Nghiên cứu xác định glucosamin trong thực phẩm chức năng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector tái xạ bay hơi (hplc elsd)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH LÊ THỊ DUNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH GLUCOSAMIN TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR TÁN XẠ BAY HƠI (HPLC-ELSD) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGHỆ AN - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH LÊ THỊ DUNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH GLUCOSAMIN TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR TÁN XẠ BAY HƠI (HPLC-ELSD) Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60.44.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN TRUNG DŨNG NGHỆ AN - 2014 LỜI CẢM ƠN Bản luận văn thực Viện kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc Gia, 48B Tăng Bạt Hổ, Hai Bà Trưng, Hà Nội hoàn thành Trường Đại học Vinh, với hướng dẫn TS Nguyễn Trung Dũng Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới: TS Nguyễn Trung Dũng, Bộ môn Kỹ thuật Mơi trường, Khoa Hóa Lý kỹ thuật, Học viện Kỹ thuật Quân giao đề tài hết lịng hướng dẫn, bảo tận tình, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho suốt trình thực luận văn PGS.TS Nguyễn Khắc Nghĩa PGS.TS Trần Đình Thắng dành nhiều thời gian đọc viết nhận xét cho luận văn Ban lãnh đạo Viện kiểm nghiệm An toàn vệ sinh Thực phẩm Quốc Gia tạo điều kiện thuận lợi cho tơi học tập hồn thành đề tài ThS Vũ Thị Kim Oanh, ThS.Vũ Thị Trang toàn thể anh chị labo Hóa độc nhiệt tình bảo, hướng dẫn, động viên suốt trình làm thực nghiệm Các thầy, giảng dạy khoa Hóa học, đặc biệt thầy mơn Hóa Phân tích, cho tơi kiến thức quý giá, tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu môi trường khoa học, đại Và cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè quan tâm động viên tơi trình học tập thực luận văn Vinh, tháng 10 năm 2014 Học viên Lê Thị Dung MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu thực phẩm chức 1.1.1 Định nghĩa thực phẩm chức 1.1.2 Tên gọi 1.1.3 Phân biệt thực phẩm chức 1.2 Giới thiệu glucosamin 1.2.1 Cấu tạo, tính chất dạng tồn glucosamin 1.2.2 Quy trình điều chế Glucosamin hydroclorua 10 1.2.3 Tác dụng dược lý glucosamin 11 1.2.4 Tình hình sử dụng glucosamin nước giới 12 1.3 Các phương pháp tạo dẫn xuất glucosamin 15 1.4 Các phương pháp xác định glucosamin 17 1.5 Phương pháp HPLC-ELSD 28 1.5.1 Nguyên tắc hoạt động 28 1.5.2 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 29 1.6 Đánh giá (thẩm định) phương pháp phân tích 32 CHƢƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Đối tượng, mục tiêu, nội dung phương pháp nghiên cứu 37 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 37 2.1.2 Mục tiêu nghiên cứu 37 2.1.3 Nội dung nghiên cứu thực nghiệm 37 2.1.4 Phương pháp nghiên cứu 38 2.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 44 2.2.1 Thiết bị dụng cụ 44 2.2.2 Hóa chất 45 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 46 3.1 Tối ƣu điều kiện xác định glucosamin phƣơng pháp HPLC-ELSD 46 3.1.1 Tối ưu điều kiện chạy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 46 3.1.2 Tối ưu hóa detector ELSD 51 3.2 Đánh giá phương pháp phân tích 56 3.2.1 Đánh giá độ lặp lại thiết bị 56 3.2.2 Xác định khoảng tuyến tính lập phương trình đường chuẩn 58 3.2.