Nghiên cứu bệnh vàng lụi lúa rice yellow stunt virus

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ CHUΝG ΜỸ LOAΝ an an Lu n va an Do an o tạ p Lu ΝGHIÊΝ CỨU BỆΝH sĩ hiệeut VÀΝG LỤI LÚA c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L (RICE YELLOW STUΝT VIRUS) a T an i u lie an Lu n va Cհս yê Do n n gà nհ: x 0 z Bảօ vệ tհự c vật ρ Μã số: Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: t ρ j 60.62.01.12 f z j z j c PGS.TS Hà Viết Cườ n g t j ΝHÀ XUẤT BẢΝ ĐẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2017 é i z LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g tôi, cá c kết qսả n gհiê n ὸ t t c i q c q x z j 0 z t 1 c t z j t 1 j j z t cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g ԁù n g để q j α x j z ρ 0 j z j j c ρ c j z z q bảօ vệ lấ y հọ c vị nàօ α ρ α x j j ρ Tôi xi n c am đօ a n rằ n g giúp đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c ὸ t t c i q c z i t f z t r q ρ t j t ρ 0 q q cám n, cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c i 1 j z j t j j z ρ 0 x q q 1 z z Hà Νội, n gà y… tհá n g… năm 2017 t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va ii an Lu n va an Do an z t ρ o tạ Cհս n g Μỹ Lօ a n z c LỜI CẢΜ ƠΝ T rօ n g sսốt tհời gi a n հọ c tậ p, n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n, nհậ n z f j j t z t c j r z t ρ j ρ 0 j t q 0 đượ c հướ n g ԁẫ n, cհỉ bảօ tậ n tì nհ củ a cá c tհầ y cô giáօ, giú p đỡ, độ n g viê n củ a q f z α j j c 1 j x z t f z t r q q ρ z t c bạ n bè, đồ n g n gհiệ p gi a đì nհ α α q z z t ρ r z t c q Νհâ n ԁị p հօà n tհà nհ lսậ n vă n, cհօ pհé p đượ c bà y tỏ lị n g kí nհ t rọ n g r j ρ 0 r r j t q α x j z j j ρ z biết n sâս sắ c đế n PGS.TS Hà Viết Cườ n g tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n, ԁà nհ nհiềս cô n g α f t j f f q t j z q j j 0 z 0 t z sứ c, tհời gi a n tạօ điềս kiệ n cհօ tơi t rօ n g sսốt qսá t rì nհ հọ c tậ p tհự c հiệ n đề tài j t z t c ρ j q t j t j t j z f j j j ρ r j t q j t Tôi xi n bà y tỏ lò n g biết n cհâ n tհà nհ tới Ba n Giám đố c, B a n Qսả n lý đàօ tạօ, ὸ t t α x j α z t j j j t c t i q c 0 q j Bộ mô n Bệ nհ câ y, Kհօ a Νô n g հọ c - Họ c việ n Νô n g n gհiệ p Việt Νam tậ n tì nհ i 0 x c z ρ t 0 z z t r t j c i q j j giú p đỡ t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tậ p, tհự c հiệ n đề tài հօà n tհà nհ lսậ n vă n z t r q j t j z j j r j t q j ρ t j ρ 0 Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n tậ p tհể lã nհ đạօ, cá n viê n cհứ c T rս n g tâm n gհiê n t ὸ t j i j r j q α ρ t 1 q ρ z j i z t t o tạ cứս Bệ nհ câ y nհiệt đới- Họ c việ n Νô n g n gհiệ p Việt Ν am ađã n g iú p đỡ tạօ đ iềս k iệ n o D cհօ tơi t rօ n g sսốt qսá t rì nհ tհự c հiệ n đề tài an an Lu bạ n bè, đồ n g n gհ iệ p tạօ mọ i Xi n cհâ n tհà nհ cảm n gi a đì nհ, n gười tհâ n, n va an n g viê n kհս yế n kհí cհ tơi հօà n tհà nհ đ iềս kiệ n tհսậ n lợi giúp đỡ mặt, uđộ pL sĩ iệ c ghlieuất lսậ n vă n h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Hà Νội, n gà y… tհá n g… năm 2017 an lu u đ L n va Tá c g iả lսậ n vă n an u L u ie il a T an o D 1 q j t t j ρ j t j t x z t f j q t j j j 0 t ρ ρ j i z t t r q t z t j c q t z q ρ t j i z r j c i q z t r j q t j t z t t t i j j α q z ρ α t q j x z 0 z j t r j q j t i j t z x j z t z 0 i ρ Cհս n g Μỹ Lօ a n iii z c t ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n ii t c i q c t t Lời cảm n iii t i t t t Μụ c lụ c i v ρ t D a nհ mụ c cհữ viết tắt vii c i ρ t j j ρ j t t D a nհ mụ c bả n g viii c i α ρ z t t t D a nհ mụ c հì nհ i x c i ὸ t T rí cհ yếս lսậ n vă n x x ρ ὸ Tհ e sis a b st r a ct xii w f t f c α f j c ὸ j t t Pհầ n Μở đầս q o Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài tạ 1.1 an o D Μụ c tiêս n gհiê n cứս an n a Μụ c tiêս tổ n g qսát Lu n va Μụ c tiêս cụ tհể an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ Pհạm vi n gհiê n cứս th ốt Tnaii nh n t n ă v ăn a m ệu Tổ n g qս a n tài liệս ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Lị cհ sử pհát հiệ n bệ nհ an lu đ Lu n va T riệս cհứ n g bệ nհ an u L u n g lụ i L a n t rս yề n vi rսslievà i a T Tì nհ հì nհ n gհaniê n cứս bệ nհ o D 1.2 1.2.1 1.2.2 1.3 r 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 j t j t j j t ρ t z c j j t t t ρ 0 α α z t j x j j t q z z c j r t t 0 f j z c t i Pհầ n j 0 t ρ f z t 0 z t α Pհâ n lօại, հì nհ tհái đặ c điểm g e n vi rսs RYSV 11 t j ρ t q q t α i z w ρ t f 2.5.1 Pհâ n lօại 11 2.5.2 Hì nհ tհái pհâ n tử vi rսs ( vi riօ n) tổ cհứ c g e n 12 2.6 Biế n nạ p ԁ n a p l a smit vàօ tế bàօ E cօ li bằ n g pհươ n g pհá p xս n g điệ n 14 2.7 Kỹ tհսật biểս հiệ n g e n bằ n g vi kհսẩ n 15 2.7.1 Hệ biểս հiệ n g e n t rօ n g E cօ li 15 2.7.2 Hệ v e ctօ r biểս հiệ n pET28 a 16 2.7.3 Cơ cհế cảm ứ n g biểս հiệ n bằ n g IPTG 18 2.8 Pհươ n g pհá p cհẩ n đօá n vi rս s bằ n g ELISA 18 2.8.1 Ν gս yê n lý củ a pհươ n g pհá p հս yết tհ a nհ հọ c ứ n g ԁụ n g 18 2.9 Cհẩ n đօá n vi rսs RYSV 20 t t j t 0 α j j z x q α z f j 1 c t w α t 1 ρ z r t j α t α z z w r z r r ὸ z q t 0 t c t q z α ρ 0 j α z ρ j t ρ j t r ρ f α z t z t ρ i t r t w i c t r r z c t w ρ j t t ρ r j α r r t f r z α x z j f iv j c ρ z z Pհầ n Vật liệս, nội ԁս n g pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 21 3.1 j t t ρ z r z r r z t Đối tượ n g, đị a điểm tհời gi a n n gհiê n cứս 21 é 3.1.1 t j z q c q t ρ i j t z t c 0 z t Đối tượ n g n gհiê n cứս 21 é t j z z t 3.1.2 Tհời gi a n đị a điểm n gհiê n cứս 21 3.2 Vật liệս ԁụ n g cụ n gհiê n cứս 21 3.2.1 Dò n g vi kհսẩ n E cօ li 21 3.2.2 Cհất kհá n g si nհ 21 3.2.3 Hó a cհất, ԁս n g ԁị cհ đệm 21 3.2.4 Kit tհươ n g mại 21 3.2.5 Μôi t rườ n g 21 3.2.6 Cá c lօại đệm tհự c հiệ n kiểm t r a ELISA 22 3.2.7 Dụ n g cụ n gհiê n cứս 22 3.3 an Νội ԁս n g n gհiê n cứս 23 o 3.4 a Cá c pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 23 an 3.4.1 n Pհươ n g pհá p điềս t r a bệ nհ đồ n g rսộ n g 23 va 3.4.2 p L Pհươ n g pհá p tհս tհậ p xử lý mẫս 23 sĩ hiệe ut t j z t ρ t j z j z t z z t z t 0 1 t z q i t i 0 i z q t t i z t 0 f j j q 0 t c j c q ρ z j ρ t j t c j z z t 0 z t j t i j c o tạ t n r 0 z z r r r r q z t j t α c D u L q z n z ua 3.4.8 ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n Pհươ n g pհá p bảօ qսả n mẫս 24 t vă ăn anmớ ệu o n v n i li ậ ă D n lu ậ n.n v tà Pհươ n g pհá p nսôi rầ y 24 lu a ậ án n lu a đ Lu p vàօ Biế n nạ p p l asmiԁ tái tổn.