchếnàymàcáctácgiảđãkhôngđặcbiệtlưuýđến.

CCH OH Ở đây chúng tôi xét thấy có sự tương tự với phương pháp cyanohydrin tổng hợpcorticoid, khi đó 17-cyano hoá đặc thù lập thể 17-ketosteroid đạt được bằng cách kếttinh chọn lọc trực tiếp đồng phân 17-cyano từ môi trường phản ứng trong điều kiệncân bằng nhiệt động [16,37-41] Phương pháp điều chế chọn lọc 17-cyanohydrin nàyđã được công bố từ những năm 1953 [42], nhưng chỉ những năm gần đây mới đượcquan tâm thoả đáng vì các sản phẩm trung gian có thể được sử dụng trong tổng hợpcorticoid Rõ ràng có sự tương đồng giữa phương pháp cyanohydrin và ví dụ duy nhấtđược dẫn ra ở trên 17-ethynyl hoá 17-ketosteroid, có thể giả thiết rằng hướng này cóthểpháttriểntrongthờigiantới.

Quá trình chuyển hóa 17α-ethynylcarbinol đến dẫn xuất 17β-ethynyl tương ứngcóthểđượcthựchiệntheohaiphươngpháp:

(1) Epimer hóa gián tiếp thông qua 17β-OR-ester (R = -SO3H, -COCF3, -

NO2…)xúctácmuốikimloại(Ag + ,Cu + ,Hg + ,Hg 2+ )[34,38].

(2) Epimer hóa trực tiếp: Lưu Đức Huy và cộng sự [43-46] lần đầu tiên đã áp dụngthành côngphản ứngNicholas[47] đểepimer hoát r ự c t i ế p 1 7- ethynylcarbinol bỏqua giai đoạn ester hoá Phương pháp tỏ ra là một phương pháp chung trong tổng hợpmộtlớpchấtbấtkỳ17-Xthế-17- ethynylandrostene(X=O-,N-,S-,Hal-,C-).

Các phương pháp khác xây dựng mạch bên pregnane là rất phức tạp, tốn kém vàkhông có triển vọng thực tiễn do hiệu suất thấp các sản phẩm mong muốn Đó là tổnghợp với việc ứng dụng phản ứngWittigvà mô hình hoá phản ứng này (phản ứngHorner–Wadsworth–Emmons) [48], áp dụng phản ứng Knoevenagel [49], áp dụngphảnứngReformatskii[50-53]haylàcácphươngpháp khácđãbiết[54-57].

Phươngphápbảovệnhóm3-và20-ketosteroid

Tạo mạch bên pregnane theo phương pháp cyanohydrin có nhược điểm là đòi hỏiphải bảo vệ nhóm carbonyl (3-keto ) bởi nhóm này bị tấn công không mong muốn bởimộtsốtácnhân nhưtácnhân cơkim

Có rất nhiều phương pháp bảo vệ nhóm carbonyl trong các tài liệu đã công bố,trongđóphươngphápketalhóađượcứngdụngnhiềunhất.

Antonucci và cộng sự [58] ketal hóa 17α-hydroxy-17-deoxycorticosterone-21- acetate nhận được 3-monoethyleneketal Hơn nữa, việc sắp xếp lại nối đôi từ vị trí C- 4(5) sang C-5(6) khi hình thành ethyleneketal của 3-keto-∆ 4 -steroid cũng được thôngbáo[59].Với19-nor-3-keto-∆ 4 nhậnđượchỗnhợp∆ 5(6) -và∆ 5(10) Ảnh hưởng không gian của nhóm acetate đến 20-keto khi ketal hóa cortisoneacetate nhận được 3-monoethyleneketal với hiệu suất 60% trong điều kiện khắc nghiệtvà thời gian kéo dài hơn, trong khi đó ketal hóa cortisone cùng điều kiện lại nhận được3,20-bis-ketal Nhóm thế ở C-17 (như Br-) và C-21 (AcO-) làm giảm mạnh hoạt tínhcủachức20-keto.

Kashmirivàcộngsự[60]đãchuyểnhóacortisoneacetateđến3,20-bis-ethyleneketal với hiệu suất cao 90% bằng phương pháp cải tiến Áp suất giảm xuống0,5 mm Hg, thời gian phản ứng tăng lên 9 giờ đã ketal hóa được đồng thời cả hai vị trí3- và 20- keto Hiệu suất nhận được cao hơn là do áp suất thấp dẫn đến nhiệt độ phảnứnggiảmlàmchosảnphẩmkhôngbịphânhủy.

Theo tài liệu [61], hồi lưu một hợp chất trione (3,12,20-trione) với lượng dưethylene glycol trong benzene xúc tácp-TSA (hoặc BF3.Et2O) nhận được 3,12-bis- dioxolane (không công bố hiệu suất) Sự có mặt của nhóm 12-keto đã cản trở sự hìnhthành20-ketal(khivịtrí17α-cónhómOHhoặc H).

Với các 20-keto không thế ở vị trí C-21 có thể trao đổi dioxolane dễ dàng như 3- keto no 20,20-Cycloethylenedioxy dễ dàng tổng hợp bằng phản ứng với ethyleneglycol xúc tác acid (p-TSA, HCl, HBr, acid Lewis: ZnCl2, TiCl4, BF3…) trong

Các nhà khoa học Nga [6] lần đầu tiên đã đưa ra phương pháp ketal vòng hóa các3-ketosteroid tạo thành vòng 6 cạnh thay cho vòng 5 cạnh trước đây Do độ bền nhiệtđộng củavòng6 cạnh bền hơn vòng 5cạnh nênhiệu suất phảnứng caohơnh ẳ n (98%).17β-cyano-17α- hydroxyandrosta-4-en-3-onephảnứngvớineopentylglycoltrong dung môi CH 2 Cl2, có mặt triethyl orthoformate và xúc tácp-TSA trong 8 giờ ở0-5 o C nhận được 3,3-(2,2- dimethyl propylenedioxy)-17β-cyano-17α-hydroxyandrosta-5-ene.

Trong trường hợp cần monoketal hóa lựa chọn 3-keto (đặc biệt là trong sự có mặtcủa các nhóm keto khác ở vị trí 6-, 17- hoặc 20-) thì nên áp dụng phương pháp trao đổidioxolanehóavìphươngphápnàynhạycảmvớihiệuứngkhônggianhơn.

Với hệ thống 3-keto không liên hợp thì lựa chọn phương pháp bảo vệ dimethoxyhóa là phù hợp nhất Nhóm dimethylketal được tạo thành bằng phản ứng của chức ketovới MeOH trong sự có mặt của xúc tác phù hợp (p-TSA, SeO2, NBS).Phương phápnày có tính lựa chọn cao vì các nhóm 2-, 6-, 11-, 12-, 17- và 20-keto không bịdimethylketalhóatrongđiềukiệnnày.

Tuy nhiên phản ứng không xảy ra với nhóm carbonyl liên hợp Đây là hạn chếcủaphươngphápnàyvìhệthống 3-keto-∆ 4 làthườnggặptronghợpchấtsteroid.

Trường hợp có mặt nhóm 6-keto cùng hệ thống 3-keto no, do sự tương tác1:3mạnh giữa nhóm thếaxialở C-6 với H ở 8β- và 2β- (dãy 5α-steroid) và nhóm thế ở10β- làm giảm hoạt tính của 6-keto so với 3-keto Do đó nhóm 6-keto không phản ứngvới MeOH tạo thành 6-dimethylketal, thậm chí cả khi vắng mặt nhóm thế ở C-10(dẫnxuất19-nor)[64].

Đưanốiđôivào vịtrí1(2),9(11)và16(17)củaphântửsteroid

Tạolậpnốiđôi∆ 9(11 )và ∆ 16(17)

Một trong những tác nhân dehydrat hóa được sử dụng nhiều nhất là POCl3, tốtnhấtlàtrongsựcómặtcủamộtaminebậcbanhưPy.Tiếp đếnlàSOCl2t r o n gPy.

Sử dụng POCl3-Py [67] dehydrat hóa 11β-hydroxy (hoặc 11α-) đến∆9(11)ở nhiệtđộ phòng, trong điều kiện này nhóm 17α-hydroxy được bảo toàn Tác nhân này dườngnhư không thích hợpvới hệ thống 3-keto-∆ 4 , có thể do hìnht h à n h e n o l p h o s p h o r y l hóa Nếu sử dụng SOCl 2 -Py [68] cả hai nhóm hydroxy ở C-11 và C-

Dehydrat hóa nhóm 17α-hydroxy đến∆ 16(17) tương ứng có thể được thực hiệnbằng hỗn hợp của POCl3và Py Geurts và Vivat [63] dehydrat nhóm 17α-hydroxy hợpchấtvòng3-(1,2-ethanediyl)-acetalcủa17β-cyanoandrosta-5,9(11)-diene-17α-ol-3- onebằngPOCl3t r o n gPynhậnđượcdẫnxuất∆16(17)vớihiệusuấtcao(85%). Đểt r á n h d e h y d r a t h ó a 1 7 - h y d r o x y k h i s ử d ụ n g S O C l2-

[68]đãgiảmsựtiếpxúcgiữachấtđầuvớitácnhânvàtiếnhànhphảnứngởnhiệtđộ thấp,hơnnữaưuđiểmcủatácnhânSOCl2-Pynàylàcóthểápdụngvớihệthống3-keto-

Các∆ 9(11) -corticoid là những hợp chất trung gian quan trọng bởi vì các nhóm thếở C-9 làm tăng hoạttính khángkhuẩn.Các hợp chấtnày thường nhận được dodehydrat hóa các dẫn xuất 9α-, 11α- hoặc 11β-hydroxy, và do đó một vài phương phápchọn lọc đã đưa ra nhằm tăng hiệu quả của quá trình dehydrat hóa các steroid trong sựcómặtcủa hệthống 3-keto-∆ 4 vànhóm17- hydroxy.

1α-hoặcβ) với NBS trong Py và sau đó với SO2[69] Những nghiên cứu sau đó cũngkhẳng định phương pháp này (N-haloamide/SO2) cho hiệu suất vượt trội so với cácphương pháp khác (dường như tác giả không so sánh với phương pháp sử dụngCH3SO2Cl/SO2).

Methanesulfonyl chloride cũng được sử dụng để dehydrat hóa 11β-hydroxy,tốtnhất là trong hệ dung môi THF-Py và ở nhiệt độ thấp, cùng với sản phẩm chính là sảnphẩm phụ 11β-methanesulfonyl và∆ 16(17) [70] Một phương pháp khác cũng sử dụngtác nhândehydrathóamethanesulfonyl chloride chohiệu suất sảnphẩm chínht h ấ p hơn (75-80%) Tuy nhiên các nhà nghiên cứu thuộc công ty Merck [71] phát hiện ranếu methanesulfonyl chloride có chứa 10-20% mol SO2làm tăng hiệu suất tạo thànhnối đôi∆ 9(11) lên 92% trong DMF- collidine (trimethyl pyridine) ở 25-35 o C Vắng mặtSO 2 phản ứng không xảy ra Cơ chế phản ứng được cho là hình thành ester không bềnvàchínhsựmấtổnđịnhnàyđãtạorasảnphẩm,giảiphóngSO2v àanionsulfonate. Điểm đặc biệt của tài liệu [72] là tiến hành dehydrat hóa lựa chọn vùng 11α- hydroxy sử dụng PCl5(chất trung gian, chuyển thành POCl3), bằng cách loại bỏ hoặcgiảmthiểucácsảnphẩmphụchohiệusuấtcao. Để tạo nối đôi∆ 9(11) cũng có thể dehydrat hóa dẫn xuất 9α-hydroxy Điểm đặcbiệt của phản ứng dehydrat hóa 9α-OH AD là tạo thành đồng phân androsta-4,8(9)-diene- 3,17-dione (∆8(9)-AD) [73] Đồng phân này có giá trị Rftương tự∆9(11)-AD trênTLC và không thể tách khỏi nhau bằng phương pháp kết tinh Đây là nguyên nhân làmlàm cho hiệu suất phản ứng thấp và việc loại bỏ đồng phân không mong muốn này vôcùng khó khăn và tốn kém Nhận biết đồng phân∆ 8(9) -AD trong hỗn hợp sản phẩm cóthể được thực hiện, ví dụ, bằng các phương pháp phổ 1 H, 13 C-NMR, hoặc bằng sắc ký:HPLC,GC.

Phương pháp dehydrat hóa 9α-OH AD tổng hợp∆ 9(11) -AD đã biết có sử dụngdungmôi hữu cơ (cáchydrocarbon chứa Cl,c á c h y d r o c a r b o n t h ơ m , c á c e t h e r v ò n g , các base hữu cơ) Tuy nhiên, tác nhân dehydrat hóa làp-TSA

(dung môi C6H6) hoặc sửdung silica gel hấp phụ acid sulfonic hữu cơ (p-TSA, acid naphthalenesulfonic), dungmôi hydrocarbon thơm, cho hiệu suất tốt [29]; hoặc acid Lewis: FeCl 3 , TiCl4và hỗnhợp của chúng với silica gel trong một dung môi hữu cơ trơ [30], không có dấu vết củađồngphân∆8(9);hoặcacid chlorosulfonicHSO3Cl(dungmôiCH2Cl2)[74].

Mộtphương p há p n h ậ n đượccác∆ 9(11) -steroidcủa m ộ t s ố các a n d r o s t a n e , bao gồm∆ 9(11) -AD, phản ứng của 9α-hydroxysteroid (đặc biệt là 9α-OH AD) với acid chứaoxy không thơm có pKa ≤ 1,0 [74] Đó là acid được lựa chon từ nhóm các acid: acidchlorosulfonicHSO 3 Cl),sulfuric(H2SO4),phosphoric(H3PO4),methanesulfonic(CH3S

John và cộng sự [75] mô tả quá trình dehydrat hóa dùng thionyl chloride (SOCl2)trong dung môi Py để điều chếΔ 9(11) -progesterone Phương pháp này cũng được sửdụngđểdehydrathóa9α-OHAD.

Schubert và Onken [76] đã đề xuất phương pháp điều chế 9(11)- dehydrosteroidmột cách dễ dàng, bao gồm việc đun hồi lưu dung dịch của 9α- hydroxysteroid tươngứngvớimộtacidsulfonicthơm,đặcbiệtlàp- TSA.Mặcdùviệcsửdụng9α-hydroxytestosterone đã được đề cập một cách rõ ràng, các ví dụ chỉ được dẫn đối vớicác pregnane Sáng chế này chỉ dẫn ra một số ít và không rõ ràng các số liệu về hiệusuất và độ tinh sạch của sản phẩm Phương pháp này không áp dụng được đối với cáchợpchất9α-hydroxyandrostane.

Một phương pháp cải tiến được mô tả trong tài liệu [77] Đầu tiên, nhóm chức9α- hydroxy của hợp chất androstane được chuyển hóa tới nhóm 9α-OSOR (R là alkyl(1- 4C), phenyl hoặc phenyl có nhóm thế) Sau đó, dehydrat hóa bằng phản ứng vớithionyl chloride (SOCl 2 ) Phương pháp này cũng có nhược điểm là dùng dung môi độchại benzene, mặc dù cho hiệu suất không dưới 85% nhưng nhận được hỗn hợp cácđồng phânΔ 9(11) -steroid :Δ 8(9) - steroid với tỷ lệ 98 : 2, do phải thêm giai đoạn tinh chếbổsungnên phươngphápthực sự khôngtiêntiến.

Tài liệu [78] mô tả phương pháp điều chếΔ 9(11) -steroid được cho là đạt hiệu suấtcao bằng cách dehydrat hóa 9α-hydroxysteroid tương ứng sử dụng acid Lewis, ví dụ:FeCl 3 ,BF3v àcácphứccủanónhưBF3.Et2O,antimonypentachlorideSbCl5v àTiCl4.

Việc đưa nối đôi∆ 1(2) vào vòng A của phân tử corticoid làm tăng ái lực hóa họccủa chúng trong sự tiếp nhận glucocorticoid,t r o n g đ ó , c ù n g v ớ i t á c d ụ n g h i ệ p đ ồ n g của hệ thống 3-keto-∆ 4 làm giảm tốc độ suy giảm trao đổi chất, dẫn đến tăng hiệu lựcđiềutrị.

Quá trình∆ 1(2) -dehydro hóa vi sinh thường được tiến hành với tất cả tế bào. Dođây là một phản ứng phụ thuộc cùng lúc nhiều yếu tố, sự tái sinh liên tục của các đồngyếu tốcầnthiếtvẫnthườngđượcthựchiệnbằngcáchệthốngtếbàocóhoạttính.

Tàiliệu[79]giớithiệumộtphươngpháp1(2)-dehydrohóacácdẫnxuất3-keto- Δ 4 -steroidc ủ a a n d r o s t a n e P h ả n ứ n g 1 ( 2 ) - d e h y d r o h ó a s ử d ụ n g t ế b à o c ủ a c h ủ n g v i sinh có hoạt tính 3-ketosteroid-1-dehydro hóa cao, trong dungm ô i p h i p r o t o n c ó t h ể tan trong nước có chứa 8-40% thể tích H 2 O Quá trình diễn ra nhanh và có độ chọn lọccao.

R 4 = OHvà R 3 =Hhoặc CH 3 ;R 3 và R 4 nhómketo

Tài liệu [80] đã công bố phương pháp vi sinh dehydro hóa 1(2)-steroid, bao gồmhàng loạt androstane, pregnane…cho hiệu suất cao Nhược điểm của phương pháp nàylà sử dụng tế bào đông khô rất tốn năng lượng, nồng độ cơ chất thấp (cao nhất là 8 g/l),thời gian chuyển hóa dài (không ít hơn 24 giờ), sử dụng một lượng lớn dung môi hữucơ dễ cháy…Ví dụ 4 [80], quá trình dehydro hóa 1(2)- hợp chất 21-acetoxypregna-4,9(11),16-triene-3,20-dione được thực hiện trong đệm phosphate (pH 7,5) các tế bàođông khô (10 g/l, lên tới 79,6% hàm lượng của chất nền), với nồng độ steroid ban đầulà 8 g/l trong sự có mặt của menadione, và steroid trong dimethylformamide được đưavào môi trường chuyển hóa, nồng độ trong môi trường là 2% thể tích Sau thời giannuôi cấy 24 giờ ở nhiệt độ 31°C, nhận được một hỗn hợp gồm 21-acetoxy-Δ 1,4 - và 21-hydroxy-tươngứng,hàmlượngsản phẩm∆ 1,4 là97,8%cònlạilà2,2%chấtnền. Đã được biết nhiều nhất là phương pháp 1(2)-dehydro hoá vi sinh hợp chất 3- keto-∆ 4 bằngArthrobacter-17-simplex đã được đăng ký bằng phát minh [81], mô tả thínghiệm chuyển hoá∆ 9(11) -16β-methyl-20-ketopregnane Các dẫn xuất tương tự của nó11α- hydroxy-và9β,11β-epoxy vớicáchiệusuấttươngứnglà82,7%;76,7%v à 77,3%.Tuynhiênquá tr ìn h đượctiếnhàn hv ới nồngđộrấtthấpcơchấtsteroid: cơ chấtbanđầuđưavàochỉtừ0,18đến0,22g/ l.Điềunàylàmchoquátrìnhkhônghiệuquảkinhtế.

Có một quá trình kỹ thuật tổng hợp∆ 1(2) thông qua ví dụ điều chế betamethasonebằngcáchdehydrohoádẫnxuất∆ 4 - trunggiancủanóbằngchủngvis i n hArthrobacterđược mô tả trong sáng chế của Trung

Quốc, tuy nhiên cũng có nhượcđiểmlàhàmlượngcơchấtthấp[82].

Tổnghơpmachbêncorticoid

Chuyểnhoánhóm17-ethynylđếnmạchbêncorticoid

17-Ethynylcarbinol dễ dàng bị hydrat hoá được xúc tác bằng muối HgSO4đến20- ketosteroid(phảnứngKucherov)[90-93].C(21)-hydroxyhoá21-methyl-20-ketosteroid tạo thành có thể thực hiện bằng nhiều phương pháp khác nhau đã biết[14,94] Một trong số các phương pháp chuyển hoá nhóm 17-ethynyl đến mạch bêncorticoid là xử lý 17-ethynylandrostene bằng NBA trong dung dịch đệm H2O-AcOH,sau đó chuyển hoá 21,21- dibromo-20-keto đến 21-acetate tương ứng với hiệu suất 5070%,bằngcáchđunnóngvớiKOActrongdung môiphâncựcphiproton[95].

Cácp h ư ơ n g p h á p h o à n c h ỉ n h v à t h à n h c ô n g t ổ n g h ợ p 1 7- ethynylandrostenethúc đẩy việc tìm kiếm những phương pháp mới có khả năng chuyển hoá nhóm 17- ethynylđếnmạchbêncorticoid.Vàonăm1985đãxuấthiệnhaihướngnghiêncứuvà cả hai đều dự kiến sử dụng các hợp chất hữu cơ iod siêu hoá trị [38,96,97] Ở hướngnghiên cứu thứ nhất, 17-acetoxy-17-ethynylandrosta-1,4-diene-3-one được chuyểnhoá thành 17,21-diacetoxypregna-1,4-diene-3,20-dione [38] Giai đoạn chìa khoá làphản ứng giữa 17-acetoxy-17-ethynyl với hỗn hợp I2/ acid peracetic xảy ra địnhlượng tạo thành 21,21-diiodide; trong khi đó dẫn xuất 17-hydroxy-17-ethynyl củanókhôngphảnứng.Tuynhiên,thếiodtrongdẫnxuất21,21-diiodidehoặc21-monoiodide bằng nhóm acetoxy xảy ra khó khăn và chỉ có thể đạt được bằng cách xửlý với tetramethylammonium acetate (Me4NOAc) hoặc N-methyl-2-pyrrolidone, tươngứng Cần lưu ý rằngsự tạo thành 21,21- diiodide trong các điều kiện này là ngoài dựđoánđốivớicáctácgiảcóýđịnhápdụngphảnứngđượcphátminhnăm1971cho cácsteroid(Ogata vàUrasaki) [98].

CH 3 CO 2 Hii=NaOAc/Et 3 NOA c/Me 2 CO

Phản ứng iodoacetoxy hoá alkyne bằng acetyl hypoiodide (AcOI) sinh rain situkhi tương tác I 2v ớ i C H 3CO3H trong AcOH.vic-Acetyl iodide tạo thành dễ dàng bịthuỷ phân đến-hydroxy ketone [99,100] Tiếc rằng hướng nghiên cứu đó không có ýnghĩa thực tiễn trong trường hợp steroid Ở đây, phản ứng xảy ra mà không có sự thamgia của AcOI (tốc độ tạo thành nó từ CH 3 CO3H và I2có thể nhỏ) và nhóm 17- acetoxythamgialàmbềnhoáđiệntíchdươngởtrungtâmcarbocation.

Pháttriểntiếptụccácnghiêncứutheohướngnàytàiliệu[101]chothấyviệcsửdụngn g u ồ n A c O I k h á c ( p h e n y l i o d i n e d i a c e t a t e : P h I ( O A c )2hoặcI2trongC H3CO3H

[99,100]) khi tương tác cặp epimer 17-acetoxy-17-ethynylandrosta-4-en-17-ol-3- onekhông làm thay đổi tiến trình phản ứng, đồng thời tạo thành C(17)-epimer 21,21- diiodidetươngứng(17-ethynylcarbinoltrơtrongcácđiềukiệnnày).

Vắng mặt quá trình epimer hoá vào C-17 trong cả hai dãy hoá lập thể gây nênnghi ngờ đã được nêu lên ở [102] cơ chế tham gia của nhóm 17-acetoxy đòi hỏi khithừa nhận trạng thái chuyển tiếpAnghịch đảo một phần hay toàn bộ hoá lập thể trungtâmC - 1 7 t r o n g p h ả n ứ n g v ớ i 1 7-acetoxy-17-ethynylandrosta-4-en-3- one.C ó t h ể giả thiết nhóm acetoxy bên cạnh hoạt hoá liên kết acetylene quyết định nhanh hơn ảnhhưởng điện tử của nhóm acetoxy còn lại Cộng hợp nhanh chọn lọc vùng hai phân tửAcOI vào liên kết ba và sau đó vào liên kết đôi trong hợp chất trung gian kiểuB(vớihoálậpthểbanđầutrungtâmC-17),tạora21,21-diiodide[101].

Trong kế hoạch chuyển hoá một giai đoạn 17-ethynylsteroid đến 21-hydroxy- 20-ketopregnane, chúng tôi đặc biệt lưu ý đến phản ứng Mercusev [103,104] tương tácalkyne với phenyliodine bis-triflouroacetoxy (PIFA) có mặt nước Cơ chế phản ứngđượctrìnhbàynhư làtấncôngelectrophilephântửPIFAvàoliênkết ba.

Theo tài liệu [97] ứng dụng phản ứng này trong hoá học steroid cho phép thựchiệnchuyểnhoá17-ethynylcarbinoldãyestranoic(mestranol)đến17-iso-20- ketopregnanetươngứngvớihiệusuất5360%. Đây là ví dụ duy nhất được biết trước khi Lưu Đức Huy và cộng sự [43-46] bắtđầu nghiên cứu ứng dụng phản ứng này trong chuyển hoá 17-ethynylandrostane đến20- ketopregnane.Nhữngkếtquảnghiêncứu banđầucủatácgiả[45]đãchỉrarằngcon đường này tỏ ra hiệu quả trong tổng hợp chất “Reichstein S” (80%) và 11-deoxy-16,17-epoxycorticosterol (43%).Tuy nhiên, có mặt các nhóm thế có thể tích lớn ởvị trí 17- (ví dụ: -OMe) hay các nhóm chức khác nhau trong vòng C đều ảnh hưởngâmlênhiệuquảcủaquátrình.

Chuyểnhóa20-ketopregnaneđếnmạchbêncorticoid

Các hợp chất 20-ketopregnane nhận được từ phản ứng methyl hóa dẫn xuất 17- nitrilesteroid theo phương pháp cyanohydrin hoặc nhờ phản ứng hydrat hóa nhóm 17- ethynyl theo phương pháp acetylene bằng xúc tác HgSO4; có thể được chuyển hóamạchbêncorticoidtheomộttronghaiphươngphápsau:

 Thực hiện theo dãy phản ứng: 21-iodo hóa, acetoxy hóa hợp chất iodide nhậnđược với KOAc và cuối cùng thủy phân bằng dung dịch KOH/H 2 O để nhận được20-keto-21-hydroxy(mạchbêncorticoid)mong muốn,theosơđồ:

Một phương pháp nhận được 21-acetoxy (hợp chất "Reichstein S") của 17α- hydroxyprogesterone, 20-ketopregnane là đối tượngα-halogen hóa vị trí C-21 để thếmột nguyên tử Br trong sự có mặt của HCl, thu được dẫn xuất 21-bromo-21- chloro,đượcxửlýbằngKOAc trongsựcómặtcủamộtlượngnhỏ NaItrong acetone[105]. Hợp chất 21-acetoxy-17α-hydroxypregna-4,9(11)-diene-3,20-dione (21-acetoxy- Δ 9(11) -progesterone) cũng có thể được tổng hợp qua dẫn xuất 21-bromo [106] hoặc 21- chloro [56] củaΔ 9(11) -progesterone Phản ứng thế tiếp theo thay nguyên tử brom (hoặcchlor) bằng nguyên tử iod nhờ phản ứng với KI, và sau đó cho tương tác 21- iodo-Δ9(11)-progesterone với KOAc trong acetone [106] hoặc hỗn hợp acetone và

Tuy nhiên, trong quá trình chuyển từΔ 9(11) -progesterone đến dẫn xuất 21- bromohoặc 21-chloro cần thiết khóa hệ thống 3-keto-Δ 4 , sử dụng methyl hoặc ethyl 3,5-dioxolane, hoặc ketal hóa…Nếu không, sẽ hình thành các sản phẩm phụα-halogen hóaởvịtríC-2vàởvịtrí C-6vớilượngdưnhiềucủaBr 2h o ặ c Cl2.

Phương pháp 21-acetoxy hóa mạch bên pregnane áp dụng phương pháp iodo hóatrực tiếp mà không cần bảo vệ hệ thống 3-keto-Δ 4 cũng nổi tiếng Phương pháp nàyđược đề xuất bởi Hogg và các đồng tác giả vào năm 1955 [107] Để có được 21- acetoxycortisone và 21-acetoxyhydrocortisone từ 11α-hydroxyprogesterone, theo đónhóm methyl ở C-21 của phân tử steroid phản ứng với I 2 trong sự có mặt của một basehình thành21-monoiodide, sau đóđược chuyểnhóa đếndẫn xuất2 1 - a c e t a t e t ư ơ n g ứng.

Trongđó,R:11β-OHhoặc 11-keto Ứngdụnglớnnhấtphương phápiodohóatrựctiếplàtrongđiềuchếcortisoneace tatet ừ 1 7α-hydroxyprogesteronev ớ i h i ệ u s u ấ t t ổ n g 6 0 % [ 1 0 8 ] , t r o n g s á n g c h ế

[109]á p d ụ n g v ớ i 9α,17α- dihydroxyprogesterone.T à i l i ệ u [ 1 0 8 ] c ò n á p d ụ n g t h à n h côngphương pháplên hệthống3-keto-∆ 1,4 ;3α-ol-11-onecủa17α-hydroxypregnane.

R 1 : 3α-OH (1,4-no); R 2 : H; R 3 : 11- ketoR 1 : 3-keto(∆ 4 ); R 2 =9α-OH; R 3 =H

Công bố gần đây nhất với phương pháp từng phần xây dựng mạch bên corticoid(dioxyacetone) từ 17-ketoandrosterone, cụ thể là, bảo vệ nhóm 3-keto bằng ketal vòng,bảo vệ nhóm 17α-hydroxy hình thành 17α-(1-alkoxy) ethyl ester, alkyl hóa nhómnitrile và 21-acetoxy hóa bằng phương pháp iodo hóa trực tiếp, là phương pháp đượcmô tảtrongsángchế[6],áp dụngvớiAD.

Lưu Đức Huy và cộng sự [43] cũng đã thử nghiệm áp dụng thành công phản ứngMoriarty [110,111] để tiến hành 21-hydroxy hoá trực tiếp một vài 17-acetylsteroid sửdụng hệ oxy hóa PhI(OAc) 2 /KOH/MeOH Cơ chế phản ứng được giả thiết đi qua sảnphẩmtrunggian20,21-epoxysteroid:

Hiệnn a y nhómng hi ên c ứ u n à y vẫnđ a n g t i ế p t ụ c n g h i ê n c ứ u h oà n t h i ệ n p h ản ứngMoriarty[112].

Tổnghợp16β-methyl-17α-hydroxypregnane

Gắnm ả n h 16β-methyl-17α-hydroxyvào20-ketopregnane

Phương pháp ưa dùng nhất bao gồm quá trình epoxy hoá hợp chất∆ 16(17) -20- ketopregnane bằng H2O2trong môi trường kiềm, sau đó mở vòng chọn lọc lập thể sửdụng CH3MgBr, cho phép đồng thời đưa các nhóm 17α-hydroxy và 16β-methyl vàophântử 20-ketopregnane.

Dehydrath o á n h ó m 1 7α-hydroxyđ ế n s ả n p h ẩ m 1 6 ( 1 7 ) - d e h y d r o t ư ơ n g ứ n g c ó thể được thực hiện, ví dụ bằng hỗn hợp POCl3và Py hoặc ester hoá sơ bộ nhóm 17- hydroxy bằng acid methanesulfonic (CH3SO3H) và xử lí tiếp theo bằng collidine. Khiđótrongcảhaitrườnghợpnhóm9α- hydroxyvẫntồntại Tuynhiênđiềukiệnphảnứng có thể được thay đổi để đồng thời tách loại cả hai nhóm hydroxy ở C-9 và C-17.Sự kết hợp các phản ứng là phù hợp hơn trong trường hợp phản ứng dehydrat hóa vớisự hình thành củaΔ 9(11) -steroid xảy ra đồng thời với các giai đoạn tổng hợp sau - giảiphóng nhóm bảo vệ ở C-3 và C-17 Ví dụ xử lí bằng acid sulfuric hợp chất 9α-hydroxysteroid có các nhóm bảo vệ 3,3-ethylenedioxy và 17α- tetrahydropyranyloxy,vừa dehydrat hóa vừa giải phóng nhóm bảo vệ, chỉ một giai đoạn cho hợp chất 17α-hydroxy-3-keto-∆ 9(11) -steroid.

Phươngphápđãđượcnghiêncứurấttốttrêndãy∆ 5 -21-deoxy-∆ 16(17) -20-ketopregnane. Các tác giả ngay từ ban đầu đã bảo vệ nhóm hydroxy của hợp chất 3β-hydroxy-

∆ 5 bằng phương pháp ester hoá Hiển nhiên rằng nhóm bảo vệ ester này trongđiều kiện xúc tác kiềm là không bền vững Bởi vậy trong trường hợp này đòi hỏi phảitáitạolạinó[113].

Phối kết hợp phương pháp cyanohydrin tổng hợp 20-ketopregnane và phươngpháp này để tổng hợp 17α-hydroxy-16β-methyl-20-ketopregnane đã được áp dụng vớicác hợp chất 3-keto-∆ 4 -steroid có liên kết∆ 9(11) , sau khi bảo vệ nhóm 3-keto bằng cáchketalhóa[63].

Gắnnhóm methylvàovịtrí16β-phântửcorticosteroid

Cách ợ p c h ấ t∆ 9(11) -corticoid,v í d ụ∆ 9(11) - hydrocortisone,c ó t h ể đ ư ợ c s ử d ụ n g như là cơ chất để tiến hành 16-alkyl hoá Để đưa nhóm thế vào C-16 đầu tiên người tatiến hành dehydrat hoá nhóm 17-hydroxy Nhóm 17-hydroxy có thể được tách loại vớisựtạothànhdẫnxuất∆ 16(17) -steroid bằngcácphươngphápđãbiết.

∆ 16(17) -20-ketopregnane một cách đồng thời hay là tuần tự Theo cách tuần tự, ban đầungười ta đưa nhóm methyl vào với sự tạo thành 16β-methyl-17-deoxy Chẳng hạnnhóm 16β-methyl có thể được đưa vào bằng phản ứng của diazomethane (CH2N2) với21-acetoxy-∆ 16(17) -20-ketopregnane[114]nhậnđượcdẫnxuất16α,17α- diazomethyleneở n h i ệ t đ ộ 1 4 0 - 1 7 0 o C,h y d r o h o á h ợ p c h ấ t 1 6 - m e t h y l -∆ 16(17) - steroidnhậnđược vớinickelRaneydẫntớihợp chất16β-methylsteroid.

Tiếp theo việc đưa nhóm 17α-hydroxy vào 16β-methyl-20-ketopregnane có thểđược thực hiện, ví dụ theo phương pháp Barton [115,116] bằng cách oxy hoá bằng oxykhôngkhítrongsự cómặtcủabasemạnh. Đã được biết các ketosteroid có nguyên tử hydro bậc ba phản ứng với oxy trongsự có mặt của base mạnh tạo thànhα-hydroperoxy, hợp chất này có thể dễ dàng bị khửhoá đến dẫn xuất hydroxy Điều chế các hợp chất 17α-hydroperoxy-20-ketopregnanevà chuyển hoá chúng đến các hợp chất 17α-hydroxy tương ứng lần đầu tiên đã đượcmô tả bởi Barton và cộng sự [115,117] Phương pháp bao gồm ban đầu là enol hoáoxosteroid trong alcohol no bậc ba (ví dụt-BuOH) với sự có mặt lượng dưtert-alkoxide tương ứng (t-

BuOK) và cho khí O2hay không khí đi qua cho đến khi tạothành nhóm hydroperoxy Khác với nhóm methyl ở C-16 với cấu hìnhα-, sự có mặtcủa nhóm 16β-methyl không gây cản trở không gian đối với quá trình enol hoá 20-ketovớisựtạothành∆ 17(20) - enolatkhiđưa nhómthếvào17α-.Vìvậyphươngphápoxyhoá trực tiếp hợp chất 16β-methyl-

20-oxo theo Barton có thể được xem như là phươngpháp lựa chọn để mô hình hoá các hợp chất 21- deoxysteroid Tuy nhiên phương phápnày,c ó t h ể , kh ôn gcó h i ệ u quả k i n h tế v ớ i cách ợpc hất có m ạ c h b ê n di ox yac et one khác với các hợp chất 21-deoxy Bởi vì trong điều kiện xúc tác kiềm có thể xảy ra táchnhóm bảo vệ ester của nhóm hydroxy ở C-21 và xảy ra các quá trình phụ không mongmuốn có đặc tính oxy hoá đối với nhóm hydroxy ở C-

21,đ ư ợ c t h ú c đ ẩ y b ở i b a s e mạnh.SựhiệndiệnhệthốngliênhợpkhôngđượcbảovệtrongvòngAcóthểdẫntới tạo thành tạp chất có đặc tính oxy hoá, do vậy cần thiết bảo vệ nó chẳng hạn bằng cáchchuyểnthànhenolester.

Như tài liệu [115] đã chỉ ra, việc chuyển hoá nhóm 17α-hydroperoxy đến 21- deoxy-∆ 9(11) -20-ketopregnane theo Barton không đòihỏibảo vệt r ư ớ c l i ê n k ế t đ ô iΔ 9(11) Đã chỉ ra khả năng ứng dụng của phương pháp này đối với các hợp chất 16β- methyl-∆ 9(11) -20-ketopregnane dãy 5α-, 5β- và∆ 5 Tuy nhiên, không đề cập đến hợpchất 16β-methylsteroid có nhóm∆ 4,9(11) -3-keto, chỉ thấy mô tả quá trình điều chế 17α- hydroperoxyprogesterone.

Khử hoá nhóm hydroperoxy đến hydroxy có thể được thực hiện bằng phươngpháp đã biết, ví dụ bằng tác dụng của Zn bột trong môi trường acid acetic hay là hydrohoáxúctác.

Như vậy từ phân tích các tài liệu tham khảo cho thấy phương pháp hiệu quả vàtriển vọng nhất tổng hợp các pregnane từ 17-ketoandrostene có các nhóm thế ở C-9hoặccảC-9vàC-11làhaiphươngpháp“tổnghợpacetylene”và“tổnghợpcyanohydrin” Để đưa nhóm 16β-methyl vào 20-ketopregnane là phương pháp “epoxyhoá-alkylhoá”.

Các loại dung môi, hoá chất mua của công ty Sigma Aldrich (Mỹ), Merck (Đức)và Trung Quốc Các loại dung môi đều được tinh chế, làm khan nếu cần và cất lại ởđiểmsôitrướckhisử dụng.

Sắc ký bản mỏng điều chếdùng silica gel G.Merck 60 F254và sắc kí cột dựngsilicagelMerckcỡhạt63-200àm.

Celite®545 (Filter agent; SiO2; Sigma Aldrich) cùng vớisilica gel Merck cỡ hạt63-200àmđểlọc,sắckýcộtloạibỏkimloại(Se). Điểmnóngchảyđo trên máyBoetius(CHDC Đức).

Phổ IR ghi trênmáy FT-IR-IMPACT-410 của hãng Nicolet (Mỹ),d ạ n g v i ê n nénvớiKBr.

Phổ NMR đo trên máy Bruker Advance-500 MHz và 400 MHz, dung môiCDCl 3,h o ặ c CD3OD,hoặcDMSO-d 6,chấtnộichuẩn TMS.

Phổ ESI-MS đo trên máy Agilent 6310 Ion Trap, dung môi

CHCl3.PhổEI-MSđotrên máyMS-5989B,dung môiCHCl3.

9α-OH AD được tổng hợp từ AD theo phương pháp chuyển hóa vi sinh(hiệusuất82,9%;hàmlượng9α-OHAD98,0%).ADđượcchuyểnhóavisinht ừ phytosterol(hiệu suất 72,6%; hàm lượng AD 97,8%) Phytosterol được thu hồi từ phếphụthảicủaquátrìnhchếbiếndầuđậutương[8].

Phươngphápdehydrathóa9 α-OHADtổnghợp androsta- 4, 9(11)- diene-3,17-dione(Δ 9 -AD)(2)

Hỗn hợp của 90,6 mg (0,30 mmol) 9α-OH AD(1); 1,68 mlCHCl3và 0,33 ml(4,82 mmol) acid H3PO485% được khuấy và hồi lưu trong 2,0 giờ Sau khi làm lạnhxuống nhiệt độ phòng, hỗn hợp phản ứng được rửa bằng H2O đến pH = 7, làm khandịch CHCl3v à c h ư n g c ấ t d u n g m ô i n h ậ n đ ư ợ c (2) Kết tinh sản phẩm bằng EtOAcnhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổ được tóm tắttrongBảng3.4.

Phươngphápcôn ghơ

SửdụngKCN

AcOH (0,03 ml; 0,56 mmol) được thêm, trong vòng 30 phút ở nhiệt độ phòng,vào một hỗn hợp của 17-ketosteroid (0,35 mmol) và KCN (88,75 mg; 1,36 mmol)trong MeOH (0,71 ml) Hỗn hợp được khuấy ở nhiệt độ phòng và sau khoảng 1,5 giờtoàn bộ chất đầu và tác nhân tan hoàn toàn và sau khoảng 2,5 giờ sản phẩm phản ứngbắt đầu tạo thành dạng vẩn đục Để yên tĩnh hỗn hợp phản ứng qua đêm rồi thêm vào0,05 ml AcOH, khuấy đều Sau khi thêm H 2 O, tủa tách ra được lọc, rửa với

H2O đếnpH = 7, sấy khô tốt nhất là thấp hơn 56 o C, nhận được sản phẩm thô Kết tinh sản phẩmthô trong các hệ dung môi phù hợp, ví dụ sử dụng EtOH, nhận được sản phẩm sạch sắcký.

2.2.1.2 Tổnghợp17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxy-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(3) Áp dụng phương pháp trên, từ∆ 9 -AD (2) tổng hợp thành công 17α-hydroxy-17β- cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one (3) Kết tinh từ EtOAc, nhận được sản phẩm sạchsắcký.Hiệusuất,cácđặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Sửdụngacetonecyanohydrin

Mộth ỗ n h ợ p c ủ a 0 , 3 5 m m o l 1 7 - k e t o s t e r o i d ; 0 , 2 8 m l M e O H ; 0 , 0 6 m l ( 0 , 7 0 mmol) acetone cyanohydrin và 0,01 ml dung dịch NaOH 3,3M trong H2O được khuấyở 36-40 o Ctrong khoảng thời gian từ1,5-4,0 giờtùy theonguyênliệuđầu.0 , 0 6 m l H 2 O được thêm vào và hỗn hợp được để yên tĩnh qua đêm Sau đó 0,24 ml H2O đượcthêm vào và hỗn hợp được khuấy 2 giờ ở nhiệt độ phòng Tủa tách ra được lọc, rửabằng hỗn hợp MeOH: H 2 O (1:2) và sau đó bằng H2O đến pH = 7, sấy khô tốt nhất lànhiệt độ thấp hơn 56 o C, nhận được sản phẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệdung môiphùhợp,vídụsửdụngEtOAc,nhận được sảnphẩmsạch sắc ký.

2.2.2.2 Tổnghợp17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxy-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(3) Áp dụng phương pháp trên, từ∆ 9 -AD (2) tổng hợp thành công 17α-hydroxy-17β- cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one (3) Kết tinh sản phẩm thô bằng EtOAc nhận đượcsản phẩm sạch sắc ký Các đặc trưng vật lý và phổ của sản phẩm tương tự như thựchiệntheomục2.2.1.2

Phươngphápbảovệnhómcarbonyl

Phươngphápbảo vệnhómcarbonylsửdụngneopentyl glycol

3-keto (hoặc 20-keto)-steroid (0,30 mmol) và 0,36 ml CH2Cl2được khuấy trongdòng khí N2(khan).146,5mg (1,41mmol) neopentyl glycol và0,92 ml triethylorthoformate được thêm vào Làm lạnh hỗn hợp phản ứng xuống 0-5 o C và sau đó thêmvào 92,0 mgp-TSA Hỗn hợp được tiếp tục khuấy trong dòng khí N2(khan) ở 0- 5oCtrong8giờ.Dừngphảnứngbằngcáchthêmnhỏgiọt0,09mlEt3Nvà7,36mlH2O Để yên tĩnh hỗn hợp qua đêm ở nhiệt độ 0-5 o C Tủa tách ra đem lọc chân không và rửanhiều lần bằng H 2 O đến trung tính Dịch lọc được chiết 3 lần với CH2Cl2hoặc CHCl3.Dịch chiếtđược chưng cất dướiáp suất giảm đến gần hếtdungmôi Cặnthuđ ư ợ c được hòa tan dạng nhão và khuấy trong hỗn hợp gồm 0,28 mln-hexane và 0,28 mln-heptane ở 0-5 o C trong 30 phút Lọc chân không tủa tách ra, rửa tủa 2 lần bằng hỗn hợpdung môi trên, sau đó bằng

H2O đến pH = 7 Sấy khô, tốt nhất là ở nhiệt độ thấp hơn46 o C, nhận được sản phẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệ dung môi phù hợp,vídụsử dụngacetone, nhậnđược sảnphẩmsạchsắc ký.

