Kết quả theo dõi mọc mảnh ghép ở người bệnh ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài bằng kỹ thuật phân tích đoạn adn trên điện di mao quản tại viện huyết học truyền máu trung ương giai đoạn 2018 2022

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NGUYỄN THUỲ TRANG H P KẾT QUẢ THEO DÕI MỌC MẢNH GHÉP Ở NGƢỜI BỆNH GHÉP TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU ĐỒNG LOÀI BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH ĐOẠN ADN TRÊN ĐIỆN DI MAO QUẢN TẠI VIỆN HUYẾT HỌC - U TRUYỀN MÁU TRUNG ƢƠNG GIAI ĐOẠN 2018-2022 H LUẬN VĂN LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 HÀ NỘI, 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NGUYỄN THUỲ TRANG H P KẾT QUẢ THEO DÕI MỌC MẢNH GHÉP Ở NGƢỜI BỆNH GHÉP TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU ĐỒNG LOÀI BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH ĐOẠN ADN TRÊN ĐIỆN DI MAO QUẢN TẠI VIỆN HUYẾT HỌC TRUYỀN MÁU TRUNG ƢƠNG GIAI ĐOẠN 2018-2022 H U LUẬN VĂN LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN KHOA HỌC TS DƢƠNG QUỐC CHÍNH GIẢNG VIÊN HỖ TRỢ ThS NGUYỄN THỊ HƢƠNG HÀ NỘI, 2022 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp Thạc sỹ Kỹ thuật xét nghiệm y học, lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy/ cô trƣờng Đại học Y tế công cộng giảng dạy tạo hội cho em đƣợc học tập, rèn luyện tích lũy kiến thức, kỹ cần thiết Nhân dịp này, em xin cảm ơn lãnh đạo anh chị công tác Viện Huyết học – Truyền máu Trung ƣơng, Khoa Ghép tế bào gốc Khoa Di truyền – Sinh học phân tử hỗ trợ, tạo điều kiện thời gian cho em suốt trình nghiên cứu Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Dƣơng Quốc Chính - giảng H P viên hƣớng dẫn trực tiếp bảo em suốt trình thực đề tài Em xin cảm ơn Ths Nguyễn Thị Hƣơng - giảng viên hỗ trợ trƣờng Đại học Y tế công cộng Thầy cô tận tình dẫn, theo dõi đƣa lời khuyên bổ ích giúp em giải đƣợc vấn đề gặp phải trình nghiên cứu hoàn thành đề tài cách tốt U Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, bạn bè ln khích lệ, động viên để em nỗ lực hồn thành tốt khóa học đề tài luận văn Em xin trân trọng cảm ơn! H i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC BIỂU ĐỒ vi TÓM TẮT NGHIÊN CỨU vii ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU H P Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Thông tin chung ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài 1.1.1 Ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài 1.1.2 Chimerism ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài .4 1.2 Các kỹ thuật theo dõi mọc mảnh ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài 1.2.1 Một số kỹ thuật theo dõi mọc mảnh ghép phổ biến U 1.2.2 Kỹ thuật phân tích đoạn ADN sử dụng STR 1.3 Bộ xét nghiệm Global filer phần mềm phân tích ChimerMarker H 1.3.1 Bộ xét nghiệm Global filer 1.3.2 Phần mềm phân tích ChimerMarker .13 1.4 Các nghiên cứu đánh giá theo dõi mảnh ghép ngƣời bệnh ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài kỹ thuật phân tích đoạn ADN sử dụng thị phân tử STR giới Việt Nam 15 1.4.1 Trên giới 15 1.4.2 Tại Việt Nam 17 1.5 Giới thiệu chung Viện Huyết học – Truyền máu Trung ƣơng Khoa Di truyền – Sinh học phân tử 18 1.5.1 Viện Huyết học – Truyền máu Trung ƣơng 18 1.5.2 Khoa Di truyền – Sinh học phân tử 19 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 ii 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 21 2.2 Thời gian thu thập số liệu địa điểm nghiên cứu 21 2.3 Thiết kế nghiên cứu 21 2.4 Cỡ mẫu 22 2.5 Trình bày phƣơng pháp chọn mẫu 23 2.6 Trình bày phƣơng pháp thu thập số liệu 23 2.7 Các biến số nghiên cứu 23 2.8 Các khái niệm, quy trình kỹ thuật, kiểm soát chất lƣợng, thƣớc đo, tiêu chuẩn đánh giá 23 2.8.1 Bệnh phẩm 23 H P 2.8.2 Trang thiết bị vật tƣ tiêu hao 24 2.8.3 Hoá chất 24 2.8.4 Quy trình kỹ thuật 24 2.8.5 Kiểm soát chất lƣợng 30 2.8.6 Đánh giá kết xét nghiệm 30 U 2.9 Phƣơng pháp phân tích số liệu 31 2.10 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 31 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 H 3.1 Thông tin chung đối tƣợng nghiên cứu 32 3.1.1 Đặc điểm tuổi giới tính 32 3.1.3 Đặc điểm cặp ghép TBGTMĐL .33 3.2 Kết STR sử dụng kỹ thuật phân tích đoạn ADN điện di mao quản 35 3.2.1 Số lƣợng alen phát locus STR 35 3.2.2 Tỷ lệ alen phát locus STR 36 3.2.3 Tần suất STR có giá trị thơng tin 37 3.3 Kết ứng dụng STR theo dõi mảnh ghép 39 3.3.1 Kết chimerism ngƣời bệnh thời điểm .39 3.3.3 Kết ca ghép TBGTMĐL 46 Chƣơng BÀN LUẬN 47 iii 4.1 Thông tin chung đối tƣợng nghiên cứu 47 4.2 Các giá trị thông tin STR sử dụng kỹ thuật phân tích đoạn ADN điện di mao quản 48 4.3 Hiệu ứng dụng STR theo dõi mọc mảnh ghép 52 KẾT LUẬN .58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 H P H U iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN : Deoxyribonucleic acid EUC : EuroChimerism FISH (Fluorescent in situ hybridization) : Lai chỗ gắn huỳnh quang HCRLST : Hội chứng rối loạn sinh tuỷ HCTST : Hội chứng tăng sinh tuỷ LXMCDL : Lơ xê mi cấp dòng lympho LXMCDT : Lơ xê mi cấp dòng tuỷ LXMLT-L : Lơ xê mi lai tuỷ - lympho H P : Nhiễm sắc thể NST PCR (Polymerase Chain Reaction) : Khả phân biệt locus quần thể PD (Power of Discrimination) STR (Short Tandem Repeat) U STX TBG TBGTM TBGTMĐL TMBS UL : Phản ứng tổng hợp chuỗi H : Đa hình đoạn lặp ngắn ngẫu nhiên : Suy tuỷ xƣơng : Tế bào gốc : Tế bào gốc tạo máu : Tế bào gốc tạo máu đồng loài : Tan máu bẩm sinh : U lympho v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các thuốc nhuộm sử dụng xét nghiệm Global Filer Bảng 1.2 Vị trí nhiễm sắc thể alen tƣơng ứng locus xét nghiệm Gloal Filer Bảng 2.1 Các biến số nghiên cứu đề tài 23 Bảng 3.1 Đặc điểm tuổi đối tƣợng nghiên cứu 32 Bảng 3.2 Phân bố thể bệnh đối tƣợng nghiên cứu .33 Bảng 3.3 Nguồn hiến tế bào gốc tạo máu đồng loài 35 Bảng 3.4 Số lƣợng alen locus STR đƣợc phát đối tƣợng H P nghiên cứu 35 Bảng 3.5 Tỷ lệ alen phát đƣợc locus STR 36 Bảng 3.6 Số lƣợng STR có giá trị thơng tin phân tích chimerism 38 Bảng 3.7 Kết chimerism dòng tế bào Lympho T ngƣời bệnh khảo sát thời điểm xét nghiệm .39 U Bảng 3.8 Kết chimerism dòng tế bào tuỷ ngƣời bệnh khảo sát thời điểm xét nghiệm .40 Bảng 3.9 Mối liên hệ kết chimerism dòng tế bào lympho T với thể H bệnh 42 Bảng 3.10 Mối liên hệ kết chimerism dòng tế bào tuỷ với thể bệnh 43 Bảng 3.11 Mối liên hệ kết chimerism dòng tế bào lympho T với nguồn hiến TBG 44 Bảng 3.12 Mối liên hệ kết chimerism dòng tế bào tuỷ với nguồn hiến TBG 45 Bảng 3.13 Kết ca ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài 46 Bảng 3.14 Kết số lần ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài ngƣời bệnh 46 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh kết phân tích chimerism phần mềm ChimerMarker 15 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Đặc điểm giới tính đối tƣợng nghiên cứu 32 Biểu đồ 3.2 Giới tính cặp ghép TBGTMĐL .34 Biểu đồ 3.3 Số lƣợng ngƣời hiến TBGTMĐL ngƣời bệnh .34 Biểu đồ 3.4 Tần suất STR có giá trị thơng tin phân tích chimerism 37 H P H U vii TÓM TẮT NGHIÊN CỨU Sau ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài, ngƣời bệnh cần đƣợc theo dõi mọc mảnh ghép để đánh giá mức độ thành công ca ghép, phát sớm thải ghép tái phát bệnh Kỹ thuật phân tích đoạn ADN điện di mao quản sử dụng STR để theo dõi mọc mảnh ghép tiêu chuẩn vàng Trong đó, STR có giá trị cần đƣợc lựa chọn phù hợp chúng ảnh hƣởng đến độ xác phân tích Vì vậy, chúng tơi thực đề tài “Kết theo dõi mọc mảnh ghép ngƣời bệnh ghép tế bào gốc tạo máu đồng lồi kỹ thuật phân tích đoạn ADN điện di mao quản Viện Huyết học - Truyền máu Trung ƣơng giai H P đoạn 2018 - 2022” Đề tài đƣợc thực với hai mục tiêu: 1) Đánh giá STR có giá trị thơng tin xét nghiệm Global filer theo dõi mọc mảnh ghép ngƣời bệnh ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài Viện Huyết học - Truyền máu Trung ƣơng giai đoạn 2018 - 2022; 2) Đánh giá tình trạng mọc mảnh ghép ngƣời bệnh ghép tế U bào gốc tạo máu đồng lồi kỹ thuật phân tích đoạn ADN điện di mao quản sử dụng STR Viện Huyết học - Truyền máu Trung ƣơng giai đoạn 2018 - 2022 Nghiên cứu áp dụng thiết kế nghiên cứu hồi cứu, mô tả cắt ngang kết hợp H tiến cứu Đối tƣợng nghiên cứu 87 ngƣời bệnh thực ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài Khoa Ghép tế bào gốc Số liệu đƣợc phân tích xử lý phần mềm Excel 2010 SPSS 20.0 Đề tài thu đƣợc kết theo với hai mục tiêu Trong đó, 24 STR sử dụng nghiên cứu có giá trị thông tin đủ điều kiện để sử dụng theo dõi mọc mảnh ghép Mỗi locus biểu alen (D3S1358) locus biểu cao 25 alen (SE33) Locus có tần suất xuất thấp TPOX (31%), nhóm locus có tần suất cao (>70%) gồm: D2S1338, SE33, D18S51, D12S391, D1S1656, D10S1248 Mỗi cặp ghép có STR có giá trị thơng tin, thể tính ƣu việt xét nghiệm 24 STR việc để theo dõi mọc mảnh ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài Các STR nghiên cứu đƣợc ứng dụng hiệu để theo dõi mọc mảnh ghép dòng tế bào lympho T tế bào tuỷ Theo PHỤ LỤC H P H U CQNG HOA XA 1101 CHU NGHiA VIET NAM Dc 1p - Tii - Hnh phñc BIEN BÀN HQI BONG CHAM LU4N VAN THeC s'c Kc' THUiT XET NGHIEM Y HQC Bui him v t chü'c ti: Tru*ng Bi h9c Y t cong cong Hi giO 00 phüt ngày 8/01/2023 Hi dng chuyên ngành dugc thành 1p theo QD s 01/QD-DHYTCC, ngày 03/01/2023 cüa Trumg Di h9c y tê cong cong ye vic thành 1p Hi dông châm 1un van Thc si k' thut xét nghim y h9c khóa 01 ti Ha Ni cüa hpc viên: Nguyn Thüy Trang VOidtài: H P Kt qua theo dOi mãnh ghëp ngui bnh ghép t bào gc t.o rnáu dng loài b&ng k' thut phân tIch don ADN din di mao quàn tti Vin Huyêt h9c Truyên máu Trung uong giai domn 20 18-2022 Tâi dir buM bâo v gm cO: Thành viên Hi dng chm bâo v 1un van Co mat: 1- Chü tjch hi dng: PGS.TS Nguyn Thu Hucmg U - U' viên thu k hi dng: TS Dng Th Hung - Phãn bin 1: TS Tthn Ng9c Qu - Phãn biên 2: PGS.TS Phan Quc Hoàn H - U' viên: TS Vu ChI Dung Vngmt: Giáo viên hrnrng dn: TS Duang Quc ChInh Di biu khác (Truz372g, diaphu'cmg, dng nghip): Hi dlng dã nghe: 1.Dui din Nhà trung cong b quyt djnh thành 1p Hi dng ch.m lun van Thu k hi dng d9c báo cáo kt qua hc v L ljch khoa hỗc cUa h9c viờn Hỗc viờn: Nguyn Thỹy Trang bỏo cỏo torn tt 1u.n van thii gian 20 Phit ' kin nhn xét cüa thành viên hi dng: 4.1 ' kin Phãn bin 1: TS Trn Ng9c Qu (Co bOn nhỗn xột kern theo,): - H9c viờn dâ chinh sira, báo cáo t,t, d tài hay Dà có báo nuâc, có näng xuât bàn quôc tê - Tom tt dài, vit 1i trang -Dọtvnd:hỗip1 - Miic tiờu: phU hcTp - Tang quan ti lieu: phỹ hỗip, trIch dn ti lieu dung yờu cu - Khung thuyt - Di tuỗlng Va phuo'ng pháp nghiên ciru: + Xem li có phãi tht cã hi ciru không + 2.8 dixa vào phii hic + phn kit & tng quan nên dim vào ph.n DT PPNC +Quy trInh k thu.t: di.ra thông s chung - Kt qua nghiên ctru: dáp img 02 miic tiêu + Biu cn có n, bang c.n cO dan vj H P + Bang trInh bay c.n b cic 1i (VD 3,7) + giá trj p cn vi& p thuà'ng - Bàn luân: + Môt s doan cOn dài, thuyêt, viêt ngan gon (nhn xét qua, so sánh vâi kt qua khãc, bin lun rôi mi kêt luan cho kêt qua) U - Kt 1un: + CAn chinh sira vit cho sat muc tiêu - Khuyn nghj: khOng nên dua khuyn nghj - Khác: cum tr vit tat cAn cO chü thIch, tài lieu tham khâo cAn theo c.0 trüc, can lê H Kt lun: D ngh hi dng thông qua 4.1 ' kin Phãn biên 2: TS Phan Quc Hoàn (Co ban nhânxét kern theo): Nhan xét chung: da sira theo kin phãn bin - CAn phãi nOi k' v kit - Vi& k5 03 k5 thut: VD kt tách rOng, phân tIch don - BO khuyên ngh 02 4.3 ' kin Uy viên: TS VU ChI DUng - C gang khai thác d 1iu d vit báo quc t - Dánh giá hiu qua mãnh ghép: cO th tách nhO them duỗc khOng 4.4 "kinThuk: - Vit tOrn tt cho rO rang han ph.n phucmg pháp, vit theo don dn - Phn kt 1un va kin nghj khOng cn vit câu dn n1ta, viêt du theo mitc tiéu 4.5 kin Chü tjch: - Can 1i v format, c.n kim tra Va chinh sira li - Ham luccng khoa h9c cao - Báo cáo cn chinh süa them cho hoàn chinh (1i format, kim tra toàn b 1un van) - Tom tht: chinh sira chi vit tat, vit theo don van (L' miic tiêu, phuang pháp nghien cu, kêt qua nhüng kêt qua chInh, kiên nghj) - Tng quan tài lieu: b sung giOi thiu v b Kit (cong trInh nghiên ciru ngoainiiàc ) - PPNC: Xem li thii gian nghiên cilru (Phê duyt 29/3, 29/4 mâi phê duyt HDDD thu thp so lieu truác van ban, can xern iai) Tách phân tiên ciru theo dOi (xem Ca) H P - Miic 2.8 (nu không lam tin ciru thI dua phi liic) - PhucTng pháp thu thp: mô tâ thu thp th d dáp 1rng tiêu chun ch9n - Khong nht thit bO khuyn nghj 2, CO th vit laj cho phü hcp Các thành viên khác cña Hi dng dai biu dir bão v phát biu, phân tIch, dánh giá lun van Tang s6 d cO duac nêu U H kin phát biu phân tIch dOng gop cho lun van v da cO cõu hOi Hỗc viờn trä kyi câu hOi dugc nêu thai gian là: phiiit H9c viên tip thu gOp cüa hi dng va sê chinh sira theo gop KET LUN: Hi dng thng nht dánh giá chung, kt 1un nhu sau: 1.Lun van a dat duỗc nhttng kt qua sau: Lu.n van dáp 1ng yêu cu cüa 1u.n van Thac sT K thut xét nghim y h9c Nhüng dim cn chinh sira: - H9c viên cn chinh sra theo gop chi tit cUa thành viên hi dng Can cr kt qua ch.m dim cüa Hi dng ban kim phiu báo cáo: Tang s dim trInh bay: 47.5 (bao gm cá dim báo) Dim chia trung binh trinh bay (TInh dé'n s thf2p phan):9.5 (bao gm cá dim báo) Tng cOng dim BVLV (da cong dim báo khoa hoc, nu có): 9.5 Trong diem thành tIch nghién cü'u (co bOo hoỗc xOc nhn cia tgp chI sở dOng so bao cu the sap toi/Dé an ap dung kêt qua rzghiên cwu vao thwc té co xac nhan cOa doii vj tiêp nhn): ( (Ghi r6 Co hoic khong có bOo khoa hQc) - Xêp 1oi: i /1 LLE (Xuát SC ?: 9.5, GiOi: 8,5-9,4; KhO: 7,5-8,4; Trung bInh: 5,5-7,4, KhOng dat: