1328 nghiên cứu khảo sát các đặc điểm có lợi của probiotic

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ NGÔ VŨ QUỲNH HƢƠNG NGHIÊN CỨU KHẢO SÁT CÁC ĐẶC ĐIỂM CÓ LỢI CỦA PROBIOTIC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC ThS DƢƠNG THỊ TRÖC LY Cần Thơ-Năm 2015 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên trân trọng nhất, xin dành lời cảm chân thành sâu sắc đến Cô Dƣơng Thị Trúc Ly hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức kỹ quý báu với tất nhiệt thành, động viên giúp đỡ tơi mặt suốt q trình làm luận văn Tiếp theo, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý Thầy Cô môn Vi Sinh, cô Nguyễn Thị Hải Yến, Cô Trần Thị Nhƣ Lê, Cô Đỗ Ánh Minh, Cô Phạm Thị Ngọc Yến Thầy Lƣơng Quốc Bính giúp đỡ tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận văn thời gian quy định Xin cảm ơn q Thầy Cơ Liên mơn Hóa phân tìch-Kiểm nghiệm-Độc chất, đặc biệt Thầy Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, Cơ Nguyễn Thị Bìch Thủy, Cơ Nguyễn Thị Ngọc Vân, Cô Nguyễn Thị Tƣờng Vi, Thầy Lữ Thiện Phúc, Cô Trần Thị Thanh Thúy Cô Nguyễn Thị Đặng động viên, tạo điều kiện để tơi hồn thành tốt công việc Xin cám ơn quý thầy cô trƣờng Đại học Y Dƣợc Cần Thơ truyền đạt kiến thức hữu ìch, giúp tơi vƣợt qua khó khăn, hoàn thành luận văn Xin gửi lời cảm ơn đến anh chị Trung tâm kiểm nghiệm Trà Vinh, đặc biệt dí Lê Phƣơng Loan - giám đốc Trung tâm cung cấp hỗ trợ nhiệt tính cho tơi để tơi hồn thành tốt cơng việc Con xin cảm ơn gia đính ngƣời thân, đặc biệt ba mẹ, mẹ Phẩm, ông bà ngoại, dì hai Cơ ln bên con, động viên, chăm sóc, ủng hộ suốt trính làm luận văn Xin cám ơn chị Tâm lớp Dƣợc K34 chị Hoanh lớp Xét Nghiệm K28 bảo kinh nghiệm quý báu Cảm ơn bạn Niệm, Duy lớp Xét Nghiệm K37, bạn Hiếu Cƣờng lớp Xét nghiệm K38 giúp đỡ động viên tơi nhiều suốt q trính làm luận văn Và cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến bạn sinh viên lớp Dƣợc Khóa 36 bên tôi, giúp đỡ chia sẻ tơi suốt q trính thực đề tài LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Ngô Vũ Quỳnh Hương, xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa sử dụng tài liệu khác Thành phố Cần Thơ - tháng 6/2015 Sinh viên Ngô Vũ Quỳnh Hƣơng i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH x ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ PROBIOTIC 1.1.1 Định nghĩa probiotic 1.1.2 Thành phần vi sinh probiotic 1.1.3 Tình an toàn probiotic 1.1.4 Vấn đề an toàn vi khuẩn đề kháng kháng sinh 1.2 CƠ CHẾ TÁC DỤNG CỦA PROBIOTIC 1.2.1 Cạnh tranh dinh dƣỡng 1.2.2 Cạnh tranh vị trì bám dình với vi sinh vật gây bệnh 1.2.3 Tổng hợp hợp chất kháng khuẩn 1.2.4 Tác động hệ miễn dịch 1.3 TÁC DỤNG CỦA PROBIOTIC 1.3.1 Cải thiện việc sử dụng lactose ngƣời không dung nạp đƣợc lactose 1.3.2 Điều trị bệnh viêm ruột 1.3.3 Điều trị dị ứng 1.3.4 Tác dụng điều trị bệnh tiêu chảy kháng sinh 1.3.5 Tác dụng bảo vệ ung thƣ ruột 1.3.6 Ức chế tiêu diệt Helicobacter pylori 1.3.7 Một số tác dụng khác 1.4 CÁC TIÊU CHUẨN ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CỦA VI SINH VẬT PROBIOTIC 1.4.1 Khả chịu acid 10 1.4.2 Khả chịu muối mật 10 ii 1.4.3 Khả chịu enzym tiêu hóa 11 1.4.4 Khả kháng vi sinh vật gây bệnh 11 1.5 TỔNG QUAN CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VI SINH VẬT 11 1.5.1 Các phƣơng pháp thử nghiệm độ nhạy cảm kháng sinh 11 1.5.2 Các phƣơng pháp khảo sát khả kháng vi sinh vật gây bệnh 13 1.6 CÁC DẠNG CHẾ PHẨM PROBIOTIC TRÊN THỊ TRƢỜNG 14 1.6.1 Thực phẩm lên men 14 1.6.2 Thực phẩm chức 14 1.6.3 Dƣợc phẩm 14 1.7 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN 15 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 17 2.3 MƠI TRƢỜNG, HĨA CHẤT 17 2.3.1 Môi trƣờng 17 2.3.2 Hóa chất 18 2.4 TRANG THIẾT BỊ, DỤNG CỤ 18 2.5 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.5.1 Khảo sát khả đối kháng với vi sinh vật gây bệnh 19 2.5.2 Khảo sát khả kháng kháng sinh 23 2.5.3 Áp dụng qui trình khảo sát chế phẩm probiotic thị trƣờng 31 Chƣơng KẾT QUẢ 33 3.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT GÂY BỆNH 33 3.1.1 Kết khảo sát với chủng Lactobacillus 33 3.1.2 Kết khảo sát khả đối kháng vi khuẩn gây bệnh với chủng Bacillus 35 3.1.3 Kết khảo sát khả đối kháng vi khuẩn gây bệnh với chủng Bifidobacterium, Enterococcus Str.thermophilus 38 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH 40 3.2.1 Kết khảo sát khả đề kháng kháng sinh chủng Lactobacillus 40 iii 3.2.2 Kết khảo sát khả đề kháng kháng sinh chủng Enterococcus 41 3.2.3 Kết khảo sát khả kháng với kháng sinh chủng Streptococcus thermophilus 42 3.2.4 Kết khảo sát khả đề kháng kháng sinh chủng Bacillus 43 3.2.5 Kết khảo sát khả nhạy cảm với kháng sinh thử nghiệm chủng Bifidobacterium 45 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT CÁC CHẾ PHẨM TRÊN THỊ TRƢỜNG 46 3.3.1 Kết khảo sát chế phẩm chứa L.acidophilus 46 3.3.2 Kết khảo sát chế phẩm chứa L.casei 47 3.3.3 Kết khảo sát chế phẩm chứa Ba.clausii 48 3.3.4 Kết khảo sát chế phẩm chứa Ba.subtilis 49 Chƣơng BÀN LUẬN 51 4.1 KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT GÂY BỆNH CỦA PROBIOTIC51 4.1.1 Khả đối kháng vi sinh vật gây bệnh chủng Lactobacillus 51 4.1.2 Khả đối kháng vi sinh vật gây bệnh chủng Bacillus 52 4.1.3 Khả đối kháng vi sinh vật gây bệnh chủng Enterococcus 54 4.1.4 Khả đối kháng vi sinh vật gây bệnh chủng Streptococcus thermophilus 54 4.1.5 Khả đối kháng vi sinh vật gây bệnh chủng Bifidobacterium55 4.2 KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA PROBIOTIC 56 4.2.1 Khả đề kháng kháng sinh chủng Lactobacillus 56 4.2.2 Khả đề kháng kháng sinh chủng Enterococcus 57 4.2.3 Khả đề kháng kháng sinh Streptococcus thermophilus 57 4.2.4 Khả đề kháng kháng sinh chủng Bacillus 58 4.2.5 Khả đề kháng kháng sinh chủng Bifidobacterium 59 4.3 KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM CÓ LỢI CỦA PROBIOTIC TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM ĐANG LƢU HÀNH TRÊN THỊ TRƢỜNG 60 4.3.1 Khảo sát đặc điểm có lợi Lactobacillus acidophilus chế phẩm60 4.3.2 Khảo sát đặc điểm có lợi Lactobacillus casei chế phẩm 61 4.3.3 Khảo sát đặc điểm có lợi Bacillus clausii chế phẩm 61 4.3.4 Khảo sát đặc điểm có lợi Bacillus subtilis chế phẩm 62 iv KẾT LUẬN 64 KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ nguyên Ý nghĩa LAB Lactic acid bacteria Vi khuẩn sinh acid lactic L Lactobacillus Chi Lactobacillus Ba Bacillus Chi Bacillus GRAS Generally recognized as safe Nhóm vi sinh vật đƣợc xem nhƣ an toàn Str Streptococcus Chi Streptococcus Bi Bifidobacterium Chi Bifidobacterium St Staphilococcus Chi Staphilococcus L.a Lactobacillus acidophilus Chủng Lactobacillus acidophilus L.c Lactobacillus casei Chủng Lactobacillus casei L.k Lactobacillus kefir Chủng Lactobacillus kefir L.p Lactobacillus plantarum Chủng Lactobacillus plantarum L.r Lactobacillus rhamnosus Chủng Lactobacillus rhamnosus Ba.clau Bacillus clausii Chủng Bacillus clausii Ba.lich Bacillus licheniformis Chủng Bacillus licheniformis Ba.poli Bacillus polifermenticus Chủng Bacillus polifermenticus Ba.sub Bacillus subtilis Chủng Bacillus subtilis Ba.coa Bacillus coagulans Chủng Bacillus coagulans Bi.bifi Bifidobacterium bifidum Chủng Bifidobacterium bifidum Bi.bre Bifidobacterium breve Chủng Bifidobacterium breve Bi.long Bifidobacterium longum Chủng Bifidobacterium longum E Escherichia Chi Escherichia vi En Enterococcus Chi Enterococcus Pe Peliococcus Chi Peliococcus Pr Propionibacter Chi Propionibacter Sa Sacharomyces Chi Sacharomyces Sp Sporolactobacillus Chi Sporolactobacillus spp sub species Loài phụ Ig Immunoglobulin Globulin miễn dịch ADN Acid deoxyribose nucleic MRSA De Mann-Rogosa-Sharpe agar Môi trƣờng thạch MRS TSA Tryptic soy agar cfu Colony form unit Môi trƣờng thạch casein đậu tƣơng Đơn vị khuẩn lạc PCR Polymerase chain reaction Phản ứng chuỗi polymeraz khuếch đại ADN MSSA Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus Tụ cầu nhạy cảm với Methicillin MRSA Methicillin-resistant Staphylococcus aureus Tụ cầu kháng với Methicillin BHI Brain-Heart Infusion Broth Môi trƣờng BHI lỏng TSB Tryptic soy broth Môi trƣờng casein đậu tƣơng lỏng MRSB De Mann-Rogosa-Sharpe Broth Môi trƣờng lỏng MRS MHA Mueller-Hinton agar Môi trƣờng thạch Mueller-Hinton R Resistant Đề kháng S Susceptible Nhạy cảm I Intermediate Đề kháng trung gian Cipro Ciprofloxacin Kháng sinh ciprofloxacin vii Ery Erythromycin Kháng sinh erythromycin Van Vancomycin Kháng sinh vancomycin Cef Cefotaxim Kháng sinh cefotaxim Ampi Ampicillin Kháng sinh ampicillin Peni Penicillin Kháng sinh penicillin Clar Clarithromycin Kháng sinh clarithromycin Lev Levofloxacin Kháng sinh levofloxacin Clin Clindamycin Kháng sinh clindamycin CLSI Clinical and Laboratory Standards Institude Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng Xét nghiệm MIC Minimum Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu PL-1 PHỤ LỤC MƠI TRƢỜNG 1.1 Mơi trƣờng MRSB Thành phần Bảng PL 1.1 Thành phần môi trƣờng MRSB Thành phần Hàm lƣợng (g/l)) Pepton chiết từ casein 10,0 Cao thịt 10,0 Cao nấm men 4,0 D-glucose 20,0 Kali hydrophosphat 2,0 Tween 1,0 Diammonium hydro citrate 2,0 Natri acetat 5,0 Magie sulfat 0,2 Mangan sulfat 0,04 Cách chuẩn bị Hịa tan thành phần lìt nƣớc cất, hấp tiệt trùng 15 phút 1210C 1.2 Môi trƣờng MRSA Thành phần Bảng PL 1.2 Thành phần môi trƣờng MRSA Thành phần Hàm lƣợng (g/l)) Pepton chiết từ casein 10,0 Cao thịt 10,0 Cao nấm men 4,0 D-glucose 20,0 Kali hydrophosphat 2,0 PL-2 Tween 1,0 Diammonium hydro citrat 2,0 Natri acetat 5,0 Magie sulfat 0,2 Mangan sulfat 0,04 Agar-agar 14,0 Cách chuẩn bị Hòa tan thành phần lìt nƣớc cất, hấp tiệt trùng 15 phút 1210C 1.3 Môi trƣờng MHA Thành phần Bảng PL 1.3 Thành phần môi trƣờng MHA Thành phần Hàm lƣợng (g/l)) Cao thịt 10,0 Casein hydrolysat 300,0 Tinh bột 17,5 Agar-agar 17,0 Cách chuẩn bị Hòa tan thành phần lìt nƣớc cất, hấp tiệt trùng 15 phút 1210C 1.4 Môi trƣờng MRSAC Thành phần Bảng PL 1.4 Thành phần môi trƣờng MRSAC Thành phần Hàm lƣợng (g/l)) Pepton chiết từ casein 10,0 Cao thịt 10,0 Cao nấm men 4,0 D-glucose 20,0 Kali hydrophosphat 2,0 Tween 1,0 PL-3 Diammonium hydro citrate 2,0 Natri acetat 5,0 Magie sulfat 0,2 Mangan sulfat 0,04 L-cystein.HCl 1,0 Agar-agar 20,0 Cách chuẩn bị Hòa tan thành phần, ngoại trừ L-cystein.HCl, lìt nƣớc cất, bổ sung thị bromocresol green Hấp tiệt trùng 15 phút 1210C Để nguội đến < 500C Hòa tan 1,0g L-cystein.HCl 10ml nƣớc cất, lọc qua màng lọc vơ khuẩn 0,22µm vào lít mơi trƣờng chuẩn bị 1.5 Môi trƣờng TSA Thành phần Bảng PL 1.5 Thành phần môi trƣờng TSA Thành phần Hàm lƣợng (g/l) Pepton from casein 15,0 Pepton from soymeal 5,0 Sodium chlorid 5,0 Agar-agar 15,0 Cách chuẩn bị Hịa tan 40g mơi trƣờng vào lìt nƣớc cất, hấp tiệt trùng 15 phút 1210C, pH môi trƣờng 7,3 ± 0,2 1.6 Môi trƣờng MRSA-salicin1 % Môi trƣờng MRS broth 1000ml Loại bỏ đƣờng glucose, bổ sung 17g agar Hấp khử trùng autoclave 1210C/15 phút Pha lỗng 10g salicin với 30ml nƣớc cất, lọc vơ khuẩn dung dịch vừa pha qua màng lọc 0,2µm cho vào môi trƣờng, lắc 1.7 Môi trƣờng MRSA-vancomycin 1mg/l Môi trƣờng MRS broth 1000ml PL-4 Bổ sung 15g agar 1mg vancomycin Hấp khử trùng autoclave 1210C/15 phút Vancomycin đƣợc thêm vào cách hút chình xác 5ml dung dịch vancomycin 20mg/100ml lọc vô khuẩn qua màng lọc 0,2µm cho vào mơi trƣờng sau hấp tiệt trùng 1.8 Môi trƣờng MHA-máu cừu-glucose Thành phần Bảng PL 1.6 Thành phần môi trƣờng MHA-máu cừu-glucose Thành phần Hàm lƣợng (g/l) Cao thịt 10,0 Casein hydrolysat 300,0 Tinh bột 17,5 Agar-agar 17,0 Glucose 20,0 Máu cừu 50 ml Hòa tan thành phần, ngoại trừ máu cừu, lìt nƣớc cất Hấp tiệt trùng 15 phút 1210C Để nguội đến 400C-500C Hút 50 ml máu cừu cho vào môi trƣờng PL-5 PHỤ LỤC CÁCH PHA ỐNG ĐỘ ĐỤC CHUẨN MCFARLAND CÁCH PHA HUYỀN DỊCH VI KHUẨN THEO ĐỘ ĐỤC MCFARLAND 2.1 Cách pha độ đục chuẩn Mcfarland Độ đục chuẩn McFarland 0,5 đƣợc pha cách:  Lấy 0,6 ml dung dịch 1% BaCl2.2H2O (10g/lìt) cho vào ống đong (loại 100ml)  Sau đổ đầy 100ml dung dịch 1% H2SO4 (10 ml H2SO4 đặc/lìt)  Phân phối vào ống nghiệm (trong, sạch) khoảng ml (Nên chọn ống nghiệm có đƣờng kình tƣơng đƣơng với ống nghiệm sau dùng để pha huyền dịch vi khuẩn)  Ống nghiệm chứa độ đục đƣợc hàn kìn Nếu bảo quản nơi tránh ánh sáng, ống độ đục chuẩn đƣợc sử dụng tháng 2.2 Cách pha huyền dịch vi khuẩn theo độ đục Macfarland Cách pha huyền dịch vi khuẩn theo độ đục McFarland  Thu từ 5-10 khuẩn lạc vi khuẩn hòa vào 5ml dung dịch nƣớc muối sinh lý  Để ống nghiệm vào máy vortex đánh cho đồng  So sánh với độ đục chuẩn McFarland 0,5 Độ đục tƣơng đƣơng với huyền dịch có nồng độ 108cfu/ml Nếu ống nghiệm pha nhạt thí thu thêm khuẩn lạc cho vào, đục thí làm lại ống khác  Từ ống có nồng độ 108cfu/ml tiếp tục pha lỗng tới nồng độ mong muốn nƣớc muối sinh lý micropipet PL-6 PHỤ LỤC HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG BỘ TEST ATB ANA McF Môi trƣờng API 20 A/ NaCl 0,85% 200 µl Mơi trƣờng ATB S 135 µl 24:00-48:00 O2 370C TBA ANA R/S/I Hình PL 3.1 Hƣớng dẫn sử dụng ATB ana (Biomiréux) PL-7 PHỤ LỤC ĐẶC ĐIỂM KHUẨN LẠC VÀ MÔI TRƢỜNG PHÂN LẬP CÁC CHỦNG PROBIOTIC KHẢO SÁT Bảng PL 4.1 Đặc điểm khuẩn lạc môi trƣờng phân lập chủng probiotic khảo sát Vi khuẩn Điều kiện phân lập Nhu cầu oxy Dạng khuẩn lạc Môi trƣờng nuôi cấy Bi.bifidum KK II Khuẩn lạc tròn, màu trắng đục, bề mặt nhăn, lõm giữa, kìch thƣớc 1,5-2mm Bi.breve KK IV Khuẩn lạc trịn, lồi, màu xanh nhạt có viền trắng có chấm xanh giữa, lồi, bề mặt nhẵn, kìch thƣớc 1,5-2mm Bi.longum KK III Khuẩn lạc màu xanh nhạt, bên ngồi có viền trắng, trịn đều, kìch thƣớc 1-2mm L.acidophilus VK VI Khuẩn lạc có viền ngồi đục, tâm trong, ría nhăn, mặt lõm, làm đổi màu mơi trƣờng từ tìm sang PL-8 vàng L.kefir VK V Khuẩn lạc có màu trắng trong, ría nhăn, bề mặt nhám L.rhamnosus VK VII Khuẩn lạc có màu trắng đục, ría trịn đều, bề mặt lồi L.casei VK VII khuẩn lạc có màu trắng đục, ría trịn đều, bề mặt lồi L.plantarum VK I Khuẩn lạc có màu trắng đục, ría trịn đều, bề mặt lồi En.faecalis HK VIII Khuẩn lạc trịn đều, màu trắng, mặt lồi, kìch thƣớc nhỏ, bờ nhẵn En.faecium HK VIII Khuẩn lạc giống nhƣ En.faecalis trịn đều, màu trắng, mặt lồi, kìch thƣớc nhỏ, bờ nhẵn Ba.clausii HK VIII Khuẩn lạc tròn khơng đều, màu vàng nhạt, mặt lồi, kìch thƣớc lớn, bờ cƣa không Ba.coagulans HK VIII Khuẩn lạc hính trịn khơng đều, kìch PL-9 thƣớc to, màu vàng nhạt, bờ cƣa không Ba subtilis HK VIII Phân lập môi trƣờng TSA thu đƣợc khuẩn lạc gần trịn khơng đều, vịng ngồi trắng nhạt, nhân sậm màu bên ngồi, bờ cƣa khơng Ba.licheniformis HK VIII Khuẩn lạc hính dạng khơng cố định dễ kéo thành dãy, khơng trịn, bờ khơng đều, màu vàng nhạt Ba.polifermenticus HK VIII Khuẩn lạc bờ cƣa, khơng đều, mặt nhám, kìch thƣớc to Str.thermophilus HK IX Khuẩn lạc trịn nhỏ, khơng màu, khơng nhân, bờ nhẵn I: MRSA-arabinose 2% + chloramphenicol 1mg/L II: MRSAC (MRSA bổ sung L-cystein.HCl 1g/l) III: MRSAF (MRSA thay glucose D-fructose 20g/l, bổ sung: L-cystein.HCl 1g/l, NaCl 50g/l, bromocresol green) IV: MRSAL (MRSA bổ sung LiCl 3g/l, bromocresol green) PL-10 V: MRSA pH 4,58 VI: MRSA-salicin 1% VII: MRSA-vancomycin 1mg/l VIII: TSA IX: BA + NB + 10% lactose + bromocresol green 50mg/l HK: hiếu khì, ủ 370C/24 KK: kỵ khì, ủ 370C/72 VK: vi hiêu khì, ủ 370C/72 PL-11 PHỤ LỤC KIỂM SOÁT CHẤT LƢỢNG THỬ NGHIỆM KHÁNG SINH ĐỒ VỚI CHỦNG VI KHUẨN CHUẨN 5.1 Staphylococcus 29213 thử nghiệm tìm MIC Hình PL 5.1 Kháng sinh đồ Staphylococcus aureus 29213 môi trƣờng MHA bổ sung ampicillin nồng độ từ 0,25 µg/ml-0,5 µg/ml Hình PL 5.2 Kháng sinh đồ Staphylococcus aureus 29213 môi trƣờng MHA bổ sung ciprofloxacin nồng độ từ 0,125 µg/ml-0,25 µg/ml Hình PL 5.3 Kháng sinh đồ Staphylococcus aureus 29213 môi trƣờng MHA bổ sung erythromycin nồng độ từ 0,125 µg/ml-0,25 µg/ml PL-12 Hình PL 5.4 Kháng sinh đồ Staphylococcus aureus 29213 môi trƣờng MHA bổ sung cefotaxim nồng độ từ µg/ml-4 µg/ml Hình PL 5.5 Kháng sinh đồ Staphylococcus aureus 29213 môi trƣờng MHA bổ sung vancomycin nồng độ từ 0,5 µg/ml-1 µg/ml 5.2 Kháng sinh đồ Streptococus pneumonia ATCC 49619 Hình PL5.6 kháng sinh đồ Streptococcus pneumonia ATCC 49619 môi trƣờng MH bổ sung máu cừu PL-13 5.3 Kháng sinh đồ Staphylococcus aureus ATCC 25923 mơi trƣờng MHA Hình PL 5.7 Kháng sinh đồ Staphylococcus aureus ATCC 25923 môi trƣờng MHA PL-14 PHỤ LỤC DUNG MƠI HỊA TAN VÀ CHẤT PHA LOÃNG ĐỂ CHUẨN BỊ DUNG DỊCH KHÁNG SINH Bảng PL 6.1 Dung mơi hịa tan chất pha loãng để chuẩn bị dung dịch kháng sinh Kháng sinh Dung mơi hịa tan Chất pha lỗng Cefotaxim Nƣớc cất Nƣớc cất Ciprofloxacin Nƣớc cất Nƣớc cất Ampicillin Đệm phosphat pH 8,0; 0,1 mol/L Đệm phosphat pH 6,0; 0,1 mol/L Erythromycin 95% ethanol acid acetic băng Nƣớc cất Vancomycin Nƣớc cất Nƣớc cất TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA DƢỢC Độc lập – Tự – Hạnh phúc GIẤY XÁC NHẬN ĐÃ BỔ SUNG, SỬA CHỮA LUẬN VĂN THEO Ý KIẾN ĐÓNG GÓP CỦA HỘI ĐỒNG CHẤM LUẬN VĂN DSĐH Họ tên sinh viên: NGÔ VŨ QUỲNH HƢƠNG Tên đề tài luận văn: Nghiên cứu khảo sát đặc điểm c lợi probiotic Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: ThS DƢƠNG THỊ TRÚC LY Luận văn đƣợc bổ sung sửa chữa điểm sau: Điều chỉnh bố cục cho phù hợp với mục tiêu Sắp xếp lại tài liệu tham khảo Chú thìch rõ ràng hính ảnh Cần Thơ, ngày 25 tháng 06 năm 2015 Thầy hƣớng dẫn Họ tên sinh viên Xác nhận Trƣởng bàn chấm luận văn