(Luận văn) nghiên cứu chiết xuất, bào chế và đánh giá độc tính cấp của viên nang cthepab

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM lu an TRẦN DIỆU LINH n va gh tn to p ie NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, BÀO CHẾ d oa nl w VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA nf va an lu VIÊN NANG CTHEPAB z at nh oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SỸ z m co l gm @ an Lu HÀ NỘI, NĂM 2020 n va ac th si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM TRẦN DIỆU LINH lu an n va p ie gh tn to NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA VIÊN NANG CTHEPAB nl w d oa Chuyên ngành : Y học cổ truyền nf va an lu Mã số : 8720115 z at nh oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SỸ Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: z PGS TS Đậu Xuân Cảnh @ m co l gm PGS TS Lê Thị Tuyết an Lu HÀ NỘI - 2020 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận văn này, với tất lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn đến Đảng ủy, Ban Giám đốc, Phòng đào tạo Sau Đại học, Bộ mơn, Khoa phịng Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, nơi trực tiếp đào tạo tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đậu Xuân Cảnh PGS TS Lê Thị Tuyết, Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, lu người thầy hướng dẫn trực sát, thường xuyên giúp đỡ, cho an va nhiều ý kiến quý báu, sát thực trình học tập, nghiên cứu để hồn n thành luận văn to gh tn Tôi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám hiệu Trường Học Viện p ie Quân Y quan tâm, tạo điều kiện tốt cho tơi việc thu thập, hồn thiện số liệu nghiên cứu để hoàn thành đề tài oa nl w Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Thầy, Cô Hội đồng thông d qua đề cương luận văn cho nhiều ý kiến q báu q trình hồn an lu thiện luận văn nf va Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy, Cô, bác sỹ, kỹ thuật viên lm ul Bộ môn Dược lý, trường Học Viện Quân Y tạo điều kiện thuận lợi z at nh oi cho tơi q trình học tập, nghiên cứu Bộ môn Tôi vô biết ơn gia đình, bạn bè, anh chị em đồng nghiệp tập thể học viên lớp cao học khóa 10 chuyên ngành Y học cổ truyền động viên, z l gm Xin trân trọng cảm ơn! @ giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn m co Học viên an Lu Trần Diệu Linh n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi Trần Diệu Linh, học viên Cao học khóa 10 Học viện Y Dược học Cổ truyền Việt Nam, chuyên ngành Y học cổ truyền, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS.TS Đậu Xn Cảnh PGS.TS Lê Thị Tuyết Cơng trình không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam; Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung lu an thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi n va nghiên cứu gh tn to Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết p ie Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2020 d oa nl w Học viên lu nf va an Trần Diệu Linh z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Dược liệu dùng nghiên cứu 1.1.1 Cà gai leo 1.1.2 Cỏ sữa nhỏ 1.1.3 Chi tử 1.1.4 Đại hoàng 1.1.5 Đinh lăng lu an 1.1.6 Nấm trùng thảo (Đông trùng hạ thảo) 11 va n 1.1.7 Linh chi 13 1.2 Kỹ thuật bào chế bột cao khô định chuẩn 16 ie gh tn to 1.1.8 Hà thủ ô đỏ 14 p 1.2.1 Khái niệm 16 nl w 1.2.2 Kỹ thuật chiết xuất dược liệu 17 d oa 1.2.3 Kỹ thuật phun sấy làm khô dịch chiết dược liệu 21 an lu 1.3 Viên nang cứng 21 nf va 1.3.1 Thành phần viên nang 21 1.3.2 Ưu nhược điểm viên nang cứng 23 lm ul 1.4 Quy trình bào chế viên nang cứng 24 z at nh oi 1.4.1 Quy trình tạo hạt 24 1.4.2 Quy trình đóng hạt vào nang 25 z 1.5.Tổng quan nghiên cứu độc tính cấp 25 @ gm 1.5.1 Nguyên nhân tiến hành thử độc tính 25 co l 1.5.2 Thử nghiệm độc tính cấp 26 m Chƣơng 2: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 an Lu 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị nghiên cứu 29 n va ac th si 2.1.1 Nguyên vật liệu 29 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ 30 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 31 2.3 Phương pháp nghiên cứu 32 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 32 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu 32 2.4 Các biến số, số nghiên cứu 41 2.4.1 Nghiên cứu chiết xuất, bào chế viên nang cứng CTHepaB 41 2.4.2 Nghiên cứu độc tính cấp viên nang CTHepaB 43 lu an 2.5 Phân tích xử lý số liệu 44 n va 2.6 Đạo đức nghiên cứu 44 3.1 Nghiên cứu chiết xuất, bào chế viên nang cứng CTHepaB 45 3.1.1 Kết nghiên cứu quy trình bào chế cao khô CTHepaB xây p ie gh tn to CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 45 w dựng tiêu chuẩn sở cao khô CTHepaB 45 oa nl 3.1.2 Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế viên nang cứng CTHepaB d xây dựng tiêu chuẩn sở viên nang cứng CTHepaB 60 lu nf va an 3.2 Kết nghiên cứu độc tính cấp 74 KẾT LUẬN 77 lm ul TÀI LIỆU THAM KHẢO z at nh oi PHỤ LỤC z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to d oa nl w YHCT : Y học cổ truyền YHHĐ : Y học đại WHO : Tổ chức y tế giới WHO DĐVN V : Dược điển Việt Nam V MAE : Chiết xuất vi sóng HPMC : Hydroxypropyl methylcellulose ĐVTN : Động vật thực nghiệm OECD : Tổ chức hợp tác phát triển kinh tế MD : Maltodextrin AE : Aerosil SME : Chụp kính hiển vi điện tử LD50 : Độc tính cấp TĐ : Thu DL : Dược liệu DM : Dung môi TD : Tá dược : Hiệu suất CR : Chất rắn CI : Chỉ số nén nf va an lu HS SKLM : Nhiệt độ z at nh oi TCCL lm ul To : Tiêu chuẩn chất lượng : Sắc ký lớp mỏng : Mẫu thử ĐC : Đối chiếu TCCS : Tiêu chuẩn sở CT : Cơng thức KLTB : Khối lượng trung bình z T m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Cỡ số vỏ nang thể tích chúng 22 Bảng 2.1 Thành phần thuốc CTHepaB 29 Bảng 2.2 Thành phần dược chất, tá dược khảo sát xây dựng công thức viên nang cứng CTHepaB 36 Bảng 2.3: Định lượng Glycoalkaloid tồn phần tính theo Solasodin 39 Bảng 3.1 Ảnh hưởng kích thước dược liệu 45 Bảng 3.2 Khối lượng cao thu từ lần chiết thời gian chiết lu an khác 46 n va Bảng hiệu suất chiết suất cao với tỷ lệ DL/DM khác 47 Bảng 3.4 Thiết kế ảnh hưởng loại tá dược hỗ trợ phun sấy 48 Kết đánh giá ảnh hưởng loại TD đến trình phun sấy 49 Bảng 3.6 Thiết kế khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ TD hỗ trợ phun sấy 51 Bảng 3.7 Kết đánh giá ảnh hưởng tỷ lệ TD đến trình phun sấy gh Bảng 3.5 ie tn to Bảng 3.3 p Thiết kế khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đầu vào đến trình d Bảng 3.8 oa nl w 51 lu Bảng 3.9 nf va an phun sấy 52 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đầu vào đến trình lm ul phun sấy 53 Kết xác định hàm ẩm bột cao khô CTHepaB 55 Bảng 3.11 Kết đánh giá độ tan bột cao khô CTHepaB nước 55 Bảng 3.12 Kết xác định tro tồn phần mẫu cao khơ CTHepaB 56 Bảng 3.13 Kết định lượng hàm lượng Glycoalcaloid mẫu thử theo z at nh oi Bảng 3.10 z gm @ l Solasodin bột cao khô CTHepaB 58 m co Bảng 3.14 Kết đánh giá độ nhiễm khuẩn bột cao khô an Lu CTHepaB 58 n va ac th si Bảng 3.15 Kết kiểm nghiệm giới hạn kim loại nặng bột cao khô CTHepaB 59 Bảng 3.16 Thành phần dược chất, tá dược công thức khảo sát 60 Bảng 3.17 Kết xác định khối lượng riêng thành phần đóng nang 61 Bảng 3.18 Thành phần công thức khảo sát bào chế viên nang 62 Bảng 3.19 Kết đo độ rã công thức khảo sát 63 Bảng 3.20 Ảnh hưởng thành phần công thức đến độ ẩm viên nang 64 Bảng 3.21 Kết định lượng Glycoalkaloid toàn phần tính theo solasodin lu an cơng thức khảo sát 65 n va Công thức bào chế viên nang cứng CTHepaB 65 Bảng 3.23 Kết xác định độ đồng khối lượng viên nang cứng tn to Bảng 3.22 Kết kiểm nghiệm hàm lượng kim loại nặng viên nang cứng CTHepaB 69 Bảng 3.25 Kết xác định độ rã viên nang cứng CTHepaB 69 p ie Bảng 3.24 gh CTHepaB 68 oa nl w Kết định lượng hàm lượng Glycoalcaloid mẫu thử theo d Bảng 3.26 lu Bảng 3.27 nf va an Solasodin viên nang CTHepaB 71 Kết kiểm nghiệm độ nhiễm khuẩn viên nang cứng CTHepaB Độc tính cấp theo đường uống CTHepaB chuột nhắt trắng z at nh oi Bảng 3.28 lm ul 72 72 74 Độc tính cấp theo đường uống CTHEPAB chuột nhắt z Bảng 3.29 @ trắng 168 75 m co l gm an Lu n va ac th si DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cà gai leo (Solanum hainanense Hance Solanaceae) Hình 1.2 Cỏ sữa nhỏ (Eurphorbia thymifolia Burm) Hình 1.3 Chi tử (Gardenia jasminoides ellis) Hình 1.4 Đại hồng (Radix et Rhizoma Rhei) Hình 1.5 Đinh lăng (Cordyceps Militaris) Hình 1.6: Đơng trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 11 Hình 1.7 Linh chi (Ganoderma lucidum) 13 lu an Hình 1.8 Hà thủ (Fallopia multiflora) 14 n va Hình 2.1: Các dược liệu thuốc CTHepaB 30 tn to Hình 3.1: Bột cao khơ CT2, CT3, CT4, CT5, CT6 50 gh Hình 3.2: Bột cao khô CT4, CT7, CT8, CT9 52 p ie Hình 3.3: Bột cao khô CT3, CT10, CT11, CT12 54 w Hình 3.4: Sơ đồ quy trình bào chế bột cao khô CTHepaB 54 Sắc ký đồ lớp mỏng định tính Cà gai leo bột cao khơ CTHepaB 57 d Hình 3.6: oa nl Hình 3.5: Hình ảnh chụp SEM cấu trúc bột cao khô CTHepaB 56 lu nf va an Hình 3.7: Sắc ký đồ lớp mỏng định tính Chi tử bột cao khơ CTHepaB 57 Hình 3.8: Sắc ký đồ lớp mỏng định tính Hà thủ ô bột cao khô CTHepaB 57 lm ul Hình 3.9: Sơ đồ giai đoạn bào chế viên nang CTHepaB 66 z at nh oi Hình 3.10 Viên nang CTHepaB 67 Hình 3.11: Sắc ký đồ lớp mỏng định tính Cà gai leo viên nang CTHepaB 70 z Hình 3.12: Sắc ký đồ lớp mỏng định tính Chi tử viên nang CTHepaB 70 m co l gm @ Hình 3.13: Sắc ký đồ lớp mỏng định tính Hà thủ viên nang CTHepaB 71 an Lu n va ac th si PHỤ LỤC QUY TRÌNH BÀO CHẾ VIÊN NANG CTHEPAB Quy trình bào chế bột cao khơ CTHepaB 1.1 Bào chế cao lỏng CTHepaB từ thuốc CTHepaB Cao lỏng thuốc CTHepaB bào chế theo phương pháp chiết nóng với dung mơi nước, chiết thuốc theo phương pháp cổ truyền, không chiết riêng vị thuốc Quá trình bào chế cao lỏng tiến hành theo bước sau: lu - Xác định dược liệu đầu vào đạt tiêu chuẩn DĐVN V an - Cân dược liệu đạt tiêu chuẩn kiểm nghiệm đầu vào theo công thức va n - Làm sạch, loại bỏ tạp chất lạ (nếu có) to ie gh tn - Dược liệu xay thô qua mắt rây 2.0 - Tiến hành chiết với nước theo với tỷ lệ dược liệu/dung môi 1:10, p thời gian chiết 1h/lần x3 lần, nhiệt độ 100℃ nl w 1.2 Bào chế cao khô CTHepaB từ cao lỏng CTHepaB d oa Bào chế bột cao khô CTHepaB từ cao lỏng phương pháp phun an lu sấy với thông số: nf va - Tá dược hỗ trợ phun sấy: MD:AE (20:80) lm ul - Tỷ lệ tá dược/chất rắn: 1/3 z at nh oi - Tỷ lệ chất rắn cao lỏng (1:1): 6,02 - Nhiệt độ đầu vào: 140℃ m co l gm - Áp suất bơm nén: 0,2 Mpa @ - Nhiệt độ đầu ra: 108 - 110℃ z - Tốc độ cấp dịch: 30 ml/phút an Lu n va ac th si Quy trình bào chế viên nang CTHepaB từ bột cao khô định chuẩn - Bước 1: Chuẩn bị nguyên phụ liệu: ₊ Các nguyên liệu đạt tiêu chuẩn đưa vào bào chế ₊ Thiết bị, dụng cụ ₊ Phịng trộn đóng nang: Nhiệt độ 250C, độ ẩm < 30 - Bước 2: Trộn bột: ₊ Cân riêng rẽ nguyên liệu theo công thức ₊ Trộn bột cao khô CTHepaB với lactose 15 phút Rây qua lu rây 0,315 cho đồng an n va ₊ Trộn tiếp Aerosil, Magesi stearat, Natri starch glyconat (qua rây ₊ Sấy hỗn hợp bột nhiệt độ 60 - 70ºC 60 phút (đến hàm ẩm bột nhỏ gh tn to 0,180) vào hỗn hợp bột 10 phút Rây qua rây 0,315 cho đồng p ie ) w - Bước 3: Đóng nang, đóng lọ: oa nl ₊ Hỗn hợp bột sau sấy đóng nang số máy đóng nang d bán tự động Loại bỏ nang bị lỗi lu an ₊ Làm nang: cho nang qua máy lau nang nf va ₊ Viên nang CTHepaB đóng lọ 60 viên/lọ lm ul - Bước 4: Đóng gói kiểm nghiệm: ₊ Đóng hộp z at nh oi ₊ Viên nang CTHepaB đóng lọ 60 viên/lọ ₊ Kiểm nghiệm thành phẩm theo tiêu chuẩn sở z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NANG CTHEPAB Phƣơng pháp nghiên cứu lu an n va p ie gh tn to - Điều kiện bảo quản khoảng thời gian lấy mẫu: Viên nang cứng CTHepaB đóng gói với quy cách 60 viên/lọ bảo quản điều kiện lão hoá cấp tốc (40℃ ± 2℃, RH 75% ± 5%) lấy mẫu thời điểm 0, tháng tháng bảo quản điều kiện nghiên cứu dài hạn (30℃ ± 2℃, RH 75% ± 5%) lấy mẫu thời điểm 0, tháng, tháng, tháng - Thử nghiệm tiêu chuẩn thử: ₊ Bộ phận Bảo đảm chất lượng chịu trách nhiệm bảo quản thử nghiệm mẫu theo điều kiện bảo quản phương pháp thử thẩm định ₊ Các mẫu lấy khỏi nơi bảo quản vào ngày thử ghi thời gian biểu để 40℃ - 80℃ phân tích.Cơng việc phân tích phải tiến hành khơng muộn tuần sau lấy mẫu khỏi nơi bảo quản - Quy trình thử nghiệm: Theo Tiêu chuẩn số CTHepaB - 2018 - Các thơng số q trình thử nghiệm: theo tiêu chuẩn sở - Số lượng mẫu thử (của lô/ điều kiện bảo quản) Bảng 1.1 Số mẫu thử nghiên cứu độ ổn định viên nang cứng CTHepaB điều kiện lão hoá cấp tốc Chỉ tiêu thử Sốviên/lần thử Số lần thử Tổng số (viên) d oa nl w Độ rã 20 60 20 60 18 90 60 60 z at nh oi Kim loại nặng lm ul Độ đồng khối lượng (*) l nf va an lu Tính chất 20 Giới hạn nhiễm khuẩn 20 gm Định lượng @ 30 z Định tính co Làm trịn trừ hư hao: tổng số 400viên m an Lu Tổng (*) tiến hành với tiêu chí khác n va ac th si Bảng 1.2 Số mẫu thử nghiên cứu độ ổn định viên nang cứng CTHepaB điều kiện nghiên cứu dài hạn Chỉ tiêu thử Sốviên/lần thử Số lần thử Tổng số (viên) Tính chất (*) Độ đồng khối 20 80 Kim loại nặng 20 80 Độ rã 24 Định tính 30 120 Định lượng 20 80 Giới hạn nhiễm khuẩn 20 80 lượng lu an n va p ie gh tn to Làm tròn trừ hư hao: tổng số 500 viên Tổng oa nl w (*) tiến hành với tiêu chí khác d - Thời gian biểu lấy mẫu thử nghiệm lu nf va an Bảng 1.3 Thời gian biểu lấy mẫu nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hoá cấp tốc viên nang cứng CTHepaB điểm Nhiệt độ 40 oC 12.11.2018 14.11.2018 15.11.2018 12.02.2019 tương đối 75% 12.05.2019 14.05.2019 15.02.2019 15.05.2019 m co ± 5% 14.02.2019 l tháng ± C; độ ẩm Lô 151118 gm tháng Lô 141118 @ o Lô 121118 z Bắt đầu Điều kiện z at nh oi Thời Thời gian biểu lm ul Bảo quản an Lu n va ac th si Bảng 1.4 Thời gian biểu lấy mẫu nghiên cứu độ ổn định điều kiện nghiên cứu dài hạn viên nang cứng CTHepaB Bảo quản Thời gian biểu Thời Điều kiện điểm Bắt đầu Nhiệt độ 30 oC ± 2oC; tháng độ ẩm tương đối 75% tháng ± 5% tháng Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 12.11.2018 14.11.2018 15.11.2018 12.02.2019 14.02.2019 15.02.2019 12.05.2019 14.05.2019 15.05.2019 12.08.2019 14.08.2019 15.08.2019 lu an va n - Chỉ tiêu chấp nhận tn to Bảng 1.5 Chỉ tiêu chất lƣợng đƣợc chấp nhận viên nang cứng ie gh CTHepaB theo tiêu chuẩn sở Yêu cầu chất lƣợng p Chỉ tiêu đánh giá ± 7,5% w Phải đạt yêu cầu theo quy định nl Tính chất d oa Độ đồng khối lượng Không 10 ppm Định lượng lm ul Định tính Khơng q 30 phút nf va Độ rã an lu Kim loại nặng Phải đạt yêu cầu theo quy định Hàm lượng glycoalcaloid: không 180 z at nh oi µg/viên Giới hạn nhiễm khuẩn Phải đạt yêu cầu mức theo DĐVN V z - Dự đoán tuổi thọ viên nang cứng CTHepaB từ kết nghiên cứu l gm @ lão hóa cấp tốc: co Kết từ nghiên cứu độ ổn định chế phẩm thuốc sử dụng m để dự đoán tuổi thọ sản phẩm điều kiện bảo quản thực tế Phương pháp an Lu dựa sở động học bậc phương trình Van’t Hoff: n va ac th si t90(t2) = k × t90(t1) + t0 Trong đó: t90(t2): Tuổi thọ thuốc nhiệt độ bảo quản t90(t1): Tuổi thọ thuốc điều kiện lão hóa cấp tốc = 0,1053/K t1: Nhiệt độ lão hóa cấp tốc t2: Nhiệt độ bảo quản K: giá trị trung bình Kt Kt = lu an C Co: hàm lượng thuốc thời điểm t t0 n va ∆t: khoảng thời gian t-t0 tn to k: Hệ số Van’t Hoff = 2∆t/10 ie gh t0: thời gian kể từ ngày xuất xưởng đến ngày bắt đầu bảo quản thực nghiệm p Kết nghiên cứu nl w 2.1 Kết nghiên cứu độ ổn định viên nang CTHepaB điều kiện oa lão hoá cấp tốc d - Kết đánh giá độ ổn định tính chất lu nf va an Bảng 2.1 Kết đánh giá tính chất viên nang CTHepaB điều kiện lão hóa cấp tốc lm ul Thời điểm Yêu cầu z at nh oi nghiên cứu Lô thử Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Phải đạt yêu cầu theo quy Đúng định Đúng z (Ban đầu) co l gm @ m Nhận xét: Viên nang CTHepaB đạt chất lượng tiêu tính chất thời điểm nghiên cứu lão hoá cấp tốc an Lu n va ac th si - Kết nghiên cứu độ ổn định độ đồng khối lượng Bảng 2.2 Kết kiểm tra độ đồng khối lƣợng viên nang CTHepaB thời điểm nghiên cứu lão hóa cấp tốc Thời điểm Lơ thử nghiên cứu Yêu cầu (tháng) Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 (Ban đầu) ± 7,5% so với Đạt Đạt Đạt KLTB bột Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt thuốc lu an nang n va tn to Nhận xét: Ở tất thời điểm nghiên cứu lão hoá cấp tốc, viên gh nang CTHepaB đạt yêu cầu độ đồng khối lượng theo tiêu chuẩn p ie sở xây dựng w - Kết nghiên cứu độ ổn định kim loại nặng oa nl Bảng 2.3 Kết đánh giá hàm lƣợng kim loại nặng viên nang d CTHepaB thời điểm nghiên cứu lão hóa cấp tốc nf va Yêu cầu 10ppm Lô 141118 Lô 151118 2,9 2,7 2,2 2,5 2,8 3,0 2,9 2,8 2,4 z Không Lô 121118 z at nh oi lm ul (tháng) (Ban đầu) Hàm lƣợng kim loại nặng (ppm) an nghiên cứu lu Thời điểm gm @ l Nhận xét: Hàm lượng kim loại nặng thời điểm nghiên cứu lão hóa m co cấp tốc viên nang CTHepaB nhỏ 10 ppm Kết cho thấy điểm nghiên cứu an Lu viên nang CTHepaB đạt yêu cầu tiêu chí hàm lượng kim loại nặng thời n va ac th si - Kết nghiên cứu độ ổn định độ rã Bảng 2.4 Kết kiểm tra độ rã điều kiện lão hóa cấp tốc Thời điểm Thời gian rã (phút) Yêu cầu nghiên cứu Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 5,7 4,5 4,9 5,0 4,3 4,8 4,7 5,7 4,8 (Ban đầu) Không 30 phút lu an n va Nhận xét: Thời gian để viên nang CTHepaB rã hoàn toàn nhỏ tn to 30 phút Như nang CTHepaB đạt yêu cầu tiêu chí độ rã - Kết nghiên cứu độ ổn định định tính p ie gh thời điểm nghiên cứu lão hoá cấp tốc nl w Bảng 2.5 Kết kiểm tra định tính điều kiện lão hóa cấp tốc Thời điểm d oa Lô thử (Ban đầu) Phải đạt yêu Lô 141118 Lô 151118 Đúng Đúng Đúng cầu theo quy Đúng Đúng Đúng định Đúng Đúng nf va an Lô 121118 z at nh oi lu Yêu cầu nghiên cứu lm ul Đúng z Nhận xét: Kết cho thấy, viên nang CTHepaB đáp ứng yêu cầu @ - Kết nghiên cứu độ ổn định định lượng: m co l gm quy định tiêu chí định tính thời điểm nghiên cứu lão hóa cấp tốc an Lu n va ac th si Bảng 2.6 Kết định lƣợng glycoalkaloid tồn phần tính theo solasodin điều kiện lão hóa cấp tốc Hàm lƣợng glycoalkaloid tồn phần tính Thời điểm (Ban đầu) theo solasodin (mg/viên) Yêu cầu nghiên cứu lu an va Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 Hàm lượng 4,53 4,38 4,43 glycoalkaloid ± 0,23 ± 0,22 ± 0,39 toàn phần tính 4,46 4,33 4,38 theo solasodin ± 0,35 ± 0,38 ± 0,25 khơng 4,42 4,28 4,34 3,8 mg/viên ± 0,29 ± 0,24 ± 0,31 n to gh tn Nhận xét: Hàm lượng glycoalkaloid tồn phần tính theo solasodin p ie viên nang CTHepaB lớn 3,8 mg/viên thời điểm nghiên cứu lão hóa cấp tốc Kết cho thấy độ ổn định hàm lượng oa nl w glycoalkaloid toàn phần tính theo solasodin điều kiện lão hóa cấp tốc d - Kết nghiên cứu độ ổn định giới hạn nhiễm khuẩn nf va an lu Bảng 2.7 Kết xác định giới hạn nhiễm khuẩn điều kiện lão hóa cấp tốc Lơ thử Thời điểm u cầu nghiên cứu Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 cầu theo quy định Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt z Phải đạt yêu z at nh oi lm ul (Ban đầu) @ gm Nhận xét: Kết đánh giá độ nhiễm khuẩn cho thấy: Viên nang nghiên cứu lão hóa cấp tốc m co l CTHepaB đáp ứng tiêu theo mức DĐVN V thời điểm an Lu n va ac th si Kết luận: Nghiên cứu độ ổn định viên nang CTHepaB điều kiện lão hóa cấp tốc thời điểm ban đầu, tháng tháng bảo quản điều kiện nhiệt độ 400C ± 20C độ ẩm tương đối 75% ± 5% cho thấy chế phẩm hoàn toàn đạt tiêu chất lượng tính chất, độ đồng khối lượng, kim loại nặng, độ rã, định tính, định lượng giới hạn nhiễm khuẩn 2.2 Kết dự đoán độ ổn định viên nang CTHepaB từ nghiên cứu lão hóa cấp tốc Từ kết nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hóa cấp tốc, sử dụng lu phương trình Van’t Hoff để dự đoán tuổi thọ sản phẩm an n va tháng -0,00624 0,00479 -0,01771 0,00680 -0,00564 0,00433 0,00471 0,00620 0,005 18,17 121118 oa nl w tháng tháng d Lô -0,00807 tháng -0,01007 z at nh oi tháng -0,01226 nf va 151118 tháng an Lô 0,004 23,29 0,00387 46,6 lu 151118 36,3 p ie Lô lm ul gh tn to Bảng 2.8 Dự đoán độ ổn định dựa vào kết định lƣợng Adenosin Thời log(C/Co t90(t2 Lô ∆t K k t90(t1) Ktb điểm ) ) 0,005 20,93 41,9 Dựa vào kết trên, tuổi thọ dự đoán chế phẩm 36,3 tháng z gm @ Căn vào kết này, đưa dự đốn rằng, sản phẩm ổn định l vòng 36 tháng Tuy nhiên, để đánh giá sâu xác hơn, cần m co theo dõi độ ổn định thực tế điều kiện nghiên cứu dài hạn để đưa hạn dùng xác cho chế phẩm Do tiếp tục theo dõi độ ổn định an Lu n va ac th si dài hạn theo điều kiện bảo quản thực tế theo quy định Bộ Y tế Việt Nam 2.3 Kết nghiên cứu độ ổn định viên nang CTHepaB điều kiện nghiên cứu dài hạn - Kết đánh giá độ ổn định tính chất Bảng 2.9 Kết đánh giá tính chất viên nang CTHepaB điều kiện nghiên cứu dài hạn Thời điểm Yêu cầu Lô thử nghiên cứu lu Lô 141118 Lô 151118 Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng an Lô 121118 n va (Ban đầu) to Phải đạt yêu tn định p ie gh cầu theo quy oa nl w d Nhận xét: viên nang CTHepaB đạt chất lượng tiêu tính chất an lu thời điểm nghiên cứu độ ổn định dài hạn nf va - Kết nghiên cứu độ ổn định độ đồng khối lượng Yêu cầu z at nh oi lm ul Bảng 2.10 Kết kiểm tra độ đồng khối lƣợng viên nang CTHepaB thời điểm nghiên cứu dài hạn Thời điểm Lô thử (Ban đầu) ± 7,5% so Đạt với KLTB Đạt bột thuốc Đạt nang Đạt nghiên cứu Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt z (tháng) m co l gm @ an Lu Đạt Đạt n va ac th si Nhận xét: tất thời điểm nghiên cứu độ ổn định dài hạn, viên nang CTHepaB đạt yêu cầu độ đồng khối lượng theo tiêu chuẩn sở xây dựng - Kết nghiên cứu độ ổn định kim loại nặng Bảng 2.11 Kết đánh giá hàm lƣợng kim loại nặng viên nang CTHepaB thời điểm nghiên cứu độ ổn định dài hạn Thời điểm Hàm lƣợng kim loại nặng (ppm) nghiên cứu Yêu cầu lu (tháng) an n va (Ban đầu) Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 2,5 2,7 2,7 gh tn to Không 2,8 2,7 2,8 10ppm 2,8 2,9 3,0 2,8 2,9 2,9 p ie w Nhận xét: Hàm lượng kim loại nặng thời điểm nghiên cứu độ ổn oa nl định dài hạn viên nang CTHepaB nhỏ 10 ppm Kết cho d thấy viên nang CTHepaB đạt yêu cầu tiêu chí hàm lượng kim loại nặng lu nf va an thời điểm nghiên cứu - Kết nghiên cứu độ ổn định độ rã lm ul Bảng 2.12 Kết kiểm tra độ rã điều kiện nghiên cứu dài hạn nghiên cứu Yêu cầu z at nh oi Thời điểm Thời gian rã (phút) z Lô 121118 4,5 4,5 4,5 Không 4,6 4,6 30 phút 4,8 4,4 co 4,8 5,0 4,7 4,8 an Lu m l gm 4,7 Lô 151118 @ (Ban đầu) Lô 141118 n va ac th si Nhận xét: Thời gian để viên nang CTHepaB rã hoàn toàn nhỏ 30 phút Như nang CTHepaB đạt yêu cầu tiêu chí độ rã thời điểm nghiên cứu độ ổn định dài hạn - Kết nghiên cứu độ ổn định định tính Bảng 2.13 Kết kiểm tra định tính điều kiện nghiên cứu dài hạn Lô thử Thời điểm Yêu cầu nghiên cứu lu (Ban đầu) an va to Lô 141118 Lô 151118 Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Phải đạt yêu cầu theo quy n Lô 121118 định Nhận xét: Kết cho thấy, viên nang CTHepaB đáp ứng yêu p ie gh tn w cầu quy định tiêu chí định tính thời điểm nghiên cứu độ ổn định dài oa nl hạn d - Kết nghiên cứu độ ổn định định lượng an lu Bảng 2.14 Kết định lƣợng glycoalkaloid tồn phần tính theo nf va solasodin điều kiện nghiên cứu dài hạn Yêu cầu Hàm lƣợng glycoalkaloid tồn phần tính theo solasodin (mg/viên) z at nh oi nghiên cứu lm ul Thời điểm Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 4,43 ± 0,26 4,38 ± 0,32 4,47 ± 0,23 4,34 ± 0,24 4,43 ± 0,32 4,30 ± 0,31 4,39 ± 0,26 4,27 ± 0,27 4,36 ± 0,25 Hàm lượng glycoalkaloid toàn 4,39 ± 0,29 phần tính theo 4,36 ± 0,25 solasodin khơng 4,32 ± 0,24 z (Ban đầu) m co l gm @ 3,8 mg/viên an Lu n va ac th si Nhận xét: Hàm lượng glycoalkaloid tồn phần tính theo solasodin viên nang CTHepaB lớn 3,8 mg/viên thời điểm nghiên cứu độ ổn định dài hạn Kết cho thấy độ ổn định hàm lượng glycoalkaloid tồn phần tính theo solasodin điều kiện nghiên cứu dài hạn - Kết nghiên cứu độ ổn định giới hạn nhiễm khuẩn Bảng 2.15 Kết xác định giới hạn nhiễm khuẩnở điều kiện nghiên cứu dài hạn Thời điểm Lô thử lu Yêu cầu an nghiên cứu va Lô 121118 Lô 141118 Lô 151118 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt n (Ban đầu) to Phải đạt yêu tn định p ie gh cầu theo quy nl w d oa Nhận xét: Kết đánh giá độ nhiễm khuẩn cho thấy: Viên nang an lu CTHepaB đáp ứng tiêu theo mức DĐVN V (phụ lục 13.6) nf va thời điểm nghiên cứu độ ổn định dài hạn lm ul Nhận xét: Nghiên cứu độ ổn định viên nang CTHepaB điều kiện dài hạn thời điểm ban đầu, 3, 6, tháng bảo quản điều kiện nhiệt độ z at nh oi 300C ± 20C độ ẩm tương đối 75% ± 5% cho thấy chế phẩm hoàn toàn đạt tiêu chất lượng tính chất, độ đồng khối lượng, kim z loại nặng, độ rã, định tính, định lượng giới hạn nhiễm khuẩn tới thời điểm l gm @ lấy mẫu (9 tháng) Kết nghiên cứu cho thấy, đánh giá điều kiện thực tế co m hàm lượng glycoalkaloid tồn phần tính theo solasodin giảm so với dự an Lu đốn từ phương trình động học Van’t Hoff n va ac th si Từ kết nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hóa cấp tốc, điều kiện thường dự đốn tuổi thọ thuốc, đến kết luận: viên nang CTHepaB ổn định tới 36 tháng điều kiện bảo quản phù hợp với yêu cầu Bộ Y tế lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si