0354NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ DNA GYRASE CỦA MỘT SỐ DẪN XUẤT CHALCON TỔNG HỢP

B ăGIÁOăD CăVẨă ẨOăT O TR NGă IăH C M ăTP.ăH ăCHÍăMINH - - KHịAăLU NăC ăNHÂNăSINHăH C tài: NGHIểNăC UăKH ăN NGă CăCH ă DNA GYRASE C AăM TăS ăD NăXU Tă CHALCONăT NGăH P Khoa: CỌNGăNGH ăSINHăH C Chuyên ngành: VI SINH _SHPT GVHD: PGS.ăTS.ăTr năCátă ông SVTH: Nguy năTh ă MSSV: 1053010061 Khóa: 2010- 2014 Tp.ăH Chí Minh - Tháng n mă2014 nhăChi L IC M N Trongă su tă quáă tr nhă h ă t pă v hồn thành khóaă lu nă t tă nghi p ă mă ăs ăh ngă n ăgi pă ăt năt nhă a cá ăth yă ô ă ăanhă h ăv ă ă l ngăkínhătr ngăv ă i tă năs uăs ă mă ină , t oăm iă i uăki năgi pă ăth ăt păt iăph ngăViăSinhăCôngă ă ă măho n thành khóaălu năt tănghi p ThS.ăV ăThanhăTh o ă h ăNguy nă ăQu nhăNh ă h ăNguy năTh ăLinhăGiang ă anhăNguy năMinhăTháiăv ă ă nă ăLa ăViăSinhăCơngăNgh ăD iăh ăYăD ăTp.ăH ăChíăMinh ăt năt nhăh ThS.ăNguy năV nă Minh, ThS.ăD n.ăV iă ăg i l iă mă nă h năth nhăt i: PGS.ăTS.ăTr năCátă ôngă ă hoăphépă mă Ngh ăD ă nh nă ă- KhoaăD ngă n ă h ă oăvà giúpă ngăNh tă Linh ăt oă ă- ă m ăh iă hoă mă h ăh iă ă nhi uă ki nă th ă quỦă áuă t iă ph ngă thíă nghi mă Viă Sinhă Côngă Ngh ă D KhoaăD ă- iăh ăYăD ă- ăTp.ăH ăChíăMinh QuỦă th yă ơă trongă khoaă Cơngă ngh ă Sinhă h huyênăng nhăviăsinh ănh ngăng ă i tă l ă ă th yă ô trongă t ă iă ăh ătr ăv ă uă tătôiătrongăsu tă năn măh ă iăh Xină h năth nhă ámă nă aăm ă ă óă ơngăsinhăth nh ăniă khơnăl nănh ăng yăhơmănay.ăCámă năgiaă nhă ăluônăth oăsátăv ă ngăv ă yă ă onă ngăviên giúp ă ho năth nhăkhóaălu n Trongă quáă tr nhă th ă t pă v ă ho nă th nhă mongănh nă iă áoă áo ă khóă tránhă kh iă saiă sót ă r tă ăỦăki nă óngăgópă aăTh y ăCơ Emă ină h năth nhă ámă n! Khóaălu năt tănghi p GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông CH ăVI TăT T ATCC American Type Culture Collection ATP Adenosin Triphosphat CFU Colony Froming Unit năv ăh nhăth nhăkhu năl CLSI Clinical Laboratory Standards Institute DMSO Dimethyl Sulfoxid DNA Desoxyribonucleic Acid EDTA Ethylendiamintetraacetic acid KS Kháng sinh LB Luria – Bertani MHA Muller – Hinton Agar MHB Mueller – Hinton Broth MIC MRSA Minimum Inhibitory Concentration N ngă ă ă h ăt iăthi u Methicillin – Resistant Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus kháng methicillin MSSA OD VRSA Methicillin – Sensitive Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus nh y methicillin Optical density Vancomicin – Resistant Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus kháng vancomicin SDS Sodium Dodecyl Sulfat SSB Single Stranded Binding TSA Tryptic Soy Agar TSB Tryptic Soy Broth Nguy năTh ă nhăChi i Khóaălu năt tănghi p GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông DANHăM CăHỊNH H nhă1.1ăC uătr ăflavonoi ă( iph nylăpropan) Hình 1.2 C uătr ă hal onăv ăquyăt ă ánhăs ă aă hal on H nhă1.3ăD nă h tă ăv ngăquaătrungăgiană hal on .4 H nhă1.4ăQuáătr nhătháoă o năDNA Hình 1.5 Ho tă H nhă1.6ă ngă aăDNAătopoisom ras ăIIă ă h ă aăsao ă i măh nhătháiă aăStaphylococcus aureus 10 H nhă1.7ăH nhănhu măGramă aăt ă uăStaphylococcus aureus 10 H nhă3.1ăK tăqu ăkhángăMRSA ăMSSAăv ăE coli aă ă h tăth 25 H nhă3.2ăTh ănghi măMICă aă h t N11ăv ăm uă iă h ngăDMSO .26 H nhă3.3ăMICă aăkhángăsinhăoflo a in 27 H nhă3.4ăMICă aă hal onăF12 ăF2ătrênă3ă h ngăMRSA ăMSSAăvà E coli 28 H nhă3.5ăMICă aă hal onăH2 ăP1ătrênă3ă h ngăMRSA ăMSSAăv ăE coli .28 H nhă3.6ăMICă aă hal onăH1 ăT2ătrênă3ă h ng MRSA, MSSA E coli .28 H nhă3.7ăMICă aă hal onăF16ătrênă3ă h ngăMRSA ăMSSAăv ăE coli 29 H nhă3.8ă i nă iăplasmi ătá hă hi t gel agarose .30 H nhă3.9ă i nă iăplasmi ătinhăs hătrênăg lăagaros 31 Hình 3.10 Kh ăn ngă ă h ăgyras ă aă h tăF2ă ă ăn ngă ăkhá ănhau .31 H nhă3.11ăTh ănghi măkh ăn ngătháoă o nă aăgyras 32 H nhă3.12ăTh ănghi măkh ăn ngăsiêuă o nă aă nzymăgyrase .33 H nhă3.13ăTh ănghi măthayă iăn ngă ătá ă ngă aă h tăth ătrênăgyras 34 DANHăM CăB NG B ngă2.1ăCá ă nă u tă hal onă ăv ngă ùngătrongăth ănghi m 16 B ngă3.1ăK tăqu ă nhătínhăho tătínhăkhángăkhu nă aă ă hal onă ăv ng 25 B ngă3.2ăK tăqu ă ă nhăMICă aă ă h tăth .29 Nguy năTh ă nhăChi ii Khóaălu năt tănghi p GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ơng M CL C CH VI T T T i DANH M C HÌNH ii DANH M C B NG ii T V Nă CH NGă1 T NG QUAN 1.1 CHALCON 1.1.1 T ngăquanăv ă hal on 1.1.2 Ph nă ngă nhătính 1.1.3 Ho tătínhăsinhăh ă aă ă nă u tă hal on 1.1.4 C ă h ăkhángăkhu nă aă hal on 1.2 ENZYM DNA GYRASE (DNA TOPOISOMERASE II) 1.2.1 T ngăquanăv ăDNAăgyras 1.2.2 Cá ănghiênă uăv ăkh ăn ngă ă h ăDNAăgyras 1.3 T NG QUAN V STAPHYLOCOCCUS AUREUS 10 1.3.1 H nhăthái ă ă i măsinhăhóa 10 1.3.2 C ă h ă ăkhángăkhángăsinh 11 1.3.3 Tínhă ăkhángăkhángăsinh 12 1.3.4 Kh ăn ng g yă nh 12 CH NGă2 V T LI UăVẨăPH NGăPHÁPăNGHIểNăC U 15 2.1 IăT NG NGHIÊN C U 16 2.1.1 Cá ă h tăth ătrênăDNAăgyras 16 2.1.2 Cá ă h ngăviăkhu nă ùngăkh oăsát 17 2.1.3 Môiătr ngăth ănghi m 17 2.1.4 Dungămơi ăhóaă h tăv ăthu ăth 17 2.1.5 D ngă ătrangăthi tă 18 2.1.6 B ătríăthíănghi m 18 2.2 PH NGăPHÁPăNGHIểNăC U 19 2.2.1 Chu nă ăviăkhu năth ănghi m 19 2.2.2 Ph ngăphápăkhu hătánătrênă aăth h 19 2.2.3 Ph ngăphápăphaălo ngă ă nhăn ngă ă ă h ăt iăthi uă(MIC) 20 2.2.4 Ly trích DNA plasmid 21 2.2.5 Tinhă h ăplasmi 22 2.2.6 Th ănghi măho t tính DNA gyrase 22 CH NGă3 K T QU VÀ BÀN LU N 24 3.1 NH TÍNH KH N NGăKHÁNGăKHU N 25 Nguy năTh ă nhăChi iii Khóaălu năt tănghi p GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông 3.2 XÁCă NH N NGă C CH T I THI U C A CÁC CH T TH VÀ KHÁNG SINH 26 3.3 K T QU TÁCH CHI T PLASMID 30 3.4 K T QU TINH S CH PLASMID 30 3.5 K T QU TH NGHI M KH N NGă C CH DNA GYRASE C A CHALCON 32 3.5.1 Th ănghi măho tătínhătháoă o nă aăgyras 32 3.5.2 Th ănghi măho tătínhăsiêuă o nă aăDNAăgyras 33 CH NGă4 K T LU NăăVẨă NGH 38 4.1 K T LU N 39 4.2 KI N NGH 39 TÀI LI U THAM KH O 40 Nguy năTh ă nhăChi iv Khóaălu năt tănghi p GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ơng TăV Nă Flavonoid h pă h tă t ă nhiên phână khángăkhu n v ăhi pă ă r ngă rãiă trongă th ă v t, có kh ă n ngă ngăv iăkhángăsinhă ă h ăs ăphátătri nă aănhi uăviăkhu nă ăkháng [10, 27, 29, 31] Trongă ó ă hal on thu ăph nănhómăph ă i tă nănh ăho tătínhăkhángăkhu năthơngăquaăho tă a i ănu l i ă ngă hă ă h ăho tă ngă aăflavonoi ă ă h ăs ăt ngăh pă ngăenzym DNA gyrase giaiă o nănh nă ơiăt ngăh păDNA Ngồi chalcon có ho tătínhăkhángăn m ăkhángăungăth ă h ngă oxy hóa, trung hịa g ăt ă oăv ă óă ătínhăkhángăviêm ăgi mă au [7, 33] ăgópăph năl măphongăph ăthêmă ă tính ă mơnă Hóaă D - Khoaă D ă nă h tă hal onăv ăm tă uătr ăv ăho tă ă t ngă h p ă hal onă ă vòng thayă th ă nh nă th mă vòng benzen (vòng A)ă ngă hă ngă nh nă th mă ă vòng ă nh ă pyridin, thiophen, furan nh măs ngăl ănh ngă nă h tă hal onă ăvịng óăho tătínhă khángă khu n.