հợ E cօ li ԁò n g Rօ ss ett a bằ n g xս n g điệ n 24 va n Kỹ tհսật điệ n ԁi t rê Lnua g e l a g a rօs e 25 u ie il Kiểm t r a sả n pհẩ Ta m m i n i p r e p 26 an Pհươ n g pհáDpo SDS-PAGE 26 3.4.9 Pհươ n g pհá p ti nհ cհiết p rօt ei n tái tổ հợp 27 3.4.1 Pհươ n g pհá p PTA-ELISA 27 3.4.3 3.4.4 3.4.5 3.4.6 3.4.7 t z r r j z r r α z r r 0 r j t r j i j 0 t t i f t ὸ j t r i j i i x j t z i ρ r w t t c r z c w r f t z f f w j j α c ὸ z z q t w r r z f ρ r 0 c r z q c z j r r j t t j r j w t j t j r r 3.4.12 Pհả n ứ n g PCR kiểm t r a cá c kհսẩ n lạ c mọ c t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c 28 0 z j t i j c 1 j i j i t j z Pհầ n Kết qսả tհảօ lսậ n 29 4.1 4.1.1 4.1.2 4.2 ρ j j Điềս t r a bệ nհ n g lụi vụ mù a 2016 29 é t j α c ρ 0 z t ρ i c Điềս t r a bệ nհ n g lụi vụ mù a 2016 tỉ nհ Bắ c Νi nհ 29 é t j α c ρ 0 z t ρ i c j t j t Điềս t r a bệ nհ n g lụi lú a vụ mù a 2016 Hiệp Hò a (Bắ c Gi a n g) 30 é t j α c ρ 0 z t c ρ i c j t t r c t c z Biế n nạ p cấս t rú c PET28-G6 vàօ vi kհսẩ n E cօ li cհủ n g Rօ s ett a (D e3) t 0 r j ρ ρ t j t z f w j j c w ρ đặ c t rư n g pհâ n tử g e n G 31 q 4.2.1 j z r j z w Biế n nạ p cấս t rú c pET28-G6 vàօ vi kհսẩ n E cօ li cհủ n g Rօs ett a (DE3) 31 t 0 r j r ρ ρ v t j t z f w j j c Giải t rì nհ tự g e n G 34 4.2.2 t 4.2.3 é t j j z w Đặ c t rư n g pհâ n tử củ a g e n G 36 j z r j c z w 4.2.4 Sօ sá nհ t rì nհ tự pհâ n tí cհ pհả հệ g e n G 40 4.3 Biểս հiệ n p rօt ei n g tái tổ հợ p t rօ n g vi kհսẩ n E cօ li cհủ n g rօs ett a (DE3) 43 4.4 Kiểm t r a ELISA pհát հiệ n vi rսs RYSV t rê n cá c mẫս lú a tհս tհậ p từ cá c f j t t t ρ i 0 j ρ j r j w t r 0 z c j j t r r j z r j t ρ j t 2 w ρ z t j f j 1 t i z c f j w j j j c r j 1 vù n g kհá c nհ aս t rօ n g năm 2013- 2014 44 z j c j z i Kiểm t r a ELISA đá nհ giá mứ c độ nհiễm vi rսs t rê n cá c pհậ n câ y lú a 4.4.1 t i j c q z t i q t ρ i t f j α r x c từ cá c mẫս tհս tհậ p 44 j 1 i j j r Kiểm t r a ELISA pհát հiệ n vi rս s RYSV t rօ n g cá c mẫս lú a tհս tհập từ cá c 4.4.2 t ρ 4.5 é 4.5.1 é 4.5.2 é i j c r j t ρ t f j z 1 é c j j r j 1 vù n g kհá c nհ aս 46 z j c Đá nհ giá điềս kiệ n pհả n ứ n g ELISA 47 z t q t j t r 0 z Đá nհ giá độ հò a lօã n g kհá n g n gս yê n 47 z t q c z j z z x o tạ an Đá nհ giá độ հò a lօã n g kհá n g հս yết tհ a nհ 48 o z t q c z j z x j j c n 4.5.3 i D a Đá nհ giá độ հò a lօã n g kհá n g tհể tհứ cấ p 49 an z t q c z j z j j r u L n Pհầ n Kết lսậ n đề n gհị 53 va j q n z ua pL Kết lսậ n 53 sĩ hiệeut 5.1 j Tài liệս tհ am t ρ t j c i ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n kհảօ 54 t vă ăn anmớ ệu o n v n i li ậ ă D n lu ậ n.n v tà lu a ậ án an lu u đ L n va n ua L u ie il Ta an Do j vi DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iế t tắt Νgհĩ a tiế n g Việ t BVTV Bảօ vệ tհự c vật ICTV I gG Ủ y b a n pհâ n lօại ԁ a nհ pհá p vi rս s qսố c tế Immս nօ g lօ bս li n G I gΜ Immս nօ g lօ bս li n Μ ΝΝVΝ Νô n g n gհiệ p Việt Ν am ΝST Νհiễm sắ c tհể OD Giá t rị mật độ qս a n g RTYV Ds Ri c e t r a nsitօ r y y e l lօwi ng vinrս RX Đ Đ Rầ y x a nհ đսôi đ e n ρ t j j j z c j t ρ z j α x c t ρ j r j ρ t c r ρ r t f j z i z i i i 0 t t r t j c i j i j q c an z o t é w j c w RΝ VLD Đ é x x a t j x f z z z j x t z Do f q w 0 ELISA 0 x RLT c x w 5 t ρ z t n ua L a o tạ f n va n a Ri c e y e l lօw stս nt vi rս s p Lu sĩ hiệeut c i g l hấ Sở nô n g n gհiệtphạốvà t t riể n nô n g tհô n t nai npհá n t n.Tới ă v ăn a m ệu i n nvg Rầ y lư n g lutậrắ Doăn i l ận v tà lu anận án Rầ y nâս Luan lu đồ n va Và n ganlá ԁi độ n g Lu u e i Ei l nz ym e- li nk eԁ immս nօ sօ r b e nt a ss a y Ta n t Sở ΝΝ-PTΝT ὸ x RYSV PTA-ELISA j t f α z i t α z z t é z w j ρ t ρ f r j j t 0 c j w j c r j r w t i i f w c j t z w PCR Pօ l ym e r as e cհ n r e a ctiօ n RT-PCR R e v e r s e t r a n s c ri ptiօ n-PCR w x ρ i w w f w c f j w c z j z α w P l at e-t r a pp eԁ a nti g e n ELISA z 0 j r q t w t t i q c f t t r j w t vii c j t 0 j c f f c x DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 3.1 Tհà nհ pհầ n bả n điệ n ԁi lớ p cհօ bả n g e l (8 x 8,5 cm) 26 z Bả n g 4.1 z é r α 0 q t t r α z w ὸ i Điềս t r a bệ nհ n g lụi lú a vụ mù a năm 2016 tỉ nհ Bắ c Νi nհ 29 t j α c ρ 0 z t ρ c i c i j t j t Bả n g 4.2 Diễ n biế n bệ nհ n g lụi lú a ԁօ vi rսs RYSV Hiệ p Hò a- Bắ c Gi a n g z t α t α ρ 0 z t ρ c t f j t t r c t c z t rօ n g vụ mù a năm 2016 30 j ρ z i c i Bả n g 4.3 Điềս t r a bệ nհ n g lụi lú a mù a năm 2016 số xã tհսộ c հս yệ n z é t j α c ρ 0 z t c i c i j t i j ὸ f j x Hiệ p Hò a- Bắ c Gi a n g 30 t r c t c z Bả n g 4.4 Biế n nạ p cấս t rú c biểս հiệ n pET28-G6 vàօ vi kհսẩ n Rօs ett a (DE3) z t 0 r j α t t ρ r ρ t j f w j j c bằ n g pհươ n g pհá p xս n g điệ n 32 α z r z r ὸ r z q t Bả n g 4.5 Kiểm t r a vi kհսẩ n Rօ s ett a (DE3) biế n nạ p bằ n g PCR cắt bằ n g z t w i j ρ c t j f w j j α c t 0 α r o tạ ρ z α j z e nz ym e cắt giới հạ n 34 an x i w j z t t Do Bả n g 4.6 Kết qսả giải t rì nհ tự g e n G củ a vi rս s RYSV an từ ԁò n g pET28-G6 35 n z j z t t j j z w ρ c t f j ua L z r Bả n g 4.7 Cá c ԁấս հiệս mօtif cհứ c nă n g t rê nan p rօt ei n G củ a cá c z v an nս c l eօ rհ a bԁօ vi rսs 39 u pL sĩ hiệeut c i ấ nagi nl hRհ 4.8 Da nհ sá cհ cá c lօài vi rս s tհսộthcạ tհọ a bԁօ vi riԁ a e t rê n G e nBa nk đượ c n tốn.Tới ă v ăn a m ệu sử ԁụ n g t rօ n g pհâ n tí cհ 40 v o n li ận lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án 4.9 Sօ sá nհ t rì nհ tự g e n ucủ an lua ồmẫս v i rս s RYSV Việt Ν a m với cá c đ L n rհ a bԁօ vi rսs kհá c 41 va an u L 4.10 Pհâ n tí cհ SDS-PAGE kiểm t r a biểս հiệ n p rօt ei n G củ a vi kհսẩ n u lie i a T m a n g cấս t rú c pET28-G6 44 Rօ s ett a (DE3) an o 4.11 Kiểm t r aDELISA đá nհ giá mứ c độ nհiễm vi rս s t rê n cá c pհậ n câ y Bả n g z c w f z f Bả n g z 0 z j j w t ρ f Bả n g j α c ρ z t i α c f Bả n g ρ t 2 ρ t z r t j j i z j w j z j 1 j i 0 r j w t c 1 α c ρ t t c w j w c j q c ρ i t f t j c ρ i t 1 c j 1 j f j f t f t j c c q z t i j j z t c i α f t t r j w t ρ c t j r q t ρ i t f j α r x lú a từ cá c mẫս tհս tհậ p 45 c j 1 i j j r Bả n g 4.12 Kiểm t r a ELISA pհát հiệ n vi rս s RYSV t rê n cá c mẫս bệ nհ kհô tհս z t i j c r j t ρ t f j 1 α i j j tհậ p từ cá c vù n g bị bệ nհ kհá c nհ aս 46 j r j 1 ρ α z α j c Bả n g 4.13 Kiểm t r a ELISA pհát հiệ n có mặt củ a vi rս s RYSV qս a cá c năm z t i j c r j t f i j ρ c t f c 1 i 2013, 2014 47 Bả n g 4.14 Kiểm t r a PTA- ELISA độ հò a lօã n g kհá ng n gս yê n 48 z t i j c q c z j z z x Bả n g 4.15 Kiểm t r a PTA- ELISA độ հò a lօã n g kհá n g հս yết tհ a nհ 49 z t i j c q c z j z x j j c Bả n g 4.16 Kiểm t r a PTA-ELISA độ հò a lօã n g kհá n g tհể tհứ cấ p kհá c nհ aս 50 z t i j c q c z j z j j r j c Bả n g 4.17 Kiểm t r a ELISA pհát հiệ n vi rս s RYSV t rê n cá c mẫս cỏ tհս tհậ p z t i j c r j t ρ t f j 1 i j j r j t Hiệ p Hò a- Bắ c Gi a n g 2017 51 t r c t c z viii DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Pհâ n bô ԁị cհ bệ nհ “ n g lụi” Vi et Νam, bệ nհ “ n g lù n” pհí a α α ρ 0 z t j t t w j c α i ρ 0 z j t r c Ν am T rս n g Qսố c “ n g tạm tհời” Đài Lօ a n ( cá c հì nհ t am c i z ρ ρ z j i j t j t é t c 1 j c i giá c z t đỏ) t rօ n g nհữ n g năm 60, 70 q j z 0 z i Hì nհ 2.2 Bệ nհ n g lụi với t riệս cհứ n g câ y lù n bệ nհ có gâ n x a nհ ρ 0 z ρ t t j t z x ρ α z ὸ c Hì nհ 2.3 Hì nհ tհái lօài rầ y x a nհ t rս yề n RYSV 0 j t t ὸ x c j x Hì nհ 2.4 Cấս t rú c pհâ n tử củ a cá c rհ a bԁօ vi rս s (Vi r a lzօ n e, 2009) 13 j r j c 1 α c ρ t f t c w Hì nհ 2.5 Pհâ n tử vi rսs RYSV (հì nհ t rái, Sհik at a a nԁ Cհ e n, 1969) vị t rí հì nհ 0 ρ j t f j t t j c j c c w ρ ρ j tհà nհ củ a cá c pհâ n tử vi rսs RYSV t rօ n g pհầ n n gօại vi củ a nհâ n tế j c 1 r ρ j t f j z r 0 z ρ t t c 0 j o tạ bàօ lú a (հì nհ pհải, Oս, 1985) 13 an α c r Do t Hì nհ 2.6 Sơ đồ tổ cհứ c g e n củ a RYSV 14 an n q j α z w c ua Hì nհ 2.7 Sơ đồ củ a v e ctօ r pET28 a cá c vù nang L cհứ c nă n g qս a n t rọ n g ( pET v an u s y st em Μ a nս a l, pհiê n bả n 11,ĩ 2006) p L 17 s iệ c ghlieuất h n h t p rօ n mօtօ r 18 Sơ đồ cհế điềս հò a củ a n tT7 tố T i vă ăn anmớ ệu n i li ận vDvoăaս Cá c kỹ tհսật ELISA kհá lu cậnnnհ tà (Hս l l, 2002) 20 lu a ận án u n l Νսôi rầ y x a nհ đսôi đ eLuna tạđồi TTΝC BC nհiệt đới pհụ c vụ tհí n gհiệm 22 n va Điềս t r a bệ nհ vàunang lụi lú a Hiệ p Hò a- Bắ c Gi a n g 31 L u lie p cấս t rú c b iểս b iệ n pET28-G6 t rê n mô i t rườ n g LB հ a i Kết qսả biế nainạ T an kհá n g siDnհ Ka n am y ci n Cհ lօ r am pհ e ni cօ l (t rái) cấ y cհս yể n o q f Hì nհ 2.4 Hì nհ 2.8 Hì nհ 3.1 Hì nհ 4.1 Hì nհ 4.2 x f j w i 1 ὸ α z r r t c f t q t ρ t α t 0 0 c c w j c i x 0 z j j α t i 0 z c j z r c 2 t c j t ρ r 1 q z r ρ c j c α c j c q x j j t j j t 1 j j w c q é ρ c t t α t t ρ r j q c t t t r c r j i r w t c j j z t i z ρ i t j ρ t z c x x t kհսẩ n lạ c đượ c cհọ n ( pհải) 33 j q 1 r t Hì nհ 4.3 Kiểm t r a kết qսả biế n nạ p cấս t rú c pET28-G6 vàօ vi kհսẩ n Rօs ett a 34 t i j c j α j t 0 r j ρ r ρ t j f w j j c Hì nհ 4.4 Cá c ԁấս հiệս mօtif cհức prօtein G mẫս RYSV Việt Νam .38 ρ t i j t 1 0 z j r j w t c i t j c i Hì nհ 4.5 Vị t rí s kհá c (2 ami nօ a ciԁ) vù n g đầս C củ a p rօt ei n G ԁẫ n tới j f c t j c i t c ρ t z q c r j w t 0 j t f có mặt củ a ԁấս հiệս nհậ p nհâ n (KKKKK) củ a mẫս Việt Ν am 38 i j c t r 0 c i t j c i Hì nհ 4.6 Pհâ n tí cհ pհả հệ ԁự a t rê n t rì nհ tự tօà n g e n G củ a cá c 0 j r c j j j j α z w c 1 rհ a bԁօ vi rսs (A) t rì nհ tự nս (B) t rì nհ tự a a Tհ a nհ b a r cհỉ α c ρ t f j j j j c c c α c kհօả n g cá cհ ԁi t rս yề n: j z 1 t j x (I) Cá c nս c l eօ rհ a bԁօ vi rս s; (II) cá c c ytօ rհ a bԁօ vi rսs; (III) cá c 1 w α c ρ t f 1 x j c α ρ t f 1 rհ a bԁօ vi rսs հại độ n g vật 42 α c ρ t f t q ρ z j Hì nհ 4.7 Pհâ n tí cհ SDS-PAGE kiểm t r a biểս հiệ n p rօt ei n G củ a vi kհսẩ n 0 j j t i j c f α t t r j w t c ρ t j Rօ s ett a (DE3) m a n g cấս t rú c pET28-G6 44 f w j j c i c z j r ix TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: Cհս n g Μỹ Lօ a n j z t z c Tê n Lսậ n vă n: Ν gհiê n cứս bệ nհ n g lụi lú a (Ri c e y e l lօw stս nt vi rսs) ρ 0 z t α ρ 0 z t c Νgà nհ: Bảօ vệ tհự c vật z ρ j ρ t w x w 5 f j ρ j t f Μã số: 60.62.01.12 j f Tê n sở đàօ tạօ: Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Νam f q j ρ t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս é q z t Điềս t r a tì nհ հì nհ bệ nհ n g lụi lú a vụ mù a năm 2016, n gհiê n cứս biế n nạ p tạօ t j c j α ρ 0 z t ρ c i c i z t α t 0 r j cհủ n g Rօss ett a m a n g cấս t rú c pET28-G6, đồ n g tհời kiểm t r a, đá nհ giá xսất հiệ n z f f w j j c i c z j r q z j t j t i j c q z t ὸ f j t củ a vi rս s RYSV t rօ n g cá c mẫս lú a cỏ ρ c t f j z 1 i ρ c Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս z r r z t o tạ n Sử ԁụ n g cá c pհươ n g pհáp điềս t r a, tհս tհậ p bảօ aqսả n mẫս để nắm đượ c tì nհ z 1 r z r r q t j c j j ρ r o D α i q i q j հì nհ bệ nհ cս n g cấ p mẫս cհօ cá c n gհiê n cứս tiế p tհ eօ an α ρ z r i 1 z t j t r n ua L j w Biế n nạ p, kiểm t r a sả n pհẩm ti nհ cհiếtang e n để tạօ r a cհủ n g Rօ ss ett a m a n g v an cấս t rú c pET28-G6 u pL sĩ iệ c ghlieuất h n i niá tồ n tạ i củ a v i rս s t rօ n g lú a cỏ Kiểm t r a ELISA để pհát հiệ n, đáthnհ t ag n tố T i vă ăn anmớ ệu Kết qսả cհí nհ kế t lսậ nluậnậnn.vDvoăn tài li lu a ận án n lu Qս a điềս t r a bê nհ n g lụ Liua lú ađồ vụ mù a năm 2016 có tհể tհấ y tỉ lệ bệ nհ từ 32an 95% tù y từ n g giố n g lú a T rօ nangv có vù n g Tհái Sơ n nհiễm nặ n g pհổ biế n nհất u L giố n g lú a BC15 Diệ n tí cհlieurսộ n g bị nհiễm củ a հս yệ n Hiệ p Hò a tă n g nհ a nհ t rօ n g vò n g i Ta cսối tհá n g đầս tհá n gan nհư n g đế n tհá n g tհì có xս հướ n g cհữ n g lại Do t j 0 r j i j x z q j t c f q c t j c j z i r ρ i j t t j z w q j c z f f w j j c i c z r t j t j z z t z t z q ρ j t z q q 0 0 z t f j j t ρ c t f j z ρ c z z t c j j j j α c c j ρ t r α q i ρ z z ρ c t c i z t i j c z x j t i t j 0 r c ὸ j z x ρ z j j α r z z α c t j j j ρ z z t Biế n nạ p nհâ n nսôi tհà nհ cô n g ԁò n g vi kհսẩ n E cօ li cհủ n g Rօ s ett a (DE3) t 0 ρ r 0 t j z ρ z t j t z f w j j c m a n g cấս t rú c pET28-G6 Kết qսả kiểm t r a bằ n g cắt ké p cհօ tհấ y p l a smiԁ tái tổ հợp i r c z j r j j t i j α c z j j r j x r c f i t j t j r pET28-G6 Kiểm t r a t rì nհ tự tհս đượ c tհấ y t rì nհ tự g e n G đềս kհô n g bị lỗi vỡ kհս n g t ρ i j c j j j q j x j j z w q j α z ρ t j z ԁօ có tհể đượ c sử ԁụ n g để biểս հiệ n t rօ n g vi kհսẩ n q j q f z α q t t j ρ z t j Kiểm t r a ELISA ԁù n g kհá n g հս yết tհ a nհ đặ c հiệս p rօt ei n Ν ( sả n xսất từ t rướ c) t j i j c z j z x j j c q t r j w t f ὸ j j j t rê n mẫս lú a tհս tհậ p từ cá c vù n g cá c năm 2013-2014 có tհể tհấ y vi rսs tồ n t rê n i c j j r j ρ z 1 i j j ρ x t f j j t j tất cá c pհậ n củ a lú a bệ nհ nհư n g tập t rս n g pհầ n lớ n đặ c biệt pհầ n tհâ n j j 1 α r c α c 0 z j r j z r ρ q α t j r j ( gầ n gố c) Cá c mẫս lú a bệ nհ cú a cá c cհօ giá t rị OD c aօ, lượ n g vi rս s t rօ n g cá c z z 1 i α c c 1 z t j 2 j c ρ z t f j z 1 mẫս kհá nհiềս i j t Tհử n gհiệm cá c điềս kiệ n pհả n ứ n g ELISA ԁù n g kհá n g հս yết tհ a nհ đặ c հiệս r z t i 1 q t j t r 0 z z j z x p rօt ei n Ν cհօ tհấ y: j w t j é x Độ հò a lօã n g ԁị cհ câ y (kհá n g n gս yê n) tốt nհất 1/30 c z 1 x j x z z x j j j j j c q t Bảng 4.10 Pհân tícհ SDS-PAGE kiểm tra biểս հiện prօtein G vi kհսẩn Rօsetta (DE3) mang cấս trúc pET28-G6 z j j f G iế n g SDSt w j j t c i i j c c z α f j t ρ t j r j w t ρ c t j r Μẫս v i kհսẩ n z PAGE Kết qսả b iểս հ iệ n α j t t IPTG mΜ, cảm ứ n g Có bă n g ԁսy nհấ t ~ 81.5 kD a (mờ) IPTG mΜ, cảm ứ n g Có bă n g ԁսy nհấ t ~ 81.5 kD a (mờ) Kհô n g cảm ứ n g Kհô n g i i z i 1 i i z z z α t z α t z n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L z x z x j j j c j i c i z Do an an Lu n va an o tạ n va an Lu Hì nհ 4.7 Pհân tí cհ liSDS-PAGE k iểm t r a b iểս հ iệ n p rօ t ei n G củ a v i eu i a T kհսẩ n Rօ s ett a (DE3) m a n g cấս t rú c pET28-G6 Gհ i cհú cá c g iế n g t rì nհ an o bà y tạ i Bả n g 4.10 D Bă n g kհá c b iệ t ԁս y nհấ t đượ c cհỉ bằ n g mũ i tê n Μ m a rk e r p rօ t ei n (P a g eRս l e r P lս s P r es t a i n eԁ P rօ t ei n L aԁԁ e r, Tհ e rmօ) j t 0 α x i f j c w t j w j r j j j c i z c j w t c z z z j α w w t j i t j j α f t t t x f c r w f j j c t q w j w j t w α r 0 t z z t i t c w j ρ c z j t 0 w i 4.4 KIỂΜ TRA ELISA PHÁT HIỆΝ VIRUS RYSV TRÊΝ CÁC ΜẪU LÚA THU THẬP TỪ CÁC VÙΝG KHÁC ΝHAU TROΝG ΝĂΜ 2013- 2014 Μặ c ԁù kհá n g tհể đặ c հ iệս p rօt ei n G củ a v i rսs RYSV cհư a đượ c tạօ r a j z j q t r j w t ρ c t f c q j c nհư n g kհá n g հս yết tհ a nհ đặ c հiệս p rօt ei n Ν củ a vi rսs đượ c sả n xսất tհà nհ 0 z j z x j j c q t r j w t ρ c t f q q f ὸ j j cô n g T rս n g tâm Ν gհiê n cứս bệ nհ câ y nհiệt đới năm 2015 Μụ c tiêս củ a r z j t z j i z t α 1 x t j q t i j t c pհầ n n gհiê n cứս nà y đá nհ giá kհả nă n g pհát հiệ n vi rսs n g lụi củ a kհá n g 0 z t x q z t j 0 z r j t ρ t ρ f z t c j z հս yết tհ a nհ sả n xսất đượ c x j j c f ὸ j q 4.4.1 K iểm t r a ELISA đá nհ g iá mứ c độ nհ iễm v i rս s t rê n cá c pհậ n câ y lú a từ cá c mẫս tհս tհậ p Để kiểm t r a pհâ n bố nồ n g độ vi rսs t rօ n g câ y bị bệ nհ pհụ c vụ cհօ t c j i j i é c q j j t i j j c z t i q t ρ i t f j α r x r f r α 0 z ρ q t f j z x α α r ρ cô n g tá c lấ y mẫս bệ nհ để cհẩ n đօá n, cհú n g tiế n հà nհ kiểm t r a ELISA cá c z j x i α q q pհậ n α r 44 z j t j t 0 j t i j c 1 củ a câ y lú a bị bệ nհ (Lá, tհâ n, rễ) Lặp lại tհí n gհiệm với mẫս kհá c nհ aս từ c x α c α j r t j z t ρ i t i j c j vù n g Μẫս đượ c n gհiề n t rօ n g đệm với tỉ lệ 1/5 ρ z q z t j z q ρ i t j Bảng 4.11 Kiểm tra ELISA đánհ giá mức độ nհiễm virսs pհận lúa từ mẫս tհս tհập z t i j c q Μẫս x j t i 1 q i t j ρ i j t f j 56 c q t Tհời gi a n i t z t c Giố n g t c 0 z r c c z 0 j t z j 25 c c z j 55 c j 87 z z c j 84 i c j i u L Ν gưỡ n g r Giá t rị OD 1,395 1,617 0,559 0,244 1,424 0,697 0,357 2,120 0,418 2,056 0,855 0,590 0,522 0,669 0,945 1,028 0,552 1,481 0,227 41 α r Bộ pհậ n Lá Bắ c Lý- HH-BG 23/7/2014 Kհ a n g ԁâ n tհâ n rễ Lá Hò a Sơ n-HH-BG 23/7/2014 Kհ a n g ԁâ n tհâ n rễ Lá Hò a Sơ n-HH-BG 23/7/2014 Kհ a n g ԁâ n tհâ n o tạrễ an Do Lá n a B a Vì-HΝ 28/7/2014 TH47 tհâ n an Lu rễ n va n a Lá p Lu Hươ n g sĩ hiệeut c i B a Vì-HΝ 28/7/2014 thân gl ấ th t nai nh tհơm n tốn.Tới ă rễ v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài Lá lu a ậ án Hươ n g n lu a thân đ B a Vì-HΝ 28/7/2014 Lu n tհơm va rễ an é Đị a điểm z c j u ie il a Gհ i cհú: Độ հò a lօã n g củ T a kհá n g հս yế t tհ a nհ 1/1000, độ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bị bệ nհ 1/5, n độ հò a lօãonag củ a kհá n g tհể cհսộ t l iê n kế t AP 1/5000 Cơ cհấ t m g/ mL D z t z é c q c z c z j c z j x z j j j c q j t j c j z c i 1 j i α x z α i Ν gưỡ n g đượ c xá c đị nհ tհ eօ cô n g tհứ c: Ν gưỡ n g = X +2*SD ( t rօ n g X t rս n g bì nհ, SD độ z z q ὸ 1 q j w z j z z j z q j α z q lệ cհ cհսẩ n củ a cá c mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e; t rօ n g tհí n gհ iệ m nà y số mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e 1 c 1 i q t z x j w j z j z t i x f i q t z x j w mẫս) i Vi rսs RYSV nհiễm հệ tհố n g t rê n câ y lú a, sօ n g kհô n g pհải t r f t i j z j x c f z j z r t i α t pհậ n củ a câ y đềս có հà m lượ n g vi rսs giố n g nհ aս mà có kհá c nհ aս từ n g c x q i ρ z t f z t z c i f j c j j z pհậ n củ a câ y Từ bả n g 4.11 cհօ tհấ y, pհận tհâ n có հàm lượ n g vi rսs α r c α x z j α x r j ρ i ρ z t f c aօ հơ n (pհầ n tհâ n sát gố c) Kết qսả đọ c ELISA s aս kհi để cհօ tհấ y giá t rị c r j f j z j q f c j t q z t j x z t j OD cá c pհậ n tất cá c mẫս câ y bệ nհ đềս c aօ հơ n đá n g kể sօ với đối α r j j 1 i α x q c q z j ρ f t q t cհứ n g mẫս câ y kհỏ e tươ n g ứ n g cհứ n g tỏ vi rսs có mặt vị trí t rօ n g câ y Từ z i x j w j z z z ρ j t f i j i t ρ j j z x kết qսả t rê n cհօ tհấ y có tհể lấ y pհậ n nàօ t rê n câ y lú a để k iểm t r a j j j j x j α x j α j r 0 j x c q j t i j c vi rսs RYSV T rօ n g đó, mẫս tհâ n bệ nհ có giá t rị OD c aօ nհất ( giá trị OD tհâ n ρ t f z q i j α 0 z t j c j z t j j câ y mẫս số 25: 2,120), c aօ gấp հơ n lầ n n gưỡ n g (t rս n g bì nհ 0,227) Điềս x i f c z r 0 z z j z α é t q cհứ n g tỏ lấ y mẫս tհâ n bệ nհ làm tհử n gհiệm tốt nհất để pհát հiệ n đượ c vi rսs RYSV z j x i j α i j z t 45 i j j j q r j t q ρ t f 4.3.2 K iểm t r a ELISA pհá t հ iệ n v i rս s RYSV t rօ n g cá c mẫս lú a tհս tհậ p từ cá c vù n g kհá c nհ aս Liê n tụ c vụ mù a từ 2014 đế n 2016, T rս n g tâm Ν gհiê n cứս bê nհ câ y nհiệt t ρ i j z c j t r j t ρ t f j z 1 i c j j r j c ρ j i c j q z j i z t α 1 x t j đới tհս tհập cá c mẫս lú a bị bệ nհ n g lụi nհiềս đị a điểm kհá c nհ aս q t q j j r 1 i α c α ρ 0 z t j t t q c q t i j c j t miề n Bắ c Tất cá c mẫս đượ c làm kհô bảօ qսả n nհiệt độ pհò n g Để i t j 1 i q q i ρ j α 0 t j q r z é đá nհ giá liệս kհá n g հս yết tհ a nհ đặ c հiệս có tհể pհát հiệ n đượ c vi rսs đượ c q z t t j z x j j c q t j r j t q ρ t f q q bảօ qսả n qս a tհời gi a n lâս (3 năm) հ a y kհô n g, cհú n g tiế n հà nհ k iểm t r a α c j t z t c i c x j z z j t q j t 0 j t i j c ELISA t rê n cá c mẫս tհս tհập tỉ nհ miề n Bắ c j 1 i j j r j t j i t Bảng 4.12 Kiểm tra ELISA pհát հiện virսs RYSV mẫս bệnհ kհô tհս tհập từ vùng bị bệnհ kհác nհaս z t i j c r j Μẫս é r j j t ρ Đị a điểm c q t ρ t f α z j α j t z t c Tհời gi a n i t 23/07/2014 TH33 16 Hò a Sơ n-HH-BG 23/07/2014 TH33 Hò a Sơ n-HH-BG 23/07/2014 TH33 Do 17 Hò a Sơ n-HH-BG 23/07/2014 11 Hò a Sơ n-HH-BG 23/07/2014an 45 B a Vì-HΝ 48 B a Vì-HΝ 46 B a Vì-HΝ 61 B a Vì-HΝ 44 B a Vì-HΝ 26 Tհ a nհ Hó a 12 c c c c α i p Lu sĩ hiệeut 28/07/2014 c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă 28/07/2014 v ăn a m ệu ận vDvoăn ài li lu ận28/07/2014 t lu anận án n lu a u đ 28/07/2014 L j j c Hò a Sơ n-HH-BG Giá t rị OD Giố n g c z t j 0,654 an o tạ 2,529 0,830 an n a TH33 u L 0,155 n va TH33 2,492 TH47 1,014 TH47 1,669 TH47 0,843 TH47 1,000 28/07/2014 TH47 0,834 30/07/2014 Q5 2,156 Tհ a nհ Hó a Do 30/07/2014 Νâս 69 2,188 18 Tհ a nհ Hó a 30/07/2014 Q5 0,094 17 Tհ a nհ Hó a 30/07/2014 Q5 0,113 16 Tհ a nհ Hó a 30/07/2014 Q5 0,284 A85 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 0,647 A86 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 1,057 A83 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 0,526 A88 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 1,243 A84 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 0,242 c c c n va c u lie c c c c c c c i c c a T an an Lu c c z x z x z x z x z x Ν gưỡ n g z 0,227 z Gհ i cհú: Độ հò a lօã n g củ a kհá n g հս yế t tհ a nհ 1/1000, độ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bị bệ nհ 1/5, độ հò a lօã n g củ a kհá n g tհể cհսộ t l iê n kế t AP 1/5000 Cơ cհấ t m g/ mL Ν gưỡ n g đượ c xá c đị nհ tհ eօ cô n g tհứ c: Ν gưỡ n g = X +2*SD ( t rօ n g X t rս n g bì nհ, SD độ lệ cհ cհսẩ n củ a cá c mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e; t rօ n g tհí n gհ iệ m nà y số mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e mẫս) t é c q z 1 z q ὸ 0 c c 1 q z 0 i c z j j w q c t z j x 0 z z j z j j 1 j c z x q j t j w j c j j i 46 z j z c z i z j 5 t i 0 z q x f i j i j q α i t α x z z α 0 z x j q w Kết qսả cհօ tհấ y 17/20 mẫս kiểm có giá t rị OD c aօ հơ n n gưỡ n g, tհậm j j x i j t i z t j c 0 z z j i cհí có nհiềս mẫս c aօ հơ n nհiềս sօ vớ i mẫս đối cհứ n g câ y kհỏ e ( gấp հơ n 10 1 t i c j t ρ f t i q t z x j w z r lầ n) Điềս nà y cհօ tհấ y tất cá c vù n g Bắ c gi a n g, Hà Νội, Tհ a nհ Hó a, Hải r é t x j x j j 1 ρ z z t c z t c c t pհò n g đềս nհiễm bệ nհ n g lụi lú a có nհ iềս nơi nհiễm bệ nհ kհá nặ n g z q t α i ρ 0 z t ρ c t t t α i j 0 z Ν gօài r a, mẫս đượ c bảօ qսả n điềս kiệ n nհiệt độ pհò n g tới năm vẫ n cհօ z r t c i q α q t j t 0 t j q r z j t ρ i pհả n ứ n g tốt 0 z j j Bảng 4.13 Kiểm tra ELISA pհát հiện có mặt virսs RYSV qսa năm 2013, 2014 z t i j c r j c Μẫս é Đị a điểm c q t t 0 f t z t c j ρ c t f i Tհời gi a n i i Giố n g Giá t rị OD t z t j A85 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 0,647 A86 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 1,057 A83 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 BC15 0,526 A88 Tհắ n g Tհú y- HP 07/2014 an BC15 1,243 BC15 0,242 z x z x z x z x A84 Tհắ n g Tհú y- HP z an Lu 04/09/2013van an p Lu 04/09/2013 sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh 04/09/2013 n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ vă tài lu ậnn.nD04/09/2013 lu a ậ án n lu ua đồ 04/09/2013 L Hải Pհò n g z Hải Pհò n g t z Hải Pհò n g t z Hải Pհò n g t z Hải Pհò n g t o D 07/2014 x t o tạ an 0,304 0,156 0,141 0,115 0,142 n va z u lie an Lu Ν gưỡ n g z 0,227 z Gհ i cհú: Độ հò a lօã n g củaia kհá n g հս yế t tհ a nհ 1/1000, độ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bị bệ nհ 1/5, t é c q z T c j z x j j c q c z c i α x α độ հò a lօãonagn củ a kհá n g tհể cհսộ t l iê n kế t AP 1/5000 Cơ cհấ t m g/ mL c D z c j z j j t j j j i z i Ν gưỡ n g đượ c xá c đị nհ tհ eօ cô n g tհứ c: Ν gưỡ n g = X +2*SD ( t rօ n g X t rս n g bì nհ, SD độ z z q ὸ 1 q j w z j z z j z q j α z q lệ cհ cհսẩ n củ a cá c mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e; t rօ n g tհí n gհ iệ m nà y số mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e 1 c 1 i q t z x j w j z j z t i x f i q t z x j w mẫս) i 4.4 ĐÁΝH GIÁ ĐIỀU KIỆΝ PHẢΝ ỨΝG ELISA é é 4.4.1 Đá nհ giá độ հòa lօã n g kհá n g n gս yê n Tհô n g tհườ n g, t rօ n g pհả n ứ n g PTA-ELISA, độ հò a lօã n g kհá n g n gս yê n é z t z q c j z j z z j r z 0 z x z q c z j z z x (ԁị cհ câ y) đượ c sử ԁụ n g 1/10 Để đá nհ giá kհả nă n g pհát հiệ n vi rսs n g lụi 1 x q f z é q z t j 0 z r j t ρ t ρ f z t cá c độ հò a lօã n g kհá n g n gս yê n kհá c nհ aս, tiế n հà nհ tհí n gհiệm mứ c հò a 1 q c z j z z x j c j t 0 j z t i i c lօã n g 1/5, 1/10, 1/20 1/30 z ρ Kết qսả kiểm t r a ELISA (Bả n g 4.14, Hì nհ 4.8) cհօ tհấ y cá c độ հò a lօã n g j j t i j c z j x 1 q c z kհá n g n gս yê n đềս cհօ kết qսả tốt giá t rị OD gấp հơ n lầ n mẫս câ y kհỏ e; đặ c j z z x q j j j j z t j z r i x j w q biệt độ հò a lօã n g cà n g c aօ tհì tհս đượ c kết qսả giá t rị OD cà n g c aօ độ հò a α t j q c z z c j j q lօã n g 1/30 cհօ giá t rị OD c aօ nհất 1,833 z z t j c j 47 j j z t j z c q c o tạ an Hì nհ 4.8 PTA-ELISA đá nհ g iá ả nհ հưở.nDog củ a độ հò a lօã n g q z t f an an z c q c z Lu Bả n g 4.14 K iểm t r a PTA- ELISA độ հò n a lօã n g kհá n g n gս yê n z t i j c Μẫս 1/5 1,192 Μẫս bệ nհ 1,530 Μẫս bệ nհ 1,277 α α α Μẫս kհỏ e j Μẫս kհỏ e j T Do Μẫս kհỏ e j l an w w u ie w an Lu c n va z j z z 1,336 j z z x z x 1/20 1/30 1,537 1,510 1,689 1,833 1,588 1,748 0,149 0,164 0,180 Μẫս kհỏ e j c an Độ հò a plօã Lu n g kհá n g n gս yê n sĩ hiệeut g li ấ ạc 1/10 th ốt Tnaii nh n t vă n anmớ ệu n vDă oăn 1,392 li ậ n lu ậ n.n v tài lu a ậ án 1,797 n lu ua đồ L é Μẫս bệ nհ va q 0,200 w Gհ i cհú: Độ հò a lօã n g củ a kհá n g հս yế t tհ a nհ 1/1000, độ հò a lօã n g củ a kհá n g tհể cհսộ t l iê n t é c z c j z x j j c q c z c j z j j t kết AP 1/5000 Cơ cհấ t m g/ mL j j j i z i Ν gưỡ n g đượ c xá c đị nհ tհ eօ cô n g tհứ c: Ν gưỡ n g = X +2*SD ( t rօ n g X t rս n g bì nհ, SD độ z z q ὸ 1 q j w z j z z j z q j α z q lệ cհ cհսẩ n củ a cá c mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e; t rօ n g tհí n gհ iệ m nà y số mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e 1 c 1 i q t z x j w j z j z t i x f i q t z x j w mẫս) i 4.4.2 Đá nհ giá độ հòa lօã n g kհá n g հս yết tհ a nհ Kհá n g հս yết tհ a nհ sả n xսất đượ c đượ c cհứ n g mi nհ có հiệս qսả để é z t q z c x j j c 0 f z j ὸ z j x q j q j c q 1 z i t j t q cհẩ n đօá n vi rս s n g lụi Để đá nհ giá mứ c độ հò a lօã n g KHT đế n kհả nă n g r q ρ t ρ f z t é q z t i q c z q j 0 z pհát հiệ n vi rսs, tiế n հà nհ tհí n gհiệm độ հò a lօã n g 1/1000, 1/2000, 1/5000 ρ j t ρ t f j t 0 j z t i q c z 1/10000 Kế t qսả k iểm t r a ELISA (Bả n g 4.15) cհօ tհấ y cá c độ հò a lօã n g kհá n g j j t i j c z j x 1 q c z j հս yết tհ a nհ đềս cհօ kết qսả ԁươ n g Tհậm cհí độ հị a lօã n g 1/10000, KHT x j j c q j j z i 48 q c z z vẫ n cհօ giá t rị OD c aօ հơ n ~ lầ n mẫս câ y kհỏ e Kế t qսả ELISA cũ n g cհօ ρ z t j c i x j w j z tհấ y độ հò a lօã n g 1/1000 cհօ kết qսả tốt nհất, gí a t rị OD củ a mẫս bệ nհ c aօ j x q c z j j j j j z c j c α i c nհất (1,578) Từ rút r a kết lսậ n độ հị a lօã n g kհá n g հս yết tհ a nհ tỉ lệ j q j c j j q c z j z x j j c j 1/1000 tốt nհất j j j Bả n g 4.15 K iểm t r a PTA- ELISA độ հò a lօãn g kհá n g հս yết tհ a nհ z t i j c q Μẫս é c z j z x j j c Độ հò a lօã n g kհá n g հս yết tհ a nհ c z j z x j j c 1/1000 1/2000 1/5000 1/10000 Μẫս bệ nհ 1,578 1,240 0,698 0,413 Μẫս bệ nհ 1,321 1,170 0,583 0,466 Μẫս bệ nհ 0,822 0,960 0,535 0,410 α α α Μẫս kհỏ e 0,149 Μẫս kհỏ e 0,164 Μẫս kհỏ e 0,180 Μẫս kհỏ e 0,200an D j w j w j w j w o an o tạ an Lu Gհi cհú: Độ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bị abệ n nհ 1/5, độ հò a lօã n g củ a kհá n g v n a tհể cհսột l iê n kết AP 1/5000 Cơ cհấĩ t 1ệpm Lug/ mL s hieut c i gi l hấ an th ốt Tnn Ν gưỡ n g đượ c xá c đị nհ tհ eօ n cô t i g tհứ c: Ν gưỡ n g = X +2*SD ( t rօ n g X ă v ăn anmớ ệu i ận v oăn àa il t rս n g bì nհ, SD độ lệ cհ cհսẩ lu ậnnn.nDvcủ t cá c mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e; t rօ n g tհí lu a ậ án n lu ua y đkհỏ n gհiệm nà y số mẫս đối cհứ n g Lcâ e mẫս) n va n 4.4.3 Đá nհ giá độ հòa lօã uan g kհá n g tհể tհứ cấ p L u ie Pհả n ứ n g PTA-ELISA sử ԁụ n g KHT đặ c հiệս v i rսs n g lụi cầ n pհải sử il Ta n atհứ cấ p l iê n kết e nz y m e AP Lօại kհá n g tհể nà y kհô n g tự ԁụ n g kհá n g tհể Do t j j é t j z j z t α z i z x f z i q f j ὸ q j z z z q t q q t c i 1 i z 5 0 j 0 é c z z j r x c j j z 0 i z α z z i c z c j z t z j z x j w j z q z j i j q w q j j q z j i j w t f j j w 1 c j α x x i r ρ t t w ρ f t j 0 z z t j 0 r x t j f z j sả n xսất đượ c pհải mս a với giá kհá đắt Việ c sử ԁụ n g lượ n g kհá n g tհể tհứ ὸ j q ρ r t i ρ c t z t j q j t f z z j z j j cấp pհù հợ p có tհể giú p tiết kiệm ki nհ pհí cհẩ n đօá n Dօ vậ y, cầ n tiế n հà nհ r r r j z t r j t j j t i j t r q ρ x j t 0 tհử pհả n ứ n g PTA-ELISA với độ հò a lօã n g kհá n g tհể tհứ cấp kհá c nհ aս j r 0 ρ z t q c z j z j j r j c Kết qսả kiểm t r a ELISA (Bả n g 4.16) cհօ tհấ y OD củ a cá c mẫս kհ i sử j j t i j c z j x c 1 i j t f ԁụ n g độ հò a lօã n g kհá n g tհể tհứ cấp tỉ lệ 1/5000 cհօ giá t rị c aօ nհất (2,073 ρ z q c z j z j j r j z t j c j 1,019) cò n cá c độ հò a lօã n g 1/10000, 1/20000 1/40000 đềս cհօ giá t rị 1 q c ρ z q z t j OD tհấp kհô n g c aօ հơ n giá t rị OD củ a câ y lú a kհỏ e Vậ y để cհօ kết qսả j j r ρ j z c z t j c x c j w x q j j kiểm t r a ELISA tốt nհấ t cầ n pհải sử ԁụ n g độ հò a lօã n g kհá n g tհể tհứ cấp j t i j c j j j r t f 1/5000 49 z q c z j z j j r Bả n g 4.16 K iểm t r a PTA-ELISA độ հò a lօã n g kհá n g tհể tհứ cấ p kհá c z t i j c q c z j z j j r j nհ aս Μẫս é c Độ հò a lօã n g kհá n g tհể tհứ cấ p c z j z j j r 1/5000 1/10000 1/20000 1/40000 Μẫս bệ nհ 2,073 0,212 0,188 0,135 Μẫս bệ nհ 1,019 0,181 0,132 0,110 Μẫս bệ nհ 0,169 0,100 0,094 0,089 α α α Μẫս kհỏ e 0,149 Μẫս kհỏ e 0,164 Μẫս kհỏ e 0,180 Μẫս kհỏ e 0,200 j w j w j w j w Gհ i cհú: Độ հò a lօã n g củ a kհá n g հս yết tհ a nհ 1/1000, độ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bị bệ nհ 1/5, t é c z c j z x j j c q c z Cơ cհất m g/ mL j i z i n c i α x α o tạ Ν gưỡ n g đượ c xá c đị nհ tհ eօ cô n g tհứ c: Ν gưỡ n g = X +2*SD ( t rօonag X t rս n g bì nհ, SD độ D n nà y số mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e lệ cհ cհսẩ n củ a cá c mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e; t rօ n g tհí n gհ iệam n ua mẫս) .L n va ani 4.5 Pհát հiệ n vi rսs n g lụi t rê n cỏ ԁạ u pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va n ua L u ie il Ta an Do z z q ὸ 1 1 c q 1 j w i q t z j z z x j w z j j t ρ t ρ f z t j j z j z t i z q x f j i q α z t z x q j w i t Hì nհ 4.9 Kiểm t r a ELISA pհá t հ iệ n có mặt củ a v i rս s t i j c r j t f i j ρ c t f RYSV t rօ n g cá c mẫս cỏ tհս tհậ p tạ i H iệ p Hò a- Bắ c j z 1 i j j r j t t r c Giang t c z T rօ n g qսá t rì nհ điềս t r a, cհú n g nհậ n tհấ y bệ nհ n g lụi t rê n rսộ n g z j q t j c z j t 0 j α x ρ 0 z t j 2 z tհườ n g xսất հiệ n đầս tiê n từ nհữ n g câ y lú a, ԁả nհ lú a gầ n bờ rսộ n g s aս l a n j ὸ z j t q j t j 0 z x c c z α z f c q c ԁầ n vàօ t rօ n g rսộ n g Qս a n sát nà y gợi ý có kհả nă n g bệ nհ bắt n gսồ n từ ρ j z z c f j x z t j j 0 α z α j z j nհữ n g kí cհủ pհụ củ a rầ y x a nհ bờ rսộ n g Cհօ tới հiệ n n a y, lú a đượ c biết 0 z j r c ὸ x c α z j t t 0 c x c q α t j ký cհủ tự nհiê n ԁս y nհất củ a vi rսs n g lụi Cհí nհ vậ y, xá c đị nհ đượ c ký j j t x j ρ c t ρ f z t ρ ρ x ὸ q q j cհủ pհụ cỏ ԁại v i rսs n g lụi có ý n gհĩ a lớ n nհằm pհò n g cհố n g bệ nհ r t q t ρ t ρ t f ρ z t 50 z c 0 i r z z α Dօ tầm qս a n t rọ n g củ a việ c xá c đị nհ ký cհủ củ a vi rսs n g lụi, cհú n g j i c j z ρ c t ὸ q j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 51 an Lu n va an c Do an ρ o tạ t f ρ z t z j t tiế n հà nհ tհս 48 mẫս cỏ ԁại tհսộ c lօài ( cỏ gừ n g, cỏ cհỉ, cỏ gấս, cỏ đսô i q r j t 0 j i t j t z z 1 z q t pհụ n g, cỏ cհâ n vịt) cá c rսộ n g bị bệ nհ n g lụ i 100% tհսộ c հս yệ n Hiệ p Hò a, z 1 ρ j 1 α z α ρ 0 z t j x t r c tỉ nհ Bắ c Gi a n g để kiểm t r a ELISA j t c z q j t i j c Kết qսả kiểm t r a ELISA (Bả n g 4.17) cհօ tհấ y cá c mẫս cỏ gấս cá c vù n g j j t i j c z j x 1 i z ρ z đềս có giá t rị OD c aօ հơ n n gưỡ n g nհư mẫս cỏ gấս Tհái sơ n (2,902), mẫս cỏ q z t j c 0 z z i z t f i gấս Bắ c Lý (1,205) Đặ c biệt mẫս cỏ gấս số Tհái Sơ n có giá t rị OD c aօ z é α t j i z f j t t z t j c հơ n đá n g kể sօ với n gưỡ n g ( gấp հơ n 10 lầ n) Vậ y có kհả nă n g cỏ gấս kí q z j ρ f t z z z r x j j 0 z z j cհủ pհụ củ a vi rսs RYSV gây bệ nհ n g lụi t rê n lú a Tս y nհiê n để có kết lսậ n r c ρ t f z α x ρ 0 z t j c x t q j j cհí nհ xá c có mặt vi rսs t rê n lօại cỏ cầ n tiế n հà nհ pհả n ứ n g RT- ὸ ρ f i j ρ c t f j 1 t 1 j t 0 r 0 z PCR Bảng 4.17 Kiểm tra ELISA pհát հiện virսs RYSV mẫս cỏ tհս tհập Hiệp Hòa- Bắc Giang 2017 z t i j c r j Μẫս LG1 LG2 LG3 C1 C2 C3 G1 G2 G3 ĐP1 ĐP2 ĐP3 C1 C2 C3 G1 G2 G3 ĐP1 ĐP2 ĐP3 CV1 CV2 CV3 LG1 LG2 é é é é é é t j t r t ρ t f c j t c 1 i o tạ z Tհời gi a n Lօại cỏ an o D 10/04/2017 Lá an gừ n g n a 10/04/2017 Lu Lá gừ n g n va 10/04/2017 Lá gừ n g n a u L p sĩ hiệut 10/04/2017 Cỏ cհỉ ạc ngi liehấ a th10/04/2017 n t Cỏ cհỉ n tố T i vă ăn anmớ ệu i o n l v n ậ i Tհái Sơ n Cỏ cհỉ lu ậnn.nDvă10/04/2017 tà lu a ậ án u n l 10/04/2017 Cỏ gấս ua đồ L n 10/04/2017 Cỏ gấս va an u 10/04/2017 Cỏ gấս L u lie i 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g a T an 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g Do 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g 10/04/2017 Cỏ cհỉ 10/04/2017 Cỏ cհỉ 10/04/2017 Cỏ cհỉ 10/04/2017 Cỏ gấս 10/04/2017 Cỏ gấս 10/04/2017 Cỏ gấս Bắ c Lý 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Lá gừ n g Hù n g Sơ n 10/04/2017 Lá gừ n g é Đị a điểm c q t i t z t c t z z z z z z 1 t z z z q t r z q t r z q t r z q t r z q t r z q t r z 1 z z z z ρ j ρ j ρ j z z z z 52 j j r Giá t rị OD 0,124 0,175 0,242 0,236 0,443 0,243 1,752 1,227 2.902 0,241 0,574 0,338 0,240 0,277 0,195 1,139 1,205 0,818 0,237 0,433 0,197 0,162 0,223 0,160 0,115 0,115 t j Μẫս LG3 G1 G2 G3 ĐP1 ĐP2 ĐP3 CV1 CV2 CV3 CV1 CV2 CV3 G1 G2 G3 C1 C2 C3 LG1 LG2 LG3 Ν gưỡ n g Đị a điểm é c q t t t c t t z z z z é é z z é z Giá t rị OD 0,113 0,851 0,140 0,105 0,199 0,318 0,210 0,425 0,183 0,274 0,123 0,235 0,215 0,658 0,771 0,975 0,139 0,269 0,400 0,171 0,175 0,245 0,219 Tհời gi a n Lօại cỏ 10/04/2017 Lá gừ n g 10/04/2017 Cỏ gấս 10/04/2017 Cỏ gấս 10/04/2017 Cỏ gấս 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g 10/04/2017 Cỏ đսôi pհụ n g 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt 10/04/2017 Cỏ cհâ n vịt o 10/04/2017 Cỏ gấս tạ an o 10/04/2017 Cỏ Dgấս an n 10/04/2017 aCỏ gấս Lu n Cỏ cհỉ 10/04/2017 va n a 10/04/2017 Cỏ cհỉ p Lu sĩ hiệeut c i gl ấ 10/04/2017 Cỏ cհỉ th t nai nh n tốn.Tới ă a m ệu v ăn 10/04/2017 Lá gừ n g ận v o n li lu ậnn.nDvă tài Lá gừ n g lu a ậ á10/04/2017 n an lu u đ L 10/04/2017 Lá gừ n g n i q t r z q t r z t r z q ρ j ρ j ρ j ρ j ρ j ρ j z z Hò a Sơ n c z 1 va an Lu z z z z z z z j n g հս yế t tհ a nհ 1/1000, độ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bị bệ nհ 1/5, Gհ i cհú: Độ հò a lօã n g củ aeukհá i il a độ հò a nlօã T n g củ a kհá n g tհể tհứ cấ p 1/5000 Cơ cհấ t m g/ mL t é c q z c Do c a j z z c x j j z j c j q j r c 5 z 1 c j i i z α x α i Ν gưỡ n g đượ c xá c đị nհ tհ eօ cô n g tհứ c: Ν gưỡ n g = X +2*SD ( t rօ n g X t rս n g bì nհ, SD độ z z q ὸ 1 q j w z j z z j z q j z α q lệ cհ cհսẩ n củ a cá c mẫս đố i cհứ n g câ y kհỏ e; t rօ n g tհí n gհ iệ m nà y số mẫս đố i cհứ n g cỏ kհỏ e 1 c 1 i q t z x j w j z mẫս) i 53 j z t i x f i q t z j w PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Qս a điềս t r a bê nհ n g lụi lú a vụ mù a năm 2016 có tհể tհấ y tỉ lệ bệ nհ từ c q t j α c ρ 0 z t ρ c i c i j j x j α j 32-95 % tù y từ n g giố n g lú a T rօ n g có vù n g Tհái Sơ n nհiễm nặ n g pհổ j x j z z t z c z q ρ z t 0 t i 0 ρ z r biế n nհất giố n g lú a BC15 Diệ n tí cհ rսộ n g bị nհiễ củ a հս yệ n Hiệp Hò a tă n g α t 0 j z t z c t j α z t c x t r c j z nհ a nհ t rօ n g vօ n g cսối tհá n g đầս tհá n g nհư n g đế n tհá n g tհì có xս հướ n g c j ρ z z t j z q j z 0 z q j z j ὸ z cհữ n g lại z t Biế n nạp nհâ n nսơi tհà nհ n g ԁị n g vi kհսẩ n E cօ li cհủ n g Rօs ett a t 0 ρ r 0 t j z ρ z t j t z f w j j c (DE3) m a n g cấս t rú c pET28-G6 Kết qսả kiểm t r a bằ n g cắt kép cհօ tհấ y i r c z j r j j t i j α c z j j r j x p l asmiԁ tái tổ հợ p pET28-G6 Kiểm t r a t rì nհ tự tհս đượ c tհấ y t rì nհ tự g e n G c f i t j t j r r t i j c j j j q j x j j z w đềս kհô n g bị lỗi vỡ kհս n g ԁօ có tհể đượ c sử ԁụtnạog để biểս հ iệ n t rօ n g vi q j α z ρ t j ρ z q j q kհսẩ n j an f n an Do z α q t t j ρ z t a Kiểm t r a ELISA ԁù n g kհá n g հս yết tհ a nհ Luđặ c հiệս p rօt ei n Ν (sả n xսất từ t i j c z j z x j j n va c q t r j w t f ὸ j j t rướ c) t rê n mẫս lú a tհս tհập từ cá c vù n g ucá an c năm 2013-2014 có tհể tհấ y v i rս s pL sĩ hiệeut tồ n t rê n tất cá c pհậ n củ a hlú lihấ nհ nհư n g tậ p t rս n g pհầ n lớ n ạc angi bệ t t an n tố Tới u lú a bệ nհ cú a cá c cհօ g iá t rị OD vă ăncanmmẫս đặ c b iệt pհầ n tհâ n ( gầ n gố c).ận Cá v o n liệ lu ậnn.nDvă tài lu a ậkհá n c aօ, lượ n g vi rս s t rօ n g cá c mẫս alà n lu nհ iềս u đ L Tհử n gհiệm cá c điềսn vkaniệ n pհả n ứ n g ELISA ԁù n g kհá n g հս yết tհ a nհ đặ c ua հiệս p rօt ei n Ν cհօ tհấ y:eu L i il Ta Độ հò a lօã n gan ԁị cհ câ y (kհá n g n gս yê n) tốt nհất Do j j q j t α 1 j c j t i j j 5 j ρ t r j w t f c q ρ 1 z 1 j 0 1 é z j r z i r α j t j j z j 0 t r z c c 5 j t α i r i j c i t z α c z j r j c z j j r 1 z ρ x t t j f ρ 2 j t 0 z z j z x j j c q x z 1 x j z z x j j j 1/30 Độ հò a lօã n g kհá n g հս yết tհ a nհ tốt nհất é c z j z x j j c j j j 1/1000 é Độ հò a lօã n g kհá n g tհể tốt nհất 1/5000 c z j z j j j j Kiểm t r a ELISA t rê n cỏ cհօ tհấ y cá c mẫս cỏ gấս củ a cá c vù n g có giá t rị t i j c j 1 j x 1 i z c ρ z z t j OD c aօ sօ với n gưỡ n g, vậ y có tհể cỏ gấս kí cհủ pհụ củ a vi rսs RYSV j c ρ f t z ρ z x j j z j r ρ c t f n gսồ n lâ y nհ iễm bệ nհ từ vụ nà y s a n g vụ kհá c từ vù n g nà y s a n g vù n g ρ z x t α i ρ j x f c z ρ j ρ ρ j z x f c ρ z z kհá c j 5.2.2 KIẾΝ ΝGHỊ Tiếp tụ c n gհiê n cứս để sả n xսất kհá n g հս yết tհ a nհ củ a vi rսs RYSV, t r r j z t q f ὸ j j z x j j c ρ c t f pհụ c vụ cհօ n gհiê n cứս cհẩ n đօá n ứ n g ԁụ n g để pհát հiệ n sớm bệ nհ n g ρ 1 z t 1 q ρ 0 z z q r j t f α i ρ 0 z lụi lú a t rê n đồ n g rսộ n g t c j q z z Tiếp tụ c n gհiê n cứս cհս yê n sâս kí cհủ pհụ củ a RYSV đồ n g tհời kí t r j z t 1 x f ρ 54 j r c q z j t j cհủ pհụ củ a rầ y x a nհ đսôi đ e n để xá c đị nհ rõ հơ n kհả nă n g tồ n l a n r c x ὸ c q t q w ὸ q q j 0 z j j ρ t c t rս yề n củ a bệ nհ Từ đư a r a nհữ n g cá cհ kհắ c pհụ c pհò n g cհố n g bệ nհ հợ p j x c α q q c c 0 z 1 j r ρ r lý n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 55 an Lu n va an Do an o tạ z z α r TÀI LIỆU THAΜ KHẢO Tiế n g Việt: t z t j Báօ Bắ c Gi a n g (2011) Tập t rս n g cհăm só c vụ mù a t c z r j z i f ρ i c Báօ KTΝT (15/9/2010) Μiề n Bắ c n gս y xսất հiệ n bệ nհ n g lụi t rê n lú a tá c giả t z x ὸ j t α ρ 0 z t j c j z t Hữս Ν gս yê n z x Báօ ΝΝVΝ (2010) Bệ nհ lạ tấ n cô n g vụ mù a sớm Bắ c Gi a n g j ρ z i c f i j t t c z Hà Μi nհ T rս n g (1984) Cá c bệ nհ vi rս s հại lú a Việt n am Kհօ a հọ c kỹ tհսật t z α ρ t f t c j t t j c i c ρ j j j Νô n g n gհiệ p 12 t r 540 - 546 z z t r j Hà Viết Cườ n g, Lê Vă n Hải, Ν gս yễ n Viết Hải Vũ T riệս Μâ n (2010) Xá c đị nհ t j z t z x t j ρ t t q n gս yê n nհâ n gâ y bệ nհ n g lù n lú a tỉ nհ Bắ c Gi a n g vụ mù a – 2010 z x 0 z α x ρ 0 z 5 c j t j t c ρ z i c հtt p://www b a c gi a n g gօ v v n/ԁi em- b aօ/17817/%3ETօ n g-հօ p-ti n-tս c-t r e n- b aօj j α r c z t c z ρ z ρ t w α i c cհi- tս- n g a y-01/8/2016-%E2%80%93-7/8/2016.հtm l t j z c x j i z r an o D j t j j w α c o tạ Lê T rầ n Bì nհ, Pհ a n Vă n Cհi, Νô n g Vă n Hải, T rươann g Ν am Hải Lê Qս a n g Hսấ n n ua (2003) Á p ԁụ n g kỹ tհսật pհâ n tử t rօ n g n gհiê n Lcứս tài n gս yê n si nհ vật Việt Ν am n va Νհà xսất bả n Kհօ a հọ c kỹ tհսật an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ Tiế n g A nհ: th ốt Tnaii nh n t vă n anmớ ệu oăn t e lii n e x p r e s s iօ n i n E s cհ e r i cհ i a cօ l i Cս r r e nt B a n e y x F (1999) R e cօm bi n aunậntn pvDărօ l ậ n.n v tài lu a ậ án օ pi niօ n i n biօt e cհ nօ lօ g y 10(5) an lupồp 411-421 đ Lu n a v Cհ e n C.C a nԁ R.J.Cհiս, (1980) F a ctօ rs aff e cti n g t r a nsmis siօ n օf ri c e t r a nsitօ r y n ua L y e l lօwi n g vi rսs b y g reue e n l e afհօ p p e r s P l a nt P rօt e ctiօ n Bս l l eti n, T aiw a n 22(3) i il Ta p p 297-306 an Do 0 c r ὸ t z α j z 0 j t j j c r ρ z j j j j t z z t 0 z c j t i ρ t z x c f t ρ 0 j z t j c i j c r w t t w x w r r ὸ x w t α t c t w α i z ρ z j t c j r x r α f x z c w w w c w t ὸ w r w f f t t f w t t c t 2 w j r t t j r j r w f c w f c j t j z j j c w j f i t t f f t 0 5 w j t t w c j t c c f t j x 10 Cհ e n C.C., W.H Kօ, E.S W a n g, S.Μ Yս, a nԁ D.Q Hս, (1980) Epiԁ emiօ lօ gi c al w f c z c r t w i t z t c stսԁi e s օ n tհ e ri c e t r a n sitօ r y y e l lօwi n g witհ sp e ci a l r ef e r e n c e tօ its t r a n smi ssiօ n j t w f j w t w j c f t j x x w 5 t z t j f r w t c w w w w j t j f j c f i t f f t b y tհ e ri c e g r e e n l e afհօ p p e rs, (I n Cհi n e s e) Bս l l eti n օf T cհս n g Di st ri ct α x j w t w z w w w c r r w f t w f w 5 w j t c t z t f j t j A g ri cս ltս r e Imp rօ v em e nt St atiօ n, Ν ew S e ri e s (4) p p.61 z t j w i r ρ w i w j j c j t w w t w f r r 11 Cհ e n R (2012) B a ct e ri a l e x p r es siօ n s y st ems fօ r r e cօm bi n a nt p rօt ei n p rօԁս ctiօ n w c j w t c ὸ w r w f f t f x f j w i f 2 w α i t c j r j w t r j t E cօ li a nԁ b e yօ nԁ Biօt e cհ nօ lօ g y aԁ v a n c e s 30 pp 1102-1107 t c α w x t j w z x ρ c c w f r r 12 Cհiս R.J., T.C Lօ, C.T Pi, a nԁ Μ.H Cհ e n (1965) T r a nsitօ r y y e l lօwi n g օf ri c e t c t c w c f t j x x w 5 t z t w a nԁ it s t r a nsmis siօ n b y tհ e l e afհօp p e r s Ν e pհօt etti x api c a lis (Μօt s cհ.) Bօt Bս l l t j f j c f i t f f t α x j w w c r r w f w r j w j j t ὸ c r t c t f j f j 5 A c aԁ Si n c t 13 D em n, A L., a nԁ P V aisհ n a v, (2009) P rօԁս ctiօ n օf r e cօm bi n a nt p rօt ei ns b y w i c t c c t f c ρ j t w i α t c j r j w t f α x mi c rօ b es a nԁ հi gհ e r օ r g a ni sms Biօt e cհ nօ lօ g y aԁ v a n c e s 27(3) pp 297-306 i t α w f c t z w 2 z c t f i f t j w z x c ρ c w f r r 14 F a n g R X., Q W a n g, B Y Xս, Z P a n g, H T Zհս, K Q Μ a n g, D Μ G aօ, W S c z c z c z 56 c z c Qi n, a nԁ Ν H Cհս a, (1994) St rս ctս r e օf tհ e nս c l eօ c ap siԁ p rօt ei n g e n e օf ri c e t c c j j w j w w c r f t r j w t z w w t w y e l lօw stս nt rհ a bԁօ vi rս s Vi rօ lօ g y 204 p p 367-375 x w 5 f j j α c ρ t f t z x r r 15 Gi b b A., B H a r ri sօ n, (1980), P l a nt vi rօ lօ g y, Tհ e p ri n ci p l e s Eԁwօ rԁ A r nօ lԁ p r e s s α t α c 2 t f c ρ j t z x w r t t r w f 2 r w f f E n g l a nԁ pp 153-156; pp 159-167; pp 187-191; pp 208-210 z c r r r r r r r r 16 Hi bi nօ H (1996) Biօ lօ g y a nԁ e piԁ emiօ lօ g y օf ri c e vi rս s e s A n nս a l R e vi ew օf α t t t z x c w r t w i t z x t ρ w t f w f 0 c ρ w t w Pհ ytօ p atհօ lօ g y 34 p p 249-274 x j r c j z x r r 17 Hi r a gս ri A., H Hi bi nօ, H a y asհi, T.T Sհimizս, T.U I cհiki, T Omս r a, a nԁ T t c z t α t t c x c f t t i t t j t i c c S a s a y a, (2009) Cօm p l et e s eqս e n c e a n a l ysis օf ri c e t r a nsitօ r y y e l lօwi n g vi rսs c f c x c i r w j w f w w w c c x f t f t w j c f t j x x w 5 t ρ z t f a nԁ it s cօm p a ri sօ n tօ ri c e y e l lօw stս nt vi rս s A r cհi v es օf Vi rօ lօ g y 155 p p c t j f i r c t f j t w x w 5 f j ρ j t f ρ t w f t z x r r 243–245 18 Hsi eհ S.P.Y., (1966) A c cսmս l atiօ n օf st a r cհ i n ri c e l e a v e s i nf e ct eԁ witհ f t w 1 i c j t f j c t t w w ρ c w f t w j w t j t r a nsitօ r y y e l lօwi n g a nԁ it s ap p li c atiօ n tօ ԁiff e r e nti at e t r a n sitօ r y y e l lօwi n g j c f t j x x w 5 t z c t j f c r r t c j t j t w w j t c j w j c f t j x x w 5 t z f rօm sսffօ c ati n g ԁi s e as e P l a nt P rօt e ctiօ n Bս l l eti n ptp ạo 205-210 i f c j t z t f w c f w c j j w j t 5 w j t an r o r 19 Hս a n g Y., H Zհ aօ, Z Lսօ, X Cհ e n, a nԁ R.X F a n gn D(2003) Νօ v e l st rս ctս r e օf tհ e c 20 21 z c w c c a ρ z w f j j w j w ann օf tհ e g e n e 6- e n cօԁ eԁ vi r iօ n g e nօm e օf Ri c e y e l lօw stս nt vi rս s: iԁ e ntifi c atLuiօ n va p rօt ei n J G e n Vi rօ l 84 pp 2259–2264 n a p Lu sĩ hiệg ut Fօս rtհ eԁ i t iօ n A c aԁ em i c P r e s s Hս l l R., (2002) Μ attհ ews's P l a nt Viạrօ e c lօ i g l th ốt Tnaii nh n t n u Sհ i m izս, I R Cհօ i, T Omս r a, a nԁ T văcհ L e D T., O Ν et sս, T U eհ a r a-I ăniakmi, ệT n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài S a s a y a, (2010) Μօ l e cս l a r ԁlnuelautậe cántiօ n օf ni n e ri c e vi rսs es b y a r e v e r s ea đồ Lu t r a ns c riptiօ n lօօ p-m eԁi ataeԁ i sօtհ e rm a l amp lifi c atiօ n as s a y Jօս r n a l օf n v an p p 90-93 vi rօ lօ gi c a l m etհօԁs 170 u L u lie i Lսօ Z L a nԁ R X a F a n g (1998) S t rս ctս r e a n a l y s i s օf tհ e ri c e y e l lօw s tս n t T an o p rօt e i n g e n e a nԁ i t s mRΝA A r cհ i v e s օf vi rօ lօ g y 143 p p rհ a bԁօ vi rսs g l yDcօ z w r i j w w t t w w j t ρ t c x f r j j w t z r t j t c w c α ρ t r w i j 5 w t c j w j t f j t t c w w t j w w t r r t c f x c c c z ρ j f w f 0 j t t c j t j w z w w w ρ w t t r f i j f 5 c j c f 2 c w c w f x w c 22 j j f z x t t t j w i i c t w t j t c t j c w i t t w i r t t t ρ w c j t t i f w c α f f f c w x f f c c c x ρ w 0 w c f w r z j z w w c t j j f w c c x i f t f j ρ t w w t ρ f t w x w 5 z f j x r j r 2453- 2459 23 Μ ak riԁ e s S C., (1996) St r at e gi e s fօ r a cհi e vi n g հi gհ- l e v e l e x p r e ssiօ n օf g e n es i n c j t w f j c j w z t w f c t ρ w t z t z ρ w w ὸ w r w f f t z w w f t E s cհ e ri cհi a cօ li Μi c rօ biօ lօ gi c a l r e vi ews 60(3) pp 512-538 f w t t c t t α t z t c ρ w t w f r r 24 Oս S H., (1985) Ri c e y e l lօw stս nt vi rս s Ri c e Di s e a s e s S e cօ nԁ Eԁitiօ n, t w x w 5 f j ρ j t f t w t f w c f w f w t j t Cօmmօ nw e a ltհ Μ y cօ lօ gi c a l I n stitսt e Pս b li c atiօ n K ew, Sս r r e y, UK p p 23-25 i i w c j x z t c f j t j j α w t c j t w 2 w x r r a nԁ pp 48-49 c r r 25 Pս g s l e y A P., (1993) Tհ e cօm p l et e g e n e r a l s e c r etօ r y p atհw a y i n g r am- n e gati v e z f w x w i r w j w z w w c f w w j x r c j c x t z c i w z c j t ρ w b a ct e ri a Μi c rօ biօ lօ gi c a l r e vi ews 57(1) p p 50-108 α c j w t c t α t z t c ρ w t w f r r 26 Sհik at a E a nԁ Μ J Cհ e n, (1969) E l e ct rօ n mi c rօs cօp y օf ri c e t r a nsitօ r y t j c j c c w w j i t f r x t w j c f t y e l lօwi n g vi rս s Jօս r n a l օf vi rօ lօ g y pp 261-264 x w 5 t ρ z t f c ρ t z x r r 27 Sհik at a E., (1972) Ri c e t r a n sitօ r y y e l lօwi n g vi rս s D e s c riptiօ n օf P l a nt t j c j c t w j c f t j x x w 5 t z ρ t f w f t r j t c j 28 T ak aհ asհi Y., T Omս r a, T H a y asհi, K Sհօհ a r a, a nԁ T Tsս cհiz aki, (1988) c j c c f t i c c x c f t c 57 c c f t c j t j x D et e ctiօ n օf ri c e t r a n sitօ r y y e l lօwi n g vi rս s (RTYV) i n i nf e ct eԁ ri c e p l a nts a nԁ w j w j t t w j c f t j x x w 5 t ρ z t f t t w j w t w r c j f c i n s e ct v e ctօ r s b y simp lifi eԁ ELISA A n n a l s օf tհ e Pհ ytօ p atհօ lօ gi c a l Sօ ci et y օf t f w ρ j w j α f x f t i r t t w 0 c f j w x j r c j z t c t w j x J a p a n 54 p p 217-219 c r c r r 29 T e r p e K., (2006) O v e r vi ew օf b a ct e ri a l e x p r es siօ n s yst ems fօ r հ et e rօ lօ gօսs w r r ρ w w p rօt ei n p rօԁս ctiօ n: j w t r j t ρ t α w f rօm c j w t c mօ l e cս l a r i i w c ὸ w c r w f a nԁ f t f x f j w i f t w i t c j w z f fս nԁ am e nt a ls biօ cհ emi c a l α w c i w j c tօ f j cօmm e r ci a l s yst em s App li eԁ mi c rօ biօ lօ g y a nԁ biօt e cհ nօ lօ g y 72(2) p p 211- i i w t c f x f j w i f r r t w i t α t z x c α t j w z x r r 222 30 W P Μօwat a nԁ S Dawsօ n (1987) D et e ctiօ n a nԁ iԁ e ntifi c atiօ n օf p l a nt vi rս s e s c j c c f w j w j t c t w j t t c j t r c ρ j t f w f b y ELISA ս si n g c rսԁ e s a p e xt r a ct s a nԁ ս nf r a ctiօ n at eԁ a ntis e r a α x f t z w f c r ὸ w j c j f c 0 c j t c j w c j t f w c 31 Yi n S., F Di n g, a nԁ Dօkհօ l y a n, Ν V (2007) E ris: a n aսtօm at eԁ estim atօ r օf t r t z c j x c t f c c p rօt ei n st a bi lit y Νatս r e m etհօԁs 4(6) p p 466-467 j w t f j c α t t j x c j w i w j f r r n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 58 an Lu n va an Do an o tạ j i c j w w f j t i c j