(Luận văn) nghiên cứu khu hệ nấm rễ và đánh giá tác động của việc sử dụng chế phẩm nấm rễ lên năng suất và chất lượng của cây thuốc bạch chỉ (angelica dahurica (fisch ex hoffm ) benth et hook f )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - - lu an n va gh tn to p ie ĐỖ HOÀNG HẢI nl w d oa NGHIÊN CỨU KHU HỆ NẤM RỄ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG CỦA VIỆC SỬ DỤNG CHẾ PHẨM NẤM RỄ LÊN NĂNG SUẤT VÀ CHẤT LƯỢNG CỦA CÂY THUỐC BẠCH CHỈ (ANGELICA DAHURICA (FISCH EX HOFFM.) BENTH.ET HOOK F.) oi lm ul nf va an lu z at nh LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si HÀ NỘI – 2015 VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - - lu an n va ie gh tn to ĐỖ HOÀNG HẢI p NGHIÊN CỨU KHU HỆ NẤM RỄ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG CỦA VIỆC SỬ DỤNG CHẾ PHẨM NẤM RỄ LÊN NĂNG SUẤT VÀ CHẤT LƯỢNG CỦA CÂY THUỐC BẠCH CHỈ ANGELICA DAHURICA (FISCH EX HOFFM.) BENTH.ET HOOK F d oa nl w an lu Mã số: 60420103 oi lm ul nf va Chuyên ngành: Vi sinh vật học z at nh LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC z m co l gm @ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN THỊ NHƯ HẰNG an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si HÀ NỘI – 2015 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, nhận nhiều giúp đỡ thầy cơ, anh chị gia đình Với tất lịng chân thành, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Thị Như Hằng người tận tình giúp đỡ, bảo, hướng dẫn tơi thực nghiên cứu, góp ý sửa chữa để tơi hồn thiện luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy, Cô giáo Viện Sinh thái Tài lu an nguyên sinh vật, Trường Đại Học Thái Nguyên tận tình truyền đạt cho n va kiến thức suốt năm học tập, tảng cho tơi q trình nghiên Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Mai Hương tập thể cán ie gh tn to cứu luận văn, hành trang quý báu theo suốt đời p cơng tác phịng Sinh học thực nghiệm - Viện Hoá học Hợp chất nl w thiên nhiên giúp đỡ q trình hồn thành luận văn d oa Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình thân u tơi, an lu người bên tôi, ủng hộ động viên chỗ dựa vững để nf va yên tâm học tập hồn thành khóa học oi lm ul Cuối tơi xin kính chúc q Thầy, Cơ, Anh, Chị gia đình dồi sức khỏe, thành công nghiệp! z at nh Tôi xin chân thành cảm ơn! z gm @ Hà Nội, ngày 15 tháng 12 năm 2015 m co l Tác giả luận văn an Lu Đỗ Hoàng Hải http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực, chưa sử dụng cho bảo vệ học vị Mọi giúp đỡ cho hoàn thành luận văn cảm ơn Các thơng tin, tài liệu trình bày luận văn ghi rõ nguồn gốc./ Tác giả luận văn lu an Đỗ Hoàng Hải n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC BẢNG, BIỂU ix lu MỞ ĐẦU an va CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU n 1.1 Giới thiệu khu hệ nấm cộng sinh đất rễ .3 1.2.1 Nấm rễ ngoại cộng sinh (Ectomycorrhiza) .4 p ie gh tn to 1.2 Phân loại khu hệ nấm cộng sinh đất rễ w 1.2.2 Nấm rễ nội cộng sinh (Endomycorrhiza) oa nl 1.2.3 Nấm rễ nội ngoại cộng sinh (Ectoendo mycorrhiza) d 1.3 Tính chun hóa khu hệ nấm cộng sinh đất rễ an lu 1.4 Vai trò khu hệ nấm cộng sinh đất rễ chủ .9 nf va 1.4.1 Tăng khả hấp thụ P dinh dưỡng trồng .10 oi lm ul 1.4.2 Hình thành chất kích thích sinh trưởng 10 z at nh 1.4.3 Nâng cao sức chống chịu thích nghi với mơi trường trồng 11 1.4.4 Cải thiện môi trường xung quanh 12 z 1.4.5 Tăng khả kháng bệnh trồng 12 @ l gm 1.5 Những nghiên cứu ứng dụng khu hệ nấm cộng sinh đất rễ 13 m co 1.5.1 Trên giới 13 an Lu 1.5.2 Ở Việt Nam 14 1.6 Tình hình phát triển dược liệu Việt Nam [1] .16 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si iii 1.7 Cây bạch (Angelica dahurica (Fisch ex Hoffm.) Benth.et Hook f.) .18 1.7.1 Tên khoa học 18 1.7.2 Nguồn gốc, phân bố 18 1.7.3 Đặc điểm sinh học, sinh thái 19 1.7.4 Sản lượng 19 1.7.5 Hoạt tính sinh học (Tác dụng dược lý) 19 1.7.6 Thành phần hóa học 21 lu an 1.7.7 Hoạt chất imperatorin 22 n va CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1.1 Đất rễ Bạch 24 2.1.2 Hóa chất thiết bị thí nghiệm .24 p ie gh tn to 2.1 Vật liệu 24 w 2.1.2.1 Hóa chất 24 oa nl 2.1.2.2 Thiết bị phịng thí nghiệm .24 d 2.1.3 Môi Trường 25 lu an 2.1.3.1 Môi trường phân lập nấm vùng rễ 25 nf va 2.1.3.2 Môi trường nuôi cấy, lên men giữ giống 25 oi lm ul 2.1.3.3 Mơi trường thử hoạt tính enzyme 26 2.1.3.4 Môi trường đánh giá hoạt tính phân giải phốt phát khó tan 26 z at nh 2.1.3.5 Môi trường đánh giá khả sinh IAA 26 2.2 Phương pháp nghiên cứu 26 z gm @ 2.2.1 Phương pháp phân lập 26 2.2.1.1 Thu thập mẫu 26 l m co 2.2.1.2 Phân lập chủng nấm 27 an Lu 2.2.2 Tuyển chọn chủng nấm hữu hiệu để sản xuất chế phẩm thử nghiệm .27 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si iv 2.2.2.1 Xác định hoạt khả hoà tan phosphat canxi chủng nấm phân lập 27 2.2.2.2 Xác định hoạt tính phân giải phốt phát khó tan chủng nấm lựa chọn 28 2.2.2.3 Đánh giá khả sinh tổng hợp Indole-3-acctic acid (IAA) chủng nấm lựa chọn 28 2.2.2.4 Xác định khả đối kháng chủng nấm lựa chọn 29 2.2.3 Định danh chủng nấm sinh học phân tử 29 lu 2.2.4 Xác định điều kiện nuôi cấy tối ưu chủng nấm lựa chọn 30 an va n 2.2.4.1 Xác định mơi trường ni cấy thích hợp chủng nấm lựa chọn 30 tn to p ie gh 2.2.4.2 Xác định khoảng pH mơi trường ni cấy thích hợp chủng nấm lựa chọn .30 oa nl w 2.2.4.3 Xác định khoảng thời gian ni cấy thích hợp chủng nấm lựa chọn 30 d 2.2.5 Tạo chế phẩm quy mơ phịng thí nghiệm 31 an lu 2.2.5.1 Lên men chủng nấm lựa chọn tạo sinh khối vi sinh vật 31 nf va 2.2.5.2 Quy trình phối trộn tạo chế phẩm quy mơ phịng thí nghiệm 32 oi lm ul 2.2.6 Thử nghiệm chế phẩm bạch .32 z at nh 2.2.6.1 Nghiên cứu tác động chế phẩm đến suất bạch 32 z 2.2.6.2 Nghiên cứu tác động chế phẩm đến hàm lượng chất imperatorin rễ củ bạch sau thu hoạch 35 gm @ CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 l 3.1 Phân lập chủng nấm 38 m co 3.2 Tuyển chọn chủng nấm hữu hiệu để sản xuất chế phẩm thử nghiệm 38 an Lu 3.2.1 Khả hoà tan phosphat canxi chủng nấm phân lập 38 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si v 3.2.2 Xác định hoạt tính phân giải phốt phát khó tan chủng nấm lựa chọn 39 3.2.3 Đánh giá khả sinh tổng hợp Indole-3-acctic acid (IAA) chủng nấm lựa chọn .40 3.2.4 Xác định khả đối kháng chủng nấm lựa chọn .42 3.3 Định danh chủng nấm sinh học phân tử .42 3.4 Xác định điều kiện nuôi cấy tối ưu chủng nấm lựa chọn để tạo chế phẩm .44 lu 3.4.1 Ảnh hưởng môi trường lên men 44 an va 3.4.2 Ảnh hưởng pH môi trường lên men 46 n 3.4.3 Ảnh hưởng thời gian lên men 47 gh tn to 3.5 Tạo chế phẩm thử nghiệm 48 ie 3.6 Thử nghiệm chế phẩm 49 p 3.6.1 Tác động chế phẩm đến suất bạch 49 oa nl w 3.6.2 Tác động chế phẩm đến hàm lượng chất imperatorin rễ củ bạch sau thu hoạch 55 d CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 an lu va 4.1 KẾT LUẬN 63 ul nf 4.2 KIẾN NGHỊ .64 oi lm CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN LUẬN VĂN .65 TÀI LIỆU THAM KHẢO .66 z at nh TIẾNG VIỆT 66 z TIẾNG ANH .67 @ gm TRANG WEB 71 m co l PHỤ LỤC 72 an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si vi DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ Al Nhôm AM Arbuscular mycorrhiza CFU Colony forming unit ECM Ectomycorrhiza Fe Sắt IAA Indole-3-acctic acid N Nitơ P Phốt PPM Parts per million lu STT an n va p ie gh tn to 10 nl w 11 VA 12 VAM 13 VM 14 VSV 15 YHCT Số thứ tự d oa STT an lu Vesicular arbuscular nf va Vesicular arbuscular mycorrhiza oi lm ul Vesicular mycorrhiza Vi sinh vật z at nh Y học cổ truyền z m co l gm @ an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si vii TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Đề án “Quy hoạch tổng thể phát triển dược liệu giai đoạn từ đến năm 2020 tầm nhìn đến năm 2030”, tr 30-33 Đỗ Huy Bích cs, Cây thuốc Động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật 2004 Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học lu an 1991 Nguyễn Minh Châu, Lê Quốc Huy (2007), “Kết nghiên cứu n va tn to áp dụng thử nghiệm chế phẩm nấm rễ ECM dạng viên nang (Alginate p ie gh beads) cho đen (Hopea odorata)”, tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn số 18, tr 81-86 Phạm Quang Thu, Đặng Như Quỳnh (2008), “Đặc điểm sinh w oa nl trưởng hệ sợi hình thành rễ nấm số loài nấm ngoại d cộng sinh với bạch đàn nuôi cấy khiết”, tạp chí Nơng nghiệp lu Tăng Thị Chính, Bùi Văn Cường, (2007) “Nghiên cứu đa ul nf va an phát triển nông thôn số 12 , tr 84-90 oi lm dạng nấm cộng sinh Arbuscular mycorrhiza cỏ Vetiver từ đất nhiễm chì” Báo cáo khoa học Sinh thái Tài nguyên sinh vât, Hội nghị z at nh khoa học toàn quốc lần thứ hai, Viện sinh thái Tài nguyên sinh vật, @ Trần Hùng, Kết di thực số thuốc, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu 1961-1971 Viện Dược Liệu Trần Thị Minh Hằng, Nguyễn Hà Đăng, Phạm Văn Cường, Trần m co l gm z 1, tr 216-221 an Lu Thị Như