Đánh giá độc tính cấp của cao chiết từ lá cây sầu đâu ăn lá (azadirachta indica jus f ) trồng tại an giang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ PHAN HUỲNH NGỌC XUÂN ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY SẦU ĐÂU ĂN LÁ (Azadirachta indica Jus F.) TRỒNG TẠI AN GIANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cần Thơ – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ PHAN HUỲNH NGỌC XUÂN ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY SẦU ĐÂU ĂN LÁ (Azadirachta indica Jus F.) TRỒNG TẠI AN GIANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS DƯƠNG XUÂN CHỮ ThS TRẦN YÊN HẢO Cần Thơ – 2018 LỜI CÁM ƠN Lời đầu tiên, em xin gửi lịng kính trọng lời cám ơn sâu sắc đến Thầy PGS TS Dương Xuân Chữ, người thầy hết lòng quan tâm, động viên, giúp đỡ tận tình hướng dẫn em suốt thời gian thực luận văn Thầy dành nhiều thời gian, tâm huyết nhẫn nại để truyền đạt cho em kinh nghiệm kiến thức quý báu, cho em lời khuyên hữu ích tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt luận văn Em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến Cô ThS Trần Yên Hảo, Cô TS Nguyễn Thị Thu Trâm, Cô ThS Nguyễn Thị Trang Đài, Cô ThS Trần Hoàng Yến, Thầy ThS BS Nguyễn Văn Luân quan tâm, giúp đỡ, tận tình hướng dẫn tạo điều kiện cho em hoàn thành tốt luận văn Em xin chân thành cám ơn quý Thầy Cô Liên môn Dược lý - Dược lâm sàng, Bộ mơn Hóa – Khoa Khoa học bản, Liên môn Dược Liệu - Thực vật dược - Dược cổ truyền, Bộ môn Bào chế - Công nghiệp dược giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian thực luận văn Cám ơn bạn lớp Dược B K39, đặc biệt bạn Vũ, Vân, Thư, Linh, Trinh, bạn chung nhóm đề tài Sầu đâu – Thoảng, Châu, Nguyệt bạn làm đề tài mơn Hóa Dược, Dược lý, Dược liệu, Kiểm nghiệm bên cạnh giúp đỡ, ủng hộ động viên giai đoạn khó khăn sống suốt trình làm luận văn Cuối lời, xin cám ơn Cha Mẹ nhà lo lắng, chăm sóc, chỗ dựa, nguồn động lực để vững bước đường học vấn Em xin chúc q Thầy Cơ dồi sức khỏe hồn thành tốt cơng tác Một lần nữa, xin chân thành cám ơn tất người LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình khảo sát nghiên cứu riêng tơi, kết luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu trước Cần Thơ, ngày 14 tháng 06 năm 2018 Sinh viên ký tên Phan Huỳnh Ngọc Xuân i MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ v ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Sầu đâu 1.1.1 Tên gọi .3 1.1.2 Phân loại thực vật 1.1.3 Mô tả 1.1.4 Phân bố sinh thái 1.1.5 Bộ phận dùng công dụng 1.1.6 Thành phần hóa học 1.1.7 Tác dụng dược lý .6 1.1.8 Các nghiên cứu độc tính Sầu đâu giới 1.2 Nghiên cứu độc tính cấp 10 1.2.1 Một số định nghĩa 10 1.2.2 Ý nghĩa việc xác định LD50 .11 1.2.3 Các trường hợp không xác định LD50 12 1.2.4 Nguyên tắc thử độc tính cấp 12 1.2.5 Cách tính LD50 14 1.3 Các thông số cần theo dõi .14 1.3.1 Theo dõi tổng trạng 14 1.3.2 Các số huyết học 15 1.3.3 Các số hóa sinh máu 19 ii 1.3.4 Xét nghiệm đại thể vi thể 22 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 Đối tượng, hóa chất thiết bị nghiên cứu 23 2.1.1 Động vật thí nghiệm 23 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.3 Hóa chất 24 2.1.4 Trang thiết bị, dụng cụ thí nghiệm 25 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 2.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp cao chiết từ Sầu đâu cách xác định LD50 25 2.2.2 Các tiêu đánh giá độc tính cấp cao chiết từ Sầu đâu .28 2.2.3 Phân tích kết thống kê 32 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Kết xác định LD50 cao chiết từ Sầu đâu (LSĐ) .33 3.2 Kết khảo sát độc tính cấp cao chiết từ Sầu đâu (LSĐ) 34 3.2.1 Thay đổi tổng trạng chuột thí nghiệm .34 3.2.2 Kết xét nghiệm huyết học 38 3.2.3 Kết xét nghiệm hóa sinh 41 3.2.4 Kết giải phẫu mô học gan, thận 42 Chương BÀN LUẬN 47 4.1 Xác định LD50 cao chiết từ Sầu đâu .47 4.2 Khảo sát độc tính cấp cao chiết từ Sầu đâu 48 4.2.1 Sự thay đổi tổng trạng chuột nhắt trắng 48 4.2.3 Sự thay đổi số huyết học .50 4.2.4 Sự thay đổi số hóa sinh 50 4.2.5 Sự thay đổi mô học 53 KẾT LUẬN 54 KIẾN NGHỊ .55 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT LD50: Lethal dose 50% – Liều làm chết 50% số vật thí nghiệm RBC: Red blood cell – Số lượng hồng cầu HGB: Hemoglobin HCT: Hematocrit WBC: White blood cell – Số lượng bạch cầu NEU: Neutrophil – Bạch cầu đa nhân trung tính EOS: Eosinophil – Bạch cầu ưa acid BASO: Basophil – Bạch cầu ưa base LYM: Lymphocyte – Bạch cầu lympho MONO: Monocyte – Bạch cầu mono PLT: Platelet – Tiểu cầu AST: Aspartat aminotransferase ALT: Alanin aminotransferase IR: Tia hồng ngoại LSĐ: Lá Sầu đâu iv DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Ứng dụng y học Sầu đâu .5 Bảng 1.2 Chức loại bạch cầu .17 Bảng 1.3 Các số huyết học chuột nhắt 18 Bảng 1.4 Phân loại enzym gan 19 Bảng 1.5 Giá trị hóa sinh lâm sàng chuột nhắt .22 Bảng 3.1 Kết thăm dò liều ban đầu 33 Bảng 3.2 Tỷ lệ chuột chết thử nghiệm độc tính cấp cao chiết Sầu đâu liều 12000mg/Kg thể trọng chuột .33 Bảng 3.3 Trọng lượng chuột trước thử nghiệm 24 giờ, 72 sau thử nghiệm.34 Bảng 3.4 Số ô di chuyển trước thử nghiệm 24 giờ, 72 sau thử nghiệm .35 Bảng 3.5 Số lần vận động bất thường trước thử nghiệm 24 giờ, 72 sau thử nghiệm .36 Bảng 3.6 Thời gian chuột bám quay trước thử nghiệm 24 giờ, 72 sau thử nghiệm 37 Bảng 3.7 Kết xét nghiệm hemoglobin hematocrit lô thử nghiệm 39 Bảng 3.8 Thành phần bạch cầu lô sau thử nghiệm .40 Bảng 3.9 Kết hàm lượng enzym gan AST, ALT lô thử nghiệm 41 Bảng 3.10 Kết creatinin huyết thanh, urê máu lô thử nghiệm .41 v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 2.1 Kết sắc ký lớp mỏng 24 Hình 2.2 Mơ hình môi trường mở (Open field test) 29 Hình 2.3 Mơ hình quay Rota-rod 31 Hình 3.1 Biểu đồ biểu diễn thay đổi trọng lượng chuột sau 24 giờ, 72 so với trước thử nghiệm 33 Hình 3.2 Biểu đồ biểu diễn thay đổi số ô di chuyển chuột sau 24 giờ, 72 so với trước thử nghiệm 35 Hình 3.3 Biểu đồ biểu diễn thay đổi số lần vận động bất thường chuột sau 24 giờ, 72 so với trước thử nghiệm .36 Hình 3.4 Biểu đồ biểu diễn thay đổi thời gian chuột bám quay sau 24 giờ, 72 so với trước thử nghiệm 37 Hình 3.5 Kết xét nghiệm số lượng hồng cầu (RBC) lô thử nghiệm 38 Hình 3.6 Kết xét nghiệm số lượng bạch cầu (WBC) lơ thử nghiệm 39 Hình 3.7 Kết xét nghiệm số lượng tiểu cầu (PLT) lơ thử nghiệm .40 Hình 3.8 Kết glucose huyết lô thử nghiệm 42 Hình 3.9 Trọng lượng gan tương đối lơ thử nghiệm 43 Hình 3.10 Hình đại thể gan lơ thử nghiệm 44 Hình 3.11 Hình đại thể thận lô thử nghiệm 44 Hình 3.12 Hình vi thể gan lô chứng nước .45 Hình 3.13 Hình vi thể gan lơ chứng tween 45 Hình 3.14 Hình vi thể gan lơ uống cao LSĐ 45 Hình 3.15 Hình vi thể thận lô chứng nước 46 Hình 3.16 Hình vi thể thận lơ chứng tween 46 Hình 3.17 Hình vi thể thận lơ uống cao LSĐ 46 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam đất nước có nguồn tài nguyên thực vật nói chung tài nguyên dược liệu nói riêng đa dạng, phong phú Từ xa xưa, nhân dân ta biết sử dụng thuốc dân gian từ lồi thân thuộc quanh Ngày nay, xu hướng sử dụng sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên phòng điều trị bệnh ngày phát triển Tuy nhiên, việc sử dụng thuốc từ dược liệu nước ta chủ yếu dựa vào kinh nghiệm, chưa có chứng khoa học rõ ràng; với tâm lý thuốc từ dược liệu rẻ tiền, dễ sử dụng, tác dụng phụ chưa có nhiều nghiên cứu độ an tồn, độc tính thuốc Sầu đâu ăn (gọi tắt Sầu đâu, tên khoa học Azadirachta indica Jus F.) có nguồn gốc từ Ấn Độ, biết đến loại “thần dược trị bách bệnh” Sầu đâu xuất nhiều thuốc cổ truyền với nhiều công dụng như: trị bệnh da, sốt rét, trị giun, diệt sâu bọ, ký sinh trùng, làm răng, giảm căng thẳng, mệt mỏi,… [16], [25], [21] Sau đó, tác dụng dược lý Sầu đâu như: kháng khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, chống oxy hóa, hạ đường huyết, trị ung thư, trị sốt rét,… [20], [32] chứng minh qua cơng trình nghiên cứu nhiều nhà khoa học giới Tại An Giang, Sầu đâu biết đến loại nguyên liệu chế biến ăn đặc sản Người dân địa phương khai thác đọt Sầu đâu để chế biến ăn bữa tiệc gia đình Sầu đâu cho thấy lồi có nhiều cơng dụng, xem “kho báu xanh” Việc nghiên cứu, khảo sát thành phần hóa học, tác dụng dược lý độ an tồn, độc tính Sầu đâu góp phần quan trọng cho việc đặt tảng khoa học cho việc khai thác, sử dụng nguồn tài nguyên thực vật cách hợp lý hiệu Hiện nay, giới, có nhiều đề tài khoa học nghiên cứu Sầu đâu Tuy nhiên, Việt Nam điều hạn chế, chưa có nghiên cứu đánh giá độ an tồn, độc tính lồi Đánh giá độc tính cấp, xác định liều LD50 (một thông số quan trọng để đánh giá độc tính thuốc) giúp xác định phương hướng dùng liều thí nghiệm dược lý cách đắn, xác định