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp 59 3.2.4 Độ lặp lại độ phương pháp 60 3.3 Kết phân tích số mẫu thực 62 KẾT LUẬN 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC 70 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân biệt thực phẩm chức thực phẩm truyền thống Bảng 1.2 Phân biệt thực phẩm chức thuốc Bảng 1.3 Cấu tạo tính chất dạng tồn glucosamin Bảng 1.4 Các phương pháp xác định glucosamin 18 Bảng 3.1 Rửa giải chất phân tích theo chế độ đẳng dòng 47 Bảng 3.2 Khảo sát chương trình gradient 49 Bảng 3.3 Khảo sát nhiệt độ ống bay 52 Bảng 3.4 Khảo sát tốc độ dịng khí mang 54 Bảng 3.5 Các điều kiện tối ưu xác định glucosamin phương pháp HPLC-ELSD 56 Bảng 3.6 Đánh giá độ lặp lại thiết bị 57 Bảng 3.7 Sự phụ thuộc diện tích píc sắc ký vào nồng độ glucosamin 58 Bảng 3.8 Độ lặp lại phương pháp mẫu TPCN dạng viên nang cứng 60 Bảng 3.9 Độ lặp lại phương pháp mẫu TPCN dạng viên nang dầu 60 Bảng 3.10 Độ lặp lại phương pháp mẫu TPCN dạng viên nang mềm 61 Bảng 3.11 Kết xác định chuẩn Fisher phương pháp HPLC ELSD AOAC 2005.01 61 Bảng 3.12 So sánh hai phương pháp HPLC-ELSD phương pháp tiêu chuẩn OAC 2005.01 62 Bảng 3.13 Kết phân tích glucosamin mẫu thực phẩm chức 63 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Các dạng cấu trúc hóa học glucosamin Hình 1.2 Bệnh thối hóa khớp người 11 Hình 1.3 Một số thực phẩm chức có chứa glucosamin 15 Hình 1.4 Sơ đồ cấu tạo hệ thống HPLC 29 Hình 1.5 Cấu tạo detector ELSD 31 Hình 2.1 Quy trình xử lý mẫu khơng chứa chất béo 39 Hình 2.2 Quy trình xử lý mẫu chứa chất béo 40 Hình 2.3 Quy trình xử lý mẫu theo phương pháp tiêu chuẩn AOAC2005.01 mẫu khơng chứa béo 41 Hình 2.4 Quy trình xử lý mẫu theo phương pháp tiêu chuẩn AOAC 2005.01 mẫu chứa béo 42 Hình 2.5 Hệ thống máy UPLC Acquity (Waters, Mỹ) 44 Hình 3.1 Sắc đồ chuẩn glucosamin 13000ppm sử dụng pha động H2O:ACN=20:80 47 Hình 3.2 Sắc đồ chuẩn glucosamin 13000ppm sử dụng pha động H2O:ACN=25:75 47 Hình 3.3 Sắc đồ chuẩn glucosamin 13000ppm sử dụng pha động H2O:ACN=30:70 48 Hình 3.4 Sắc đồ chuẩn glucosamin 1300ppm sử dụng pha động H2O:ACN=40:60 48 Hình 3.5 Sắc đồ chuẩn glucosamin 13000ppm với thành phần pha động H2O: ACN theo chương trình gradient 50 Hình 3.6 Sắc đồ chuẩn glucosamin 13000ppm với thành phần pha động H2O:ACN theo chương trình gradient 50 Hình 3.7 Sắc đồ chuẩn glucosamin 13000ppm với thành phần pha động H2O:ACN theo chương trình gradient 50 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.8 Sắc đồ chuẩn glucosamin 13000ppm với thành phần pha động H2O:ACN theo chương trình gradient 51 Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic vào nhiệt độ ống hóa 53 Hình 3.10 Sắc đồ xác định glucosamin HPLC-ELSD, nhiệt độ ống bay 55oC 53 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic vào tốc độ dịng khí mang N2 55 Hình 3.12 Sắc đồ xác định glucosamin HPLC-ELSD, tốc độ dịng khí mang 30psi 55 Hình 3.13 Sắc đồ glucosamin đánh giá độ lặp lại thiết bị 57 Hình 3.14 Sự phụ thuộc diện tích píc sắc ký vào nồng độ glucosamin từ 5,2mg/ml đến 26,0 mg/ml 58 Hình 3.15 Sắc đồ glucosamin giới hạn phát 59 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC TỪ VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt ACN Acetonitrile Acetonitril AOAC Association of Official Analytical Community Hiệp hội cộng đồng phân tích thức APCI Atmospheric pressure chemical ionization Chế độ ion hóa áp suất khí CE Capillary electrophoresis Điện di mao quản ELSD Evaporative Light Scattering Detector Detector tán xạ bay EMAE Pharmaceutical Management Agency Europe Cơ quan quản lý dược phẩm Châu Âu ESI Electrospray ionization Ion hóa phun điện tử HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao NPHPLC Normal phase high performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao pha thuận RPHPLC Reversed phase high performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo ICH International Conference on Harmonization Hội đồng hòa hợp quốc tế Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an IFIC International Food Information Council Hiệp Hội thông tin thực phẩm quốc tế ILSI International Life Science Institute Viện khoa học đời sống quốc tế LCMS/MS Liquid chromatography tandem mass spectrometry Sắc ký lỏng ghép khối phổ hai lần LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng PRSD Predicted Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối ước tính PDA Photodiode array Dãy diod quang RSD Relative standard devition Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn USFDA Food and Drug Administration Cục quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ UV Ultraviolet Tia cực tím Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 84 Hình P6.10: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 2,2131g Hình P6.11: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 2,1625g Hình P6.12: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 2,1625g Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 85 * Trên mẫu dạng viên nang mềm Hình P6.13: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 1,0050g Hình P6.14: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 0,9975g Hình P6.15: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 1,0014g Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 86 Hình P6.16: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 1,0025g Hình P6.17: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 0,9948g Hình P6.18: Trên mẫu TPCN khối lượng cân 0,9885g Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 87 Phụ lục 7: Phƣơng pháp tiêu chuẩn AOAC 2005.01 Hình P7.1: Phương trình đường chuẩn mAU 175 265nm,4nm (1.00) 150 125 /7.130/416370 50 25 /8.216/918891 75 /8.716/61242 100 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P7.2: Sắc đồ xây dựng đường chuẩn nồng độ 16,2ppm mAU 265nm,4nm (1.00) 350 300 250 /8.094/2488957 200 100 50 /8.709/40606 /6.886/1395049 150 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P7.3: Sắc đồ xây dựng đường chuẩn nồng độ 40,5ppm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 88 mAU 650 265nm,4nm (1.00) 600 550 500 450 400 /8.086/4921504 350 300 /6.880/2799594 250 200 150 100 50 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P7.4: Sắc đồ xây dựng đường chuẩn nồng độ 81,0ppm Phụ lục 8: Sắc đồ đánh giá độ xác phƣơng pháp tiêu chuẩn AOAC 2005.01 * Trên mẫu dạng viên nang cứng mAU 265nm,4nm (1.00) 150 125 /7.411/1374228 100 /6.118/824571 75 50 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Hình P8.1: Trên mẫu viên nang cứng (lần 1) mAU 250 265nm4nm (1.00) 225 200 175 150 /8.104/1675061 100 /6.917/851303 75 50 25 /8.701/74683 125 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.2: Trên mẫu viên nang cứng (lần 2) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 89 mAU 265nm,4nm (1.00) 300 250 200 /8.009/1570588 /6.777/854367 100 50 /8.699/58791 150 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.3: Trên mẫu viên nang cứng (lần 3) mAU 300 265nm4nm (1.00) 275 250 225 200 175 /8.000/1497833 125 /6.775/813253 100 75 50 25 /8.700/68374 150 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.4: Trên mẫu viên nang cứng (lần 4) mAU 650 265nm4nm (1.00) 600 550 500 450 400 350 300 /8.033/2131339 /6.818/1124402 200 150 100 50 /8.693/27573 250 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.5: Trên mẫu viên nang cứng (lần 5) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 90 mAU 325 265nm4nm (1.00) 300 275 250 225 200 175 125 /6.793/813446 100 75 50 25 /8.696/47054 /8.017/1529867 150 -25 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.6: Trên mẫu viên nang cứng (lần 6) * Trên mẫu dạng viên nang dầu mAU 700 265nm,4nm (1.00) 600 500 400 /7.453/1117163 200 /8.356/2814845 300 100 -100 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.7: Trên mẫu viên nang dầu (lần 1) mAU 600 265nm4nm (1.00) 550 