Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến hàm lượng adenosine và cordycepin ở nấm đông trùng hạ thảo cordyceps militaris

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG ĐẾN HÀM LƯỢNG ADENOSINE VÀ CORDYCEPIN Ở NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS HÀ NỘI – 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG ĐẾN HÀM LƯỢNG ADENOSINE VÀ CORDYCEPIN Ở NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS Sinh viên thực : VŨ THỊ HUYỀN Lớp : K63-CNSHA Mã sinh viên : 637033 Giảng viên hướng dẫn : PGS TS NGUYỄN ĐỨC BÁCH Bộ môn : SHPT & CNSH ỨNG DỤNG Khoa : CÔNG NGHỆ SINH HỌC HÀ NỘI – 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết trình bày khố luận hồn toàn trung thực Kết thu thập dựa vào q trình nghiên cứu khoa học trực tiếp tơi hướng dẫn PGS TS Nguyễn Đức Bách khoa Công nghệ Sinh học - Học Viện Nông nghiệp Việt Nam Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực khóa luận tốt nghiệp cảm ơn thơng tin trích dẫn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 09 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Vũ Thị Huyền i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn trân trọng tới Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học tất thầy, cô giảng dạy, truyền đạt kiến thức tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình học tập, rèn luyện, nghiên cứu Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới PGS TS Nguyễn Đức Bách tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, quan tâm tạo điều kiện suốt trình học tập thực khóa luận tốt nghiệp Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán nghiên cứu Viện nghiên cứu Vi tảo Dược mỹ phẩm - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ, đóng góp ý kiến bổ ích tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, với tất lịng thành kính biết ơn vơ hạn, tơi xin gửi lời cám ơn đến bố mẹ, người sinh thành, nuôi nấng, động viên tạo động lực cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 09 tháng 09 năm 2022 Sinh viên Vũ Thị Huyền ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT ix PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu đề tài PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung đông trùng hạ thảo 2.1.1 Đặc điểm sinh học phân bố 2.1.2 Đặc điểm hình thái đơng trùng hạ thảo 2.2 Thành phần tác dụng nấm đông trùng hạ thảo 2.2.1 Thành phần hóa học đơng trùng hạ thảo 2.2.2 Tác dụng đông trùng hạ thảo 2.3 Tổng quan adenosine cordycepin 2.3.1 Công thức cấu tạo, đặc điểm vật lý hóa học 2.3.2 Dược động học cordycepin adenosine 2.3.3 Tác dụng cordycepin adenosine 10 2.4 Các phương pháp nuôi trồng nấm đông trùng hạ thảo 12 2.4.1 Nuôi cấy môi trường rắn 12 2.4.2 Nuôi cấy môi trường lỏng 14 2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni trồng nấm đơng trùng hạ thảo 15 2.5.1 Ảnh hưởng điều kiên môi trường đến trình ni trồng nấm 15 iii 2.5.2 Ảnh hưởng dinh dưỡng môi trường nuôi nấm 16 2.6 Tình hình nghiên cứu đơng trùng hạ thảo Việt Nam giới 17 2.6.1 Tình hình nghiên cứu đơng trùng hạ thảo Việt Nam 17 2.6.2 Tình hình nghiên cứu đơng trùng hạ thảo giới 17 2.7 Phương pháp xác định nhanh hàm lượng hoạt chất có dẫn xuất adenosine phương pháp đo quang phổ 19 2.7.1 Phương pháp đo quang phổ 19 2.7.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng phương pháp áp dụng máy đo quang phổ để xác định hàm lượng adenosine cordycepin 20 PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 21 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 21 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 21 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 22 3.3 Nội dung nghiên cứu 22 3.4 Phương pháp nghiên cứu 22 3.4.1 Chuẩn bị giống Cordyceps militaris NBRC 9787 22 3.4.2 Ảnh hưởng tảo xoắn Spirulina đến sinh trưởng nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris NBRC 9787 23 3.4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng pepton tảo tươi Spirulina đến sinh trưởng nấm đông trùng hạ Cordyceps militaris NBRC 9787 25 3.4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng pepton đến sinh trưởng nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris NBRC 9787 26 3.4.5 Phương pháp nghiên cứu đánh giá 27 3.4.6 Phương pháp xử lí mẫu 28 3.4.7 Phương pháp xác định tương đối hàm lượng hoạt chất có dẫn xuất adenosine phương pháp đo quang phổ 28 iv PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến phát triển hệ sợi nấm30 4.2 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến đến sinh trưởng tổng hợp hoạt chất 31 4.3 Phương pháp xác định hàm lượng hoạt chất có dẫn xuất adenosine phương pháp đo quang phổ 39 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 49 v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Nguyên liệu quy trình khảo sát nuôi trồng nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris NBRC 9787 24 Bảng 3.2: Ngun liệu quy trình khảo sát ni trồng nấm đông trùng hạ thảo C militaris 26 Bảng 4.1: Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến phát triển hệ sợi nấm 30 Bảng 4.2 Bảng kết giai đoạn nuôi trồng nấm đông trùng hạ thảo 32 Bảng 4.3: Bảng kết kích thước trung bình thể quả/hộp nấm đơng trùng hạ thảo 35 Bảng 4.4: Bảng kết màu sắc đặc điểm thể nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps Militaris NBRC 9787 37 Bảng 4.5: Giá trị hấp thụ quang phổ mẫu dịch chiết với điều kiện nuôi khác 41 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Nấm đơng trùng hạ thảo mặt cắt dọc thể chứa bào tử Hình 2.2 Cấu tạo số nucleotid đơng trùng hạ thảo Hình 2.3 Cơng thức cấu tạo cordycepin Hình 2.4 Cơng thức cấu tạo adenosine Hình 2.5 Con đường chuyển hóa adenosine động vật có vú 10 Hình 3.2: Sơ đồ nghiên cứu ảnh hưởng tảo xoắn Spirulina đến sinh trưởng nấm đông trùng hạ thảo 23 Hình 3.3 Sợi khơ sợi tươi ĐTHT 28 Hình 3.4: Máy đo quang phổ UV-VIS 29 Hình 4.1: Kết giai đoạn nuôi trồng nấm đông trùng hạ thảo 34 Hình 4.2: Kích thước thể nấm đông trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác 36 Hình 4.3: Chiều dài thể nấm đông trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác 38 Hình 4.4: Dịch chiết đơng trùng hạ thảo 39 Hình 4.5: Kết đo phổ dịch chiết đông trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác 40 Hình 4.6: Độ hấp thụ quang mẫu dịch chiết đông trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác nhua 40 Hình 4.7: Đồ thị biểu diễn dải bước sóng từ 250-265 nm 42 vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải nghĩa C militaris Cordyceps militaris C sinensis Cordyceps sinensis SD Standard Deviation HPLC High Performance Liquid viii b Kích thước trung bình thể hộp Trong trình quan sát theo dõi tiêu đánh giá thể tới giai đoạn thu hoạch tiến hành thu hoạch thể quả, thời điểm thu hoạch thể quả: Dựa vào thay đổi đặc điểm hình thái thể (thu hoạch kích thước đạt tối đa 6070 mm, tối thiểu từ 20 mm trước đầu thể chuyển sang hình trịn nhạt dần Tiến hành đo kích thước chiều dài trung bình thể hộp kết thể bảng 4.3 Bảng 4.3: Bảng kết kích thước trung bình thể quả/hộp nấm đơng trùng hạ thảo Cơng thức thí Bổ sung 15 g/l tảo 20 g/l tảo 10g/l tảo 30g/l nghiệm 30 g/l tảo tươi + 15 tươi + 10 tươi + pepton tưởi Chỉ tiêu theo dõi chiều cao thể 65,48±5, (mm) 23 Đường kính 2,65±0,2 thể g/l g/l pepton 20g/l pepton pepton 55,3±5,33 56,47±5,0 48,4±5,65 2,65±0,22 2,62±0,65 45,43±5,1 2,65±0,25 2,65±0,25 Ghi chú: đơn vị diện tích hộp ni cơng thức thí nghiệm 63,5 cm2 35 ớc thể nấm đông trùng hạạ thảo nuôi điều Hình 4.2: Kích thước kiện dinh dưỡng khác Ghi chú: Kích thước thư thể ni điều ều kiện dinh dưỡng d khác (chiều dài đường kính) đơn vị mm, (A) Cơng thức ức bổ sung 30g/l tảo tươi, (B) 15g/l tảo tươi ươi + 15g/l pepton, (C) 20g/l tảo t tươi ươi + 10g/l pepton, (D) 10g/l tảoo tươi + 20g/l pepton, (E) 30g/l pepton Qua bảng 4.3 thấy ợc cơng thức thí nghiệm mặt kích thước th trung bình thể có sai khác đáng kểể với cơng thức cho kích thước ớc trung bình dài nhất, tiếp đến cơng thức 3,, kết k so với nghiên cứu (P.T P.T Lan., Lan et al, 2016) chiều ều cao thể cao h Ở cơng thức 1, chiều ều dài trung bình 65,98 mm cao nhất, ất, với nghiên cứu P.T Lan et al (2016) sử dụng môi trường tr dinh dưỡng ỡng nhộng tằm cho kích thước th trung bình dài ất 27,56 mm Từ bảng số liệu thấy môi trường dinh dưỡng ỡng bổ sung tảo tươi t cho kích thước thể dài ơn so với v môi trường bổổ sung nhộng tằm theo phương ph pháp nghiên cứu ứu truyền thống, môi trường tr dinh dưỡng ỡng bổ sung pepton Điều có ý nghĩa ĩa lớn, tạo giá trị kinh tế cao c Màu sắc đặc điểm ểm đông trùng hạ thảo Sau gần ần tháng tiến hành thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng h môi trường dinh dưỡng ỡng tảo tươi t pepton lên sinh trưởng ởng hàm lượng l hoạt chất 36 adenosine cordycepin nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris NBRC 9787 kết đặc điểm hình thái thể bảng 4.4 Bảng 4.4: Bảng kết màu sắc đặc điểm thể nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps Militaris NBRC 9787 Cơng thức 30g/l thí nghiệm tảo Chỉ tiêu theo dõi 15g/l tảo 20g/l tảo 10g/l tảo 30g/l tươi + tươi 15g/l 10g/l pepton pepton Cam sẫm Cam Cam sẫm Vàng số Đa số có Đa số có Đa số có Đa số có có hình hình trụ, hình trụ, hình trụ, hình trụ, trụ số số số số phân phân phân nhánh phân nhánh nhánh tươi Màu sắc thể Cam sẫm Đặc điểm Đa + tươi + 20g/l pepton pepton nhánh, có dạng khối u Sau tiến hành thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến đến sinh trưởng phát triển, tổng hợp hoạt chất adenosine cordycepin nấm đông trùng hạ thảo cho kết quat hình thái: Mỗi cơng thức khảo sát 20 hộp keo nơi, hình thái đặc điểm trung bình loại cơng thức đồng với nhau, hình thái đại diện cho cơng thức thí nghiệm biểu thị hình 4.3 37 Hình 4.3: Chiều dài thể Ghi chú: (1) Công th ằng tr pepton, (3) 20g/l tảo tươi + 10g/l pepton, ( 30g/l pepton Nitơ có vai trị quan tr protein enzyme Nấm nguồn nitơ vô hữu c phát triển nitơ hữu c môi trường nuôi trồng nhiều mơi trường làm chậm q trì et al 2000, Kobayasi Y nấm C.militaris cần nguồn nit hai chất cao nấm men, pepton kết hợp hai chất 4.3 Phương pháp xác định hàm lượng hoạt chất có dẫn xuất adenosine phương pháp đo quang phổ Phương pháp xác định nhanh hàm lượng hoạt chất có dẫn xuất adenosine phương pháp đo quang phổ để xác định môi trường dinh dưỡng cho độ hấp thụ quang cao bước sóng 260 nm, theo nghiên cứu (Harry G Britain,1998; Rie., et al 2007) cho adenosine cordycepin hấp thụ cực đại bước sóng 260 nm Từ số liệu đo phổ kết luận môi trường dinh dưỡng cho hàm lượng chất adenosine cordycepin cao Thí nghiệm tạo dịch chiết mẫu đơng trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác tiến hành sau: Cân xác 0,5g đơng trùng hạ thảo tươi cân phân tích cho vào ống nghiệm Đong xác 10ml nước sơi cho vào ống nghiệm chứa 0,5 g đông trùng hạ thảo ngâm vòng 15 phút Dung dịch ly tâm tốc độ 3000 g 10 phút Thu dịch sau đo pha loãng mẫu dịch chiết khác với 25 ml Sau đem dịch chiết pha loãng để xác định nhanh hàm lượng hoạt chất có dẫn xuất adenosine cách đo độ hấp thụ máy đo quang phổ UV-VIS Dịch chiết mẫu đông trùng hạ thảo nuôi trồng điều kiện dinh dưỡng khác thể hình 4.4 Hình 4.4: Dịch chiết đơng trùng hạ thảo Ghi chú: (1) Mẫu dịch chiết đông trùng hạ thảo bổ sung 30g/l tảo tươi, (2) 15g/l tảo tươi + 15g/l pepton, (3) 20g/l tảo tươi + 10g/l pepton, (4) 10g/l tảo tươi + 20g/l pepton, (5) 30g/l pepton 39 Xác định hàm lượng hoạt chất có dẫn xuất adenosine phương pháp đo quang phổ cho kết đo mẫu dịch chiết điều kiện nuôi khác dài từ 250 nm đến 600 nm kết thể hình 4.5 Hình 4.5: Kết đo phổ dịch chiết đông trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác Ghi chú: Phổ hấp thụ quang bước sóng 250-600 nm mẫu dịch chiết đơng trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác (1) Mẫu dịch chiết công thức bổ sung 30 g/l tảo tươi, (2) 20 g/l tảo tươi + 10 g/l pepton, (3) 15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton, (4) 10 g/l tảo tươi + 20 g/l pepton, (5) 30 g/l pepton Giá trị OD 260nm 2.5 1.5 0.5 Mẫu dịch chiết Hình 4.6: Độ hấp thụ quang mẫu dịch chiết đông trùng hạ thảo nuôi điều kiện dinh dưỡng khác nhua Ghi chú: Phổ hấp thụ quang bước sóng 260 nm mẫu dịch chiết đông trùng hạ thảo (1) Mẫu dịch chiết công thức bổ sung 30 g/l tảo tươi, (2) 15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton, (3) 20 g/l tảo tươi + 10 g/l pepton, (4) 10 g/l tảo tươi + 20 g/l pepton, (5) 30 g/l pepton 40 Phương pháp đo quang phổ đề xuất tìm thấy đơn giản xác để xác định Cordyceps militaris chiết xuất Phổ UV đông trùng hạ thảo thu thể cực đại hấp thụ 260 nm Dưới kết đo quang phổ với mẫu nuôi trồng điều kiện khác 260nm thể bảng 4.5 Bảng 4.5: Giá trị hấp thụ quang phổ mẫu dịch chiết với điều kiện nuôi khác Mẫu dịch chiết Độ hấp thụ quang bước sóng 260 nm 30 g/l tảo tươi 2,02±0,22 15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton 1,68±0,11 20 g/l tảo tươi + 10 g/l pepton 1,84±0,14 10 g/l tảo tươi + 20 g/l pepton 1,29±0,15 30 g/l pepton 0,93±0,13 Độ hấp thụ quang bước sóng 260 nm thí nghiệm khác có sai khác cơng thức bổ sung 100% tảo tươi có độ hấp thụ 2,02 cao cơng thức cịn lại Ở công thức bổ sung 15 g/l tảo + 15 g/l pepton cho giá trị độ hấp thụ 1,68 thấp công thức bổ sung 20 g/l tảo tươi + 10 g/l pepton Với công thức bổ sung 10 g/l tảo tươi + 20 g/l pepton độ hấp thụ quang 1,29 0,93 với công thức bổ sung 30 g/l pepton Kết thu bước sóng 260nm giá trị OD mẫu dịch chiết công thức (30 g/l tảo tươi) cao nhất, đến mẫu dịch chiết công thức (15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton) (15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton) Cuối thấp công thức (30 g/l pepton) 41 Đ thị biểu diễn dải bước sóng từ 250 265 nm Hình 4.7:: Đồ Ghi chú: (1) Mẫu ẫu dịch chiết bổ sung 30 g/l tảo tươi, (22) 15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton, (3) 20 g/l tảo t tươi + 10 g/l pepton, (4) 10 g/l tảo t tươi + 20 g/l pepton, (5) 30 g/l pepton Kết ết cho thấy hàm lượng l ợng tảo xoắn Spirulina dạng tươi t có ảnh hưởng nhiều với ới pepton thay cho mơi trường tr có chất ch nhộng tằm, 42 nghiên cứu (Adisak K., et al 2021) cho nguồn Nito từ tảo xoắn Spirulina sử dụng tạo trọng lượng tươi khô cao đáng kể môi trường sử dụng nhộng So sánh chất rắn khác (gạo lứt, kê, cao lương, ngơ, lúa mì gạo nếp) cho thấy suất cao 1,03 g/quả thể C militaris sử dụng gạo lứt làm chất (Wen., et al 2014) Về mặt này, Spirulina nguồn dinh dưỡng tốt đặc biệt giàu protein Tảo xoắn spirulina chứa 56-77% protein trọng lượng khô, cao nguồn protein khác trứng, sữa, thịt, cá, đậu nành loại ngũ cốc khác Loại tảo khơng có thành tế bào cellulose, cho phép sinh vật hấp thụ sau cung cấp lượng chất dinh dưỡng dồi Trong số tất nguồn protein, Spirulina nguồn giàu protein chứa khoảng 60-70% so với 51%-58%, 35%, 20,97-31,32% 18-22% hàm lượng protein Chlorella trứng gà, đậu xanh đậu nành tương ứng Hơn hàm lượng protein tảo xoắn Spirulina cao khoảng vài lần so với cám gạo eri silklarva, với hàm lượng protein dự trữ thấp (10-15% 16%) Tảo xoắn spirulina chứa nhiều khoáng chất thiết yếu carotenoid (một chất chống oxy hóa mạnh) đặc biệt giàu vitamin B (B1, B2, B3, B6, B12) đặc biệt hàm lượng vitamin B1 cao (0,5 g/100 g) chất quan trọng cho phát triển C militaris (Gershwin 2008) 43 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Sau trình nghiên cứu ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến hàm lượng adenosine cordycepin nấm đông trùng hạ thảo kết luận mơi trường có sử dụng tảo tươi cụ thể công thức (30 g/l tảo tươi) (15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton) (15 g/l tảo tươi + 15 g/l pepton), cơng thức có tác động nhiều tăng hàm lượng hoạt chất adenosine cordycepin, công thức Thời gian hình thành thể quả, kích thước cơng thức bổ sung hồn tồn tảo tươi nhanh so với cơng thức cịn lại khoảng 10-15 ngày Điều đóng góp nhiều q trình ni trồng để tìm điều kiện tối ưu để tạo suất kinh tế hiệu Kết nghiên cứu xác định nhanh hàm lượng hoạt có dẫn xuất adenosine phương pháp đo quang phổ phương pháp dễ thực Kết cho thấy bước sóng 260 nm đỉnh cơng thức (30 g/l tảo tươi) cao nên công thức bỏ sung môi trường dinh dưỡng 30 g/l tảo xoắn Spirulina dạng tươi có ảnh hưởng đến hàm lượng hoạt chất adenosine cordycepin cao nhất, thấp công thức (30 g/l pepton) 5.2 Kiến nghị Để xác định xác hàm lượng adenosine cordycepin nấm đông trùng hạ thảo sử dụng phân tích hàm lượng HPLC với chất chuẩn 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tài liệu tiếng việt Đoàn Thị Phương Thùy, Trần Thị Ngọc Ánh & Nguyễn Thị Mai (2018) Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện tách chiết đến hiệu thu nhận hoạt chất cordycepin từ nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris Linn Link) Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh 13(1): 93-102 Đỗ Thị Gấm, Bá Thị Châm & Nguyễn Tiến Mạnh (2020) Nghiên cứu bào chế hệ chất mang nano Chitosan-Peg chưa hoạt chất từ nấm đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris Link) Tạp chí Khoa học Công nghệ Đại học Thái Nguyên 225(08): 126133 Lê Thị Huyền Trang, Lê Minh Hoàng & Nguyễn Duy Bắc (2017) Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết xuất adenosin cordycepin từ Đông trùng hạ thảo nuôi cấy (Cordyceps militaris) Tạp chí Dược học, (T57) Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại Học Quốc Gia TP.HCM, TP.HCM Nguyễn Thị Trúc Loan (2018) So sánh trình chiết mangiferin từ xồi keo dung mơi ethanol phương pháp chiết truyền thống chiết có hỗ trợ siêu âm Tạp Chí Khoa học Và Cơng nghệ - Đại học Đà Nẵng, vol 9, số p.h 130 78-82 Nguyễn Thu Hà, Nguyễn Ngọc Trai Nguyễn Thiện Thảo (2020) Nghiên cứu quy trình ly trích xác định hàm lượng Adenosine cao ethanol đơng trùng hạ thảo (Cordyceps Militaris) HPLC-PDA Tạp chí Công Thương - Các kết nghiên cứu khoa học ứng dụng công nghệ 225(9): 32- 43 Nguyễn Thu Quỳnh, Nguyến Thị Hồng Thúy Đỗ Thị Huyền (2020) Nghiên cứu bào chế cốm tan đông trùng hạ thảo Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đại học Thái Nguyên 225(01): 24-28 Trần Tứ Hiếu (2008) Phân tích trắc quang, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội P.T Lan nnk./Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 32, Số (2016) 6372 B Tài liệu nước Adisak K., Piyanast S., Sermsiri C., Siriluck I., (2021) Utilization of spirulina maxima to enhance yield and cordycepin content in cordyceps militaris artificial cultivation J.issas 27, 1: 1-14 Aguilar CN., Aguilera - Carbo A., Robledo A., et al (2008) Production of antioxidant nutraceuticals by Solid-State cultures of pomegranate (Punica granatum) peel and creosote bush (Larrea tridentata) leaves Food Technol Biotech, 46, 218- 22 analysis cordycepin and adenosin in the products of Cordyceps spp., African Akihiko S., Mina M., Eriko U., Mikio S., (2006) Production of cordycepin by surface culture using the medicinal mushroom Cordyceps militaris Enzyme and Microbial Technology 39(4):641-646 Baoyan Fan., Haibo Zhu (2012) Cordycepin: pharmacological properties and their relevant mechanisms, tang humanitas medicine, 2, pp 141-147 Td cordycepin biotechnological production Research Journal of Biotechnology (7): 1-2 45 Buenz E.J., Bauer B.A., Osmundson T.W Motley T.J (2005) The traditional Chinese medicine Cordyceps sinensis and its effects on the apoptotic homeostatic”, Journal of Ethnopharmacology, 96, pp 19 – 29 Chang H L., Chao G R., Chen C C., Mau J L (2001) Non-volatile taste components of Agaricus blazei, Antrodia camphorata and Cordyceps militaris mtcelia Food Chemistry 74:203-207 Chatterjee, R.M P C., Srinivasan, K S (1957), Cordyceps sinensis (Berkeley) Saccardo: Structure of Cordycepic Acid, J Am Pharm Assoc., vol XLVI, no 2, pp 114-118 Chen Ysh., Liu BL., Chang YN (2011) Effects of light and heavy metals on Cordyceps militaris fruit body growth in rice grain-based cultivation Korean J Chem Eng, 28, 875-9 Choi YS., Lee HK., Kim SH., et al (1999) Production of fruiting body using cultures of entomopathogenic fungal species Korean J Mycol, 27, 15-19 10 Das, G., Shin, H S., Leyva-Gómez, G., Prado-Audelo, M L D., Cortes, H., Singh, Y D., Patra, J K (2021) Cordyceps spp.: A review on its immune-stimulatory and other biological potentials Frontiers in Pharmacology, 2250 11 Das, S K., Masuda, M., Sakurai, A., Sakakibara, M (2010) Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: current state and prospects Fitoterapia, 81(8), 961968 12 Dong C.J (2013) The traditional Chinese medicine fungus Cordyceps and its Effect of temperature on Cordycepin Production in Cordyceps militaris Thai J Agric Sci 42 (2), 219 - 225 13 Fan DD., Wang W., Zhong JJ., (2012) Enhancement of cordycepin production in submerged cultures of Cordyceps militaris by addition of ferrous sulfate Biochem Eng J, 60, 30-5 14 Fang H.Z., Zuo X.Z., Xiao X.M., Lu C.Y., Li W.J (2011) Effects of Moisture Content and Temperature on Mycelium and Sporophore Growth of Cordyceps militaris Guizhou Agricuitural Sciences 39 (9):110-113 15 Fenice M., Giovannozzi SG., Federici F., D’Annibale A., (2003) Submerged and solid state production of laccase and Mn-peroxidase by Panus tigrinus on olive mill wastewater-based media J Biotechnol, 100, 77-85 Fermentation for Fruiting Body Growth and cordycepin production by Cordyceps 16 Gao X.H., Wu W., Qian G.C (2000) Study on influences of abiotic factors on fruitbody differentiation of Cordyceps militaris Acta Agriculture Shanghai 16: 93-98 17 Gershwin, M.E and A Belay (2008) Spirulina in Human Nutrition and Health 1st Edition CRC Press Boca Raton, Florida 328 p 18 Gershwin, M.E., Belay, A., (2008) Spirulina in Human Nutrition and Health, 1st ed CRC Press, Taylor & Francis Group, Boca Raton, FL Hardeep S Tuli., 19 Sharma A K., Sandhu S S., Dharambir K (2013), Cordycepin: A bioactive metabolite with therapeutic potential, Life Sciences, 93, pp 863 – 869 19 Hardeep S Tuli1., Sandhu S S., Dharambir K., Sharma Anil K (2014) Optimization of extraction conditions and antimicrobial potential of a bioactive metabolite, cordycepin from cordyceps militaris 3936 World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(4), pp 1525-1535 46 20 Harry G B (1998) Analytical profiles of Drug Substances and Excipients Volume 25, Academic Press, USA 21 Hong Jue Lee (2012) The nucleoside antagonist cordycepin causes DNA double strand breaks in breast cancer cells, Invest New Drugs, 20, pp 1917 – 1925 22 Hsieh Ch., Tsai KL., Shih IL., (2007) Effects of culture conditions on the mycelial growth and bioactive metabolite production in submerged culture of Cordyceps militaris Biochem Eng J, 33, 193-201 23 Huang, L., Li, Q., Chen, Y., Wang, X and Zhou, X (2009) Determination and Jounrnal of Microbiology Research Vol, 3(12), pp 957-961 24 Kaewkam, A., Sornchai, P., Chanprame, S., Iamtham, S (2021) Utilization of Spirulina maxima to enhance yield and cordycepin content in Cordyceps militaris artificial cultivation Journal of the International Society for Southeast Asian Agricultural Sciences, 27(1), 1-14 25 Kamble, V R., Agre, D.G (2012), Reinvestigation of insect parasite fungus Cordyceps militaris from Maharashtra, vol 5, no 2, pp 224-225 26 Kang C., Wen T.C., Li G.R., Kang J.C.,Hyde D.K (2014) Optimization of Solid-state Fermentation for Fruiting Body Growth and Cordycepin Production by Cordyceps militaris Chiang Mai J Sci 41 (4): 858 - 872 27 Kobayasi Y (1941) The genus Cordyceps and its allies Science Reports of the Tokyo Bunrika Daigaku section B 84(5):53–260 28 Lei H., Qizhang L., Yiyuan C., Xuefei W Xuanwei Z (2009) Determination and analysis of cordycepin and adenosine in the products of Cordyceps spp African Journal of Microbiology Research Vol 3(12): 957-961 29 Lim L., Lee C., Chang E., 2012 Optimization of solid state culture conditions for the production of adenosine, cordycepin, and D-mannitol in fruiting bodies of medicinal caterpillar fungus Cordyceps militaris (L.:Fr.) Link (Ascomycetes) Int J Med Mushrooms, 14, 181-7 30 Liu, X M., Cheng, Y H., Tian, D (1999) Progress in the research of pharmacological Cordyceps in China Natl Product Res Development 11: 87-91 31 Mains, E B (1958), North American Entomogenous Species of Cordyceps, Mycologia, vol 50, no 2, pp 169-222 32 Manash K., Vikas G., Anup K (2005) Merits of HPLC-based method over spectrophotometric method for assessing the kinetics and inhibition of mammalian adenosine deaminase Journal of Chromatography B, 822 (2005) 146-153 33 Mao XB., Eksriwong T., Chauvatcharin S., Zhong JJ., (2005) Optimization of carbon source/nitrogen ratio for cordycepin production by submerged cultivation of medicinal mushroom Cordyceps militaris Process Biochem, 40, 1667-72 34 Mao XB., Zhong JJ., (2006) Significant effect of NHỵ4 on cordycepin production by submerged cultivation of medicinal mushroom Cordyceps militaris Enzyme Microbial Technol, 38, 343-50 35 Natthapong S., Ronnarit R., Boonsong S., Peerasak C., Yuranan B., (2020) Determination of Adenosine and Cordycepin Concentrations in Cordyceps militaris Fruiting Bodies Using Near-Infrared Spectroscopy Acs omega, 5, 27235-27244 47 36 Olatunji, O J., Tang, J., Tola, A., Auberon, F., Oluwaniyi, O., Ouyang, Z (2018) The genus Cordyceps: An extensive review of its traditional uses, phytochemistry and pharmacology Fitoterapia, 129, 293-316 37 Pan-utai, W., Kahapana, W., Iamtham, S., (2018) raction of C-phycocyanin from Arthrospira (Spirulina) and its thermal stability with citric acid J Appl Phycol 30, 231-242 https://doi.org/10.1007/s10811-017-1155-x 38 Paterson R.R.M., (2008), Cordyceps - A traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic biofactory, Phytochemistry, 69(7), 1469-1495 39 Rie I., Miho N., Yen S., Misuhiro W., Kenichiro N., (2007) Simple HPLC-UV determination of nucleosides and its application to the authentication of Cordyceps and its allies Biomedical chromatography Biomed Chromatogr 22: 630-636.0 40 Shagun G., Damandeep K., Reetika., (2021) UV Method Development and Validation, Formulation, Development and Characterisation of Transfersomes and SLNs of Cordycep militaris Extract Int J Pharm; 11(8): 6-11 41 Shrestha B., Lee W.H., Han S.K., Sung J.M (2006) Observations on Some of the Mycelial Growth and Pigmentation Characteristics of Cordyceps militaris Isolates Mycobiology 34(2):83-91 42 Stringer, S C., Webb, M D., George, S M., Pin, C., Peck, M W (2005), Heterogeneity of times required for germination and outgrowth from single spores of nonproteolytic Clostridium botulinum, Appl Environ Microbiol., vol 71, no 9, pp 4998-5003 43 Sung J M., Park YJ., Han SK (2006) Selection of superior strains of Cordyceps militaris with enhanced fruiting body productivity Mycobiology, 34, 131-7 44 Tang, J., Qian, Z., Wu, H (2018), Enhancing cordycepin production in liquid static cultivation of Cordyceps militaris by adding vegetable oils as the secondary carbon source, Bioresour Technol., vol 268, pp 60-67 45 Verma, A K (2020), Cordycepin: a bioactive metabolite of Cordyceps militaris and polyadenylation inhibitor with therapeutic potential against COVID-19, J Biomol Struct Dyn 46 Wang X.L., Yao Y.J (2011) Host insect species of Ophiocordyceps sinensis: areview ZooKeys 127:43–59 47 Wei HP., Ye XL., Zhang HY (2008) Investigations on cordycepin production by solid culture of Cordyceps militaris, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 33, 2159-69 48 Wen T.C., Li G.R., Kang, C., Hyde, K.D (2014) Optimization of Solid state27, 1: 1-15 49 Wol J., Yoo C., Hyoun K., Jae L (2010) The Anti-inflammatory Effects of Water Extract from Cordyceps militaris in Murine Macrophage Mycobiology 38(1): 46-51 50 Xu, Y F (2016) Effect of polysaccharide from Cordyceps militaris (Ascomycetes) on physical fatigue induced by forced swimming International journal of medicinal mushrooms, 18(12) 51 Yan H., Zhu D., Xu D., Wu J., Bian X (2008) A study on Cordyceps militarispolysaccharide purification, composition and activity analysis African Journal of Biotechnology (22): 4004-4009 52 Zheng P., Xia Y.L., Xiao Ch.H (2011) Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional Chinese medicine.Genome Biology 23; 12 48 PHỤ LỤC Bảng thông tin chủng giống Cordyceps militaris NBRC 9787 Tên khoa học Cordyceps militaris Ngày chấp nhận 1973/10/22 Lịch sử IFO 9787