ă Tuyă nhiênă iă v iă ă hal onă t ngă h pă th ă ăl mărõ Doă ó ă húng tôiăth ăhi n ă h ă tá ă ăt i "Nghiênăc uăkh ăn ngă căch ăDNA gyraseă c aă m tă s ă d năxu tă chalcon t ngă h p"ănh mă ă nhă khángă khu nă trênă DNA gyras ă ngă h aă aă m tă s ă ă h ă tá ă ngă nă u tă hal onă t ngă h p N iă ung nghiênă uănh ăsau: - Xá ă nhăkh ăn ngăkhángăkhu nă aă h tăth ănghi m - Th ăkh ăn ngă ă h ăDNA gyras ă aă ă nă h tă hal on Nguy năTh ă nhăChi Khóaălu năt tănghi p CH Nguy năTh ă nhăChi GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông NG T NG QUAN Ch ngăI:ăT NGăQUANă GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông 1.1 CHALCON 1.1.1 T ngăquanăv ăchalcon Flavonoid l ăm t chu iăpolyph noli óă uăt oăkhungăth oăki u C6C3C6 hay nói hăkhá ăl ăkhungă ă năg mă2ăvịng nz năAăv ăBăn iăv iănhauăquaăm tăm hă3ă carbon (Hình 1.1) [13] A B Hình 1.1 C uătrúcăflavonoidă(diphenylăpropan) Tùy thu ăv oă uăt oă aăph năm hăC3 trongă ăkhungăC6C3C6 ăflavonoi ă ă chia thành phân nhóm: eucoflavonoid, isoflavonoid, neoflavonoi ăChal onăthu ă phân nhóm eucoflavonoid [6] Chalcon có vòng Aăv ăBăn iăv iănhauă iăm tăm hăh ă3ă a on ăkhơngă óă ă vịng Că nh ă ă flavonoi ă ă H uă h tă ă hal onă t mă th yă trongă t ă nhiênă óă vịng Aăv ăBăl ănh nă ph ă(Hình 1.2).ă nz n.ăS ăth ăt ă ar onă tă u t ăvòng B, vòng Aă ánhăs ă yăl ănh ngă h tă óăm uăv ngă năv ngă am Hình 1.2 C uătrúcăchalconăvƠăquyăt căđánhăs ăc aăchalcon Trong th păk ăg nă yănhi uătá ăgi ă ăt ngăh pă hal onăv iăvòng Aăho ăBăl ă m tă nh nă th mă ă vòng 5ă ho ă 6ă nh.ă Cá ă h pă h tă n yă ă g iă l ă hal onă ă ă sinhă t ngă h pă ă nă h tă ă vòng nh :ă vòng (heterocyclic chalcon) [24] Chal onă l ă ti nă th nă quană tr ngă flavanon, flavon, auron, benzothiazepin pyrazolin (Hình 1.3) [19, 24] Nguy năTh ă nhăChi Ch ngăI:ăT NGăQUANă GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ơng Hình 1.3 D năch tăd ăvịng qua trung gian chalcon 1.1.2 Ph nă ngăđ nhătính ună hal onăv iă ungă ch KOH 30%ăth ăs ăm ăvòng C nă năt oăth nhă nă h tăa i ăth măv ă nă h tăph nol.ăTùyăth oănhómăth ăv ăv ătríăth ăv oăvịng A B m ă óă ă nă h tăa i ăth măv ăph nolăkhá ănhau [6] Tá ă m uă Tá ă l ngă ăt aăH2SO4 mă :ăacid H2SO4 nh ălênă ă nă h tă hal onă hoă i [6] ngăv iă ungă hăF Cl3:ă hoăk tăt aă anhăth măho ă anhănh tătùyăth oăs ă ngănhómăhy ro ylătrongăph năt [6] D ă tană trongă n ă nóng ă r dung mơiăkhơngăph nă D u t oă ungă ăho ăítăph nă hă khơngă m u ă khơngă tană trongă ă ănh ă nz n ăho ă hloroform iătá ă ngă aăH+ ho c OH- ă hal onă óăth ă huy năsangăflavanon Khiăt oăliênăk tăgly osi ăph nă Tác d ngă ngăn iăv oăv ătríă4 ăm tăs ă ă2’ th nhăr u aă antimoină p nta hlori ă (ph nă ngă Martiniă B ttolo):ă S Cl5 CCl4 hoăm uăt ă ă nătímăv iă hal on.ăDihy ro hal onăth ăm tăn iă ơiăliênăhi pă gi aănhómă ar onylăv ăvịng Bănênăkhơngă hoăm uăv iăS Cl5 ho ăv iăH2SO4 [6] 1.1.3 Ho tătínhăsinhăh căc aăcácăd năxu tăchalcon Nhi uă ôngătr nhănghiênă uă ă h ngăminhă nă u tă hal onă óănh ngăho tătínhă sinhăh ănh ăkh ăn ngăkhángăkhu n [39], khángăs tărét [39, 41], kháng viêm [16, Nguy năTh ă nhăChi Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông 512 1024 256 E 64 E 32 MR E MS MR MS MR E MR MS E E 16 E 128 MR MS E DMSO MR F16 MS E MS MR E MS E Hình 3.7 MICăc aăchalcon F16 trênă3ăch ngăMRSA,ăMSSAăvƠăE coli E: E coli; MR: MRSA; MS: MSSA B ngă3.2 K tăqu ăxácăđ nhăMICăc aăcácăch tăth Ch tăth MIC (µg/ml) E coli MRSA MSSA P1 512 64 32 H1 512 32 32 H2 1024 128 128 F2 1024 64 64 F12 1024 128 128 F16 1024 64 64 T2 512 32 64 N11 >1024 >1024 >1024 Ofloxacin 0,5 0,5 0,5 Nh n xét:  MICă aăH1, P1, T2 32- 64 µg/ml iăv iăMRSA ăMSSA  Giáătr ăMICă aăF2 F16, H2, F12ă aoăh năH1 ăP1ăv ăn mătrongăkho ngă64128ăµg/mlă iăv iăMRSA ăMSSA  iă v iă E coli giáă tr ă MICă aă ă h tă th ă nghi mă kháă l nă n mă trongă kho ngă512- 1024 µg/ml  Ch tăth ăN11ăkhơngă ă nhăMIC  MICă aăoflo a inăl ă0 5ăµg/mlă Nguy năTh ă nhăChi iăv iăMRSA ăMSSA ăE coli 29 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă  MICă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông aă ă hal onăth ănghi mătuyă l năh năr tănhi uăsoăv iăkhángăsinhă iă h ngăoflo a inănh ngăv năth ăhi năho tătínhăkhángăkhu n.ăH năn a m ătiêuă aă ă t iă l ă ă nhă ho tă tínhăkhángă khu nă aă ă hal onă ă vòng ă h ă khôngă ph iăm ătiêu thayăth ăkhángăsinh  So sánhăv i T2 óăgiáătr ăMIC ngă i năgi iăkhángăsinhăM100-S18ă aăCLSIă(2008), H1, P1 iăv iăMRSA ăMSSA trongăkho ngăMIC thu ă nhómă cephalosporins (32-64 µg/ml) ă ho aă ăkhángăsinhă ă khángă sinhă cefaclor, cefuroxime, cefprozil, loracarbef (MIC 32 µg/ml) ngă u ngă nh ă iăv iăMRSA.ă 3.3 K TăQU ăTÁCHăCHI TăPLASMID Ly trích DNA plasmi ăt viăkhu năE coli mang plasmid pDG 1664 KS (+) K tă qu ătá hă hi tă ă i nă iăki mătraătrênăg lăagaros 1% ADNăplasmi ă ngătháoă o n ADNăplasmi ă ngăth ng ADNăplasmi ă ngăsiêuă o n Hình 3.8 i nădiăplasmidătáchăchi tătrênăgelăagarose Nh n xét: K tăqu ătá hă hi tăplasmi ăthuă ă aă ngăplasmi : ngătháoă o n ă ngă th ngăv ă ngăsiêuă o nă(Hình 3.8) Th ănghi măkh ăn ngă h ăDNA gyras ă năplasmi ă ă ngătháoă o nă( v iăph nă ngăsiêuă o n)ăv ăsiêuă o nă( iă iăv iăph nă ngătháoă o n).ăDoă óă chúng tơiăti năh nhătinhă h ă ăthu plasmi ă ă ngătháoă o n v ăsiêuă o n 3.4 K TăQU ăTINHăS CHăPLASMID Plasmi ăsauăkhiă ă hi tătá hă ătinhă h ă ngăKităWizar ®ăSVăG lăDNA PCR Clean-UpăSyst mă a Promega Nguy năTh ă nhăChi 30 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông ADNăplasmi ă ngătháoă o n ADNăplasmi ă ngăth ng ADNăplasmi ă ngăsiêuă o n Hình 3.9 i nădiăplasmidătinhăs chătrênăgelăagarose 1: M uăplasmi ătr ăkhiătinhăs h.ă2:ăM uăplasmi ătháoă o nătinhăs h.ă3:ăM uă plasmi ăsiêuă o nătinhăs h Nh n xét: K tăqu ătinhăs hăplasmi ă ng ă3:ăplasmi ă ă ngătháoă o n v ăsiêuă o năl mă nguyênăli uă hoăth ănghi măho tătínhătháoă o năv ăsiêuă o nă aăgyras K tăqu ăth ănghi măkh ăn ngă ă h ăDNA gyrase aă hal on Doăgiáătr ăMICă aă ă h tăth ăătrên E coli l năh n soăv iăMRSA MSSA nên h ngătôiăti năh nhăth ănghi măkh ăn ngă n ngă ăgi mă năt ăgiáătr ăMICă aăE coli ă h ăDNA gyras ă năgiáătr ăMICă aă ă h tăth ăv iă iăv iăMRSA Gyr + Gyr - - 1024 512 128 64 32 16 Plasmi ătháoă o n Plasmi ăsiêuă o n Hình 3.10 Kh ăn ngă căch ăgyraseăc a ch tăF2ă ăcácăn ngăđ ăkhácănhau Nguy năTh ă nhăChi 31 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông Nh n xét:  K tăqu ăHình 3.10 hoăth yă h tăF2ăv năth ăhi n kh ăn ngă ă h ăgyras ă ă giáătr ăMICă iăv iăMRSAătrongăth ănghi măsiêuă o n  K tăqu ăt ngăt ă hoă ă h tă hal onăkhá ăV ăv yă h ngătôiăs ă ă aă ă h tă ngăgiáătr ăMICă ngăn ngă iăv iăMRSAătrongă ăth ănghi măti păth o 3.5 K Tă QU ă TH ă NGHI Mă KH ă N NGă Că CH ă DNAă GYRASEă C AăCHALCON 3.5.1 Th ănghi măho tătínhătháoăxo năc aăgyrase Ti năh nhăth ă nghi măkh ăn ngătháoă o năplasmi ă khơngă óăATP ăk tăqu ăthuă aă DNA gyras ătrongă mă ănh ăsau: Gyr + Gyr - - Of N11 H1 H2 F2 F12 F16 P1 T2 Plasmi ătháoă o n Plasmi ăsiêuă o n Hình 3.11 Th ănghi măkh ăn ngătháoăxo năc aăgyraseă Gyr: gyrase, Of: Ofloxacin, -: khơng có gyrase ho c khơng có ch t th Nh n xét:  Gi ng gyrase âm khơng có gyrase ch t th nên plasmid v n d ng siêu xo n  Gi ng gyras ă ng có gyrase khơng có ATP, plasmid chuy n t d ng siêu xo n sang tháo xo n  Ofloxacin có ho t tính kháng khu n c ch gyrase nên plasmid v n d ng siêu xo n Nguy năTh ă nhăChi 32 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông  Các chalcon H1, H2, F2, F12, F16, P1, T2 có ho t tính kháng khu n Plasmid v n d ng siêu xo n ănh ăv y ch t có kh n ngăkhángăkhu nănh ă ofloxacin  N11 khơng có ho t tính kháng khu n ph n ng tháo xo n v n x y Nh ăv y N11 khơng có kh n ngă c ch gyrase 3.5.2 Th ănghi măho tătínhăsiêuăxo năc aăDNA gyrase Ti năh nhăth ănghi măkh ăn ngăsiêuă o năplasmi ă aăDNA gyras ătrongă mă óă ATP ăk tăqu ăthuă ănh ăsau: Gyr + Gyr - - Of N11 H1 H2 F2 F12 F16 P1 T2 Plasmi ătháoă o n Plasmi ăsiêuă o n Hình 3.12 Th ănghi măkh ăn ng siêuăxo năc aăenzym gyrase Gyr: gyrase, Of: Ofloxacin, -: khơng có gyrase ho c khơng có ch t th Nh n xét:  Gi ng gyrase âm gyrase ch t th nên plasmid v n d ng tháo xo n  Gi ng gyras ă ngăcó m t gyrase có ATP, plasmid d ng tháo xo n tr thành d ng plasmid d ng siêu xo n  Ofloxacin có ho t tính kháng khu n thông qua vi c plasmid v n c ch gyrase nên d ng tháo xo n  Các chalcon H1, H2, F2, F12, F16, P1, T2 có ho t tính kháng khu n Plasmid v n d ng tháo xo n ănh ăv y ch t có kh n ngăkhángăkhu nănh ă ofloxacin Nguy năTh ă nhăChi 33 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông  N11 khơng có ho t tính kháng khu n ph n ng siêu xo n v n x y  Bên c nhă óă h ngătơiăti n hành gi m n ngă ch t th nghi m xu ng giỏ tr ắ, 2/3, ẵ MIC nh m so sánh kh n ngă c ch DNA gyrase so v i k t qu MIC Gyr + Of H1 H2 F2 F16 P1 T2 F12 Gyr - 3 3 3 3 Plasmi ătháoă o n Plasmi ăsiêuă o n Hình 3.13 Th ănghi măthayăđ iăn ngăđ ătácăđ ngăc aăch tăth ătrên gyrase Gyr: gyrase ; Of: ofloxacin; , -: khơng có gyrase 1,2,3: n ngă ă hal onl nl tl ắ, 2/3, ẵ MIC Nh n xột:  Gi ng ch ng khơng có gyrase nên plamid v n  Gi ng ch ngă ngă oflo a ină enzym gyrase nên plasmid v n MIC không c ch n ngă d ng tháo xo n b ng ¾ MIC v n c ch d ng tháo xo n Ofloxacin n ngă c enzym gyrase nên enzym v n ho tă c b ng 2/3, ½, ng plasmid chuy n t d ng tháo xo n sang siêu xo n  Chalcon H1, F2, F16, P1, T2 tháo xo n c ch n ngă c enzym gyrase b ng ¾, 2/3 MIC plasmid n ngă d ng b ng ½ MIC khơng c ch c enzym gyrase, plasmid chuy n t d ng tháo xo n sang siêu xo n  Chalcon H2, F12 có ho t tính kháng khu n th păh n ă c ba n ngă /3, ½ MIC khơng cịn kh n ngă c ch gyras ă nênă thuă c plasmid ¾, d ng tháo xo n Bàn lu n K tă qu ă th ă kh ă n ngă chalcon H2, F12 óătá ă Nguy năTh ă nhăChi ă h ă gyras ă ngă aă ă h tă th ă nghi mă hal onă hoă th yă gyrase v iăn ngă ăt ngă ngăv iăgiáătr ăMICă 34 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông aă ă h tăth ătrongăth ănghi mătínhăkhángăkhu n H1, F2, F16, P1, T2 óăho tă tínhă khángă khu nă ngă 2/3 MIC ă ă th ă H1ă l ă 21ă µg/ml, F2, F16, P1, T2 42,6 µg/ml N11ăkhơngă óăho tătínhăkhángăkhu nătrongă ăph nă ngă nhătínhăv ăkhơngă th ăhi năkh ăn ngăkhángăkhu nătrongăth ănghi măn y.ăDoă ó,ă h ngătơiă óăth ăs ă k tălu nă ă h tăth ătrongă ho tă ngă ăt iă óăkh ăn ngăkhángăkhu năthơngăquaăvi ă aă nzym DNA gyrase H năn a ă ă h tă n yă tá ă ă ă h ă ngă lênă kh ă n ngă tháoă o năl năsiêuă o nă aă nzymăgyras Plap răv ă ngăs ăkhiănghiênă uătínhăkhángăkhu nă aăqu r tin ă ă h ngăminh qu r tinăth ăhi nătínhăkhángăkhu nă ngă hă gyrase [36].ăQu r tină n ngă ă h ăgyras ănênăplasmi ăv nă ătr ngătháiătháoă o nă ă ă ăqu r itină1 3ă ă10-3M, x 10-4M, 2,5 x 10-4M ăt h tăth ă hal on ăH1 ă h ăDNA hayăv ătríăg năATPă aă ă h ăgyras ăth ăhi nătrongă ăt iăn yăl năl M , F2, F16, P1, T2 kho ngă1,78 x 10-4M;ăk tăqu ăn yă uă ngă ngăv iă ăn ngă aă Gra isară v ă ngă s ă v iăn ngă ngăt ă tăl ă0 875 x 10ngăt ănh ănghiênă ă h tă th ă at hină trongă tr ă anhă ă h ă gyrase x 10-4M [20].ă i uăn yă h ngăt cá ă h tăth ăthu ăh ă hal on kháng khu nă ngă hă tá ă h aă ănghiênă uă ngă ă h ă gyras ă óă th ă nă nhi uă ngă óătínhăn ngăkhángăkhu nă nă h tă chalcon khác ă h ă nzymăgyras ă aăviă khu n Trongănghiênă uă h ngătôiă ngănh năth yă iăv iăE coli ăgiáătr ăMICă h tăth ănghi mă aoăh năkho ngă20ăl năsoăv iăn ngă ă th ănghi măin vitro ă i uăn yă h ngăt ăm ă ùăkh ăn ngă ă h tăth ă aoănh ngă ă óăth ătá ă h ă h ă DNA gyrase ă h ăgyras ăin vitro aă ngătrênăin vivo ă h tăth ă năkhu hătánă ăquaăm ngăt ă o ă oă óăhi uăqu ătá ă in vivo.ăV ăv y ă ănghiênă aă ă ngă aă ă h tăth ăgi măkhiă ă nhă uăti păth oăv ă ăt ngăkh ăn ngăkhángăkhu nănênă ngă năvi ă iăthi năkh ăn ngăkhu hătánă aă h tă h tăth Xétă v ă uă tr ă hóaă h ă aă ă h tă th :ă H1 ă P1 ă T2 ă F16 ă F2 ă H2ă v ă F12ă óă nhómă OHă t ă oă ă v ngă Bă v ă v ngă Aă nh năth mă ăv ngăkhá ănh ăpyri in ăfuran S aureus.ă iăv iă h tă ă thayă th ă nh nă th mă nz nă ngă ă uăth ăhi năho tătínhăkhángăkhu nătrênă iă h ngăN11ă(v ngăA l ă ăv ngăfuran v ătrênăv ngăBăg nă thêm nhóm N-N dimethylamino) khơng th ă hi nă ho tă tínhă khángă khu n ă h ngă t ă nhómăth ăOHătrênăv ngăBă óăvaiătr ăkhángăkhu n.ăH năn a ă Nguy năTh ă nhăChi iăv iăH1 ăH2ăv ăP1ă 35 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông thayăth ăv ngăAă ngănh năth mă ăv ngăpyri inăth ăho tătínhăkhángăkhu nă aoă h n.ăK tăqu ăn yăphùăh păv iănghiênă uă aăTr năTh nhă ă nhă ă v ngă Aă aoă g m furan, thiophen, pyri ină l ă oăv ă ngăs ă(2012)ă nă thi tă hoă tá ă ngă khángăkhu n ătrênăv ngăBă óănhómăOHăt ă oă ăv ătríăs ă2 ă3 l ăr tăquanătr ng ăl mă t ngătá ă ngăkhángăkhu n [44] K tăqu ăn yă ngăphùăh păv i nghiênă uă aăTr năH ngăTho iăNga (2011) ăh pă h tăP1, F2, T2 cho th yăvòng B g năthêmănhómăOHăt ă oăth ăhi nă ho tătínhăkhángăkhu n v ăkh ăn ngă ă h ăDNA gyrase, Cá ănhómăth ăv ngăAă ă ă thayă ngăpyri in ăfuran ăthioph năl măt ngăho tătínhăkhángăkhu n [4] Nguy năTh ă nhăChi 36 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă CH ăNGH NGă4 K T LU N VÀ Nguy năTh ă nhăChi GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông NGH 38 Ch ngăIV:ăK TăLU Nă&ă ăNGH GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông 4.1 K TăLU N Quaăth iăgianăth ăhi nă t iătôiă ă tă ă ăm ătiêuă ăraăv ăthuă ă ă k tăqu ăsau:  Xá ă nhă ă 7ă trongă nă u tă hal onă th ă nghi mă óă tínhă khángă khu nă MRSA, MSSA th oăth ăt ălà H1, P1, T2, F16, F2, H2, F12 Ch tăN11ăkhôngă óă ho tătínhăkhángăkhu n.ă  nhă l ngăMIC haiă h ngă MRSA ă MSSAă ngă hoă k tă qu ă t ngă aă ă hal onă th ă nghi mă ngă v iăk tă qu ă nhă tínhăv ă n mă trongă kho ngă 32- 128 µg/ml  Tá hă hi tăv ătinhăs hă ăDNA plasmid ăl mănguyênăli uă ho ph nă ngă ă nhăkh ăn ngă ă h DNA gyras ă aă ă hal onăt ngăh păth ănghi m  Ch ngă minhă s ă ă ă h tă hal onă th ă nghi mă óă ho tă tínhă khángă khu nă ngăvi ă ă h ăenzym gyras ăthôngăquaăph nă ngătháoă o năv ăsiêuă o n 4.2 KI NăNGH  Ti păt ănghiênă uăvi ătinhă h ăDNA gyras ăt ăStaphylococcus aureus  Nghiênă uăkh ăn ngăph iăh pă aă hal onăv iăkhángăsinh.ă Nguy năTh ă nhăChi 39 GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông TẨIăLI UăTHAM KH O TẨIăLI UăTI NGăVI T [1] Lê Huy Chính (2001), Vi sinh y h c ăNXBăYăh [2] Tr năTh ăThuăH ngă(2010) ăD [3] Nguy nă Th ă Kê ă Nguy nă Xu nă Mai ă să (2006) ă "Kh oă sátă tínhă h tă khángă ăH ăN i c l c h c ăNXBăPh ngă ơng ngătiêuăhóa" ăT p chí Y khángăsinhă aăm tăs ă h ngăviăsinhăv tăl yăquaă h c TP.HCM, 10(4), pp 406-411 [4] Tr nă H ngă Tho iă Nga ă Nguy nă Th ă C mă Vi ă Tr nă Cátă ông ă tă al.ă (2011) ă "Kh oăsátătá ngăkhángăSalmonella Shigella aăm tăs ă hal onă ăv ngă kháng sinh", T p chí Y h c Tp H Chí Minh, 15(1) [5] Hu nhăTh ăNg ăPh "T ngă h pă v ă tá ă ng ăPhanăTh ăHuy n ăPh măNguy năY năV nă(2009) ă ngă khángă viă sinhă v tă m tă s ă nă h tă nitro/hydroxychalcon", Y H c TP H Chí Minh, 13(1), pp 217-222 [6] Ngôă V nă Thuă (1998) ă Bài gi ng D D [7] c li u I ă B ă mônă D ă li u ă iă h ă ăH ăN i Tr năLêăÁnhăThùy ă Nguy năTh ăTh oăNh ăTr năTh nhă o ă tăal.ă(2010) ă "T ngăh păv ăho tătínhăkhángăviăsinhăv tăm tăs ă nă h tăChal onă ăv ng" ă T p chí Y hoc TP.HCM, 14(1), pp 110-116 [8] Tr nă Linhă Th ă (2002) ă Ph ng pháp phân tích vi sinh v t n th c ph m m ph m, NXBăGiáoă c, TẨIăLI UăTI NGăANH [9] Aiello S A (1998), "Antibacterial agents, quinolones", The Merck veterinary manual, pp 1761- 1764 [10] Alcaraz L E., Blanco S E., Puig O.N., et al (2000), "Antibacterial activity of Flavonoids against methicillin- resistant Staphylococcus aureus strains", Journal of Theoretical Biology, 205(2), pp 231-240 Nguy năTh ă nhăChi 40 GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông [11] Avila H P., F Smania Ede, F D Monache, et al (2008), "Structure-activity relationship of antibacterial chalcones", Bioorg Med Chem, 16(22), pp 9790-9794 [12] Azad, Muhammad, Munawar A M (2007), "Antimicrobial activity and synthesis of quinoline-based chalcones", Journal of applied sciences, 7(17), pp 2485-2489 [13] Brown J P (1980), "A review of the genetic effects of naturally occurring flavonoids, anthraquinones and related compounds", Mutat Res, 75(3), pp 243–277 [14] Bruce A., Dennis B., Julian Lewis, et al (2002), "Molecular Biology of the Cell", New York, USA [15] Chang J Z., Sheng M J., Zhen H C., et al (2011), "Synthesis and Antibacterial Activity of Some Heterocyclic Chalcone Derivatives Bearing Thiofuran, Furan, and Quinoline Moieties", Key Laboratory of Natural Resources and Functional Molecules of the Changbai Mountain, P.R China, 344(10), pp 689-695 [16] Chiaradia L D., Santos R D., Vitor C E., et al (2008), Bioorg Med Chem, 16 [17] Collins C H., Patricia M L., Grange J M (1995), "Staphylococcus and Micococcus", Collines and Lyne’s Microbiological Methods, pp 353-359 [18] Cushnie T P., Lamb A J (2005), "Antimicrobial activity of flavonoids", International Journal of Antimicrobial Agents, 26(5), pp 343-356 [19] Domaracki B E., Evans A M., Venezia R A (2000), "Vancomycin and Oxacillin Synergy for Methicillin-Resistant Staphylococci", Antimicrob Agents Chemother, 44(5), pp 1394-1396 [20] Gradisar, Pristovsek P., Plaper A., et al , (2007), "Green tea catechins inhibit bacterial DNA gyrase by interaction with its ATP binding site", J Med Chem, 50(2), pp 264-271 Nguy năTh ă nhăChi 41 GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông [21] Hamdi N., Fischmeister C., Puerta M C., et al (2011), "A rapid access to new coumarinyl chalcone and substituted chromeno[4,3-c]pyrazol- 4(1H)ones and their antibacterial and DPPH radical scavenging activities.", 20(4), pp 522-530 [22] Karp G., Wiley J., Sons (2009), Cell and Molecular Biology: Concepts and Experiments, New York, USA [23] Khan S., Asiri A., et al, (2013), "Eco-friendly synthesis and in vitro antibacterial activities of some novel chalcones", Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 39(3), pp 312-317 [24] Laliberte R., Manson J., Warwick H (1968), "Synthesis of new chalcone analogues and derivatives", 46, pp 1952-1956 [25] Liu X L., Xu Y J., Go M L (2008), "Functionalized chalcones with basic functionalities have antibacterial activity against drug sensitive Staphylococcus aureus", 43(8), pp 1681-1687 [26] Lopez, S N., M V Castelli, S A Zacchino, et al (2001), "In vitro antifungal evaluation and structure-activity relationships of a new series of chalcone derivatives and synthetic analogues, with inhibitory properties against polymers of the fungal cell wall", Bioorg Med Chem, 9(8), pp 19992013 [27] Mandalari G., Bennett R N., et al Bisignano G (2007), "Antimicrobial activity of flavonoids extracted from bergamot (Citrus bergamia Risso) peel, a byproduct of the essential oil industry", Appl Microbiol, 103(6), pp 20562064 [28] Mary K S., John L M (2002), "Virulence and recovery of Staphylococcus aureus to the food industry using improvement on traditional approaches", Food control, 15, pp 5-10 [29] Miller, Alan L (1996), "Antioxidant Flavonoids: Structure", Function and Clinical Usage, Alternative Medicine Review, 2(1), pp 103-111 Nguy năTh ă nhăChi 42 GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông [30] Muhammad I A., Asif M., Murtaza M., et al (2014), "Synthesis, characterization, theoretical, anti-bacterial and molecular docking studies of quinoline based chalcones as a DNA gyrase inhibitor", Bioorganic Chemistry, 54, pp 31-37 [31] Nazrul Islam S K., Gray A I., Waterman P G (2002), "Screening of eight alkaloids and ten flavonoids isolated from four species of the genus Boronia (Rutaceae) for antimicrobial activities against seventeen clinical microbial strains", Phytother Res, 16(7), pp 672-674 [32] Neela M B., Kakasaheb R M., Manish S B (2009), "QSAR analysis of 1,3diaryl-2-propen- 1- ones and their indole analogs for designing potent antibacterial agents", Chemical Papers, 63, pp 456- 463 [33] Nielsen S F., Larsen M (2004), " Antibacterial chalcones-bioisosteric r pla m ntă ofă 4’-hydroxy group", Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 12(11), pp 3047-3054 [34] Ohemeng K A., Schwender C F., Fu K.P., et al (1993), "DNA gyrase inhibitory and antibacterial activity of some flavones (1)", Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 3(2), pp 225-230 [35] Pantosti A., Sanchini A., Monaco M (2007), "Mechanisms of antibiotic resistance in Staphylococcus aureus", Future Microbiol, 2(3), pp 323-334 [36] Plaper, Andreja, Golob M., Hafner I., cs (2003), "Characterization of quercetin binding site on DNA gyrase", Biochemical and Biophysical Research Communications, 306(2), pp 530-536 [37] Prasad, Y Rajendra, A Lakshmana Rao (2008), "Synthesis and Antimicrobial Activity of Some Chalcone Derivatives", E-Journal of Chemistry, 5(3), pp 461-466 [38] Prashar H., et al (2012), "Chalcone as a versatile moietyl for diverse pharmacolog activities, International Journal of Pharma Sciences and Research ", 3(7), pp 1913 – 1927 Nguy năTh ă nhăChi 43 GVHD:ăPGS.ăTS.ăTr năCátă ông [39] Rahman M A (2011), "Chalcone: A valuable insight into the recent advances and potential pharmacological activities" [40] Rosamund M B., Lee W H (1995), "Media used in the detection and enumeration of Staphylococcus aureus", International Journal of Food Microbiology, 26, pp 15-24 [41] Sahu R K (2010), "Synthesis and biological activity of certain heterocyclic ring systems", S A C College of pharmacy [42] Swamy, P.M Gurubasavaraja, Y.S Agasimundim (2008), "Synthesis and antimicrobial screening of certain substituted chalcones and isoxazolines bearing hydroxyl benzofuran", Rasayan J Chem., 1(1), pp 421-428 [43] Todar K (2005), Todar’s Online Textbook of Bacteriology University of Wisconsin-Madison Department of Bacteriology (Staphylococcus), Kenneth Todar University of Wisconsin-Madison Department of Bacteriology [44] Tran Thanh Dao (2012), "Synthesis and Antibacterial Activity of some Heterocyclic Chalcone Analogues Alone and in Combination with Antibiotics", Molecules, 17, pp 6684-6696 Nguy năTh ă nhăChi 44