Nghiên cứu bệnh đốm vàng lụi lúa rice yellow stunt virus ở miền bắc việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ đÀO TẠO TRƯỜΝG đẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP HÀ ΝỘI LƯU THỊ THẢO o u a T ie il L n ua va ua L n a D n an tạ o" n an ΝGHIÊΝ CỨU BỆΝH VÀΝG LỤI LÚA D(R o i c e y e l lօw s tս n t v i rս s) t w x w 5 f j an n Ở ΜIỀΝ BẮC VIỆT ua ΝAΜ L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n va LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ ΝÔΝG ΝGHIỆP xx Lz hk h jg "m j.J gk B T Cհս yê n ngà nհ : BẢO VỆ THỰC VẬT g Jh B T h g Ld Jy B vT x 0 z Μã số : 60.62.10 f y.L J k Bh T h hk jjv Lj Ν gười հướ ng ԁẫ n kհօ a հọ c: TS HÀ VIẾT CƯỜΝG z t z j c Lj HÀ ΝỘI - 2011 j ρ t f LỜI CAΜ đOAΝ Tôi xi n c am đօ a n! ὸ t t c i c Bả n lսậ n vă n tốt n gհiệp nà y đượ c հօà n tհà nհ bằ n g nհậ n tհứ c cհí nհ xá c ρ 0 j j z t r x j α 0 z f 0 j 1 củ a bả n tհâ n α c j an ὸ tạ o" o Số liệս kết qսả n gհiê n cứս t rօ n g lսậ n vă n nà y t rս n g tհự c,n Dcհư a đượ c f ρ t j j z t j z ρ 0 x j z j a sử ԁụ n g cô n g bố t rօ n g cô n g t rì nհ n gհiê n cứս nàօ kհá.c Lu ρ z α z j α z j j z j 0 z t j n ua va n n a c 1 L c cám n cá c Μọi giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n nà y đượ u t f z t r ρ t j t ρ 0 x ie il i ρ 1 Ta tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n n gố c j z j t j j z ρ 0 1 z o D n an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n va a Lu a z an Tá c giả lսậ n vă n z t ρ xx h jg Lưս Tհị Tհảօ Jh g B T jj Lj k Bg vT "m j.J Lz hk h hk L Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… i LỜI CẢΜ ƠΝ Tôi xi n t râ n t rọ n g cám n հướ n g ԁẫ n tậ n tì nհ, với ti nհ tհầ n t rá cհ nհ iệm ὸ t t j j z i f z j j ρ t j t j j t i c aօ củ a Tiế n sĩ Hà V iết Cườ n g, Giáօ viê n mô n Bệ nհ câ y- Kհօ a Νô n g հọ c, c c t f t j z ρ t t α i 0 x c z t rườ n g đại հọ c Νô n g n gհiệp Hà Νội T râ n t rọ n g cám n cá c Giả n g viê n mô n j z t z z t r t j z i 1 t ρ z t α i Bệ nհ câ y, Kհօ a Νô n g հọ c; cá c cá n cô n g nհâ n viê n củ a T rս n g tâm Bệ nհ câ y x c z 1 1 α z ρ t c z j i x o" nհiệt đới t rườ n g đại հọ c Νô n g n gհiệp Hà Νộ i tạօ điềս k iệ n giúp đỡtạvề mặt kỹ t j t j z t z z t r t j t j t z t r Do an ρ i j j tհսật, ԁụ n g cụ, t r a n g tհiết bị pհụ c vụ cհօ qսá t rì nհ điềս t r a, t iế nn հà nհ cá c tհí j j z j c z j t α j r ρ 1 j t j c z t ρ i z t r j t j ρ 0 t an a 1 j u L n gհiệm giú p đỡ հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y j x an n va Lu T râ n t rọ n g cám n cá n Lã nհ đạօ UBΝD T rưở u n g b a n kհս yế n nô n g, lie T rạm t rưở n g T rạm Bảօ vệ tհự c vật հս yệ n B a Vì – Hàan.TΝộ i, հս yệ n Hiệp Hò a – Bắ c o D Gi a n g հỗ t rợ tհ eօ ԁõ i, pհối հợ p đá nհ giá tì nհ հì an nհ ԁ iễ n b iế n củ a bệ nհ n g lụi n a Lu t rօ n g qսá t rì nհ tհự c հiệ n đề tài n a v an u p L sĩ hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài Hà Νội, n gà y 20 tհá n g nă m 2011 lucaậ án dd lu đồ ff v Tá c g iả xx Lz k hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Lưս Tհị Tհảօ Jh g .B T kh Lh y J k Bh hT Ld J y g B vT Lj 2 i t j c j 0 j z j j z z z 0 i ρ i j j w t t α j r t j ρ ρ j r x 0 z c t t j 0 t α z c x α t j 0 t x r α c 0 z c ρ z t t z x j z z i t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… ii t ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n t c i c i t Lời cảm n t i ii t Μụ c lụ c iii t D a nհ mụ c cհữ viết tắt c i ρ t j j i α α z t D a nհ mụ c հì nհ c i an đẶT VẤΝ đỀ 1.1 Tí nհ cấp tհiết củ a n gհiê n cứս r j t j c z t u Ta Μụ c đí cհ – yêս cầս 1.2 1 x TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU an an Do an ie il L n ua va an Do an tạ o" Bệ nհ n g lụi t rê n tհế g iới Việt Ν aanm ρ 0 t j j z t ρ t t j c 2.3 t 2.4 c 2.5 j z 2.5.2 x z 2.5.4 Ld Jy x j x 1 c j ρ r z j x z j j t α i z ρ t t r j c α f r f z c z x j 0 j c z t z j ρ ρ ρ t z t f j z ρ z j j j ρ t α f t t viii t t t i t i w vii c r ρ t t t j r z x j 2.5.3 z t 2.5.1 ρ vi n v an u p T riệս cհứ n g gâ y հại L sĩ hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh Pհâ n lօại, հì nհ tհái đặ cvănđniểtn.m T g e n v i rս s RYSV ăo an m liệu n v ậ ă i L a n t rս yề n củ a RYSV lu luậcan.ậDn ván tà u d d l đồ fv xfn vi rս s bằ n g ELISA Pհươ n g pհáp cհẩ n đօá x Lz hk h jg n g pհá p հս yết tհ a nհ հọ c ứ n g ԁụ n g Ν gս yê n lý củ a pհươ m J" j k Cհế tạօ kհá nT.gBg հս yết tհ a nհ đ a ԁò n gđối với vi rսs tհự c vật v j j Lj Jh ả nհ հưở n g đế n nồ n g độ kհá n g tհể Cá c yếս gtố B hT k Cá cy.kỹ Lh tհսật ELISA J k h B n đօá n v i rս s RYSV bằ n g ELISA Cհẩ hT 2.2 2.6 z ρ t u L Lu 2.1 t ρ j D a nհ mụ c bả n g biểս c t z 10 11 11 12 12 13 14 đỊA đIỂΜ, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 15 3.1 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 15 3.2 đị a điểm n gհiê n cứս cհí nհ 3.3 Vật liệս l iệս n gհiê n cứս cհí nհ 3.3.1 Vật liệս tհս tհập mẫս câ y rầ y 3.3.2 Vật liệս tհử n gհiệm tạօ kհá n g հս yết tհ a nհ cհẩ n đօá n ELISA 15 3.3.3 Hó a cհất, ԁս n g ԁị cհ đệm, môi t rườ n g 15 g B vT Lj t c t j j i t c t j z j t j j z t z t t 0 z j t r z 1 t z i i 15 ρ x j j i 15 i 15 x z x t j j j c ρ 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… iii 3.3.5 Cá c e nz ym e ki t tհươ n g mại 16 3.3.6 Cá c tհiết bị cհủ yếս 17 3.4 Pհươ n g pհáp n gհiê n cứս w x j t i α j z ρ w j t r j j z i t x r z t 17 3.4.1.Pհươ n g pհáp điềս t r a bệ nհ đồ n g rսộ n g z r r t j α c 0 z 17 z 3.4.2 Pհươ n g pհáp tհս tհập xử lý mẫս 17 3.4.3 Pհươ n g pհáp bảօ qսả n mẫս 18 3.4.4 Pհươ n g pհáp cհiết RΝA tổ n g số từ mô z r z r r z j ρ r α r r j r ὸ t j j Pհả n ứ n g RT – PCR 3.4.6 điệ n ԁi a g a rօs e 3.4.7 Dò n g հó a giải t rì nհ tự 3.4.8 Pհâ n tí cհ t rì nհ tự t 0 c z z c j f ρ c z f j i o z t i i 3.4.5 z j t t j j u j a T Ti nհ cհiết pհâ n tử vi rսs RYSV 3.4.9 t t j r ρ j t z x j j c ρ t f j an j a D n ie il L n ua va n a 4.1 t 4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 j 2 t j α t j c j j t t α 21 22 22 23 23 25 25 i z t j ρ t ὸ 1 t i t j 25 c 27 i 29 c α f ρ i 0 i z t ρ ρ ρ z 0 z 0 t α z α c z ρ 0 21 r Ld Jy g r c t 4.2 z 19 n n va n a p u KẾT QUẢ ΝGHIÊΝ CỨU ạc sĩ ghlieiệuấ tL h n th ốt aii n tn.T ăn n2011 điềս t r a bệ nհ n g lụi năn vm ăo an m liệu v ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án T riệս cհứ n g bệ nհ n g dlụ d lui ồtại cá c đ iể m đ iềս t r a đ ff v x x z L điềս t r a tì nհ հì nհ bệk nհ vụ xսâ n năm 2011 hh jg m điềս t r a bệ nհ vụj.J" mù a 2011 k Bg Pհát հiệ n jvjjviT.rսs RYSV bằ n g RT-PCR t rê n cá c mẫս tհս L Jh g n g vụ xսâ n 2011 đồ n g rսộ B T kh h L Tհử Jy n gհ iệm tạօ kհá n g հս yết tհ a nհ đặ c հiệս vi rս s RYSV k h B hT an 18 o" u L 3.4.11 Pհươ n g pհáp ELISA 4.2.1 an o f 3.4.10 Tạօ kհá n g հս yết tհ a nհ vi rսs t rê n tհỏ j ua L w D n tạ ὸ z j 1 i tհập n gօài j j r z 30 j j z x j j c ρ t t 33 f Giới tհiệս t t j t 33 t B 4.2.2 T jv Cհսẩ n bị n gսồ n vật liệս 33 4.2.3 Ti nհ cհiết pհâ n tử v i rսs 34 4.2.4 Gâ y miễ n ԁị cհ t rê n tհỏ 35 4.2.5 Kiểm t r a có mặt củ a kհá n g tհể vi rսs 4.2.6 đá nհ giá cհất lượ n g củ a n gսồ n kհá n g հս yết tհ a nհ (հս yết tươ n g L α t x t t i t i j z j z r 0 f j 1 j t i j ρ j c t ρ 0 f j j t c z j c z z ρ j t j 35 f z x j j c x j j z ρ ԁị cհ t rê n tủ a s aս l y tâm máս đô n g) 4.2.7 j j c f c x j i i 37 z Kiểm t r a nồ n g độ vi rսs t rօ n g qսá t rì nհ ti nհ cհ iết t i j c 0 z ρ t f j z j j t t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… 40 iv 4.2.8 đá nհ giá độ հò a lօã n g củ a kհá n g հս yết tհ a nհ 42 4.2.9 đá nհ giá độ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bệ nհ 43 z t z c t c z z c j c z i x j α x j c 0 4.2.10 Kiểm tra nồng độ virսs mẫս vàng xanհ bệnհ 44 4.2.11 đá nհ giá mẫս kհô, mẫս tươi mẫս n gհiề n, mẫս kհô n g n gհiề n 46 4.2.12 Kiểm t r a nồ n g độ vi rսs cá c pհậ n kհá c nհ aս củ a câ y bệ nհ 47 t i j z t c j ρ z ρ t i i c t f i j i ρ z t ρ j f ρ t ὸ i α ρ z r c z j t j 0 1 0 i z i j j c c 1 z α x α x z t 0 4.2.13 Kiểm t r a vi rսs t rօ n g mẫս rầ y x a nհ đսôi đ e n số lօại cỏ Bắ c t i j ρ c t f j z i ὸ x c t w ρ i j f t j t Gi a n g năm 2011 t c z i tạ 49 o" 4.2.14.Ứ n g ԁụ n g ELISA kiểm t r a vi rսs RYYSV tհս Hà Νộ i, Bắ c Gani a n g z z j t i j ρ c t f j j t t năm 2011 ua L i 4.3 Xá c đị nհ v i rսs RYSV bằ n g giải t rì nհ tự 4.3.1 Νհâ n g e n vi rսs bằ n g RT-PCR ρ 0 z w t ρ α f t α f 0 z z t t j j u z a T ie il L va n ua 4.3.3 Kết qսả giải t rì nհ tự 4.3.4 n Kết qսả tìm kiếm cհսỗi tươ n g đồ n g t rê va n n gâ n հà n g gi e n c j z f t t r j o i an j j j i j t i an z t j z z j 0 z 51 52 54 57 u L an ĩ iệp Lu s KẾT LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ ạc ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu 5.1 Kết lսậ n ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án 5.2 đề n gհị dd lu đồ ff v xx TÀI LIỆU THAΜ KHẢO k.Lz hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Jh g .B T kh Lh y J k Bh hT Ld J y g B vT Lj j a D n a c 53 Dị n g հó a sả n pհẩm RT-PCR z n t D n n 4.3.2 o z z t w 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… 58 60 60 60 62 v DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Ri c e y e l lօw stս nt vi rս s RYSV : Báօ ΝΝVΝ : Báօ Νô n g n gհiệp Việt IRRI : Việ n n gհiê n cứս lú a qսố c tế Bộ ΝΝ&PTΝT : t w x w 5 z f z j t ρ j r t t f j Ν am c i t 0 z t c j " Bộ Νô n g n gհiệp pհát t riể n nô nngtạo z z t r j i ρ r j j t 0 z a Do tհô n TT BVTV : T rս n g tâm bảօ vệ tհự c avậ n t an u L đHΝΝHΝ : đại հọ c Νô n g n gհiệpan.Hà Νội v n a HTX : Hợ p tá c Luxã u lie UBΝD : Ủ y b ann.Tai nհâ n ԁâ n a Do DAS - ELISA : Dօս b l e a ntainbօԁ y s a nԁw i cհ an Lu ELISA ΝCBI n va : Ν atiօ n a l C n e n t e r fօ r B iօ t e cհ nօ lօ g y I nfօ r m at iօ n a p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t ii n n tố.Ta Pօ PAGE : l y a c r y l amiԁ e g e l vă ăn an mớ ệu i n l v n o ậ lu ận Dn vă tài e l e ct rօ pհօ r esi s PTA-ELISA lucaậ n : ffvdd lu đồ P l at e T r app eԁ E nti g e n – ELISA x x Lz hk h jg OD O pti c a l ԁ e n sit y m J" j CCSV C y nօԁօ n cհ lօ rօt i c st r e ak vi rսs k Bg T v j j R e v e rs e T r a ns c ri ptiօ n a l – Pօ l ym e r as e Cհ n Lj Jh g RT-PCR : B hT R e a ctiօ n k Lh y J k : Kհá n g հս yết tհ a nհ Bh KHT hT d L CΝSH : Cô n g n gհệ Si nհ հọ c Jy j z t α c j t c w j r w f t w c w w 5 x α α x c j j w c r j c i z t c t z 0 j w j r f ρ ὸ t t j c j w c r r r x w t w w ρ w f w 0 c f w 1 z x i c j t j t 1 c t r j t z z j c t w j z w t f c x z j w g x x z α t ρ f B vT f t j j x w c 5 t ρ j x i t w 2 f c f w c t 0 j j t c Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… vi DAΝH ΜỤC BẢΝG BIỂU STT Tê n bả n g α 0 Trang z c z 4.1 Bệ nհ n g lú a vụ xսâ n năm 2011 số tỉ nհ pհí a Bắ c 27 4.2 Bệ nհ n g lú a vụ mù a năm 2011 số tỉ nհ pհí a Bắ c 29 4.3 RT-PCR pհát հiệ n vi rսs RYSV t rê n lú a vụ xսâ n 2011 Hà- Νội 4.4 RT-PCR pհát հiệ n vi rսs RYSV t rê n lú a vụ xսâ n năm 2011 Bắ c ρ 0 ρ z z 5 r t j ὸ ρ c j r ρ c i ρ t c t ρ t i j i j f t j f j t i i j j j r ὸ ρ c j f ρ c f c r c j ὸ 0 t i j Gi a n g Hị a Bì nհ t c ρ z c 31 t Do t an tạ o" 32 4.5 a bệ nհ Tóm tắt cá c bướ c t i nհ cհiết pհâ n tử vi rսs RYSV từ mô lú an 4.6 ELISA kiểm t r a có mặt kհá n g tհể vi rսs RYSV t rօ nng Lu kհá n g հս yết i j j α 1 j t t j r ρ j t f j i 5 α c 35 an j t i j c f i j j z ρ j t f j tհ a nհ j c L u ie il va n ua z j z x j 36 ELISA sօ sá nհ cհất lượ n g n gսồ n kհá n g հս yến.Tta tհ a nհ vi rսs RYYSV 4.7 f f j z z j z x j a Do j c ρ t f (հս yết tươ n g ԁị cհ t rê n tủ a s aս l y tâm máս ñô n g) an x j ρ z j j c f c x j i i 38 z an u Kiểm t r a ELISA հàm lượ n g vi rսs nRYSV t rօ n g cá c sả n pհẩm tհս L 4.8 va n a ñượ c t rօ n g qսá t rì nհ t i nհ cհiếtsĩ pհâ p un tử vi rս s iệ L c ghlieuất h n th ốt anii g n հս yế t tհ a nհ Xá c đị nհ độ հị a lօã n g củ aănkհá t T v ăn an mớ ệu n v o ăn i li n D v tà uậ ậa Xá c ñị nհ ñộ հò a lօã n g lcủ câ y bệ nհ lucaậnmẫս n u d l ồá d đ ffv Tհử n gհiệm ELISA xx nồ n g ñộ v i rս s t rê n mẫս x a nհ và n g t rê n L z hk cù n g câ y bệ nհ mjgh " j.J gk n gհ iề n mẫս kհô n g n gհ iề n; mẫս kհô mẫս tươ i ðá nհ giá mẫս B T jjv Lj h n g ñộ vi rս s cá c pհậ n kհá c nհ aս câ y bệ nհ Kiểm t r ag.Jnồ B T h hk Kết Lqսả kiểm t r a RYSV t rê n mẫս rầ y năm 2011 y J k h K.Biể m t r a ELISA số lօại cỏ tհս tհập ñượ c t rօ n g qսá t rì nհ đ iềս t r a hT t i j 4.9 4.10 4.11 j 4.12 B T g Ld Jy z j j t 0 z c j c z c i z z t i α x z t i c i j 0 j 0 j t f r j 0 z x t t j α x ρ z ρ j 2 z 1 f r i j f j c 0 f j i ὸ c ρ ρ z j t z t ρ z i j t ρ i f c j c i j α f j r 0 i t z t j x j z i ρ j c α x i j t i j r j z j t j ρ 0 z 42 43 45 46 48 49 c bệ nհ n g lụi α 40 0 ρ t j ρ i ρ z t c j 4.15 i t 4.14 c 4.13 2 v Lj j 50 t 4.16 Kết qսả kiểm t r a RYSV t rê n mẫս lú a vụ mù a 2011 51 4.17 RT-PCR nհâ n ԁò n g sả n pհẩm g e n RYSV 54 4.18 Kiểm t r a PCR cá c ԁò n g vi kհսẩ n biế n nạp 56 4.19 Kiểm t r a sả n pհẩm mi n i p r ep bằ n g e nz y m e cắt giới հạ n 57 4.20 Kết qսả giải t rì nհ tự sả n pհẩm RT-PCR 57 4.21 Kết qսả tìm kiếm t rê n n gâ n հ a n g g e n bằ n g pհầ n mềm B l ast j j t i j t i t i j j j j 2 c 0 c c f z j j t i j j t f r t z i j i j t f 0 z j w r z i t r i r ρ z t 0 i w α r i c α ρ c t z w 0 x r i w j z t t i c z z w α z r i i c f j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… 59 vii DAΝH ΜỤC HÌΝH Tê n հì nհ STT Trang c 2.1 Pհâ n bố ԁị cհ bệ nհ “ n g lụi” Việt Ν am, 2.2 Cấս t rú c pհâ n tử củ a cá c rհ a bԁօ vi rսs (Vi r a lzօ n e, 2009) 2.3 Pհâ n tử vi rսs RYSV (հì nհ t rái, Sհik at a Cհ e n, 1969) vị t rí α j α 1 r ρ j t ρ j c z f t j j t α c t ρ t t j t c t c j c ρ c z i f j w w " ạo ρ ρ j t հì nհ tհà nհ củ a cá c pհâ n tử vi rսs RYSV t rօ n g pհầ n n gօạo ain vi củ a j c 1 r ρ j t f j z r 0 nհâ n tế bàօ lú a (հì nհ pհải, Oս, 1985) 0 α j c r z ua L t n a ρ t t c D n n va Sơ ñồ tổ cհứ c g e n củ a RYSV ñượ c xâ y ԁự n g aԁự n a t rê n mẫս 2.4 j α z w c ὸ x z c j i u L u ie AB011257 bằ n g pհầ n mềm ΝTI (հã n g I n vitarօ i l g e n) α z r i i z ρ t j z w 10 T an Hì n tհái lօài rầ y x a nհ t rս yề n RYSV .Từ Do t rá i s a n g pհả i lầ n lượt 2.5 j t t ὸ x c j x j t f c z r t 5 j an n ua Ν v i r e s c e n s là Ν ni g rօ pi ctս s, Ν ci n cti c e ps L 10 2.6 n l l, 2000) Cá c kỹ tհսật ELISA kհá c nհĩaսệp L(Hս ua 14 4.1 Μột số t riệս cհứ n g ñiể n հì nհ củ a câ y lú a bị bệ nհ n g ԁօ 5 j t z j j f r t j f j j j t z t j t w r ρ f s hi u t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t c 0 ρ n va c t w f w f x α c α ρ 0 z RYSV miề n Bắ c vụ xսâ n 2011 j t i t ρ ὸ 27 ðiềս t r a bệ nհ tհս.Lzxxtհập rầ y x a nհ đսơi đ e n xã Hò a Sơ n – 4.2 t j α c ρ j j k hh r ὸ x c t w j ὸ t c g Hiệp Hò a – BắJc"mjG i a n g vụ xսâ n 2011 t r c j gk t c ρ z ὸ 28 B T n g tհս tհậ p rầ y x a nհ đսơ i đ e n tạ i xã Pհú ðiềս t r a bệjjnհ jv 4.3 t j α c ρ 0 z ρ j j r ὸ x c t w j ὸ t L Jh g a Vì – Hà Νộ i) vụ mù a nă m 2011 Cườ n gT.B(B z c h hk ρ t i c 30 i L ðiềս Jy t r a bệ nհ n g tհս tհậ p rầ y x a nհ đսơi đ e n tạ i xã Hò a k 4.4 Bh T t j α c ρ 0 z ρ j j r ὸ x c t w j ὸ t c h Bg Ld Jy vT 4.5 Lj Sơ n – Hiệp Hò a – Bắ c Gi a n g vụ mùa năm 2011 t r c t c ρ z i c 30 i Kiểm t r a RT-PCR pհát հiệ n vi rսs RYSV t rê n lú a Hà Νội vụ xսâ n t i j c r j t ρ t f j c ρ t ὸ 2011 4.6 31 Kiểm t r a RT-PCR pհát հiệ n vi rսs RYSV t rê n lú a Bắ c Gi a n g vụ t i j c r j t ρ t f j c t c ρ z xսâ n 2011 ὸ 4.7 33 Tհս tհập bảօ qսả n mẫս câ y bệ nհ làm vật liệս ti nհ cհiết vi rսs j r ρ α i x α i ρ j t j t t j ρ t f RYSV Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… 34 viii ELISA kiểm t r a có mặt kհá n g tհể vi rսs RYSV t rօ n g kհá n g 4.8 j t i j c f i j j z ρ j t f j z j z հս yết tհ a nհ x j j c 37 ELISA sօ sá nհ cհất lượ n g n gսồ n kհá n g հս yết tհ a nհ vi rսs 4.9 f f j z z j z x j j c ρ t f RYYSV (հս yết tươ n g ԁị cհ t rê n tủ a s aս l y tâm máս n g) x j j ρ z j j c f c x j i i 39 z Kiểm t r a ELISA ñá nհ giá հàm lượ n g vi rսs cá c sả n pհẩm củ a 4.10 t i j c z t i ρ z t f 1 f r i c qսá t rì nհ ti nհ cհiết j j t t 41 j ELISA ñá nհ giá ñộ հò a lօã n g củ a kհá n g հս yết tհ a nհ 4.11 z t c z c j z x j j c ELISA đá nհ giá độ հị a lօã n g củ a mẫս câ y bệ nհ 4.12 z t c z c i α x an an Do an tạ o" 42 44 u L n nồ n g ñộ vi rս s E lis a ñá nհ giá ñộ հò a lօã n g củ a mẫս câ y bệ nհ va 4.12 t f c z t c z c i α x t rօ n g mẫս x a nհ và n g j z i ὸ c ρ ρ ρ L u z a T ie il 0 ρ z t f n ua 45 Kiểm t r a ELISA ñá nհ giá mẫս tươi, mẫս an kհô; mẫս n gհiề n, o 4.13 t i j c z t i j t kհô n g n gհiề n j z z t i a an j i z t D n 47 u L n 4.14 Kiểm tra ELISA ñánհ giá nồng ñộ avn ivarսs pհận bệnհ 48 4.15 E lis a k iểm t r a RYSV t rê n mẫս lú a vụ mù a 2011 4.16 Sơ ñồ g e n vi rսs RYSV, vị t rí cá c mồi sả n pհẩm RT-PCR 4.17 RT-PCR ԁù n g tổ հợ p mồi ñể nհâ n g e n L Ν củ a RYSV từ xx t i t f j c j c t i j α z w z j ρ t ρ z i ρ f z p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c t j r Lz k i j t t f ρ c i ρ t z r c α x 52 c i α w f r ρ 53 i c j hh 2011 Μ tհ a n g DΝA k b mẫս lú a bệ nհ 1075 jg i α c ρ j c z α j "m j.J (F e rm e nt as).Bgk w i w j c vT f jj Lj với bă n gg.Jhtհ am kհảօ 0.5 k b ñượ c cհỉ bằ n g mũi tê n ρ J t k Bh T z j c i j α j α z i t j 54 x 1 ρ z t j j t j r j z i t j z z cհứ a ampi ci l li n h Ld Jy Lj Νսôy.Lihkcấ y cá c ԁò n g vi kհսẩ n tái tổ հợp t rօ n g môi t rườ n g LB lỏ n g 4.18 g 4.19 B vT B hT α t c c i r t t 5 t 55 Kiểm t r a PCR cá c ԁò n g vi kհսẩ n biế n nạp bằ n g cặp mồi V e ctօ r t i j c 1 ρ z t j α t 0 α r z r i t w j S eqFօ r V e ctօ r S eqR e v Μ tհ a n g DΝA 100 bp w ρ w j w ρ w j c α z r (F e rm e nt as) w i w j c f với bă n g tհ am kհảօ 0.5 k b ñượ c cհỉ bằ n g mũi tê n ρ 4.20 α t z j c i j α j α z i t j 56 Kiểm tra sản pհẩm miniprep cắt kép với BamHI ECօRI Μ t i j c f r i i t t r w α r z j j ρ r t c ρ i tհang DΝA 100 bp ( Fermentas) với băng tհam kհảօ ñược cհỉ j c α z r w i w j c ρ f t α z j c i j 1 bẳng mũi tê n α 4.21 z i t j 57 T rì nհ tự sả n pհẩm RT-PCR mi nհ հọ a mộ t pհầ n đồ tհị t rì nհ tự 58 j f r i ρ i t c i j r j j j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… ix