Nghiên cứu ảnh hưởng của điều kiện đèn led ở các bước sóng khác nhau đến sự hình thành quả thể ở nấm đông trùng hạ thảo cordycep militaris

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN ĐÈN LED Ở CÁC BƢỚC SÓNG KHÁC NHAU ĐẾN SỰ HÌNH THÀNH QUẢ THỂ Ở NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO Cordycep militaris Hà Nội- 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN ĐÈN LED Ở CÁC BƢỚC SÓNG KHÁC NHAU ĐẾN SỰ HÌNH THÀNH QUẢ THỂ Ở NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO Cordycep militaris Sinh viên : Nguyễn Doãn Quân Mã sinh viên : 637064 Lớp : K63CNSHA Giảng viên hƣớng dẫn : PGS.TS Nguyễn Đức Bách Địa điểm thực : Viện nghiên cứu Vi tảo Dƣợc mỹ phẩm Học viện Nông nghiệp Việt Nam Hà Nội- 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận đƣợc thực hồn thành tìm hiểu nghiên cứu khoa học thân dƣới hƣớng dẫn PGS.TS Nguyễn Đức Bách, khoa Công nghệ Sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tất số liệu, hình ảnh, kết đƣợc trình bày khóa luận hồn tồn trung thực, khơng chép tài liệu, cơng trình nghiên cứu ngƣời khác Các thơng tin trích dẫn, tham khảo khóa luận đƣợc ghi rõ nguồn gốc Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trƣớc Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp Học viện Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Dỗn Qn i LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết tơi xin gửi lời cảm ơn đến tồn thầy công tác Học viện Nông nghiệp Việt Nam, đặc biệt thầy cô khoa Công nghệ sinh học ln tận tình bảo truyền đạt kiến thức quý giá cho năm học tập rèn luyện trƣờng Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban chủ nhiệm khoa Cơng nghệ sinh học tồn thể thầy, truyền đạt cho kiến thức chuyên ngành, kỹ làm việc phịng thí nghiệm học quý báu giảng đƣờng đại học Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Đức Bách tất thầy cô bạn bè làm việc Viện nghiên cứu Vi tảo Dƣợc mỹ phẩm Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ, định hƣớng cách tƣ cách làm việc khoa học Đó góp ý q báu khơng q trình thực khóa luận tốt nghiệp mà cịn hành trang tiếp bƣớc cho tơi q trình học tập lập nghiệp sau Cuối cùng, vô cảm ơn tới gia đình, ngƣời thân, anh chị em luôn động viên, giúp đỡ, tạo động lực cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu suốt thời gian học tập, rèn luyện trƣờng Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Doãn Quân ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT ix PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan đông trùng hạ thảo 2.1.1 Giới thiệu chung 2.1.2 Đặc điểm hình thái nấm đơng trùng hạ thảo 2.2 Kĩ thuật nuôi trồng phƣơng pháp nhân giống đông trùng hạ thảo 2.3 Chu tr nh sống nấm đông trùng hạ thảo 2.4 Tác dụng nấm đông trùng hạ thảo 2.5 Các thành phần hóa học nấm đơng trùng hạ thảo 2.6 Tổng quan cordycepin adenosine 11 2.6.1 Công thức cấu tạo, đặc điểm vật lý, hóa học cordycepin adenosine 11 2.6.2 Tác dụng cordycepin adenosine 13 iii 2.7 Tình hình nghiên cứu ảnh hƣởng bƣớc sóng đèn led đơng trùng hạ thảo giới Việt Nam 15 2.7.1 Tình hình nghiên cứu ảnh hƣởng bƣớc sóng đèn led đơng trùng hạ thảo giới 15 2.7.2 Tình hình nghiên cứu ảnh hƣởng bƣớc sóng đèn led đơng trùng hạ thảo Việt Nam 17 2.8 Đánh giá hàm lƣợng hoạt chất thứ cấp phƣơng pháp đo quang phổ 18 PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 21 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 21 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 23 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 23 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 23 3.3 Nội dung nghiên cứu 23 3.4 Các phƣơng pháp nghiên cứu 24 3.4.1 Phƣơng pháp đo cƣờng độ ánh sáng máy đo cƣờng độ ánh sáng Milwaukee MW700 24 3.4.2 Phƣơng pháp nuôi cấy nấm đông trùng hạ thảo 24 3.4.3 Thiết kế giàn nuôi nghiên cứu ảnh hƣởng đèn led 27 3.4.4 Phƣơng pháp xử lí mẫu 27 3.4.5 Xác định hợp chất thuộc nhóm nucleobase tự phƣơng pháp đo quang phổ 29 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 4.1 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn led đến thời gian tỷ lệ hình thành mầm thể nấm đơng trùng hạ thảo 32 iv 4.2 Phƣơng pháp sử dụng ánh sáng đèn led đến phát triển hình thái thể nấm đông trùng hạ thảo 34 4.3 Ảnh hƣởng điều kiện đèn led bƣớc sóng khác đến chất lƣợng thể nấm đông trùng hạ thảo 38 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 5.1 Kết luận 42 5.2 Kiến nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 PHỤ LỤC 51 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần acid béo nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 10 Bảng 3.1 Thông tin đèn led sử dụng thí nghiệm 22 Bảng 3.2 Công thức làm môi trƣờng dinh dƣỡng nuôi trồng nấm đông trùng hạ thảo C militaris 26 Bảng 4.1 Ảnh hƣởng loại đèn led đến thời gian tỷ lệ hình thành thể nấm đông trùng hạ thảo C militaris 33 Bảng 4.2 Ảnh hƣởng điều kiện đèn led bƣớc sóng khác đến phát triển hình thái thể nấm đông trùng hạ thảo C militaris sau 60 ngày 36 Bảng 4.3 Ảnh hƣởng loại đèn led đến sinh khối tƣơi đông trùng hạ thảo C militaris 38 vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Nấm Cordyceps militaris mặt cắt dọc thể chứa bào tử Hình 2.2 Cấu tạo số nucleotid đông trùng hạ thảo 11 Hình 2.3 Cơng thức cấu tạo cordycepin 12 Hình 2.4 Công thức cấu tạo adenosine 12 Hình 3.1 Đèn led thí nghiệm 22 Hình 3.2 Đèn huỳnh quang 23 Hình 3.3 Máy đo cƣờng độ ánh sáng Milwaukee MW700 24 Hình 3.4 Thành phần mơi trƣờng dinh dƣỡng 26 Hình 3.5 Sợi đông trùng hạ thảo tƣơi khô 29 Hình 3.6 Dịch chiết mẫu đông trùng hạ thảo 30 Hình 3.7 Máy đo quang phổ UV-VIS 31 Hình 4.1 Giai đoạn đông trùng hạ thảo sáng thí nghiệm 32 Hình 4.2 Đơng trùng hạ thảo sau nuôi 14 ngày 33 Hình 4.3 Đơng trùng hạ thảo sau 60 ngày nuôi cấy 35 Hình 4.4 Chiều dài thể sau 60 ngày nuôi cấy 35 Hình 4.5 Kết đo phổ dịch chiết khác theo dải từ 250 - 600 nm 39 Hình 4.6 Độ hấp thụ quang mẫu dịch chiết đông trùng hạ thảo 39 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ đầy đủ DMSO Dimethyl sulfoxide AMP Adenosine Monophosphate ARN Acid ribonucleic viii Ghi chú: (*) Số lượng thể tính đơn vị diện tích ni cơng thức thí nghiệm 63,5 cm2 Ánh sáng led có tác động khác đến hình thái thể nấm đơng trùng hạ thảo C militaris Kích thƣớc thể nấm C militaris công thức chiếu sáng giảm dần theo trình tự sau: led vàng > led xanh dƣơng > đèn huỳnh quang > led kết hợp xanh dƣơng đỏ > led đỏ Ta xác định thể đo áp dụng kích thƣớc lớn cm Số lƣợng thể nhiều thí nghiệm đèn led đỏ đơn sắc, đèn led xanh đơn sắc nhƣng thể nhỏ ngắn Về hình thái, thể nấm thu đƣợc từ cơng thức đèn led có màu vàng cam Hai công thức đèn led kết hợp xanh dƣơng đỏ, đèn huỳnh quang có tỷ lệ thể phân nhánh cao tất công thức nghiên cứu, thể phân nhánh công thức đèn led kết hợp xanh dƣơng đỏ đèn huỳnh quang tƣơng ứng 6/104 9/120 Ở công thức đèn led vàng thể nấm C militaris có kích thƣớc chiều dài 4,00 ± 0,55 cm chiều rộng 0,30 lớn tất công thức nghiên cứu khác biệt đƣợc đánh giá có ý nghĩa thống kê Tại công thức đèn led vàng thể nấm mọc tƣơng đối đồng đều, có màu vàng cam đậm, đầu thể phình to tỷ lệ thể bị phân nhánh thấp, 3/156 thể Ở công thức đèn led đỏ, thể nấm C militaris có kích thƣớc chiều dài 2,50 cm chiều rộng 0,20 0,10 cm thấp nhất, số lƣợng thể phân nhánh thấp 5/180 thể Quả thể nấm cơng thức đèn led xanh dƣơng có kích thƣớc chiều dài 3,20 ± 0,35 cm chiều rộng 0,30 ± 0,10 cm đèn led vàng đƣợc đánh giá tƣơng đƣơng với đèn huỳnh quang Về hình thái nhận thấy cơng thức đèn led kết hợp xanh dƣơng đỏ, thể có màu vàng cam nhạt, số đầu thể dẹt, mọc khơng đồng có phân nhánh cao 6/104 thể Quả thể thu đƣợc từ công thức đèn huỳnh quang có kích thƣớc chiều dài 3,10 ± 0,50 cm chiều rộng 0,40 ± 0,10 cm, mọc không đồng đều, thể bị phân nhánh cao 9/120 thể Từ kết 37 trên, công thức nghiên cứu cơng thức đèn led vàng phù hợp cho phát triển thể nấm đông trùng hạ thảo C militaris 4.3 Ảnh hƣởng điều kiện đèn ed bƣớc s ng khác đến chất ƣợng thể nấm đông trùng hạ thảo Bên cạnh thay đổi chiều dài hình thái thể nấm C militaris, ánh sáng đèn led cịn ảnh hƣởng tới chất lƣợng thể thơng qua số tiêu theo dõi nhƣ sinh khối tƣơi, hàm lƣợng hoạt chất cordycepin adenosine thể nấm đông trùng hạ thảo C militaris Bảng 4.3 dƣới thể tiêu sinh khối tƣơi mẫu đông trùng hạ thảo Bảng 4.3 Ảnh hƣởng oại đèn ed đến sinh khối tƣơi đông trùng hạ thảo C militaris Nguồn sáng Sinh khối 20 thể tƣơi (g) Vàng 3,68  0,56 Đỏ 2,29  0,38 Xanh dƣơng 2,15  0,33 Xanh dƣơng đỏ( tỷ lệ 1:4) 3,21  0,51 Huỳnh quang 3,50  0,44 Xác định hàm lƣợng hoạt chất có dẫn xuất nucleobase tự (adenosine cordycepin) phƣơng pháp đo quang phổ Kết đo mẫu dịch chiết 38 điều kiện nuôi khác dải từ 250 nm đến 600 nm kết đƣợc thể dƣới hình 4.5 Hình 4.5 Kết đo phổ dịch chiết khác theo dải từ 250 - 600 nm Ghi chú: : (a) led vàng, (b) led đỏ, (c) led xanh dương, (d) led xanh dương đỏ, (e) huỳnh quang Hình 4.6 Độ hấp thụ quang mẫu dịch chiết đông trùng hạ thảo 39 Ghi chú: Phổ hấp thụ quang bước sóng 260 nm mẫu dịch chiết đơng trùng hạ thảo chiếu sáng (a) đèn led vàng, (b) led đỏ, (c) led xanh xương, (d) led xanh dương đỏ, (e) huỳnh quang Các mẫu nấm đông trùng hạ thảo nuôi điều kiện chiếu sáng đèn led vàng huỳnh quang cho sinh khối thể tƣơi tƣơng ứng 3,68 g 3,50 g/ 20 thể Kết phù hợp với phát triển hình thái thể công thức đèn thể thu đƣợc to dài so với công thức đèn cịn lại Sinh khối tƣơi thấp cơng thức đèn led đỏ đơn sắc (tƣơng ứng 2,29 g/ 20 thể) Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Dong cộng (2013), cho biết điều kiện ánh sáng led đỏ hiệu suất sinh học thể nấm C militaris thấp so với ánh sáng led vàng không khác biệt nhiều so với ánh sáng đèn led kết hợp xanh dƣơng đỏ (Dong et al., 2013) Chất lƣợng ánh sáng loại đèn led khác có ảnh hƣởng rõ rệt đến việc tích lũy chất chuyển hóa khác thực vật (Bian et al., 2015) Sự gia tăng chất chuyển hóa thực vật, bao gồm hợp chất sơ cấp thứ cấp (nhƣ đƣờng, tinh bột, vitamin-C, protein polyphenol) nhận thấy rõ ánh sáng led đỏ led xanh dƣơng so với ánh sáng huỳnh quang Trong nghiên cứu này, tiến hành đánh giá ảnh hƣởng loại đèn led khác đến hàm lƣợng hợp chất có hoạt tính sinh học nấm đông trùng hạ thảo C militaris cordycepin adenosine Hàm lƣợng hoạt chất cordycepin adenosine cao cơng thức led vàng, sau công thức đèn led đỏ thấp công thức đèn led xanh dƣơng Từ kết thu đƣợc nhận thấy đèn led đỏ cho kích thƣớc thể nấm ngắn nhỏ nhƣng lại cho hàm lƣợng hoạt chất cao sau điều kiện nuôi trồng đèn led vàng Đèn led vàng, led xanh dƣơng có ảnh hƣởng tích cực đến hình thái thể nấm đông trùng hạ thảo C militaris Cơng thức 40 đèn led vàng có nhiều tiêu sinh trƣởng, phát triển tốt so với điều kiện ánh sáng đèn huỳnh quang nên đƣợc đánh giá nguồn sáng thay đèn huỳnh quang q trình ni trồng nhân tạo nấm đơng trùng hạ thảo C militaris Do đèn led có cơng suất 25 W, nên sử dụng để chiếu sáng nuôi trồng nấm đông trùng hạ thảo C militaris tiết kiệm đƣợc chi phí điện so với đèn huỳnh quang (công suất 36- 40 W) nhờ giảm đƣợc chi phí sản xuất sản phẩm thƣơng mại từ nấm C militaris đƣợc giảm giá đáp ứng nhu cầu tiêu dùng thị trƣờng 41 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết uận Các kết nghiên cứu điều kiện chiếu sáng đèn led khác có ảnh hƣởng đáng kể đến sinh trƣởng, phát triển nấm đông trùng hạ thảo C militaris Ánh sáng led có tác dụng kích thích hình thành thể nấm đơng trùng hạ thảo nhanh từ - ngày so với ánh sáng huỳnh quang Trong điều kiện chiếu sáng đèn led vàng có bƣớc sóng 570 nm, cƣờng độ sáng mật độ dòng photon quang hợp 32,568 mol.m-2.s-1 với độ rọi từ 500 - 1000 lux, chu kỳ chiếu sáng 12h/24h thể nấm đơng trùng hạ thảo C militaris phát triển tốt với chiều dài trung bình cm, khối lƣợng tƣơi 3,68 0,56 g/ 20 thể, hàm lƣợng hoạt chất cao điều kiện đèn led cịn lại Điều cho thấy đèn led vàng với số nhƣ sử dụng để thay đèn huỳnh quang q trình ni cấy nhân tạo nấm đơng trùng hạ thảo C militaris 5.2 Kiến nghị Cần nghiên cứu ni cấy nhiều bƣớc sóng kết hợp đa dạng để cải thiện phát triển hình thành thể nhƣ tăng cao hàm lƣợng hoạt chất quý đông trùng hạ thảo C militaris Sau nghiên cứu xong cần phát triển quy mô lớn, phục vụ cho ngành sản xuất dƣợc liệu, sản xuất dƣợc phẩm, thực phẩm 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài iệu tham khảo tiếng Anh Baoyan, F., & Haibo, Z (2012) Cordycepin: pharmacological properties and their relevant mechanisms CELLMED, 2(2), 141-147 Bian ZH, Yang QC, Liu WK (2015) Effect so flight quality on the accumulation of phytochemic alsin vegetables produced in controlled environments: A review J Sci Food Agricult 95: 869-877 Berti, D., Barbaro, P., Bucci, I., & Baglioni, P (1999) Molecular recognition through H-bonding in micelles formed by dioctylphosphatidyl nucleosides The Journal of Physical Chemistry B, 103(23), 4916-4922 Byung-Tae P., Kwang-Heum N., Eui-Cha J., Jae-Wan P., & Ha-Hyung K (2009) Antifungal and Anticancer Activities of a Protein from the Mushroom Cordyceps militaris Korean Journal of Physiol Pharmacology 13(14), 49 – 54 Chang, H L., Chao, G R., Chen, C C., & Mau, J L (2001) Non-volatile taste components of Agaricus blazei, Antrodia camphorata and Cordyceps militaris mycelia Food chemistry, 74(2), 203-207 Chao, S C., Chang, S L., Lo, H C., Hsu, W K., Lin, W T., & Hsu, T H (2019) Enhanced production of fruiting body and bioactive ingredients of Cordyceps militaris with LED light illumination optimization Journal of Agricultural Science and Technology, 21(2), 451-462 Che, Z M (2003) Assessment on edible safety of artificially-cultivated Cordyceps militaris fruiting bodies Edible Fungi, 25(3), 45-46 Choi Y.S., Lee H.K., Kim S.H (1999) Production of fruiting body using cultures of entomopathogenic fungal species Korean Journal of Mycology 27: 15–19 Christian G.D.N E & Henry A C F (1837) Das System der Pilze: part one 43 10 Das, S K., Masuda, M., Sakurai, A., & Sakakibara, M (2010) Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: current state and prospects Fitoterapia, 81(8), 961-968 11 Dong C.J (2013) The traditional Chinese medicine fungus Cordyceps and its Effect of temperature on Cordycepin Production in Cordyceps militaris Thai J Agric Sci 42 (2), 219 - 225 12 Dong, J Z., Liu, M R., Lei, C., Zheng, X J., & Wang, Y (2012) Effects of selenium and light wavelengths on liquid culture of Cordyceps militaris Link Applied biochemistry and biotechnology, 166(8), 2030-2036 13 Fengyao, W., Hui, Y., Xiaoning, M., & Junqing, J Guozheng Zh., Xijie G and Zhongzheng G (2011) Structural characterization and antioxidant activity of purified polysaccharide from cultured Cordyceps militaris African Journal of Microbiology Research, 5(18), 2743-2751 14 Harada, Y (1995) Production of Cordyceps militaris fruit body on artificially inoculated pupae of Mamestra brassicae in the laboratory Nippon Kingakukai Kaiho, 36, 63-72 15 Harry G B (1998) Analytical profiles of Drug Substances and Excipients Volume 25, Academic Press, USA 16 Hong, I.P, Kang ,P.D., Kim, K.Y., Nam, S.H., Lee, M.Y., Choi, Y.S., Kim, N.S, Kim, H.K., Lee, K.G & Humber, R.A (2010) Fruit body formation on silkworm by Cordyceps militaris Mycobiology 38(2): 128-132 17 Hori, M., & Kitakaze, M (1991) Adenosine, the heart, and coronary circulation Hypertension, 18(5), 565-574 18 Huang, N L., Lin, Z B., & Chen, G L (2010) Medicinal and edible fungi Shanghai Scientific and Technological Literature, Shanghai 19 Hur, H (2008) Chemical ingredients of Cordyceps militaris Mycobiology, 36(4), 233-235 44 20 Kamble, V R., Agre, D.G (2012) Reinvestigation of insect parasite fungus Cordyceps militaris from Maharashtra, vol 5, no 2, pp 224–225 21 Kim, J S., Sapkota, K., Park, S E., Choi, B S., Kim, S., Hiep, N T., & Kim, S J (2006) A fibrinolytic enzyme from the medicinal mushroom Cordyceps militaris Journal of Microbiology, 44(6), 622-631 22 Kim, S W., Hwang, H J., Xu, C P., Sung, J M., Choi, J W., & Yun, J W (2003) Optimization of submerged culture process for the production of mycelial biomass and exo‐polysaccharides by Cordyceps militaris C738 Journal of applied microbiology, 94(1), 120-126 23 Kobayasi, Y (1982) Keys to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella Transactions of the mycological Society of Japan, 23, 329364 24 Lee, H J., Burger, P., Vogel, M., Friese, K., & Brüning, A (2012) The nucleoside antagonist cordycepin causes DNA double strand breaks in breast cancer cells Investigational new drugs, 30(5), 1917-1925 25 Liu, C., Huang, J., & Liang, Y (2001) Spectroscopic studies on molecular recognition capabilities of a nucleolipid bearing thymine headgroup to adenosine Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 57(8), 1587-1593 26 Li, C R., Nam, S H., Geng, D G., Fan, M Z., & Li, Z Z (2006) Artificial culture of seventeen Cordyceps spp Mycosystema, 25(4), 639-645 27 Li, N., Song, J G., Liu, J Y., & Zhang, H (1995) Compared chemical composition between Cordyceps militaris and Cordycpes sinensis Journal of Jilin Agriculture University, 17(7), 80-83 28 Lim, L., Lee, C., & Chang, E (2012) Optimization of solid state culture conditions for the production of adenosine, cordycepin, and D-mannitol in fruiting bodies of medicinal caterpillar fungus Cordyceps militaris (L.: 45 Fr.) Link (Ascomycetes) International Journal of Medicinal Mushrooms, 14(2), 15-16 29 Liu, M M., Ning, S Y., & Cui, X Y (2008) Optimization of submerged culture condition for Cordyceps militaris using response surface methodology Chin Agric Sci Bull, 24(5), 127-131 30 Lu, J M., Zeng, Z J., & He, H Q (2005) Culture technique of Cordyceps militaris on artificial media Guangdong Agric Sci, 22(2), 88-89 31 Ma, L., Zhang, S., & Du, M (2015) Cordycepin from Cordyceps militaris prevents hyperglycemia in alloxan-induced diabetic mice Nutrition Research, 35(5), 431-439 32 Manash K., Vikas G., Anup K (2005) Merits of HPLC-based method over spectrophotometric method for assessing the kinetics and inhibition of mammalian adenosine deaminase Journal of Chromatography B, 822 (2005), 146-153 33 Mizuno, T (1999) Medicinal effects and utilization of Cordyceps (Fr.) Link (Ascomycetes) and Isaria Fr.(mitosporic fungi) Chinese caterpillar fungi," Tochukaso" International Journal of Medicinal Mushrooms, 1(3), 27-29 34 Natthapong S., Ronnarit R., Boonsong S., Peerasak C., Yuranan B (2020) Determination of Adenosine and Cordycepin Concentrations in Cordyceps militaris Fruiting Bodies Using Near-Infrared Spectroscopy Acs omega, 10(5), 27235-27244 35 Park, B T., Na, K H., Jung, E C., Park, J W., & Kim, H H (2009) Antifungal and anticancer activities of a protein from the mushroom Cordyceps militaris The Korean Journal of Physiology & Pharmacology, 13(1), 49-54 36 Paul, M K., Paul, F C., David, W M and Stalpers, J A (2008) Dictionary of the Fungi; CABI 12(3), 23-25 46 37 Ren, W Y., Zhao, H., & Wu, Z K (2009) Techniques for fast and high yielding cultivation of the valuable edible and medicinal mushroom, Cordyceps militaris China Agric Technol Ext, 25(5), 28-29 38 Sato, H., & Shimazu, M (2002) Stromata production for Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to alternative host insects Applied Entomology and Zoology, 37(1), 85-92 39 Seulmee S., Sungwon L., Jeonghak K., Sunhee M., Seungjeong L., ChongKil L., Kyunghae C., Nam-Joo H., Kyungjae K (2009) Cordycepin uppresses Expression of Diabetes Regulating Genes by Inhibition of Lipopolysaccharide-induced Inflammation in Macrophages Immune Network 9(3), 98-105 40 Shagun G., Damandeep K., Reetika (2021) UV Method Development and Validation, Formulation, Development and Characterisation of Transfersomes and SLNs of Cordycep militaris Extract Int J Pharm; 11(8), 6-11 41 Shih, L., Tsai, K L., & Hsieh, C (2007) Effects of culture conditions on the mycelial growth and bioactive metabolite production in submerged culture of Cordyceps militaris Biochemical engineering journal, 33(3), 193-201 42 Shin, S., Lee, S., Kwon, J., Moon, S., Lee, S., Lee, C K., & Kim, K (2009) Cordycepin suppresses expression of diabetes regulating genes by inhibition of lipopolysaccharide-induced inflammation in macrophages Immune network, 9(3), 98-105 43 Shonkor K D., Shinya F., Mina M and Akihiko S (2010) Efficient Production of Anticancer Agent Cordycepin by Repeated Batch Culture of Cordyceps militaris Mutant Lecture Notes in Engineering and Computer Science, 3(1-2), 20-22 47 44 Spicuzza, L., Di Maria, G., & Polosa, R (2006) Adenosine in the airways: implications and applications European journal of pharmacology, 533(13), 77-88 45 Stone, R (2008) Last stand for the body snatcher of the Himalayas? Science, 322(5905), 1182-1182 46 Sung, J M (1996) The insects-born fungus of Korea in color Seoul: Kyohak Publishing, 12(3), 18-22 47 Sung, J M., Choi, Y S., Lee, H K., Kim, S H., Kim, Y O., & Sung, G H (1999) Production of fruiting body using cultures of entomopathogenic fungal species The Korean Journal of Mycology, 27(1), 15-19 48 Sung, J M., Choi, Y S., Shrestha, B., & Park, Y J (2002) Investigation on artificial fruiting of Cordyceps militaris The Korean Journal of Mycology, 30(1), 6-10 49 Sung, J M., Park, Y J., Lee, J O., Han, S K., Lee, W H., Choi, S K., & Shrestha, B (2006) Selection of superior strains of Cordyceps militaris with enhanced fruiting body productivity Mycobiology, 34(3), 131-137 50 Tuli, H S., Sharma, A K., Sandhu, S S., & Kashyap, D (2013) Cordycepin: a bioactive metabolite with therapeutic potential Life sciences, 93(23), 863-869 51 Wang, G D (1995) Ecology, cultivation and application of Cordyceps and Cordyceps sinensis Scientific and Technical Documents, Beijing 52 Wang, J F., & Yang, C Q (2006) Research survey on artificial cultivation and product development of Cordyceps militaris Lishizhen Med Ma-ter Med Res, 17(4), 268-269 53 Wol-Soon J., Choi, Y J., Mm, H J., Lee, J Y., Nam, B H., Lee, J D., & Jeong, M H (2010) The anti-inflammatory effects of water extract from Cordyceps militaris in murine macrophage Mycobiology, 38(1), 46-51 48 54 Yan, H., Zhu, D., Xu, D., Wu, J., & Bian, X (2008) A study on Cordyceps militaris polysaccharide purification, composition and activity analysis African Journal of Biotechnology, 7(4), 55-59 55 Yi, Z L., Huang, W F., Ren, Y., Onac, E., Zhou, G F., Peng, S., & Li, H H (2014) LED lights increase bioactive substances at low energy costs in culturing fruiting bodies of Cordyceps militaris Scientia Horticulturae, 256(123), 139-143 56 Young-Joon A., Suck- Joon P., Sang-Gil L., Sang-Cheol S., & Don-Ha C (2000) Cordycepin: Selective Growth Inhibitor Derived from Liquid Culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48(24), 2744−2748 57 Yuko O., Lee, J B., Hayashi, K., Fujita, A., Park, D K., & Hayashi, T (2007) In vivo anti-influenza virus activity of an immunomodulatory acidic polysaccharide isolated from Cordyceps militaris grown on germinated soybeans Journal of Agricultural and Food Chemistry, 55(25), 10194-10199 58 Zhang, Y., Li, E., Wang, C., Li, Y., & Liu, X (2012) Ophiocordyceps sinensis, the flagship fungus of China: terminology, life strategy and ecology Mycology, 3(1), 2-10 59 Zhang, Z., Lei, Z., Yun, L., Zhongzhi, L., & Chen, Y (2008) Chemical composition and bioactivity changes in stale rice after fermentation with Cordyceps sinensis Journal of Bioscience and bioengineering, 106(2), 188-193 60 Zheng, P., Xia, Y., Xiao, G., Xiong, C., Hu, X., Zhang, S., & Wang, C (2012) Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional Chinese medicine Genome biology, 12(11), 1-22 49 61 Zhou, X., Gong, Z., Su, Y., Lin, J., & Tang, K (2009) Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental products Journal of Pharmacy and Pharmacology, 61(3), 279-291 Tài iệu tham khảo tiếng Việt Đỗ Thị Gấm, Dƣơng Hƣơng Quỳnh, Phan Thị Lan Anh, Nguyễn Hoàng Dƣơng, Đỗ Thị Kim Hoa (2019) Đánh giá ảnh hƣởng ánh sáng led nơng nghiệp đến q trình ni cấy invitro nấm đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris Tạp chí Công nghệ Sinh học, 17(3), 473-481 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phƣơng pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại Học Quốc Gia TP.HCM, TP.HCM, 18(5), 47-72 Nguyễn Thị Liên Thƣơng, Trịnh Diệp Phƣơng Danh Nguyễn Văn Hiệp (2016) Nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris: Đặc điểm sinh học, giá trị dƣợc liệu yếu tố ảnh hƣởng đến trình ni trồng nấm Tạp chí Khoa học Trƣờng Đại học Cần Thơ, 35(8), 9-22 Nguyễn Văn May (2004) Kỹ thuật sấy nông sản thực phẩm Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, Hà Nội, 44(4), 235-237 Nguyễn Văn Ri (2011) Các phƣơng pháp tách, Tài liệu dùng cho học viên cao học, Bộ mơn Hóa Phân Tích, Khoa Hóa Học, trƣờng đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội, 68(9), 123-125 Phạm Thị Lan, Đỗ Hải Lan, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Bạc Thị Thu, Phạm Văn Nhã (2016) Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ ánh sáng tới sinh trƣởng, phát triển hàm lƣợng hoạt chất cordycepin nấm Cordyceps militaris NBRC 100741 nhộng tằm VNU Journal of Science: Medical and Pharmaceutical Sciences, 32(2), 63-67 Phan Lê Hiền, Hà Minh Hiển (2019) Nghiên cứu xây dựng quy trình định lƣợng cordycepin đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris phƣơng pháp HPLC Tạp chí Dƣợc học, 59(3), 20-23 50 PHỤ LỤC Chủng giống Cordyceps militaris NBRC 9787 Ngày đƣợc chấp nhận 22/10/1973 Lịch sử IFO 9787 (T Yokoyama, T Yokoyama 4808-28-8) Lƣu trữ giống VTCC F-1223 Nhiệt độ nuôi 25 Giống địa phƣơng Ohdaigaharayama, Nara Pref Nguồn gốc Nhật Bản Đƣợc bảo quản, lƣu giữ NBRC H-12007, IFO H-12007 51