2.3.1.2 Tổnghợp17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxy-3,3-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β- cyanoandrosta-5,9(11)-diene(4a) Áp dụng phương pháp trên, từ 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3- one (3) tổng hợp thành công17α-hydroxy-3,3-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-17β- cyanoandrosta-5,9(11)-diene (4a) Kết tinh từ acetone, nhận được sản phẩm sạch sắcký.Hiệusuất,các đặctrưng vậtlývàphổ đượctómtắttrongBảng3.4.

2.3.1.3 Tổnghợp3,20-bis-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-16α,17α-α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-epoxypregna-5,9(11)- diene(10a) Áp dụng phương pháp trên, từ 3,3-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-16α,17α- epoxypregna-5,9(11)-diene-20-one(9)tổnghợpthànhcông3 , 2 0 - b i s - ( 2 , 2 - d i m e t h y l propylene dioxy)-16α,17α-epoxypregna-5,9(11)-diene (10a) Kết tinh từEtOAc, nhậnđược sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổ được tóm tắt trongBảng3.4.

Phươngphápchungbảovệchức3-keto- ∆ 4 củaphântửsteroidsửdụngethyleneglycol

Hỗn hợp gồm 0,30 mmol 3-keto-∆ 4 -steroid; 0,11 ml trimethyl orthoformate; 70ml ethylene glycol (10,20m m o l ) v à 2 , 4 m g p-TSA dạng nhũ tương được khuấy ở40oC trong khoảng 10-12 giờ, dòng khí N 2 (khan) đi qua Kiểm tra bằng SKBM thấyvết chất đầu còn rất mờ, dừng phản ứng Sau khi trung hòa bằng Et3N hỗn hợp đượcchưng cất dưới áp suất thấp ở nhiệt độ không cao hơn 40 o C đến khi dung môi khôngngưng tụ rồi thêm nước đá vào Khuấy 30 phút ở nhiệt độ phòng rồi lọc rửa tủa tách ranhiều lần bằng H 2 O đến pH = 7 Sấy khô trong tủ sấy chân không tốt nhất ở nhiệt độkhông cao hơn 36 o C, kết tinh lại từ dung môi phù hợp, ví dụ như MeOH, nhận đượcsảnphẩmsạch sắcký.

2.3.2.1 Tổnghợp3,3-(1,2-ethyleneketal)-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β-cyanoandrosta-5,9(11)-diene-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-ol(4b) Áp dụng phương pháp trên, từ 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3- one (3) tổng hợp thành công 3,3-(1,2-ethyleneketal)-17β-cyanoandrosta-5,9(11)-diene- 17α-ol (4b) Kết tinh từ MeOH nhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.3.2.2 Tổng hợp 3,3-(1,2-ethyleneketal)-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-dihydroxypregna-5,9(11)-diene-20- one-21-acetate(4c) Ápdụngphươngpháptrên,từ17α,21-dihydroxypregna-4,9(11)-diene-3,20-dione-21-acetate(17)tổnghợpthànhcông3,3-(1,2-ethyleneketal)-17α,21-dihydroxypregna-5,9(11)-diene-20-one-21-acetate (4c) Kết tinh từ acetone nhận đượcsản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổ được tóm tắt trongBảng3.4.

Phươngphápchungbảovệchức2 0 -

Hòa tan 0,25 mmol 20-ketosteroid (đã bảo vệ chức 3-keto) trong 0,91 ml

CH2Cl2,thêm vào 0,91ml ethylene glycol (16,3 mmol); 0,46m l t r i e t h y l o r t h o f o r m a t e v à 2 , 4 mgp-TSA Hỗn hợp phản ứng được khuấy ở nhiệt độ phòng trong khoảng thời gian 6giờ đồng thời liên tục dẫn khí N2( k h a n ) q u a h ệ p h ả n ứ n g K i ể m t r a S K B M n ế u t h ấ yhếtchấtđầuthì dừng phảnứng Trung hòabằng Et3N sauđó cấtloại dungmôi dưới áp suất giảm ở nhiệt độ thấp hơn 45 o C Nước đá được thêm vào, khuấy ở nhiệt độ phòng,tủa tách ra được lọc hút chân không, rửa bằng H 2 O nhiều lần đến pH = 7, sấy khô tốtnhất là thấp hơn 45 o C, nhận được sản phẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệdung môiphùhợp,vídụsửdụngacetone,nhậnđược sảnphẩmsạchsắc ký.

2.3.3.1 Tổnghợp3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)-16α,17α-α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-epoxypregna-5,9(11)- diene(10b) Áp dụng phương pháp trên, từ 3,3-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-16α,17α- epoxypregna-5,9(11)-diene-20-one(9)tổnghợpthànhcông3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)-16α,17α- epoxypregna-5,9(11)-diene (10b) Kết tinh từ acetone, nhận được sản phẩmsạchsắcký.Hiệusuất,cácđặctrưngvật lývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.3.4 Tổnghợp3,17-bis-(1,2-ethyleneketal)-androsta-5-en-9α-ol(10c)

Hỗn hợp gồm 0,1 g 9α-OH AD (0,33 mmol); 1,00 ml CH2Cl2; 1,00 ml ethyleneglycol (17,9 mmol); 0,50 ml triethyl orthoformate và 7,5 mgp-TSA được khuấy 5 giờởn hi ệt độ p h ò n g D ừn gp hả n ứ n g , t ru ng hò abằ ng Et 3 Nsau đ ó chư ng cấ tb ớt du ng môi, thêm nước đá và khuấy Tủa tách ra đem lọc rửa bằng H2O đến pH = 7, sấy khô ởdưới 36 o C, nhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổđượctómtắttrongBảng3.4.

Tổnghợp9α-hydroxy-3-methoxyandrosta-3,5-diene-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-one(4d)

0,09 ml trimethyl orthoformate được thêm vào dung dịch của 90,6 mg (0,30mmol) 9α-OH AD (1) trong 1,24 ml (30,7 mmol) MeOH khan Nhỏ giọt dung dịchH 2 SO45% trong MeOH khan đến pH = 0,4 Khuấy 1 giờ ở nhiệt độ phòng Thêm 0,2ml H2O rồi tăng chỉ số pH lên 2,5 và khuấy tiếp 30 phút Trung hòa dịch phản ứng,thêm 0,09 ml H2O và khuấy ở 5-10oC Lọc, rửa tủa tách ra bằng H2O đến trung tínhnhậnđượcsả np hẩm (4d).Kết t i n h l ạ i t ừ Me O H nhậ nđ ượ c s ả n p h ẩ m sạchs ắ c k ý Hiệusuất,cácđặctrưng vậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Dehydrathóa17α-hydroxysteroidđếndẫnxuất∆ 16(17) tươngứng

Phươngphápchung

Nhũt ư ơ n g c ủ a 0 , 2 5 m m o l 1 7α-hydroxysteroid( đ ã b ả o v ệ c h ứ c 3 - k e t o ) t r o n g 0,71mlPy(khan)đượckhuấy trongdòngkhíN2(khan),0,07ml(0,75mmol)phosphor oxychloride (POCl3) (khan) được thêm vào Hỗn hợp được khuấy 10 giờ ở45-

HCl (0,07 ml HCl đặc trong5,70ml H2O) đang được khuấy và làm lạnhở -

1 5 oC(nước đá/muối) Tủa tách ra được lọc, rửa bằng H2O nhiều lần đến pH = 7, sấy khô tốtnhất là thấp hơn 50 o C, nhận được sản phẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệdung môiphùhợp,vídụsửdụngacetone,nhậnđược sảnphẩmsạchsắc ký.

Tổng hợp3,3-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-17-cyanoandrosta- 5,9(11),16(17)-triene(5)

triene(5) Áp dụng phương pháp trên, từ 3,3-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-17β-cyano-17α-hydroxyandrosta-5,9(11)-diene(4a)tổnghợpthànhcông3,3-(2,2-dimethylpropylene dioxy)-17-cyanoandrosta-5,9(11),16(17)-trien (5) Kết tinh từ acetone, nhậnđược sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổ được tóm tắt trongBảng3.4.

Phươngp h á p c ộ n g h ợ p a c e t y l e n e v à o h ợ p c h ấ t 1 7 -

Tổnghợp9α,17β-dihydroxy-17α-ethynylandrosta-4-en-3-one

a Từ 9α-OH AD: Thêm vào dung dịch của 96,6 mg (0,32 mmol) 9α-OH AD (1) trong0,70 ml THF khan 160,0 mg (1,74 mmol) lithium acetylide trong ethylene diamine.Khuấy hỗn hợp phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 20 giờ Sau khi làm lạnh pH củadịch phản ứng được điều chỉnh xuống 1 bằng dung dịch HCl 4M, khuấy thêm 45phút ở nhiệt độ phòng Cất quay kiệt dung môi, chiết cặn bằng CHCl3, rửa và làmkhandịchchiết.Tuynhiên,khôngnhậnđượcsảnphẩmmongmuốn. b Từ 9α-hydroxy-3-methoxyandrosta-3,5-diene-17-one (4d): Thêm vào dung dịch của100,0 mg (0,32 mmol) (4d) trong 0,70 ml THF khan 160,0 mg (1,74 mmol) lithiumacetylide trong ethylene diamine Khuấy hỗn hợp phản ứng ở nhiệt độ phòng trong20 giờ Sau khi làm lạnh pH của dịch phản ứng được điều chỉnh xuống

1 bằng dungdịch HCl 4M, khuấy thêm 45 phút ở nhiệt độ phòng Cất quay kiệt dung môi, chiếtcặn bằng CHCl 3 , rửa và làm khan dịch chiết Tuy nhiên, không nhận được sản phẩmmong muốn.

Tổnghợp17α-ethynyl-17β-hydroxyandrosta-4,9(11)-diene-3-one(7)

Nhũ tương của 78,4 mg (0,70 mmol)t-C4H9OK (khan) trong 3,50 ml THF (khan)được làm lạnh xuống -20 o C (MeOH/nước đá) đồng thời vừa khuấy vừa cho dòng khíC 2 H2s ạ c h ,khanliêntụcsụcvàotrongkhoảng1giờ.Giữnhiệtđộhỗnhợpở-15÷-

20 o C (MeOH/nước đá), sau đó nhỏ giọt dung dịch của 99,4 mg (0,35 mmol)∆ 9 -AD (2)trong 1,40 ml THF (khan) Tiếp tục khuấy hỗn hợp ở nhiệt độ này trong khoảng 1 giờvà ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ Thêm H2O lạnh và acid hóa dịch phản ứng bằng dungdịchHC l4 Mt ro ng H2Ođến pH =4 Cấ tq uay hếtdu ng m ô i dư ới á p su ấ t g iả mr ồichiết dịch phản ứng với CHCl3, rửa dịch CHCl3nhiều lần bằng H2O đến pH = 7 Saukhi chưng cất dung môi, sấy khô, cặn thu được đem kết tinh trong acetone nhận đượcsản phẩm

(7) sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổ được tóm tắt trongBảng3.4.

PhươngphápepimerhóagiántiếptrungtâmC- 17hợpchấtsteroidthôngquaester17-ONO 2

Tổnghợp 17α-ethynyl-17β-nitrooxyandrosta-4,9(11)-diene-3-one(7’)

Nhỏgiọt0,10ml(1,4mmol)acidHNO36 3 %vàohuyềnphùcủa100,0mg(0,32 mmol)17α-ethynyl-17β-hydroxyandrosta-4,9(11)-diene-3-one(7)trong1,0mlanhydride acetic ở -15 o C (nước đá/muối) Khuấy 1 giờ ở nhiệt độ này sau đó thêm 5,0ml nước đá, tủa tách ra đem lọc, rửa bằng H2O đến pH = 7 Sấy khô sản phẩm ở nhiệtđộ thấp,kết tinh trong EtOAc nhận được sản phẩm (7’) sạch sắc ký Hiệu suất, các đặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Tổnghợp 17β-ethynyl-17α-hydroxyandrosta-4,9(11)-diene-3-one(8)

Hỗn hợp 99,4 mg (0,28 mmol) 17α-ethynyl-17β-nitrooxyandrosta-4,9(11)-diene- 3-one (7’); 0,64 ml THF; 0,12 ml (0,67 mmol) H2O cất và 336,7 mg (1,8 mmol)AgNO3đ ư ợ c k h u ấ y ở n h i ệ t đ ộ p h ò n g t r o n g 2 4 g i ờ T h ê m v à o 2 , 4 0 m l d u n g d ị c hNH4Cl bão hòa có hòa tan 24,0 mg KCN Chiết dịch phản ứng bằng CHCl3,rửa dịchchiết CHCl3bằng H2O đến pH = 7 Sau khi làm khan bằng Na2SO4(khan), cất kiệtdungm ôi rồikế t tinhcặ n trongace to ne n hậ n đượcsản phẩ m (8)s ạ c h sắc k ý

H iệ u suất,các đặctrưngvậtlý vàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Phươngpháptổnghợpcác20-ketosteroid(mạchbênpregnane)

α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(.1.1 Phươngpháp chung

α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(.2.1 Phươngpháp chung

Dung dịch của 0,25 mmol 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta (đã bảo vệ chức 3- keto) trong 0,89 ml THF (khan) được khuấy, đồng thời cho dòng khí N2(khan) liên tụcchạy qua 0,10 ml (1,05 mmol) C2H3OC2H5và 19,6 mgp-TSA (nếu chức carbonyl đãđược bảo vệ bằng neopentyl glycol) hoặc 13,0 mgp-TSA (nếu chức carbonyl đã đượcbảo vệ bằng ethylene glycol) được thêm vào Thực hiện phản ứng bảo vệ nhóm 17α-hydroxy trong khoảng 30 phútở n h i ệ t đ ộ p h ò n g , k ế t t h ú c b ằ n g c á c h t h ê m v à o E t3Nđến pH = 8-9 Giảm nhiệt độ xuống -20 o C (MeOH/nước đá), nhỏ giọt 0,54 ml

(0,86mmol)dungdịchCH 3 Li1,6MtrongEt2O,nângdầnlênnhiệtđộphòngvàkhuấytiếp

3 giờ Làm lạnh hỗn hợp phản ứng xuống 0-5 o C rồi thêm vào bằng cách nhỏ giọt hỗnhợp MeOH (0,41 ml), H2O (0,16 ml) và HCl đặc (0,16 ml) Khuấy hỗn hợp khoảng 15giờ ở nhiệt độ phòng, sau đó thêm H2O (1,41 ml), tiếp tục khuấy thêm 1 giờ Tủa táchra được lọc hút chân không, rửa bằng H2O nhiều lần đến pH = 7, sấy khô tốt nhất làthấphơn50 o C,nhậnđượcsảnphẩmthô.Tinhchếsảnphẩmthôbằngthanhoạttính, dung môi CH2Cl2(tỉ lệ 1 g steroid : 30 ml CH2Cl2: 0,15 g than hoạt tính) và kết tinh lạitrongdungmôithíchhợp,vídụ sửdụngacetone,nhậnđượcsảnphẩmsạchsắc ký.

α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(.2.2 Tổnghợppregna-4,9(11)-diene-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-ol-3,20-dione (6b)

Theophươngphápacetylene,hydrathóanhómethynyltổnghợppregna-4,9(11)- diene-17α-ol-3,20-dione(6b)

93 mg (0,30 mmol) 17β-ethynyl-17α-hydroxyandrosta-4,9(11)-diene-3-one (8)được hòa tan trong hỗn hợp gồm 1,50 ml THF và 6,00 ml MeOH Thêm vào 0,30 mldung dịch HgSO 4 (được chuẩn bị bằng cách: Hòa tan 195 mg HgO vào 0,15 ml

H2SO4đặc và 3,00 ml H2O) Khuấy hỗn hợp phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 3 giờ. Trunghòadịchp hản ứn g bằngEt3Nsauđ óch ưn gc ất dungmô idưới áps uất giảm.

Th êm H2OvàchiếtdịchphảnứngbằngCHCl3.RửadịchCHCl3n h i ề ulầnbằngH2OđếnpH

= 7, làm khan và chưng cất dung môi nhận được sản phẩm (6b) sạch sắc ký có các đặctrưngvậtlývàphổtươngtựnhư thực hiệntheophươngpháp2.7α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(.2.2.

Phươngpháptổnghợpcácdẫnxuấtepoxy

TheophươngphápoxyhóanốiđôiC=Cliênhợp

2.8.1.1 Tổngh ợ p 3 , 3 - ( 2 , 2 - d i m e t h y l p r o p y l e n e d i o x y ) - 1 6α,17α- α , 1 7α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one( α - e p o x y p r e g n a - 5 , 9 ( 1 1 ) - diene-20-one(9)

5,9(11),16(17)-triene-20-one (6a); 0,86 ml THF; 0,43 ml MeOH; 0,09 ml dung dịchNaOH bão hòa trong MeOH và 0,09 ml (1,90 mmol) dung dịch H 2 O260% trong

H2Ođược khuấy trong dòng khí N2(khan) ở 40-45oC trong khoảng 20 giờ Phần lớn dungmôi được chưngcất dưới áp suất giảm, sauđón ư ớ c đ á đ ư ợ c t h ê m v à o đ ồ n g t h ờ i khuấy ở nhiệt độ phòng trong 30 phút Tủa tách ra được lọc hút chân không, rửa bằngnước nhiều lần đến pH = 7, sấy khô tốt nhất là thấp hơn 45 o C, nhận được sản (9) Kếttinh từ acetone, nhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, cácđ ặ c t r ư n g v ậ t l ý v à phổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.8.1.2 Tổnghợp16α,17α-α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-epoxypregna-5-en-3β-ol-20-one (23)

89,0 mg (0,25 mmol) DPA được hòa tan trong 6,00 ml MeOH Làm lạnh dungdịch xuống 15 o C Thêm vào 0,20 ml dung dịch KOH 4N cùng với 0,40 ml (3,9 mmol)H 2 O230% Hỗnhợpđược giữ trongtủ lạnh ở 5oC trong 24giờ.T h ê m v à o

4 0 0 m l H2O, tủa tách ra đem lọc rửa với H2O đến trung tính Sau khi sấy khô, kết tinh lại từMeOH nhận được sản phẩm (23) sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổđượctómtắttrongBảng3.4.

Theophươngphápdehalohydrin

0,20mmol9α-bromo-11β-hydroxysteroidđươc hòatantrong4,93mlhỗnhơp MeOH:CHCl3=3:2.Khuấy đảotrongdòngN 2 ở0 - 5 o C,0,41ml(0,41mmol)dung dichNaOH1Mt r o n g H2Ođươc thêmvàobằngcáchnhỏgiot trongvòng50phút.Sau 3h trung hòa bằng AcOH Cất giảm dung môi trong chân không rồi đổ hỗn hợp vào4,90 ml nước đá, khuấy ở nhiệt độ phòng trong 30 phút Tủa tách ra được lọc hút chânkhông, rửa bằng H 2 O nhiều lần đến pH = 7, sấy khô tốt nhất là thấp hơn 50oC, nhậnđược sản phẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệ dung môi phù hợp, ví dụ sửdụngacetone,nhậnđược sảnphẩmsạchsắcký.

2.8.2.2 Tổnghợp9β,11β-epoxy-16α,17α-β-methyl-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-dihydroxypregna-4-en-3,20- dione(19a) Ápdụngphươngpháptrên,từ9α-bromo-16β-methyl-11β,17α,21-trihydroxypregna- 4-en-3,20-dione-21-acetate(18a)tổnghợpthànhcông9β,11β-epoxy-16β-methyl-17α,21- dihydroxypregna-4-en-3,20-dione(19a).K ế t t i n h t r o n g acetonenhân đươ c sảnphẩmsachsắcký.Hiệusuất,cácđặctrưngvậtlývàphổđược tómtắttrongBảng3.4.

2.8.2.3 Tổnghợp9β,11β-epoxy-16α,17α-β-methyl-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-dihydroxypregna-1,4-diene-3,20- dione(19b) Ápdụngphươngpháptrên,từ9α-bromo-16β-methyl-11β,17α,21-trihydroxypregna- 1,4-diene-3,20-dione-21-acetate (18b) tổng hợp thành công 9β,11β-epoxy-16β- methyl-17α,21-dihydroxypregna-1,4-diene-3,20-dione(19b).K ế t t i n h trongacetonenhân đươ c sảnphẩmsachsắcký.Hiệusuất,cácđặctrưngvậtlývàphổ đượctómtắttrongBảng3.4.

Phươngpháptổng hợpcác16β-methyl-17α-hydroxypregnane

Phươngphápchung

0,56 ml (1,68 mmol) dung dịch CH3MgBr 3M trong Et2O được đưa vào 1 bìnhcầu đang được làm lạnh 0-5oC trong dòng khí N2(khan) Tất cả dung môi được chưngcất dưới áp suất giảm ở 60-65 o C Sau đó, 0,49 ml THF (khan) và 0,20 mmol 16α,17α-epoxysteroid (đã bảo vệ các chức carbonyl) được thêm vào và hỗn hợp được khuấy 16giờ ở 70-75oC trong dòng khí N2( k h a n ) D o d u n g m ô i b a y h ơ i m ộ t p h ầ n t r o n g q u átrìnhp h ả n ứ n g n ê n 0 , 1 5 m l d u n g d ị c h C H3MgBr3 M t r o n g E t2Ov à 0 , 2 5 m l T H F (khan) được thêm vào Thực hiện phản ứng trong điều kiện trên thêm 7 giờ nữa Kiểmtra bằng SKBM nếu hết chất đầu thì dừng phản ứng Hỗn hợp được làm lạnh xuống40oC rồi được đổ vào21,00 ml dung dịch NH4Cl bão hòa đang được duy trì ở 0oC,khuấy hỗn hợp ở nhiệt độ phòng trong 30 phút Tủa tách ra được lọc hút chân không,rửa nhiều lần bằng H 2 O đến pH = 7, sấy khô tốt nhất là thấp hơn 45oC, nhận được sảnphẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệ dung môi phù hợp, ví dụ sử dụngacetone,nhậnđược sảnphẩmsạchsắc ký.

Tổng hợp 3,20-bis-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-16β- methylpregna-5,9(11)-diene-17α-ol(11a)

diene-17α-ol (11a) Áp dụng phương pháp trên, từ 3,20-bis-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-16α,17α- epoxypregna-5,9(11)-diene(10a)tổnghợpthànhcông3,20-bis-(2,2- dimethylpropylenedioxy)-16β-methylpregna-5,9(11)-diene-17α-ol(11a).Kếttinhtừn- hexane/acetone, nhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý vàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Tổnghợp3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)-16β-methylpregna-5,9(11)- diene-17α-ol(11b)

ol(11b) Ápdụngphươngpháptrên,từ3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)-16α,17α-epoxypregna-5,9(11)-diene (10b) tổng hợp thành công 3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)-16β- methylpregna-5,9(11)-diene-17α-ol(11b).Kếttinhtừn-hexane/EtOAc,n h ậ n được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổ được tóm tắt trongBảng3.4.

Phươngphápgiảiphóngnhómbảo vệ

Phươngphápchung

Hỗn hợp 0,25 mmol 3,20-bis-(ketal)-steroid; 1,00 ml acetone và 0,30 ml

H2OđượckhuấytrongbầukhíN2v à0,01mlH2SO4đ ặ cđượcthêmvào.Duytrìphảnứngở

60 o C trong 2-4 giờ Sau đó đưa về nhiệt độ phòng, nước đáđược thêm vào, khuấytrong30phút.Tủatáchrađượclọchútchânkhông,rửabằngH 2 OnhiềulầnđếnpH7, sấy khô nhận được sản phẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệ dung môi phùhợp,vídụsử dụngacetone,nhậnđược sảnphẩmsạch sắcký.

2.10.2 Tổnghợp16β-methyl-17α-hydroxypregna-4,9(11)-diene-3,20-dione(12) Ápdụngphươngpháptrên,từ3,20-bis-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-16β- methylpregna-5,9(11)-diene-17α-ol(11a)(cũngápdụngvới3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)- 16β-methylpregna-5,9(11)-diene-17α-ol(11b)tổnghợpthànhcông16β-methyl-17α- hydroxypregna-4,9(11)-diene-3,20-dione(12).KếttinhtừCHCl 3 /

MeOH,n hận đư ợc sảnphẩ m sạch sắc ký.H i ệ u s uấ t , cácđặ c trưng vậ t lývà phổđư ợctómtắttrongBảng3.4.

Hỗnhơpgồm0,30mmol3-keto-∆4-steroid;81,8mg(0,74mmol)SeO2;6,82ml t-BuOHvà0,03mlPyđươchồilưu24giờ.Thêmtiếp13,6mg(0,12mmol)SeO 2 và hồilưukhuấy đảotiếp3giờ.Hỗnhơp phảnứngsauđóđươc lo c quaCelitevàrửa bằngEtOAc.Côđăc dichloc đếnkhôtrongchânkhông,phầncăn đemtáchsắckýcôt (silica gel : Celite = 3 : 1), rửa giải bằng hệ dung môi, ví dụ nhưn-hexane : acetone,nhậnđược sảnphẩmsạch sắc ký.

2.11.2 Tổnghợp16β-methyl-17α-hydroxypregna-1,4,9(11)-triene-3,20-dione(13a) Áp dụng phương pháp trên, từ16β-methyl-17α-hydroxypregna-4,9(11)-diene- 3,20-dione (12) tổng hợp thành công 16β-methyl-17α-hydroxypregna-1,4,9(11)-triene- 3,20-dione (13a) Rửa cột bằng hệ dung môin-hexane : acetone = 4:1 nhận được sảnphẩmsạchsắcký.Hiệusuất,các đặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.11.3 Tổnghợppregna-1,4,9(11)-triene-17α,21-diol-3,20-dione-21-acetate(13b) Áp dụng phương pháp trên, từ pregna-4,9(11)-diene-17α,21-diol-3,20-dione-21- acetate(17)t ổ n g h ợ p t h à n h c ô n g p r e g n a - 1 , 4 , 9 ( 1 1 ) - t r i e n e - 1 7α,21-diol-3,20- dione-21-

Phươngphápchung 43 2.11.2 Tổnghợp16β-methyl-17α-hydroxypregna-1,4,9(11)-triene-3,20-dione(13a)

Hỗnhơpgồm0,30mmol3-keto-∆4-steroid;81,8mg(0,74mmol)SeO2;6,82ml t-BuOHvà0,03mlPyđươchồilưu24giờ.Thêmtiếp13,6mg(0,12mmol)SeO 2 và hồilưukhuấy đảotiếp3giờ.Hỗnhơp phảnứngsauđóđươc lo c quaCelitevàrửa bằngEtOAc.Côđăc dichloc đếnkhôtrongchânkhông,phầncăn đemtáchsắckýcôt (silica gel : Celite = 3 : 1), rửa giải bằng hệ dung môi, ví dụ nhưn-hexane : acetone,nhậnđược sảnphẩmsạch sắc ký.

2.11.2 Tổnghợp16β-methyl-17α-hydroxypregna-1,4,9(11)-triene-3,20-dione(13a) Áp dụng phương pháp trên, từ16β-methyl-17α-hydroxypregna-4,9(11)-diene- 3,20-dione (12) tổng hợp thành công 16β-methyl-17α-hydroxypregna-1,4,9(11)-triene- 3,20-dione (13a) Rửa cột bằng hệ dung môin-hexane : acetone = 4:1 nhận được sảnphẩmsạchsắcký.Hiệusuất,các đặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.11.3 Tổnghợppregna-1,4,9(11)-triene-17α,21-diol-3,20-dione-21-acetate(13b) Áp dụng phương pháp trên, từ pregna-4,9(11)-diene-17α,21-diol-3,20-dione-21- acetate(17)t ổ n g h ợ p t h à n h c ô n g p r e g n a - 1 , 4 , 9 ( 1 1 ) - t r i e n e - 1 7α,21-diol-3,20- dione-21- acetate (13b) Rửa cột bằng hệ dung môin-hexane : Et2O = 2:1 nhận được sản phẩmsạchsắcký Hiệusuất,cácđặctrưngvật lývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Phươngpháptổnghợpmạchbêncorticoid

Phươngpháp tổng hợp mạch bên corticoidsửd ụ n g h ợ p

2.12.1.1 Phươngphápchung a 0,25 mmol steroid (đã bảo vệ chức 3-keto, nếu có) được thêm vào 1,50 ml dungdịch KOH 4N trong MeOH và 120,8mg (0,38m m o l ) P h I ( O A c ) 2 Duy trì nhiệt độphản ứng ở 18-25 o C trong khoảng thời gian 24-48 giờ Kiểm tra bằng SKBM nếu thấyhết chất đầu thì dừng phản ứng.Loại kiệt dung môi dưới áp suất thấp ở cao nhất là25oC trong khoảng 30 phút, thêm H 2 O và chiết bằng CHCl3 Dịch CHCl3được rửanhiều lần bằng nước để loại kiềm và tác nhân dư Làm khan dịch chiết CHCl3bằngNa2SO4( k h a n ) C h ư n g c ấ t d u n g m ô i , c ặ n t h u đ ư ợ c đ ư ợ c đ ư a l ê n c ộ t s ắ c k ý , r ử a g i ả i vớicáchệdung môi,vídụn- hexane:acetonenhậnđượcsản phẩmsạchsắcký. b Toàn bộ sản phẩm thu được ở trên được hòa tan trong 3,00 ml acetone có chứa40,0mg (0,23 mmol)p-TSA Khuấy đảo ở nhiệt độ 18-25 o C trong khoảng thời gian 2 giờ.Kiểm tra trên SKBM nhận thấy hết chất đầu Dừng phản ứng và xử lí Loạidung môidưới áp suất giảm và chiết bằng CHCl 3 Rửa dịch chiết CHCl3bằng H2O đến pH 7.Làm khan dịch chiết CHCl3bằng Na2SO4(khan) Chưng cất dung môi, cặn thu đượcđược đưa lên cột sắc ký, rửa giải với các hệ dung môi, ví dụn-hexane: acetone nhậnđượcsảnphẩmsạchsắcký.

2.12.1.2 Tổnghợp16α,17α-α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-epoxypregna-4,9(11)-diene-21-ol-3,20-dione(15) a Ápdụngphươngpháptrên,từ3,3-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-16α,17α- epoxypregna-5,9(11)-diene-20-one(9)tổnghợpthànhcông3,3-(2,2- dimethylpropylenedioxy)-16α,17α-epoxy-20,20-dimethoxypregna-5,9(11)-diene-21- ol(14).Rửa giải bằng hệ dungm ô in-hexane : acetone = 10:1 nhận được sản phẩm sạch sắcký.H i ệ u suất,các đặctrưng vậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4. b Áp dụng phương pháp trên, từ 3,3-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-16α,17α-epoxy- 20,20-dimethoxypregna-5,9(11)-diene-21-ol(14)tổnghợpthànhcông16α,17α- epoxypregna-4,9(11)-diene-21-ol-3,20-dione(15).Rửagiảibằnghệdungmôin- hexane: acetone = 10:4 nhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.12.1.3 Tổnghợp16α,17α-α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-epoxypregna-5-en-3β,21-diol-20-one(25) Ápdụngphương pháptrên,từ16α,17α-epoxypregna-5-en-3β-ol-20-one(23);16β- chloropregna-5-en-3β,17α-diol-20-one(24a)và16β-bromopregna-5-en-3β,17α-diol-20- one(24b)t ổ n g h ợ p t h à n h c ô n g (25).K ế t t i n h l ạ i t ừ M e O H n h ậ n đ ư ợ c s ả n phẩm sạchsắcký.H i ệ u suất,cácđặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

PhươngpháptổnghợpmạchbêncorticoidsửdụngI 2t r o n g môitrườngkiềm 45 1 Phươngphápchungtổnghợpmạchbêncorticoidquahợpchấttrunggi an21,21-diiodide

2.12.2.1 Phương pháp chung tổng hợp mạch bên corticoid qua hợp chất trung gian21,21-diiodide a Nhũ tương của 0,30 mmol 20-ketosteroid và 9,4 mg CaCl 2 trong 0,51 ml MeOHtuyệt đối được khuấy trong dòng khí N2(khan) ở nhiệt độ phòng 66,0 mg (0,9 mmol)Ca(OH)2được thêm vào và hỗn hợp được khuấy thêm 5 phút rồi tăng nhiệt độ lên 40-45oC Dung dịch của I2(152,4 mg; 0,60 mmol) và CaCl2(560,0 mg) trong 0,56 mlMeOH tuyệt đối được thêm vào bằng cách nhỏ giọt trong 30 phút trong điều kiện hạnchế ánh sáng Sau đó 0,22 ml MeOH tuyệt đối được thêm vào Thực hiện phản ứngtrong điều kiện này khoảng 2 giờ Giảm nhiệt độ xuống 20 o C và đổ hỗn hợp phản ứngvào dung dịch AcOH 4% đang được khuấy ở 0-5 o C Khuấy 30 phút Tủa tách ra đượclọc hút chân không, rửa bằng H 2 O nhiều lần đến pH = 7, sấy khô trong tủ sấy chânkhông tốt nhất là thấp hơn 36 o C nhận được sản phẩm thô Sản phẩm này được dùngchogiaiđoạnsaumàkhôngcầntinhchế thêm. b Toànbộdẫnxuấtdiiodideởt r ê n và0,45mlN,N-dimethylformamideđươcđưavào hỗnhơp 1,50mlacetonecóchứa1%H 2 O;0,02mlAcOHvà154,0mgAcOK.Khuấy đảohỗnhơp đồngthờiđunnóngđếnhồilưu,khíN 2q u a trongđiềukiên khôngcóánh sángtrong1,5h.Giảmnhiêt độhỗnhơp phảnứngxuống20 o Crồithêmvào0,50ml

H2O.Hỗnhơp đểyêntinhchođếnkhitoànbộAcOKcòndưtanhết.LươngH 2 O nhiềuhơnđươc thêmvàovàhỗnhơp đươ c làmlanh.Loc húttủatáchra,rửavớiH 2 O, sấykhô ở60 o Cnhân đươ c sản phẩmthô.Kếttinh sảnphẩm thô trongcáchệdungmôi phùhợp, vídụsử dụng acetone,nhậnđược sảnphẩmsạchsắcký.

2.12.2.2 Tổnghợp21-acetoxy-16α,17α-β-methylpregna-4,9(11)-diene-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-diol-3,20- dione(16a) Ápdụngphươngpháptrên,từ16β-methylpregna-4,9(11)-diene-17α-ol-3,20-dione

(12) tổng hợp thành công 21-acetoxy-16β-methylpregna-4,9(11)-diene-17α,21-diol- 3,20-dione(16a)quahợpchấttrunggian21,21-diiodo-16β-methylpregna-4,9(11)-diene- 17α-ol-3,20-dione Kết tinh từ acetone nhận được sản phẩm sạch sắc ký.Hiệusuất,cácđặctrưng vậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.12.2.3 Tổnghợp21-acetoxy-16α,17α-β-methylpregna-1,4,9(11)-triene-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-diol-3,20- dione(16b) Áp dụng phương pháp trên, từ 16β-methylpregna-1,4,9(11)-triene-17α-ol-3,20- dione(13a)tổnghợpthànhcông21-acetoxy-16β-methylpregna-1,4,9(11)-triene-17α,21- diol-3,20-dione(16b)quahợpchấttrunggian21,21-diiodo-16β-methylpregna-1,4,9(11)- triene-17α-ol-3,20-dione Kết tinh từ acetone, nhận được sảnphẩmsạchsắcký.Hiệusuất,cácđặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.12.2.4 Phươngphápchungtổnghợpmạchbêncorticoidquadẫnxuất21-monoiodide a Nhỏg i o t dungdichI2(101,6mg;0,40mmol)trong0,25mlMeOHcóhòatan17,0 mgCaCl2vàodungdich0,30mmol20- ketosteroidtrong0,25mlMeOHvà0 , 7 6 mlCH 2 Cl2cóhòa tan 80,0mg(1,40mmol)CaO và0,5mlH 2 O cất.Khuấy2hởn h i ê ṭ đô phòng.Thêmvào5,40mldungdichNaHCO 3 bao hòa,khuấyđều.Loc rửatủatrên phễubằnghỗnhợpMeOH:CH2Cl2=1:4,sauđób ằ n g CH 2 Cl2,đổb o ̉t u ̉a.Dịchloc ̣chiếtlaịbằ ngCH2Cl2.ToànbộdichchiếtCH 2 Cl2đượcrửabằngH2OđếnpH=7,làm khanbằngNa2SO4( k h a n ) ,chưngcấtdungmôinhân đươ c sảnphẩm thô.Sảnphẩm nàyđượcdùng chogiai đoạnsaumàkhôngcầntinhchếthêm. b Toànb ộ d ẫ n x u ấ t m o n o i o d i d e ơ ̉ trênđ ư ợ c h ò a t a n t r o n g 1 , 3 0 m l N , N - dimethylformamide.150,0mgAcOK(khan)đượcthêmvào.Khuấyđảohỗnhơp,khi

N2(khan)điquađồngthờiđunnóngở65 o Ctrong2giờ.Giảmnhiêṭđộhỗnhơpphản ứngxuống20 o Crồithêmvào2,80mlH 2 O,khuấytrong30phút.Lochúttủatáchra, rửavớiH 2 OđếnpH=7,sấykhôở65 o Cnhân đươ c sảnphẩmthô.Tinhchếsảnphẩm thôbằngthanhoạttínhtrongCHCl3r ồ ikếttinhlạitrongcáchệdungmôiphùhợp,vídụsử dụngacetone,nhậnđược sảnphẩmsạchsắc ký.

2.12.2.5 Tổnghợp21-acetoxypregna-4,9(11)-diene-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-diol-3,20-dione (17) Áp dụng phương pháp trên, từ pregna-4,9(11)-diene-17α-ol-3,20-dione (6b) tổnghợp thành công 21-acetoxypregna-4,9(11)-diene-17α,21-diol-3,20-dione (17) qua hợpchấttrunggian21-iodopregna-4,9(11)-diene-17α-ol-3,20- dione.Kếttinhlạit ừ acetone/ CH 2 Cl2nhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý vàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.12.2.6α,17α- Tổnghợp16α,17α-β-chloro-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxy-21-iodopregna-4-en-3,20-dione(22) Ápdụngphươngpháp(a)trên,từ16β-chloro-17α-hydroxypregna-4-en-3,20-dione (21’’) tổng hợp thành công 16β-chloro-17α-hydroxy-21-iodopregna-4-en-3,20-dione

(22) Rửa cặn bằng Et2O nhận được sản phẩm sạch sắc ký Hiệu suất, các đặctrưngvậtlývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Phươngphápđưa halogenvàophântửsteroid

Phươngpháphalohydrin

0,30mmol∆ 9(11) -steroidhòatantrong0,50mlTHF.Sauđóh ạ nhiêt độxuống 0oCr ồ i t h ê m v à o 1 , 0 0 m l d u n g d i c h H C l O412%.6 5 , 0 m g ( 0 , 3 7 m m o l ) N B S đ ư ợ c thêmvàotừtừtrongvòng30phút.Nângnhiệtđộlên5-10 o Cvàkhuấytrong1giờ.

ThêmvàodichphảnứngdungdịchNa 2 SO310%đếnpH=6,5.Lockếttủatáchravà rửa bằng H2O nhiều lần đến pH = 7, sấy khô tốt nhất là thấp hơn 40oC, nhận được sảnphẩm thô Kết tinh sản phẩm thô trong các hệ dung môi phù hợp, ví dụ sử dụngacetone,nhậnđược sảnphẩmsạchsắc ký.

2.13.1.2 Tổnghợp9α-bromo-16α,17α-β-methyl-11β,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-trihydroxypregna-4-en-3,20- dione-21-acetate(18a) Ápdụngphươngpháptrên,từ16β-methyl-17α,21-dihydroxypregna-4,9(11)-diene- 3,20-dione-21-acetate(16a)tổnghợpthànhcông9α-bromo-16β-methyl-11β,17α,21- trihydroxypregna-4-en-3,20-dione-21-acetate(18a).Sảnphẩmthôđemkết tinhtrongacetonenhân đươ c sảnphẩmsachsắcký.Hiệusuất,cácđặctrưngvậtlývà phổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.13.1.3 Tổnghợp9α-bromo-16α,17α-β-methyl-11β,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-trihydroxypregna-1,4-diene- 3,20-dione-21-acetate(18b) Áp dụng phương pháp trên, từ 16β-methyl-17α,21-dihydroxypregna-1,4,9(11)- triene-3,20-dione-21-acetate(16b)tổnghợpthànhcông9α-bromo-16β-methyl-

11β,17α,21-trihydroxypregna-1,4-diene-3,20-dione-21-acetate(18b).Kết tinhtrong acetonenhân đươ c sảnphẩmsachsắcký.Hiệusuất,cácđặctrưngvậtlývàphổđược tómtắttrongBảng3.4.

2.13.1.4 Tổng hợp 9α-bromo-11β,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-trihydroxypregna-1,4-diene-3,20- dione-21-acetate(18c) Ápd ụ n g p h ư ơ n g p h á p t r ê n , t ừ 1 7α,21-dihydroxypregna-1,4,9(11)- triene-3,20-dione-21-acetate(13b)tổnghợpthànhcông9α-bromo-11β,17α,21- trihydroxypregna-

1,4-diene-3,20-dione-21- acetate(18c).K ế t t i n h t r o n g a c e t o n e n h â n đươ c sảnp h ẩ m sachsắcký Hiệusuất,cácđặctrưngvật lývàphổđượctómtắttrongBảng3.4.

Phươngphápcộngmởvòngepoxy

2.13.2.1 Tổnghợp16α,17α-β-chloro-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxypregna-4-en-3,20-dione(21’’)

Dungdịchcủa103,5mg(0,25mmol)3,3-(2,2-dimethylpropylenedioxy)-16α,17α- epoxypregna-5-en-20-one (21) trong 5,55 ml acetone được làm lạnh xuống 5-10 o C và khuấy đều 1,11 ml (13,3 mmol) HCl đặc được thêm vào bằng cách nhỏ giọttrong 10 phút Sau đón â n g l ê n n h i ệ t đ ộ p h ò n g , k h u ấ y h ỗ n h ợ p p h ả n ứ n g t r o n g 6 g i ờ thì hết chất đầu và sản phẩm trung gian Cất quay bớt dung môi dưới áp suất thấp ởnhiệt độ không cao hơn 40 o C, sau đó nước đá được thêm vào đồng thời khuấy ở nhiệtđộ phòng trong 30 phút Tủa tách ra được lọc hút chân không, rửa bằng H2O nhiều lầnđến pH = 7, sấy khô tốt nhất là thấp hơn 45 o C, nhận được sản phẩm thô Kết tinh sảnphẩmthôtronghệdungmôin-hexane/acetone,nhậnđược sảnphẩm (21’’)sạchs ắcký.Hiệusuất,các đặctrưng vậtlývàphổ đượctómtắttrongBảng3.4.

2.13.2.2 Tổnghợp16α,17α-β-chloropregna-5-en-3β,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-diol-20-one (24a)

1,00 ml HCl đặc (12,0 mmol) được thêm nhỏ giọt trong khoảng 5 phút vào dungdịch của 100,0 mg (0,30 mmol) 16α,17α-epoxypregna-5-en-3β-ol-20-one (23) trong6,00 ml acetone Hỗn hợp được khuấy ở 30 o C trong 3 giờ Cất quay kiệt dung môi ởnhiệt độ thấp Nhũ tương được đổ vào 30 ml H 2 O và chiết với CHCl3 Rửa dịch chiếtbằngH2Ođếntrung tínhrồilàmkhan.Saukh iloạidungm ô i và kết tinhlạicặ ntừ

MeOH nhận được sản phẩm (24a) sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.13.2.3 Tổnghợp16α,17α-β-bromopregna-5-en-3β,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-diol-20-one (24b)

0,20 ml HBr đặc (1,8 mmol) được thêm nhỏ giọt trong khoảng 5 phút vào dungdịch của 100,0 mg (0,30 mmol) 16α,17α-epoxypregna-5-en-3β-ol-20-one (23) trong6,00 ml acetone Hỗn hợp được hồi lưu ở 65 o C trong 4 giờ Cất quay kiệt dung môi ởnhiệt độ thấp Nhũ tương được đổ vào 30 ml H 2 O và chiết với CHCl3 Rửa dịch chiếtbằng H2O đến trung tính rồi làm khan Sau khi loại dung môi và kết tinh lại cặn từMeOH nhận được sản phẩm (24b) sạch sắc ký Hiệu suất, các đặc trưng vật lý và phổđượctómtắttrongBảng3.4.

2.14 Phương pháp khử halogen (dehalogen hóa): tổng hợp prednisolone acetate(20)

Hòa tan 86,6 mg (0,18 mmol) 9α-bromo-11β,17α,21-trihydroxypregna-1,4-diene- 3,20-dione-21-acetate (18c) trong 2,00 ml THF (khan) có chứa 0,01 ml CH3CN 0,10ml (0,37 mmol) HSnBu3được thêm vào Hỗn hợp được khuấy và hồi lưu trong 3,5 giờđến khi không còn chất đầu Bay hơi kiệt dung môi, rửa cặn bằngn-hexane để loại bỏmộtphầntạpchất.KếttinhlạitrongMeOH,sauđólàacetonenhậnđượcsảnphẩ m

(20)sạchsắcký.Hiệu suất,cácđặctrưngvật lývàphổđượctómtắt trongBảng 3.4.

