(Luận văn) đánh giá độc tính bán trường diễn và tác dụng bảo vệ tế bào gan của viên nang cthepab trên thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM lu an va n TRẦN THỊ MỸ LINH p ie gh tn to nl w ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN VÀ d oa TÁC DỤNG BẢO VỆ TẾ BÀO GAN CỦA VIÊN NANG nf va an lu CTHEPAB TRÊN THỰC NGHIỆM z at nh oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC z m co l gm @ an Lu HÀ NỘI- 2020 n va ac th si -1- BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM lu an TRẦN THỊ MỸ LINH n va gh tn to ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN VÀ p ie TÁC DỤNG BẢO VỆ TẾ BÀO GAN CỦA VIÊN NANG d oa nl w CTHEPAB TRÊN THỰC NGHIỆM nf va an lu Chuyên ngành : Y học cổ truyền Mã số : 8720115 lm ul z at nh oi LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC z Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Lê Thị Tuyết TS Nguyễn Thị Minh Thu m co l gm @ an Lu HÀ NỘI - 2020 n va ac th si -2- LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận văn này, với tất lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn đến Đảng ủy, Ban Giám đốc, Phòng đào tạo Sau Đại học, Bộ mơn, Khoa phịng Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, nơi trực tiếp đào tạo tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Lê Thị Tuyết, TS Nguyễn Thị Minh Thu Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, lu người thầy hướng dẫn trực sát, thường xuyên giúp đỡ, cho an nhiều ý kiến quý báu, sát thực trình học tập, nghiên cứu để hoàn va n thành luận văn to gh tn Tôi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám hiệu Trường Học Viện ie Quân Y quan tâm, tạo điều kiện tốt cho việc nghiên cứu, thu p thập, hoàn thiện số liệu để hồn thành đề tài nl w Tơi xin gửi lời cảm ơn đến Thầy, Cô Hội đồng thông an lu thiện luận văn d oa qua đề cương luận văn cho nhiều ý kiến q báu q trình hồn nf va Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy, Cô, bác sỹ, kỹ thuật viên lm ul Bộ môn Dược lý, trường Học Viện Quân Y tạo điều kiện thuận lợi z at nh oi cho tơi q trình học tập, nghiên cứu làm việc Bộ môn Tôi vô biết ơn gia đình, bạn bè, anh chị em đồng nghiệp tập thể học viên lớp cao học khóa 2017-2020 chuyên ngành Y học cổ truyền động viên, z giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn l gm @ Xin trân trọng cảm ơn! m co Học viên an Lu Trần Thị Mỹ Linh n va ac th si -3- LỜI CAM ĐOAN Tôi Trần Thị Mỹ Linh, Học viên Cao học khóa 10 chuyên ngành Y học cổ truyền Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn khoa học Cô PGS.TS Lê Thị Tuyết, TS Nguyễn Thị Minh Thu Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam lu Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung an thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên va n cứu ie gh tn to Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết p Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2020 d oa nl w Ngƣời viết cam đoan an lu nf va Trần Thị Mỹ Linh z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si -4- MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan bệnh lý gây hủy hoại tế bào gan 1.1.1 Tổng quan bệnh Viêm gan B 1.1.2 Tồng quan viêm gan rượu 1.1.3 Tổng quan tổn thương gan thuốc 11 lu 1.1.4 Viêm gan theo y học cổ truyền 13 an 1.2 Tổng quan phương pháp nghiên cứu độc tính bán trường diễn va n phương pháp thử nghiệm bảo vệ tế bào gan 15 to 1.2.2 Tổng quan thử nghiệm độc tính bán trường diễn .16 ie gh tn 1.2.1 Tổng quan thuốc y học cổ truyền .15 p 1.2.3 Tổng quan phương pháp thử nghiệm bảo vệ tế bào gan 18 nl w 1.3 Tổng quan viên nang cứng CTHepaB 19 d oa 1.3.1 Xuất xứ 19 an lu 1.3.2 Đặc điểm bào chế viên nang cứng CTHepaB 19 nf va 1.3.3 Cơ sở xây dựng thuốc 22 lm ul 1.4 Tình hình nghiên cứu thuốc điều trị vị thuốc điều trị viêm z at nh oi gan B 22 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới thuốc điều trị viêm gan B 22 z 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nước vị thuốc thuốc gm @ CTHepaB 25 l co Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 m 2.1 Chất liệu nghiên cứu 26 an Lu 2.1.1 Chế phẩm làm nghiên cứu 26 n va ac th si -5- 2.1.2 Thiết bị máy móc hóa chất 27 2.2 Đối tượng 27 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu .28 2.3 Địa điểm nghiên cứu 28 2.4 Thời gian nghiên cứu 28 2.5 Phương pháp nghiên cứu 28 2.5.1 Thiết kế nghiên cứu 28 lu 2.5.2 Cỡ mẫu cách chọn mẫu 29 an 2.5.3 Phương pháp nghiên cứu 29 va n 2.6 Các biến số số nghiên cứu 31 to 2.6.2 Các biến số số nghiên cứu tác dụng bảo vệ tế bào gan .32 ie gh tn 2.6.1 Các biến số số nghiên cứu độc tính bán trường diễn 31 p 2.7 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 33 nl w 2.8 Sai số cách khống chế sai số 33 d oa 2.9 Đạo đức nghiên cứu 34 an lu Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 nf va 3.1 Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn viên nang CTHepaB 35 lm ul 3.1.1 Ảnh hưởng viên nang CTHepaB lên tình trạng chung thay z at nh oi đổi khối lượng chuột cống trắng dùng dài ngày 35 3.1.2 Ảnh hưởng CTHepaB lên điện tim chuột đạo trình DII 36 3.1.3 Ảnh hưởng CTHepaB đến số tiêu huyết học chuột 37 z 3.1.4 Ảnh hưởng CTHepaB lên chức gan, thận chuột thực nghiệm 41 @ l gm 3.1.5 Đại thể mô bệnh học gan, thận lách chuột thí nghiệm 46 co 3.2 Kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan, chống oxy hóa viên nang m cứng mơ hình thực nghiệm 50 an Lu n va ac th si -6- 3.2.1 Ảnh hưởng CTHepaB khối lượng gan tương đối chuột nhắt trắng .50 3.2.2 Ảnh hưởng CTHepaB lên hoạt độ AST, ALT huyết chuột 51 3.2.3 Ảnh hưởng CTHepaB lên hàm lượng MDA gan chuột nhắt trắng 52 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 55 4.1 Về độc tính bán trường diễn viên nang CTHepaB 56 lu 4.1.1 Đối với thể trọng chuột 57 an 4.1.2 Đối với điện tim chuột đạo trình DII 57 va n 4.1.3 Chức tạo máu 58 to 4.1.5 Tổn thương đại thể quan 62 ie gh tn 4.1.4 Chức gan, thận .60 p 4.1.6 Tổn thương vi thể quan 63 nl w 4.2 Tác dụng bảo vệ tế bào gan viên nang cứng CTHepaB thực d oa nghiệm 63 an lu KẾT LUẬN 68 nf va KIẾN NGHỊ 69 z at nh oi PHỤ LỤC lm ul TÀI LIỆU THAM KHẢO z m co l gm @ an Lu n va ac th si -7- DANH MỤC VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Việt Tiếng Anh ALT Chỉ số enzyme gan Alanin Amino Transferase AST Chỉ số enzyme gan Aspartat Amino Transferase ĐVTN Động vật thí nghiệm HBV Virus viêm gan B Virus Hepatitis B HE×400 Nhuộm Hematoxylin - Eosin, Hematoxylin - Eosin lu độ phóng đại 400 lần an Hội nghị quốc tế hài hịa hóa International Conference va ICH n thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng onHarmonization to gh tn cho người p ie MDA Sản phẩm q trình peroxy hóa Malondialdehyde Trung bình oa nl TB w lipid màng tế bào Tổ chức y tế giới YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại World Health Organization d WHO nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si -8- DANH MỤC BẢNG lu an n va Ảnh hưởng CTHepaB khối lượng thể chuột 35 Bảng 3.2 Ảnh hưởng đến điện tim chuột 36 Bảng 3.3 Số lượng hồng cầu lô chuột nghiên cứu 37 Bảng 3.4 Hàm lượng huyết sắc tố lô chuột nghiên cứu 38 Bảng 3.5 Chỉ số hematocrit lô chuột nghiên cứu 38 Bảng 3.6 Chỉ số thể tích trung bình hồng cầu lô chuột NC 39 Bảng 3.7 Số lượng bạch cầu lô chuột nghiên cứu 40 Bảng 3.8 Số lượng tiểu cầu lô chuột nghiên cứu 40 Bảng 3.9 Nồng độ enzym AST, ALT lô chuột 41 Bảng 3.10 Nồng độ bilirubin toàn phần lô chuột 42 tn to Bảng 3.1 gh Bảng 3.11 Ảnh hưởng viên nang CTHepaB lên số albumin p ie huyết tương máu 43 Ảnh hưởng viên nang CTHepaB lên số creatinin máu chuột 44 Ảnh hưởng viên nang CTHepaB lên nồng độ cholesterol d Bảng 3.13 oa nl w Bảng 3.12 lu Bảng 3.14 nf va an toàn phần máu chuột sau 45 Ảnh hưởng viên nang CTHepaB lên trọng lượng tương đối Ảnh hưởng CTHepaB lên hoạt độ AST, ALT huyết z at nh oi Bảng 3.15 lm ul gan 50 nhóm chuột nghiên cứu 51 Bảng 3.16 Ảnh hưởng CTHepaB đến hàm lượng MDA gan chuột z Tóm tắt nhận xét đại thể gan nhóm chuột đánh giá l Bảng 3.17 gm @ gây độc 52 Tóm tắt nhận xét vi thể gan nhóm chuột đánh giá tác an Lu Bảng 3.18 m co tác dụng bảo vệ gan viên nang cứng CTHepaB 53 dụng bảo vệ gan viên nang cứng CTHepaB 54 n va ac th si -9- DANH MỤC HÌNH VẼ lu an n va Hình ảnh vị thuốc thuốc chế phẩm CTHepaB 21 Hình 3.1 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lơ chứng 46 Hình 3.2 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị 46 Hình 3.3 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị 46 Hình 3.4 Hình ảnh vi thể gan chuột lơ chứng 47 Hình 3.5 Hình ảnh vi thể gan chuột lô trị 47 Hình 3.6 Hình ảnh vi thể gan chuột lô trị 47 Hình 3.7 Hình ảnh vi thể lách chuột lơ chứng 48 Hình 3.8 Hình ảnh vi thể lách chuột lơ trị 48 Hình 3.9 Hình ảnh vi thể lách chuột lô trị 48 tn to Hình 1.1 ie gh Hình 3.10 Hình ảnh vi thể thận chuột lơ chứng 49 p Hình 3.11 Hình ảnh vi thể thận chuột lơ trị 49 nl w Hình 3.12 Hình ảnh vi thể thận chuột lơ trị 49 d oa Hình 3.13 Lơ chứng, chuột 05 53 an lu Hình 3.14 Lơ mơ hình,chuột 12 53 nf va Hình 3.15 Lơ tham chiếu, chuột 26 53 lm ul Hình 3.16 Lơ trị 1, chuột 34 53 Hình 3.17 Lơ trị 2, chuột 42 53 z at nh oi Hình 3.18 Lơ chứng, chuột 54 Hình 3.19 Lơ mơ hình, chuột 14 54 z Hình 3.20 Lơ Silymarin, chuột 27 54 @ l gm Hình 3.21 Lơ trị chuột 36 54 Hình 3.22 Lơ trị 2, chuột 45, 54 m co an Lu n va ac th si 63 CTHepaB không khác so với chứng: có màu nâu đỏ thẫm đồng đều, bề mặt nhẵn, khơng có u cục xuất huyết, có đàn hồi ấn xuống khơng khác biệt so với hình ảnh gan, lách, thận chuột lơ chứng Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột đại diện cho lô chuột nghiên cứu trình bày ảnh 3.1, 3.2 3.3 Kết mô bệnh học tạng (gan, lách, thận): Kết nghiên cứu mô bệnh học gan, lách, thận chuột cho thấy viên nang CTHepaB dùng đường uống với liều 0,94g viên nang/kg/ngày liều 4,70g viên nang/kg/ngày liên tục 90 ngày, không gây tổn thương lu an gan, thận, lách chuột Hình ảnh vi thể gan, lách, thận chuột đại n va diện cho lơ chuột nghiên cứu trình bày ảnh lô trị (ảnh 3.5) lô tn to trị (ảnh 3.6) lô chứng (ảnh 3.4) Trên hình ảnh khơng thấy xuất huyết ie gh ổ hoại tử, thối hóa tế bào gan p 4.1.6 Tổn thương vi thể quan w Hình ảnh vi thể lách kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần oa nl chuột lô trị (ảnh 3.8) lô trị (ảnh 3.9), lô cho uống viên nang d CTHepaB, không khác biệt so với hình ảnh vi thể lách chuột lô chứng (ảnh lu nf va an 3.7) Trên hình ảnh thấy vùng tủy trắng bắt màu xanh thậm, tập trung nang lympho lớn Vùng tủy đỏ có màu xanh đỏ, với xoang nang chứa lm ul nhiều hồng cầu số đại thức bào không thấy xuất huyết hoại tử z at nh oi Hình ảnh vi thể thận kính hiển vi với độ khuyếch đại 400 lần chuột lô trị (ảnh 3.11) lô trị (ảnh 3.12), lô cho uống viên nang CTHepaB, không khác biệt so với hình ảnh vi thể thận chuột lô chứng (ảnh z gm @ 3.10) Cấu trúc vùng chức thận bình thường 4.2 Tác dụng bảo vệ tế bào gan viên nang cứng CTHepaB thực co l nghiệm m Enzym AST ALT máu chuột AST (hay gọi SGOT), ALT an Lu (hay gọi SGPT) hai men gan đặc trưng cho gan Khi có nhiều tế n va ac th si 64 bào gan bị tổn thương, hoại tử, hai men “giải thốt” ạt phóng thích vào máu Kết nghiên cứu bảng 3.15 cho thấy AST ALT máu chuột lơ mơ hình tăng so với lơ chứng (80,20 UI/l 98,50 UI/l so với 42,60 UI/l 54,90 UI/l), thể hủy hoại tế bào gan Ở lô trị (chuột gây độc uống viên nang CTHepaB) cho thấy giảm rõ rệt hoạt dộ enzyme AST ALT so với lô mô hình (p