Bài thực hành Sử dụng sắc ký cột và sắc ký bảng mỏng để phân tích thành phần các chất trong lá lốt. Mô tả phương pháp tiến hành cũng như hệ dung môi đã sử dụng, các kết quả có được sau thí nghiệm. Từ đó chọn được hệ dung môi thích hợp để phân tích mẫu
BÀI 2: SẮC KÝ LỚP MỎNG VÀ SẮC KÝ CỘT Thực hành a) Dụng cụ hóa chất Cột sắc ký Cốc thủy tinh 250 ml Cốc thủy tinh 100 ml Cối chày Phễu thủy tinh Phễu chiết Ống nghiệm 15 Đũa thủy tinh Bếp điện Cốc thủy tinh dùng giải ly mỏng Bản mỏng silica gel Ống vi quản Kiếng thủy tinh Ống đong 10 ml Acetone Hexan Silica gel Hình Lá lốt b) Cách tiến hành: sử dụng lốt ❖ Chuẩn bị dịch sắc tố màu Cho rửa sạch, lau thật khô, cắt nhỏ vào cối dùng chày nghiền nát Chuyển giã nát vào cốc 100 ml có chứa sẵn 30 ml hỗn hợp gồm 18 ml hexan 12 ml acetone, lắc 10 phút, lọc lấy dịch trích, cho vào cốc khác phễu giấy lọc Rửa bã nằm phễu ml hỗn hợp Hình Dịch trích Cho dịch trích vào phễu chiết, rửa 20 ml nước tách riêng lớp hữu (lớp trên) cho vào cốc thủy tinh khác, làm khan Na2SO4, gạn lấy dung dịch Đun cách thủy dung dịch để loại bớt dung môi, thu dung dịch sắc tố đậm đặc Hình 3,4,5,6 Tách riêng phần dịch chiết, làm khan loại bớt dung môi ❖ Chuẩn bị cột sắc ký chọn dung môi giải ly Dùng đũa thủy tinh dài để nhồi lớp bơng gịn dày khoảng 1-2mm vào đáy cột, không nhồi chặt ráp cột sắc ký thẳng đứng vào giá nhờ kẹp, thêm dung môi hexan cho đầy cột Cho 15ml dung môi hexan vào cốc thủy tinh 100ml, thêm từ từ 10g silica gel khuấy để thấm ướt hết silica gel Cho từ từ silica gel vào cột sắc ký, vừa gõ cột mở khóa kho dung mơi chảy giọt Lưu ý dung môi ngập silica gel Sau cho hết silica gel, mở khóa để dung mơi chảy ra, hứng dung mơi để sử dụng cho đoạn Cắt mỏng thành nhỏ có kích thước 2x10 cm Dùng bút chì vạch mức xuất phát cách mép cm mức tiền tuyến dung môi cách mép 0.5 cm STT Dung môi giải ly Hexan Hexan : acetone Hexan: acetone Tỉ lệ 100% 90:10 70:30 Cho dung môi giải ly vào ly thủy tinh khác (đã có sẵn giấy lọc), đậy miếng kiếng thủy tinh để dung mơi bão hịa Chấm mẫu lên mỏng tiến hành giải ly, chọn dung mơi phù hợp để tiến hành sắc ký cột Hình Giải ly sắc kí mỏng Thứ tự dung môi từ trái qua 1,2,3 ❖ Nạp mẫu vào cột sắc ký Khi dung môi cột nằm lớp silica gel cịn khoảng mm khóa cột lại Dùng ống nhỏ giọt để đưa mẫu vào đầu cột sắc ký Từ từ mở khóa cột dung dịch mẫu thấm xuống bề mặt silica gel đầu cột, lúc thấy dung dịch xuống gần lớp silica gel khóa cột lại, tiếp tục nạp cho mẫu vào đầu cột (lưu ý giữ lại mẫu để chấm sắc ký lớp mỏng) Mở khóa để hạ mực dung dịch mẫu xuống sát mặt thoáng chất hấp phụ, đóng khóa lại Dùng ống nhỏ giọt cho lượng nhỏ dung môi hệ dung môi chọn để sắc ký cột vào đầu cột, mở khóa để dịch màu tiếp tục thấm xuống silica gel Đến thấy dịch chất màu gắn chặt vào silica gel phần đầu cột Liên tục cho dung môi vào để giải ly Sắc tố di chuyển khỏi cột hứng vào ống nghiệm Hình Chạy sắc kí cột Tiến hành sắc ký lớp mỏng ống nghiệm chứa sắc tố màu dung dịch mẫu trước chạy cột mỏng để so sánh Chọn hệ 9:1 để tiến hành sắc kí mỏng so sánh Nội dung báo cáo Cho biết dung môi hệ dung môi lựa chọn để tiến hành sắc ký cột Ban đầu chọn hệ 100% hexan sau chuyển sang hệ Hexan:acetone theo tỉ lệ 9:1 Nêu tượng quan sát trình chạy cột? Từ dịch màu xanh ban đầu theo thời gian chảy xuống cột phân thành tầng màu khác nhau.(xanh, đen, vàng,…) Hệ 100% Hexan cho thấy chất cần tìm( màu vàng) thấm xuống nhiều thời gian phân tách lâu Trong khi thay hệ 9:1 thời gian thấm xuống cột nhanh hơn, có phân bố màu rõ Cho biết màu sắc, hình dạng vết giá trị Rf chất có mẫu Hệ 100% Hexan: vết màu vàng có hình bầu dục Rf=6,5/9= 0,7(2) Hệ 9:1: vết có hình dạng kéo dài theo thứ tự chiều dung môi lên gồm: xanh lục(1), xanh rêu đậm(2), đen(3) vàng(4) Có Rf theo thứ tự là: Rf1= 0,8/9=0,0(8) Rf2= 1,3/9=0,1(4) Rf3= 4,2/9=0,47 Rf4=7,5/9=0,8(3) Hệ 7:3: vết có hình dạng kéo dài theo thứ tự chiều dung môi lên xanh nhạt(1’),xanh mạ(2’), xanh lục(3’),đen(4’),vàng(5) Trong vết màu đen màu vàng gần trùng Có Rf theo thứ tự Rf(1’)= 1,7/9=0,1(8) Rf(2’)=5,3/9=0,5(3) Rf(3’)=5,8/9=0,6(4) Rf(4’)=8/9=0,8(8) Rf(5)=8/9=0,8(8) Sắc kí mỏng so sánh( hệ 9:1) Chất cần tìm có màu vàng Rf = 4,8/9=0,5(3) Sinh viên thực buổi Nguyễn Bích Trâm 19139172 Ngơ Huỳnh Huyền Trân 19139175 Võ Hồng Trúc Phương