Đặc điểm sinh học phân tử của haemophilus influenzae typ b hib phân lập từ bệnh nhi viêm màng não mủ dưới 5 tuổi và trẻ khỏe mạnh tại nhà trẻ mẫu giáo

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Giống vi khuẩn Haemophilus loại vi khuẩn ký sinh đường hô hấp người số loài động vật Loài H influenzae (Hi) nguyên số bệnh nhiễm trùng người (có thể từ viêm đường hơ hấp viêm màng não) Hi typ b (Hib) giới xác định nguyên gây viêm màng não (VMN) vi khuẩn, đặc biệt trẻ em tuổi [13], [78] Tại nước phát triển khu vực Bắc Mỹ, Tây Âu, Châu Úc hầu hết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ mang Hib họng cao trẻ nhỏ, đặc biệt trẻ chăm sóc trung tâm giữ trẻ ban ngày mang Hib đến 15% [41], [58] Bên cạnh đó, Hib đánh giá nguyên nhân hàng đầu gây bệnh nhiễm trùng nguy hiểm cho trẻ nhỏ viêm màng não (VMN), viêm phổi để lại di chứng tỷ lệ tử vong cao (khoảng 10%) Gánh nặng bệnh tật Hib giảm đáng kể nhờ có vacxin phịng bệnh nước [78] Tuy nhiên, số nước giới sau đánh giá q trình thực phịng bệnh Hib vacxin cho thấy tỷ lệ thất bại vacxin không nhỏ Xuất phát từ vấn đề này, có nhiều nghiên cứu đặc điểm học phân tử (phổ biến sử dụng kỹ thuật PFGE) Hib tiến hành để đánh giá dịch tễ học phân tử vi khuẩn [71], [90], [95], [101], [102] Tại Việt Nam, số nghiên cứu đánh giá tỷ lệ trẻ khỏe mạnh mang vi khuẩn Hi nói chung [1], tỷ lệ mắc VMN Hi (chưa có điều kiện xác định typ huyết thanh) trẻ tuổi [6] Cho thấy tỷ lệ trẻ tuổi mang Hi chiếm 21,4-35,5% [4] Hi nguyên hàng đầu gây VMN (50-60% trường hợp VMN xác định vi khuẩn) trẻ nhỏ [6] Từ năm 1999 đến 2004, số nghiên cứu Phan Lê Thanh Hương cộng đưa tỷ lệ VMN Hib trẻ tuổi Hà Nội số tỉnh phía Bắc [6], [87], tìm hiểu phân bố theo biotype, genotype (phân loại PFGE) gen mã hóa tổng hợp enzym b-lactamase Hib phân lập từ trẻ viêm màng não trẻ tuổi thực [6] Tuy nhiên, số lượng chủng Hib sử dụng nghiên cứu hạn chế chưa có so sánh với chủng Hib phân lập trẻ khỏe mạnh Vì vậy, để góp phần tìm hiểu nguồn gốc, đặc điểm sinh học phân tử chủng Hib gây viêm màng não cho trẻ tuổi trẻ khỏe mạnh lứa tuổi mẫu giáo có mang Hib Chúng tơi thực đề tài: “Đặc điểm sinh học phân tử Haemophilus influenzae typ b (Hib) phân lập từ bệnh nhi viêm màng não mủ tuổi trẻ khỏe mạnh Nhà trẻ - Mẫu giáo”, nhằm thực mục tiêu: Xác định biotype, genotype, khả sinh enzym b-lactamase chủng Hib phân lập từ bệnh nhi viêm màng não mủ trẻ khỏe mạnh tuổi Đánh giá mối liên quan đặc điểm sinh học ADN Hib gây viêm màng não mủ trẻ nhỏ với Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh mang vi khuẩn Xác định tỷ lệ mang Hib trẻ khỏe mạnh Nhà trẻ - Mẫu giáo điều tra Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vi khuẩn Haemophilus influenzae typ b (Hib) 1.1.1 Haemophilus influenzae: lịch sử tên gọi Haemophilus influenzae (Hi) phân lập lần đầu Richard Pfeiffer từ đờm bệnh nhân bị viêm phổi - cúm đại dịch cúm năm 1890 Lúc đó, vi khuẩn hiểu lầm nguyên nhân gây bệnh cúm nên gọi trực khuẩn cúm (Influenzae bacteria) Mãi đại dịch cúm xảy năm 1918-1919, người ta biết Hi thành viên hệ vi khuẩn ký sinh đường hô hấp lúc gây bệnh Đến năm 1933, phát virus cúm nguyên bệnh cúm, vai trò Hi làm sáng tỏ: virus cúm gây bệnh cúm, Hi vi khuẩn “ăn theo” (second invader) sau tế bào đường hô hấp bị tổn thương nặng nề virus cúm [11], [32], [78] Vì vậy, vi khuẩn có tên Haemophilus influenzae xuất phát từ nhu cầu địi hỏi mơi trường giàu chất dinh dưỡng, bao gồm yếu tố phát triển có mặt máu (Haemophilus: ưa máu), đặc biệt yếu tố X (hemin) yếu tố V (NAD NADP) Thêm vào đó, vi khuẩn lại có mối liên quan lịch sử với bệnh cúm (influenzae: bệnh cúm) Cho nên, vi khuẩn gọi tên [11], [78] 1.1.2 Đặc điểm sinh học đặc trưng Hib 1.1.2.1 Hình thể cấu trúc [11], [78] Hi lồi vi khuẩn nhỏ nhất, cịn gọi cầu trực khuẩn vi khuẩn có dạng trực khuẩn ngắn (1,0–1,5mm) uốn cong hai đầu trông hình cầu Tuy nhiên chúng dịch não tuỷ, hình thể Hi kéo dài gấp vài lần so với chiều dài thơng thường (Hình 1.1) Hi bắt màu Gram âm, không di động không hình thành nha bào Thành tế bào vi khuẩn có cấu trúc bề mặt lipopolysaccharide–protein tương tự thành vi khuẩn Gram âm khác Tuy nhiên, Hi phân loại thành nhóm: loại khơng vỏ polysaccharide (non-typeable không xác định typ huyết thanh) loại có vỏ (typeable xác định typ huyết thanh) Lồi Hi (Hi) có vỏ bọc phân loại tiếp tục theo typ huyết (serotype) từ a đến f tuỳ thuộc vào đặc tính kháng nguyên vỏ polysaccharide gen qui định [11], [32], [78] Vỏ bọc typ b dạng trùng hợp ribose, ribitol phosphate, gọi polyribosyl - ribitol phosphate (PRP) Những polysaccharide bề mặt có liên quan mạnh mẽ đến tính gây độc vi khuẩn, đặc biệt Hi typ b (Hib), nguyên nhân nhiều trường hợp nhiễm trùng hệ thống nghiêm trọng bao gồm VMN (chiếm 90% ca nhiễm khuẩn lan tràn Hib) Bạch cầu đa nhân Hi Hình 1.1 Hình thể Hi tiêu nhuộm gram dịch não tuỷ kính hiển vi quang học [89] Trên thực tế lâm sàng, nhuộm gram bệnh phẩm dịch não tủy từ bệnh nhân mà vi trường cho thấy nhiều vi khuẩn gram (-) nhỏ, đa hình thái nhiều bạch cầu đa nhân dấu hiệu quan trọng gợi ý cho chẩn đoán sớm VMN Hi [78] 1.1.2.2 Sức đề kháng [117] Hi loại vi khuẩn chịu đựng với yếu tố ngoại cảnh Trong bệnh phẩm, chúng chết nhanh chóng để ánh sáng mặt trời chiếu trực tiếp, để khô lạnh giá Các chất sát khuẩn thông thường tiêu diệt vi khuẩn cách dễ dàng Vì vậy, bệnh phẩm để chẩn đốn vi khuẩn nên vận chuyển phịng thí nghiệm vịng giờ, khơng q nhiệt độ phịng thí nghiệm (24 - 28oC) Nếu tăm bệnh phẩm phải giữ môi trường vận chuyển (mơi trường bảo quản), giữ nhiệt độ - 8oC tối đa 24 môi trường 1.1.2.3 Đặc điểm nuôi cấy [11] Điều kiện nuôi cấy: Hi loại vi khuẩn khó ni cấy Chúng không mọc môi trường nuôi cấy thông thường, mọc mơi trường có sẵn hai yếu tố X V Yếu tố X có lẽ chất tuý mà hỗn hợp chất màu có chứa sắt (như hemin hematin); khơng có hai yếu tố môi trường nuôi cấy, vi khuẩn Hi không phát triển Hi dùng yếu tố X để tổng hợp số enzym catalase, peroxidase cytochrom hệ thống vận chuyển điện tử Máu sản phẩm máu, kể hemin nguồn nguyên liệu truyền thống sử dụng để sản xuất yếu tố X Thạch máu (5%) có khả cung cấp đủ lượng yếu tố X mà Hi cần thiết phát triển Khi dùng hematin tinh chế nồng độ cần thiết 0,1 – 1,0 mg/ml Yếu tố V NAD NADP có mặt máu, phần chúng nằm bên tế bào Mặt khác, máu nhiều lồi động vật có enzym NADase, nên máu tươi khơng có NAD dạng tự Thạch chocolate, NAD giải phóng khỏi tế bào enzym NADase bị nhiệt phá huỷ Khi dùng NAD tinh chế, nồng độ cần thiết 0,2 - 1,0 mg/ml Hi hiếu khí, địi hỏi mơi trường ni cấy có CO2 (2-5%) phân lập Mọc tốt môi trường chocolate Levinthal nhiệt độ khoảng 23390C, tối ưu 370C Không mọc thạch máu cừu; mọc loại thạch máu khác (ví dụ máu thỏ) khơng gây tan máu khuẩn lạc nhỏ nhiều so với chocolate điều kiện nuôi cấy Cũng thạch máu, người ta thấy khuẩn lạc Hi mọc xung quanh khuẩn lạc Staphylococcus aureus bội nhiễm to, vùng xa khuẩn lạc không mọc, bé Hiện tượng gọi tượng “vệ tinh” (satellitism), khả tiết yếu tố V vi khuẩn bội nhiễm giúp Hi phát triển thạch máu thông thường S aureus H influenzae Hình 1.2: Hiện tượng "vệ tinh", khuẩn lạc vi khuẩn Hi mọc xung quanh khuẩn lạc S aureus môi trường thạch máu thỏ Môi trường nuôi cấy đặc điểm khuẩn lạc: Để ni cấy Hi, có loại mơi trường được sử dụng [11], [32], [78], [117]: - Thạch chocolate có khơng có 300mg bacitracin/ml mơi trường (có tác dụng ức chế vi khuẩn khác, đặc biệt liên cầu) để phân lập Hi Đây loại môi trường thường sử dụng nuôi cấy phân lập vi khuẩn - Thạch máu thỏ tươi 7% Sau nuôi cấy vi khuẩn vào mơi trường phân lập, ủ ấm khí trường 5% CO2 (nếu khơng có tủ ấm CO2, mơi trường nuôi cấy đặt chuông thủy tinh đốt nến chuông Sau nến tắt, khí trường bên chng - 5% CO2) 37oC thời gian 18 – 24 Hình 1.3: Khuẩn lạc Hi mọc môi trường chocolate Sau 16 – 18 ni cấy, Hi phát triển thành khuẩn lạc bóng mờ, vồng nhẹ, đường kính từ 1- 2mm khơng gây tan huyết Vi khuẩn Hib vỏ, khuẩn lạc thường sáng bóng, nhày ướt, óng ánh ánh sáng chiếu vào có đường kính lớn Ngồi ra, mơi trường ni cấy vi khuẩn thường có mùi hăng đặc biệt (hăng indol) Sau 24 – 48 giờ, trạng thái vỏ xuất hiện, tính óng ánh biến mất, vi khuẩn tự ly giải tính chất bắt màu Gram thay đổi Trên mơi trường lỏng, Hi thường phát triển làm đục mơi trường Tình trạng vỏ xảy sớm môi trường thạch, muốn xác định vỏ cần chọn thời điểm ni cấy thích hợp (18 giờ) Haemophilus influenzae phân biệt với loại Heamophilus khác đặc điểm sau đây: Tính chất Lồi Tan huyết Cần yếu tố X Cần yếu tố V Cần CO2 Hi - + + + H parainfluenzae - - + - H hemolyticus + + + - H parahemolyticus + - + ± H aphrophilus - + - + H paraphrophilus - - + + Bảng 1.1: Những đặc điểm sinh học đặc trưng để phân biệt Hi với Haemophilus khác Tính chất sinh hóa đặc trưng Hi: Tính chất sinh hóa đặc trưng Hi nhu cầu đòi hỏi bắt buộc yếu tố phát triển X V môi trường nuôi cấy Tính chất xác định thử nghiệm sau [11], [32], [78], [117]: Hình 1.4: Thử nghiệm với khoanh giấy X, V XV, cho thấy vi khuẩn đòi hỏi bắt buộc phải có yếu tố X V cho phát triển C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 1.1.3 Đặc điểm phân loại theo typ huyết (serotype) biotype Haemophilus influenzae 1.1.3.1 Đặc điểm phân loại Hi theo serotype (typ huyết thanh) [11], [32], [78] Năm 1930, Hi xác định thành nhóm chính, lồi không vỏ (không xác typ huyết - non typeable) lồi có vỏ (xác định typ huyết - typeable) Dựa tính đặc hiệu kháng nguyên vỏ polysaccharide, vi khuẩn Hi có vỏ chia thành typ huyết từ a đến f Theo hầu hết nghiên cứu cho thấy vi khuẩn Hi gây bệnh thuộc loại có vỏ, nhiều Hi typ b 1.1.3.2 Đặc điểm phân loại Hi theo biotype (typ sinh học) Biotype Các tính chất hố học Test Urease Test Indol Ornithin decarboxylase (ODC) I + + + II + + - III + - - IV + - + V - + + VI - - + VII - + - VIII - - - Bảng 1.2: Phân loại Haemophilus influenzae theo typ sinh học Kilian đưa phương pháp sử dụng số thử nghiệm sinh hoá để xác định biotype đặc điểm sinh học loài Haemophilus dựa kết thử nghiệm sinh hố: tìm khả sinh Indol, hoạt động hai enzym Urease Decarboxylase vi khuẩn Trước đây, Kilian nghiên cứu chia Hi thành biotype từ I đến IV Những biotype độc lập với typ huyết vi khuẩn đó, chủng Hi khơng có vỏ cho kết Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 10 tương tự với ba phản ứng sinh hoá Sau này, với thử nghiệm tương tự, Kilian bổ sung thêm biotype từ V đến VIII Vì vậy, Hi chia làm typ sau theo tiêu chuẩn Killian (bảng 1.2) [32] 1.1.4 Miễn dịch [17], [78] Kháng thể (Kháng nguyên thân) Kháng nguyên thân (LPS protein màng ngoài) Vỏ (Polyribosyl-ribitol phosphate) Kháng thể (Kháng nguyên vỏ) Đại thực bào Hình 1.5 : Đại thực bào nuốt vi khuẩn Hib bị opsonin hóa kháng thể đặc hiệu kháng nguyên vỏ kháng nguyên thân [78] Miễn dịch tự nhiên Hib đa dạng, bao gồm hợp phức tạp nhiều thành phần hệ thống miễn dịch: 1) Các yếu tố miễn dịch niêm mạc, 2) Kháng thể dịch thể, 3) Sự opsonin hóa q trình hoạt hóa phản ứng viêm qua trung gian bổ thể, 4) Khả thực bào, diệt vi khuẩn đại thực bào tế bào đa nhân, 5) Chức miễn dịch qua trung gian tế bào lympho T Trong khó đánh giá rạch rịi chế miễn dịch quan trong chế bảo vệ thể vật chủ Tuy nhiên, hầu hết cá thể có khả miễn dịch bảo vệ Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 129 nhiễm chéo vi khuẩn Hib đứa trẻ nuôi dưỡng Nhà trẻ - mẫu giáo Đặc điểm phù hợp với nhiều nghiên cứu khác giới [91], [112] báo cáo, điển hình nghiên cứu Raquel Sa - Leao Bồ Đào Nha cho thấy có tỷ lệ cao vi khuẩn Hi lan truyền những đứa trẻ ni dưỡng trung tâm chăm sóc ban ngày [91] Vì vậy, nghiên cứu chúng tơi cho thấy có tỷ lệ cao (24,5%) trẻ khỏe mạnh nhà trẻ - mẫu giáo mang vi khuẩn Hib; số trẻ mang vi khuẩn Hib độc lực mà khơng có biểu bệnh, nguồn lây quan trọng sang trẻ khác khó tránh 4.5 Đánh giá khả sinh enzym β-lactamase, đặc điểm gen mã hóa enzym β-lactamase chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN trẻ khỏe mạnh tuổi Kể từ Alexander Flemming phát Penicillin, quan điểm phương pháp điều trị bệnh nhiễm trùng thay đổi đạt hiệu cao nhiều Ở kỷ 20, hóa trị liệu kháng khuẩn đóng vai trò quan trọng sống điều trị bệnh nhiễm trùng người Tuy nhiên, loại kháng sinh đời gặp phải trở ngại lớn, vi khuẩn phát sinh chủng đề kháng thuốc Nguồn gốc chế đề kháng, hầu hết vi khuẩn đột biến gen nhận gen đề kháng từ vi khuẩn khác hay nhiều hình thức khác (biến nạp, tải nạp hay tiếp hợp) Cho dù tượng đột biến, tượng trao đổi di truyền xảy ra, liệu pháp sử dụng kháng sinh lại nhân tố chọn lọc tự nhiên (selective natural factors) để tạo dịng vi khuẩn kháng thuốc Vì vậy, lạm dụng kháng sinh tượng thay đổi cấu trúc vật liệu di truyền (đột biến kháng thuốc nhận gen đề kháng) vi khuẩn dẫn đến tạo chủng vi khuẩn đa kháng (kháng nhiều loại kháng sinh) làm cho trình điều trị bệnh nhiễm trùng trở nên phức tạp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 130 4.5.1 Đánh giá khả sinh enzym β-lactamase chủng Hib phân lập Đối với vi khuẩn Hi, khả đề kháng ampicillin kháng sinh khác thuộc nhóm β-lactam khác thường hai chế: 1) vi khuẩn có khả sinh enzym β-lactamase (β-lactamase-producing ammpicillin resistant BLPAR) có tác dụng phân hủy kháng sinh nhóm β-lactam; 2) phân tử PBPs (Penicillin Binding Protein) nằm tế bào vi khuẩn thay đổi cấu trúc (do đột biến) dẫn đến giảm lực kháng sinh nhóm β-lactam [109] Ngồi ra, số chủng Hib sở hữu hai chế đề kháng Hiện tượng đề kháng với ampicillin chủng Hi bắt lên năm đầu thập kỷ 1970 mức độ gia tăng đề kháng đặn từ thời gian Tỷ lệ Hi đề kháng với ampicillin có khác vùng địa lý Khả sinh enzym β-lactamase chế đề kháng chủ yếu Hi kháng sinh nhóm β-lactam hầu hết vùng nghiên cứu, chủng Hi kháng ampicillin khơng có enzym β-lactamase (β-lactamase negative ampicillin-resistant: BLNAR) thường phổ biến Một nghiên cứu điều tra phạm vi quốc tế với khoảng 3000 chủng Hi từ năm 1999 – 2000 cho thấy tỷ lệ chung chủng Hi có enzym β-lactamase dương tính 16,6% (khoảng dao động từ thấp nhất: 3% Đức cao Hàn Quốc: 65%) tỷ lệ chung chủng BLNAR chiếm 0,07% [109] Bên cạnh đó, nhiều nghiên cứu khác đánh giá khả sinh enzym β-lactamase Hi nói chung Hib nói riêng Cụ thể nghiên cứu tổng thể nhiều quốc gia châu Âu, châu Úc, Fluit cộng đánh giá mức độ nhạy cảm với kháng sinh chủng Hi phân lập giai đoạn 1997/1998 2002/2003, cho thấy tỷ lệ sinh enzym β-lactamase vi khuẩn 11,0% 13,7% [35] Tại Ba Lan, nghiên cứu Sulikowska đặc điểm Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae Moraxella Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 131 catarrhalis phân lập từ trẻ khỏe mạnh không triệu chứng trung tâm chăm sóc trẻ ban ngày, trại trẻ mồ côi trẻ nuôi dưỡng nhà; kết cho thấy chủng Hi có khả sinh enzym βlactamase chiếm 3,6% [101] Tương tự, nghiên cứu Skoczýnska cho thấy tỷ lệ sinh enzym β-lactamase chủng Hib gây VMN Ba Lan năm 2005 chiếm 14,6% [98]; nghiên cứu Cerquetti báo cáo chủng Hi gây bệnh xâm hại có khả sinh enzym β-lactamase với tỷ lệ 10,0% Italia [28]; nghiên cứu Hashida cho thấy 2,9% chủng Hi gây bệnh nhiễm trùng Nhật Bản năm 2008 có khả sinh enzym [45] Tuy nhiên, Việt Nam theo nghiên cứu Phan Lê Thanh Hương cộng Hib (79 chủng) gây VMN cho trẻ nhỏ, cho thấy 57% tổng số chủng Hib có khả sinh enzym β-lactamase [87] Gần số quốc gia, tỷ lệ Hi có enzym β-lactamase dương tính bắt đầu giảm xuống Tại Canada tỷ lệ giảm từ 32% (năm 1993) xuống 19% (năm 2000), Tây Ban Nha giảm từ 28% (năm 1998) xuống 16% (năm 2000), Mỹ giảm từ 36% (năm 1994) xuống 26% (năm 2002) Nhật Bản giảm từ 25% (năm 1995) xuống 3% (năm 1999) [109] Tuy nhiên, nghiên cứu Mitsuda năm 1999 Nhật Bản Hib gây VMN cho thấy tỷ lệ vi khuẩn sinh enzym β-lactamase cao (50%) Đánh giá khả sinh enzym β-lactamase 102 chủng Hib gây VMN 52 chủng Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh nghiên cứu này, xác định tỷ lệ Hib gây VMN Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh có β-lactamase dương tính là: 50,0% 46,2%; khơng có khác biệt tỷ lệ sinh enzym hai nhóm vi khuẩn Kết phù hợp với nghiên cứu Phan Lê Thanh Hương cộng Hib gây VMN năm 2006 [87] Tuy nhiên, tỷ lệ sinh enzym β-lactamase chủng Hib xác định nghiên cứu chiếm tỷ lệ cao so với nhiều nghiên cứu khác Hib giới [28], [45], [98], [109] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 132 4.5.2 Đánh giá đặc điểm gen mã hóa enzym β-lactamase chủng Hib phân lập Enzym β-lactamase, trung gian đề kháng ampicillin vi khuẩn Hi lần xác định vào đầu năm 1970 β-lactamase loại TEM xác định vào năm 1975 Năm 1981, Rubin cộng báo cáo xuất loại β-lactamase mới, sau gọi ROB-1 Cả hai loại thuộc lớp βlactamase A nằm plasmid có vai trị đề kháng ampicillin bị ức chế có hiệu chất ức chế β-lactamase, clavulanate hay sulbactum Chủng Hi kháng ampicillin β-lactamase dễ dàng phát lâm sàng, chủng dương tính với hai loại enzym, cho kết MIC90 ≥ 32µg/ml ampicillin hai dương tính với phản ứng ly giải nitrocefin Trên thực tế, sử dụng phương pháp sinh học phân tử để xác định xuất hai enzym β-lactamase chủng Hi phân lập (TEM-1 ROB-1), PCR phương pháp thường sử dụng Một số nghiên cứu phân biệt chủng Hi có enzym β-lactamase cách phân loại enzym Trong đó, gen TEM Hi có hoán chuyển transposon (Tn): Tn2 Tn3 từ vi khuẩn họ đường ruột (Enterobacteriaceae) lên plasmid "bí ẩn" (cryptic plasmid) thấy xuất loài thuộc giống Haemophilus Đối với gen ROB, lần mô tả vào năm 1981 với chủng Hib phân lập lâm sàng bệnh nhân VMN Gen ROB Hi thuộc loại ROB-1 nằm plasmid nhỏ khoảng 4,1-5,0 kb (kilobase) Hầu hết nghiên cứu cho thấy gen TEM quy định tổng hợp enzym β-lactamase Hi thuộc loại TEM-1 Farrell cộng cho thấy tỷ lệ 93,7% TEM-1 4,6% ROB-1 điều tra toàn cầu với 2000 chủng Hi có β-lactamase dương tính, tương tự nghiên cứu trước Tỷ lệ ROB-1 số chủng Hi có enzym β-lactamase dương tính khác nhiều tùy Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 133 theo vị trí địa lý, với tỷ lệ cao tìm thấy Mexico (30%), Mỹ (13,2%) Canada (4,9%) Những chủng Hi có enzym có, trường hợp báo cáo nghiên cứu Farrell [109] Nghiên cứu cho thấy tỷ lệ gen quy định enzym βlactamase Hib phân lập khơng có biệt chủng Hib gây VMN chủng Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh tuổi Trong đó, hầu hết gen quy định tổng hợp enzym β-lactamase chủng Hib TEM-1 (98,0% Hib gây bệnh 95,8% chủng phân lập từ trẻ khỏe mạnh) tỷ lệ thấp ROB-1 (2,0% Hib gây bệnh 4,2% chủng phân lập từ trẻ khỏe mạnh) Kết phù hợp với nhiều nghiên cứu vi khuẩn Hi nói chung Hib nói riêng Bên cạnh đó, nghiên cứu Karlowsky cộng 324 chủng Hi có β-lactamase dương tính từ bệnh nhân nhiễm trùng đường hô hấp dưới, cho thấy 90,7% chủng Hi có gen TEM-1 9,3% gen ROB-1 Tương tự, nghiên cứu Cerquetti cho kết chủng Hi gây bệnh xâm hại có khả sinh enzym β-lactamase với 100% gen mã hóa enzym thuộc loại TEM-1 [28], [54] Ngoài ra, nghiên cứu khác Dabernat cộng đặc điểm chủng Hi phân lập từ trẻ khỏe mạnh nuôi dưỡng trung tâm chăm sóc ban ngày Pháp cho thấy 100% gen mã hóa enzym β-lactamase thuộc loại TEM-1 [30] Vì vậy, nói TEM-1 gen mã hoá enzym β-lactamase chiếm tỷ lệ hầu hết số vi khuẩn Hi phân lập được, ngược lại gen ROB-1 chiếm tỷ lệ thấp phụ thuộc vào vị trí địa lý vùng, quốc gia [109] 4.5.3 Ảnh hưởng enzym β-lactamase kết MIC kháng sinh nhóm β-lactam chủng Hib phân lập Nghiên cứu cho thấy enzym β-lactamase có ảnh hưởng đến kết MIC số kháng sinh nhóm β-lactam, dẫn đến kết Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 134 tăng lên nhiều lần chủng Hib có enzym β-lactamase dương tính so với chủng Hib có enzym β-lactamase âm tính Cụ thể, chủng Hib phân lập có enzym β-lactamase dương tính cho kết MIC ampicillin tăng 1000 lần, ampicillin/sulbactum tăng lần Đặc điểm tương tự với nghiên cứu Tamargo Cuba năm 2003 số tác giả khác giới [35], [103] Trên thực tế, enzym β-lactamse vi khuẩn Hi biết khơng có tác dụng cephalosporin hệ không bền với chất ức chế β-lactamase clavulnate, sulbactum [109] Tuy nhiên, nghiên cứu cho thấy có chủng Hib gây VMN có mang gen mã hóa β-lactamase loại ROB-1 Cho dù chủng khơng đề kháng cefaclor kết MIC kháng sinh cefaclor cho giá trị cao so với kháng sinh hệ loại Hib không chứa gen ROB-1 Kết có lẽ phù hợp với cơng trình nghiên cứu khác cho Hi kháng cefaclor qua chế tiết men β-lactamase loại ROB-1 [54] 4.6 Đánh giá mức độ nhạy cảm với số kháng sinh thông dụng chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN trẻ khỏe mạnh tuổi 4.6.1 Đánh giá mức độ nhạy cảm với số kháng sinh thông dụng chủng Hib Kết đánh giá mức độ nhạy cảm với số kháng sinh thông dụng 102 chủng Hib gây VMN 52 chủng Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh, cho thấy vi khuẩn nhạy cảm tốt với số loại kháng sinh như: nhóm cephalosporin (cefaclor, cefotaxim, ceftriaxon, cefpodoxime nhạy cảm 100%), nhóm macrolide (clarithromycin, azithromycin nhạy cảm 100%), rifampicin (nhạy cảm 100%) ampicillin/sulbactum (94,2%-95,8%) tương tự nghiên cứu Phan Lê Thanh Hương cộng năm 2006 [87] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 135 Ngoài ra, kết tương tự số nghiên cứu gần châu Á, châu Âu, Mỹ, Canada Hầu hết nghiên cứu cho thấy kháng sinh, ampicilin/sulbactam, ceftriaxon, cefaclor, cefotaxim, cefpodoxim, meropenem, levofloxacin, rifampicin, azithromycin, clarithromycin xem kháng sinh có độ nhạy cao (xấp xỉ 100%) Hib [28], [96], [100], [103] Tuy nhiên, nghiên cứu Haghiashteiani MT cộng Iran cho thấy 19 chủng Hib phân lập từ bệnh nhi viêm VMN có khả đề kháng cao với loại kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin, cụ thể 47% với cephalotin 42% với ceftriaxon, ceftazidim, cefixim, ceftizoxim, số chủng Hib đưa nghiên cứu thấp (19 chủng) nên tỷ lệ đưa chưa xác Bên cạnh đó, chủng Hib chúng tơi phân lập nghiên cứu lại có tỷ lệ kháng cao với ampicillin (50% Hib gây VMN 48,1% Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh) chloramphenicol (54,9% Hib gây VMN 44,2% Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh) Kết tương tự với nghiên cứu Phan Lê Thanh Hương cộng [6], [87] cho thấy khả đề kháng chủng Hib gây VMN với ampicillin (40,3%); với chloramphenicol (46,5%) Thêm vào đó, nghiên cứu Hàn Quốc, Đài Loan, Trung Quốc hay nghiên cứu Haghiashteiani MT cộng Iran năm 2008 khả đề kháng kháng sinh Hib gây VMN trẻ tuổi cho thấy vi khuẩn đề kháng 42,1% ampicillin; 36,8% chloramphenicol [43], [57], [91] Tại châu Mỹ, nghiên cứu Tarmago cộng năm 2003 khả đề kháng kháng sinh 938 chủng Hib gây VMN trẻ tuổi Cuba cho thấy vi khuẩn đề kháng với ampicillin chloramphenicol là: 46,3% (tất chủng có khả sinh enzym β-lactamase) 44,0% [103] phù hợp với kết giám sát kháng sinh từ năm 1990 – 2000 nước (sự gia tăng mức độ đề kháng tương ứng 40,7% - 54,8% Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 136 ampicillin; 40,1% - 51,6% chloramphenicol) Ngoài ra, nhiều nghiên cứu khác cho thấy Hib ngày gia tăng đề kháng hai loại kháng sinh ampicillin chloramphenicol [92], đặc biệt nước phát triển Mỹ, Canada hay châu Âu hầu hết báo cáo cho thấy hai loại kháng sinh bị Hib đề kháng nhiều Vì vậy, chủng Hib gây VMN phân lập từ trẻ khỏe mạnh tuổi nghiên cứu nhạy cảm 100% với kháng sinh cefaclor, cefotaxim, ceftriaxon, cefpodoxime, clarithromycin, azithromycin rifampicin; 97,1% - 98,1% ampicillin/sulbactum đề kháng 40,7% - 54,8% ampicillin; 40,1% 51,6% chloramphenicol tương đồng với nhiều nghiên cứu giới Trong đó, tượng số chủng vi khuẩn Hib sinh không sinh enzym β-lactamase phân lập từ trẻ VMN trẻ khỏe mạnh kháng ampicillin ampicillin/sulbactum làm lo ngại chế biến đổi cấu trúc PBP giúp Hib đề kháng ampicillin Đây chế đề kháng trở nên trầm trọng tương lai Việt Nam Sở dĩ chế biến đổi PBP Hib cần quan tâm qua chế này, Hib kháng amoxicillin-clavulanate hay cefuroxim [3], [109] 4.6.2 Đánh giá mối liên quan enzym β-lactamase mức độ đề kháng với số kháng sinh thông dụng chủng Hib Sự nhạy cảm với kháng sinh nhóm β-lactam Hi nhìn chung dự đốn khả đề kháng với ampicillin định nghĩa điểm giới hạn (breakpoint) MIC tiêu chuẩn (The Clinical and Laboratory Standards Institute: CLSI) Trong đó, giá trị MIC ≤ 1µg/ml: nhạy cảm; 2µg/ml: trung gian ≥ 4µg/ml: đề kháng Tuy nhiên, số tác giả sử dụng giới hạn (breakpoint) đề kháng với ampicillin không xuất enzym βlactamase để định nghĩa chủng BLNAR, số chủng khác có mức độ nhạy cảm trung gian (intermidiate) thuộc chủng BLNAR Ngồi ra, chưa có Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 137 định nghĩa rõ ràng chủng BLPAR, hầu hết tác giả sử dụng giới hạn đề kháng với amoxicillin-clavulanate ≥ 8µg/ml để định nghĩa chủng [109] Tỷ lệ chủng Hi BLNAR đánh giá có tỷ lệ thấp tồn cầu, số nước tỷ lệ chủng Hi loại phổ biến Điển hình, nghiên cứu Châu Âu với khoảng 1000 chủng nghiên cứu từ năm 1997 đến 2000 cho thấy tỷ lệ Hi loại BLNAR xấp xỉ 10%, Ba Lan Anh xấp xỉ 20% Ngoài ra, nghiên cứu đánh giá cao sử dụng MIC amoxicillin (MIC ≥ 2µg/ml) sử dụng ampicillin để phân loại chủng Hi BLNAR Tuy nhiên, đáng ý tình trạng Nhật Bản, số nghiên cứu báo cáo hầu hết 40% chủng Hib phân lập 50% chủng Hib gây VMN thuộc loại BLNAR [109] Kết nghiên cứu cho thấy tất chủng Hib có enzym β-lactamase dương tính kháng ampicillin, có chủng có enzym β-lactamase âm tính đề kháng với ampicillin Ngồi ra, thấy khả sinh enzym β-lactamase chủng Hib có liên quan đến khả đề kháng với kháng sinh chloramphenicol Cụ thể, chủng Hib có enzym β-lactamase dương tính có tỷ lệ đề kháng cao (90% Hib gây VMN 87,5% Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh) so với chủng khơng có enzym (20% Hib gây VMN 7,1% Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh) Kết tương tự với nghiên cứu Tamargo Cuba năm 2003, cho thấy chủng Hib gây VMN có enzym β-lactamase dương tính 100% đề kháng với ampicillin 90,8% đề kháng với chloramphenicol [103] Khả đề kháng chloramphenicol Hi xác định có liên quan đến sản xuất enzym chloramphenicol acetyltransferase (CAT) mã hóa gen Cat Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 138 nằm plasmid, có tác dụng ngăn cản kháng sinh ngấm vào tế bào vi khuẩn để tác dụng lên ribosome Gen Cat mang plasmid tiếp hợp (conjugative plasmid) có trọng lượng phân tử khoảng 34 × 106 – 46 × 106, plasmid thường mang gen mã hóa tính chất đề kháng tetracyclin, ampicillin [109] Vì vậy, chủng BLPAR chứa gen đề kháng ampicillin chloramphenicol nằm plasmid có khả di truyền tế bào vi khuẩn (transferable plasmid) dẫn đến lan truyền gen đa kháng (multiple drug resistance) [6], [87], [103], [104] Với kết thu được, thấy để điều trị hiệu hạn chế tối đa lan truyền vi khuẩn Hib kháng thuốc mục tiêu phải đạt diệt hết vi khuẩn Vì vậy, bệnh nhân cần điều trị cách khoa học Cụ thể, bên cạnh việc điều trị triệu chứng, vai trò xét nghiệm vi sinh cần trọng Nếu phân lập vi khuẩn, tối thiểu phải xem xét khả sinh b-lactamase vi khuẩn có hay khơng test cefinase, blactamase (+) nên tránh khơng dùng thuốc dịng penicillin mà phải dùng loại thuốc phối hợp ampicillin/sulbactum amoxillin/clavulanic (bởi sulbactum clavulanic có vai trị ức chế enzym b-lactamase) dùng nhóm cephalosporins hay nhóm thuốc khác mà vi khuẩn nhạy cảm phù hợp với lứa tuổi trẻ Trên thực tế, tốt phải điều trị theo kháng sinh đồ MIC phải dùng đủ liều lượng Dùng thuốc kháng sinh phù hợp, đủ liều lượng cách khoa học diệt vi khuẩn gây bệnh (điều trị nguyên nhân), ngăn chặn khả lan truyền tính kháng thuốc vi khuẩn (qua plasmid gen kháng thuốc nằm plasmid) khả lan truyền vi khuẩn kháng thuốc mà hạn chế tượng đột biến gen gây kháng thuốc vi khuẩn (là xu hướng tất yếu chọn lọc tự nhiên) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 139 4.7 So sánh đặc điểm sinh học chủng Hib gây VMN Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh tuổi Nghiên cứu cho thấy phân bố tỷ lệ chủng Hib gây VMN Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh tuổi theo biotype, khả sinh enzym β-lactamase, gen mã hóa enzym β-lactamase mức độ nhạy cảm với kháng sinh khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê Tuy nhiên, phân bố chủng Hib theo genotype hầu hết có khác chủng phân lập từ bệnh nhi VMN chủng phân lập từ trẻ khỏe mạnh tuổi; có 01 chủng Hib (không xếp loại) 02 chủng (không xếp loại) phân lập từ trẻ khỏe mạnh lần lượt: có genotype với 01 chủng gây VMN có mối liên quan gần gen với 02 chủng gây VMN Vì vậy, đánh giá đặc điểm biotype, khả sinh enzym β-lactamase, gen mã hóa enzym βlactamase, mức độ nhạy cảm với kháng sinh Hib phân lập từ bệnh nhi VMN Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh khơng có khác Sự khác chủng Hib phân lập từ bệnh nhi hay trẻ khỏe mạnh thể phân loại genotype Điều minh chứng cho thấy để gây bệnh VMN, chủng Hib không phụ thuộc vào đặc điểm biotype, serotype mà phải cần nhiều đến yếu tố độc lực khác [39] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 140 KẾT LUẬN 4.1 Tỷ lệ Hib phân lập từ bệnh nhi VMN giảm dần theo nhóm lứa tuổi < 12 tháng tuổi, 12 - 24 tháng tuổi > 24 tháng tuổi, tương ứng: 84,3%; 10,8% 4,9% Khơng có khác biệt tỷ lệ phân lập hai giới 4.2 Tỷ lệ trẻ khỏe mạnh tuổi Nhà trẻ mẫu giáo mang Hib chiếm 24,5% Tỷ lệ khơng có liên quan đến giới, nhóm tuổi trẻ điều kiện Nhà trẻ-mẫu giáo (thành thị hay nơng thơn) Trong đó, tỷ lệ Hib phân lập có xu hướng giảm dần theo nhóm lứa tuổi: < 24 tháng tuổi, 24 – 36 tháng tuổi, > 36 – 48 tháng tuổi > 48 – 60 tháng tuổi, tương ứng: 25,9%; 25,0%; 23,6% 23,5% 4.3 Tỷ lệ loại biotype chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN tuổi là: I (16,7%), II (70,6%), III (8,8%), IV (2,9%) V (1,0%); trẻ khỏe mạnh tuổi là: I (26,9%), II (48,1%), III (9,6%), IV(11,5%) V (3,8%) Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê tỷ lệ loại biotype chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN trẻ khoẻ mạnh tuổi 4.4 Tỷ lệ chủng Hib có enzym β-lactamase (+) tương ứng: 50,0% (đối với Hib gây VMN) 46,2% (đối với Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh) Tỷ lệ loại gen mã hoá enzym β-lactamase tương ứng: TEM-1: 98,0% ROB1: 2,0% (đối với Hib gây VMN), TEM-1: 95,8% ROB-1: 4,2% (đối với Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh) Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê tỷ lệ sinh enzym β-lactamase gen mã hóa enzym chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN trẻ khỏe mạnh tuổi 4.5 Những chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN trẻ khỏe mạnh tuổi nhạy cảm tốt với số loại kháng sinh: cefaclor, cefotaxim, ceftriaxon, cefpodoxime, clarithromycin, azithromycin, rifampicin (100%) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 141 ampicillin/sulbuctam (97,1% chủng Hib gây VMN; 98,1% chủng Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh) - Hib đề kháng nhiều kháng sinh ampicillin (50,0% Hib gây VMN 48,1% Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh tuổi) choloramphenicol (54,9% Hib gây VMN 44,2% Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh tuổi) - Khả đề kháng kháng sinh choloramphenicol vi khuẩn Hib có liên quan với khả sinh enzym β-lactamase vi khuẩn 4.6 Đặc điểm phân bố genotype (theo kỹ thuật PFGE) Hib gây VMN có tính tập trung vào nhóm genotype chính, khơng phụ thuộc vào năm phân lập Ngược lại, chủng Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh có genotype tản mạn vào nhiều gentype khác nhau, cho dù chủng vi khuẩn phân lập vòng năm - Phân loại PFGE chủng Hib phân lập không liên quan với khả sinh enzym β-lactam loại biotype - 1,9% (01) chủng Hib phân lập từ trẻ khỏe mạnh có chung genotype với 01 chủng Hib gây VMN 3,9% (02) chủng Hib khác phân lập từ trẻ khỏe mạnh có genotype liên quan gần gen với genotype 02 chủng Hib khác gây VMN 4.7 Giữa chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN trẻ khỏe mạnh khơng có khác biệt đặc điểm phân loại biotype, khả sinh enzym βlactamase, gen mã hóa enzym mức độ nhạy cảm với kháng sinh Tuy nhiên, chủng Hib phân lập từ bệnh nhi VMN trẻ khỏe mạnh có khác biệt với phân loại genotype (theo kỹ thuật PFGE) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 142 KIẾN NGHỊ Tiến hành tiêm chủng mở rộng vacxin cộng hợp Hib cho trẻ từ sau 02 tháng tuổi Để điều trị có hiệu phịng ngừa phát triển lây lan chủng vi khuẩn Hib kháng thuốc cần coi trọng công tác xét nghiệm điều trị theo kháng sinh đồ Đảm bảo hiệu điều trị diệt khuẩn: cần thu thập chủng vi khuẩn Hib gây bệnh, theo dõi thay đổi tính nhạy cảm với kháng sinh để phát chủng có gen kháng thuốc đột biến (thuộc chủng BLNAR) Tiến hành thu thập số chủng Hib từ bệnh nhi VMN từ trẻ khỏe mạnh tuổi phạm vi toàn quốc với số lượng nhiều để đánh giá phát tán genotype gây VMN cho trẻ tuổi cộng đồng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn