Xác định hàm lượng vitamin a trong sưaz lỏng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Tr-ờng đại học vinh Khoa hóa học === === lê thị h-ơng XC NH HM LNG VITAMIN A TRONG SỮA LỎNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO khóa luận tốt nghiệp đại học Chuyên ngành: hóa thực phẩm Vinh - 2011 Tr-ờng đại học vinh Khoa hãa häc ===  === XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG VITAMIN A TRONG SỮA LỎNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIU NNG CAO khóa luận tốt nghiệp đại học Chuyên ngành: hóa thực phẩm Cán h-ớng dẫn: ThS lê tâm Sinh viên thực hiện: lê thị h-ơng Lớp: 48B - Hãa Vinh - 2011 LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường, Trường Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn đến Ths Lê Thế Tâm - Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn ThS Chu Thị Thanh Lâm - Khoa Hóa - Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình làm thí nghiệm, hướng dẫn cách sử dụng máy HPLC đo mẫu Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cơ, cán khoa Hố Và lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Vinh, tháng năm 2011 Sinh viên Lê Thị Hƣơng MỤC LỤC Trang LỜI MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu sữa 1.2 Giới thiệu vitamin 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Đặc điểm chung phân loại 1.2.2.1 Đặc điểm chung 1.2.2.2 Phân loại 1.3 Vitamin A 1.3.1 Giới thiệu 1.3.2 Tính chất vật lý 1.3.3 Tính chất hóa học 1.3.4 Tính chất quang phổ 1.3.5 Tính ổn định 10 1.3.6 Vai trò vitamin A 10 1.3.7 Tác hại vitamin A 11 1.3.8 Nguồn vitamin A thực phẩm 14 1.4 Các phương pháp xác định vitamin A 16 1.4.1 Phương pháp quang phổ 16 1.4.1.1 Phương pháp so màu 16 1.4.1.2 Phương pháp quang phổ khác 16 1.4.2 Phương pháp đo quang 16 1.4.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 18 1.5 Giới thiệu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 21 1.5.1 Cơ sở lý thuyết 21 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 1.5.2 Nguyên tắc trình sắc ký cột 21 1.5.3 Phân loại sắc ký ứng dụng 22 1.5.4 Các đại lượng đặc trưng sắc ký đồ 23 1.5.5 Hệ thống HPLC 26 1.5.5.1 Bình đựng dung môi 26 1.5.5.2 Bộ khử khí Degasse 26 1.5.5.3 Bơm (Pump) 27 1.5.5.4 Bộ phận tiêm mẫu (injection) 27 1.5.5.5 Cột sắc ký 27 1.5.5.6 Đầu dò (Detector) 28 1.5.5.7 Bộ phận ghi tín hiệu 28 1.5.5.8 In kết 29 1.5.6 Chọn điều kiện sắc ký 29 1.5.6.1 Lựa chọn pha tĩnh 29 1.5.6.2 Lựa chọn pha động 30 1.5.7 Tiến hành sắc ký 31 1.5.7.1 Chuẩn bị dụng cụ máy móc 31 1.5.7.2 Chuẩn bị dung môi pha động 32 1.5.7.3 Chuẩn bị mẫu đo HPLC 32 1.5.7.4 Cách đo HPLC 32 Chƣơng PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Phương pháp lấy mẫu 33 2.2 Nguyên tắc 33 Chƣơng THỰC NGHIỆM 34 3.1 Thiết bị, dụng cụ 34 3.2 Hóa chất 34 3.3 Thực nghiệm 35 3.3.1 Sơ đồ xử lý chất chuẩn mẫu 35 3.3.2 Tiến hành 36 3.3.2.1 Chất chuẩn gốc 36 3.3.2.2 Mẫu phân tích 38 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.4 Tiến hành máy sắc ký HPLC 39 3.5 Khảo sát đánh giá phương pháp 40 3.5.1 Khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn xác định (LOQ) phương pháp 40 3.5.2 Đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp 40 3.5.3 Khảo sát độ lặp 40 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 4.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn Vitamin A 41 4.2 Đánh giá phương pháp 43 4.2.1 Xác định độ lặp lại phương pháp 43 4.2.2 Xác định độ thu hồi phương pháp 45 4.2.3 Xác định LOD LOQ phương pháp 46 4.3 Sắc đồ 47 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Kiến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC BẢNG, HÌNH, SƠ ĐỒ Bảng: Bảng 1.3.4: Bảng thể tính chất quang phổ Bảng 1.2.7: Tham khảo phần ăn chứa vitamin A mức độ chấp nhận (UL) 13 Bảng 1.3.8: Vitamin A thực phẩm 14 Bảng 4.1.1: Diện tích peak vitamin a tương ứng với nồng độ chuẩn 41 Bảng 2.4: Giá trị LOD LOQ 42 Bảng 4.1.2: Kết phân tích hàm lượng vitamin A sữa 43 Bảng 4.2.1 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu sữa 44 Bảng 4.2.2: Kết xác định hiệu suất thu hồi phương pháp 46 Bảng 2.4: Giá trị LOD LOQ 46 Hình: Hình 1.3.4: Đặc điểm quang phổ β-caroten Hình 4.1 Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ chuẩn vitamin 42 Sơ đồ: Sơ đồ 1.3.6: Quá trình tổng hợp chuyển hoá vitamin A 10 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT IU: Đơn vị quốc tế DRI: Thuật ngữ chung cho tập giá trị tham chiếu sử dụng để lập kế hoạch đánh giá lượng chất dinh dưỡng người khoẻ mạnh DRIs: Chế độ phần ăn tham khảo UL: Mức độ chấp nhận RDA: Chế độ ăn uống phụ cấp RE: Đương lượng retinol Với IU=0,3μg retinol 1RAE = 1μg vitamin A = 12 μg β carotence =24 μg carotenoid khác 1RAE = 3,3 IU Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an LỜI MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Vitamin nhóm chất hữu có phân tử lượng lớn tính chất lý, hoá học khác Tác dụng chúng thể sinh vật khác cần thiết cho sống sinh vật, người động vật So với nhu cầu chất dinh dưỡng protein, lipit, gluxit nhu cầu vitamin thấp Trong thể vitamin đóng vai trị chất xúc tác Có khoảng 40 vitamin khống chất cần thiết cho người Vitamin cung cấp vào thể người để giúp thể đáp ứng nhu cầu dinh dưỡng giúp thể khỏe mạnh khỏe mạnh Trong nhiều kỉ, thiếu số vitamin gây nên bệnh mù lòa (thiếu vitamin A), bệnh beri-beri (thiếu vitamin B1), bệnh scobut (thiếu vitamin C), thiếu axit folic thời kì thai nghén gây khuyết tật ống thần kinh thai nhi Theo thống kê, riêng Mỹ, có tới 7/10 người phải “cầu cứu” tới vitamin, cịn người sử dụng chúng cách có định hướng thường xuyên Từ năm 70, phủ Mỹ cho phép sử dụng phụ gia thực phẩm có chứa vitamin liều cao Kết là, hàng năm Mỹ, người ta tiêu tốn khoảng tỷ đôla cho loại vitamin Nhiều người cho vitamin thần dược chữa ung thư kéo dài tuổi thọ Hiện nay, khoa học tiến hành nghiên cứu thực nghiệm quy mô rộng lớn vitamin Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Mỹ đưa lời khuyên là: đa dạng hóa ăn uống biện pháp tốt để đáp ứng nhu cần vitamin thể Sử dụng bổ sung loại vitamin chất khống cần phải có mức độ Liều lượng sử dụng nhiều hay vấn đề có tính riêng biệt, tùy thuộc vào lối sống, phần ăn uống, tình trạng sức khỏe người vô số nhân tố khác Các nhà khoa học nghiên cứu vitamin A loại vitamin cần thiết cho thể Vì nên cần bổ sung lượng thích hợp cho thể Vitamin A có dược phẩm, thực phẩm tự nhiên loại thực phẩm qua chế biến.Viamin A vitamin có nhiều sữa tuỳ thuộc vào hàm lượng carotence thức ăn gia súc dùng lấy sữa Để biết hàm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an lượng vitamin A sữa sao? Ở khóa luận chúng tơi nghiên cứu việc xác định hàm lượng vitamin A sữa lỏng số sản phẩm sữa Có thể xác định vitamin A phương pháp trắc quang, quang phổ, sắc kí, hố học… Nhưng vitamin A hợp chất hữu thuộc đối tượng khó phân tích tồn trạng thái tan dầu Do cần phải lựa chọn phương pháp phân tích mang lại hiệu cao Chúng tơi chọn phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao(HPLC) Vì phương pháp đại cho ta biết kết nhanh xác, tiết kiệm thời gian lượng mẫu cần dùng Nhiệm vụ nghiên cứu Trong khóa luận này, chúng tơi có nhiệm vụ sau: - Nghiên cứu tính chất vật lý, hóa học phương pháp xác định vitamin A - Tách, chiết vitamin A mẫu sữa lỏng - Định lượng vitamin A phương pháp HPLC - Kết thực nghiệm Đối tƣợng nghiên cứu Mẫu sữa lỏng thu thập từ cửa hàng tạp hoá thành phố Vinh Mỗi mẫu lấy dây sữa hộp 110ml, đựng vào túi nilông Bao gồm: + Sữa tươi Vinamilk + Sữa Ba Vì + Sữa Mộc Châu Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 40 - Bước sóng cài đặt cho đầu dò UV: 325 nm (Ghi chú: tốc độ dòng tỉ lệ pha động thay đổi tuỳ cột sử dụng) Điều kiện Detectơ: Detectơ UV bước sóng 325 nm Loại detectơ cho phép ghi phổ hấp thụ UV-VIS vitamin A tách sắc ký đồ Với trợ giúp máy tính, liệu phổ lưu trữ sau đem so sánh với phổ hấp thụ chất chuẩn, nhờ cho phép khẳng định phần cấu trúc vitamin A đánh giá độ pic 3.5 Khảo sát đánh giá phƣơng pháp 3.5.1 Khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn xác định (LOQ) phương pháp Giới hạn phát (LOD) định nghĩa nồng độ nhỏ chất phân tích mà có tín hiệu sắc ký lớn gấp lần tín hiệu đường Đây thông số đặc trưng cho độ nhạy phương pháp LOD = tín hiệu chiều cao pic/nhiễu đường ≥ Giới hạn định lượng (LOQ) (limit of quantitation) nồng độ nhỏ đo phương pháp, nồng độ tối thiểu chất mẫu xác định mà thiết bị đo với RSD% quy định nồng độ chất phân tích mà cho tín hiệu gấp 10 lần tín hiệu đường 3.5.2 Đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp Để đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp tiến hành phân tích mẫu theo quy trình với phương pháp thêm chuẩn: Mẫu 4: mẫu sữa Ba thêm 1,7ml chất chuẩn vitamin A có nồng độ 1ppm 3.5.3 Khảo sát độ lặp - Độ lặp lại dùng để đánh giá định lượng độ phân tán kết Đại lượng đặc trưng cho độ gần giá trị trung bình hai hay nhiều phép đo nhận điều kiện giống - Đánh giá độ lặp dựa độ lệch chuẩn tương đối (RSD) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 41 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Xác định khoảng tuyến tính đƣờng chuẩn Vitamin A Dãy chuẩn vitamin A khảo sát có nồng độ sau:1ppm; 5ppm; 10 ppm Phân tích chuẩn nói xác định phương trình hồi quy tuyến tính dựa vào diện tích pic Bảng 4.1.1: Diện tích peak vitamin a tƣơng ứng với nồng độ chuẩn Diện tích píc Nồng độ a b R2 76,56 8,1249 0.9996 chuẩn Lần Lần Lần 92,9893 93,0995 92,7898 392,27866 392,30087 392, 2578 10 772,2227 772,3034 772,1560 Sử dụng chương trình Microsoft Excel để xây dựng đường chuẩn, ta có phương trình đường chuẩn xác định hàm lượng vitamin a sau: Phương trình hồi qui đường chuẩn theo diện tích peak có dạng: y = ax +b x nồng độ, y tích pic a = 76,56 b = 8,1249 Hệ số hồi quy tuyến tính R2 =0,9996 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 42 y = 76.56x + 8.1249 R2 = 0.9996 900 800 700 600 500 400 300 200 100 y Linear (y) 10 15 Hình 4.1 Đƣờng chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu đƣợc nồng độ chuẩn vitamin Giá trị LOD LOQ phương pháp qua lần đo nồng độ khác 1ppm, 5ppm, 10ppm ta kết bảng sau: Bảng 2.4: Giá trị LOD LOQ Ghi : Giá trị Chuẩn vitamin A(ppm) LOD 0,026 LOQ 0,087 3*Sy 10*LOD LOD = LOQ = LOQ = a a hệ số góc phương trình hồi quy Độ lệch chuẩn Sy: Σ( Xi – Xtb )2 Sy = ΣXi Xtb = n-1 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn n C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 43 Qua bảng số liệu ta thấy phương pháp có khoảng giới hạn phát khoảng định lượng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, phát hàm lượng vitamin A dạng vết có mẫu phân tích Từ giá trị diện tích peak đo ta tính hàm lượng C (ppm) - Sau ta tính hàm lượng vitamin A (ppm) có mẫu tính theo cơng thức: C = (C0/ V) Vdm Trong đó: C : nồng độ vitamin A có mẫu tính (ppm) Co: nồng độ vitamin A dịch chiết tính từ đường chuẩn, tính theo ppm V : Thể tích lấy mẫu lấy để phân tích (ml) Vdm: Thể tích bình định mức mẫu(ml) Bảng 4.1.2: Kết phân tích hàm lƣợng vitamin A sữa Mẫu C0 (ppm) Thể tích mẫu Diện tích pic C (ppm) (ml) 0,356804 5,0 35,44185 0,7136 0,105010 5,0 16,16446 0,2100 0,283175 5,0 28,80481 0,5659 4.2 Đánh giá phƣơng pháp 4.2.1 Xác định độ lặp lại phương pháp Theo lý thuyết thống kê, đại lượng đặc trưng cho độ lặp lại độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% (RSD) Thực phân tích ml mẫu tiến hành phân tích lặp lại lần điều kiện Kết phân tích lần lặp lại độ lặp lại phương pháp nêu bảng 4.2.1 Độ lặp lại phương pháp đánh giá qua độ lệch chuẩn tương đối (RSD) Dựa vào nồng độ tương ứng tính kết trung bình tính độ lệch chuẩn hệ số biến thiên theo công thức đây: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 44 Bảng 4.2.1 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu sữa Mẫu TT Mẫu Mẫu Thể tích Nồng độ Thể tích Nồng độ Thể tích Nồng độ 5,0 0,7136 5,0 0,2100 5,0 0,5659 5,0 0,7228 5,0 0.208 5,0 0,5715 5,0 0,7198 5,0 0,2145 5,0 0,5630 Xtb 0,7187 0,211 0,5668 S 0,0047 0,00239 0,00432 CV(%) 0,654 1,13 0,762 - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin A mẫu là: Xtb = n  x = 0,1787 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s  ( xi  xtb ) i 1 = 0,0047 n 1 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = S  100 0.0047 =  100 = 0,654 % xtb 0,7187 - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin A mẫu là: Xtb = n  x = 0,211 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s  ( xi  xtb ) i 1 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = n 1 = 0,00239 S  100 0.00239 =  100 = 1,13 % xtb 0,211 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 45 - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin A mẫu là: Xtb = n  x = 0,5668 n i 1 n Độ lệch chuẩn: s  (x i 1 i  xtb ) n 1 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = = 0,00432 S  100 0.00432 =  100 = 0,762 % xtb 0,5668 Trong đó: Xi nồng độ vitamin A lần chạy thứ i Xtb nồng độ trung bình n lần chạy n số lần chạy lặp lại Nhận xét: Kết tính tốn cho thấy, phương pháp có lặp lại cao cho độ tốt đáp ứng yêu cầu định lượng 4.2.2 Xác định độ thu hồi phương pháp Hiệu suất thu hồi xác định theo công thức sau: Cmẫu - Cblank H= 100% Cspike Trong đó: Cmẫu: Hàm lượng vitamin A có mẫu có thêm chuẩn (ppm) Cblank: Hàm lượng vitamin Acó mẫu khơng thêm chuẩn (ppm) Cspike: Hàm lượng chuẩn vitamin cho vào mẫu Độ thu hồi phương pháp xác định cách tiến hành phân tích lần lặp lại mẫu tiến hành tách chiết theo quy trình xử lý mẫu theo quy trình với nồng độ thêm chuẩn 0,17 ppm Mẫu 4: Thêm 1,7ml chuẩn vitamin A 1ppm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 46 Bảng 4.2.2: Kết xác định hiệu suất thu hồi phƣơng pháp STT V Cmẫu Diện tích pic Cpic Cblank H% 5,0 0,315998 32,28882 0,17 0,283175 96,53 5,0 0,316094 32,28892 0,17 0,283175 96,69 5,0 0,316485 32,28799 0,17 0,283175 97,97 Từ bảng kết ta có giá trị trung bình H% mẫu là: xtb = n  x = 97,06 % n i 1 n s Độ lệch chuẩn:  (x n 1 Độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = i  xtb ) n 1 = 0.78 % 0.78  100 S  100 = = 0,8 % xtb 97,06 Qua kết phân tích tính toán cho thấy, hiệu suất thu hồi cao, tỷ lệ % trung bình tìm thấy vitamin A sữa Ba 97,06% đáp ứng u cầu phân tích 4.2.3 Xác định LOD LOQ phương pháp Giá trị LOD LOQ phương pháp qua lần đo mẫu nồng độ khác 1ppm, 5ppm, 10ppm ta kết bảng sau: Bảng 2.4: Giá trị LOD LOQ Giá trị Mẫu (ppm) LOD 0,031 LOQ 0,1033 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 47 4.3 Sắc đồ Sau sắc đồ dung dịch chuẩn vitamin A Hình 4.3.1: Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 1ppm Hình 4.3.2: Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 5ppm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 48 Hình 4.3.3: Sắc đồ mẫu chuẩn có nồng độ 10ppm Hình 4.3.4: Sắc đồ mẫu khơng thêm chuẩn Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 49 Hình 4.3.5: Sắc đồ mẫu khơng thêm chuẩn Hình 4.3.6: Sắc đồ mẫu không thêm chuẩn Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 50 Hình 4.3.7: Sắc đồ mẫu thêm chuẩn vitamin A Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 51 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết phân tích cho thấy mẫu sữa tươi có phát thấy hàm lượng vitamin A là: + Mẫu 1: 0,7136ppm + Mẫu 2: 0,21ppm + Mẫu 3: 0,5659 Giới hạn phát LOD = 0.031ppm Giới hạn định lượng LOQ =0,103ppm Độ lặp lại vitamin A mẫu với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,654% Độ lặp lại vitamin A mẫu với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 1,13% Độ lặp lại vitamin A mẫu với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,762% Độ thu hồi trung bình vitamin A sữa Ba 97,06% 5.2 Kiến nghị Vấn đề sử dụng vitamin a điều trị bệnh thiếu vitamin A, thực phẩm sản phẩm sữa, coi tiến khoa học công nghệ áp dụng y học đời sống sức khỏe Tuy nhiên không nên lạm dụng xem thường cách sử dụng vitamin A mà dẫn đến biến tính xảy Chúng ta biết triệu chứng xảy thừa thiếu vitamin A mục 1.3.7 Sữa sản phẩm đa dạng, sản xuất theo nhiều dây chuyền khác Theo Quyết định 178/1999 Thủ tướng Chính phủ, “Quy chế ghi nhãn hàng hóa lưu thơng nước hàng hóa xuất khẩu, nhập khẩu”, với sữa hồn ngun từ sữa bột, nhãn phải ghi rõ tên gọi sản phẩm “Sữa hoàn nguyên tiệt Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 52 trùng” Thế nhưng, theo khẳng định nhiều chuyên gia ngành sữa tọa đàm phần lớn lượng sữa quảng cáo sữa tươi nguyên chất 100%, sữa tươi tiệt trùng không Bởi với lượng nguyên liệu sữa tươi sản xuất nước đảm bảo lượng nhỏ sữa tươi mà doanh nghiệp bán thị trường Lượng sữa tươi cịn lại, thực tế sữa bột hồn ngun “phù phép” thành sữa tươi Khi uống sản phẩm vào không đảm bảo nhu cầu dinh dưỡng Có thể bị mắc bệnh quy trình xử lý không đảm bảo Trong số 300 sản phẩm sữa loại công ty nước sản xuất nhập khẩu, người tiêu dùng khó tự nhận biết, phân biệt chất lượng sữa, vậy, có doanh nghiệp lợi dụng điều để quảng cáo, ghi nhãn không với chất lượng sản phẩm Thậm chí đưa thị trường sản phẩm chất lượng thấp kém.Vì quyền lợi, người tiêu dùng nhiều lần đưa kiến nghị thắc mắc đến quan chức năng, doanh nghiệp sản xuất chất lượng thật sản phẩm Tuy nhiên, tới chưa có chế tài xử phạt doanh nghiệp sản xuất làm ăn gian dối, làm giảm uy tín doanh nghiệp làm ăn đáng ngang nhiên móc túi Cần phải tăng cường kiểm sốt chất lượng vệ sinh an tồn thực phẩm, quy trình sản xuất sản phấm sữa loại sản phẩm có chứa nhiều vitamin A Cần nghiên cứu lượng vitamin A diện rộng sản phẩm sữa loại thực phẩm khác để từ có lựa chọn đắn Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1) Hồng Kim Anh Hóa học thực phẩm NXB Khoa học kỹ thuật 2) PGS.TS Trần Thị Xơ Hóa sinh I Trường ĐH Bách khoa Khoa hóa ĐH Đà Nẵng 3) Nguyễn Hữu Nhân Dinh dưỡng học NXB Nông nghiệp 4) Phạm Luân (1999) Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu suất cao Đại học quốc gia Hà Nội 5) Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng cộng (1985) Các phương pháp sắc ký Nhà xuất khoa học kỹ thuật 6) Hoàng Minh Châu, Từ Vọng Nghi, Từ Văn Mặc Cơ sở hóa học phân tích Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật 7) Dược điển Việt Nam 8) Phạm Văn Sổ, Bùi thị Như Thuận, Kiểm nghiệm lương thực, thực phẩm, Khoa hóa học thực phẩm, trường đại học Bách khoa Hà Nội, 1991 9) Hoàng Văn Lựu Các phương pháp sắc ký DHVinh 10) PGS.TS Nguyễn Khắc Nghĩa Xử lí số liệu thống kê DHVinh 11) Viện kiểm nghiệm Định lượng Vitamin NXB Y học 12) Hoàng Minh Châu, Từ Vọng Nghi, Từ Văn Mặc Cơ sở hóa học phân tích Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật 13) Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm, Đào Thị Vui, Lê Phan Tuấn Dược lý học, tập Trường Đại học Dược Hà Nội Tiếng Anh 1) Vitamin A (retinol) in Milk Based Infant Formular Liquid Chromatographic Method 2) Vitamin analysis for the health and food sciences Ronald R Êitnmiller Lin Ye W.O.Landen, Jr Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn