BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN NGỌC PHAN XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ACID CINNAMIC, CINNAMALDEHYDE, CHROMEN-2-ONE TRONG VỎ THÂN QUẾ (CINNAMOMUM CASSIA (L.) J PRESL) ĐỊNH HƯỚNG TIÊU CHUẨN HÓA DƯỢC LIỆU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN NGỌC PHAN Mã sinh viên: 1801541 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ACID CINNAMIC, CINNAMALDEHYDE, CHROMEN-2-ONE TRONG VỎ THÂN QUẾ (CINNAMOMUM CASSIA (L.) J PRESL) ĐỊNH HƯỚNG TIÊU CHUẨN HÓA DƯỢC LIỆU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Phạm Lê Minh Ths Bùi Thị Lan Phương Nơi thực hiện: Khoa Hóa phân tích - Kiểm nghiệm thuốc Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc Gia HÀ NỘI - 2023 LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp hồn thành phịng Phân tích - Kiểm nghiệm thử tương đương sinh học Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc Gia hướng dẫn, tận tình bảo TS Phạm Lê Minh ThS Bùi Thị Lan Phương Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến đến ThS Bùi Thị Lan Phương TS Phạm Lê Minh đã dành nhiều thời gian để hướng dẫn, bảo đưa những góp ý quý báu để em hoàn thiện khóa luận Em xin chân thành cảm ơn các anh chị nghiên cứu viên Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia đã tạo điều kiện tốt cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp động viên, hỗ trợ em sử dụng thiết bị thời gian thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô công tác tại Trường Đại học Dược Hà Nội đã truyền đạt những kiến thức quý báu, nền tảng để em xây dựng hoàn thiện khóa luận Sau cùng em xin xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến bạn bè, người thân gia đình đã ln ủng hộ, động viên giúp đỡ em trình học tập nghiên cứu hồn thành khóa luận Bài khóa luận không tránh khỏi những thiếu sót, đó em mong nhận ý kiến đóng góp quý báu thầy cô các bạn để kiến thức em lĩnh vực hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 23 tháng 06 năm 2023 Sinh viên Trần Ngọc Phan MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan dược liệu vỏ quế 1.1.1 Đặc điểm phân bố quế Việt Nam 1.1.2 Bộ phận dùng 1.1.3 Thành phần hoá học 1.1.4 Công dụng tác dụng sinh học 1.2 Phân tích thành phần có hoạt tính sinh học 1.2.1 Đặc điểm số chất có hoạt tính sinh học quế 1.2.2 Các nghiên cứu đánh giá chất lượng quế 1.3 Tiêu chuẩn hoá dược liệu quế nhục 1.3.1 Yêu cầu về nâng cấp chuyên luận dược điển 1.3.2 Xây dựng tiêu chuẩn 1.4 Thẩm định phương pháp phân tích 11 1.4.1 Độ chọn lọc (Độ đặc hiệu) 11 1.4.2 Độ phù hợp hệ thống 11 1.4.3 Độ tuyến tính 12 1.4.4 Độ xác 12 1.4.5 Độ 12 1.4.6 Giới hạn phát giới hạn định lượng 13 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Hóa chất 14 2.1.3 Chất đối chiếu 14 2.1.4 Thiết bị 14 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Lựa chọn điều kiện phân tích 15 2.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 16 2.3.3 Ứng dụng phương pháp định lượng mẫu vỏ quế, từ đó định hướng tiêu chuẩn hóa dược liệu 18 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Lựa chọn marker tiêu chuẩn hóa dược liệu điều kiện sắc ký 20 3.1.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký 20 3.1.2 Lựa chọn marker tiêu chuẩn hóa dược liệu 22 3.2 Thẩm định phương pháp 24 3.2.1 Độ chọn lọc 24 3.2.2 Độ phù hợp hệ thống 25 3.2.3 Độ tuyến tính 26 3.2.4 Độ xác 28 3.2.5 Độ 29 3.2.6 Giới hạn phát giới hạn định lượng 31 3.3 Ứng dụng phương pháp định lượng mẫu vỏ quế, từ định hướng tiêu chuẩn hóa dược liệu 32 3.3.1 Cỡ mẫu nghiên cứu 32 3.3.2 Xác định độ ẩm 32 3.3.3 Xây dựng tiêu chuẩn hàm lượng coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd vỏ quế 33 3.4 Bàn luận 37 3.4.1 Xây dựng phương pháp phân tích coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd bằng HPLC 37 3.4.2 Thẩm định phương pháp phân tích 39 3.4.3 Ứng dụng phương pháp phân tích mẫu vỏ quế từ đó định hướng tiêu chuẩn hóa dược liệu 39 3.4.4 Đề xuất xây dựng dự thảo tiêu chuẩn 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril CA Acid cinnamic CAL Cinnamaldehyd CALC Cinamyl alcohol CM Coumarin HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High performance liquid chromatography) LOD Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of Quantification) MCA 2-methoxycinnamic acid MCAL 2-methoxycinnamaldehyd MeOH Methanol PCAB2 Procyanidin B2 QNa Quảng Nam QNi Quảng Ninh Rs Độ phân giải (Resolution) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) SKĐ Sắc ký đờ STT Số thứ tự TB Trung bình TH Thanh Hóa TLTK Tài liệu tham khảo tR Thời gian lưu (Retention time) USP Dược điển Mỹ (United States Pharmacopeia) UV Tử ngoại (Ultraviolet) v/v Thể tích/ thể tích WHO Tổ chức Y tế Thế giới (World Health Organization) YB Yên Bái DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số phương pháp định lượng các thành phần hóa học quế bằng HPLC…6 Bảng 1.2 Yêu cầu chất lượng dược liệu vỏ quế Dược điển các nước Bảng 3.1 Các chương trình gradient khảo sát 20 Bảng 3.2 Chương trình gradient sắc ký 21 Bảng 3.3 Thông số sắc ký hệ gradient khảo sát 22 Bảng 3.4 Kết khảo sát sơ hàm lượng chất vỏ quế 23 Bảng 3.5 Kết độ đặc hiệu 25 Bảng 3.6 Độ phù hợp hệ thống coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd 25 Bảng 3.7 Kết khảo sát khoảng tuyến tính coumarin, acid cinnamic 26 Bảng 3.8 Phương trình đường chuẩn coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd 27 Bảng 3.9 Kết phân tích độ lặp lại ngày khác ngày định lượng đồng thời coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd 28 Bảng 3.10 Kết phân tích độ lặp lại ngày khác ngày định lượng đồng thời coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd 28 Bảng 3.11 Nồng độ các mức thêm chuẩn 29 Bảng 3.12 Kết độ thu hồi coumarin 29 Bảng 3.13 Kết độ thu hồi acid cinnamic 30 Bảng 3.14 Kết độ thu hồi cinnamaldehyd 30 Bảng 3.15 Kết khảo sát LOD LOQ phương pháp 31 Bảng 3.16 Thông tin chung mẫu vỏ quế nghiên cứu 32 Bảng 3.17 Kết hàm lượng các chất mẫu quế Yên Bái 33 Bảng 3.18 Kết hàm lượng các chất mẫu quế Quảng Nam 34 Bảng 3.19 Kết hàm lượng các chất mẫu quế Quảng Ninh 34 Bảng 3.20 Kết hàm lượng các chất mẫu quế Thanh Hóa 34 Bảng 3.21 Kết xác định hàm lượng coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd vỏ quế theo các tỉnh 35 Bảng 3.22 Kết hàm lượng các chất theo loại quế, năm thu hái bề dày 36 DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ ĐỜ THỊ Hình 1.1 Công thức cấu tạo acid cinnamic Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo cinnamaldehyd Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo coumarin (chromen-2-on) Hình 3.1 Sắc ký đờ hệ gradient khảo sát sát 21 Hình 3.2 Sắc ký đờ dung dịch hỗn hợp chuẩn hệ gradient 21 Hình 3.3 Sắc ký đờ dung dịch hỗn hợp chuẩn 22 Hình 3.4 Sắc ký đờ hỗn hợp chuẩn mẫu thử 22 Hình 3.5 Sắc ký đờ đánh giá độ chọn lọc phương pháp 24 Hình 3.6 Độ tinh khiết coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd mẫu thử 24 Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ diện tích pic 27 Hình 3.8 Sắc ký đờ khảo sát LOD phương pháp 32 Hình 3.9 Sắc ký đờ mẫu thử đại diện các tỉnh 33 Hình 3.10 Hàm lượng coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd giữa các tỉnh 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Quế có tên khoa học Cinnamomum cassia, sử dụng nhiều sống hàng ngày loại gia vị Quế đã dùng y học cổ truyền từ hàng nghìn năm trước Dùng q́ giúp điều trị, phịng chống số bệnh như: Kích thích tiêu hóa, sát khuẩn, kích thích thần kinh, chống chứng huyết khối, chống viêm chống dị ứng [10] Từ ngàn xưa, dược liệu đã coi vị thuốc quý, quế Tứ đại danh dược: Sâm Nhung - Quế - Phụ Ngày nay, quế dùng thuốc cổ truyền loại thực phẩm chức Nhiều nghiên cứu đã rằng, quế có chứa nhiều thành phần hóa học khác dẫn xuất terpenoid, phenyl propanoid, glycosid, lignan, lacton…[15] Trong đó hàm lượng phenylpropanoid có quế coi quyết định mùi hương, vị tác dụng sinh học quế Việt Nam nước có sản lượng mặt hàng quế xuất lớn thứ thế giới sau Trung Quốc Indonesia với diện tích trồng trải dài từ bắc vào nam Đây ngành hàng có giá trị kinh tế lớn nhiên lại chưa trọng nhiều về vấn đề chuẩn hoá chất lượng Dược điển Trung Quốc [14], Bộ tiêu chuẩn dược liệu Hồng Kông [20] sử dụng HPLC để định lượng số thành phần vỏ quế (quế nhục) quế cành (quế chi) Dược điển Việt Nam V [2] quy định hàm lượng tinh dầu chưa có quy định về hàm lượng thành phần cụ thể Từ thực tế đó cho thấy, tiêu hàm lượng thành phần hoá học quế cần thiết cho xu thế hội nhập quốc tế tiêu chuẩn hoá dược liệu Phương pháp HPLC phương pháp phân tích đại cho giá trị xác cao thực với hầu hết phòng kiểm nghiệm Việc phát triển phương pháp HPLC để đánh giá chất lượng vỏ quế phục vụ tiêu chuẩn hóa dược liệu cần thiết Acid cinnamic, cinnamaldehyd chất đặc trưng có hoạt tính sinh học quế [26] ; coumarin có nguy gây độc cho gan) [18] quan tâm Do đó tiến hành đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng acid cinnamic, cinnamaldehyd, chromen-2-on vỏ thân quế (Cinnamomum cassia (L.) J Presl) định hướng tiêu chuẩn hóa dược liệu” thực với mục tiêu: ➢ Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng cinnamic acid, cinnamaldehyd chromen-2-on (coumarin) vỏ thân quế (C cassia) Việt Nam ➢ Ứng dụng phương pháp phân tích để định lượng acid cinnamic, cinnamaldehyd chromen-2-on (coumarin) mẫu vỏ quế thu hái tỉnh, từ định hướng tiêu chuẩn hóa dược liệu Quế Việt Nam CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan dược liệu vỏ quế 1.1.1 Đặc điểm phân bố quế Việt Nam Quế loài đặc sản riêng vùng nhiệt đới, thích hợp với điều kiện khí hậu nóng ẩm, nhiệt độ thích hợp cho sinh trưởng phát triển 20-30 ºC Lượng mưa thích hợp cho sinh trưởng phát triển 2000-3000 mm/năm, độ ẩm 85 % Quế mọc nhiều loại đất có ng̀n gốc đá mẹ khác nhau, đất ẩm nhiều mùn, tới xốp, đất đỏ, đất cát pha, đất đồi núi, đất chua, đất nghèo dinh dưỡng thoát nước Quế gỗ ưa sáng giai đoạn cịn non cần che bóng [8] Điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng kỹ thuật canh tác vùng khác khác thế chất lượng quế các địa phương khác Theo tài liệu, quế có Việt Nam cách khoảng 2000 năm, các triều đại phong kiến đã coi “quế Giao Chỉ” (Giao Chỉ tên nước Việt Cổ) sản vật quý để trao đổi triều cống Ở nước ta, Quế trờng tỉnh miền núi phía bắc, phân bố rải rác đến miền nam, gồm tỉnh Quảng Ninh, Cao Bằng, Bắc Kạn, Thái Nguyên, Bắc Giang, Lào Cai, Yên Bái, Hà Giang, Tuyên Quang, Hà Tây, Ninh Bình, Thanh Hố, Nghệ An, Hà Tĩnh, Quảng Bình, Quảng Nam, Quảng Ngãi, Khánh Hoà, Bà Rịa-Vũng Tàu Trong đó có số vùng trờng Q́ tập trung đã hình thành từ lâu đời: Yên Bái (gần 81000 ha); Quảng Ninh (diện tích 6000 ha); Thanh Hóa (Thường Xuân với diện tích 2000 ha); Quảng Nam (Trà My, Phước Sơn với diện tích 3760 ha) Quảng Ngãi (Trà Bồng với diện tích 4000 ha) Đặc điểm dược liệu quế Việt Nam: - Vỏ quế thường có các nốt sần nhỏ, bên có màu xám xanh, có vết loang địa y - Bên lòng vỏ quế có màu vàng nhạt đến vàng sậm - Vỏ quế thân, bột quế có mùi thơm nồng đặc trưng không ngái có vị cay pha lẫn vị đắng nhẹ - Chất lượng quế có khác giữa từng vùng: Quế Văn Yên có độ ẩm thấp, số khúc xạ tinh dầu cao hàm lượng cinnamaldehyd cao Quế Quảng Ninh có hàm lượng coumarin thấp so với các vùng khác 1.1.2 Bộ phận dùng Vỏ thân, vỏ cành non phơi sấy khô Vỏ thân phơi khô bóng râm (Quế nhục) Tinh dầu từ cành [10] Ngày nay, người ta sử dụng nhiều phận quế để phục vụ đời sống sản xuất vỏ, lá, rễ, cành Tuy nhiên, vỏ quế phận coumarin, trans-cinnamic acid, trans-cinnamaldehyde, and eugenol in encapsulated cinnamon flavoring powder", Journal of AOAC International, 103, pp 1394-1399 14 Chinese Pharmacopiea Commission (2015), "Pharmacopeia of the people's republic of China", I, pp 136-137 15 Chunling Zhang et al (2019), "Cinnamomum cassia Presl: A Review of Its Traditional Uses, Phytochemistry, Pharmacology and Toxicology", Molecules 24(19), pp 3473 16 EFSA (2008), "Coumarin in Flavourings and Other Food Ingredients with Flavouring Properties: Scientific Opinion of the Panel on Food Additives, Flavourings, Processing Aids and Materials in Contact with Food (AFC)", EFSA Journal, 104, pp 1– 36 17 Garg Sourbh Suren, Gupta Jeena, Sharma Shikha, et al (2020), "An insight into the therapeutic applications of coumarin compounds and their mechanisms of action", European Journal of Pharmaceutical Sciences, 152, pp 105424 18 Geng Shi-Lei, Cui Zhao-Xue, Shu Bin, et al (2012), "Histochemistry and cell wall specialization of oil cells related to the essential oil accumulation in the bark of Cinnamomum cassia Presl.(Lauraceae)", Plant Production Science, 15(1), pp 1-9 19 Geng Shilei, Cui Zhaoxue, Huang Xinchao, et al (2011), "Variations in essential oil yield and composition during Cinnamomum cassia bark growth", Industrial crops products33(1), pp 248-252 20 Government of Hong Kong Special Administrative Region (2015), Hong Kong Chinese Materia Medica Standards,, Hong Kong, pp 226-236 21 Hajimonfarednejad Mahdie, Nimrouzi Majid, Heydari Mojtaba, et al (2018), "Insulin resistance improvement by cinnamon powder in polycystic ovary syndrome: A randomized double‐blind placebo controlled clinical trial", Phytotherapy Research, 32(2), pp 276-283 22 Harada M, Ozaki Y (1972), "Pharmacological studies on Chinese cinnamon I Central effects of cinnamaldehyde", Pharm Soc Jap J, pp 23 ICH GUIDELINE (2005), Q2 (R1) validation of analytical procedures: text and methodology, pp 1-17 24 Iwata N (2021), Simultaneous Quantitative Analysis of Coumarin and Cinnamaldehyde in Cinnamon Produced in Different Regions, Shimadzu Excellence in Science 25 Jakhetia Vaibhavi, Patel Rakesh, Khatri Pankaj, et al (2010), "Cinnamon: a pharmacological review", Journal of advanced scientific research, 1(02), pp 19-23 26 Kurita Nobuyuki, Miyaji Makoto, Kurane Ryuichiro, et al (1979), "Antifungal activity and molecular orbital energies of aldehyde compounds from oils of higher plants", Agricultural Biological Chemistry, 43(11), pp 2365-2371 27 Ma Wei-Bin, Feng Jun-Tao, Jiang Zhi-Li, et al (2014), "Fumigant activity of selected essential oil compounds and combined effect of methyl salicylate and transcinnamaldehyde against Culex pipiens pallens", Journal of the American Mosquito Control Association, 30(3), pp 199-203 28 Momtaz Saeideh, Hassani Shokoufeh, Khan Fazlullah, et al (2018), "Cinnamon, a promising prospect towards Alzheimer’s disease", Pharmacological research, 130, pp 241-258 29 National Center for Biotechnology Information https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Coumarin (2022), " Coumarin.", 30 National Center for Biotechnology Information (2022), ", Cinnamic acid.", https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Cinnamic-acid 31 National Center for Biotechnology Information (2022), " Cinnamaldehyde.", https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Cinnamaldehyde 32 Ooi Linda SM, Li Yaolan, Kam Sheung-Lau, et al (2006), "Antimicrobial activities of cinnamon oil and cinnamaldehyde from the Chinese medicinal herb Cinnamomum cassia Blume", The American journal of Chinese medicine, 34(03), pp 511-522 33 Shreaz Sheikh, Wani Waseem A, Behbehani Jawad M, et al (2016), "Cinnamaldehyde and its derivatives, a novel class of antifungal agents", Fitoterapia, 112, pp 116-131 34 Silva Maria Leonor, Bernardo Maria Alexandra, Singh Jaipaul, et al (2022), "Cinnamon as a complementary therapeutic approach for dysglycemia and dyslipidemia control in type diabetes mellitus and its molecular mechanism of action: A review", Nutrients, 14(13), pp 2773 35 United States Pharmacopeial Convention (2020), United States Pharmacopeia (USP43), Cinnamomun Cassia Bark, Cinnamomum Cassia Twig, pp 4902 – 4904 36 Vasconcelos NG, Croda J, Simionatto S (2018), "Antibacterial mechanisms of cinnamon and its constituents: A review", Microbial pathogenesis, 120, pp 198-203 37 Vogt Thomas (2010), "Phenylpropanoid biosynthesis", Molecular plant, 3(1), pp 220 38 WHO Expert commitee (2017), WHO guidelines for selecting marker substances of herbal origin for quality control of herbal medicines, WHO Technical Report Series, pp 77-83 39 WHO Expert Committee on Specifications for Pharmaceutical Preparations Annex Good pharmacopoeial practices: Chapter on monographs on herbal medicines, pp 245 40 World Health Organization (1999), WHO monograph on selected medicinal plants, pp 94 41 Yilmaz SEVDAN, Sova Matej, Ergün Sebahattin (2018), "Antimicrobial activity of trans‐cinnamic acid and commonly used antibiotics against important fish pathogens and nonpathogenic isolates", Journal of Applied Microbiology, 125(6), pp 1714-1727 Tiếng Trung 43 《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求, 国家药典委员会 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Sắc ký đồ thẩm định phương pháp 1.1 Sắc ký đồ chuẩn đơn, chuẩn hỗn hợp, chồng phổ UV 1.2 Sắc ký đồ độ tuyến tính 1.3 Sắc ký đồ độ thích hợp hệ thống Phụ lục 2: Kết quả định lượng coumarin, acid cinnamic, cinnamaldehyd mẫu thử 1.1 Kết định lượng Yên Bái 1.2 Kết định lượng Quảng Nam 1.3 Kết định lượng Quảng Ninh 1.4 Kết định lượng Thanh Hóa 1.5 Kết HPLC định lượng các mẫu thử PHỤ LỤC 1: SẮC KÝ ĐỒ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 1.1 Sắc ký đồ chuẩn đơn, chuẩn hỗn hợp, chồng phổ UV Coumarin Acid cinnamic Cinnamaldehyd Hỗn hợp chuẩn Chồng phổ UV Coumarin Acid cinnamic Cinnamaldehyd 1.2 Độ tuyến tính S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S10 S9 Phương trình đường chuẩn TT Nờng độ µg/ml Coumarin Diện tích pic (mAu.s) Bias (%) Acid cinnamic Nờng Diện tích độ pic µg/ml (mAu.s) Bias (%) 2,25 209058 0,4 Cinnamaldehyd Nờng Diện tích Bias độ pic (%) µg/ml (mAu.s) 8,09 366204 1,9 2,99 277530 -0,2 20,22 924708 0,3 7,49 699371 0,0 32,88 4501500 3,6 40,44 1873415 -1,3 14,97 1416579 1,1 65,76 8902593 0,6 60,67 2756029 0,6 22,46 2084761 -0,8 98,65 13082756 1,3 80,89 3673597 0,6 29,95 2778816 -0,9 131,53 17456832 0,5 161,78 7388942 0,02 59,89 5622624 0,2 263,06 34961573 -0,7 202,22 9284088 -0,5 74,86 7047276 0,5 328,82 43803304 -1,2 242,66 11099014 -0,1 89,84 8424149 0,1 394,59 52139590 -0,5 10 323,55 14743728 0,2 119,78 11203450 -0,2 526,11 68486846 0,8 R y =45660 x + 3704,3 1,0000 y = 93740 x – 2742,4 1,0000 y = 130563 x + 364434 0,9998 1.3 Sắc ký đồ độ phù hợp hệ thống PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG COUMARIN, ACID CINNAMIC, CINNAMALDHEYD TRONG MẪU THỬ 2.1 Kết quả định lượng Yên Bái 2022 STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Mẫu 22.1.8.YB.DC-01 22.1.8.YB.DP-01 22.1.8.YB.LTh-02 22.1.8.YB.MV-01 22.1.8.YB.NHa-01 22.1.8.YB.PDH-06 22.1.8.YB.PDT-01 22.1.8.YB.VS-02 22.1.8.YB.YPh-08 22.2.8.YB.DS-01 22.2.8.YB.MV-03 22.2.8.YB.PDH-01 22.2.8.YB.PDH-05 22.2.8.YB.YPh-01 22.1.8.YB.DP-03 22.1.8.YB.DS-03 22.1.8.YB.MA-05 22.1.8.YB.MA-06 22.1.8.YB.MD-04 22.1.8.YB.MV-02 22.1.8.YB.XA-01 22.1.8.YB.XTa-01 22.1.8.YB.YHo-03 22.2.8.YB.DS-02 22.2.8.YB.MA-09 22.2.8.YB.MV-05 22.2.8.YB.PDH-04 22.2.8.YB.VS-01 22.2.8.YB.XA-04 22.2.8.YB.YT-01 22.2.8.YB.YPh-02 22.2.8.YB.XTa-02 Bề dày (mm) 1,60 1,86 1,38 5,20 1,42 2,60 1,64 2,34 2,30 3,50 2,50 2,08 2,40 2,58 1,76 5,86 1,74 2,42 1,20 2,26 2,90 5,08 1,80 2,64 2,60 4,32 2,70 1,86 8,10 2,10 1,88 2,10 Độ ẩm (%) 11,2 10,7 8,9 10,8 11,5 10,9 11,8 13,3 11,1 12,0 11,2 10,3 12,4 10,9 11,5 11,8 10,5 11,8 11,4 13,5 11,6 11,2 11,4 11,2 11,6 11,4 10,9 11,5 9,7 11,1 11,4 11,9 Hàm lượng (%) Acid Coumarin Cinnamaldehyd cinnamic 0,30 0,01 1,44 0,17 0,03 1,36 0,66 0,02 5,03 2,16 0,06 4,95 0,88 0,03 2,82 0,60 0,03 2,98 0,39 0,04 3,44 0,56 0,03 4,62 0,31 0,03 2,44 0,50 0,01 2,88 1,00 0,02 3,32 0,60 0,04 5,71 0,70 0,03 4,25 1,05 0,03 4,78 1,56 0,09 3,66 0,90 0,09 3,11 0,46 0,05 2,09 1,95 0,05 5,40 0,98 0,10 2,46 0,16 0,07 4,88 0,28 0,12 4,76 0,71 0,05 3,28 0,68 0,11 4,83 1,55 0,04 3,55 0,43 0,09 3,52 0,71 0,05 3,85 0,55 0,05 4,89 1,52 0,05 4,62 1,79 0,15 6,16 1,49 0,03 3,81 0,81 0,03 3,26 2,15 0,07 2,80 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 56 58 59 60 61 62 63 64 65 22.2.8.YB.CQH-01 22.1.8.YB.TH-02 22.1.8.YB.QTh-01 22.1.8.YB.QM-01 22.1.8.YB.NA-06 22.1.8.YB.DAn-03 22.1.8.YB.CQH-02 22.1.8.YB.AT-02 22.1.8.YB.AB-02 22.1.8.YB.MA-02 22.1.8.YB.MA-03 22.1.8.YB.MA-04 22.1.8.YB.PDH-02 22.1.8.YB.PDH-06 22.1.8.YB.XA-02 22.1.8.YB.XA-07 22.1.8.YB.AT-01 22.1.8.YB.NA-01 22.2.8.YB.AB-01 22.2.8.YB.YPh-07 22.2.8.YB.CQH-03 22.1.8.YB.YPh-06 22.1.8.YB.VS-03 21.1.8.YB-13 21.1.8.YB-24 21.1.8.YB-38 21.1.8.YB.41 21.1.8.YB-40 21.1.8.YB.42 21.1.8.YB.43 21.1.8.YB.44 21.1.8.YB.47 21.1.8.YB-48 2,40 1,48 1,56 1,10 2,26 3,50 2,80 1,88 2,10 1,94 1,78 3,20 1,40 2,60 1,20 2,66 2,16 3,24 2,40 1,14 1,30 2,06 4,22 5,00 2,56 1,30 1,50 2,10 1,48 2,40 1,38 3,20 2,00 10,8 8,9 9,9 12,5 9,8 13,1 11,5 12 10,8 11,9 10,8 14,5 13,5 11,1 11,3 9,8 11,4 11,3 11,9 11,1 12,1 12,2 11,4 10,2 10,4 10,7 10.7 11,9 10,9 12,3 11,7 10,8 14,4 0,50 0,61 0,43 0,80 0,98 1,55 2,58 1,16 1,31 0,22 0,54 1,49 0,17 0,66 0,56 0,43 0,17 1,43 0,79 1,05 0,07 0,32 0,59 2,57 0,69 0,43 0,13 2,04 1,02 1,45 1,65 0,77 1,007 0,09 0,04 0,05 0,06 0,06 0,09 0,05 0,07 0,12 0,04 0,04 0,13 0,02 0,07 0,05 0,04 0,15 0,02 0,06 0,06 0,16 0,05 0,11 0,09 0,04 0,05 0,09 0,06 0,08 0,09 0,06 0,03 0,04 2,64 2,91 3,29 3,19 3,23 5,04 5,33 4,55 3,82 2,31 2,59 4,80 2,36 3,41 3,36 2,40 3,72 3,72 3,13 3,82 3,86 2,36 3,97 9,83 3,75 5,53 4,60 5,21 4,37 3,30 4,01 3,10 4,59 2.2 Kết quả định lượng Quảng Nam 2022 STT mẫu bề dày (mm) Độ ẩm (%) Coumarin Hàm lượng (%) Acid Cinnamaldehyd cinnamic 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 2.3 STT 10 22.1.8.QNa-07 22.1.8.QNa-12 22.1.8.QNa-14 22.1.8.QNa-15 22.1.8.QNa-19 22.1.8.QNa-20 22.1.8.QNa-22 22.1.8.QNa-26 22.1.8.QNa-27 22.1.8.QNa-28 22.1.8.QNa-29 22.1.8.QNa-30 21.1.8.QNa-02 21.1.8.QNa-04 21.1.8.QNa-06 21.1.8.QNa-10 21.1.8.QNa-15 21.1.8.QNa-17 21.1.8.QNa-20 21.1.8.QNa-21 21.1.8.QNa-24 21.1.8.QNa-25 3,72 5,16 4,12 4,10 6,14 5,50 5,70 4,40 3,94 7,10 2,50 4,62 4,72 3,84 5,04 4,10 4,02 3,84 4,90 2,10 2,54 5,70 13,9 13,6 12,3 13,4 13,0 11,9 13,4 12,9 13,1 12,1 13,9 13,2 11,9 11,9 11,7 12,4 11,6 11,1 11,3 11,4 12,1 12,3 0,73 0,46 0,42 0,81 0,96 1,06 1,51 0,64 0,96 1,66 0,93 1,00 0,59 0,17 0,64 0,87 0,37 0,39 0,64 0,66 0,32 0,99 0,10 0,07 0,04 0,05 0,08 0,07 0,10 0,07 0,05 0,03 0,14 0,19 0,05 0,09 0,08 0,05 0,06 0,07 0,05 0,05 0,05 0,10 6,05 3,56 3,41 5,71 5,50 2,15 5,74 4,20 4,11 2,71 6,04 3,15 3,55 3,11 5,92 6,27 2,24 2,46 2,36 5,18 3,28 7,84 Kết quả định lượng Quảng Ninh mẫu 21.1.8.QNi-03 21.1.8.QNi-04 21.1.8.QNi-05 21.1.8.QNi-06 21.1.8.QNi-07 21.1.8.QNi-10 21.1.8.QNi-14 21.1.8.QNi-17 21.1.8.QNi-18 21.1.8.QNi-37 bề dày (mm) 2,36 2,60 4,00 2,80 2,60 3,14 2,56 2,80 1,90 2,30 Độ ẩm (%) 11,0 11,0 10,7 10,3 11,4 10,5 9,3 11,9 12,5 12,4 Coumarin 0,10 0,07 0,18 0,13 0,15 0,13 0,08 0,06 0,09 0,07 Hàm lượng (%) Acid Cinnamaldehyd cinnamic 0,07 2,42 0,06 2,04 0,06 2,60 0,07 2,20 0,08 2,87 0,07 2,33 0,06 2,00 0,07 2,13 0,07 2,80 0,07 2,02 2.4 STT 2.5 STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Kết quả định lượng Thanh hóa mẫu 21.1.8.TH-01 21.1.8.TH-02 21.1.8.TH-03 21.1.8.TH-04 21.1.8.TH-05 bề dày (mm) Độ ẩm (%) Coumarin 1,26 1,02 1,30 1,90 1,80 21,5 24,3 29,9 14,1 20,5 0,27 0,16 0,15 0,27 0,29 Hàm lượng (%) Acid Cinnamaldehyd cinnamic 0,41 1,24 0,23 0,96 0,24 0,92 0,30 1,26 0,36 1,43 Kết quả HPLC định lượng các mẫu thử mẫu 21.1.8.QNa-02 21.1.8.QNa-04 21.1.8.QNa-06 21.1.8.QNa-10 21.1.8.QNa-15 21.1.8.QNa-17 21.1.8.QNa-20 21.1.8.QNa-21 21.1.8.QNa-24 21.1.8.QNa-25 21.1.8.QNi-03 21.1.8.QNi-04 21.1.8.QNi-05 21.1.8.QNi-06 21.1.8.QNi-07 21.1.8.QNi-10 21.1.8.QNi-14 21.1.8.QNi-17 21.1.8.QNi-18 21.1.8.QNi-37 21.1.8.TH-01 21.1.8.TH-02 21.1.8.TH-03 Coumarin Diện tích tR pic (mAU.s) 23,279 1896723 23,286 545669 23,193 2519813 23,236 2751076 23,206 1498995 23,235 1602682 23,135 2670840 23,136 2651587 23,276 1069580 23,266 3195488 23,258 310307 23,084 286805 23,261 587579 23,247 440643 23,266 494247 23,264 425825 22,878 330167 23,114 255796 23,061 347844 23,148 273335 23,193 930414 23,131 554846 23,097 468679 Acid cinnamic Diện tích tR pic (mAU.s) 26,346 360352 26,356 648277 26,256 663030 26,314 383084 26,27 460026 26,298 612999 26,201 426678 26,185 410542 26,339 380843 26,339 750323 26,337 529863 26,142 474329 26,342 453555 26,334 519556 26,347 594859 26,342 553813 25,991 510696 25,967 570893 26,153 596789 26,24 555240 26,3 1283473 26,226 706578 26,198 674419 Cinnamaldehyde Diện tích tR pic (mAU.s) 29,551 34946040 29,567 30425595 29,46 67254080 29,51 60806412 29,482 26094485 29,513 29364509 29,402 28229244 29,376 59601166 29,542 33014612 29,542 77563124 29,54 23997086 29,341 24057990 29,545 25994333 29,538 21990885 29,55 28921544 29,545 23334500 29,135 24015180 29,287 25216928 29,342 31972074 29,455 23698624 29,496 10521230 29,413 7934656 29,378 6998026 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 21.1.8.TH-04 21.1.8.TH-05 21.1.8.YB.41 21.1.8.YB.42 21.1.8.YB.43 21.1.8.YB.44 21.1.8.YB.47 21.1.8.YB-13 21.1.8.YB-24 21.1.8.YB-38 21.1.8.YB-40 21.1.8.YB-48 22.1.8.QNa-07 22.1.8.QNa-12 22.1.8.QNa-14 22.1.8.QNa-15 22.1.8.QNa-19 22.1.8.QNa-20 22.1.8.QNa-22 22.1.8.QNa-26 22.1.8.QNa-27 22.1.8.QNa-28 22.1.8.QNa-29 22.1.8.QNa-30 22.1.8.YB.AB-02 22.1.8.YB.AT-01 22.1.8.YB.AT-02 22.1.8.YB.CQH-02 22.1.8.YB.DAn-03 22.1.8.YB.DC-01 22.1.8.YB.DP-01 22.1.8.YB.DP-03 22.1.8.YB.DS-03 22.1.8.YB.LTh-02 22.1.8.YB.MA-02 22.1.8.YB.MA-03 22.1.8.YB.MA-04 22.1.8.YB.MA-05 23,127 23,12 23,227 23,247 23,227 23,228 23,267 23,274 23,278 23,274 23,258 23,272 23,263 23,263 23,226 23,279 23,202 23,145 23,269 23,11 23,12 23,092 23,27 23,099 23,235 23,24 23,042 23,107 22,937 23,276 23,262 23,06 23,116 23,29 23,23 23,249 23,241 23,085 1024349 1041249 570082 4054479 5750794 6598958 3227049 8498681 2279463 1431678 6658336 3322054 2305376 1477161 1336008 2621019 3848787 4209854 4800504 2533272 3909354 6575786 2975030 4052346 5354039 685858 4564985 10660183 6107593 1218187 695643 6256533 3680453 2773745 919059 2280951 5863645 1947556 26,237 26,23 26,318 26,327 26,309 26,312 26,351 26,35 26,348 26,34 26,334 26,343 26,333 26,347 26,302 26,356 26,215 26,185 26,346 26,172 26,187 26,162 26,349 26,172 26,284 26,31 26,12 26,156 26,035 26,328 26,332 26,137 26,177 26,324 26,301 26,302 26,294 26,146 1044860 1156009 746341 638978 739969 521147 278338 671023 295627 384617 451123 312298 713063 510568 313828 373431 623435 560052 723516 584479 415075 232297 1041870 1591630 903438 1228421 593377 435490 747713 225427 403844 702534 715070 375641 273909 334743 892968 449087 29,423 29,416 29,498 29,51 29,488 29,49 29,54 29,549 29,555 29,547 29,535 29,549 29,535 29,556 29,498 29,566 29,422 29,391 29,549 29,358 29,38 29,349 29,557 29,36 29,48 29,487 29,301 29,347 29,207 29,544 29,549 29,324 29,367 29,54 29,5 29,501 29,49 29,337 11592960 12263793 56075139 50146716 37743659 46218330 37611534 99420383 37778372 55659574 51857761 46231179 58719244 35004547 33116392 56258530 63098877 24772887 55678081 48037702 48063998 30997032 58727641 36663104 38230150 42985731 51545047 63460276 57244139 16996037 15872434 42364379 36522630 61148120 23304180 26553717 46059365 25473937 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 22.1.8.YB.MA-06 22.1.8.YB.MD-04 22.1.8.YB.MV-01 22.1.8.YB.MV-02 22.1.8.YB.NA-01 22.1.8.YB.NA-06 22.1.8.YB.NHa-01 22.1.8.YB.PDH-02 22.1.8.YB.PDH-06 22.1.8.YB.PDH-06 22.1.8.YB.PDT-01 22.1.8.YB.QM-01 22.1.8.YB.QTh-01 22.1.8.YB.TH-02 22.1.8.YB.VS-02 22.1.8.YB.VS-03 22.1.8.YB.XA-01 22.1.8.YB.XA-02 22.1.8.YB.XA-07 22.1.8.YB.XTa-01 22.1.8.YB.YHo-03 22.1.8.YB.YPh-06 22.1.8.YB.YPh-08 22.2.8.YB.AB-01 22.2.8.YB.CQH-01 22.2.8.YB.CQH-03 22.2.8.YB.DS-01 22.2.8.YB.DS-02 22.2.8.YB.MA-09 22.2.8.YB.MV-03 22.2.8.YB.MV-05 22.2.8.YB.PDH-01 22.2.8.YB.PDH-04 22.2.8.YB.PDH-05 22.2.8.YB.VS-01 22.2.8.YB.XA-04 22.2.8.YB.XTa-02 22.2.8.YB.YPh-01 23,158 22,988 23,254 23,012 23,253 23,185 23,251 23,217 23,224 23,264 23,261 23,074 23,276 23,25 23,272 23,126 23,255 23,227 23,241 22,875 23,069 23,143 23,269 23,259 23,12 23,125 23,271 23,012 23,157 23,146 23,107 23,266 23,135 23,259 22,95 23,256 23,11 23,273 8055192 3925865 8739356 626748 5924641 4031209 3555909 671593 2725340 2446210 1578009 3207372 1869410 2538787 2316645 2336814 1171707 2267714 1808900 2877489 2733194 1262507 1272231 3180518 2090564 276331 1989801 6230207 1782919 4237391 2877732 2450443 2250299 2905122 6049968 7369867 8674910 4317739 26,221 26,058 26,323 26,024 26,32 26,224 26,321 26,287 26,287 26,326 26,325 26,127 26,319 26,297 26,325 26,221 26,33 26,298 26,294 25,99 26,128 26,226 26,323 26,33 26,176 26,221 26,328 26,066 26,212 26,206 26,179 26,325 26,181 26,329 26,062 26,328 26,159 26,324 385625 791081 998434 572699 180268 530965 539858 124263 530501 481539 635120 488209 437163 335549 531527 376693 972029 334357 268320 380450 940028 187531 515215 499994 761966 556510 199889 318066 781684 271739 388370 667486 449793 419406 422915 1300039 568914 411593 29,406 29,231 29,538 29,174 29,498 29,422 29,536 29,484 29,484 29,542 29,541 29,322 29,543 29,508 29,541 29,405 29,537 29,501 29,491 29,144 29,298 29,41 29,539 29,51 29,355 29,405 29,542 29,253 29,403 29,394 29,365 29,541 29,362 29,545 29,23 29,538 29,347 29,539 64248166 28623935 58161723 56214039 44462085 38234249 33051716 23114132 34233146 34991303 40568053 36956892 40979546 35053508 55211480 37789922 56458434 33431613 24483835 38207856 56016480 22754727 29129955 36220299 31828691 36597932 33321833 41182295 41594608 40655542 44802502 67768687 57489533 51058312 52884723 72758564 32730633 56968021 100 101 102 22.2.8.YB.YPh-02 22.2.8.YB.YPh-07 22.2.8.YB.YT-01 23,254 23,212 23,173 3296784 4166347 6007005 26,299 26,254 26,234 251070 227438 241969 Kí hiệu mẫu: XX.Y.A.BBB.CCC-TT - XX: năm - Y: Quế bào quế đen ( Quế đen Y=1, Quế bào Y=2) A: Mùa thu hái (mùa Xuân, vụ A=3; mùa Thu, vụ A=8) - BBB: Tỉnh CCC: Xã - TT: số thứ tự mẫu 29,509 29,403 29,432 38309292 36521257 44361637