Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano paclitaxel định hướng làm hỗn dịch tiêm truyền khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG ĐỨC THUẬN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO PACLITAXEL ĐỊNH HƯỚNG LÀM HỖN DỊCH TIÊM TRUYỀN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG ĐỨC THUẬN Mã sinh viên: 1801670 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO PACLITAXEL ĐỊNH HƯỚNG LÀM HỖN DỊCH TIÊM TRUYỀN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Võ Quốc Ánh TS Đào Văn Nam Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa lý Khoa Bào chế - Cơng nghệ dược phẩm HÀ NỘI - 2023 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc đến TS Võ Quốc Ánh TS Đào Văn Nam – người thầy tận tình truyền đạt kiến thức chun mơn, kỹ kinh nghiệm trình thực nghiệm Cảm ơn thầy dạy em thái độ suy nghĩ phù hợp đứng trước khó khăn thực khóa luận sống Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viên, bạn sinh viên thuộc mơn Hóa lý, Viện Cơng nghệ Dược phẩm Quốc gia, Bộ môn Công nghệ sinh học Dược, Bộ mơn Hóa sinh tạo điều kiện thiết bị, máy móc hóa chất q trình thực nghiệm để hồn thành khóa luận Tơi xin cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo, Khoa Bào chế Công nghệ dược phẩm, Khoa Công nghệ Sinh học, Khoa Cơng nghệ Hóa dược, Khoa Khoa học khoa phòng ban khác, thầy cô cán nhân viên Trường Đại học Dược Hà Nội dạy bảo, tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành khóa học trường thực khóa luận Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè ln động viên quan tâm thời gian vừa qua Tôi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 03 tháng 06 năm 2023 Hoàng Đức Thuận MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG 1.1 TỔNG QUAN .2 Vài nét paclitaxel 1.1.1 Công thức hóa học tính chất lý hóa 1.1.2 Dược động học 1.1.3 Tác dụng dược lý chế tác dụng 1.1.4 Độc tính tác dụng khơng mong muốn 1.2 Vài nét đặc điểm hệ thống mạch máu khối u hiệu ứng tăng thấm lưu giữ (EPR) 1.3 Vài nét dạng bào chế PTX 1.3.1 PTX hòa tan Cremophor EL ethanol 1.3.2 Vài nét nano PTX số nghiên cứu bào chế nano PTX 1.4 Vài nét albumin hệ tiểu phân nano albumin 1.4.1 Albumin .8 1.4.2 Hệ tiểu phân nano albumin 1.4.3 Một số nghiên cứu nano albumin khác .11 CHƯƠNG 2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 Nguyên vật liệu thiết bị 14 2.1.1 Nguyên vật liệu 14 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 14 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.2.1 Đánh giá tính chất lý hóa dược chất 15 2.2.2 Nghiên cứu bào chế HD nano albumin chứa PTX 15 2.2.3 Đánh giá đặc tính HD nano 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Phương pháp bào chế .15 2.3.2 Các phương pháp đánh giá .17 2.3.3 Phương pháp xử lý kết biểu diễn số liệu 22 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Thẩm định phương pháp định lượng PTX .23 3.1.1 Độ đặc hiệu 23 3.1.2 Độ thích hợp hệ thống .23 3.1.3 Độ tuyến tính 23 3.1.4 Độ tìm lại PTX 24 3.2 Kết đánh giá số đặc tính lý hóa dược chất 25 3.2.1 Đặc điểm nguyên liệu PTX .25 3.2.2 Độ tan PTX số môi trường .25 3.3 Kết nghiên cứu bào chế hệ tiểu phân nano albumin chứa PTX 26 3.3.1 Khảo sát lựa chọn thành phần công thức 26 3.3.1 thuật Lựa chọn khoảng biến thiên thành phần công thức thông số kỹ … 28 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng kỹ thuật bốc dung mơi đến đặc tính tiểu phân 30 3.3.3 Đánh giá độ ổn định HD 31 3.3.4 Đánh giá ảnh hưởng số tỷ lệ thành phần thông số kỹ thuật đến đặc điểm phân bố KTTP HD 31 3.3.5 3.4 Lựa chọn công thức để thực đánh giá đặc tính HD nano .38 Đánh giá đặc tính HD nano .38 3.4.1 Kết xác định tỷ lệ dược chất nano hóa HD 38 3.4.2 Đánh giá khả hòa tan - khuếch tán PTX từ HD 40 3.4.3 Kết phổ hồng ngoại FT-IR 42 3.4.4 Kết phân tích nhiệt lượng quét vi sai 44 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril AcOH Acid acetic CCM Curcumin CrEL Cremophor EL BSA Albumin huyết bò D/N Dầu/nước DOXO Doxorubicin EE Tỷ lệ dược chất nano hóa (encapsulation efficiency) EPR Tăng tính thấm lưu giữ FDA Cục quản lý thực phẩm dược phẩm HD Hỗn dịch HPLC Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao HSA Albumin huyết người KTTP Kích thước tiểu phân LC Tỷ lệ dược chất hệ nano (loading efficiency) PB KTTP Phân bố kích thước tiểu phân PTX Paclitaxel SLS Natri lauryl sulfat SPARC Protein tiết chứa nhiều cystein (secreted protein and rich in cystein) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các ưu điểm ABI-007 so với Taxol [16] Bảng 1.2 Một số đặc tính Abraxane mẫu bào chế [18] .12 Bảng 2.1 Các nguyên liệu hóa chất sử dụng nghiên cứu 14 Bảng 2.2 Thiết bị, dụng cụ sử dụng trình thực nghiệm 14 Bảng 3.1 Kết khảo sát độ thích hợp hệ thống 23 Bảng 3.2 Diện tích píc mẫu chuẩn có nồng độ từ 0,05 – 5,98 µg/mL 23 Bảng 3.3 Thành phần mẫu thử mẫu đối chứng 24 Bảng 3.4 Khả tạo NT số dung môi hữu 26 Bảng 3.5 Công thức khảo sát ảnh hưởng DCM pha nước đến hệ tiểu phân tạo thành .27 Bảng 3.6 Phân bố kích thước tiểu phân NT CT1, CT2 CT3 29 Bảng 3.7 Phân bố kích thước tiểu phân mẫu CT1, CT4 CT5 29 Bảng 3.8 Phân bố kích thước tiểu phân mẫu CT1, CT6 CT7 29 Bảng 3.9 Phân bố kích thước tiểu phân mẫu CT6, CT8, CT9 CT10 30 Bảng 3.10 Kết khảo sát ảnh hưởng phương pháp bay dung môi đến PB KTTP CT 11 30 Bảng 3.11 PB KTTP NT CT11 số thời điểm sau bào chế 31 Bảng 3.12 Đặc điểm PB KTTP HD CT11 sau khoảng thời gian 31 Bảng 3.13 Các biến độc lập khoảng biến thiên .32 Bảng 3.14 Các công thức thiết kế thí nghiệm .32 Bảng 3.15 Kết giá trị thực nghiệm biến đầu 33 Bảng 3.16 Tham số thống kê mơ hình, hệ số tương quan giá trị p biến đầu vào mơ hình 34 Bảng 3.17 Tham số thống kê, hệ số tương quan giá trị p biến đầu vào sau loại bỏ biến đầu vào ảnh hưởng khơng có ý nghĩa thống kê 35 Bảng 3.18 Phân bố KTTP kết định lượng PTX khoảng KTTP mẫu N1 N2 (n=3) 39 Bảng PL.4 Kết tỷ lệ PTX tự do, PTX phức hợp phân tử PTX-BSA tự tiểu phân nano PTX PTX tiểu phân lớn kết tinh DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 - Cơng thức hóa học paclitaxel (PTX) .2 Hình 1.2 Cấu trúc khơng gian ba chiều HSA BSA .9 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ diện tích píc PTX khoảng 0,05 – 2,99 µg/mL 24 Hình 3.2 Nguyên liệu paclitaxel quan sát kính hiển vi quang học vật kính 40, thang đo µm (A B) 25 Hình 3.3 Ảnh hưởng số chu kỳ đồng hóa tỷ lệ pha dầu đến KTTB TB, PDI, KTTP TB píc độ rộng píc 36 Hình 3.4 Đồ thị PB KTTP HD N1 trước ly tâm theo cường độ tín hiệu (A), số lượng (B) thể tích (C) PB KTTP HD N1 sau ly tâm theo cường độ tín hiệu (D), số lượng (E) thể tích (F) PB KTTP BSA theo cường độ tín hiệu (G), số lượng (H) thể tích (I) .37 Hình 3.5 Đồ thị phân bố kích thước tiểu phân HD N2 khoảng KTTP (II) theo cường độ tín hiệu (A), số lượng tiểu phân (B), thể tích (C) 39 Hình 3.6 Tỷ lệ PTX tự do, phức hợp PTX-BSA tự do, tiểu phân nano PTX tiểu phân lớn kết tinh N1 N2 40 Hình 3.7 Đồ thị hịa tan – khuếch tán PTX từ N1 N2 môi trường đệm phosphat đẳng trương pH 7,4 chứa SLS % (n=3) 41 Hình 3.8 Phổ hồng ngoại nguyên liệu PTX, nguyên liệu BSA, dịch ly tâm N1 (sN1), dịch ly tâm N2 (sN2) N2 .43 Hình 3.9 Đồ thị DSC mẫu nguyên liệu PTX, nguyên liệu BSA, cắn ly tâm N2 (pN2), N2 44 Hình PL.1 Sắc ký đồ dung dịch paclitaxel chuẩn (A), dung dịch thử mẫu thử đánh giá phương pháp xử lý mẫu hỗn dịch (B), dung dịch sau xử lý mẫu hỗn dịch (C), dung dịch thử khuếch tán (D) phổ hấp thụ píc dung dịch chuẩn (E) Hình PL.2 Sắc ký đồ dung mơi tìm lại PTX (A), mẫu placebo (B) mơi trường khuếch tán (C) Hình PL.3 Hình ảnh kính hiển vi quang học vật kính 40 NT thô (A), NT nano (B) HD (C) thiết kế thí nghiệm ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư bệnh khó chữa, có tỷ lệ tử vong cao số lượng ca bệnh mắc ngày gia tăng Ước tính năm 2020, giới ghi nhận khoảng 19,3 triệu ca mắc gần 10 triệu ca tử vong ung thư [15] Trên lâm sàng, ung thư phổi ung thư vú hai bệnh lý ung thư hay gặp có tỷ lệ tử vong hàng đầu [22], [52] 85 % trường hợp ung thư phổi ung thư phổi không tế bào nhỏ Phần lớn trường hợp ung thư vú tiến triển thành ung thư vú di gây tử vong cho bệnh nhân [52] Có nhiều thuốc hóa trị liệu điều trị ung thư phát triển, có paclitaxel, số hóa trị liệu ung thư có nguồn gốc tự nhiên Paclitaxel alkaloid có hoạt tính chống ung thư tìm thấy vỏ số lồi thơng đỏ (Taxus brevifolia, T baccata,…) [1], [7] Dạng bào chế paclitaxel hòa tan hỗn hợp Cremophor EL ethanol khan đánh dấu bước ngoặt lớn điều trị ung thư vú di [19] ung thư phổi không tế bào nhỏ [50] Tuy nhiên, dạng bào chế bộc lộ nhược điểm độc tính tá dược Cremophor EL đặc tính dược động học phi tuyến tính [30], [39], [40], [57] Điều đặt yêu cầu phát triển dạng bào chế paclitaxel an toàn hiệu Một hướng nghiên cứu phát triển hệ nano chứa paclitaxel Các hệ nano chứa paclitaxel hệ đưa thuốc tiềm năng, giúp tăng tích lũy thuốc vào khối u giảm độc tính mô khỏe mạnh Trong chế phẩm nano chứa paclitaxel thị trường, Abraxane®, hỗn dịch chứa phức hợp albumin-paclitaxel, chế phẩm phê duyệt FDA Hoa Kỳ nhiều quốc gia khác điều trị nhiều bệnh lý ung thư So với Taxol®, Abraxane® cho thấy tính hiệu tính an tồn vượt trội điều trị ung thư vú di ung thư phổi không tế bào nhỏ nhờ vào đặc điểm dược động học tuyến tính, có khả phân bố ưu tiên thuốc vào khối u giảm phơi nhiễm thuốc toàn thân [8], [13], [19] Những ưu điểm Abraxane® cho nhờ vào khả hướng đích tiểu phân nano tính an tồn albumin vai trò chất mang [13], [14], [33] Với mục đích bước đầu phát triển chế phẩm hỗn dịch nano paclitaxel tiêm truyền tĩnh mạch Việt Nam, đề tài “Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano paclitaxel định hướng làm hỗn dịch tiêm truyền” thực với mục tiêu sau:  Bước đầu bào chế đánh giá ảnh hưởng số yếu tố đến phân bố kích thước tiểu phân hỗn dịch nano paclitaxel  Đánh giá số đặc tính lý hóa hỗn dịch nano paclitaxel CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét paclitaxel 1.1.1 Công thức hóa học tính chất lý hóa Cơng thức hóa học tên khoa học Hình 1.1 - Cơng thức hóa học paclitaxel (PTX) Cơng thức phân tử: C47H51NO14 [10], [11] Khối lượng phân tử: 853,91 g/mol [11] Tên khoa học: 4,10β-Bis(acetyloxy)-13α-[[(2R,3S)-3-benzamido-2-hydroxy-3phenylpropanoyl]oxy]-I,7β-dihydroxy-9-oxo-5β,20-epoxytax-1l-en-2α-yl benzoat [10] Tính chất lý hóa Cảm quan: Bột màu trắng gần trắng, dạng tinh thể [10] Độ tan: Thực tế không tan nước, tan methanol (MeOH), ethanol, dicloromethan dễ tan methyl clorid [10], acetonitril [45] Độ bền: PTX bị phân hủy nhanh chóng dung dịch MeOH chứa kiềm yếu dung dịch MeOH có tính acid mạnh PTX bền dung dịch MeOH chứa 0,1 % acid acetic (AcOH) bảy ngày nhiệt độ phòng ba tháng °C AcOH trung hịa vết kiềm có MeOH, giúp PTX khơng bị phân hủy [45] LogP: 3,2 [53] Góc quay cực: Dung dịch 10 mg/mL MeOH có góc quay cực 20 °C từ 49,0° đến -55,0° dạng khan [10], [11] 1.1.2 Dược động học Dạng bào chế thông thường PTX dạng dung dịch đậm đặc Cremophor EL ethanol tuyệt đối để pha dịch truyền tĩnh mạch Sau tiêm vào tĩnh mạch, thuốc phân bố rộng vào mô dịch thể, bị ảnh hưởng liều thời gian truyền Tỷ lệ gắn với protein 89 % đến 98 % không bị thay đổi dùng với cimetidin, ranitidin, dexamethason diphenhydramin Ở giai đoạn ổn định, thể tích phân bố 5-6 lít/kg cân nặng, thể tích phân bố người tiêm truyền từ đến 67,1 lít/m2 người tiêm truyền 24 227 đến 688 lít/m2 cho thấy thuốc khuếch tán nhiều nhỏ, lượng mẫu thí nghiệm DSC mẫu nhỏ so với mẫu khác Có thể dự đốn píc nóng chảy BSA PTX tương ứng mẫu Sự dịch chuyển nhiệt độ nóng chảy hai chất ảnh hưởng giảm KTTP hai chất tạo phức hợp PTX-BSA tồn dạng kết tinh Tuy nhiên, để khẳng định điều cần làm thêm số thí nghiệm đánh giá khác NMR, XRD, AFM, SEC-MS 45 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN: Sau q trình thực nghiệm, khóa luận đạt số kết sau: Đã xác định khoảng biến thiên phù hợp thành phần thông số kỹ thuật bào chế hỗn dịch nano PTX phương pháp nhũ hóa – bốc dung mơi sử dụng thiết bị đồng hóa áp suất cao:  Pha dầu: Dung dịch PTX DCM (1,5 – % w/v)  Pha nước: Dung dịch BSA nước bão hòa DCM (0,5 – 4,5 % w/v)  Tỷ lệ hai pha: – % (v/v)  Áp suất đồng hóa: 10000 – 20000 (psi)  Số chu kỳ đồng hóa: 20 – 40 (chu kỳ)  Đã lựa chọn thông số kỹ thuật bốc dung môi: Cất quay 35 ± oC, áp suất khí quyển, tốc độ quay 90 vịng/phút, thời gian 60 phút Đã đánh giá số đặc tính hỗn dịch:  Đã đánh giá ảnh hưởng thành phần công thức thông số kỹ thuật đến PB KTTP hỗn dịch: Nồng độ dược chất pha dầu, tỷ lệ pha dầu số chu kỳ có ảnh hưởng đến KTTP TB, KTTP TB píc độ rộng chân píc Nồng độ BSA pha nước, tỷ lệ pha dầu số chu kỳ có ảnh hưởng đến giá trị PDI  Nhũ tương hỗn dịch ổn định PB KTTP sau ngày bảo quản điều kiện 5-8 oC  Tỷ lệ dược chất nano hóa cơng thức đại diện, N1 N2, 86,43 % 94,01 %  Đã đánh giá khả hòa tan/khuếch tán hỗn dịch Trong đó, dược chất khuếch tán qua màng chậm nồng độ BSA công thức ảnh hưởng nhiều đến khuếch tán dược chất vào khoang nhận  PTX phức hợp PTX-BSA tồn dạng tinh thể, xác định píc thu nhiệt đồ thị DSC Có tương tác phân tử PTX BSA, khẳng định thay đổi phổ FT-IR dược chất nguyên liệu ĐỀ XUẤT: Để tiếp tục phát triển chế phẩm hỗn dịch nano PTX , đề xuất: Tiếp tục cải tiến, tối ưu hóa cơng thức quy trình bào chế hỗn dịch nano PTX Tiếp tục đánh giá sâu đặc tính lý hóa tiểu phân nano PTX, nghiên cứu tính an toàn tác dụng dược lý tế bào in vivo 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Bộ Y Tế (2018), Dược thư quốc gia Việt Nam, pp 1105-1108 GS TS Nguyễn Ngọc Chiến, ThS Hồ Hoàng Nhân (2019), Công nghệ nano ứng dụng sản xuất thuốc, Nhà xuất Y học, pp 21 Trịnh Thị Hằng (2018), Nghiên cứu bào chế hệ tiểu phân nano phối hợp paclitaxel dihydroartemisinin sử dụng lecithin chitosan, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Tuấn Linh (2020), Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano dihydroartemisinin paclitaxel với chất mang acid poly (lactic - co glycolic) lecithin, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Tiếng Anh: Abumaree Mohamed, Zhu Lingyan, et al (2011), "Fabrication of biologically active surface-modified Taxol nanowires using anodic aluminum oxide templates", RSC Advances, 1, pp Belatik A., Hotchandani S., et al (2012), "Locating the binding sites of Pb(II) ion with human and bovine serum albumins", PLoS One, 7(5), pp e36723 Bertram G Katzung Anthony J Trevor (2017), Basic and Clinical Pharmacology pp 963 Blair Hannah A., Deeks Emma D (2015), "Albumin-Bound Paclitaxel: A Review in Non-Small Cell Lung Cancer", Drugs, 75(17), pp 2017-2024 Chou Pi-Ling, Huang Ya-Ping, et al (2020), "Improvement of PaclitaxelAssociated Adverse Reactions (ADRs) via the Use of Nano-Based Drug Delivery Systems: A Systematic Review and Network Meta-Analysis", International Journal of Nanomedicine, 15, pp 1731-1743 10 Commission British Pharmacopoeia (2022), "Paclitaxel", British Pharmacopoeia, II, pp 521-526 11 Convention United States Pharmacopeial (2021), "Paclitaxel", Usp 44Nf39, 1, pp 12 Convention United States Pharmacopeial (2021), "Paclitaxel Injection", Usp 44-Nf39, 1, pp 13 Desai Neil (2016), "Nanoparticle albumin-bound paclitaxel (Abraxane®)", Albumin in Medicine, Springer, pp 101-119 14 Elzoghby Ahmed O, Samy Wael M, et al (2012), "Albumin-based nanoparticles as potential controlled release drug delivery systems", 157(2), pp 168-182 15 Ferlay J., Colombet M., et al (2021), "Cancer statistics for the year 2020: An overview", Int J Cancer, pp 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Fu Qiang, Sun Jin, et al (2009), "Nanoparticle albumin-bound (NAB) technology is a promising method for anti-cancer drug delivery", 4(3), pp 262-272 Fulwah Paclitaxel, Alqahtani Yahya, et al (2020), "CHAPTER THREE", pp Gao Yue, Nai Jingxue, et al (2021), "A novel preparative method for nanoparticle albumin-bound paclitaxel with high drug loading and its evaluation both in vitro and in vivo", 16(4), pp e0250670 Gradishar W J (2012), "Taxanes for the treatment of metastatic breast cancer", Breast Cancer (Auckl), 6, pp 159-71 Gradishar W J (2006), "Albumin-bound paclitaxel: a next-generation taxane", Expert Opin Pharmacother, 7(8), pp 1041-53 Hassanin I., Elzoghby A (2020), "Albumin-based nanoparticles: a promising strategy to overcome cancer drug resistance", Cancer Drug Resist, 3(4), pp 930-946 Hjartåker A., Weiderpass E., et al (2008), "Cancer Mortality", International Encyclopedia of Public Health, Heggenhougen Harald Kristian, Academic Press, Oxford, pp 452-464 Hong S., Choi D W., et al (2020), "Protein-Based Nanoparticles as Drug Delivery Systems", Pharmaceutics, 12(7), pp Hornok V (2021), "Serum Albumin Nanoparticles: Problems and Prospects", Polymers (Basel), 13(21), pp Information National Center for Biotechnology (2023), "PubChem Compound Summary for CID 6212, Chloroform", Retrieved May 17, 2023, from https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Chloroform Information National Center for Biotechnology (2023), "PubChem Compound Summary for CID 6344, Methylene Chloride", Retrieved May 17, 2023, from https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/MethyleneChloride Information National Center for Biotechnology (2023), "PubChem Compound Summary for CID 8857, Ethyl Acetate", Retrieved May 17, 2023, from https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Ethyl-Acetate Jahanshahi Mohsen, Babaei Zahra %J African Journal of Biotechnology (2008), "Protein nanoparticle: A unique system as drug delivery vehicles", 7, pp 4926-4934 Kagihara Jodi A, Andress Michelle, et al (2020), "Nab-paclitaxel and atezolizumab for the treatment of PD-L1-positive, metastatic triplenegative breast cancer: review and future directions", 5(2), pp 59-65 Kearns C M (1997), "Pharmacokinetics of the taxanes", Pharmacotherapy, 17(5 Pt 2), pp 105s-109s Kim T Y., Kim D W., et al (2004), "Phase I and pharmacokinetic study of Genexol-PM, a cremophor-free, polymeric micelle-formulated 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 paclitaxel, in patients with advanced malignancies", Clin Cancer Res, 10(11), pp 3708-16 Kim Tae Hyung, Jiang Hai Hua, et al (2011), "Preparation and characterization of water-soluble albumin-bound curcumin nanoparticles with improved antitumor activity", 403(1-2), pp 285-291 Kratz F (2008), "Albumin as a drug carrier: design of prodrugs, drug conjugates and nanoparticles", J Control Release, 132(3), pp 171-83 Kundranda Madappa N, Niu Jiaxin J (2015), "Albumin-bound paclitaxel in solid tumors: clinical development and future directions", Drug design, development, 9, pp 3767 Kuten Pella O., Hornyák I., et al (2022), "Albumin as a Biomaterial and Therapeutic Agent in Regenerative Medicine", Int J Mol Sci, 23(18), pp Lee S H., Heng D., et al (2011), "Nano spray drying: a novel method for preparing protein nanoparticles for protein therapy", Int J Pharm, 403(1-2), pp 192-200 Li C., Li Y., et al (2014), "Direct comparison of two albumin-based paclitaxel-loaded nanoparticle formulations: is the crosslinked version more advantageous?", Int J Pharm, 468(1-2), pp 15-25 Lomis Nikita, Westfall Susan, et al (2016), "Human serum albumin nanoparticles for use in cancer drug delivery: process optimization and in vitro characterization", 6(6), pp 116 Ma P., Mumper R J (2013), "Paclitaxel Nano-Delivery Systems: A Comprehensive Review", J Nanomed Nanotechnol, 4(2), pp 1000164 Marupudi N I., Han J E., et al (2007), "Paclitaxel: a review of adverse toxicities and novel delivery strategies", Expert Opin Drug Saf, 6(5), pp 609-21 Merlot A M., Kalinowski D S., et al (2014), "Unraveling the mysteries of serum albumin-more than just a serum protein", Front Physiol, 5, pp 299 Nakamura Y., Mochida A., et al (2016), "Nanodrug Delivery: Is the Enhanced Permeability and Retention Effect Sufficient for Curing Cancer?", Bioconjug Chem, 27(10), pp 2225-2238 Neil P Desai Chunlin Tao, Andrew Yang, Leslie Louie, Tianli Zheng, Zhiwen Yao, Patrick Soon-Shiong, Shlomo Magdassi, Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof 1999 Nie S (2010), "Understanding and overcoming major barriers in cancer nanomedicine", Nanomedicine (Lond), 5(4), pp 523-8 Nikolic Vesna D., Savic Ivan M., et al (2011), "Paclitaxel as an anticancer agent: isolation, activity, synthesis and stability", Central European Journal of Medicine, 6(5), pp 527-536 Paál K., Müller J., et al (2001), "High affinity binding of paclitaxel to human serum albumin", Eur J Biochem, 268(7), pp 2187-91 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 Panalytical Malvern (2021), Zetasizer advance series - User guide, pp 82,99 Purcell M., Neault J F., et al (2000), "Interaction of taxol with human serum albumin", Biochim Biophys Acta, 1478(1), pp 61-8 Qi J., Yao P., et al (2010), "Nanoparticles with dextran/chitosan shell and BSA/chitosan core doxorubicin loading and delivery", Int J Pharm, 393(1-2), pp 176-84 Ramalingam Sakkaraiappan, Belani Chandra P (2004), "Paclitaxel for nonsmall cell lung cancer", Expert Opinion on Pharmacotherapy, 5(8), pp 1771-1780 Reis C P., Neufeld R J., et al (2006), "Nanoencapsulation I Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles", Nanomedicine, 2(1), pp 8-21 Scully O J., Bay B H., et al (2012), "Breast cancer metastasis", Cancer Genomics Proteomics, 9(5), pp 311-20 Sharma S., Verma A., et al (2015), "Development of stabilized Paclitaxel nanocrystals: In-vitro and in-vivo efficacy studies", Eur J Pharm Sci, 69, pp 51-60 Siemann D W (2011), "The unique characteristics of tumor vasculature and preclinical evidence for its selective disruption by Tumor-Vascular Disrupting Agents", Cancer Treat Rev, 37(1), pp 63-74 Sofias A M., Dunne M., et al (2017), "The battle of "nano" paclitaxel", Adv Drug Deliv Rev, 122, pp 20-30 Spada Alessandra, Emami Jaber, et al (2021), "The uniqueness of albumin as a carrier in nanodrug delivery", 18(5), pp 1862-1894 Sparreboom A., van Tellingen O., et al (1996), "Nonlinear pharmacokinetics of paclitaxel in mice results from the pharmaceutical vehicle Cremophor EL", Cancer Res, 56(9), pp 2112-5 Suttiprasit Prasert, Krisdhasima Viwat, et al (1992), "The surface activity of α-lactalbumin, β-lactoglobulin, and bovine serum albumin: I Surface tension measurements with single-component and mixed solutions", Journal of Colloid and Interface Science, 154(2), pp 316-326 Tang Y., Wang X., et al (2019), "Overcoming the Reticuloendothelial System Barrier to Drug Delivery with a "Don't-Eat-Us" Strategy", ACS Nano, 13(11), pp 13015-13026 Trynda-Lemiesz L (2004), "Paclitaxel-HSA interaction Binding sites on HSA molecule", Bioorg Med Chem, 12(12), pp 3269-75 Wang Qi, Atluri Keerthi, et al (2023), "Exploring the Application of Micellar Drug Delivery Systems in Cancer Nanomedicine", 16(3), pp 433 Weaver B A (2014), "How Taxol/paclitaxel kills cancer cells", Mol Biol Cell, 25(18), pp 2677-81 63 64 65 66 67 68 Wu J (2021), "The Enhanced Permeability and Retention (EPR) Effect: The Significance of the Concept and Methods to Enhance Its Application", J Pers Med, 11(8), pp Ye L., He J., et al (2013), "Antitumor effect and toxicity of Lipusu in rat ovarian cancer xenografts", Food Chem Toxicol, 52, pp 200-6 Yedomon B., Fessi H., et al (2013), "Preparation of Bovine Serum Albumin (BSA) nanoparticles by desolvation using a membrane contactor: A new tool for large scale production", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 85(3, Part A), pp 398-405 Yu Huaxing, Li Daixi, et al (2016), "The binding affinity of human serum albumin and paclitaxel through MMPBSA based on docked complex", Molecular Simulation, 42(17), pp 1460-1467 Zhao Dongmei, Zhao Xiuhua, et al (2010), "Preparation, characterization, and in vitro targeted delivery of folate-decorated paclitaxel-loaded bovine serum albumin nanoparticles", 5, pp 669 Zhao M., Lei C., et al (2015), "Abraxane, the Nanoparticle Formulation of Paclitaxel Can Induce Drug Resistance by Up-Regulation of P-gp", PLoS One, 10(7), pp e0131429 PHỤ LỤC Phụ lục Sắc ký đồ dung dịch paclitaxel chuẩn, paclitaxel mẫu thử phổ hấp thụ thời gian lưu A B C D E Hình PL.1 Sắc ký đồ dung dịch paclitaxel chuẩn (A), dung dịch thử mẫu thử đánh giá phương pháp xử lý mẫu hỗn dịch (B), dung dịch sau xử lý mẫu hỗn dịch (C), dung dịch thử khuếch tán (D) phổ hấp thụ píc dung dịch chuẩn (E) Phụ lục Sắc ký đồ dung mơi tìm lại PTX, mẫu placebo mơi trường khuếch tán khoang nhận A B C Hình PL.2 Sắc ký đồ dung mơi tìm lại PTX (A), mẫu placebo (B) môi trường khuếch tán (C) Phụ lục Hình ảnh kính hiển vi quang học vật kính 40 NT thơ (A), NT nano (B) HD (C) thiết kế thí nghiệm N1A N2A N3A N4A N5A N6A N7A N8A N9A N10A N11A N1B N2B N3B N4B N5B N6B N7B N8B N9B N10B N11B N1C N2C N3C N4C N5C N6C N7C N8C N9C N10C N11C Hình PL.3 Hình ảnh kính hiển vi quang học vật kính 40 NT thơ (A), NT nano (B) HD (C) thiết kế thí nghiệm Phụ lục Kết tỷ lệ PTX tự do, PTX phức hợp phân tử PTX-BSA tự tiểu phân nano PTX PTX tiểu phân lớn kết tinh Bảng PL Kết tỷ lệ PTX tự do, PTX phức hợp phân tử PTX-BSA tự tiểu phân nano PTX PTX tiểu phân lớn kết tinh Mẫu N1 N2 Khoảng KTTP Nồng độ PTX (μg/mL) Các dạng tồn PTX Nồng độ PTX (μg/mL) Tỷ lệ PTX (%) I 0,00 PTX tự 0,00 % II 5,70 ± 0,47 PTX phức hợp PTX-BSA tự 5,77 7,51 % III 72,09 ± 1,17 PTX tiểu phân nano PTX 66,33 86,35 % Mẫu toàn phần 76,81 ± 0,24 PTX tiểu phân lớn kết tinh 4,72 6,14 % I 0,00 PTX tự 0,00 % II 9,09 ± 1,15 PTX phức hợp PTX-BSA tự 9,09 2,55 % III 343,89 ± 3,52 PTX tiểu phân nano PTX 334,79 94,01 % Mẫu toàn phần 356,12 ± 12,40 PTX tiểu phân lớn kết tinh 12,23 3,44 %