Đánh giá độc tính bán trường diễn của cao chiết từ lá cây sầu đâu ăn lá (azadirachta indica jus f ) trồng tại an giang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ NGUYỄN THỊ THANH THOẢNG ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY SẦU ĐÂU ĂN LÁ (Azadirachta indica Jus F.) TRỒNG TẠI AN GIANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC ThS NGUYỄN THỊ HẠNH ThS LÊ KIM KHÁNH Cần Thơ – 2018 LỜI CẢM ƠN Con xin gửi lời cảm ơn đến Cha Mẹ tin tưởng, động viên, chỗ dựa tinh thần vững để hồn thành luận văn cách tốt Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy PGS.TS Dƣơng Xuân Chữ, Thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm, ln ln quan tâm, hết lịng giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô ThS Nguyễn Thị Hạnh, Cô ThS Lê Kim Khánh Thầy Cô liên môn Dƣợc lý – Dƣợc lâm sàng Trƣờng Đại học y dƣợc Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô ThS Nguyễn Thị Trang Đài, Cô Ts Nguyễn Thị Thu Trâm, Thầy Ths.Bs Nguyễn Văn Luân hỗ trợ, tạo điều kiện, truyền đạt kiến thức cho em trình thực đề tài Cảm ơn Bạn Phan Huỳnh Ngọc Xuân lớp Dược B K39 đồng hành, chia sẻ kiến thức, nhiệt tình giúp đỡ, tạo động lực cho suốt thời gian thực đề tài Cảm ơn Anh, Chị khóa 38, Bạn Khóa 39 nhóm đề tài Dược lý, Bào chế, Hóa dược, Dược liệu nhiệt tình giúp đỡ, chia sẻ kinh nghiệm, động viên để hồn thành tốt đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Bạn lớp Dược B K39 ln nhiệt tình giúp đỡ, động viên thời gian thực đề tài, chúc Bạn vượt qua kỳ thi đến cách tốt nhất! Em xin chân thành cảm ơn người! LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Cần Thơ, ngày 14 tháng 06 năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thị Thanh Thoảng i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG .iv DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ v ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Sầu đâu 1.1.1 Giới thiệu chung .3 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Các nghiên cứu tác dụng dược lý .7 1.2 Tổng quan mơ hình thử nghiệm độc tính bán trường diễn 10 1.2.1 Khái niệm độc tính thuốc .10 1.2.2 Mục tiêu thử nghiệm .10 1.2.3 Lựa chọn mơ hình thử 10 1.2.4 Thời gian thử 10 1.2.5 Liều dùng .11 1.2.6 Theo dõi, đánh giá 11 1.3 Các nghiên cứu độc tính bán trường diễn Sầu đâu giới 18 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.1.1 Đối tượng 20 2.1.2 Động vật thí nghiệm .20 2.1.3 Hóa chất thử nghiệm .20 2.1.4 Trang thiết bị, dụng cụ thử nghiệm 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 21 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ii 2.2.2 Các thử nghiệm đánh giá độc tính bán trường diễn .24 2.3 Phân tích kết thống kê 26 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 Thể trạng chung chuột .27 3.1.1.Thay đổi trọng lượng chuột trình theo dõi độc tính bán trường diễn 27 3.1.2 Hoạt tính vận động tự nhiên chuột 28 3.2 Các số huyết học 31 3.2.1 Chỉ số hồng cầu 31 3.2.2 Chỉ số bạch cầu .32 3.2.3 Chỉ số tiểu cầu 34 3.3 Các số sinh hóa 34 3.4 Kết giải phẫu bệnh gan, thận 37 3.4.1 Đại thể gan, thận 37 3.4.2 Vi thể gan, thận .39 Chƣơng BÀN LUẬN 42 4.1 Ảnh hưởng cao chiết Sầu đâu thể trạng chung .42 4.1.1 Ảnh hưởng trọng lượng chuột .42 4.1.2 Ảnh hưởng hoạt tính vận động tự nhiên 42 4.2 Ảnh hưởng cao chiết Sầu đâu số huyết học .43 4.3 Ảnh hưởng cao chiết Sầu đâu số hóa sinh 44 4.3.1 Ảnh hưởng số AST, ALT 44 4.3.2 Ảnh hưởng số Creatinin huyết thanh, urea máu 45 4.3.3 Ảnh hưởng số glucose huyết 46 4.4 Ảnh hưởng cao chiết Sầu đâu mô học 46 4.4.1 Ảnh hưởng mô học thận 46 4.4.2 Ảnh hưởng mô học gan 47 KẾT LUẬN 48 KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ACTH Adrenocorticotropic hormone Hormon vỏ thượng thận AST Aspartaminotransferase ALT Alaninaminotransferase BASO Basophil DNA Deoxyribonucleic acid ĐVTN Bạch cầu đa nhân ưa base Động vật thí nghiệm EOS Eosinophil Bạch cầu đa nhân ưa acid GFR Glomerular filtration rate Độ lọc cầu thận Hb Hemoglobin Hct Hematocrit HDL High-density lipoprotein LDL Low-density lipoprotein LYM Lymphocyte Bạch cầu lympho MONO Monocyte Bạch cầu đơn nhân NEU Neutrophil Bạch cầu hạt trung tính Platelet RBC Tiểu cầu Red Blood Cell TLGTĐ WBC Hồng cầu Trọng lượng gan tương đối White Blood Cell Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Bạch cầu C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an iv DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Phân loại thực vật Sầu đâu Bảng 1.2 Các hợp chất có hoạt tính sinh học phân lập từ Sầu đâu Bảng 1.3 Đặc điểm, chức loại bạch cầu 13 Bảng 1.4 Các số huyết học bình thường chuột 15 Bảng 1.5 Các thông số sinh hóa bình thường chuột 17 Bảng 3.1 Khoảng đường chuột di chuyển mơ hình mơi trường mở 28 Bảng 3.2 Số vận động bất thường chuột mơ hình mơi trường mở 29 Bảng 3.3 Thành phần bạch cầu lô thử nghiệm 33 Bảng 3.4 Các số đánh giá chức gan lô thử nghiệm 34 Bảng 3.5 Các số đánh giá chức thận lô thử nghiệm 35 Bảng 3.6 Glucose huyết lô thử nghiệm 36 Bảng 3.7 Bảng kết trọng lượng gan tương đối lô thử nghiệm 38 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ HÌNH VẼ Trang Hình 1.1 Sầu đâu mọc nước ta .4 Hình 2.1 Sắc ký lớp mỏng vết A, B 23 Hình 2.2 Mơ hình mơi trường mở 25 Hình 3.1 Sự thay đổi trọng lượng lơ thử nghiệm 27 Hình 3.2 Sự thay đổi khoảng đường di chuyển (số ô) thời điểm 10 ngày, 20 ngày, 30 ngày so với trước bắt đầu thử nghiệm 28 Hình 3.3 Sự thay đổi số vận động bất thường thời điểm 10 ngày, 20 ngày, 30 ngày so với trước bắt đầu thử nghiệm 29 Hình 3.4 Các số hồng cầu lô thử nghiệm 31 Hình 3.5 Số lượng bạch cầu lơ thử nghiệm 32 Hình 3.6 Số lượng tiểu cầu lô thử nghiệm 34 Hình 3.7 Hình quan sát đại thể thận lô thử nghiệm 37 Hình 3.8 Hình quan sát đại thể gan lô thử nghiệm 37 Hình 3.9 Hình vi thể cầu thận lô thử nghiệm 39 Hình 3.10 Hình vi thể ống thận lô thử nghiệm 39 Hình 3.11 Hình vi thể đơn vị tiểu thùy gan lô thử nghiệm 40 Hình 3.12 Hình vi thể ống mật, khoảng cửa gan lô thử nghiệm 40 SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết cao Sầu đâu 22 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, việc sản xuất thuốc từ dược liệu thiên nhiên phát triển ngày mạnh mẽ nước ta nước với nguồn tài nguyên thực vật phong phú, với nhu cầu sử dụng thuốc có nguồn gốc thiên nhiên ngày gia tăng nhằm hạn chế tác dụng phụ điều trị lâu dài Các loài thực vật tập trung nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng dược lý để cân nhắc sử dụng chúng làm dược liệu với mục đích y tế Sầu đâu (Azadirachta indica A Juss) trồng chủ yếu Ấn Độ, từ xa xưa biết đến với tác dụng: kháng khuẩn, kháng virus, điều trị bệnh lây truyền qua đường tình dục, kháng viêm, chống oxy hóa, hoạt tính chống ung thư, chữa trị bệnh da: mụn trứng cá, bệnh vẩy nến, eczema; dầu Sầu đâu sử dụng thành phần tuyệt vời mỹ phẩm giúp làm sáng, làm đẹp làm trẻ hóa da, ngồi cịn có tác dụng điều trị rối loạn tiêu hóa Đặc biệt, giới có nghiên cứu tác dụng tiềm cao chiết Sầu đâu việc quản lý bệnh đái tháo đường typ nghiên cứu khả tái tạo tế bào beta chuột đái tháo đường McCalla cộng vào năm 2015; nghiên cứu phương pháp phân tử để xác định khả chống đái tháo đường Satyanarayana cộng vào năm 2015 [19], [26] Ở nước ta, Sầu đâu (Azadirachta indica A Juss) loại hoang dã mọc nhiều vùng An Giang số tỉnh khu vực Nam Bộ, dân gian biết đến với tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, chữa lành vết thương, vết loét, hạ đường huyết Tuy nhiên có nghiên cứu thành phần, tác dụng dược lý mức độ an toàn sử dụng loài Xuất phát từ thực tế trên, với mong muốn đưa chứng khoa học cho việc sử dụng hiệu quả, an toàn khai thác tiềm từ cao chiết Sầu đâu, chúng tơi tiến hành nghiên cứu: “Đánh giá độc tính bán trƣờng diễn cao chiết từ Sầu đâu ăn (Azadirachta indica Jus F.) trồng An Giang” Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Nghiên cứu tiến hành với mục tiêu cụ thể Xác định độc tính bán trường diễn cao chiết từ Sầu đâu số huyết học hóa sinh Khảo sát độc tính bán trường diễn cao chiết Sầu đâu mô học chuột nhắt trắng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 39 3.4.2 Vi thể gan, thận A B C D Hình 3.9 Hình vi thể cầu thận lơ thử nghiệm A B C D Hình 3.10 Hình vi thể ống thận lô thử nghiệm A Lô chứng nước B Lô chứng tween C Lô thử 200mg Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn D Lô thử 600mg C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 40 A B C D Hình 3.11 Hình vi thể đơn vị tiểu thùy gan lô thử nghiệm A B C D Hình 3.12 Hình vi thể ống mật, khoảng cửa gan lô thử nghiệm A Lô chứng nước B Lô chứng tween C Lô thử 200mg Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn D Lô thử 600mg C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 41 Nhận xét Quan sát vi thể thận lô sau 30 ngày thử nghiệm: cầu thận, ống thận bình thường, khơng có tượng viêm, xơ Cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi mơ học thận nhóm thử so với nhóm chứng Quan sát vi thể gan lô sau 30 ngày thử nghiệm: tế bào đơn vị tiểu thùy gan, ống mật gan khoảng cửa bình thường, tế bào gan xếp thành bè ly tâm, có nhân bào tương rõ ràng, khơng phát dấu hiệu viêm, xơ hay hoại tử tế bào gan Cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi mơ học gan nhóm thử so với nhóm chứng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 42 Chƣơng BÀN LUẬN Để thiết lập mức liều cho thử nghiệm độc tính bán trường diễn, chúng tơi khảo sát liều thấp (liều đủ để cao chiết Sầu đâu có tác dụng dược lý) Theo nghiên cứu Nguyễn Thanh Luân (2017), cao chiết ethanol 96% liều 200mg/Kg có khả gây hạ đường huyết mơ hình chuột gây đái tháo đường typ [5] Mức liều thứ thường chọn gấp lần liều thấp có tác dụng dược lý [3] Vì chúng tơi chọn mức liều 200mg/Kg 600mg/Kg Cao chiết ethanol 96% Sầu đâu hòa tan tween 80 5% cho chuột uống với thể tích 0,1ml/10g thể trọng Song song thử nghiệm mức liều trên, tiến hành lô chứng nước lô chứng dung dịch tween 80 5%, cho chuột uống thể tích với lơ thử 4.1 Ảnh hƣởng cao chiết Sầu đâu thể trạng chung 4.1.1 Ảnh hƣởng trọng lƣợng chuột Chuột nhắt trắng Viện vắc xin sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp có trọng lượng 18-24 g, đạt 5-6 tuần tuổi, sau ni ổn định tuần phịng thí nghiệm Bộ môn Dược Lý, trước bắt đầu thử nghiệm, trọng lượng chuột tăng lên đạt 22-27g Chuột giai đoạn tăng trưởng, phát triển trọng lượng chuột ngày tăng Kết thử nghiệm cho thấy trọng lượng chuột lô thử nghiệm tăng sau 30 ngày, lô uống cao liều 200, 600 mg/Kg tăng lơ chứng, cao chiết Sầu đâu hòa tan dung dịch tween 80 5% liều 200, 600 mg/Kg tạo thành hỗn dịch mịn, lần uống 0,1 ml/10g thể trọng, chuột uống cao Sầu đâu no lâu hơn, mức tiêu thụ thức ăn lơ chứng Tuy nhiên khác biệt lơ khơng có ý nghĩa thống kê Cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi thể trọng chuột lô thử lơ chứng 4.1.2 Ảnh hƣởng hoạt tính vận động tự nhiên Nhằm đánh giá cao chiết Sầu đâu có gây ảnh hưởng đến vận động tự nhiên chuột hay không, tiến hành thử nghiệm mơ hình mơi trường mở Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 43 Thử nghiệm tiến hành thời điểm: trước cho chuột uống cao, sau uống 10 ngày, sau 20 ngày kết thúc nghiên cứu Trước mơi trường mới, chuột có xu hướng tìm kiếm, khám phá, thể thông qua số ô chuột di chuyển vào chân hay số lần chuột đứng chân sau Một thuốc gây ảnh hưởng đến vận động tự nhiên có xu hướng làm chuột thu nhỏ lại, giảm di chuyển, lại Kết thử nghiệm cho thấy sau 10 ngày chuột uống cao chiết Sầu đâu liều 200, 600mg/Kg, hoạt tính vận động tự nhiên giảm Sau 20 ngày, 30 ngày tiếp tục giảm, mức độ giảm vận động nhiều thời điểm sau 10 ngày Song song quan sát lơ chứng nước lơ chứng tween 80 5% thấy có giảm vận động, lơ khác biệt nêu khơng có ý nghĩa thống kê Giải thích cho giảm vận động tự nhiên lô, chuột đưa vào mơ hình mơi trường mở lần thứ hai, thứ ba, thứ tư làm chuột trở nên quen thuộc với mơ hình chuột khám phá, tìm kiếm giai đoạn đầu tiếp xúc Cao chiết Sầu đâu khơng làm thay đổi hoạt tính vận động tự nhiên chuột lô thử lô chứng 4.2 Ảnh hƣởng cao chiết Sầu đâu số huyết học Một thuốc có tác động đến quan tạo máu làm thay đổi số lượng chất lượng tế bào máu hồng cầu, bạch cầu tiểu cầu [3] Vì để khảo sát ảnh hưởng cao chiết Sầu đâu quan tạo máu, tiến hành xác định số: số lượng hồng cầu, Hemoglobin, Hematocrit, số lượng bạch cầu, tiểu cầu sau 30 ngày thử nghiệm độc tính bán trường diễn Kết nghiên cứu cho thấy số lượng hồng cầu, Hemoglobin, Hematocrit lô khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi số hồng cầu lô thử lô chứng Bạch cầu lưu thông máu để tham gia bảo vệ thể, bạch cầu thường tăng bệnh nhiễm khuẩn, giảm bị nhiễm độc, suy tủy [6], [8], [9] Số lượng bạch cầu thường quan tâm để đánh giá độc tính bán trường diễn thuốc quan tạo máu [3] Kết xét nghiệm cho thấy tổng số lượng bạch cầu lô thử cao Sầu đâu thấp lô chứng nước, khác Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 44 biệt lơ thử lơ chứng khơng có ý nghĩa thống kê Số lượng thành phần bạch cầu LYM, EOS, BASO không khác biệt lô thử cao lô chứng Tuy nhiên số lượng bạch cầu NEU lô uống cao liều 200mg/Kg, 600mg/Kg lô chứng uống tween tăng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng nước Việc tăng bạch cầu NEU lô chưa xác định cao Sầu đâu gây tăng bạch cầu NEU chuột, lô chứng uống tween đồng thời có số bạch cầu NEU tăng, kết phụ thuộc vào bảo quản mẫu máu, cần tiếp tục theo dõi số lượng thành phần bạch cầu thời điểm sau 60 ngày Sau 30 ngày khảo sát, số lượng bạch cầu MONO lô uống cao liều 200, 600mg/Kg không khác biệt so với lô chứng nước, cao Sầu đâu không ảnh hưởng đến bạch cầu MONO Theo kết quả, số lượng bạch cầu MONO lơ chứng tween giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng nước, nhiên kết phụ thuộc vào thao tác lấy mẫu, bảo quản mẫu Cần tiếp tục theo dõi số lượng thành phần bạch cầu thời điểm sau 60 ngày Một thành phần giữ vai trò quan trọng q trình đơng máu tiểu cầu Một thuốc sử dụng gây ảnh hưởng tiểu cầu, làm suy giảm tiểu cầu (số lượng chất lượng) gây bệnh chảy máu [6], [8] Sau 30 ngày khảo sát độc tính bán trường diễn, số lượng tiểu cầu lô thử lô chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Cao Sầu đâu không làm thay đổi số tiểu cầu lô thử lô chứng 4.3 Ảnh hƣởng cao chiết Sầu đâu số hóa sinh 4.3.1 Ảnh hƣởng số AST, ALT Gan nơi chuyển hóa nhiều loại thuốc, chức gan tốt chuyển hóa thuốc thành dẫn chất mong muốn, mặt khác thuốc sử dụng có tác dụng độc với gan [12] Gan thực chức chuyển hóa thơng qua hệ thống enzym, tế bào gan bị tổn thương dẫn đến giải phóng enzym vào máu, làm tăng nồng độ enzym máu AST ALT enzym có giá trị quan trọng chẩn đoán [3], [10] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 45 ALT enzym có bào tương tế bào gan, tế bào gan tổn thương, bị hủy hoại màng tế bào ALT máu tăng sớm AST (1 enzym có ty thể) Kết thử nghiệm cho thấy ALT lô uống cao liều 200, 600 mg/Kg không tăng so với lô chứng, giá trị có thấp lơ chứng nước, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết nghiên cứu cho thấy AST lô thử cao Sầu đâu không tăng so với lô chứng, giá trị AST lô không nhau, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi giá trị AST, ALT lô thử lô chứng Tuy nhiên để đánh giá chức gan tổn thương cấu trúc, cần phối hợp quan sát đại thể, vi thể gan nhằm tăng tính xác 4.3.2 Ảnh hƣởng số Creatinin huyết thanh, urea máu Thận quan giúp đào thải thuốc sau thuốc phát huy tác dụng Các thuốc thải chủ yếu qua thận dạng nguyên vẹn dạng chuyển hóa cịn hoạt tính trực tiếp ảnh hưởng lên cấu trúc chức đào thải thận Thông thường xét nghiệm định lượng creatinin huyết urea máu sử dụng để đánh giá ảnh hưởng thuốc sử dụng lên chức thận Nồng độ creatinin huyết urea máu tăng thận tiết giảm chứng tỏ thận đào thải tốt [9], [15] Creatinin thành phần có nitrogen máu ổn định nhất, khơng phụ thuộc vào chế độ ăn hay thay đổi sinh lý khác mà phụ thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin huyết tăng sớm urea máu Theo kết nghiên cứu, creatinin huyết lô uống cao Sầu đâu cao lô chứng uống nước, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê lô Cao Sầu đâu không làm thay đổi số creatinin huyết lô thử so với lô chứng Gan quan tổng hợp urea từ NH3, urea đào thải đường tiểu Định lượng urea máu góp phần đánh giá ảnh hưởng thuốc lên chức thận Kết nghiên cứu cho thấy lô chứng tween, lô uống Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 46 cao liều 200mg, 600 mg có giá trị urea máu cao lô chứng nước Tuy nhiên khác biệt giá trị urea máu lơ khơng có ý nghĩa thống kê Cao Sầu đâu không làm thay đổi số urea máu lô Để đánh giá chức năng, cấu trúc thận xác hơn, cần phối hợp quan sát đại thể, vi thể thận 4.3.3 Ảnh hƣởng số glucose huyết Để khảo sát độc tính bán trường diễn thuốc, số glucose huyết thường đánh giá Đặc biệt nghiên cứu, cao Sầu đâu cho có khả giảm đường huyết mơ hình chuột gây đái tháo đường typ [37] Do chúng tơi tiến hành định lượng glucose huyết sau 30 ngày sử dụng cao Sầu đâu nhằm khảo sát ảnh hưởng cao glucose huyết chuột bình thường Sau 30 ngày khảo sát, glucose huyết lơ dùng cao Sầu đâu có giảm so với lô chứng nước lô chứng tween, lô liều 600mg/Kg giảm nhiều lô 200mg/Kg Tuy nhiên khác biệt nêu lơ khơng có ý nghĩa thống kê Cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi số glucose huyết lô 4.4 Ảnh hƣởng cao chiết Sầu đâu mô học Ưu tiên quan sát đại thể quan gan, thận Đây hai quan quan trọng liên quan đến trình chuyển hóa đào thải thuốc, chịu ảnh hưởng trực tiếp thuốc sản phẩm chuyển hóa thuốc 4.4.1 Ảnh hƣởng mô học thận Quan sát đại thể thận lô cho thấy khác màu sắc, hình dạng: thận mềm, màu đỏ thẫm, khơng có tượng xung huyết Đôi tổn thương cấu trúc bên thận mà mắt thường ta khơng nhìn thấy tính xác số đánh giá chức thận creatinin huyết thanh, urea máu phụ thuộc vào nhiều yếu tố xét nghiệm không giúp nhiều việc phát sớm tổn thương thận cầu thận lành phì hoạt động bù, phải 50-70 % diện tích lọc cầu thận làm giảm độ thải creatinin gây tăng creatinin huyết [4] Do để góp phần đánh giá chức thận, cần phối hợp quan sát vi thể thận Kết nghiên cứu cho thấy lô thử lô chứng, cấu trúc ống thận, cầu thận bình thường, khơng có Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 47 tượng viêm, xơ Cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi cấu trúc chức thận lô 4.4.2 Ảnh hƣởng mơ học gan Hình ảnh đại thể gan lơ bình thường, gan khơng có tượng xung huyết, bề mặt gan nhẵn bóng, sờ mềm Trọng lượng gan tương đối lô tương đối nhau, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Xét nghiệm số AST, ALT có giá trị chẩn đốn bệnh gan, ALT dấu đặc hiệu cho tổn thương gan [7] Tuy nhiên tính xác xét nghiệm cịn phụ thuộc vào nhiều yếu tố: hoạt độ AST ALT hồng cầu > 4-8 lần huyết [17], để xảy tượng tán huyết lấy máu dẫn đến làm tăng AST, ALT huyết gây sai lệch chẩn đoán tổn thương nhẹ gan chưa dẫn đến thay đổi tính thấm màng hay hủy hoại màng tế bào gan, chưa phóng thích AST, ALT vào máu, số xét nghiệm AST, ALT lúc chưa tăng cao để chẩn đốn, đồng thời hoại tử tế bào gan khơng thiết gây giải phóng aminotransferase mức độ tăng aminotransferase khơng tương ứng với độ nặng tổn thương gan [7] Do việc kết hợp quan sát vi thể góp phần tăng tính xác việc đánh giá ảnh hưởng thuốc cấu trúc, chức gan Kết quan sát vi thể gan lơ kính hiển vi quang học với độ phóng đại 400 lần thấy đơn vị tiểu thùy, ống mật, khoảng cửa gan bình thường, khơng có tổn thương Cao chiết Sầu đâu không làm thay đổi cấu trúc chức gan lô Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 48 KẾT LUẬN Khảo sát độc tính bán trường diễn cao chiết ethanol 96% từ Sầu đâu liều 200mg/Kg, 600mg/Kg sau 30 ngày chuột nhắt trắng, thu kết sau - Cao chiết từ Sầu đâu ăn không làm thay đổi thể trạng chung chuột (thể trọng, hoạt tính vận động tự nhiên) nhóm thử nhóm chứng - Cao chiết từ Sầu đâu ăn không làm thay đổi số huyết học (hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu), không làm thay đổi số sinh hóa (AST, ALT, creatinin huyết thanh, urea máu, glucose huyết) nhóm thử nhóm chứng - Cao chiết từ Sầu đâu ăn không làm thay đổi mô học gan, thận (quan sát đại thể, vi thể) nhóm thử nhóm chứng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 49 KIẾN NGHỊ Nếu tiếp tục thực đề tài, chúng tơi có kiến nghị sau Khảo sát tiếp tục độc tính bán trường diễn cao chiết từ Sầu đâu thời điểm 60 ngày, 90 ngày Khảo sát độc tính bán trường diễn cao chiết từ Sầu đâu dung môi chiết khác Nghiên cứu độc tính cao chiết từ Sầu đâu liều điều trị dùng dài ngày mơ hình chuột nhắt trắng gây đái tháo đường typ Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ Y Tế (2015), Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu, số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27/10/2015 Võ Văn Chi (1996) , 200 thuốc thông dụng, NXB tổng hợp Đồng Tháp, tr 265-267 Đỗ Trung Đàm (2014), Phương pháp xác định độc tính thuốc, NXB Y học, Hà Nội Phạm Thị Minh Đức (2011), Sinh lý học, Nhà xuất y học Hà Nội, tr 265-283 Nguyễn Thanh Luân (2017), Khảo sát tác dụng hạ đường huyết cao chiết Sầu đâu (Azadirachta sp.) mơ hình thực nghiệm in vitro chuột nhắt trắng, Luận văn tốt nghiệp Dược sĩ đại học, Trường Đại Học Y Dược Cần Thơ Phạm Đình Lựu (2012), Sinh lý học y khoa, Nhà xuất Y học, tập I, tr 64-70, 76-88, 230 Trần Văn Ngọc, Nguyễn Thị Lệ (2016), Sinh lý học y khoa, Nhà xuất y học, tr 285 Nguyễn Xuân Thắng (2005), Hóa sinh học, Nhà xuất y học Hà Nội, tr.501, 507, 508, 533 Trần Thiện Trung (2012), Giải phẫu sinh lý, Nhà xuất Y học, TP Hồ Chí Minh, tr 130-133 10 Lê Xuân Trường ( 2015 ), Hóa sinh lâm sàng, Nhà xuất Y học TP Hồ Chí Minh, tr.79,80,114,115,121 11 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, 2, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 1116-1117 12 Viện Dược liệu (2006), Nghiên cứu phát triển dược liệu đông dược Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 382 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Tài liệu tiếng Anh 13 Aladakatti, R.H., Ahamed, R.N., Ahmed, M., Ghosesawar, M.G (2001), “Sperm parameters changes induced byAzadirachta indicain albino rats”, Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology, 12, pp.69-76 14 Alzohairy, M A ( 2016), “Therapeutics role of Azadirachta indica ( Neem ) and their active constituents in diseases prevention and treatment”, Evidence – Based Complementary and Alternative Medicine, pp.1-11 15 Arthur C., Guyton, M.D (2006), Textbook of Medical Physiology, International Edition, pp 412, 419 16 Awasthy, K.S (2001), Cytobios, 106, pp 151–164 17 Biswas, K., Chattopadhyay, I., Banerjee, R., Bandyopadhyay, U (2002), “Biological activities and medicinal properties of neem (Azadirachta indica)”, Current Science, 82(11), pp.1336-1345 18 Chaube, S.K., Shrivastav, T.G., Tiwari, M., Prasad, S., Tripathi, A Pandey, A.K (2014), “Neem (Azadirachta indica L.) leaf extract deteriorates oocyte quality by inducing ROS-mediated apoptosis in mammals”, SpringerPlus, 3, pp.464 19 Gupta, S.C., Prasad, S., Tyagi, A.K., Kunnumakkara, A.B., Aggarwal, B.B (2017), “Neem (Azadirachta indica): An indian traditional panacea with modern molecular basis”, Phytomedicine, 34, pp.14-20 20 Harjai, K., Bala, A., Gupta, R.K., et al (2013), “Leaf extract of Azadirachta Indica (neem): a potential antibiofilm agent for Pseudomonas aeruginosa”, Pathogens Dis, 69, pp.62-65 21 Hashmat, I., Azad, H Ahmed, A (2012), “Neem (Azadirachta indica A Juss) - A Nature's Drugstore: An overview”, International Research Journal of Biological Sciences, 1(6), pp.76-79 22 Kasutri, M., Ahmed, R N., Pathan, K M., Shaikh, P D Manivannan, B (1997), “Effects of Azadirachta indica leaves on the seminal vesicles and ventral prostate in albino rats”, Indian J Physiol Pharmacol, 41, pp.234-240 23 Khosla, P., Bhanwra, S., Singh, J., et al (2000), “A study of hypoglycaemic Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an effects of Azadirachta indica (neem) in normal and alloxan diabetic rabbits”, Ind J Physiol Pharmacol, 44(1), pp.69-74 24 Kumar, D., Rahal, A Malik, J.K (2016), “Neem Extract”, Nutraceuticals, 43, pp.585-597 25 Kumar, V.S., Navaratnam , V (2013), “Neem (Azadirachta indica): Prehistory to contemporary medicinal uses to humankind”, Asian Pac J Trop Biomed, 3(7), pp.505-514 26 McCalla, G., Parshad, O., Brown, P.D., Gardner, M.T (2015), “Beta Cell Regenerating Potential of Azadirachta indica (Neem) Extract in Diabetic Rats”, The West Indian medical journal, 65(1), pp.13-17 27 More, YW., Raut, RR., Taware, AS (2015), “Review on biological activities of Azadirachta indica (Neem) and its medicinal uses”, International Journal of Informative Futuristic Research, 2(5), pp.1327-1334 28 Mukherjee, A., Sengupta, S (2013), “Characterization of nimbidiol as a potent intestinal disaccharidase and glucoamylase inhibitor present in Azadirachta indica (neem) useful for the treatment of diabetes”, Journal of enzyme inhibition and medicinal chemistry, 28(5), pp.900-910 29 Nargund, R.R., Kulkarni, V.H., Habbu, P.V., Smita, D.M (2017), “Antidiabetic Potential of Ethnomedicinal Plants of Western Ghats, India: A Review”, International Journal for Pharmaceutical Research Scholars (IJPRS), 6(2), pp.189208 30 Ogbuewu, I.P., Unamba-Oparah, I.C., Odoemenam, V.U., Etuk, I.F., Okoli, I.C (2011), “The potentiality of medicinal plants as the source of new contraceptive principles in males”, North Am J Med Sci, 3, pp.255-263 31 Panda, S., Kar, A (2000), “How safe is neem extract with respect to thyroid function in male mice?” Pharmacol Res, 41, pp.419-422 32 Pankaj, S., Lokeshwar, T., Mukesh, B., Vishnu, B (2011), “Review on neem (Azadirachta indica): thousand problems one solution”, Int Res J Pharm, 2(12), pp.97-102 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn