0177 nghiên cứu tổng hợp và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm của các dẫn chất 3 phenyl 3h benzoe13thiazin 24 dion

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ - NGUYỄN HOÀNG THÂN NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CỦA CÁC DẪN CHẤT 3-PHENYL-2H-1,3-BENZOTHIAZIN-2,4(3H)-DION LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC Cần Thơ – 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ - NGUYỄN HOÀNG THÂN NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CỦA CÁC DẪN CHẤT 3-PHENYL-3H-BENZO[e][1,3]THIAZIN-2,4-DION LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC ThS VÕ THỊ MỸ HƢƠNG Cần Thơ – 2015 LỜI CẢM ƠN Trên hết, xin gửi luận văn quà đặc biệt dành tặng cho ba mẹ người thân gia đình ln nguồn động viên tinh thần, kề vai sát cánh bên bên năm qua Đầu tiên, xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc đến cô Ths Ds Võ Thị Mỹ Hƣơng tận tình hướng dẫn, dìu dắt truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho suốt thời gian thực luận văn Dù gặp khơng khó khăn quan tâm, động viên, ủng hộ mặt để tơi hồn thành luận văn cách tốt Cho xin gửi lời cám ơn đến cô Ts Ds Phạm Thị Tố Liên - Trƣởng liên mơn Hóa Lý - Hóa Dƣợc, Khoa Dƣợc, Đại Học Y Dƣợc Cần Thơ dành nhiều thời gian hướng dẫn tạo điều kiện tốt để em thực tốt luận văn Tiếp theo, tơi xin chân thành cảm ơn q thầy cơ, anh chị mơn Hóa Dược gồm Thầy Ds Huỳnh Trƣờng Hiệp, Cô Ths Ds Lê Thị Cẩm Tú, Cô Ths Ds Trần Lê Uyên, Cô Ths Ds Nguyễn Thị Hồng Long, anh Lê Việt Hùng chị Bùi Thị Ngọc Hân giúp đỡ, động viên hỗ trợ em hồn thành tốt luận văn Tơi xin gửi lời cám ơn đến quý thầy cô Liên môn Dƣợc Liệu Thực Vật Dƣợc - Dƣợc Cổ Truyền, liên mơn Hóa Phân Tích - Kiểm Nghiệm Độc chất tạo điều kiện giúp đỡ tơi thiết bị, máy móc phịng thí nghiệm suốt trình thực hiên luận văn Cuối cùng, xin cám ơn anh Hồ Phƣớc Tính Dƣợc K34, anh Phạm Duy Toàn Dƣợc K35 bạn thực đề tài Hóa Dƣợc, bạn thực đề tài Dƣợc Liệu, Kiểm Nghiệm, Bào chế - Công Nghiệp Dƣợc bạn Dƣợc K36 trao đổi kinh nghiệm, chia sẻ vui buồn giúp đỡ thời gian qua LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học riêng Các số liệu kết nghiên cứu khoa học luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố nghiên cứu Cần Thơ, ngày 12 tháng 06 năm 2015 Nguyễn Hoàng Thân i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ TỪ VIẾT TẮT iii DANH MỤC ẢN IỂU ĐỒ v DANH MỤC H NH ẢNH .vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔN QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẠI CƢƠNG VỀ BENZOTHIAZIN VÀ DẪN CHẤT 1.1.1 Benzothiazin 1.1.2 Acid thiosalicylic 10 1.1.3 Anilin dẫn chất 11 1.2 CÁC PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC 12 1.2.1 Phƣơng pháp quang phổ hồng ngoại (Infrared spectrometry-IR) 12 1.2.2 Phƣơng pháp phổ khối lƣợng (Mass Spectrometry-MS) 13 1.2.3 Phƣơng pháp cộng hƣởng từ hạt nhân (NMR) 14 Chƣơng ĐỐI TƢỢN VÀ PHƢƠN PHÁP N HIÊN CỨU 15 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 15 2.2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 15 2.2.1 Nguyên liệu 15 2.2.2 D ng c thiết ị 15 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.3.1 Phƣơng pháp tổng hợp 17 2.3.2 Phƣơng pháp kiểm tra độ tinh khiết 20 2.3.3 Phƣơng pháp xác định cấu trúc 21 ii 2.3.4 Phƣơng pháp khảo sát hoạt t nh kháng khuẩn kháng nấm 23 Chƣơng KẾT QUẢ N HIÊN CỨU 28 3.1 T NG HỢP H A HỌC 28 3.1.1 Tổng hợp dẫn chất N-aryl-2-mercaptobenzamid (1A – 1D) 28 3.1.2 Tổng hợp dẫn chất 3-aryl-3H-benzo[e][1,3]thiazin-2,4-dion (2A – 2D) 36 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM 41 3.2.1 Định t nh khả kháng khuẩn kháng nấm 41 3.2.2 Kết MIC cho chất có hoạt t nh kháng khuẩn 42 Chƣơng ÀN LUẬN 43 4.1 T NG HỢP H A HỌC 43 4.1.1 Tổng hợp dẫn chất N-aryl-2-mercaptobenzamid 43 4.1.2 Tổng hợp dẫn chất 3-aryl-3H-benzo[e][1,3]thiazin-2,4-dion 45 4.2 XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT VÀ CẤU TRÚC 47 4.2.1 Xác định độ tinh khiết 47 4.2.2 Xác định cấu trúc 48 4.3 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN VÀ NẤM 53 KẾT LUẬN 54 KIẾN N HỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nguyên gốc Ý nghĩa 13 13 Phổ cộng hƣởng từ car on C-NMR C- Nuclear Magnetic Resonance CFU Colony-forming unit CTPT Công thức phân tử CYP51 Cytochrome 51 Đơn vị khuẩn lạc Enzyme chuyển hóa tế vi khuẩn Tỷ trọng d DMF Dimethylfomamide Dung môi hữu DMSO Dimethylsulfoxide Dung môi hữu ESI Electrospray ionization K thu t phun m electron khối phổ H-NMR H-Nuclear Magnetic Phổ cộng hƣởng từ proton Resonance HPLC High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography IC50 Inhibition concentration at 50% Giá trị đánh giá khả ức chế tác d ng sinh học IUPAC International Union of Pure and Liên minh Quốc tề Hóa học Applied Chemistry túy Hóa học ứng d ng IR Infrared Hồng ngoại MRSA Methicillin resistant Chủng vi khuẩn Staphylococcus Staphylococcus aureus aureus kháng Methicillin MHA Muller - Hilton Agar Môi trƣ ng thử nghiệm vi khuẩn MS Mass spectrometry Khối phổ MIC Minimum inhibitory Nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh v t iv concentration kháng sinh Non-steroidal anti- Thuốc giảm đau kháng viêm không inflammatory drug steroid NB Nutrient Broth Môi trƣ ng nuôi cấy vi khuẩn PE Petrolium ether Dung môi hữu NSAID Hằng số phân ly acid pKa PTL Phân tử lƣợng SKLM Sắc ký lớp mỏng SDA Sabouraud dextrose agar Môi trƣ ng thử nghiệm vi khuẩn TBS Trypticase soy broth Môi trƣ ng nuôi cấy vi khuẩn TBA Trypticase soy agar Môi trƣ ng nuôi cấy vi khuẩn Tonc Nhiệt độ nóng chảy UV Ultraviolet Tử ngoại v DANH MỤC ẢN IỂU ĐỒ ảng 2.1 Đỉnh hấp thu IR đặc trƣng cho nhóm chức dẫn chất 22 ảng 2.2 Độ dịch chuyển car on proton dẫn chất 22 ảng 3.1 Hiệu suất phản ứng tổng hợp với dẫn chất 29 ảng 3.2 T nh chất sản phẩm (1A – 1D) 29 ảng 3.3 Nhiệt độ nóng chảy sản phẩm (1A – 1D) nguyên liệu 30 ảng 3.4 Kết sắc ký lớp mỏng sản phẩm (1A – 1D) 31 ảng 3.5 Kết phổ tử ngoại – khả kiến sản phẩm (1A – 1D) 31 ảng 3.6 Kết phổ hồng ngoại sản phẩm (1A - 1D) 32 ảng 3.8 Kết phổ 13C-NMR sản phẩm (1A – 1D) 34 ảng 3.9 Kết phổ DEPTcủa sản phẩm (1A – 1D) 35 ảng 3.10 Kết khối phổ sản phẩm (1A -1D) 36 ảng 3.11 Hiệu suất phản ứng tổng hợp 37 ảng 3.12 T nh chất sản phẩm (2A – 2D) 38 ảng 3.13 Kết định t nh khả kháng khuẩn kháng nấm 42 ảng 3.14 Kết MIC (µg/ml) sản phẩm 42 vi DANH MỤC H NH ẢNH H nh 2.1 Sơ đồ tổng hợp dẫn chất 3-aryl-3H-benzo[e][1,3]thiazin-2,4-dion 17 Hình 2.2 Bảng mỏng chấm sắc ký 20 Hình 2.3 Đĩa thạch định t nh khả kháng khuẩn kháng nấm 25 No Date 2015/06/10 15:44 320.4 Peak Peak Vakue 0.212 253.0 Peak Peak Vakue 0.483 3500 3000 2500 C:\Program Files\OPUS_65\meas\Sample description.322 2000 1500 Wavenumber cm-1 Sample description Sample Compartment Page 1/1 Phụ lục 7.2 Phổ IR sản phẩm 2B 1000 552.98 612.33 764.77 734.12 672.05 1063.80 1133.64 1333.21 1474.13 1442.84 1594.54 1651.70 3445.04 50 60 Transmittance [%] 70 80 90 100 Phụ lục 7.1 Phổ UV sản phẩm 2B 500 10/06/2015 Phụ lục 7.3 Phổ 1H-NMR khối sản phẩm 2B Phụ lục 7.4 Phổ 1Hex-NMR khối sản phẩm 2B Phụ lục 7.5 Phổ 13C-NMR khối sản phẩm 2B Phụ lục 7.6 Phổ 13Cex-NMR khối sản phẩm 2B Phụ lục 7.7 Phổ DEPT-NMR khối sản phẩm 2B Phụ lục 7.8 Phổ MS khối sản phẩm 2B No Date Peak Peak Vakue Peak Peak Vakue Peak Peak Vakue 331.4 258.4 222.9 2015/06/04 20:20 0.200 0.492 0.804 3500 3000 2500 C:\Program Files\OPUS_65\meas\Sample description.309 2000 1500 Wavenumber cm-1 Sample description Sample Compartment Page 1/1 Phụ lục 8.2 Phổ IR sản phẩm 2C 1000 547.31 668.76 764.22 736.89 875.04 984.89 1125.76 1253.95 1327.41 1477.65 1445.29 1588.47 1655.05 30 40 Transmittance [%] 50 60 70 80 90 100 Phụ lục 8.1 Phổ UV sản phẩm 2C 500 03/06/2015 Phụ lục 8.3 Phổ 1H-NMR sản phẩm 2C Phụ lục 8.4 Phổ 1Hex-NMR sản phẩm 2C Phụ lục 8.5 Phổ 13C-NMR sản phẩm 2C Phụ lục 8.6 Phổ 13Cex-NMR sản phẩm 2C Phụ lục 8.7 Phổ DEPT sản phẩm 2C Phụ lục 8.8 Phổ khối sản phẩm 2C No Sample Name 2015/05/07 13:15 Peak Peak Vakue Peak Peak Vakue Peak Peak Vakue 331.6 259.2 230.6 0.257 0.666 0.891 60 Transmittance [%] 70 80 90 100 Phụ lục 9.1 Phổ UV sản phẩm 2D 3500 3000 2500 D:\Data\IR-Than\4-CLO\meas\Sample description.0 2000 1500 Wavenumber cm-1 Sample description Sample Compartment Page 1/1 Phụ lục 9.2 Phổ IR sản phẩm 2D 1000 550.51 668.47 734.01 818.03 1007.38 1123.54 1090.52 1321.82 1292.91 1264.26 1488.61 1447.89 1407.91 1591.16 1679.30 2359.99 3403.78 50 Date 500 15/05/2015 Phụ lục 9.3 Phổ 1H-NMR sản phẩm 2D Phụ lục 9.4 Phổ 1Hex-NMR sản phẩm 2D Phụ lục 9.5 Phổ 13C-NMR sản phẩm 2D Phụ lục 9.6 Phổ 13Cex-NMR sản phẩm 2D Phụ lục 9.7 Phổ DEPT sản phẩm 2D Phụ lục 9.8 Phổ khối sản phẩm 2D 10 11 12 13 14 C 15 16 C 2A 10 2B 11 2C 12 2D Phụ lục 30.1 Định tính khả kháng Streptococcus faecalis 10 11 12 13 14 C 15 16 C 2A 10 2B 11 2C 12 2D Phụ lục 10.4 Định tính khả kháng Staphylococcus aureus 10 11 12 13 14 C 15 16 C 2A 10 2B 11 2C 12 2D Phụ lục 10.3 Định tính khả kháng MRSA Streptococcus E Coli MSSA MRSA Phụ lục 11.1 Thử nghiệm MIC dẫn chất 2A khả kháng vi khuẩn Phụ lục 11.2 Thử nghiệm MIC dẫn chất 2B khả kháng vi khuẩn Phụ lục 11.3 Thử nghiệm MIC dẫn chất 2C khả kháng vi khuẩn Phụ lục 11.4 Thử nghiệm MIC dẫn chất 2D khả kháng vi khuẩn