0798 nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học của loài thông nàng (dacrycarpus imbricatus) và pơ mu (fokienia hodginsii) luận văn tốt nghiệp

BỘGIÁO DỤCVÀĐÀO TẠO VIỆNHÀNLÂMKHOAHỌCVÀ CƠNGNGHỆVIỆTNAMHỌCV IỆNKHOAHỌCVÀCƠNGNGHỆ ĐẶNGVIẾTHẬU NGHIÊNCỨUTHÀNHPHẦNHĨAHỌC,HOẠTTÍNHSINHHỌCCỦA LỒITHƠNGNÀNG(DACRYCARPUSIMBRICATUS)VÀPƠMU( FOKIENIAHODGINSII) Chunngành:Hóahọchữucơ Mãsố:62.44.01.14 TĨM TẮTLUẬNÁNTIẾNSĨHĨAHỌC HÀNỘI-2017 Cơngtrìnhđƣợchồnthànhtại:HọcviệnKhoahọcvàCơngNghệ -ViệnHànlâmKhoahọcvàCơngNghệViệtNam Ngƣờihƣớngdẫnkhoahọc: 1.TS.TRẦNVĂNLỘC 2.PGS.TS.TRỊNHTHỊTHỦY Phảnbiện1:…………………………………………………… Phảnbiện2:……………………………………………………… Phảnbiện3:……………………………………………………… Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ, họp tạiHọcviệnKhoahọcvàCôngnghệ-ViệnHànlâmKhoahọcvàCôngnghệViệtNam Vàohồi…….giờ…’,ngày….tháng…năm2017 Cóthể tìmhiểuluậnántại: - Thưviện HọcviệnKhoahọcvàCơngnghệ - ThưviệnQuốcGiaViệtNam MỞĐẦU Tínhcấpthiếtcủaluậnán Sự phát triển công nghiệp làm cho chất lượng sống conngười ngày nâng cao, mặt trái thảm họamơi trường ngày nhiều Cùng với đó, việc lạm dụng hóa chất độc hạitrong sản xuất nơng nghiệp, cơng nghiệp kháng thuốc, biến dị vikhuẩn, virus xem nguyên nhân gây chứng bệnh nguy hiểmcho người HIV/AIDS, tim mạch, ung thư, tiểu đường, viêm đường hôhấpcấp SARS,haygần đâylàcácloại cúmdovirus… Trước thay đổi tiêu cực ấy, nhiệm vụ cấp thiết đặt chocác nhàkhoahọclàphảitìmracácloạithuốcchữabệnhmớicótácdụngchọnlọc, hiệu cao, giá thành rẻ điều trị bệnh hiểm nghèo Trongquá trình nghiên cứu, nhà khoa học nhận theo tự nhiên làxu hướng tất yếu để người tồn thích nghi tốt với tự nhiên.Và đường hiệu nghiên cứu tìm chất có cấu trúc mới, cóhoạt tính tiềm từ hợp chất thiên nhiên để phát triển thành thuốcchữa bệnh cho người, gia súc trồng Nguyên nhân trải qua hàngtriệu năm tiến hóa, hợp chất thiên nhiên có khả tương thích dễ dàng,tương đối phù hợp với thể sống, độc đặc biệt thân thiện với mơitrường ViệtNamnằmtrongvùngkhíhậunhiệtđớigiómùađiểnhìnhnêncóthảmthực vật vơ đa dạngvàphongphúvớikhoảng12.000lồi,trongđócó309họgồm4.000lồidùngđểlàmthuốc.Đâylànguồntàingunthiênnhiên vơcùng q giá Mặc dù có nhiều loại thảo dược sử dụng để làm thuốcchữabệnhchongười,giasúcvàcâytrồng,tuynhiênhiệuquảkinhtếvẫncịnhạnchếbởiviệckha ithácvàsửdụnghầunhưvẫndựavàokinhnghiệmdângian Dựa sở khoa học chúng tơi chọn đề tài “Nghiên cứu thành phầnhóa học, hoạt tính sinh học lồi thơng nàng (Dacrycarpus imbricatus) Pơmu(Fokienia hodginsii)” Mụctiêunghiêncứucủaluậnán - Nghiên cứu thành phần hóa học lồi thơng nàng (Dacrycarpusimbricatus(Blume) de Laub) lồi Pơ mu (Fokienia hodginsii(Dunn) A.Henryet Thomas) - Thửnghiệmhoạttínhsinhhọccácchấtsạchtáchđược Cácnộidungnghiêncứuchínhcủaluậnán - Nghiên cứu phân lập chất từ cao chiết hai lồi thơng nàng vàlồiPơ mu bằngphươngpháp sắckícột - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập phươngphápphổ IR,MS,1D-NMR,2D-NMR - Thửnghiệmvàđánhgiáhoạttínhsinhhọccủamộtsốhợpchấtphânlậpđược Nhữngđónggópmớicủaluậnán Đâylàlầnđầutiênhailồilákimlàthơngnàng(Dacrycarpusimbricatus)và Pơ mu (Fokienia hodginsii) Việt Nam nghiên cứu thành phầnhóahọcvàhoạt tínhsinhhọc ‫٭‬Từlồithơngnàng(Dacrycarpusimbricatus) - 13hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, có01hợp chất làcassipouryl hexadecanoat (79) 10 chất lần tìm thấytrongchiDacrycarpus - Đâylàcácnghiên cứumớivềhoạttínhgâyđộctrên cácdịngtếbàoungthưcủacácchấttáchđượctừhailồinày.Trongđó,hợpchất84(acidlam betic)ứcchếdịngtếbàoungthưbiểumơ(KB)vàungthưgan(HepG2)vớigiátrịIC50tươngứngl à165,93µMvà110,88 µM *Từ lồiPơ mu (Fokieniahodginsii): - Có hợp chất lần tìm thấy chiFokieniatrong số cácchấtđượcphân lậpvàxácđịnhcấu trúchóahọctừ lồiPơmu - 6hợpchấtđượcthửnghiệmhoạttínhgâyđộctếbàotrên3dịngtếbàoungthưbiểum ơ(KB)ungthưgan(HepG2),ungthưtủyxươngcấp(OICAML),cóhaihợpchất92(totarolone)và93(3βhydroxytotarol)cótácdụnglàmchếttếbàoungthưtủyxươngcấptheochươngtrình(apop tosis)ởnồngđộ20µg/ml Bốcụccủaluậnán Luận án gồm 132trang với chương, bảng, 75 hình, 106 tài liệu thamkhảovàphụ lụcgồm81 tranghìnhphổ Luậnánđượcbốcụcnhưsau:Mởđầu:2trang,Tổngquan:25trang,Thựcnghiệm: 26 trang, Kết thảo luận: 65 trang, Kết luận kiến nghị: trang,Danhmụccơngtrìnhliênquanđếnluậnán:1trang,Tàiliệuthamkhảo:12trang NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁNMỞĐẦU Đềcậptínhcầnthiết,ýnghĩakhoahọccủaluậnán CHƢƠNG1:TỔNGQUAN Trên sở nghiên cứu tài liệu, chương tổng quan họ, chi lồinghiêncứu: Tổng quan hóa học hoạt tính sinh học lớp chấtditerpenevàflavonoid glucoside, hai nhóm chất phổ biến tìm thấy lồi thuộcchinày 1.1 Đặcđ i ể m t h ự c v ậ t v t ì n h h ì n h n g h i ê n c ứ u v ề c h i D a c r y c a r p u s ,h ọ Podocarpaceae 1.1.1 ĐặcđiểmthựcvậtchiDacrycarpus 1.1.2 Sửdụngtrongyhọccổtruyền 1.1.3 ThànhphầnhóahọcvàhoạttínhsinhhọcchiDacrycarpus 1.2 ĐặcđiểmthựcvậtcủavàtìnhhìnhnghiêncứuchiFokieniaA.Henry& H.H.Thomas,họHồngđàn(Cupressaceae) 1.2.1 HọHồngđàn(Cupressaceae) 1.2.2 ĐặcđiểmthựcvậtcủachiFokieniaA.Henry&H.H.Thomas 1.2.3 Đặcđ i ể m t h ự c v ậ t , p h â n b ố c ủ a l o i F o k i e n i a h o d g i n s i i ( D u n n ) A Henry&H.H Thomas 1.2.4 Sửdụngvàứngdụngtrongyhọccổtruyền 1.2.5 ThànhphầnhóahọcvàhoạttínhsinhhọccủalồiFokieniahodginsii 1.2.6 Vàinétvềhóahọcvàhoạttínhsinhhọccủacáchợpchấtditerpene Tổng quan hóahọc hoạttínhsinh học củalớpchấtditerpene,mộtnhómchấtphổ biếnđượctìmthấy trongcáclồi thuộcchiFokienia CHƢƠNG2:T HỰ C NGHIỆM - Trìnhb y v ề p h n g p h p n g h i ê n c ứ u , c c h p h â n l ậ p v l i ệ t k ê t í n h chất,hằng số vậtlý,số liệuphổcủacácchấtthuđượctừhailoàinghiên cứu - Các phương pháp xác định cấu trúc hóa học: Cấu trúc hợp chấtđược xác định kết hợp phương pháp phổ đại phổ hồngngoại (FT-IR), phổ khối (EI-, ESI-, HR-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân mộtchiềuvàhai chiều (HSQC,HMBC…) Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học: Thử hoạt tính gây độc tế bàocácchất phân lập đượctừ hai câynghiêncứu - Sơđồ chiếttách vàtinhchếcáchợp chấttừ haicâynghiêncứu Hình2.1.Sơđồchiếtvàphânlậpcácchấttừvỏ câythơngnàng Hình2.2.Sơđồchiếtvàphânlậpcácchấttừgỗcâythơngnàng Hình2.3.Sơđồchiếtvàphânlậpcácchấttừcànhlácâythơngnàng ● Hợpchất86(βsitosterol)tinhthểhìnhkimmàutrắng,hàmlượngsovớimẫu khơ:0,0037%,Rf=0,34 (n-hexane:DCM=1:3) ● Hợpchất89(catechin)màuđỏtía,dạngkeo, hàmlượngsovớimẫu khơ:0,0018%,R f= 0,2(DCM:MeOH:H 2O=4:1:0,1),[α]α]] 25 D =+14 o(MeOH,c 0,1),cơngthứcphântửC15H14O6(độchưabãohịabằng9) Phổ1H-NMR(CD3OD,500MHz),δ(ppm),J(Hz):6,86(1H,d,J=2Hz,H2’);6,78(1H,dd,J=2,6,5Hz,H-6’);6,74(1H,dd,J=2,2Hz,H-5’);5,95 (1H,d,J=2,5Hz,H-8);5,88(1H,d,J=2,5Hz,H-6);4,59(1H,d,J=8Hz, H-2);4,01(1H,ddd,J=5,5,5,5,5Hz,H-3);2,86(1H,dd,J=5,5,5,5Hz,H-4a); 2,53(1H,dd,J=8, Hz, H-4b) Phổ13C-NMR(125MHz,CD3OD),δ(ppm):157,8(C-5);157,5(C-7);156,9(C9);146,2(C-4’);146,21(C-3’);132,2(C-1);120,0(C-6’);116,1(C-2’);115,2(C5’);100,8(C-10);96,3(C-6);95,5(C-8);82,8(C-2);68,8(C-3);28,46(C-4) ● Hợpc h ấ t ( ponasteroneA )c h ấ t b ộ t m u t r ắ n g , h m l ợ n g s o v i mẫuk h ô : , 0 % , R f= , ( D C M : M e O H = , : , ) ,nct o =2 oCc n g thứcphântửC27H44O6(độchưabãohịabằng 6) HR-ESI-MSm/z= 487,3029 [α]M+Na]+(tính tốn cho cơng thức C27H44O6Nalà 487,3036),m/z= 465,3209 [α]M+H]+(tính tốn cho cơng thức C27H45O6là465,3216),công thứcphân tửC27H44O6 Phổ1H-NMR(500MHz,CD3OD),δ(ppm),J(Hz):5,83(1H,d,J=2Hz,H7);3,97(1H,d,J=2Hz,H-3);3,86(1H,ddd,J=4,4,5,3Hz,H-2ax);3,36 (1H,H-22);3,17(1H,m,H-9);2,38(1H,m,H-5);2,14(1H,m,H-12ax);2,02 (1H, H-17);2,00(1H,H-15α]);1,9(1H,H-16α]);1,8(1H, H-12eq);1,78(1H,H1eq);1,78(1H,H-11eq);1,75(1H,H-4eq);1,75(1H,H-24a);1,72(1H,H-20); 1,60(1H,H-23a);1,65(1H,H-11ax);1,65(1H,H-4ax);1,53(1H,H-15β);1,48);1,48 (1H,H-16β);1,48);1,45(1H,H-24b);1,43(1H,H-1ax);1,30(1H,H-23b);1,20(3H,s, H-27);0,98(3H,s,H-26);0,97(3H,s,H-19);0,94(3H,H-21);0,91(3H,s,H-18).Phổ13CNMR(125MHz,CD3OD),δ(ppm):206,40(C-6);1 , ( C - ) ; 122,14(C7);85,23(C-14);77,96(C-20);77,84(C-22);68,70(C-2);68,51(C-3); 51,78(C-5);50,47(C-17);49,62(C-13);39,26(C-10);37,65(C-23);37,37(C-1); 35,10(C-9);32,86(C-4);32,52(C-12);31,75(C-15);30,47(C-24);29,21(C-25); 24,40(C-19);23,40(C-27);22,75(C-26);21,50(C-11);21,50(C-16);20,99(C21);18,32(C-18) ● Hợpchất88(20-hydroxyecdysone)chấtrắn,màutrắnghìnhkim,hàm lượngs o v i m ẫ u k h ô : , 0 % , R f= , ( D C M : M e O H = : ) , [α] α] ]D25 =5 o (MeOH, c0,1), tonc=244-246oC HR-ESI-MSm/z=503,2972[α]M+Na]+(tínhtốnchocơngthứcC27H44O7Na + 503,2985),m/z= 481,3151 [α]M+H] (tính tốn cho cơng thứcC27H45O7là481,3165),cơngthứcphântửC27H44O7(độchưabãohịabằng 6) Phổ1H-NMR(500MHz,CD3OD),δ(ppm),J(Hz):5,83(1H,J=2Hz,H7);3,97(1H,d,J=1,5Hz,H-3);3,86(1H,ddd,J=3,5,5, 3,5 Hz, H-2ax);3,36 (1H,H-22);3,17(1H,t,J=9Hz,H - ) ; 2,38(1H,dd,J=9,5;5Hz,H-5);2,16 (1H,m,H-12ax);2,02(1H,H-17);2,00(1H,H-15α]);1,98(1H,H-16α]);1,8(1H, H-12eq);1,79(1H,H-1eq);1,78(1H,H-11eq);1,75(1H,H-4eq);1,75(1H,H- 24a);1,72(1H,H-20);1,67(1H,H-23a);1,65(1H,H-11ax);1,65(1H,H-4ax); 1,59(1H,H-15β);1,48);1,48(1H,H-16β);1,48);1,45(1H,H-24b);1,43(1H,H-1ax);1,31 (1H,H-23b);1,22(3H,s,H-27);1,22(3H,s,H-26);1,21(3H,s,H-19);0,98(3H,H21);0,91(3H,s,H-18) Phổ13 C-NMR(125MHz,CD 3OD),δ(ppm):206,36(C-6);167,93(C8);122,12( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; 7 , 8 ( C - 2 ) ; , ( C 25);68,68 (C-2);6 , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C 13);42,36(C-24); 39,25( C - ) ; 7, ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C 12);31,77(C15);2 , ( C - ) ; , 9 ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C 19);21,49(C-16); 21,06(C-21);18,04(C-18) ● Hợpc h ấ t ( acidl a m b e r t i c )c h ấ t b ộ t m u t r ắ n g , h m l ợ n g s o v 25 o i mẫukhô:0,0016%,R f=0,5(n-hexane:EtOAc=4:1),[α]α] D=+58 (MeOH,c o o 0,1),t =129-130 C,côngthứcphân tửCH O ( đ ộ c h a bãohòabằng 7) nc 20 28 Phổ1 HNMR(500MHz,CD 3OD),δ(ppm),J(Hz):6,98(1H,d,J=8,3Hz,H12);6,52(1H,d,J=8,5Hz,H-11);3,12-3,14(1H,m,H-15);2,94(1H, dd,J=14,1,6,3Hz,H-7α]);2,74-2,76(1H,m,H-7β);1,48);2,26-2,28(1H,m,H-6α]); 2,01(1H,dd,J=13,8Hz;H-1α]);1,86(1H,d,J=13,4Hz;H-3α]);1,71-1,73 (1H,m,H-2α]);1,67-1,69(1H,m,H-1β);1,48);1,62-1,64(1H,m,H-2β);1,48);1,42(1H,d, J=13,4Hz;H-5);1,38(1H,d,J=13,4Hz;H-6β);1,48);1,34(3H,d,J=7Hz,H16);1,33(3H,d,J=7Hz,H-17);1,18(3H,s,H-20);1,06(3H,s,H18);1,00(1H,dd,J=13,4,3 Hz; H-3β);1,48) Phổ13 C-NMR(125MHz,CD 3OD),δ(ppm):181,64(C-19);153,38(C12);147,37(C-9);133,61(C-8);127,30(C-14);127,17(C-13);112,58(C-11); 54,41(C-5);44,87(C-4);40,91(C-6);39,45(C-10);38,83(C-1);32,49(C-3); 29,29( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C 17);22,63 (C-7);21,20(C-2) ● Hợp chất79(cassipouryl hexadecanoat, chất mới) dạng dầu, khơngmàu,hàmlượng0,0059%(sovớikhốilượngmẫukhơ),R f=0,5(nhexane:EtOAc=5:0,2),cơngthứcphântửC36H68O2(độchưabãohịabằng3) Phổ1 HNMR( 0 M H z , C D C l 3),δ ( p p m ) , J ( H z ) : , 3 ( H , t , J = , Hz,H14);4,58(2H,d,J=7,0Hz;H-15);2,29(2H,t,J=7,5Hz,H-2’);2,00 (1H,m,H-12a);1,69(3H,brs,H-20);1,60(2H,m,H-11);1,58-1,60(2H,m, H-3’);1,52(1H,m,H-5);1,38(1H,m,H-6);1,36(2H,m,H-9);1,30(2H,m, H-8);1,28(2H,m,H-7);1,25(2H,m,H-3);1,25(2H,m,H-4);1,25(1H,m, H-10a);1, 25 ( H , m,H - 4’ - H - ’ ) ; 1, 25 ( H , s, H - 4’ ) ; , ( H , b r s , H15’);1,14(2H,m,H-2);1,08(1H,m,H-10b);1,08(1H,m,H-12b);0,87(3H, t,J=7Hz;H-16’);0,86(3H,s,H-16);0,85(3H,s,H-17);0,845(3H,d,J=7;H18);0,838(3H,d,J=7Hz;H-19) Phổ13C-NMR(125MHz,CDCl3),δ(ppm):173,93(C-1’);142,58(C-13); 118,21( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , 4 ( C 10);37,37 (C-4);37,30(C-8);36,64(C-1);34,42(C-2’);32,80(C-6);32,68(C-9);31,93 (C-14’);29,70-29,16(C4’-C13’);27,98(C-5);25,04(C-11);24,80(C-7);24,80