500 450 400 350 300 /8.009/2589022 /6.786/1395171 200 150 100 50 /8.700/118242 250 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.8: Trên mẫu viên nang dầu (lần 2) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 91 mAU 265nm4nm (1.00) 225 200 175 /8.125/2302507 150 125 75 50 /8.714/29762 /6.925/1179492 100 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.9: Trên mẫu viên nang dầu (lần 3) mAU 265nm4nm (1.00) 225 200 175 /8.060/2222341 150 125 75 50 /8.704/41105 /6.849/1164143 100 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.10: Trên mẫu viên nang dầu (lần 4) mAU 265nm4nm (1.00) 250 225 200 175 /8.116/2467613 150 125 75 50 /8.717/71770 /6.912/1291119 100 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.11: Trên mẫu viên nang dầu (lần 5) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 92 mAU 265nm4nm (1.00) 250 225 200 175 /8.089/2356848 150 125 75 50 /8.706/157474 /6.888/1192388 100 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.12: Trên mẫu viên nang dầu (lần 6) *Trên mẫu dạng viên nang mềm mAU 265nm,4nm (1.00) 600 550 500 450 400 350 /6.837/1579933 200 /8.059/3016834 250 150 100 50 /8.750/40535 300 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.13: Trên mẫu viên nang mềm (lần 1) mAU 265nm4nm (1.00) 200 175 /8.073/2843157 150 125 75 50 /8.713/64394 /6.860/1514760 100 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.14: Trên mẫu viên nang mềm (lần 2) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 93 mAU 265nm,4nm (1.00) 225 200 /8.116/3101311 175 150 125 75 50 /8.689/28147 /6.921/1620800 100 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.15: Trên mẫu viên nang mềm (lần 3) mAU 500 265nm4nm (1.00) 450 400 350 300 /8.143/2972113 250 200 100 50 /8.708/22999 /6.950/1498257 150 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.16: Trên mẫu viên nang mềm (lần 4) mAU 265nm4nm (1.00) 275 250 225 200 /8.008/2643428 175 150 100 75 50 /8.689/68376 /6.784/1448368 125 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình P8.17: Trên mẫu viên nang mềm (lần 5) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 94 mAU 225 265nm4nm (1.00) 200 175 /8.107/2959962 150 125 75 50 /8.619/43894 /6.914/1517517 100 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Hình P8.18: Trên mẫu viên nang mềm (lần 6) Bảng P8.19: Bảng kết đánh giá độ xác phương pháp tiêu chuẩn Mẫu Viên nang cứng Viên nang dầu Viên nang mềm SD RSD (%) HorRat 3.23 2.43 0.89 5.71 3.03 1.19 1.1014 1620800 3101311 4722111 566.6746 578.4938 14.27 2.46 1.14 m (g) Sum Hlg (mg/g) Area1 Area2 TB 0.9423 824571 1374228 2198799 129.2751 0.9984 851303 1675061 2526364 138.6331 0.9987 854367 1570588 2424955 133.4471 0.9591 813253 1497833 2311086 132.9421 132.8282 1.3419 1124402 2131339 3255741 130.6831 0.9784 813446 2.2198 1117163 2814845 3932008 188.8686 2.1812 1395171 2589022 3984193 194.6352 2.2341 2.0228 1179492 2302507 4091796 194.9068 189.0000 1164143 2222341 3386484 179.9362 2.1673 1291119 2467613 3758732 185.3427 2.0298 1192388 2356848 3549236 187.4401 1.0635 1579933 3016834 4596767 571.9414 1529867 2343313 131.9884 0.9985 1514760 2843157 4357917 578.8759 0.9948 1498257 2972133 4470390 595.4389 0.9677 1448368 2643428 4091796 562.4693 0.9958 1517517 2959962 4477479 595.6527 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 95 Phụ lục 9: Sắc đồ phân tích mẫu thực Hình P9.1: Mẫu TPCN Hình P9.2: Mẫu TPCN Hình P9.3: Mẫu TPCN Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 96 Hình P9.4: Mẫu TPCN Hình P9.5: Mẫu TPCN Hình P9.6: Mẫu TPCN Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 97 Hình P9.7: Mẫu TPCN Hình P9.8: Mẫu TPCN Hình P9.9: Phân tích mẫu TPCN Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn