Nghiên cứu tách chiết, xây dựng tiêu chuẩn chất lượng zerumbone sau tinh sạch từ gừng gió (zingiber zerumbet)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC ~~~~~***~~~~~ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT, XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƢỢNG ZERUMBONE SAU TINH SẠCH TỪ GỪNG GIÓ (Zingiber zerumbet) Hà Nội tháng 09 năm 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC ~~~~~***~~~~~ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT, XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƢỢNG ZERUMBONE SAU TINH SẠCH TỪ GỪNG GIÓ (Zingiber zerumbet) Sinh viên thực : Tạ Khánh Linh Mã sinh viên : 637038 Lớp : K63CNSHA Giảng viên hƣớng dẫn : PGS TS.Nguyễn Thanh Hải TS Phí Thị Cẩm Miện Hà Nội , 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài “NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT, XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƢỢNG ZERUMBONE SAU TINH SẠCH TỪ GỪNG GIÓ (Zingiber zerumbet) ” cơng trình nghiên cứu cá nhân thời gian qua Mọi số liệu đƣợc sử dụng, hình ảnh, kết nghiên cứu tơi tự tìm hiểu, phân tích cách khách quan, trung thực, có nguồn gốc rõ ràng chƣa đƣợc cơng bố dƣới hình thức Mọi giúp đỡ cho việc thực đề tài đƣợc cảm ơn thơng tin trích dẫn đề tài đƣợc ghi nguồn gốc rõ ràng Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trƣớc Học viện Hội đồng Hà Nội, ngày 09 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Tạ Khánh Linh i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực tập Bộ môn Sinh học, Khoa Công nghệ Sinh học Viện nghiên cứu Vi tảo Dƣợc mỹ phẩm - Học viện Nông nghiệp Việt Nam nhận đƣợc nhiều quan tâm, bảo tận tình Thầy, cán phịng thí nghiệm Cùng với cố gắng, nỗ lực thân, rút học kinh nghiệm hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban chủ nhiệm khoa Cơng nghệ sinh học tồn thể Thầy, Cơ truyền đạt cho kiến thức chuyên ngành, kỹ làm việc phịng thí nghiệm học quý báu suốt thời gian học tập, rèn luyện Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tôi xin chân thành cảm ơn bày tỏ lịng kính trọng đến TS Phí Thị Cẩm Miện PGS TS Nguyễn Thanh Hải trực tiếp hƣớng dẫn, hỗ trợ, tận tình dạy theo sát tơi q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn đến anh chị nghiên cứu viên môn Sinh học Viện nghiên cứu Vi tảo Dƣợc mỹ phẩm nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Cuối cùng, với biết ơn vô hạn, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình ngƣời thân bạn bè đồng hành, động viên, giúp đỡ, chia sẻ, tạo động lực cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu nhƣ q trình làm khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 09 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Tạ Khánh Linh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT .ix PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài .2 1.2.1 Mục đích đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3.Ý nghĩa đề tài .3 1.3.1.Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan tình hình xây dựng tiêu chuẩn dƣợc liệu cao dƣợc liệu .4 2.1.1 Cách thức xây dựng tiêu chuẩn 2.1.2 Phƣơng pháp xây dựng tiêu chuẩn sở nói chung .4 2.2 Tổng quan chi zingiber 2.2.1 Vài nét thực vật học họ gừng Zingiberaceae 2.2.2 Thành phần hóa học tinh dầu chi Zingiber 2.3 Tổng quan gừng gió (Zingiber zerumbet smith) 2.3.1 Đặc điểm thực vật 2.3.2 Nguồn gốc phân bố 2.3.3 Thành phần hố học gừng gió 2.3.4 Tác dụng dƣợc lí gừng gió 11 2.4 Tổng quan zerumbone tinh chế zerumbone 12 2.4.1 Zerumbone 12 iii 2.4.2 Nguồn gốc, cấu trúc tính chất vật lý zerumbone .12 2.4.3 Phân lập zerumbone 13 2.4.4 Hoạt tính sinh học zerumbone .16 2.5 Một số phƣơng pháp chiết .17 2.5.1 Phƣơng pháp chiết Soxhlet 17 2.5.2 Ngấm kiệt .19 2.5.3 Ngâm dầm 19 2.5.4 Lôi nƣớc .20 2.6 Các nghiên cứu Gừng gió Việt Nam giới 21 2.6.1 Tình hình nghiên cứu Gừng gió Việt Nam .21 2.6.2 Tình hình nghiên cứu Gừng gió giới 25 PHẦN ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 3.1 Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu: .27 3.1.1 Nguyên liệu, hoá chất, dụng cụ: 27 3.1.2 Thiết bị 27 3.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu .27 3.2 Nội dung nghiên cứu 27 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 3.3.1 Phƣơng pháp tách chiết thu dịch chiết thơ Gừng gió 27 3.3.2 Phân lập zerumbone 29 3.3.3 Chiết xuất tinh zerumbone phƣơng pháp ép thuỷ lực .29 3.3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu giải phẫu 30 3.3.5 Phƣơng pháp phân tích bột dƣợc liệu 31 3.3.6 Phƣơng pháp đánh giá chất lƣợng dƣợc liệu 31 3.3.7 Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng bán thành phẩm dịch chiết thơ từ Gừng gió tiêu chí Dƣợc điển Việt Nam V tiêu chuẩn dƣợc liệu 33 3.3.8 Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng zerumbone 35 3.4 Quy trình thực thí nghiệm .36 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 39 iv 4.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới khối lƣợng cao chiết thu đƣợc .39 4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới hàm lƣợng zerumbone thu đƣợc .40 4.3 Tinh zerumbone: 42 4.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở dƣợc liệu cho nguyên liệu đầu vào Gừng gió .43 4.4.1 Xây dựng tiêu chuẩn dƣợc liệu cho nguyên liệu đầu vào Gừng gió 43 4.5 Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng zerumbone 47 4.5.1 Yêu cầu cảm quan 47 4.3.2 Chỉ tiêu lý hoá 47 4.3.3 Yêu cầu an toàn thực phẩm .48 4.3.4 Giới hạn tối đa độc tố vi nấm .48 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .49 5.1 Kết luận 49 5.2 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần hoá học tinh dầu củ Gừng gió sau tách Zerumbone kết tinh (đề tài nghiên cứu khoa học quốc gia mã số CNHD- ĐT- 018/10-11) Bảng 2.2 Các thành phần tinh dầu thân, lá, hoa Gừng gió Quảng Bình 11 Bảng 2.3 Hàm lƣợng zerumbone tinh dầu Z zerumbet số vùng giới 14 Bảng 2.4 Một số phát có chứa zerumbone 14 Bảng 2.5 Cƣờng độ gây độc tế bào ung thƣ zerumbone in vitro 16 Bảng 2.6 Thành phần hố học tinh dầu củ Gừng gió vùng Tam Đảo – Vĩnh Phúc sau tách Zerumbone kết tinh (đề tài nghiên cứu khoa học quốc gia mã số CNHD- ĐT- 018/10-11) 23 Bảng 2.7 Các thành phần tinh dầu thân, lá, hoa Gừng gió Quảng Bình 25 Bảng 4.1 Khối lƣợng hiệu suất cao chiết thu đƣợc từ dịch chiết gừng gió thu thập Ba Vì – Hà Nội 39 Bảng 4.2 Kết khối lƣợng zerumbone thu đƣợc .42 Bảng 4.3 Hiệu suất zerumbone thu đƣợc từ phƣơng pháp phân lập khác 42 Bảng 4.4 Yêu cầu cảm quan 47 Bảng 4.5 Các tiêu lý hoá 47 Bảng 4.6 Giới hạn tối đa kim loại nặng 48 Bảng 4.7 Giới hạn tối đa độc tố vi nấm 48 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hoa, thân củ Gừng gió Hình 2.2 Cơng thức cấu tạo zerumbone 10 Hình 2.3 Các phân tử Flavanoid .10 Hình 2.4 Cơng thức cấu tạo zerumbone 13 Hình 2.5 Hình ảnh dụng cụ Soxhlets .18 Hình 2.6 Phƣơng pháp ngâm dầm 20 Hình 2.7 Sơ đồ hoạt động chƣng cất lôi nƣớc 21 Hình 3.1 Phƣơng pháp tách chiết thu dịch chiết phƣơng pháp soxhlet 37 Hình 4.1 Dịch chiết cao chiết mẫu 40 Hình 4.2 Cao chiết phƣơng pháp ép thuỷ lực .40 Hình 4.3 Củ gừng gió tƣơi thu thập Tuyên Quang 43 Hình 4.4 Hình ảnh vi phẫu củ Gừng gió 44 Hình 4.5 Hình ảnh vi phẫu thân gừng gió 45 Hình 4.6 Hình ảnh vi phẫu gừng gió 46 Hình 4.7 Hình ảnh vi phẫu bột gừng gió vật kính 40 46 Hình 4.8 Bột zerumbone sau kết tinh 47 vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải nghĩa EtOAc Ethyl acetate HPLC-MS Liquid chromatography–mass spectrometry NMR Nuclear magnetic resonance MetOH Methanol TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam IC50 The half maximal inhibitory concentration Cs Cộng CC Column Chromatography MITF microhthalmia SKBM Sắc kí mỏng viii Thí nghiệm 2: Phân lập tinh zerumbone phƣơng pháp kết tinh phân đoạn Từ phƣơng pháp ép thuỷ lực thu đƣợc cao chiết, tiếp tục gộp tất dịch chiết n-hexan làm khô Na2SO4 khan, sau cất loại dung mơi thu đƣợc phần khơng phân cực củ gừng gió Thêm 2% n-hexan tính theo khối lƣợng khuấy tiến hành kết tinh phân đoạn theo nhiệt độ thời gian sau lọc thu đƣợc zerumbone Sản phẩm zerumbone đƣợc kiểm tra độ tinh khiết SKBM xác định hàm lƣợng phƣơng pháp HPLC-MS Thí nghiệm 3: Xây dựng tiêu chuẩn dƣợc liệu tiêu chuẩn chất lƣợng zerumbone sau tinh Dựa tiêu chí Dƣợc điển Việt Nam IV V tiêu chuẩn dƣợc liệu  Mơ tả • Soi bột • Mất khối lƣợng làm khơ • Tro tồn phần • Tỷ lệ vụn nát • Vi phẫu • Định tính • Định lƣợng • Kim loại nặng Các u cầu cảm quan, yêu cầu tiêu lí hố, u cầu an tồn thực phẩm, u cầu tối đa độc tố vi nấm 38 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới khối lƣợng cao chiết thu đƣợc Mẫu gừng gió thu thập Ba Vì – Hà Nội, sau đƣợc xử lí đƣợc tiến hành tách chiết để thu dịch chiết Sử dụng ba phƣơng pháp chiết ngâm dầm, soxhlet ép thuỷ lực với lƣợng mẫu dùng lần lƣợt 50g, 10g 3kg Sau cô đuổi dung môi thời gian định, để lắng 24h, loại bỏ dung môi thu đƣợc cao chiết Cân khối lƣợng cao xác cân phân tích Bảng 4.1 Khối lƣợng hiệu suất cao chiết thu đƣợc từ dịch chiết gừng gió thu thập Ba Vì – Hà Nội Phƣơng pháp Khối lƣợng cao chiết Hiệu suất chiết (g) (%) 0,101 0,202 Cao lỏng, màu vàng nhạt 0,061 0,61 Cao đặc, màu vàng đậm 6,915 0,230 Cao đặc, có màu nâu vàng Ngầm dầm (dung mơi chloroform) Soxhlet (dung môi ethanol 96%) Ép thuỷ lực (dung môi n-hexan) Đặc điểm cao thu đƣợc Từ kết tách chiết, ta thấy tách chiết phƣơng pháp Soxhlet, phƣơng pháp ngâm dầm với phƣơng pháp ép thuỷ lực tạo khối lƣợng cao chiết khác Mẫu gừng gió đƣợc tách chiết phƣơng pháp ép thuỷ lực thu đƣợc khối lựợng cao chiết hiệu suất chiết cao so với phƣơng pháp socxhlet ngâm dầm Vậy nên, ta dùng cao chiết đƣợc tách chiết phƣơng pháp ép thuỷ lực cho thí nghiệm 39 Hình 4.1 Dịch chiết phƣơng pháp ngâm dầm cao chiết mẫu Hình 4.2 Cao chiết gừng gió phƣơng pháp ép thuỷ lực 4.2 Ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới hàm lƣợng zerumbone thu đƣợc Tiến hành nghiền củ gừng gió đến cỡ hạt Ø ≤ 1mm ép đến bã ép có khối lƣợng khơng đổi thu đƣợc 2120g dịch ép 880g bã ép Dịch ép sau đƣợc chiết với n-hexan Bã ép đƣợc nghiền lại chiết với n-hexan Gộp dịch chiết n-hexan, làm khô, cất loại dung môi kết tinh phân đoạn thu zerumbone Cơ sở khoa học phƣơng pháp tinh dầu zerumbone phần không phân cực phân cực gừng gió, dung mơi tốt để chiết zerumbone dung môi không phân cực nhƣ n-hexan Tuy nhiên n-hexan có đặc điểm dung môi không phân cực nên không tan nƣớc khó khuếch tán xâm nhập vào chất củ gừng gió thành phần củ gừng gió chủ yếu chất phân cực nhƣ nƣớc chiếm 40 khoảng 73% chất nhƣ hemi-cellulose, cellulose Để tăng hiệu chiết zerumbone n-hexan cần phải loại nƣớc để cải thiện môi trƣờng chiết Thông thƣờng ngƣời ta hay sử dụng phƣơng pháp thái lát sau phơi sấy khơ, nhiên phƣơng pháp tốn nhiều thời gian lƣợng, gây biến chất sản phẩm nhiệt Từ chọn phƣơng pháp ép thuỷ lực đề quy trình phân lập zerumbone nhƣ sơ đồ khối dƣới đây: kg bột củ gừng gió tươi Ép thủy lực 6kg/cm 2120g dịch ép 880g bã ép Chiết với n-hexan Chiết với n-hexan (5 x 800ml) (5 x 2200ml) Dịch chiết n-hexan Cất loại dung môi 33g phần không phân cực Kết tinh phân đoạn 10,5g zerumbone Sơ đồ quy trình phân lập zerumbone từ củ gừng gió Với quy trình thu đƣợc zerumbone từ củ gừng gió đạt hiệu suất 0,35% tính theo ngun liệu tƣơi Sản phẩm có điểm nóng chảy 66-67C, có Rf = 0,75 (dung môi n-hexan/EtOAc 19/1) đạt độ tinh khiết 99,5% 41 4.3 Tinh Zerumbone: Sau thu đƣợc phần khơng phân cực củ gừng gió phƣơng pháp ép thuỷ lực Thêm 2% n-hexan tính theo khối lƣợng khuấy tiến hành kết tinh phân đoạn: Mỗi lần lấy khoảng 3g hòa tan ml hexan, sau cho vào tủ lạnh thu đƣợc chất rắn Lọc tách chất rắn, tiến hành kết tinh lại - lần hệ dung môi methanol : hexan (V:V = 2:1) thu đƣợc 10,5g chất rắn Kiểm tra độ tinh khiết chất rắn thu đƣợc sắc ký mỏng với hệ dung môi hexan: ethyl acetate = 9,5 : 0,5, Rf = 0,51 Bảng 4.2 Kết khối lƣợng zerumbone thu đƣợc Phƣơng pháp Zerumbone (g) Hiệu suất (%) Đặc điểm zerumbone Kết tinh phân đoạn 10,5 0,35 Màu trắng dạng tinh thể Ngâm chiết kg bột củ gừng gió lít MetOH bình kín dung tích lít ngày nhiệt độ thƣờng, sau lọc lấy dịch lọc, phần bã tiếp tục đƣợc ngâm chiết thêm lần Dịch chiết đƣợc gộp cất quay đến thể tích cịn 1/8 Sau pha thêm lần thể tích nƣớc tiến hành chiết n-hexan Gộp dịch chiết n-hexan làm khô Na2SO4 khan, cất loại n-hexan thu đƣợc phần không phân cực củ gừng gió Tiến hành sắc ký cột, sử dụng cột sắc ký chiều dài 1,2 m đƣờng kính 4cm, chất nhồi silical gel cỡ hạt 40-60 μm (tỷ lệ 1/30) theo phƣơng pháp nhồi ƣớt n-hexan, rửa cột hệ dung môi n-hexan/EtOAc 95/5 với tốc độ rửa 7ml/phút lấy thành phân đoạn phân đoạn 15 ml Kiểm tra phân đoạn SKBM so sánh với zerumbone chuẩn Gộp phân đoạn có vệt zerumbone cất loại dung môi thu đƣợc zerumbone Kết từ kg bột củ gừng gió tƣơi thu đƣợc 1,6 g zerumbone hiệu suất 0,16%, sản phẩm có điểm nóng chảy 64-65C, Rf=0,65 (n-hexan/EtOAc 95/5) Bảng 4.3 Hiệu suất zerumbone thu đƣợc từ phƣơng pháp phân lập khác Phƣơng pháp CC FCr Hiệu suất (%) 0,16 0,35 Điểm chảy(%) 64-65 66-67 Rf 0,65 0,75 42 Kết cho thấy phƣơng pháp tối ƣu để điều chế Zerumbone tinh khiết từ thân rễ gừng gió kết tinh phân đoạn nhiệt độ thấp 4.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở dƣợc liệu cho nguyên liệu đầu vào gừng gió 4.4.1 Xây dựng tiêu chuẩn dƣợc liệu cho nguyên liệu đầu vào gừng gió Từ kết nghiên cứu, tơi đề xuất tiêu chuẩn sở dƣợc liệu gừng gió đƣợc trình bày nhƣ sau: Bộ phận củ tƣơi hay phơi khô, xay bột củ 4.4.1.1 Mơ tả Hình 4.3 Củ gừng gió tƣơi thu thập Ba Vì Thân rễ khơng có hình dạng định, thƣờng phân nhánh, dài cm đến cm, dày 0,5 cm đến cm Mặt ngồi màu trắng tro hay vàng nhạt, có vết nhăn dọc Đỉnh nhánh có đỉnh sinh trƣởng thân rễ, vết bẻ màu trắng tro ngà vàng, có bột, vân trịn rõ, mặt cắt ngang có sợi thƣa, mùi thơm, vị cay nóng Củ có màu vàng cịn non, mùi thơm đặc trƣng Củ to già, bên có ruột màu vàng, thơm Sau đó, củ chuyển sang màu trắng có vị đắng, lúc dùng củ để tách chiết thu zerumbone để chữa bệnh 4.4.1.2 Vi phẫu * Vi phẫu củ gừng gió: Vi phẫu tiết diện trịn, vùng vỏ chiếm diện tích vi phẫu (đƣờng kính vi phẫu mm) Các mô gồm: Tầng lông hút, lớp tế bào hình đa giác, kích thƣớc đều, vài tế bào mọc dài thành lông hút Tầng suberoid gồm 12 lớp tế bào hình đa giác, xếp sát Mơ mềm vỏ ngồi đạo, tế bào hình đa giác đầu 43 tù, xếp lộn xộn; mô mềm vỏ , 4-7 lớp tế bào hình bầu dục nằm ngang xếp thành vòng đồng tâm dãy xuyên tâm Rải rác mơ mềm vỏ có nhiều tế bào hóa mơ cứng, nội bì dày, liên tục Trụ bì, lớp tế bào hình đa giác xếp xen kẽ nội bì, có xu hƣớng bị ép dẹp phía cực gỗ, vài tế bào trụ bì hóa mơ cứng vách mỏng Nhiều bó libe gỗ xếp xen kẽ thành vịng dƣới trụ bì, bó gỗ gồm 1-2 mạch tiền mộc Nhiều mạch hậu mộc to, hình đa giác kích thƣớc khơng xếp lộn xộn quanh tủy Mô mềm tủy hẹp, tế bào hình đa giác, vách hóa mơ cứng dày quanh tủy cịn cellulose tủy Hình 4.4 Hình ảnh vi phẫu củ gừng gió * Hình ảnh vi phẫu thân lõi gừng gió Biểu bì lớp tế bào hình đa giác hay chữ nhật khơng đều, bị ép dẹp chỗ có bó dẫn Mơ mềm đạo tế bào hình đa giác khơng đều, vách mỏng, kích thƣớc to tế bào biểu bì Mơ cứng tế bào hình đa giác, kích thƣớc nhỏ, 2-4 lớp xếp thành vòng gần nhƣ liên tục Rất nhiều bó dẫn kích thƣớc khơng xếp lộn xộn từ dƣới biểu bì vào tủy, bó ngồi vịng mơ cứng kích thƣớc lớn Mỗi bó gồm 1-4 mạch gỗ hình đa giác hay trịn, libe xếp chồng lên gỗ Các bó dẫn phía ngồi vịng mơ cứng đƣợc bao vịng mơ cứng gồm 2-3 lớp tế bào vách dày hóa sợi phía libe; bó vùng tủy thƣờng có cụm mơ cứng libe dƣới gỗ, bó mạch gỗ 44 chiếm hết vùng tủy Mô mềm tủy đạo, tế bào hình đa giác, kích thƣớc tƣơng đƣơng mơ mềm vỏ Tế bào tiết có nhiều vùng tủy Hình 4.5 Hình ảnh vi phẫu thân gừng gió * Hình ảnh vi phẫu gừng gió Gân mặt phẳng, mặt dƣới lồi trịn Biểu bì tế bào hình chữ nhật đứng, biểu bì dƣới tế bào hình chữ nhật, hóa mơ cứng vách mỏng, có nhiều lông che chở đơn bào ngắn, cutin dày Dƣới biểu bì biểu bì dƣới có vài lớp tế bào hình đa giác, kích thƣớc khơng đều, hóa mơ cứng vách mỏng, vùng mơ cứng sát biểu bì dƣới thƣờng gặp 1-3 tế bào mơ cứng hình bầu dục vách dày, ống trao đổi rõ Mơ mềm đạo, tế bào hình đa giác, kích thƣớc khơng Rất nhiều bó dẫn gỗ libe dƣới, kích thƣớc khơng đều, xếp thành hàng biểu bì dƣới xếp lộn xộn dƣới biểu bì trên, thƣờng gặp bó gân chính, bó to sát biểu bì dƣới Các bó dẫn đƣợc bao vịng mơ cứng tế bào vách dày hóa sợi phía libe bó to Xen bó to mơ mềm chứa nhiều lục lạp có khuyết to 45 Hình 4.6 Hình ảnh vi phẫu gừng gió * Hình ảnh vi phẫu bột gừng gió sau nghiền: Hình 4.7 Hình ảnh vi phẫu bột gừng gió vật kính 40 Định lƣợng tinh dầu dƣợc liệu Cho 30 g dƣợc liệu đƣợc cắt nhỏ vào bình cầu dung tích 500 ml dụng cụ định lƣợng tinh dầu dƣợc liệu Thêm 300 ml nƣớc, tiến hành cất 3giờ Dƣợc liệu phải chứa 0,5% tinh dầu tính theo dƣợc liệu khơ kiệt 46 Đặc điểm bột củ gừng gió mịn, màu vàng nhạt, nguyên chất không lẫn tạp Độ ẩm: không 13% Mất khối lƣợng làm khô: không 10% Tro tồn phần: Khơng q 6% Kim loại nặng: Không 10 ppm Tỷ lệ vụn nát: Không 2% 4.5 Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng zerumbone 4.5.1 Yêu cầu cảm quan Bảng 4.4 Yêu cầu cảm quan Tên tiêu Yêu cầu Màu sắc Có màu trắng tinh khiết, dạng tinh thể Trạng thái Dạng bột khô, mịn, khơng vón cục, phân tán tốt nƣớc Mùi vị Khơng mùi, thơm tự nhiên Hình 4.8 Bột zerumbone sau kết tinh 4.5.2 Chỉ tiêu lý hoá Bảng 4.5 Các tiêu lý hoá Tên tiêu Mức Cỡ hạt, nm, không lớn 100 nm Độ ẩm, % khối lƣợng, không lớn Hàm lƣợng curcuminoid tổng số, % khối lƣợng Hàm lƣợng tro tổng số, % khối lƣợng, không lớn 47  90% 2,0 4.5.3 Yêu cầu an toàn thực phẩm Bảng 4.6 Giới hạn tối đa kim loại nặng Tên tiêu Mức tối đa Hàm lƣợng cadimi, mg/kg 1,0 Hàm lƣợng chì, mg/kg 2,0 Hàm lƣợng thủy ngân, mg/kg 0,05 Hàm lƣợng asen, mg/kg 5,0 4.5.4 Giới hạn tối đa độc tố vi nấm Bảng 4.7 Giới hạn tối đa độc tố vi nấm Tên tiêu Mức tối đa Hàm lƣợng aflatoxin B1, μg/kg Hàm lƣợng aflatoxin tổng số, μg/kg 10 Hàm lƣợng ochratoxin A, μg/kg 30 48 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận 1, Từ kết tách chiết, ta thấ y tách chiết phƣơng pháp ép thuỷ lực tối ƣu so với phƣơng pháp soxhlet ngâm dầm Khối lƣợng cao chiết chiết ép thuỷ lực l , g v đ t h i ệ u s u ấ t l , % 2, Bằng phƣơng pháp ép thuỷ lực thu đƣợc 2120g dịch ép 880g bã Dịch ép đƣợc chiết lần lần 350 ml n-hexan Phần bã đƣợc nghiền nhỏ cỡ hạt Ø