Nghiên cứu đánh giá, bình tuyển và xây dựng tiêu chuẩn cây mẹ ưu tú phục vụ công tác chọn tạo giống sâm ngọc linh (panax vietnamensis ha et grushv) chất lượng cao tại quảng nam (tt)

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ LÂM HƯNG KIM HỒN NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ, BÌNH TUYỂN VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CÂY MẸ ƯU TÚ PHỤC VỤ CÔNG TÁC CHỌN TẠO GIỐNG SÂM NGỌC LINH (PANAX VIETNAMENSIS HA ET GRUSHV) CHẤT LƯỢNG CAO TẠI QUẢNG NAM Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Mã số: 8420201 TĨM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Đà Nẵng – Năm 2022 THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội Cơng trình hồn thành TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Hoàng Trung Hiếu TS Đinh Xuân Tú Phản biện 1: TS Tạ Ngọc Ly Phản biện 2: TS Vũ Thị Bích Hậu Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ Công nghệ Sinh học họp Trường Đại học Bách khoa vào ngày tháng năm 2022 Có thể tìm hiểu luận văn tại: − Trung tâm Học liệu truyền thông, Trường Đại học Bách khoaĐHĐN; − Thư viện Khoa Hóa, Trường Đại học Bách khoa – ĐHĐN THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Cây sâm Ngọc Linh loài dược liệu đặc biệt quý đặc hữu nước ta, xuất tỉnh Quảng Nam Kon Tum Cây sâm Ngọc Linh phủ xác định sinh kế sản phẩm quốc gia cần bảo tồn phát triển, không để tạo sản phẩm có giá trị kinh tế cao, góp phần vào cơng xóa đói giảm nghèo mà bảo tồn nguồn gen quý đất nước Do nhu cầu nguồn giống chất lượng để mở rộng diện tích vùng trồng lớn Tuy nhiên, nghiên cứu sâm Ngọc Linh chủ yếu thành phần hoạt chất tác dụng sinh học dược lý Gần đây, Trương Thị Hồng Hải cộng có nghiên cứu mơ tả tính trạng sâm Ngọc Linh tuổi, đưa kết luận nên sử dụng tuổi trở lên để nghiên cứu đặc điểm hình thái điển hình cho lồi sâm Ngọc Linh Các nghiên cứu tuyển chọn giống sâm Ngọc Linh hạn chế Hiện nay, sâm Ngọc Linh trồng bán hoang dã tán rừng theo phương pháp truyền thống, công tác nhân giống từ hạt cịn gặp nhiều khó khăn, chất lượng giống không đồng Một nguyên nhân mẹ chưa tuyển chọn tiêu chuẩn hố Vì chúng tơi định thực đề tài: “Nghiên cứu đánh giá, bình tuyển xây dựng tiêu chuẩn mẹ ưu tú phục vụ công tác chọn tạo giống sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv) chất lượng cao Quảng Nam” Mục tiêu nghiên cứu Tuyển chọn xây dựng tiêu chuẩn mẹ sâm Ngọc Linh ưu tú để phục vụ cho công tác chọn giống, nhân giống sản xuất sâm THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội Ngọc Linh chất lượng cao, góp phần bảo tồn, phát triển nguồn gen, xây dựng thương hiệu quốc gia sâm Ngọc Linh Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu Mẫu sâm Ngọc Linh năm tuổi Trung tâm sâm Ngọc Linh huyện Nam Trà My thu thập năm 2017 3.2 Phạm vi nghiên cứu Mẫu sâm Ngọc Linh năm tuổi thu thập thôn 2, thôn thôn xã Trà Linh, huyện Nam Trà My, tỉnh Quảng Nam Các thí nghiệm thực Trung tâm ươm tạo hỗ trợ doanh nghiệp KHCN (bộ KHCN) Phương pháp nghiên cứu Các bước nghiên cứu tiến hành sau: - Giám định mẫu sâm Ngọc Linh thu thập sở phân tích PCR đa mồi thị phân tử ADN đặc hiệu theo quy trình kiểm định sâm Ngọc Linh Trung tâm Ươm tạo Hỗ trợ doanh nghiệp KHCN – Bộ Khoa học Công Nghệ - Thu thập số liệu hình thái, đặc điểm sinh trưởng phát triển tập đoàn mẫu giống sâm Ngọc Linh Dựa số liệu thu thập đánh giá đa dạng hình thái - Đánh giá mối quan hệ kiểu gen quần thể - Đánh giá sinh trưởng quần thể, lựa chọn số nhóm mẫu ưu tú - Định lượng hàm lượng saponin mẫu ưu tú, lựa chon mẫu có hàm lượng dược liệu cao THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội - Xây dựng tiêu chuẩn mẹ ưu tú với đặc điểm hoạt chất dược học (Rg1, MR2, Rb1 saponin tổng số) có hàm lượng cao, sinh trưởng phát triển tốt, đặc điểm hình thái tương ứng Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học - Đóng góp sở lý luận cho việc nghiên cứu tuyển chọn giống sâm Ngọc Linh chất lượng cao, đánh giá mức độ đa dạng quần thể sâm Ngọc Linh Quảng Nam - Bổ sung tư liệu khoa học chất lượng dược liệu củ sâm Ngọc Linh 5.2 Ý nghĩa thực tiễn Chọn lọc - dòng sâm Ngọc Linh ưu tú có đặc điểm sinh trưởng phát triển tốt, giá trị dược liệu cao phục vụ cho cơng tác nhân giống, mở rộng diện tích vùng trồng sâm Ngọc Linh THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Sâm Ngọc Linh 1.1.1 Nguồn gốc lịch sử phát triển sâm Ngọc Linh 1.1.2 Đặc điểm hình thái, sinh trưởng phát triển Sâm Ngọc Linh 1.1.3 Đặc điểm thành phần hóa học sâm Ngọc Linh 1.1.4 Giá trị dược liệu sâm Ngọc Linh 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Các loại phản ứng multiplex PCR 1.2.3 Thiết kế mồi cho phản ứng multiplex PCR 1.2.4 Ưu điểm phương pháp multiplex PCR 1.2.5 Tối ưu hóa thành phần cho phản ứng multiplex PCR 1.2.6 Ứng dụng phản ứng multiplex PCR 1.3 Cơ sở lý thuyết diện di 1.3.1 Khái niệm 1.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng 1.3.3 Sự rây phân tử 1.3.4 Điện di gel 1.3.5 Thiết bị cho điện di gel 1.3.6 Điện di đĩa THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 1.3.7 Cơ sở điện di đĩa 1.3.8 Linh độ tương đối 1.3.9 Quan sát vùng phân tách 1.4 Chỉ thị phân tử 1.4.1 Khái niệm đặc điểm 1.4.2 Kỹ thuật SSR (Simple Sequence Repeats) 1.4.3 Expressed Sequence Tag (EST) 1.5 Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước có liên quan đến đề tài 1.5.1 Tình hình nghiên cứu nước Cây sâm Ngọc Linh loài thực vật quý có nhiều ứng dụng nên có nhiều nghiên cứu nước tập trung việc nhân giống tạo sinh khối điều kiện in vitro sâm Ngọc Linh, cụ thể là: + Năm 2013, Nguyễn Bảo Triệu cộng nghiên cứu nuôi cấy in vitro sâm Ngọc Linh[5] + Năm 2013 năm 2014, Nguyễn Hữu Hổ cộng nghiên cứu tạo nuôi nhân mô sẹo có khả sinh phơi soma từ mơ sẹo môi trường [10, 11] + Năm 2014, Vũ Thị Đào cộng nghiên cứu biến nạp gen nhằm thay đổi thông tin di truyền giúp cải thiện tạo hoạt chất sinh học có giá trị, đặc biệt dùng vi khuẩn đất Agrobacterium rhizogenes chứa gen Rol cảm ứng tạo rễ tóc [12] THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội + Năm 2015, Dương Tấn Nhựt cộng nghiên cứu sản xuất sinh khối rễ kỹ thuật chuyển gen góp phần tạo nguồn sinh khối lớn [8] + Năm 2016, Dương Tấn Nhựt cộng đánh giá khả sinh trưởng tích lũy saponin rễ bất định sâm Ngọc Linh rễ tơ chuyển gen [9] + Năm 2018, Trương Thị Hồng Hải cộng nghiên cứu mơ tả tính trạng 80 Sâm Ngọc Linh tuổi đưa kết luận nên sử dụng Sâm Ngọc Linh tuổi trở lên để nghiên cứu đặc điểm hình thái điển hình cho lồi Sâm Ngọc Linh [6] Năm 2020, tiếp tục với nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền 100 sâm Ngọc Linh tuổi trồng trại sâm Tăk Ngo xã Trà Linh, huyện Nam Trà My, tỉnh Quảng Nam Kết cho thấy đa dạng di truyền cá thể quần thể sâm nghiên cứu cao [7] + Năm 2021, Đinh Văn Phê cộng đưa số gợi ý chiến lược bảo tồn phát triển loài sâm Ngọc Linh tiếng Việt Nam [13] 1.5.2.Tình hình nghiên cứu ngồi nước Trên giới, nước trồng sâm tiếng Hàn Quốc có nghiên cứu cụ thể phân loại nhân sâm dựa theo hình thái khả tích lũy hợp chất + Năm 2012, Kyong Hwan Bang cộng nghiên cứu để cung cấp thơng tin giống dịng nhân giống nhân sâm Hàn Quốc (Panax ginseng C A Mey.) [19] THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội + Năm 2017, nhóm chun gia Hàn Quốc cơng bố thông qua Hiệp hội bảo vệ giống trồng UPOV – Hanover, Đức Nội dung nguyên tắc chung để kiểm tra, đánh giá tính khác biệt, tính đồng tính ổn định, mơ tả đặc tính đa dạng nhân sâm [20] + Năm 2018, LijuanChen cộng nghiên cứu thiết lập tiêu chuẩn phân loại giống Panax notoginseng để ổn định chất lượng phận làm thuốc P notoginsen [21] THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu Sử dụng 150 mẫu sâm Ngọc Linh từ năm tuổi Trung tâm sâm Ngọc Linh huyện Nam Trà My (gọi tắt Trung tâm) thu thập năm 2017, trồng lưu giữ Vườn bảo tồn sâm Ngọc Linh Trung tâm xã Trà Linh, huyện Nam Trà My, Quảng Nam Sử dụng 29 mồi EST-SSR để đánh giá mối quan hệ di truyền quần thể sâm Ngọc Linh Bảng 2.1 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thu thập mẫu tách chiết ADN tổng số 2.2.2 Giám định mẫu sâm Ngọc Linh chuẩn kỹ thuật PCR 2.2.3 Đánh giá khả sinh trưởng phát triển, đặc điểm hình thái 2.2.4 Phân tích định lượng saponin củ sâm Việt Nam 2.2.5 Xây dựng tiêu chuẩn mẹ ưu tú: 2.2.6 Phương pháp thống kê THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết thu thập giám định mẫu sâm Ngọc Linh chuẩn thị phân tử: 3.1.1 Thu thập mẫu sâm Ngọc Linh 3.1.2 Kiểm định tính giống sâm Ngọc Linh kỹ thuật PCR Mẫu thu thập thuộc 15 quần thể sâm (kí hiệu từ M1 – M15) tiến hành phân tích gộp, quần thể chia thành nhóm, nhóm gồm mẫu – tương ứng với cá thể) Kết điện sản phẩm PCR (ở Hình 3.1, Hình 3.2, Hình 3.3, Hình 3.4, Hình 3.5) cho thấy: tất mẫu giám định thuộc 15 quần thể thu thập có băng gen đồng với băng gen chuẩn sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) vị trí 178 bp 243 bp Điều chứng tỏ mẫu thu thập sâm Ngọc Linh Hình 3.1: Ảnh điện di quần thể từ M1-M3: NL – chuẩn sâm Ngọc Linh; F – Chuẩn sâm Lai Châu 3.2 Kết đánh giá nguồn gen dựa vào đặc diểm hình thái sâm Ngọc Linh THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 10 Qua kết khảo sát đặc điểm hình thái cho thấy có đến 13/36 đặc điểm giống quần thể sâm Ngọc Linh: số thân, số chét, hình dạng chét trung tâm, hình dạng cắt ngang chét trung tâm, hình dạng mép chét, màu sắc già, cụm hoa, màu sắc hoa, kiểu đính hoa chùm hoa, màu sắc chín, hình dạng hạt, màu sắc hạt, hình dạng rễ củ Theo Bảng 3.2, có 98% cá thể phân tích có chiều dài thân trung bình; 88,67% số mẫu mang thân; 98,22% có chiều dài cuống trung bình với kiểu đính cuống chủ yếu đứng vừa phải (60%); chiều dài chét trung tâm nhóm trung bình với tỷ lệ cá thể 100% 72% có chiều rộng 4cm Màu sắc dao động từ xanh trung bình 20% đến xanh đậm 80% Tính trạng Phân nhóm tính trạng Tỷ lệ mẫu Tính giống trạng (%) Tỷ lệ Phân nhóm tính trạng mẫu giống (%) Hình Ngắn (≤20 cm) 0,00 dạng chét trung Thìa 100,00 Phẳng 100,00 tâm Chiều Hình dài thân dạng cắt Trung bình (21–39 cm) 98,00 mặt ngang chét trung tâm THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 11 Dài (≥ 40 cm) Ít (3 lá) 2,00 (4 88,67 lá) Nhiều (5 lá) Ngắn (≤ Chiều dài cuống cm) cm) Kiểu đính cuống vào thân Cường độ xanh Trải ngang Đứng vừa phải Xanh sáng Xanh trung bình 100,00 cm) Chiều dài Trung bình cuống hoa (14–21 cm) Dài (≥ 22 58,67 35,33 6,00 cm) 14,67 Cụm hoa Đơn giản 100,00 Rẻ quạt 100,00 Đỏ 100,00 Kiểu đính 98,22 hoa cụm cm) Dài (≥ Vàng Ngắn (≤ 13 7,33 Trung bình (7– già 4,00 Trung bình Số Màu 0,00 Màu chín Trịn 40,00 Dạng 60,00 0,00 Trịn số tám Đường kính 20,00 59,87 củ Mỏng (≤ cm) (1,1 Trung bình –1,4 THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG 40,13 0,00 2,00 Lưu hành nội 12 cm) Xanh đậm Ngắn (≤ cm) Chiều Trung bình dài (8– chét 12 cm) Dài (≥ 13 cm) Ngắn ( cm) Dày (≥ 1,5 80,00 cm) Ngắn (≤ 0,00 100,00 cm) Chiều dài củ 0,00 (5,1 - 6,9 0,00 cm) cm) Màu củ 0,00 Trung bình Dài (≥ 0,00 98,00 Xám 100,00 100,00 28,00 72,00 Tính trạng hình thái hoa có đa dạng, có tính trạng chiều dài cuống hoa dạng có biến động mẫu nghiên cứu Tất cá thể sâm có củ màu xám; 98% mẫu giống có đường kính lớn 1,5cm 100% chiều dài củ lớn 7cm THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 13 Qua kết xử lý số liệu phần mềm R studio cho thấy khơng có xu hướng rõ rệt theo tính trạng nhóm quần thể sâm Ngọc Linh (xem Hình 3.6 – 3.15) Nên tiếp tục đánh giá khác biệt hai quần thể với theo tính trạng cho thấy: tính trạng số M2 M3, M2 M4, M4 M13 có khác biệt có ý nghĩa với p < 0.05 Theo đường kính thân có khác biệt M2 M15, M2 M5, M2 M7 với p < 0.05 Số lượng có khác biệt M14 M1, M15 M1 với p < 0.05 Còn xét theo chiều dài thân, chiều dài củ, đường kính củ chính, chiều dài chét trung tâm, chiều rộng chét trung tâm, chiều dài cuống lá, chiều dài cuống hoa khơng có khác biệt quần thể Qua biểu đồ phân tích thành phần (PCA - Principal Component Analysis) Hình 3.16 cho thấy vịng trịn đại diện cho nhóm mẫu gần nằm chồng lên nhau, mức độ phân tán liệu thấp Hay nói cách khác khơng có khác biệt đáng kể đặc điểm hình thái 15 quần thể sâm Ngọc Linh thu thập Hình 3.16: Biểu đồ phân tích thành phần (PCA - Principal Component Analysis) THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 14 Hình 3.17: Biểu đồ thể mối quan hệ 150 cá thể sâm Ngọc Linh Với mức độ khác biệt 40% quần thể xét tất tính trạng nghiên cứu chia 15 quần thể thành phân nhóm Phân nhóm phân nhóm chiếm số lượng cá thể lớn, 74 73 cá thể tương ứng tỉ lệ 49,33% 48,66% Riêng phân nhóm số bao gồm cá thể S346, S347, S102 tương ứng với tỉ lệ 2% Qua đánh giá mẫu nhóm mẫu cho thấy mẫu quần thể khác có đặc điểm hình thái tương tự Do kết luận 15 quần thể có tương đồng hình thái cao Để làm rõ mối quan hệ quần thể với nhau, tiếp tục đánh giá mối quan hệ di truyền Mục 3.3 THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 15 3.3 Nghiên cứu mối quan hệ di truyền quần thể sâm Ngọc Linh thị EST-SSR 3.3.1 Xác định nhiệt độ gắn mồi tối ưu cho phản ứng PCR 3.3.2 Xác định allen đa hình số PIC Trên sở phân tích hình ảnh điện di sản phẩm PCR 29 thị phân tử xác định 26 (chiếm 89%) thị phân tử cho đa hình 15 giống nghiên cứu Trong số có 19 thị phân tử cho biểu đa hình cao giống sâm với Phân tích kết Bảng 3.4 cho thấy: số đa hình PIC (Polymorphic Information Content) biến động qua vị trí locus (chỉ thị) dao động từ đến 0,90 Trong số 29 thị có thị khơng đa hình với giá trị số PIC gồm: Mr2U1, PVM129, VES17; 26 thị cho đa hình (polymorphism) giống, với giá trị PIC thay đổi từ 0,36 ( PVM104) đến 0,90 (L149) Số allen đa hình xuất nhiều thị L149 với 11 allen Tổng số allen đa hình 29 thị 121, trung bình thị có 4,17 allen Tổng số allen đa hình nhân lên 29 thị 15 giống sâm Ngọc Linh 936 allen, trung bình thị khuếch đại 32,28 allen Trong đó, thị khuếch đại nhiều allen L73 với 97 allen thị nhân lên allen PVM129 với 11 allen Giá trị PIC vị trí locus có allen (monomorphism) Các thị phân tử có giá trị PIC lớn 0,5 cho phân biệt cao đa hình thị (DeWoody cs, 1995) Như vậy, qua Bảng 3.4 nhận thấy, có 20/29 thị có THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 16 giá trị PIC > 0,5 Điều cho tỏ, có 68% số thị sử dụng nghiên cứu cho mức độ đa hình cao 3.3.3 Mối quan hệ di truyền quần thể sâm Ngọc Linh phân loại Hệ số tương đồng di truyền phản ánh mối quan hệ di truyền mẫu sâm Ngọc Linh với Các cặp lai cho ưu lai cao thường có hệ số tương đồng di truyền nằm khoảng từ 0,4 đến 0,7 Phân tích kết Bảng 3.5 cho thấy, hệ số tương đồng di truyền giống 15 mẫu sâm Ngọc Linh nghiên cứu dao động từ 0,43-0,88 Trong đó, cặp giống M1 M6 có sai mặt di truyền di truyền lớn (0,43) Cặp giống M2 M3 gần mặt di truyền (0,88) Từ 15 giống sâm thiết lập 105 cặp bố mẹ khác Trong đó, có 20 cặp giống có hệ số tương đồng di truyền lớn 0,7 Có 95 cặp bố mẹ có hệ số tương đồng di truyền nằm khoảng 0,43 - 0,7 Trong số có 63 cặp có hệ số tương đồng di truyền dao động từ 0,6 đến 0,7 Các cặp giống sử dụng làm bố mẹ để lai tạo giống có ưu lai cao THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 17 Hình 3.28: Biểu đồ mơ tả quan hệ di truyền 15 quần thể sâm Ngọc Linh xác định thị phân tử EST-SSR Với hệ số tương đồng di truyền 0,68 chia 15 quần thể sâm Ngọc Linh nghiên cứu thành nhóm sau: - Nhóm I: gồm mẫu M1 - Nhóm II: gồm mẫu M2, M3, M4, M15, M5, M6 Trong đó, cặp M2 M3 có hệ số tương đồng di truyền lớn 0,88; cặp cịn lại có hệ số tương đồng di truyền nằm khoảng 0,64 – 0,82 - Nhóm III: gồm mẫu M7, M8, M9, M10, M12 Trong cặp có hệ số tương đồng di truyền dao động từ 0,63 – 0,78 - Nhóm IV: gồm mẫu M11, M13 M14 Trong cặp có hệ số tương đồng di truyền lớn 0,6 Như vậy, với 29 thị phân tử EST-SSR sử dụng xác định 121 allen đa hình, trung bình 4,17 allen đa hình cho thị Mức độ đa hình khác giống thị phân tử sử THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 18 dụng Hệ số tương đồng di truyền giống sâm Ngọc Linh nghiên cứu nằm khoảng 0,43 -0,88 Cặp giống có mối quan hệ di truyền gần gũi M2 M3, thấp cặp giống M1 M6 Sử dụng phương pháp phân nhóm UPGMA vị trí có hệ số tương đồng di truyền 0,68 giống sâm nghiên cứu chia thành nhóm 3.4 Kết đánh giá đặc điểm sinh trưởng quần thể tuyển chọn mẹ 3.4.1 Đánh giá đặc điểm sinh trưởng Theo Bảng 3.6 3.7, mẫu có đặc điểm sinh trưởng thân tốt có số tốt khối lượng, đường kính, chiều dài củ chính, số quả, trọng lượng Điều chứng tỏ có mối tương quan tỉ lệ thuận quan sinh trưởng mặt đất mặt đất Tóm lại, dựa vào đặc điểm sinh trưởng trình bày chúng tơi tuyển chọn mẫu giống ưu tú có khả sinh trưởng, phát triển tốt M1, M3, M9, M14 Chúng tiếp tục đánh giá hàm lượng dược liệu mẫu Mục 3.4.2 3.4.2 Đánh giá hàm lượng dược liệu mẫu ưu tú Mẫu Saponin Rg1 (%) MR2 (%) Rb1 (%) M1 4,84 ± 1,37 4,55 ± 0,63 3,06 ± 1,27 17,53 ± 2,37 M3 4,31 ± 1,3 4,73 ± 0,9 3,6 ± 0,95 17,43 ± 1,2 THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội giống tổng số (%) 19 M9 4,18 ± 0,72 4,49 ± 0,35 3,78 ± 1,32 17,65 ± 1,78 M14 3,58 ± 0,49 4,48 ± 0,42 3,11 ± 1,08 16,3 ± 2,15 Hàm lượng Rg1 có khác biệt mẫu giống, giá trị trung bình nhóm M14 thấp đạt 3,58%, cao giá trị trung bình nhóm M1 đạt 4,84%, mẫu giống giá trị trung bình nhóm M3 M9 mức tương đương từ 4,18 – 4,31% Hàm lượng giá trị trung bình nhóm MR2 có khác biệt mẫu giống, cao M3 đạt 4,73% thấp M14 Các mấu giống lại dao động từ 4.49 – 4,55% Các mẫu giống có giá trị trung bình hàm lượng saponin tổng số cao 16%, cao M9 với 17,65 %, thấp M14 đạt 16,3% Hàm lượng hoạt chất dược học mẫu giống đem phân tích cao, thể đặc trưng giống Bảng 1.9: Kết đánh giá hàm lượng hoạt chất cá thể Hàm lượng (%) Mẫu giống Kí hiệu mẫu Rg1 MR2 Rb1 Saponin tổng số M1 S01 S02 S03 S04 S05 5,66 3,9 2,92 5,64 6,1 4,55 4,97 3,51 5,1 4,63 4,55 ± 0,63 5,92 5,08 2,16 1,83 2,92 3,32 3,06 ± 1,27 2,48 20,72 14,52 16,45 17,04 18,9 17,36 ± 2,28 19,34 Trung bình M3 S06 4,84 ±1,37 4,02 THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 20 S07 S08 S09 S10 Trung bình S146 S147 S148 M9 S149 S151 Trung bình M14 S228 S229 S230 S231 S232 Trung bình 5,93 2,88 5,35 3,37 5,32 4,1 3,69 4,62 4,26 3,3 4,86 3,11 16,68 17,89 16,45 16,79 4,31 ±1,3 5,17 4,73 3,64 3,64 3,73 4.18 ± 0.72 3,33 3,24 4,4 3,28 3,67 4,73 ±0,9 4,35 4,61 4,83 4,69 3,95 4.49 ± 0.35 3,91 4,85 4,51 4,23 4,9 3,6 ± 0,95 5,55 2,98 4,84 2,93 2,61 3,78 ± 1,32 2,17 3,56 1,9 3,42 4,52 17,43 ± 1,2 15,96 16,47 17,69 17,56 20,55 17,65 ± 1,78 15,45 15,55 15,32 20,14 15,05 3.58 ± 0.49 4.48 ± 0.42 3,11 ± 1,08 16,3 ± 2,15 Sau đánh giá hàm lượng hoạt chất cá thể mẫu giống cho thấy lựa chọn theo hàm lượng MR2 saponin tổng số cá thể có hàm lượng saponin tổng số cao S1 thuộc mẫu giống M1 với saponin tổng số đạt 20,72% hàm lượng MR2 đạt mức 4,55% hoạt chất thành phần Rb1, Rg1 mức cao >5% Dòng S6 hàm lượng saponin đạt mức (19,34%), nhiên có hàm lượng MR2 đạt cao (5,92%), Rb1 đạt 2,484% Các dòng lại đạt hàm lượng saponin MR2 thay đổi dao động lớn THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 21 Kết phân tích này, so với kết nghiên cứu trước đánh giá hàm lượng hoạt chất sâm Ngọc Linh theo Dược điển Việt Nam V, 2018 kết thu vượt cao nhiều 3.4.3 Đề xuất tiêu chuẩn mẹ đầu dòng Sau đánh giá 15 quần thể sâm Ngọc Linh đặc điểm sinh trưởng, hàm lượng dược liệu đề xuất tiêu chuẩn mẹ đầu dòng bảng sau: Bảng 3.10: Bộ tiêu chuẩn mẹ đầu dịng STT Tên tiêu Mơ tả Số năm tuổi (năm) Từ năm trở lên Chiều dài thân (cm) >= 23 Số (lá) >= 4 Chiều dài củ (cm) >= 11 Đường kính củ (cm) >= 1.55 Chiều dài chét trung tâm (cm) >= 8.5 Chiều rộng chét trung tâm (cm) >= 4.3 Chiều dài cuống (cm) >= Chiều dài cuống hoa (cm) >= 10 10 Đường kính thân (cm) >= 0.52 11 Số lượng >= 17 12 Trọng lượng củ >= 13.99 13 Số chét >= >= 0,5%, Theo dược điển 14 Rg1 (%) Việt Nam THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 22 >= 0,4%, Theo dược điển 15 MR2 (%) Việt Nam >= 0,5%, Theo dược điển 16 Rb1 (%) Việt Nam 17 Saponin tổng số (%) >= 12% THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội 23 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu thu được, rút số kết luận sau: + Tất mẫu 15 quần thể nghiên cứu mẫu sâm Ngọc Linh Chuẩn + Mức độ tương đồng cao 15 quần thể sâm đặc điểm hình thái, có đến 13/ 36 đặc điểm giống cá thể nghiên cứu Và mối quan hệ di truyền thể thể qua hệ số tương đồng di truyền 15 quần thể sâm Ngọc Linh nghiên cứu dao động từ 0,43 - 0,88 + Dựa đặc điểm sinh trưởng tốt nghiên cứu chọn quần thể sâm Ngọc Linh ưu tú M1, M3, M9, M14, tiếp tục tuyển chọn dựa vào hàm lượng dược liệu cao chọn cá thể sâm ưu tú S1 S6 Hàm lượng dược liệu mẫu sâm ưu tú xác định cao nhiều so với dược điển Việt Nam +Xây dựng tiêu chuẩn mẹ ưu tú có đặc điểm sinh trưởng phát triển tốt, hàm lượng dược liệu cao bao gồm 17 tiêu Kiến nghị Để tiếp tục phát triển đề tài này, đề xuất thực thêm nội dung sau: +Tiếp tục tuyển chọn mẫu có tiêu theo tiêu chuẩn mẹ ưu tú để thành lập nhóm giống ưu tú sâm NgọcLinh + Thử nghiệm đánh giá với hệ F1 mẹ ưu tú để đánh giá xem thử F1 có mang đầy đủ đặc điểm tốt giống sinh trưởng tốt, hàm lượng dược liệu cao + Xây dựng ngân hàng giống sâm Ngọc Linh chuẩn để đáp ứng cho nhu cầu sản xuất nghiên cứu khoa học THƯ VIỆN TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Lưu hành nội ... chọn tạo giống sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv) chất lượng cao Quảng Nam? ?? Mục tiêu nghiên cứu Tuyển chọn xây dựng tiêu chuẩn mẹ sâm Ngọc Linh ưu tú để phục vụ cho công tác chọn giống, ... khăn, chất lượng giống không đồng Một nguyên nhân mẹ chưa tuyển chọn tiêu chuẩn hố Vì chúng tơi định thực đề tài: ? ?Nghiên cứu đánh giá, bình tuyển xây dựng tiêu chuẩn mẹ ưu tú phục vụ công tác chọn. .. tục tuyển chọn mẫu có tiêu theo tiêu chuẩn mẹ ưu tú để thành lập nhóm giống ưu tú sâm NgọcLinh + Thử nghiệm đánh giá với hệ F1 mẹ ưu tú để đánh giá xem thử F1 có mang đầy đủ đặc điểm tốt giống