Hằng, 2013 Ảnh hưởng nấm rễ Mycorrhizae đến sinh n va ac th 66 si trưởng, suất hiệu suất bón lân cho cà chua Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn (18), tr 31-37 Trần Thị Dạ Thảo, Lê Đình Đơn, Bùi Cách Tuyến (2007), ảnh hưởng phân lân đến sinh trưởng, suất, tồn lưu dinh dưỡng mật đọ nấm cộng sinh bắp (Zea mays L.) vùng đất xám tỉnh Tây Ninh vụ Đơng Xn năm 2004-2005”, Tạp chí Khoa học kĩ thuật Nông Lâm Nghiệp (1&2), tr 82-87 lu 10 Viện Dược liệu (1993), Tài nguyên thuốc Việt Nam NXB Khoa an học kỹ thuật Hà Nội va n TIẾNG ANH to gh tn 11 Aanen D.K (2006), “As you reap, so shall you sow: cloupling of p ie harvesting and inoculating stabilizes the muatlism between termites and fungi” Biol Lett, 2, pp 209-212 Bi Guochang, Zang Mu, Guo Xiuzhen (1989), “Distribution of oa nl w 12 ectomycorrhizal fungi under several chief forest types in alpine d an lu coniferou region of northwestern yunnan”, Scientia Silvae Sinicae, Bohrer, K.E & Amon, J.P (2004) Seasonal dynamis of oi lm ul 13 nf va 25(1), pp 33-39 Arbuscular Mycorrhizal fungi in differing wetland habitats Mycorrhiza 14 z at nh 14, pp 329-337 Câmara, M P., O’Neill, N R., & Van Berkum, P (2002), z gm @ “Phylogeny of Stemphylium spp Based on ITS and glyceraldehydes3-phosphate dehydrogenase gene sequences Mycologia, 94(4), pp l 15 m co 660-672 Frank A.B (1885), “Uber die auf Wurzelsymbiose beruhende an Lu Ehrnahrung gewisser Baum durch unterirdische Pilze”, Berichte der n ac th 67 va Deutschen botainschen Gesellschaft,3, pp 128-145 si 16 Gallo M.B.C., Guimarase D O., Luciano da S Momesso, Monica T Pupo (2008), “Natural Products from Endophytic Fungi”, Microbial Biotechnology, pp 139-168 17 Grenville D.J, Piche Y., Peterson R.L (1985), “Sclerotia as viable sources of mycelia for the establishment of ectomycorrhizae”, Canadian Joural of microbiology, 31, pp 1085-1088 18 Guhardja E., “Rainforest ecosystems of East Kalimanta” (2000), lu Springer, pp.1130- 1154 an 19 Harvey, Linda M., (1991) “Cultural Techniques for Production va n of Ectomycorrhizal Fungi” Biotechnology Advances Vol 9, pp 12- to gh tn 29 p ie 20 Hartnett, D.C and Wilson, G.W.T (1999) Mycorrhizae influence plant community structure and diversity in tall grass prairie nl w Ecology 80, pp 1187-1195 Huda S.M.S., Uddin M.B., Haque M.M., “Horizontal d oa 21 an lu distribution of ectomycorrhizal infection in Dipterocarpus turbinatus J Kang, L Zhou, J Sun, J Han, D.-A Guo (2008), oi lm ul 22 nf va plantations of Bangladesh”, 17(1), pp 47-49 Chromatographic fingerprint analysis and characterization of z at nh furocoumarins in the roots of Angelica dahurica by HPLC/DAD/ESIMSn technique, J Pharm Biomed Anal, 47(4-5), pp 778-785 James M Trappe (2010), “Fungus associates of ectotrophic z @ 23 24 l gm mycorrhizae”, Botanical Review, pp 538-606 Jan-Erik Nylund (1978), “ The ectomycorrhizal infection zone m co and its relation to acids polysaccharides of cortical cell walls”, New an Lu Phytologist, 106, pp 505-516 n va ac th 68 si 25 Lakshman, H.C and Raghavendra, S (1990) Occurrence of vesicular arbuscular mycorrhizal fungi in medicinal plants In: Proceedings of the Second National Conference on Mycorrhiza, Bangalore, 21-23 November, 1990 pp 21-23 26 Marx C., Dexheimer J., Gianinazzi-Pearson V., Gianinazzi S (1982),“Enzymatic Studies on the Metabolism of Vesicular- Arbuscular mycorrhizas”, New Phytologist, 90(1), pp 37-43 lu 27 Mei-ling XU, Jiao-jun ZHU , Hong-zhang KANG, Jin-xin an Zhang, Feng-qin Li (2008), “Optimun conditions for pure culture of va n maijor ectomycorrhizal fungi obtained from Pinus Sylvestris var to gh tn Mongolica platation in southeastern Keerpin sandy lands, China”, p ie Journal of Forestry Research , Springer, pp 113-118 28 Misra and Kaushik B.D (1989), “Growth promoting substances oa nl w of Cyanobacteria II”, Detection of amino acids, sugar and auxins, Proc India Natn Sci Acad, 55, pp.499-504 d Redecker D., Kodner R., Graham L.E.2000, “Glomalean fungi an lu 29 Robson A.D., Abbott L.K., Malajczuk N (1994), “Management oi lm ul 30 nf va from the Ordovician”, Science, 289, pp 1920-1921 of mycorrhizas in agriculture horticulture and forestry”, Kluwer 31 z at nh Academic, pp 112-124 Russell J., Rodriguez Regina S redman Joan M Henson (2005), z “ Symbiotic Lifestyle Expression by Fungal Endophytes and the @ l gm Adaption of plants to Stress: Unraveling the Complexities of Intimacy”, Taylor & francis Group, LLC 34, pp 683-695 m co 32 S.E Smith and D.J Read (1997), “Mycorrhizal Symbiosis” (2nd an Lu Edition) Academic Press: London, UK, 2, pp 605 n va ac th 69 si 33 Selvaraj, T and Subramanian, G (1990) Incidence of vesicular arbuscular mycorrhizal fungi in medicinal plants In-Proceedings of the Second National Conference on Mycorrhiza, Bangalore, 21-23 November, 1990 pp 34-35 34 Shela G., Olga M.B., Elen K., (2003), “Comparison of the contents of the main biochemical”, Journal of nutritional Biochemistry, 14, pp 154-159 lu 35 Simard, S.W., Perry, D.A and Jones, M.D., (1997) Net transfer an of carbon between ectomycorrhizal tree species in the field Nature 388, va n pp 579-582 to gh tn 36 Tejavathi, D H., Anitha, P., Savitha M Murthy and Nijagunaiah, p ie R (2011) Effect of AM fungal association with normal and micropropagated plants of Andrographis paniculata Nees on biomass, oa nl w primary and secondary metabolites International Research Journal of Plant Online International Interdisciplinary Research Journal, {Bi- d nf Tian Chengming, Yang Junxiu, Liang Yingmei, Mo Yande oi lm ul 37 va 338-348 an lu Monthly}, Volume-II, Issue-II, Mar-Apr2012 Science Vol 2(12) pp (1995), “the Pharmaceutical fungi Resources and Ecological college, pp 04-05 z Trappe, J.M (1987) Phylogenetic and ecological aspects of gm @ 38 z at nh distribution in the Qingling mountain”, Journal of northwest forestry mycotrophy in the angiosperms from an evolutionary stand point In: l Ecophysiology of VA mycorrhizal plants (Eds), Safir, G.R., Academic m co Press, New Yark pp 5-25 Turmel M.S.,(2004) “Exposing the an Lu 39 Mycorrhizaes in ac th 70 n va Agriculture” University of Manitoba, Winnipeg, MB R3T 2N2 si Vanden B.D.A., Vlietlinck A.J.,(1991), “Methods in Plant 40 Biochemistry”, Academic press , NewYork 41 Vestberg M., Saari K., Kukkonen S., Hurme T., (2005) ”Mycotrophy of crops in rotation and soil amendment with peat influence the abundance and effectiveness of indigenous arbuscular mycorrhizal fungi in field soil” Mycorrhiza 15(6), pp 447-458 42 Y Chen, Y Jin, Y Chen, Y Jin, X Liu, L Wang (2009) A Novel lu HPLC Method to Analyze Imperatorin and Isoimperatorin of Angelica an dahurica Oils Obtained by Supercritical Fluid Extraction, Journal of va n Liquid Chromatography & Related Technologies, 32(16), pp 2384- to gh tn 2395 p ie 43 Warner, A and B Mosse (1980) Independent spread of Vesicular Arbuscular Mycorrhizal fungi in soil, Trans British Mycol 44 oa nl w Soc., 74, pp 407-410 Zhao, Z.W., Qin, X.Z., Li, X.W., Cheng, L.Z., Sha, T and Wang, d an lu G.H., (2001) Arbuscular mycorrhizal status of plants and the spore nf va density of arbuscular mycorrhizal fungi in the tropical rain forest of TRANG WEB oi lm ul Xishuangbanna, southwest China Mycorrhiza 11, pp 159-162 http://www.oiirj.org/oiirj/mar2012/12.pdf 46 http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/imperatorin#sectio z at nh 45 z m co l gm @ n=Biological-Test-Results an Lu n va ac th 71 si PHỤ LỤC PHỤ LỤC lu an n va ie gh tn to p Hình ảnh phân lập chủng nấm d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z gm @ m co l Hình ảnh đối kháng chủng nấm an Lu n va ac th 72 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ Hình ảnh xác định điều kiện nuối cấy tối ưu an Lu n va ac th 73 si PHỤ LỤC Cây phân loại chủng SH3 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w 0.02 Phomopsis longicolla_HQ333500 50 Diaporthe melonis_FJ889447 Phomopsis cuppatea_AY339322 100 Phomopsis dauci_FJ889451 65 57 Diaporthe angelicae_AY196779 93 Diaporthe stewartii_FJ889448 64 Phomopsis subordinaria_GQ922519 58 SH3_ 51 Diaporthe sojae_KJ590720 Diaporthe phaseolorum_JF896458 Diaporthe lusitanicae_EU814477 89 58 Diaporthe helianthi_EU878427 Diaporthe ambigua_AF230767 95 Phomopsis sclerotioides_AF439626 Diaporthe strumella var longispora_FJ889449 Diaporthe perjuncta_AY485785 87 74 Diaporthe neotheicola_EU814480 Diaporthe hickoriae_FJ889446 Diaporthe hongkongensis_KC343119 Diaporthe eres_EU805539 78 Diaporthe perniciosa_HQ908492 100 100 Phomopsis cotoneastri_FJ889450 54 Diaporthe vaccinii_AY952141 57 Diaporthe alleghaniensis_FJ889444 Phomopsis amygdali_GQ281791 82 100 Diaporthe australafricana_AF230744 Diaporthe medusaea_JQ807444 100 Diaporthe viticola_AY485750 Leucostoma cinctum_AF191170 ul nf va an lu oi lm Vị trí phân loại chủng SH3 với lồi có quan hệ họ hàng gần z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 74 si Cây phân loại chủng SH4 0.01 lu Stemphylium tomatonis_AY329229 59 Stemphylium sedicola_AY329232 57 Stemphylium vesicarium_AF442803 50 Stemphylium alfalfae_AF442775 71 Stemphylium herbarum_AY329169 Stemphylium astragali_AF442779 60 Pleospora gigaspora_AY329177 56 61 Stemphylium majusculum_AY329228 92 Stemphylium triglochinicola_AY329175 66 Stemphylium paludiscirpi_AY329231 Stemphylium loti_AY32927 58 70 Stemphylium trifolii_AY329218 Stemphylium eturmiunum_AY329230 Stemphylium botryosum_AY329168 Stemphylium solani_AF203448 Stemphylium callistephi_AF442783 80 76 Stemphylium lancipes_AY329203 Stemphylium lycopersici_JF417683 100 Stemphylium xanthosomatis_AY329206 99 Stemphylium subglobuliferum_AY751454 100 SH4 Curvularia papendorfii_KJ90977 an n va p ie gh tn to d oa nl w an lu oi lm ul nf va Vị trí phân loại chủng SH4 với lồi có quan hệ họ hàng gần z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 75 si PHỤ LỤC Bảng theo dõi động thái sinh trưởng bạch Ngày theo dõi Chiều cao Số Đường kính tán (cm) (lá) (cm) lu an n va ĐC VH1 ĐC VH1 ĐC 27/1/2015 Ngày trồng 15,33 16,44 4,20 4,30 28/2/2015 22,44±0,82 22,78±1,95 5,36±0,38 5,53±0,65 19,06±0,48 20,19±1,29 28/3/2015 53,26±3,67 47,71±5,90 5,39±0,35 5,67±0,33 43,11±1,02 45,97±1,39 28/4/2015 83,67±2,52 82,67±2,91 5,00±0,33 4,22±0,38 56,33±3,61 61,11±3,15 88,17±1,96 87,33±2,31 6,22±1,35 5,78±0,19 65,00±6,56 60,56±3,37 88,77±2,11 87,60±5,11 4,53±0,52 4,31±0,64 59,90±5,24 55,80±3,38 gh tn to VH1 p ie 28/5/2015 d oa nl w 28/6/2015 Thu hoạch oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 76 si Bảng theo dõi động thái sinh trưởng rễ củ bạch Chiều dài rễ củ (cm) Ngày theo dõi Đường kính rễ củ (cm) Khối lượng rễ củ khô (g) Tỷ lệ rễ củ Tươi/khô VH1 ĐC VH1 ĐC VH1 ĐC VH1 ĐC 4,81± 5,29± 0,87± 0,85± 0,40± 0,54± 4,18± 3,84± 0,4 0,8 0,03 0,04 0,05 0,02 0,28 0,06 12,3± 1,96± 1,55± 2,35± 1,70± 7,69± 7,52± 1,85 13,44± 1,38 0,14 0,09 0,25 0,69 1,02 0,37 16,19± 15,3± 3,79± 2,98± 33,76± 19,83± 3,01± 3,48± 3,07 3,46 0,24 0,31 3,42 9,41 0,54 0,68 21,56± 20,11± 1,83 3,68 4,07± 3,50± 66,89± 55,89± 2,67± 2,55± 0,42 0,29 15,08 15,2 0,42 0,12 22,83± 22,8± 4,87± 4,69± 87,17± 77,67± 2,53± 2,73± Thu hoạch 1,71 2,10 0,35 0,16 6,92 5,33 0,18 0,19 27/1/2015 Ngày trồng 28/2/2015 lu an 28/3/2015 n va gh tn to 28/4/2015 p ie 28/5/2015 28/6/2015 d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 77 si Phổ sắc ký đồ mẫu chất chuẩn imperatorin nồng độ 500µg/ml (a) dịch chiết MeOH mẫu rễ củ bạch BC1 nồng độ 10mg/ml (b) lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 78 si Phổ sắc ký đồ mẫu chất chuẩn imperatorin nồng độ 500µg/ml (a) dịch chiết MeOH mẫu rễ củ bạch BC2 nồng độ 10mg/ml (b) lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 79 si PHỤ LỤC Hình ảnh thử nghiệm lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 80 si