2,Sơ đồ3.3vàSơ đồ3.4dướiđây:

Sơđồ3.1.Phương pháp cyanohydrinvàphươngphápacetylenexâydựng mạch bênpregnane

Sơ đồ 3.2 Tổng hợp 16β-methyl-17α-hydroxypregnane và xây dựng mạch bêncorticoid

Sơđồ3.3.Dehydro hóa1(2);dehalogenhóavàxâydựng mạchbêncorticoid

Sơđồ3.4.Dehydro hóa1(2);xâydựngmạchbêncorticoid;halohydrinhóavà dehalohydrinhóa

Dehydrathóa9 α-OHADtổnghợpandrosta-4,9(11)-diene-3,17- dione(Δ 9 -AD)

9α-OHAD(1)làchất đầu quantrongtrongsơđồtổnghơpcácloaịthuốc steroid.

Tuynhiên,vớisựthamgianhóm(-OH)bâcbaởv i ̣tríC-9của9α-OHADcóthểdẫn tớinhữngchuyểnvịkhôngmuốn.Đểtránhhiên tươngnày,9α-OHADđươc dehydrat hóathành∆ 9 -

AD(2)làmôttiếptheo. hơ p chấtkhábền vữngtrongcácđiềukiên thư c nghiêm

Trong các tài liệu tham khảo phản ứng dehydrat hóa 9α-OH AD tổng hợp∆ 9 - ADsử dụng tác nhân dehydrat hóa như: acid vô cơ, acid hữu cơ, anhydride hoặc acidchloride hữu cơ và vô cơ Phản ứng có thể được tiến hành trong một dung môi hữu cơhoặc không cần sử dụng dung môi Dung môi sử dụng là một dung môi hữu cơ trơ phiproton, đặc biệt là các hydrocarbon thơm (benzene, Toluene) hoặc các hydrocarbonchứaCl(CH 2 Cl2,CHCl3,CH2ClCH2Cl…).

Việc chúng tôi thực hiện phản ứng trong một dung môi hữu cơ trơ phi proton đặcbiệt là hydrocarbon chứa Cl và việc sử dụng acid vô cơ chứa H 2 O như H3PO4làm tácnhân dehydrat hóa là chưa được mô tả chi tiết trong các tài liệu tham khảo Sử dụnghóa chất công nghiệp sẵn có, giá rẻ, thao tác dễ dàng, không cần tinh chế sản phẩmđồng thời cho hiệu suất cao (>94%) chính là những ưu điểm nổi bật của phương phápnàykhiđivàosảnxuất. Theo tài liệu [73], các tác giả phát hiện ra sản phẩm phụ của quá trình dehydrathóa 9α-OH AD là∆8(9)-AD Đồng phân này có giá trị Rftương tự∆9-AD trên TLC vàkhông thể tách khỏi nhau bằng phương pháp kết tinh Nhận biết đồng phân∆ 8(9) -ADtrong hỗn hợp sản phẩm có thể được thực hiện, ví dụ, bằng các phương pháp phổ 1 H-NMR (tín hiệu cộng hưởng proton H-4 của hai đồng phân này khác nhau

≈0,035 ppm(thiếtbị360MHz), 13 C-NMRhoặcbằngsắcký:HPLC(thờigianlưucủa9α- OHAD,

∆ 9 -AD và∆ 8(9) -AD lần lượt: 4,14; 9,73 và 9,26 phút), GC Tuy nhiên, quá trình phảnứngc h ú n g t ô i k h ô n g n h ậ n t h ấ y , d ù ở d ạ n g v ế t , s ả n p h ẩ m p h ụ n à y P h ả n ứ n g t á c h trans-diaxialxảyratheocơchếE1vớiđộchọnlọccao,nhậnđượcđồngphân∆ 9 -

Hình3.1 Phổ 1 H-NMRcủaandrosta-4,9(11)-diene-3,17-dione(Δ 9 -AD)(2)

TrênphổIRcủasảnphẩm(2)mấtđỉnhhấpthụđăc trưngchodaođônghóatri củanhómOH(vùng3449cm -1 )xuấthiệnvânphổđượccholàdaođộnghóatrịcủa nối đôi C=C ở 1616 cm -1 Phổ 1 H-NMR xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của protonolefinH-11cóδ=5,57ppmdạngmultiplet.

Tổnghợpmạchbênpregnane

Phươngphápcyanohydrin

Việc gắn mảnh hai nguyên tử C vào vị trí C-17 của các phân tử steroid (AD, 9α-

OH AD,∆ 9 -AD, ADD ) là giai đoạn chìa khóa trong tổng hợp corticoid, được thựchiện theo nhiều phương pháp Một trong số các phương pháp có ý nghĩa thực tiễn làphương pháp cyanohydrin, gồm hai giai đoạn chính: (1) Tương tác giữa các hợp chất17-ketosteroid với acetone cyanohydrin (hay KCN/AcOH) và(2) Alkyl hóa các hợpchất 17α-hydroxy-17β-nitrile vừa nhận được bằng tác nhân methyl hóa:

CH3MgBr(Cl),CH3Li

Sơđồ3.5.Xây dựng mạchbênpregnanetheo phươngphápcyanohydrin

Giai đoạn (1) của phương pháp này có nhiều ưu điểm như: tính chọn lọc cao củaphản ứng cộng hợp hydrocyano vào nhóm 17-keto, tác nhân acetone cyanohydrin dồidào và có giá thành thấp Tuy nhiên, quá trình hydrocyanide hóa các 17- ketosteroid, vềmặt lý thuyết, phản ứng cộng nucleophile (A N ) vào nhóm carbonyl, có thể hình thànhcân bằng của hỗn hợp đồng phân epimer 17β- và 17α-nitrile Hoặc cộng vào nối đôi∆ 4 tạo thành sản phẩm 5β-nitrile, hoặc cộng vào nối đôi∆ 9(11) , hoặc tạo thành sản phẩm3,17-bis- (cyanohydrin) , hoàn toàn phụ thuộc vào điều kiện phản ứng mà sản phẩmnào chiếm ưu thế Ví dụ, để nhận được đồng phân 17β-nitrile ít tan hơn chúng tôi thayđổinồngđộcủa nướcđểkếttủa dầnđồngphân này.

TheocáctàiliệuthamkhảocóthểsửdụngtácnhânlàmộtmuốichứaionCN - /H + , acetone cyanohydrin, hỗn hợp của chúng hoặc các hợp chất cyanide hữu cơ khácnhưdiethylaluminumcyanideEt 2 AlCN Chúngtôiđãápdụngphươngphápnà yvới chấtđầul à∆ 9 -AD,s ử d ụ n g t á c n h â n K C N t r o n g m ô i t rư ờn ga ci d ( A c O H )

AcOH được thêm từ từ vào hỗn hợp đang được khuấy đảo gồm chất đầu (∆ 9 - AD)và KCN trong MeOH ởnhiêṭ đô ̣phòng Sản phẩm ít tanhơn tách ra dạng tủa Mặc dùđồng phân 17α-cyano-17β-hydroxy hình thành do ion CN - tấn công vào vị trí C-17 từphíaα í tb ịc ả n t r ở h ơ n n h ư n g đ ã đ ư ợ c chuyển h óa đ ế n đ ồ n g p h â n 1 7β-cyano-

17α- hydroxy theomộtcânbằng thuận nghịch trong sực ó m ặ t c ủ a K C N v à c â n b ằ n g chuyển dịch về phía tạo sản phẩm chính do nó tách ra ở dạng kết tủa ít tan hơn trongMeOH Thực tế tài liệu [9] cũng đã chứng minh: đồng phân 17β-cyano-17α- hydroxycủaΔ 9(11) -AD có thể nhận được bằng cách đồng phân hóa 17α-cyano-17β- hydroxy, vídụ, với sodium cyanide hoặc triethylamine hydrocyanide trong alcohol bậc thấp TheoNitta và cộng sự [7], khi hydrocyanide hóa AD sử dụng KCN/AcOH, phân tích HPLCsản phẩm nhận được cho thời gian lưu 9,1 phút chính là thời gian lưu của đồng phân17β-cyano-17α-hydroxy(trongkhithờigianlưucủađồngphân17α-cyano-17β- hydroxylà 8,4 phút).

PhổIRcủasảnphẩmmấtbăngsóngđăctrưngchodaođôngcủanhómchức

C(17)=O(vùng1700cm -1 ),xuấthiên đỉnh3236cm -1 đăc trưngc h o d a o đ ô n g c u ̉a nhómOH,đồngthờigiữnguyênvânphổở1645cm -1 đăctrưngchodaođôngcủa nhómchứcC(3)=O.Vânphổởvùng2230cm -1 đăctrưngchodaođôngcủanhóm chứcC≡NkhôngxuấthiệntrênphổIRcủa(3)dokhôngnhậy,nhưngvẫnxuấthiệntrênphổIRcủa mộtsốdẫnxuấtnitrileởnhữnggiaiđoạntổnghợpsau.Phổ 1 H-NMR xuấthiên thêmtínhiêu cônghưởngtừc u ̉aprotonnhómOH-17cóδ=2,97ppm.Phổ

ESI-MS của (3) xuất hiện peak ion giả phân tử với số khốim/z312[M+H] + và peak ionmảnhvớisốkhốim/z285[M+H-HCN] +

Trước đó chúng tôi chỉ được biết [6] sử dụng acetone cyanohydrin làm tác nhânhydrocyanideh ó a A D H y d r o c y a n i d e h ó a A D [ 7 ] h o ặ cΔ 9(11) -

AD[ 9 ] v ớ i a c e t o n e cyanohydrinlạihìnhthànhđồngphânkhông mong muốn17α-cyano- 17β-hydroxy.

Chúngt ô i đ ã t h ự c h i ệ n p h ả n ứ n g t r o n g d u n g m ô i M e O H đ ã đ ư ơ c kiềmh o ́a bằng NaOH, tác nhân là acetone cyanohydrin Ở giai đoạn đầu H2O sẽ phân hủyacetonecyanohydrinthànhtácnhânHCN:(CH3)2C(OH)CN+H2O→HCN+

(CH3)2C(OH)2→ HCN + (CH3)2CO Giai đoạn sau thêm H2O vào và giữ yên tĩnh khốiphảnứngđểchuyểndịchcânbằngvàkếttủadầnđồngphân17α-hydroxy-17β-nitrile ítt a n h ơ n t r o n g M e O H /

C(17)=O,nhân đươ c đồngphânmongmuốn17α-hydroxy-17β-nitrile(epimercủanó chỉ ít hơn 1% và bị loại ra khỏi hỗn hợp trong quá trình lọc rửa với MeOH/H2O). Cácđặc trưng vật lý và phổ của sản phẩm tương tự với sản phẩm nhận được khi sử dụngKCN.

Hình3.2.Phổ ESI-MScủa17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(3)(a)S o sánhhaiphương pháp

Khis ử d ụ n g t á c n h â n K C N : p h ả n ứ n g x ả y r a r ấ t n h a n h , ở đ i ề u k i ệ n ê m d ị u (~25 o C),tuynhiênnhượcđiểmchínhlàtạohỗnhợpepimer17β-cyano-17α-hydroxy và 17α-cyano-17β-hydroxy (tỉ lệ 95:5) Khi sử dụng tác nhân acetone cyanohydrin:phản ứng xảy ra chậm hơn, trong điều kiện nhiệt độ cũng cao hơn (35-

36 o C), hiệu suấtthấp hơn (80% so với 90%) Nhưng tác nhân acetone cyanohydrin ít độc hơn, do vậyưađược áp dụngkhitriểnkhaiởquymôlớn.

Tạo mạch bên pregnane theo phương pháp cyanohydrin có nhược điểm là đòihỏi phải bảo vệ nhóm carbonyl (3-keto ) bởi nhóm này bị tấn công không mong muốnbởi một số tác nhân như tác nhân cơ kim Có rất nhiều phương pháp bảo vệ nhómcarbonyl( k e t a l h ó a , t h i o k e t a l h ó a , h e m i t h i o k e t a l h ó a , e n a m i n e , e n o l a c e t a t e , e n o l ether ) Bảo vệ bằng ketal hóa được ứng dụng nhiều nhất và thường được nhắc đếnnhiều nhất trong tài liệu Trong luận án này chúng tôi đã lựa chọn tiến hành bảo vệnhóm 3 hoặc/và 20-keto bằng cách ketal hóa chúng hình thành vòng 5 cạnh (tác nhânethylene glycol) và 6 cạnh (tác nhân neopentyl glycol) -1,3-dioxolane Sử dụngp-TSAlàm xúc tác acid, triethyl- hoặc trimethyl orthoformate làm tác nhân chuyển dịch cânbằng do tạo liên kết hóa học với H 2 O: (CH3O)3CH + H2O → CH3OH + HCOOH;(C2H5O)3CH + H2O → C2H5OH + HCOOH hoặc chưng cất đẳng phí để loại H2O giúpthúcđẩyphảnứnglànhữngyếutốgópphầnnângcaohiệusuất.

Trên phổ IR của sản phẩm (4a , 4b ) mất vân phổ đặc trưng của nhóm carbonyl ởvị trí C-3 (1645 cm -1 , cường độ mạnh), xuất hiện băng sóng đặc trưng cho dao độngcủa C-O ketal (vùng 1100 cm-1) Trên phổ1H-NMR, các proton nhóm CH2-O ketalcộng hưởng vùng 3,4-4,0 ppm; các nhóm CH3-ketal (nếu có) cộng hưởng vùng 1,00ppm; chuyển vị của nối đôi∆ 4(5) thành∆ 5(6) phá vỡ hệ liên hợp 3-keto-Δ 4 do đó mất tínhiệu H-4 olefin(vùng 5,7-5,8 ppm) và xuất hiện tín hiệu H-6 olefin (vùng 5,2-5,4ppm) Trên phổ 13 C-NMR tín hiệu của C-3 dịch chuyển lên trường cao hơn (từ ≈200ppmlên≈100ppm),xuấthiệntínhiệucủacarbonC -O ketal(vùng60ppm).

Hình 3.3 Phổ 1 H-NMR của 3,3-(1,2-ethyleneketal)-17β-cyanoandrosta-5,9(11)- diene-17α-ol(4b) Nhữngn g h i ê n c ứ u đ ể c h ứ n g m i n h c ó s ự d ị c h c h u y ể n c ủ a n ố i đ ô i∆ 4(5) t h à n h

∆ 5(6) đã được thực hiện [59,118] Đó là sự thay đổi rõ rệt của góc quay quang học củacác ketal và hemithioketal so với hệ thống 3-keto-Δ 4 ban đầu, điều này không thấy vớicác mercaptal Cơ chế giả thuyết đã được đưa ra dựa trên thực tế là nguyên tử oxi (O)cót ín hn uc leo ph il eca ohơ nso vớ in gu yên tử l ư u hu ỳn h( S) nê nt hú cđ ẩy qu át rì nh táchđểtạonốiđôi∆ 3,5 -(hợpchấttrunggian(c)hơnlàđóngvònghợpchấttrunggian(a)thànhvòng mercaptalprotonhóa(b).

Trên thực tế vòng 1,3-dioxolane 6 cạnh bền hơn 5 cạnh về mặt nhiệt động chínhlà nguyên nhân làm cho phản ứng với neopentyl glycol cho hiệu suất cao hơn vớiethylene glycol, đồng thời sản phẩm cũng bền vững hơn thuận lợi cho các giai đoạnsau.

∆ 16(17) l à c h u ẩ n b ị c h o v i ệ c đ ư a m ả n h 1 6β-methyl-17α- hydroxyv à o p h â n t ử s t e r o i d giai đoạn sau Có rất nhiều tác nhân dehydrat hóa có thể sử dụng cho mục đích nàynhư: acid Lewis (FeCl3, BF3, TiCl4, AlCl3, SnCl2…), acid vô cơ (H2SO4), acid sulfonic(p- TSA), acid chlorosulfonic (HSO3Cl), hoặc dẫn xuất của nó (CH3SO2Cl)…trong mộtdungm ô i t r ơ p h i p r o t o n ( D M F, T H F … ) V ớ i c á c s t e r o i d c ó c á c n h ó m c a rb o n y l đ ã được bảo vệ bằng ketal hóa thì tác nhân dehydrat hóa tốt hơn cả là POCl3( d e h y d r a thóa đồng thời cả nhóm 17α-hydroxy và 9α-hydroxy nếu có), hoặc SOCl2(chỉ dehydrathóa nhóm 17α- hydroxy), tốt nhất là trong sự có mặt của một amine bậc ba như Py Vớicác hợp chất 17α- hydroxypregnane hoặc corticoid với các nhóm carbonyl tự do phảnứng dehydrat hóa thường trải qua hai giai đoạn (1) acetyl hóa nhóm 17α-hydroxy bằnganhydrideacetic; (2)đềacetylhóađểnhận đượcΔ 16(17) tươngứngbằngAcOK.

Chúng tôi đã tiến hành phản ứng dehydrat nhóm 17α-hydroxy của hợp chất 3- ketal (vòng)-steroid sử dụng tác nhân POCl3, dung môi Py (đồng thời là chất tiếp nhậnHCl - sản phẩm của phản ứng: POCl3+ H2O → H3PO4+ HCl) trong dòng khí trơ ở45÷50 o C, trong khoảng thời gian 10 giờ với hiệu suất tốt (90%) Sản phẩm tạo thànhtan kém trong Py, lượng Py dư được xử lý bởi dung dịch HCl loãng ở nhiệt độ thấpnhằmtránhphảnứnggiảiphóngnhómbảovệketal(nếucó).

Trên phổ IR của sản phẩm(5) mất đỉnh hấp thụ ở vùng3 4 2 3 c m -1 đặc trưngchonhóm chức OH-17, xuất hiện vân phổ cường độ yếu ở vùng 1669 cm -1 được gánchodao độnghóatrịcủa liên kếtC=Cvị trí16(17).

Hình 3.4 Phổ IR của 3,3-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-17-cyanoandrosta-

5,9(11),16(17)-triene(5) Phổ 1 H-NMR (5) xuất hiện một triplet (J= 2,0 và 1,5 Hz) có độ chuyển dịch hóahọc6,64ppm,chínhlàtínhiệucủaproton H-16.

Hình 3.5 Phổ 1 H-NMR của 3,3-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-17-cyanoandrosta-

Giai đoạn thứ hai trong phương pháp cyanohydrin xây dựng mạch bên pregnanelà alkyl hóa các hợp chất 17α-hydroxy-17β-nitrile (hoặc∆ 16(17) -17-nitrile) sau khi đãbảovệcácchứccarbonylvàhydroxy.Tácnhâncơkimmethylhóacóthểlàhợpchất của Mg, Li, Cd, Cu (chẳng hạn như: CH3MgBr, CH3MgCl, CH3Li, (CH3)2CuLi ),trong đó tốt nhất là CH3Li Phản ứng được thực hiện trong một dung môi ether (ethylether, THF, dioxane ), hoặc một dung môi hydrocarbon thơm (Toluene, Xylene )hoặcm ộ t h ỗ n h ợ p d u n g m ô i ( e t h e r - h y d r o c a r b o n t h ơ m ) P h ả n ứ n g đ i q u a h ợ p c h ấ t trung gian imine, được thủy phân đến 20-keto bằng một dung dịch acid (AcOH,HCOOH, HCl ) Môi trường phản ứng phải tuyệt đối khan và trơ đểtránh phản ứngcủatác nhâncơ kim với hơiH 2 OvàO2k h ô n g k h í

Phươngphápacetylene

Một phương pháp khác xây dựng mạch bên pregnane là phương pháp acetylene,được trình bày trongSơ đồ 3.6α,17α-, gồm hai giai đoạn chính: (1) Phản ứng giữa các hợpchất 17-ketosteroid với acetylide và(2) Hydrat hóa các hợp chất 17-ethynyl- 17-hydroxyvừanhậnđược.

Sơđồ3.6.Xây dựng mạchbênpregnanetheo phươngpháp acetylene

Giai đoạn (1) của phương pháp này có nhiều ưu điểm như: tính chọn lọc cao củaphản ứng cộng hợp acetylide vào nhóm 17-keto, thực hiện giai đoạn (2) mà không cầnbảovệnhóm3-keto.

Ban đầu, chúng tôi dự định thực hiện phản ứng ethynyl hóa 9α-OH AD. Tuynhiên theo Kapur và cộng sự [24] 9α-OH AD phản ứng với potassium acetylide trongTHFkhank h ô n g n hận đ ư ợ c sản phẩm et hy ny lste ro id m o n g m u ố n m à b ị đ ồngp h â n hóa tạo thành hỗn hợp năm sản phẩm Nguyên nhân là do nhóm OH bậc ba ở C-9 cóthểbịchuyểnvị cùngvớihệthống3-keto-Δ 4 khôngbềntrong môitrườngkiềmmạnh.

(1)Ketalhóavớiethyleneglycol,mặcdùđãápdụngcácphươngpháp bảovệ chọnlọc n hư ng phảnứng củ a 9α-

OHADvới ethyleneg ly co l vẫnđồ ng t h ờ i xảyraởcảhainhómcarbonyl3-và17-keto.

Trên phổ IR của sản phẩm (10c) mất hoàn toàn vân phổ đặc trưng cho dao độnghóa trị của nhóm carbonyl vùng 1650-1750 cm -1 , xuất hiện băng sóng đặc trưng cho C-O ketal cường độ mạnh ở 1099 cm -1 , tức là cả hai nhóm 3- và 17-keto đều bị ketal hóa,dođókhôngthểethynylhóavịtríC-17.

(2) Enol ether hóa với MeOH trong môi trường acid, sản phẩm 9α-hydroxy-3- methoxyandrosta-3,5-diene-17-one (4d) nhận được với hiệu suất thấp (32%). Phươngánnàylàkhôngkhảthi.

(1) và (4d) là đối tượng để chúng tôi tiến hành phản ứng ethynyl hóa C(17)=O sửdụngp h ứ c c h ấ t b ề n v ữ n g c ủ a l i t h i u m a c e t y l i d e v ớ i e t h y l e n e d i a m i n e

T h e o t à i l i ệ u [24], áp dụng với chất đầu (4d) nhận được sản phẩm với hiệu suất 30% Tuy nhiênchúngtôilại khôngnhậnđượcsảnphẩmnhưmong muốn.

Cuối cùng chúng tôi quyết định lựa chọnΔ 9 -AD (2), sản phẩm của quá trìnhdehydrat hóa nhóm 9α-hydroxy của 9α-OH AD (1), làm chất đầu cho phản ứng ngưngtụvớiacetylene.

Ngưng tụΔ9-AD với potassium acetylide (sinh rain situdo C2H2phản ứng vớit- BuOK) trong một dung môi phi proton như THF (dioxane, DMF ), môi trường phảnứng phải tuyệt đối khan tránh sự thủy phân của KC≡CH giải phóng C 2 H2 Phản ứngcộng nucleophile (AN) chọn lọc lập thể, với sự tấn công của ion acetylide CH≡C- từphíaαít bị cản trở hơn Kết quả là chỉ nhận được đồng phân 17α-ethynyl-17β- hydroxyvớihiệusuất tốt(73,0%).

Phổ IR của sản phẩm (7) mất đi vân phổ đặc trưng cho dao động của nhóm 17- keto(1732cm -1 ),xuấthiệnbăngsóngđặctrưngchodaođộngcủaOHở3403cm -

1;của C-H acetylene ở 3268 cm -1 ; của C≡C ở 2087 cm -1 Phổ 1 H-NMRxuất hiện tín hiệucộnghưởngcủaprotonH-21ở2,58 ppm.

Hình 3.8 Phổ 1 H-NMR của 17α-ethynyl-17β-hydroxyandrosta-4,9(11)-diene-3- one(7)

17củasảnphẩm(7)lạingượcvớicấu hìnhyêu cầu của corticoid nên cần thực hiện thêm phản ứng epimer hóa. Áp dụng phươngpháp epimer hóa gián tiếp qua ester trung gian –ONO 2 Đầu tiên ester hóa nhóm 17β-hydroxy sử dụng acid HNO3đặc (bốc khói) trong Ac2O Quá trình phản ứng (7) tandần, sản phẩm (7’) có màu vàng nhạt, rất kém bền Phản ứng cho hiệu suất định lượng.Phổ IR của (7’) xuất hiện các vân phổ đặc trưng cho dao động của nhóm nitrooxy – ONO2ở1634, 1298 và1233cm-1.

Sau đó, dưới tác dụng của xúc tác AgNO3, ester –ONO2bị thủy phân đồng thờinghịch đảo cấu hình ở trung tâm C-17 Phản ứng epimer hóa xảy ra với hiệu suất cao(82,1% từ7) Tuy nhiên cùng với sản phẩm chính 17β-ethynyl-17α- hydroxyandrosta-4,9(11)-diene-3-one (8) luôn nhận được một lượng nhỏΔ 16(17) -17- ethynyl (enyne) dođồng thời xảy ra phản ứng dehydrat hóa ở vị trí 16(17)- Sản phẩm phụ này dễ dàng bịloạibỏsaukhikếttinhtừdungmôi,như làacetone.

Cơ chế phản ứng được cho là đi qua carbocation trung gian, được bền hóa bởiion kim loại (Ag + ), khống chế không gian phíaβ Do đó nucleophile OH - tấn công từphíaαítbịcảntrởhơn.

Các dữ liệu phổ 1 H-NMR của cặp đồng phân (7) và (8) khác nhau rất ít Chỉ cósự khác biết rất nhỏ về độ chuyển dịch hóa học của proton nhóm CH 3 -18 (Δ δ = + 0,004ppm)và H - 2 1 (Δ δ= -

Hình3.9.Phổ IRcủa17β-ethynyl-17α-hydroxyandrosta-4,9(11)-diene-3-one(8)

Theo phương pháp acetylene, để xây dựng mạch bên pregnane thì giai đoạn tiếptheoc h ỉ cầ nt hủ y phânn h ó m 17β- ethynyl(C H≡ C- ), phả n ứ n g đư ợc ti ến hàn h t r o n g môi trường acid, xúc tác HgSO 4 , sản phẩm là 20-ketosteroid với hiệu suất cao

Phổ IR hợp chất (6b) mất vân phổ của dao động hóa trị C-H nhóm acetylene ở3268 cm -1 , của C≡C ở 2087 cm -1 , xuất hiện băng sóng đặc trưng cho dao động hóa trịnhóm carbonyl vùng 1700 cm -1 Phổ 1 H-NMR mất tín hiệu cộng hưởng của protonacetylene H-21 (2,58 ppm), xuất hiện tín hiệu cóδ= 2,75 ppm được gán cho protonnhómacetylCH 3 COvịtríC-17.

Hình3.10.Phổ 1 H-NMRcủapregna-4,9(11)-diene-17α-ol-3,20-dione(6b)

Phươngpháptổng hợpcác16β-methyl-17α-hydroxypregnane

Mảnh 16β-methyl-17α-hydroxy có trong phân tử của các corticoid sử dụng làmdược phẩm như: betamethasone, beclomethasone…gây nên những hoạt tính mongmuốn:làmgiảmmạnh tácdụngphụgiữmuối(Na + ),tănghoạttính khángviêm…

Chúng tôi đã tổng hợp các 16β-methyl-17α-hydroxypregnane nhưSơ đồ 3.7α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(. Giaiđoạn đầu tiên là phản ứng epoxy hóa nối đôiΔ 16(17) của (6a) Nối đôi liên hợpΔ 16(17) của (6a) bị epoxy hóa chọn lọc bằng H2O2sau khi đã khóa hệ liên hợp 3-keto-Δ4bằngketal vòng, khi đó nối đôiΔ 5(6) vàΔ 9(11) không liên hợp nên không ảnh hưởng đến quátrình Nồng độ

H2O2thường sử dụng trong phản ứng này là 30% Tuy nhiên độ tan của(6a) trong hỗn hợp dung môi là rất kém nên chúng tôi phải giảm tối đa có thể lượngH 2 O trong hệ phản ứng bằng cách tăng nồng độ H2O2 Thực tế là nếu sử dụng tác nhânoxyhóaH2O2ởnồngđộ thấphơn50%phảnứngkhôngchạy.

Dung dịch của (6a) trong hỗn hợp THF:MeOH (2:1)được kiềm hóab ằ n g NaOH bão hòa trong MeOH Khuấy dưới dòng khí trơ rồi thêm vào H2O260%. Nângnhiệtđộlên40-45 o Cvàduy trìtrongkhoảngthờigian20giờ.Phảnứngcộngnucleophile (AN) xảy ra theo cơ chế Michael với độ chọn lọc cao, hiệu suất đạt trên90%.

Trên phổ 1 H-NMR của (9) không còn tín hiệu cộng hưởng proton vùng olefin(6,72 ppm) của H-16, nó bị chuyển dịch lên trường cao hơn (3,75 ppm) Đặc biệt ảnhhưởng không gian gần của trung tâm C-16(17) đến CH 3 -21 làm tín hiệu cộng hưởngproton của nhóm methyl này cũng bị chuyển dịch rõ rệt, từ 2,27 ppm lên vùng2,05ppm.

Hình 3.11.Phổ 1 H-NMR của 3,3-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-16α,17α- epoxypregna-5,9(11)-diene-20-one(9)

Trước khi thựchiện phảnứng cộngmở vòng16α,17α-epoxy sửdụng tácnhâncơkimcầnbảovệnhómcarbonylC(20)=O. Điểm đặc biệt của phản ứng từ (9) → (10b) là với lượng dư tác nhân ethyleneglycol đã đồng thời xảy ra phản ứng thế vòng ketal 6 bằng vòng ketal 5 Kết quả lànhận được 3,20-bis-ketal mà không phải là hỗn hợp ketal như như đoán ban đầu Điềunày được khẳng định bằng dữ liệu phổ 1 H-NMR của (10b), không còn tín hiệu cộnghưởng proton của 2 nhóm CH 3 -ketal (vùng 1,0 ppm), xuất hiện tín hiệu cộng hưởngcủa 8 proton CH2-O ketal (2 vòng ketal) vùng 3,9-4,1 ppm Trên phổ IR của(10a,10b)khôngcònvânphổđặctrưngchonhómcarbonylC(20)=O (vùng1700cm -1 ).

Hình 3.12 Phổ 1 H-NMR của 3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)-16α,17α-epoxypregna-

Sau khi tạo thành liên kết đôi ở vị trí 9(11)- và khóa các nhóm chức carbonyl ở vịtrí 3 và 20, sự tồn tại cầu oxy ở vị trí 16(17)- tạo thuận lợi cho việc đưa nhóm methylvào vị trí 16β- và nhóm hydroxy vào vị trí 17α- theo cơ chế cộngtrans Sử dụng tácnhân Grignard, thường là halomethyl-magnesium, tốt hơn cả là CH3MgBr Tác nhânđượcdùngởnồngđộcao(từ3- 3,4M),dưkhoảng10-50lầnsovới16α,17α-epoxysteroid ban đầu Sau phản ứng lượng dư tác nhân bị phân hủy bởi một dung dịchacid Phản ứng được thực hiện trong một dung môi trơ như THF, Et2O, dioxane ởnhiệt độ từ nhiệt độ phòng đến nhiệt độ hồi lưu, thường từ 70-100 o C tùy thuộc dungmôi,thờigianphảnứngtừ 15- 24giờ,môitrườngtuyệtđốitrơvàkhan.

Chúng tôi đã thực hiện hai phản ứng cộng mở vòng 16α,17α-epoxy với chất đầulà (10a) và (10b) để đưa mảnh 16β-methyl-17α-hydroxy vào phân tử steroid, sử dụngtácnhânCH 3 MgBr3,4MtrongdungmôiTHF ở70-75oCtrong23giờ.

Hình 3.13.Phổ 1 H-NMR của 3,20-bis-(1,2-ethyleneketal)-16β-methylpregna-

5,9(11)-diene-17α-ol(11b) Phản ứng không bị ảnh hưởng bởi vòng ketal 5 hoặc 6 cạnh (bảo vệ chức keto ởvị trí 3 và 20) đều cho hiệu suất khoảng 80% Do vòng epoxy định hướngαnênnucleophile CH 3 - tấn công vào vị trí C-16 từ phíaβít bị cản trở hơn hình thành đồngphân 16β-methyl-17α- hydroxypregnane Cấu hình của trung tâm C-16,17 được chứngminhbằngphổNOESYởgiaiđoạnsau.

Trên phổ IR của sản phẩm (11a) xuất hiện đỉnh đặc trưng cho dao động hóa trịnhóm OHvùng3500cm-1.Trênphổ1H-NMR(CDCl 3 )tínhiệucộngh ư ở n g c ủ a proton H-16 không còn xuấthiệnởvùngtrường thấp(3,43ppm)m à c h u y ể n l ê n trườngcaovùnghydrocarbonno,xuấthiệntínhiệucộnghưởngprotonnhómCH

3v ị trí C-16 có độ chuyển dịch hóa học 1,19 ppm tách vạch doublet với hằng sốJ= 7,0

Hình 3.14.Phổ1H-NMR (CDCl3) của 3,20-bis-(2,2-dimethyl propylenedioxy)-

16β-methylpregna-5,9(11)-diene-17α-ol(11a) Trên phổ1H-NMR (DMSO-d 6α,17α- ) của (11a) xuất hiện thêm tín hiệu cộng hưởngcủap r o t o n n h ó m O H-17d ạ n g s i n g l e t c óδ =3 , 5 8 p p m P h ổ E S I -

M S c ủ a h ợ p c h ấ t (11a) bắt được peak ion giả phân tử với số khốim/z515 ứng với công thức cộng[M+H] +

Nhữngg i a i đ o ạ n k ế t i ế p d o k h ô n g s ử d ụ n g n h ữ n g t á c n h â n g â y ả n h h ư ở n g không mong muốn đến chức carbonyl nên chúng tôi tiến hành phản ứng giải phóngnhóm bảo vệ Quá trình giải phóng nhóm bảo vệ ở vị trí 3 và 20 phân tử steroid đượcthực hiện theo phương pháp nào phụ thuộc vào bản chất của nhóm bảo vệ Nếu nhómbảo vệ là ketal như trường hợp này thì tác nhân sử dụng là một acid vô cơ hoặc hữu cơ(HCl,H B r , H 2 SO4,H C l O4,H N O3,p-TSA,A c O H , H C O O H , C O O H -

C O O H ) , h o ặ c hỗn hợp các acid, trong sự có mặt của H2O hoặc hỗn hợp H2O-alcohol Chúng tôi sửdụng acid H2SO4trong dung môi acetone-H2O, phản ứng giải phóng đồng thời cácnhómbảovệthựchiệnở60 o C từ 2-4giờ đạthiệusuất địnhlượng.

Trên phổ IR của (12) không còn vân phổ đặc trưng cho dao động của C-O ketal(vùng 1100 cm -1 ), xuất hiện vân phổ đặc trưng cho dao động của nhóm carbonyl ởv ị trí 3 và 20 (vùng 1650-1750 cm -1 ) Trên phổ 1 H-NMR mất tín hiệu cộng hưởng từ củaH-6 olefin (5,43 ppm), chuyển thành H-4 olefin (5,74 ppm); mất tín hiệu cộng hưởngtừ của proton nhóm CH 2 -O ketal (vùng 3,3-4,1 ppm), tín hiệu của nhóm CH3- 21chuyển dịch xuống trường thấp hơn (từ 1,39 ppm xuống 2,26 ppm vùng cộng hưởngcủachứcacetylCH 3 CO).

Hình 3.15.Phổ 1 H-NMR của 16β-methyl-17α-hydroxypregna-4,9(11)-diene -3,20- dione(12)

Phổ 13 C-NMR của (12) xuất hiện những tín hiệu cộng hưởng từ đặc trưng củanguyên tử C nhóm carbonyl ở vị trí 3 và 20 (vùng 200 ppm), tăng thêm một tín hiệucộng hưởng từ carbonCH 3 vị trí C-16, vùng cộng hưởng từ của carbonC-O ketal (60ppm) không còn xuất hiện Phổ NOESY có sự tương tác của proton nhóm CH3-18 vàCH3-21vớinhómCH3v ịtríC-16,chứngtỏchúngđềuđịnhhướngβ.

Hình3.16.PhổNOESYcủa16β-methyl-17α-hydroxypregna-4,9(11)-diene-

Hình 3.17 Tương tác NOESY giữa proton nhóm CH3-18 và CH3-21 với proton nhómCH3vị trí C-16 của hợp chất 16β-methyl-17α-hydroxypregna-4,9(11)-diene-3,20- dione(12)

Sựthayđổitínhiệucộng hưởngtừcủa mộtsố protonđặctrưng củacáchợp chấttrongsơđồ chuyểnhóatừ(6a)đến(12)được trìnhbàytómtắttrongBảng3.2.

CH3(16) - - - - 1,19(d,J=7α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(,0 Hz) 1,01(s) 1,19( d ,J =

Chúthích:*Dung môi đo1H-NMRlà CDCl3, trừhợpchất11ađotrongCDCl3v àDMSO-d 6α,17α-

**Không có,khôngxuấthiệnhoặcxuấthiệnnhưngchưa được gán

Phươngpháptạolập nốiđôi∆ 1(2)

Việc đưa nối đôi vào vị trí 1(2)- phân tử steroid làm tăng hoạt tính chống viêm vàgiảm tác dụng phụ giữ muối Chúng tôi lựa chọn phương pháp sử dụng SeO 2 làm tácnhândehydrohóa.Phảnứngưutiênxảyraởvi ̣trí1(2)-;thờigianphảnứngtươngđối dàivàhiêu suấtphảnứngkhôngcao.Tuynhiênđâylàphảnứngcóýnghia trongtổng hơ p mô t sốc o r t i c o i d c o ́ h o a t tínhs i n h h o c như:p r e d n i s o l o n e , b e t a m e t h a s o n e , beclomethasone,dexamethasone

30giờ,theocơchếtáchsyn.QuátrìnhphảnứngsinhraSe kimloai làmchohỗnhơp phảnứngchuyểndầnsangmàuđỏnâu.Ngoàisảnphẩm chínhtrênSKBMchúngtôinhân thấymôt vàisảnphẩmphụcóR f thấphơnRfcủasản phẩmchínhvớilươngkhôngđángkể.Măṭkhác,Sekimloaịởdaṇ ghaṭcókíchthước rấtnhỏnênviêc loa i bỏr ấ t khó,chúngtôiphảitinhchếsảnphẩmbằngphươngpháp sắckícôt sửdụngsilicagel:Celite=3:1,dungmôirửagiảin-hexane:acetonehoặc n-hexane:Et2O.

C=C (vùng 1615 cm -1 ) có cường độ mạnh hơn thông thường Trên phổ 1 H-NMRxuất hiện tín hiệu cộng hưởng từ đặc trưng của proton H-1 (vùng 7,38 ppm) và H-2(vùng 6,14 ppm) Chúng tương tác với nhau với hằng sốJ= 10,5 Hz; ngoài ra H-2 cònchịu tương tác xa của H-4 vớiJ= 2,0 Hz Tín hiệu cộng hưởng của proton H-4 cũng bịdịch chuyển (từ 5,74 ppm xuống 5,98 ppm) Trên phổ 13 C-NMR và DEPT là sự xuấthiện của tín hiệu cộng hưởng C-1 và C-2 ở 155,6 và 126,3 ppm, tương ứng Phổ ESI-MScủa(13b)xuất hiệnpeakionvớisố khốim/ z386α,17α-[M+H+ H ] + ([M+2H])

Hình3.18.Phổ 1 H-NMRcủapregna-1,4,9(11)-triene-17α,21-diol-3,20-dione-21- acetate(13b)

Hình3.19.PhổDEPTcủapregna-1,4,9(11)-triene-17α,21-diol-3,20-dione-21- acetate(13b)

Phươngpháptổnghợpmạchbêncorticoid

Phươngpháp tổng hợp mạch bên corticoidsửd ụ n g h ợ p

mạchbêncorticoidsửdụnghợpchấtsiêuhóatrịcủaiodPhI(OAc) 2 Đây là một phản ứng chìa khóa trong tổng hợp corticoid từ các 17- acetylsteroid.Trước tài liệu [110] được biếtα-hydroxy hóa ketone là phương pháp gián tiếp quanhiều giai đoạn Tác giả [110] đã thực hiện phản ứng hydroxy hóa trực tiếp cácmethylketone trên một dãy các arylmethylketone sử dụng các hợp chất siêu hóa trị củaiod như PhI(OAc) 2 , PhI(OCOCF3)2 cho hiệu suất tốt Lưu Đức Huy đã áp dụngphương pháp này lên một số phân tử steroid [43] Gần đây chúng tôi cũng đã công bốphươngphápmộtgiaiđoạn21-monohydroxyhóacác17β- acetylsteroidsửdụngphenyliodine diacetate[ 1 1 2 ] M ặ c d ù l à m ộ t p h ư ơ n g p h á p m ớ i m ộ t g i a i đ o ạ n , t u y nhiên cũng có một số hạn chế như: (1) không áp dụng đối với steroid có hệ thống 3-keto-∆ 4 (do môi trường kiềm mạnh…); (2) phản ứng phụ thuộc nhiều vào hóa lập thểtrungtâmC-

Chúng tôi [112] lần đầu tiên đã triển khai phản ứng tổng hợp mạch bên corticoidsử dụng PhI(OAc)2với một số dẫn xuất 17 β-acetylsteroid mới (24a); (24b) Kết quảnhận được cho thấy sự có mặt của các nhóm chức như 3β-hydroxy,Δ 5 , 16β-chloro và16β-bromo không ảnh hưởng đến phản ứng và đều cho hiệu suất tốt (trên dưới 90%).Tuy nhiên, các dẫn xuất 17α-acetyl hoàn toàn không bị chuyển hóa, mặc dù đã nỗ lựcthựchiện.

Do quá trình 21-hydroxy hóa các halohydrin xảy ra trong môi trường kiềm mạnhnên đã đồng thời xảy ra quá trình dehydrohalogen hóa đóng vòng, đưa đến cùng mộtsản phẩm (25) Sự chuyển hóa nhóm 17β-acetyl của (23), (24a) và (24b) đến mạch bêncorticoidđ ư ợ c khẳngđịnh bởidữ liệuphổ 1 H-NMR,đặc biệtlà sự mấttínhiệu singlet của proton nhóm acetyl CH3CO vị trí C-17 ở vùng 1,95-2,43 ppm, xuất hiện hai tínhiệudoubletcủahaiprotonkhôngtươngđươngnhómCH2OHvịtrí21dạngphổAB(

Với hệ thống 3-keto-Δ 4 , để xây dựng mạch bên corticoid theo phương pháp này,chúng tôi đã tiến hành bảo vệ nhóm carbonyl vị trí 3 bằng ketal hóa, chuyển hệ thống3-keto-∆ 4 thành 3-ketal-∆ 5 Các 3-ketal-∆ 5 -17β-acetylsteroid phản ứng với hợp chấtsiêu hóa trị của iod như PhI(OAc)2trong môi trường kiềm mạnh (NaOH, KOH), dungmôiMeOH.

Phản ứng được cho là đi qua qua hợp chất trung gian 20,21-epoxy, tạo thành21- hydroxy-20,20-dimethylketal(14),thủyphântrongmôitrườngacidđến21-hydroxy-20- keto(15).

(1) Phổ IR mất đi vân phổ đặc trưng của nhóm carbonyl (1701 cm -1 ), xuất hiện đỉnhđặc trưng cho dao động hóa trị nhóm hydroxy (3511 cm -1 ) (2) Phổ 1 H-NMR mất tínhiệu cộng hưởng proton nhóm acetyl CH3CO vị trí C-17 (2,05 ppm), xuất hiện tín hiệutách vạch multiplet của proton nhóm CH2OH vị trí 21 (vùng 3,71 ppm) và hai singlettươngứngvớihai nhómmethoxyCH3O- vịtríC-20(3,29và3,27ppm).

Hợp chất trung gian 3,20-bis-ketal (14) bị thủy phân trong môi trường acid (p- TSA,H C l … ) c h o 2 1 - h y d r o x y - 2 0 - k e t o P h ổ I R c ủ a s ả n p h ẩ m (15)k h ô n g c ò n b ă n g sóng đặc trưng cho dao động hóa trị của C-O ketal

(1092 cm -1 ), xuất hiện vân phổ đặctrưng của hai nhóm carbonyl cường độ mạnh vùng 1665-1710 cm -1 Phổ 1 H-NMRkhông còn tín hiệu cộng hưởng từ của hai nhóm CH 3 O- vị trí C-20, xuất hiện tín hiệucộng hưởng của hai proton không tương đương nhóm

CH2OH vị trí 21 dạng phổ ABtương ứng với hai doublet (J= 20,0 Hz) cóδ= 4,07 và 4,36 ppm; của proton nhómOH-21cóδ= 2,95ppm.

Hình 3.20.Phổ 1 H-NMR của 16α,17α-epoxypregna-4,9(11)-diene-21-ol-3,20- dione(15)

PhươngpháptổnghợpmạchbêncorticoidsửdụngI 2t r o n g môitrườngkiềm 85 1 Phương pháp tổng hợp mạchbêncorticoidqua hợpchấttrunggian21,21-

3.5.2.1 Phương pháp tổng hợp mạch bên corticoid qua hợp chất trung gian 21,21- diiodide

Với lượng dư tác nhân I2so với steroid, Ca(OH)2khan hoặc CaO khan tác dụngvới acid HI tạo thành trong quá trình phản ứng nhằm chuyển dịch cân bằng, CaCl2làmgiảm sự thăng hoa của I2, tốt hơn cả là thực hiện phản ứng trong điều kiện không cóánh sáng, dung môi trơ MeOH tuyệt đối khan Phản ứng cho hiệu suất định lượng vớisảnphẩm chínhlà21,21-diiodidemongmuốn.Quy trìnhnày đãkhắcphụcđ ư ợ c nhược điểm của [7] Theo tài liệu [7], 17α-hydroxyprogesteronep h ả n ứ n g v ớ i l ư ợ n g dưI 2trong h ỗ n h ợ p d u n g m ô i T H F -

Khôngcầntinhchếthêm,dẫnxuất21,21-diiodideđượcchuyểnđến21-monoiodide rồi 21-acetate bằng phản ứng với acetate kim loại kiềm trong dung môiphâncựcphiprotonnhưDMF,acetone,DMSO,ACN…

Trên phổ 1 H-NMR của (16a) và (16b) xuất hiện tín hiệu cộng hưởng proton dạngphổ AB vùng 4,8-4,9 ppm của hai proton không tương đương trong nhóm methyleneCH 2 OAc-21 tách vạch doublet cóJ= 18,0-19,0 Hz thay cho tín hiệu singlet nhómCH3CO vị trí C-17 cộng hưởng ở vùng 2,09-2,26 ppm; ngoài ra còn có tín hiệu singletđặc trưng của proton nhóm acetoxy CH3COO vị trí C-21 ở 2,08 ppm Trên phổ13C-NMR, C nhómC=O acetoxy và C-21 cộng hưởng vùng 170 ppm và 69 ppm, tươngứng Phổ ESI-MS hợp chất (16b) bắt được peak ion giả phân tử với số khốim/z399[M+H] +

Hình 3.21.Phổ 1 H-NMR của 21-acetoxy-16β-methylpregna-1,4,9(11)-triene-

3.5.2.2 Phương pháp tổng hợp mạch bên corticoid qua hợp chất trung gian 21- monoiodide Được biết, quá trình tổng hợp mạch bên corticoid từ 17α-hydroxypregnane (ene)giai đoạn đầu tiên, theo quy luật, là halogen hóa vị trí C-21 với sự hình thành của hợpchất trung gian 21-halogen-17α-hydroxypregnane (ene), và sau đó halogen được thaythếbằngnhómacetoxydướitácđộngcủaacetatekimloại kiềm.

Có thể 21-chloro,bromohoặc iodo hóa; tuy nhiên, theo tài liệu tham khảo[55,56,106] sau khi chloro hoặc bromo hóa đều phải iodo hóa trước khi acetoxy hóa.Trong quá trình chuyển từΔ 9(11) -progesterone đến dẫn xuất 21-bromo hoặc 21- chlorocần thiết phải khóa hệ thống 3-keto-Δ 4 , sử dụng methyl hoặc ethyl 3,5- dioxolane,pyrrolidine hoặc morpholinothio của enamine, hoặc ketal hóa Nếu không, sẽ hìnhthành các sản phẩm phụα-halogen hóa ở vị trí C-2 và C-6 khi sử dụng lượng dư nhiềucủaCl 2 ,Br2.

Vì vậy chúng tôi thực hiện theo quy trình 21-iodo hóa của Stock [108], phươngpháp iodo hóa trực tiếp đơn giản không cần khóa hệ thống 3-keto-Δ 4 Iodo hóa C-21của 17α-hydroxypregnane trong dung môi hỗn hợp CH2Cl2/MeOH hoặc THF/MeOHvới lượng dư I2trong sự có mặt của một base như CaO rắn (hoặc dung dịch NaOH),xúc tác là một lượng nhỏ H2O, cho sản phẩm chính 21-momoiodide Không cần tinhchế thêm, sản phẩm này được 21-acetoxy hóa bằng cách xử lý với acetate kim loạikiềm trong dungmôip h â n c ự c p h i p r o t o n n h ư D M F , a c e t o n e , D M S O ,

Hợp chất trung gian (22) có thể tiếp tục thực hiện ngay phản ứng mà không cầnphân lập Trên phổ 1 H-NMR của (22) mất đi tín hiệu cộng hưởng đặc trưng của protonnhóm acetyl CH 3 CO vị trí C-17 dạng singlet ở 2,17 ppm Sản phẩm cuối (17) có sựkhácbiệtrấtrõvềdữliệuphổ.Mấttínhiệucộnghưởngtừdạngsingletcủaprot on nhóm CH3CO vị trí C-17 có độ chuyển dịch hóa học 2,75 ppm (6b), xuất hiện hai tínhiệu doublet cóJ= 17,5Hz, dạng phổ AB ởδ= 5,07 và 4,84 ppm đặc trưng cho haiproton không tương đương nhóm methylene CH 2 -21 Nguyên tử carbon nhómC=Oacetoxy (vị trí C-21) vàCH2-21 cộng hưởng lần lượt ở 170,6 và 67,9 ppm trên phổ13C-NMR Phổ ESI-MS xuất hiện peak ion giả phân tử với số khốim/ z387[M+H] + vàcácpeakionmảnh vớisốkhốim/z369[M+H-H2O]+,3 2 7 [ M + H - A c O H ]

Hình 3.22.Phổ ESI-MS của 21-acetoxypregna-4,9(11)-diene-17α,21-diol-3,20- dione(17) Ưu điểm của phương pháp này là cho hiệus u ấ t c a o d ù t r ả i q u a h a i g i a i đ o ạ n (hiệusuấttổng80,3%). Đặc điểm đặc trưng nhất về cấu tạo của mạch bên corticoid chính là hai protonnhóm CH 2 -21 Chúng không tương đương do tạo cầu liên kết hydro với nguyên tử oxynhóm 20-keto Tín hiệu cộng hưởng từ của hai proton này trong phân tử các corticoidđược tổng hợp trongBảng 3.3 Chúng xuất hiện ở trường thấp hơn (4,7-5,1 ppm) vàtách vạch doublet với hằng số tương tácJ= 17,5-18,0 Hz khi liên kết với nhómacetoxy Chúng xuất hiện ở trường cao hơn (4,0-4,4 ppm) và tách vạch doublet vớihằngs ố t ư ơ n g t á cJ =1 9 , 0 -

2 0 , 0 H z k h i l i ê n k ế t v ớ i n h ó m h y d r o x y , t r o n g m ộ t s ố trường hợp (19a , 19b ) còn bắt được tương tác xa của hai proton này với proton nhómhydroxytáchvạchdoubledoubletvớiJ=5,5-6,0Hz

,5 Hz) Chú thích: Dung môi đo1H-NMR là DMSO-d 6α,17α- , trừ hợp chất14,15,17và25đo trong

3.5.3 Sosánh haiphươngpháptổng hợpmạchbêncorticoid

Phươngphápđưa halogenvàophântửsteroid

Mục đích của bromohydrin hóa nối đôiΔ 9(11) là: (1) đưa nhóm 11β-hydroxy vàophân tử steroid; (2) chuyển hóa thành dẫn xuất 9β,11β-epoxy để đưa nguyên tử Cl, Fvào vị trí 9α- Cả hai mục đích này làm tăng đáng kể hoạt tính hormone mong muốncủa steroid (làm tăngrất nhiều tác dụng chống viêm và thời gianb á n t h ả i t r ừ c ủ a thuốc, đồng thời làm giảm tác dụng phụ giữ muối và nước), trong khi 9α- bromo hoặciodo lại làm giảm hoạt tính Lựa chọn bromohydrin hóa là do: hiệu suất cao của phảnứng; tác nhân HOBr dễ kiếm; sản phẩm 9α-bromo bền hơn 9α-chloro…

Phản ứng cộngmộttácnhânHOBrnhưNBA,NBS,1,3-dibromo-5,5- dimethylhydantoin(Dibromantin)…(Br 2 X + 2 H2O → 2 HOBr + H2X) trong sự có mặt của acid pechloricvàonốiđôiΔ 9(11) theocơchếcộngtrans-diaxialcho hiệusuấttốt(khoảng90%).

Các sản phẩm chứa halogen đều dễ bị phân hủy bởi nhiệt Đồng thời việc mất đitín hiệu cộng hưởng của proton H-11 vùng 5,5 ppm dạng multiplet, xuất hiện tín hiệucộng hưởng proton nhóm OH-11 dạng singlet tù vùng 4,5-5,5 ppm cùng với sự dịchchuyển lên trường cao hơn của tín hiệu cộng hưởng C-9 và C-11 từ vùng olefin 120ppm (C-11) và 140 ppm (C-9) lên vùng 90 ppm (C-11) và 70 ppm (C-9) đã khẳng địnhcấu trúc của sản phẩm Mặc dù phổ ESI-MS hợp chất (18b) chỉ bắt được peak ion giảphân tử có số khốim/z494[M+H] + , mà không bắt được peak ion đồng vị với số khốim/z496α,17α-[M+H] +

Hình 3.23.Phổ 13 C-NMR của 9α-bromo-16β-methyl-11β,17α,21-trihydroxypregna-

Phản ứng cộng mở vòng epoxy bằng tác nhân nucleophile HX xảy ra theo cơ chếcộngtransvà thường được sử dụng để tổng hợp các halohydrin Do vòng epoxy địnhhướngαnên tác nhân nucleophile Cl - tấn công vào vị trí C-16 từ phíaβít bị cản trởhơn.Môitrườngacidmạnhđồngthờigiảiphóngnhómbảovệ3-ketalvàvớicấuhình

17α-hydroxy nhận được rất thuận lợicho việc xây dựngmạch bên corticoidở g i a i đoạn sau Trước đó (9’) và (21’) là đối tượng để chúng tôi chuyển hóa chúng đến mạchbên corticoid (sau khi đã thủy phân 3-ketal của9và21, tương ứng) theo cả hai phươngpháp3.5.2.1và3.5.2.2,tuynhiêndocấuhình16α,17α- epoxycồngkềnhđãgâycảntrởkhônggianđếnnhómCH 3 -21,nênphảnứng khôngchạy.

3.5.2.2càng khẳng định ảnh hưởng không gian của trung tâm C-16 và C-17 đến phảnứng xây dựng mạch bên corticoid Cấu trúc của sản phẩm (21’’) được khẳng định bằngcác dữ liệu phổ: Mất hoàn toàn các tín hiệu cộng hưởng của các proton CH 2 -O-ketalvùng 3,4-3,6 ppm; CH3- ketal vùng 1,0 ppm Proton olefin H-6 (5,34 ppm) chuyển vềH-4 (5,62 ppm); H-16 từ trường cao (3,67 ppm) xuống trường thấp hơn (4,27 ppm);xuấthiện tínhiệucộng hưởngprotonnhómOH-17(5,91ppm).

Với mục đích tổng hợp các dẫn xuất mới, ngoài việc áp dụng các phương pháplên chất đầu 9α-OH AD (1), chúng tôi còn sử dụng các hợp chất như DPA và các dẫnxuấtcủanó.

(24a) và (24b) là các dẫn xuất mới chứa halogen trong phân tử Chúng được tổnghợp bằngphản ứng cộngmở vòng epoxy sửdụng tác nhân HX(HCl, HBr),t h e o c ơ chếcộngtrans,chohiệusuấtcao(≈95%).Trênphổ 1 H-NMRcủacáchalohydrin(24a) và (24b): tín hiệu cộng hưởng proton của H-16 xuất hiện ở trường thấp (vùng 4,10ppm) đồng thời tín hiệu của nhóm methyl CH 3 -19 và acetyl CH3CO vị trí C-17 đềuchuyểnd ị c h x u ố n g t r ư ờ n g t h ấ p h ơ n ( t ừ 1 , 0 2 x u ố n g v ù n g 1 , 2 6 p p m v à 1 ,

9 5 x u ố n g vùng 2,42 ppm, tương ứng) Phổ EI-MS (24a) xuất hiện peak ion với số khốim/ z411[M+H] + , các cặp peak ion đồng vị (ứng với 79 Br và 81 Br) có tỉ lệ cường độ

≈50:50(với số khốim/z369 và 371; 349 và 351) Peak ion đồng vị mất đi khi Br bị tách khỏiphântử 331[M-Br] +

Hình3.24.Phổ EI-MScủa16β-bromopregna-5-en-3β,17α-diol-20-one(24b)

Tổnghợpcácdẫnxuấtepoxytheophươngphápdehalohydrin

Đưa mảnh epoxy vào vị trí C-9(11) tạo điều kiện thuận lợi để đưa mảnh 9α- F(hoặc Cl)-11β-OH vào phân tử steroid, nhằm làm tăng hoạt tính kháng viêm và kéo dàithời gian bán thải của một số thuốc steroid có cấu trúc này Giai đoạn này thường đượcthực hiện sau cùng do phản ứng xảy ra hầu như không ảnh hưởng đến các trung tâmkhác và chỉ cần thực hiện một giai đoạn phản ứng nữa là có được sản phẩm cuối chứahalogenkémbền.

Trong môi trường kiềm mạnh (NaOH hoặc KOH) phản ứng dehydrohalogen hóađóng vòng thành 9β,11β-epoxy xảy ra theo cơ chế SN2 nội phân tử, đồng thời thủyphânchức21-acetoxyđến21-hydroxy.Chứcnàynếucầncóthểkhôiphụcdễdàng.

Cấu trúc của sản phẩm (19a) và (19b) được khẳng định bởi sự vắng mặt tín hiệucộng hưởng proton nhóm acetoxy CH 3 COO vị trí C-21 (vùng 2,1 ppm) trên phổ1H-NMR, xuất hiện tín hiệu singlet của proton nhóm OH-21 (3,41 và 3,18 ppm, tươngứng) Vùng cộng hưởng của hai proton không tương đương nhóm CH 2 -21 cũng bị dịchchuyển từ vùng 4,8-5,0 ppm (do liên kết với nhóm acetoxy) xuống vùng 4,1-4,4 ppm(doliênkếtvớinhómhydroxy).

Hình 3.25.Phổ 1 H-NMR của 9β,11β-epoxy-16β-methyl-17α,21- dihydroxypregna-4-en-3,20-dione(19a) Đặc biệt hai proton này trong phân tử sản phẩm (19a) và (19b) ngoài tương tácvới nhau còn chịu tương tác xa của proton nhóm OH-21 tách vạch double doublet lầnlượt với hằng sốJ= 19,0 và 5,5 - 6,0 Hz Vắng mặt tín hiệu cộng hưởng carbonC=Oacetoxy(170ppm)trênphổ 13 C-NMR;C-9vàC-

C-11) do quá trình dehydrohalogen hóa đóng vòng vị trí C-9(11) của các halohydrinthành vòng epoxy Phổ ESI-MS của hợp chất (19b) bắt được peak ion giả phân tử vớisốkhốim/z373[M+H] +

Phươngphápkhử halogen(dehalogenhóa)

Việc giữ lại nhóm 11β-hydroxy của các dẫn xuất halohydrin là để có được sảnphẩm giống như hydrocortisone - một hormone thiên nhiên Chúng tôi đã tổng hợpthành công hợp chất (20) - prednisolone acetate - một dược phẩm steroid, có tác dụngrõrệttrongchốngviêm,chốngdịứngvà ứcchếmiễndịch

Có rất nhiều tác nhân khử alkylhalide, thông dụng nhất là LiAlH4, chính nguyêntử H trong LiAlH4đã đi vào hợp chất hữu cơ thay thế nguyên tử halogen (khẳng địnhbằng deuteri hóa) Ngoài ra còn sử dụng LiBH4và các dẫn xuất hữu cơ của nó(LiEt3BH); LiAlH(OMe)3; CuI; NaBH4; các organotin hydride RnSnH4-n…[120] Tuynhiên phản ứng dehalogen hóacác halohydrin của steroid trong tàiliệu tham khảol à rất hạn chế và chỉ thấy sử dụng tác nhân HSnBu3 Phản ứng thế nucleophile bởi sự tấncông của ion hydride H-hoặc Hδ-theo cơ chế SN2 hơn là SN1 và do đó khả năng phảnứngcủahalidebậcbalàkémnhất, cạnhtranh vớiquátrìnhdehydrohalogenhóa.

Cấu trúc của sản phẩm được xác định bằng các phương pháp phổ: (1) Phổ 1 H- NMR có sự dịch chuyển tín hiệu cộng hưởng proton H-11 lên trường cao hơn (từ 4,58ppm lên4,28 ppm); (2) Phổ 13 C-NMR, tín hiệu C-9 không xuất hiện vùng C liên kếtvới halogen (70-80 ppm); tín hiệu C-11 chuyển dịch lên trường cao hơn( 6 8 , 3 p p m ) khi so sánh với dữ liệu phổ của các hợp chất (18a) (96,8 ppm); (18b) (89,3 ppm) vàchất đầu (18c) (89,3 ppm); (3) Phổ ESI-MS bắt được peak ion giả phân tử với số khốim/z403[M+H] + , 402[M+H-H ] và peak ion mảnh với số khốim/z384[M+H- H-H 2 O].

Hình3.26.Phổ ESI-MScủaprednisolone acetate(20)

Đềxuấthaisơđồtổnghợpmộtsốdượcphẩmsteroiddựat r ê n c á c phươngphá pđãnghiêncứuởtrên

Hydrocortisone làm ộ t g l u c o c o r t i c o i d t ự n h i ê n d o t u y ế n t h ư ợ n g t h ậ n t i ế t r a N ó có tác dụng kháng viêm và ức chế miễn dịch, dùng điều trị viêm khớp dạng thấp, viêmtuyến giáp, viêm da, viêm mắt mũi dị ứng, hen xuyễn, canxi trong máu cao, suy vỏthượng thận, hội chứng thượng thận sinh dục Được Tổ chức Y tế thế giới đưa vàodanhsách thuốcthiếtyếu,hiệuquảvàantoàn. Hydrocortisone acetate là liệu pháp thay thế hormone ở người suy vỏ thượngthận Điều trịn g ắ n h ạ n t r o n g c á c b ệ n h l ý x ư ơ n g k h ớ p : v i ê m x ư ơ n g k h ớ p , v i ê m k h ớ p dothấpvàdocácnguyênnhânkhác

Prednisolone có tác dụng chống viêm và ức chế miễn dịch, điều trị: viêm khớpdạng thấp, lupus ban đỏ toàn thân, một số thể viêm mạch; viêm động mạch thái dươngvà viêm quanh động mạch nút, bệnh sarcoid, hen phế quản, viêm loét đại tràng, thiếumáu tanhuyết, giảm bạch cầuhạt,và nhữngbệnhdị ứngnặngg ồ m c ả p h ả n v ệ N ó cũng được sử dụng để hỗ trợ trong điều trị ung thư, như bệnh bạch cầu cấp, u lympho,ungthư vúvàungthư tuyến tiềnliệt ởgiai đoạn cuối.

Từ 9α-OH AD (1) chúng tôi đã tổng hợp hợp chất trung gian chìa khóa (6b) theohai phương pháp cyanohydrin và acetylene nhưSơ đồ 3.8dưới đây Hiệu suất chuyểnhóat ừ (1)đ ế n (6b)k h o ả n g 5 0 , 7 %

Từhydrocortisoneacetatequahaiphảnứngcóthểtổnghợpprednisolone:dehydrohóa1(2) -vàthủyphânchức21-acetoxyđếnchức21-hydroxy.

Từ(6b) chúng tôi tổng hợpprednisolonetheohaiphương ánnhưSơđ ồ 3 8.Tổng hợp mạch bên corticoid trước rồi dehydro hóa 1(2)- sau hoặc ngược lại đều chohiệusuấttốt.Điểmmớicủasơđồtổnghợpmàchúngtôiđềxuấtđólàphảnứngtạolập nối đôiΔ 1(2) ở giai đoạn trước hoặc sau giai đoạn tạo lập mạch bên corticoid, còntrongtàiliệuthamkhảothườngthựchiệnởgiaiđoạncuốicùngcủaquy trình[81,82,86,87] Tất cả các phương pháp này chúng tôi đã nghiên cứu và áp dụng lên cácchất đầu khác nhau, phần lớn các phản ứng trong sơ đồ đã được thực hiện theo quytrìnhphòngthínghiệm.

Sơ đồ 3.8 Tổng hợp hydrocortisone acetate và prednisolone từ 9α-OH

ADĐiềukiệnphảnứng: a: H 3 PO 4 85%, CHCl 3 , hồi lưub:C 2 H 2 ,THF,t-C 4 H 9 OK,-

15oC c:1.HNO 3 63%,Ac 2 O,-15oC; 2.H 2 O,THF,AgNO 3 ,toptn d:KCN,MeOH,AcOH,toptnhoặcMe 2 C(CN)OH,MeOH,OH-/36-40oC e: Me 2 C(CH 2 OH) 2 , (EtO) 3 CH,p-TSA, 0-5oC hoặc C 2 H 4 (OH) 2 , (MeO) 3 CH,p-TSA, 40oCf:

CH 2 =CHOEt,THF,p-TSA, toptn g: MeLi 1,6M,THF,-20 o C-t o ptn h: H 2 O,THF,MeOH,HgSO 4 ,H+,toptn i:1.I 2 ,MeOH,CH 2 Cl 2 ,CaO,H 2 O; 2.AcOK,DMF,65oC j:NBS,THF,HClO 4 ,H 2 O,0oChoặcDibromantin,acetone,HClO 4 ,H 2 O,10oC k: HSnBu 3 , THF, MeCN, hồi lưul: SeO 2 ,t-BuOH,Py,hồi lưu m: 1.I 2 ,MeOH, CH 2 Cl 2 ,CaO, H 2 O,toptn;2.AcOK,DMF, 65oC n: SeO 2 ,t-BuOH,Py,hồi lưu o: NBS, THF, HClO 4 , H 2 O, 0oC hoặc Dibromantin, acetone, HClO 4 , H 2 O,

10oCp: HSnBu 3 ,THF, MeCN,hồilưu q:OH - ,MeOH r: SeO 2 ,t-BuOH,Py, hồi lưu

Betamethasone là một glucocorticoid tổng hợp, có tác dụng chống viêm, chống dịứng và ức chế miễn dịch; mạnh hơn hydrocortisone khoảng 40 lần Betamethasoneđược sử dụng trong điều trị: bệnh viêm da (chàm, vẩy nến…); các phản ứng dị ứng(điều trị cấp ong đốt, dị ứng nọc độc côn trùng , sốc phản vệ , phát ban ); bệnh thấpkhớp (viêm khớp dạng thấp…); rối loạn tự miễn dịch (lupus ban đỏ…); các bệnh vềphổi và đường hô hấp (cấp tính nặng lên cơn suyễn, bệnh phổi tắc nghẽn mãn tính, phùphổi, khởi trưởng thành phổi ở trẻ em chưasinh nếucónguy cơs i n h n o n … ) ; b ệ n h viêmđ ư ờ n g t i ê u h ó a ( v i ê m l o é t đ ạ i t r à n g … ) H ơ n n ữ a b e t a m e t h a s o n e c ò n đ ư ợ c s ử dụngđểhỗtrợđiềutrịcáckhốiuáctính.

Beclomethasone là một glucocorticoid tổng hợp, có tác dụng chống viêm mạnhtrên đường hô hấp Dạng hít để điều trị lâu dài bệnh hen suyễn Dạng kem có thể sửdụng điều trị viêm da và vẩy nến Dạng thuốc uống điều trị viêm loét đại tràng, mạnhhơn hydrocortisone khoảng bảy lần Dạng xịt mũi để điều trị viêm mũi dị ứng và polypmũi…

Sau khi tổng hợp hợp chất (4a) từ 9α-OH AD như Sơ đồ 3.8, chúng tôi tổng hợpbetamethasone và beclomethasone theo hai phương án theoSơ đồ 3.9dưới đây. Trongđó phản ứng đưa mảnh 16β-methyl-17α-hydroxy vào phân tử steroid là phản ứng chìakhóa Từ hợp chất trung gian quan trọng (12) có thể tổng hợp betamethasone vàbeclomethasone bằng cách xây dựng mạch bên corticoid trước rồi dehydro hóa 1(2)- sauhoặcngượclạiđềuchohiệusuấttốt.Điểmmớicủasơđồtổnghợpmàchúngtôiđề xuất đó là phản ứng tạo lập nối đôiΔ 1(2) ở giai đoạn trước hoặc sau giai đoạn tạo lậpmạch bên corticoid, còn trong tài liệu tham khảo thường thực hiện ở giai đoạn cuốicùngcủaquytrình[81,82,86,87].Tấtcảcácphươngphápnàychúngtôiđãnghiêncứu vàápdụnglêncácchấtđầukhácnhau,phầnlớncácphảnứngtrongsơđồđãđượcthực hiệntheoquytrìnhphòngthínghiệm.

Sơ đồ 3.9 Tổng hợp betamethasone và beclomethasone từ 9α-OH

ADĐiềukiệnphảnứng: a: POCl 3 ,Py,45-50oC b: 1.MeMgBr(Cl) 3M, Toluene, 65 o C; 2.AcOH,

0 o Cc: H 2 O 2 60%,THF,MeOH,OH-, 45oC d:Me 2 C(CH 2 OH) 2 ,(EtO) 3 CH,p -TSA,0-5oChoặc C 2 H 4 (OH) 2 ,(EtO) 3 CH,p-TSA,toptn e: MeMgBr3,4M,THF,70 o C f: H+,H 2 O,acetone,60oC g:SeO 2 ,t-

H-,CaCl 2 ,40oC i: AcOK, AcOH,DMF,acetone, hồilưu j:NBS,THF,HClO 4 ,H 2 O,0oChoặcDibromantin,acetone,HClO 4 ,H 2 O,10oC k:NaOH1M,H 2 O,MeOH,CHCl 3 ,0-5oC l: HFhoặc HCl m:I 2 ,MeOH,OH-,CaCl 2 ,40oC n: AcOK, AcOH, DMF, acetone, hồi lưuo: SeO 2 ,t-BuOH, Py, hồilưu

Bảng3.4 Cácđặctrưng vậtlývà dữliệuphổcủacácchấtđầu,cáchợpchấttrunggian vàcácsảnphẩmcuối

Phổ 1 H-NMR( 5 0 0 M H z ,δ, ppm) DungmôiNMR;Phổ 13

(9α-OH (Et2O) 1736v à 1 6 5 6 1H,OH-9);1,35(s,3H,CH3- Phổ 13 C-NMR: 19 C;

4b C22H29NO3 75,1 202-204 3386 (O-H); 6,33(s,1H,OH-17);5,52(d, Dung môi NMR:DMSO-

4c C25H34O6 67,6 (acetone) 3470 (O-H); 5,49(s,1H,OH-17);5,49(s, Dungmôi NMR: DMSO-

6a C26H36O3 78,0 198-200 1665 (C=O); 6,72 (dd, 1H,H-16,J=3,0 và Dungmôi NMR: CDCl3

CH3-19);1,00( s , 3 H , C H3- ketal);0 , 9 9 (s,3H,CH3- ketal);0,92 (s,CH3-18)…

(từ (acetone) 1660 (C=C); Hz);5,41(d,1H,H-6,J=4,0 Phổ ESI-MS (m/z,

9) 1096 (C-O Hz);4 , 0 3 - 3 , 9 1 (m,8H,4 CHCl3): 415[M+H]+ ketal)… nhómC H2-Oketal);3,41(s,

CH3v ị tríC-16,J=7α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(,0Hz); mCH3-ketal);1,01(s,3H, 1,19(s,3H,CH3-19);0,99(s, CH3vịt r í C -

CH3-ketal); 0,92(s,6 H , 2 ketal); 0,71( s , 3H, nhóm CH3-ketal); 0,86 (s, 3H, CH3-18)…PhổE S I - M S

CH3-19);1,19(d,3H,CH3v ị tríC-16,J=8,0Hz);0,87(s, 3H,CH3-18)…

J=7,5Hz);0,88(s,3H,CH3- (C-11); 89,9 (C- 18)… PhổNOESY:CH3vịtrí 17)…19,9( C - 1 9 ) ; 15,3 C-16tươngt á c k h ô n g g i a n

2,09(s3H,CH3-21);1,37(s, 3H,CH3-19);1,02(d,3H,CH3vị trí C-16,J= 6,5 Hz);0,76(s, 3H, CH3-18)…

Dung môi NMR: DMSO- d 6α,17α- Phổ13C-

(từ (acetone) Hz); 6,15( d d , 1 H , H - 2 ,J = d 6α,17α- Phổ 13C-NMR,

3 ) ; 1 6 9 , 9 5,5Hz);5,54(s,1H,OH-17); (C=O acetoxy); 167,6 4,97(d,1H,CH2-21,J=17,5 (C-5);155,6(C-1);142,3 Hz);4,82(d,1H,CH2-21,J= (C-9);126,3(C-2);122,9 17,5 Hz);2 , 0 8 ( s , 3 H , C H 3

3,29( s , 3 H , C H3Ov ị t r í C - 20); 3,27 (s, 3H, CH3O vị tríC-20); 1,19 (s, 3H, CH3- 19);0,98( s , 6 H , 2 n h ó m

CH2-21,J =1 8 , 0 H z ) ; 4,83 3);169,8(C=Oacetoxy); (d,1H,CH2-21,J=18,0Hz); 169,6(C-5);143,8(C-9); 2,08( s , 3 H , C H3-acetoxy); 123,2( C -

16b C24H30O5 83,0 218-221 3433 (O-H); 7,39(d,1H,H-1,J=5,5Hz); Dung môi NMR:DMSO-

(từ (acetone) 1714và1 6 6 0 6,14 (dd, 1H,H-2,J=11,0 và d 6α,17α- P h ổ 1 3 C-NMR:2 4 C ;

2,08( s , 3 H , C H3-acetoxy); 168,8(C-5);122,9(C-4); 1,70(s,3H,CH3-19);1,01(d, 96,8(C-11);87,8(C-17); 3H,C H3vịt r í C - 1 6 ,J =7 , 0 73,1 (C-9); 69,2 (C- Hz);0,89 (s, 3H,CH3-18)… 21)…19,7( C -

(từ (acetone) 1716 và1650 OH-17);4 , 4 6 ( t , 1 H , H - 1 1 ,J d 6α,17α- P h ổ 1 3 C-NMR:2 2 C ;

CH3-19);1,01(d,3H,CH3v ị 19,9(C-18). tríC-16,J=7,0Hz);0,85(s,3H,CH3-18)…

4 ) ; 8 7 , 2 21,J=19,0và6,0Hz);4,10 (C-17);67,5(C-21);65,6 (dd,1H,CH2-21,J=19,0và (C-9);62,1(C-11)… 6,0Hz);3,18(s,1H,OH-21); 19,9(C-19);1 7 , 9 ( C -

1 8 ) P h ổ 1,37(s,3H,CH3-19);1,00(d, ESI-MS (m/z, CHCl3): 3H,C H3vịt r í C - 1 6 ,J =7 , 0 373[M+H] +

2,09( s , 3 H , C H3-acetoxy); 19);1 6 , 5 (C-18).Phổ 1,38(s,3H,CH3-19);0,78(s, ESI-MS (m/z, 3H,CH3-18)… CHCl3):403[M+H]+402

21’’ C21H29O3Cl 86,6 (n-hexane/ 5,91( s , 1 H , O H-17);5 , 6 2 Dungmôi NMR: DMSO-

22 C 21 H 28 O 3 ClI 80,3 (Et2O) 5,77(s,1H,OH-17);5,62(s, Dungmôi NMR: DMSO-

1 Đãnghiêncứusosánhhaiphươngpháptổnghợppregnane:phươngphápcyanohydrin và phương pháp acetylene Cả hai phương pháp đều hiệu quả, khả thiđểt r i ể n k h a i v à o t h ự c t i ễ n v à đ ề u c ầ n t á c h l o ạ i n h ó m 9α- hydroxyđ ể t r á n h c á c phản ứng phụ kèm theo So với phương pháp acetylene, phương pháp cyanohydrinphải bảo vệ nhóm chức 3-keto nhưng hiệu suất cao hơn và dễ tiến hành hơn TừΔ 9 -AD (2), ứng dụng phương pháp acetylene, tổng hợp thành công hợp chất (6b)đạt hiệu suất trung bình 82,8%/giai đoạn Cũng từΔ 9 -AD (2), ứng dụng phươngpháp cyanohydrin, tổng hợp thành công hợp chất (6b) đạt hiệu suất trung bình82,3%/giai đoạnvàhợpchất(6a)đạthiệu suấttrungbình82,0%/giaiđoạn.

- Phương pháp truyền thống sử dụng I2: hiệu quả, khả thi, kinh tế, có thể ứng dụngvà triển khai vào thực tiễn Phương pháp này áp dụng được với chất đầu có hệthống 3-keto-Δ 4 , cho hiệu suất tốt Tuy nhiên bước đầu nghiên cứu chúng tôi nhậnthấy phản ứng cũng bị ảnh hưởng bởi hóa lập thể trung tâm C-16 và C-17: từ cácdẫn xuất 17α-hydroxy (6b;12;13a;21’’) tổng hợp thành công17(80,3%);16a(77,6%);16b(83,0%) và22(80,3%) tương ứng Với dẫn xuất 16 α,17α-epoxy (9’và(21’)phản ứngkhôngchạy.

- Phươngphápm ớ i s ử d ụ n g hợpc h ấ t hữuc ơ s i ê u h óa t r ị của i od P h ( I O A c )2:ch ỉhiệu quả trong một số ít trường hợp và rất nhậy cảm đối với hóa lập thể trung tâmC-17 (chỉ các dẫn xuất 17β- acetyl-17α-nhóm thế có thể tích nhỏ mới đi vào phảnứng) Lần đầu tiên triển khai phản ứng tổng hợp mạch bên corticoid sử dụngPhI(OAc) 2 với một số dẫn xuất mới: (24a) và (24b) Sản phẩm (25) nhận được vớihiệu suất tốt (93,0% từ24avà 87,0% từ24b) Các hợp chất mới (24a) và (24b)được tổng hợp lần đầu tiên từ

(23) với hiệu suất cao (94,0% và 89,0% tương ứng).Ứng dụng phương pháp này đối với pregnane đã bảo vệ chức 3-keto (9) nhận đượccorticoid(15)quahợpchấttrunggian(14).

3 Đãnghiêncứuthànhcôngphươngpháptạolậpchức16β-methyl-17α- hydroxypregnanec h o h i ệ u s u ấ t t ố t T ừ (10a)v à (10b)b ằ n g p h ả n ứ n g c ộ n g m ở vòngtransepoxypregnane lựa chọn lập thể sử dụng tác nhân Grignard nhận được(11a)và(11b)vớihiệu suấttươngứng:78,3%và76,0%.

4 Lần đầu tiên cấu hình trung tâm C-16 và C-17 của hợp chất (12) được khẳng địnhthêmbằngdữ liệuphổNOESY[128].

5 Đã nghiên cứu thành công phương pháp tạo lập nối đôiΔ 1(2) bằng con đường hóahọc sử dụng SeO2vớimột số trường hợp: từ(12) và(17)nhậnđ ư ợ c (13a)v à (13b)t ư ơ n g ứ n g ( h i ệ u s u ấ t 6 0 -

6 Đã thiết lập được hai sơ đồ lựa chọn hoàn chỉnh tổng hợp các corticoid kiểuhydrocortisoneacetate,prednisolone,betamethasone,beclomethasone.

7 Những điểm đặc trưng về cấu trúc của các hợp chất tổng hợp được xác định vàkhẳng định bằng các phương pháp vật lý: (Đnc.), phổ: IR, MS, 1 H-NMR, 13 C-NMR,DEPT,NOESY.

1 Đã góp phần hoàn thiện phương pháp mới một giai đoạn tổng hợp mạch bêncorticoid sử dụng hợp chất hữu cơ siêu hóa trị của iod: PhI(OAc) 2 Phương pháphiệu quả, khả thi và cho hiệu suất tốt trong tổng hợp 16α,17α-epoxypregna- 4,9(11)-diene-21-ol-3,20-dione(15)(hiệusuất49,5%)và16α,17α-epoxypregna-5-en-3β,21- diol-20-one(25)(hiệusuất87-93%).

OH AD), đó là con đường acetylene và con đường cyanohydrin, đãđềxuấthaisơđồlựachọnhoànchỉnhtổnghợphydrocortisoneacetate,prednisolone,bet amethasonevàbeclomethasone.

3 Lần đầu tiên cấu hình trung tâm C-16 và C-17 của hợp chất (12) được khẳng địnhthêm bằng dữ liệu phổ NOESY Bên cạnh đó, nhiều số liệu phổ, nhất là phổ 13 C-NMRvà2D-NMR,lần đầutiênđượcchúngtôinghiêncứuvàcôngbố.

4 Mộtsốhợpchấtmớiđượcchúngtôitổnghợpvàxácđịnhnhữngđiểmđặctrưngvề cấu trúc: 16β-chloropregna-5-en-3β,17α-diol-20-one (24a); 16β-bromopregna-5-en-3β,17α-diol-20-one(24b).

1 L.D.Huy,N.T.Diep,21-monohydroxylationof17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β- acetylsteroidsusingphenyliodosodiacetate: one step method and its limitation,

2 L D Huy,N T Diep, and L T K Nhung,Alternative road for synthesis of16α,17α-α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-epoxypregna-4,9(11)-diene-21-ol-3,20-dione from

3 Nguyen T Diep, Luu D Huyet al.,Efficient synthesis of 16α,17α-β-methylpregna-

4,9(11)-diene-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-ol-3,20-dionefrom9α-hydroxyandrosta-4-en-3,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-dione,3 rd Junior international conference on cutting-edge organic chemistry in Asia, Chiba,Japan,2013.

4 Luu D Huy,Nguyen T Diep, Pham T Thao, Chang-Hee Lee, Luu D. Hung,Approach to synthesis of prednisolone from 9α-hydroxyandrostenedione, Tạp chíHóahọc,2014,52(2),143-147.

5 LưuĐứcHuy,NguyễnThịDiệp,PhạmThịThảo,LưuĐứcHùng,Tổnghợp21- acetatpregn-4,9(11)-dien-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α,21-diol-3,20- dion,Tap443-446 chíHóahoc ̣,2 01 4, 52(4),

6α,17α- LưuĐứcHuy,PhạmThịThảo,NguyễnThịDiệp et.al.,Haiphươngpháphiêu quảtổnghơp

17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxy-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β-nitril-androsten,Tap chíH o ́ah o c , 2 0 1 4 , 5 2 ( 6 ) ,

7 Luu D Huy andNguyen T Diep,Synthesis of 16α,17α-β-methylpregna-4,9(11)-diene-

17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-ol-3,20-dione from 9α-hydroxyandrostenedione, Pharm Chem J (RU),

8 L D Huy,N T Diep et al.,Transformation of androstenedione into 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxy-

16α,17α-β-methyl-pregn-4-ene-3,20-dione,I n d i a n J C h e m , S e c t B , 2 0 1 6 , 5 5 B (July),888-891.

9 Lưu Đức Huy,Nguyễn Thị Diệp, Lưu Đức Hùng, Phạm Thị Thảo, Vũ TrungQuân,Nghiên cứu hai con đường hiệu quả tổng hợp 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxyprogesterone, Tạp chíHóahọc,2016,54(6e2),127-132.

1 J.Fried,J.A.Edwards,OrganicReactionesinSteroidChemistry,VanNostrandR einhold Company,1972,1,NewYork,UnitedStatesofAmerica.

2 D.M.Piatak,J.Wicha,Variousapproachestotheconstructionofaliphaticsidec hainsofsteroids andrelatedcompounds, Chem Rev.,1978,78(3),199-241.

3 J.Redpath,F.J.Zeelen,Stereoselectivesynthesis ofsteroidsidechains,C hem.Soc.Rev.,1983,12,75-98.

4 М.И.Pяховская,Дисс.насоисканиеуч.степениканд.Xим.наук,М., 1990.

5 М.И.Pяховская,Г.С.Гриненко,Хим.-фарм.журн,1992,9.

6 V.A.Andryushina,T.S.Savinova,K.G.Skryabin,Methodofpreparingpregnanes,Ru ssianpatentRU2156255,2000.

7 I Nitta, S Fujimori, H Ueno,The syntheses of the corticoid side chain I.

Animprovedmethodforthepreparationof17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxyprogesteronefromandrosta- 4-ene-3,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-dione,Bull Chem Soc.Jpn.,1985, 58(3),978-980.

8 V H Van Rheenen,Cyanohydrin process,United States patentUS4500461,1985(UpjohnCo.).

9 K Nitsuta,Preparation of 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-cyanosteroid, Japanese patent JP57062298, 1982, (MitsubishiChem Ind.).

10 F.Schmidt,E.Graupner,S.Krahmeret.al.,Verfahrenzurherstellungvonsteroid-C-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α- carbonitrilen, East Germany patent DD281394, 1990, (JenapharmVeb,DD).

11 M.I.Ryakhovskaya,E.V.Popova,E.M.Dolginova,andG.S.Grinenko,Synthesis of 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(- hydroxy-20-oxopregananes by reaction of cyanohydrins of 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-oxoandrostenes with methyllithium,

12 J.N.M.Batist,A.F.Marx,W.J.VanZoest,andJ.C.Kapur,9α- hydroxysteroids,processforthepreparationofthecorresponding9(11)-dehydro- derivatives and pharmaceutical preparations containing said steroids,EuropeanpatentEP263569,1988, (Gist-Brocades,NewZealand).

13 E V Popova, V A Andryushina and G S Grinenko,Synthesis of pregnanederivatives,Chem.Nat.Compd., 1984,20 (3),302-304.

14 J Fried, J A Edwards,Organic reactiones in steroid chemistry, Van NostrandReinhold Company,1972,2,NewYork,UnitedStatesofAmerica.

Oettleret.al.,Vergharenzurherstellungvon17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-hydroxy-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β- cyanosteroiden,EastGermanypatentDD147669,1981;Chem.Abstr.,96,20370f,198

16 D Seebach,9α-hydroxysteroids, process for their preparation, process for thepreparation of the corresponding 9(11)-dehydro derivatives and pharmaceuticalpreparationscontainingsuchsteroids,Chem.Ind.

17 B.T.Groebel,D.Seebach,Umpolungofreactivityofcabonylcompoundsthroughsulfu r-containingreagents,Synthesis,1977,357-367.

18 O W Lever, Jr,New horizons in carbonyl chemistry: reagents for nucleophilicacylation,Tetrahedron,1976,32,1943-1971.

19 P M Smid, Z W J Van Zoest, P G Weber, A F Marx,New process for thepreparation of certain steroids, especially intermediates for the preparation ofproligestoneandrelatedcompounds,andnewintermediatesformedinthisprocess,

20 J E Baldwin, G A Hoefle, O W Jr Lever, α-Methoxyvinyllithium and relatedmetalatedenolethers.Practicalreagentsfornucleophilicacylation,J.Am.Che m.Soc,1974,96(22),7125-7127.

21 J E Baldwin, O.W.Jr Lever, N R Tzodikov,A convenient route to thedihydroxyacetonesubstituent,J.Org.Chem,1976,41 (13),2312-2314.

22 V H Van Rheenen,Steroids having an enamide, enimide or cyano group, theirpreparationandtheiruse,EuropeanpatentEP153001,1985,(Upjohn Co.).

24 J C Kapur, A F Marx, J Verweij,The chemistry of 9α-hydroxysteroids.

I.Preparationof9α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(β-dihydroxy-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-ethylnylandrost-4-en-3- one,S t e r o i d s , 1988,52(3),181-186.

25 J.N.M.Batist,A.F.M.Slobbe,A.F.Marx,Thechemistryof9α-hydroxysteroids II.

Epimerization and functionalization of 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α-ethylnylated 9α- hydroxysteroids,Steroids,1989,54 (93),321-332.

26 O F Beumel, F F Harris,The preparation of lithium acetylide.ethylenediamine,J.Org.Chem., 1963,28 (10),2775-2779.

27 C G Bergstrom, R M Dodson,9α-hydroxy-17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-methylenesteroid, process fortheir preparation and their use in the preparation of corticosteroids, Chem.

28 V Van Rheenen, K P Shephard,New synthesis of corticosteroids from 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(- ketosteroids:applicationandstereochemicalstudyoftheunsaturatedsulfoxide- sulfenaterearrangement,J.Org.Chem.,1979,44(9),1582-1584.

29 J.N.M.Batist,A.F.Marx,Processforthepreparationof9(11)- dehydroandrostanes,EuropeanpatentEP253415,1988.

30 J.N.M.Batist,B.N.Maria,M.Cornelis,A.F.Marx,Processfort h e preparationof

31 M B Jiyon, B Muudei, E Jiyoeru, H Edowaado, G G Amufuretsutoet. al.,Acid dehydration of9α-hydroxyandrostenedione, Japanese patent

32 K Kogai, K Watanabe,Preparation of 21-acyloxy-20-keto-∆ 16α,17α- -steroid,

34 R M Kanojia, G O Allenet al.,Synthesis and estrogenic properties of 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-epi- ethynylestradiol and its ether derivatives epimestranol and epiquinestrol, J.

35 J R Runge,Reacting 17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(-keto steroids and acetylene using a polar amine solventtoo b t a i n 1 7α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one( β - e t h y n y l - 1 7α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one( α - h y d r o x y s t e r o i d s,

36 J W Huffmann, P G Araparos,Studies on sresin acids Synthesis of sometricyclicsteroidanalogs,J Org.Chem., 1965,30 (5),1604-1607.

37 J N M Batist, C M E Barendse Nicholas, A F Marx,The chemistry of 9α- hydroxysteroids.III.Methodsforselectiveformationanddehydrationsof9α,17α-hydroxy-17β-cyanoandrosta-4,9(11)-diene-3-one(α- dihydroxyandrosta-4-en-3-one,Steroids,1990,55,109-113.

Định dạng
Số trang	162
Dung lượng	6,07 MB