(Luận văn) nghiên cứu chuyển gen echb1 làm tăng chiều dài sợi gỗ vào bạch đàn lai up (eucalyptus urophylla x e pellita) thông qua vi khuẩn agrobacterium tumefaciens

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu Nguyễn Thị Việt Hà an va n to tn gh NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN EcHB1 LÀM TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ VÀO BẠCH ĐÀN LAI UP (Eucalyptus urophylla x E pellita) THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens p ie d oa nl w an nv a lu LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC fu oi m ll at nh z z om l.c gm @ Hà Nội - 2021 an Lu n va ac th si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Việt Hà lu an va n to tn gh NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN EcHB1 LÀM TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ VÀO BẠCH ĐÀN LAI UP (Eucalyptus urophylla x E pellita) THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens p ie oa nl w Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm d an nv a lu Mã số: 8420114 fu LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC oi m ll at nh NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: z Hƣớng dẫn 1: TS Trần Hồ Quang z an Lu Hà Nội - 2021 om l.c gm @ Hƣớng dẫn 2: TS Lê Sơn n va ac th si Lời cam đoan Tôi xin cam đoan nội dung luận văn kết nghiên cứu thân dƣới hƣớng dẫn TS Trần Hồ Quang TS Lê Sơn Mọi kết nghiên cứu nhƣ ý tƣởng tác giả khác (nếu có) đƣợc trích dẫn cụ thể Đề tài luận văn chƣa đƣợc bảo vệ hội đồng bảo vệ luận văn thạc sĩ nhƣ chƣa đƣợc công bố phƣơng tiện Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Hà Nội, ngày tháng năm 2021 lu Ngƣời cam đoan an va n to tn gh Nguyễn Thị Việt Hà p ie d oa nl w fu an nv a lu oi m ll at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si Lời cảm ơn Tôi xin cảm ơn Học viện Khoa học Công nghệ, phịng Đào tạo, thầy giáo, giáo Học Viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn Lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam nhiệt tình giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ q trình học tập trƣờng Tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, tồn thể cán Bộ mơn Sinh học phân tử - Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam lu an va n to tn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hƣớng dẫn, TS Trần Hồ Quang (Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam) TS Lê Sơn (Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam) tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn gh p ie d oa nl w Luận văn đƣợc sử dụng phần số liệu kết từ đề tài cấp Nhà nƣớc “Nghiên cứu tạo giống bạch đàn lai biến đổi gen cho chiều dài sợi gỗ (giai đoạn 2)” ThS Trần Đức Vƣợng làm chủ nhiệm, thuộc Chƣơng trình trọng điểm phát triển ứng dụng Công nghệ sinh học Nông nghiệp Phát triển nông thôn đến 2020 mà Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp đơn vị thực Xin chân thành cám ơn an nv a lu fu Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc gửi tới gia đình bạn bè giúp đỡ, động viên khích lệ suốt thời gian học tập thực đề tài oi m ll at nh z z Học viên om l.c gm @ Hà Nội, ngày tháng năm 2021 an Lu Nguyễn Thị Việt Hà n va ac th si Danh mục ký hiệu chữ viết tắt STT Từ viết tắt Viết đầy đủ AS BAP CNSH ĐC ĐHST Điều hòa sinh trƣởng ADN Acid Deoxyribonucleic IBA Indole-3-Butyric Acid IFTIB lu Acetosyringone 6-Benzyl Amino Purine Công nghệ sinh học Đối chứng an va n to tn gh p ie Institute of Forest Tree Improvement and Biotechnology oa nl w Km Kanamycin 10 LB Môi trƣờng nuôi cấy Luria and Betani d nv a lu Môi trƣờng nuôi cấy Murashige & Skoog MS 12 NAA 13 OD Mật độ quang học (Optical Density) 14 PCR Phản ứng trùng hợp chuỗi (Polymerase Chain Reaction) fu an 11 oi m ll 1-Naphthyl Acetic Acid at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si Danh mục bảng Bảng 1.1 Các lồi bạch đàn đƣợc nghiên cứu chuyển gen thơng qua vi khuẩn A tumefaciens 27 Bảng 2.1 Các cặp mồi sử dụng nghiên cứu 40 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 40 Bảng 2.3 Chu trình phản ứng PCR 40 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin 42 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ Kanamycin đến khả rễ 44 lu Bảng 3.3 Ảnh hƣởng tuổi vật liệu đến mẫu tạo mô sẹo 45 an va Bảng 3.4 Ảnh hƣởng thời gian tiền nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 47 n to tn Bảng 3.5 Ảnh hƣởng mật độ vi khuẩn đến tỷ lệ chồi tái sinh 49 gh p ie Bảng 3.6 Ảnh hƣởng thời gian nhiễm khuẩn đến tỷ lệ tạo mô sẹo 50 oa nl w Bảng 3.7 Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 52 d Bảng 3.8 Khả sống sót chồi chuyển gen sau lần chọn lọc 56 a lu fu an nv Bảng 3.9 Kết kiểm tra khả rễ chồi chuyển gen sau lần chọn lọc 59 m ll Bảng 3.10 So sánh hình thái thân chuyển gen với đối chứng 60 oi Bảng 3.11 So sánh hình thái chuyển gen đối chứng 61 nh at Bảng 3.12 Đánh giá sinh trƣởng chiều cao vƣờn ƣơm sau 1, tháng 63 z z @ gm Bảng 3.13 Tổng hợp kết đo kích thƣớc giai đoạn tháng tuổi 64 om l.c Bảng 3.14 Tổng hợp kết đo kích thƣớc giai đoạn tháng tuổi 65 an Lu n va ac th si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Danh mục hình vẽ, đồ thị Hình 1.1 Tỷ lệ trồng biến đổi gen/tổng diện tích loại nƣớc trồng biến đổi gen lớn giới Hình 1.2 Tổng giá trị (USD) thu đƣợc từ trồng biến đổi gen toàn cầu Hình 1.3 Bạch đàn lai UP trồng khảo nghiệm Yên Bình – Yên Bái 21 Hình 1.4 Cây Bạch đàn lai UP phƣơng pháp nhân giống in vitro 23 Hình 2.1 Vật liệu Bạch đàn lai UP sử dụng chuyển gen 31 Hình 2.2 Cấu trúc vector pGWB2/35S/EcHB1 32 lu Hình 2.3 Sơ đồ quy trình tái sinh thơng qua phơi soma cho Bạch đàn lai UP 34 an va n to Hình 2.4 Vị trí đƣợc chọn để đánh giá hình thái 38 tn gh Hình 3.1 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Km đến chồi chƣa chuyển gen 43 p ie oa nl w Hình 3.2 Bạch đàn lai UP 15 ngày tuổi tạo mơ sẹo mơi trƣờng chọn lọc 45 Hình 3.3 Mẫu bật chồi sau chuyển gen tiền nuôi cấy 48 48 d Hình 3.4 Mẫu nhiễm khuẩn với thời gian lần lƣợt sau 10 phút, 15 phút, 20 phút 51 nv a lu fu an Hình 3.5 Sơ đồ quy trình chuyển gen EcHB1 vào Bạch đàn lai UP 54 oi m ll Hình 3.6 Mẫu chuyển gen tái sinh môi trƣờng chọn lọc 55 nh Hình 3.7 Bình nhân chồi dịng Bạch đàn lai UP chuyển gen EcHB1 55 at Hình 3.8 Chồi chuyển gen EcHB1 môi trƣờng chọn lọc 58 z z Hình 3.9 Hình thái thân dòng bạch đàn chuyển gen đối chứng 62 gm @ om l.c Hình 3.10 Cây bạch đàn chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 63 an Lu Hình 3.11 Hình thái kích thƣớc chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 64 n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.12 Hình thái kích thƣớc chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 66 Hình 3.13 Bạch đàn chuyển gen rễ môi trƣờng chọn lọc vƣờn ƣơm 67 Hình 3.14 Cây chuyển gen EcHB1 trồng vƣờn ƣơm 67 Hình 3.15 Kết chạy điện di kiểm tra ADN số dòng Bạch đàn lai UP 68 Hình 3.16 Kết PCR 40 dịng bạch đàn chuyển gen EcHB1 69 Hình 3.17 Kết kiểm tra có mặt gen EcHB1 PCR 70 lu an va n to tn gh p ie d oa nl w fu an nv a lu oi m ll at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an MỤC LỤC MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 1.1.1 Hiện trạng vai trò trồng biến đổi gen 1.1.1.1 Hiện trạng trồng biến đổi gen 1.1.1.2 Vai trò trồng biến đổi gen lu an 1.1.1.3 Tình hình trồng biến đổi gen nước ta va Các phƣơng pháp chuyển gen 11 1.1.2 n to tn 1.1.2.1 Chuyển gen trực tiếp 11 gh 1.1.2.2 Chuyển gen gián tiếp 12 p ie 1.1.3 Tình hình nghiên cứu chuyển gen lâm nghiệp 13 oa nl w 1.1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 d 1.1.3.2 Các nghiên cứu nước 15 a lu 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÂY BẠCH ĐÀN LAI UP 17 nv fu an 1.2.1 Tổng quan bạch đàn Bạch đàn lai UP 17 m ll 1.2.1.1 Tổng quan bạch đàn 17 oi 1.2.1.2 Nghiên cứu phát triển giống Bạch đàn lai UP Việt Nam 20 nh at 1.2.3 Các hƣớng cải thiện giống bạch đàn ứng dụng Công nghệ sinh học 22 z z @ gm 1.2.3.1 Nhân giống vơ tính in vitro bạch đàn 22 om l.c 1.2.3.2 Tái sinh in vitro thông qua hình thành callus phơi soma 24 an Lu 1.2.3.3 Nghiên cứu phát triển sử dụng thị phân tử chọn tạo lai giống 25 n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 1.2.3.4 Chuyển gen cho loài bạch đàn 26 1.2.4 Gen EcHB1 ứng dụng cải thiện chiều dài sợi gỗ 28 1.2.4.1 Vai trò nhân tố phiên mã sinh trưởng thực vật 28 1.2.4.2 Nhân tố phiên mã gen EcHB1 30 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 31 2.1.1 Vật liệu thực vật 31 lu 2.1.2 Vật liệu di truyền chủng vi khuẩn 31 an va 2.1.3 Trang thiết bị hóa chất 32 n to 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 tn gh 2.2.1 Nghiên cứu tái sinh in vitro dòng Bạch đàn UP 33 p ie 2.2.2 Xác định ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin 35 oa nl w 2.2.3 Xác định tuổi vật liệu đến tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 35 2.2.4 Xác định thời gian tiền nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 36 d nv a lu 2.2.5 Xác định mật độ tế bào vi khuẩn A tumefaciens 36 fu an 2.2.6 Xác định thời gian nhiễm khuẩn đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 36 m ll oi 2.2.7 Xác định thời gian đồng nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 37 at nh z 2.2.8 Tái sinh từ mẫu biến nạp gen, nhân dòng biến nạp gen, rễ trồng chăm sóc bên ngồi vƣờn ƣơm 37 z @ gm 2.2.9 Phƣơng pháp đánh giá hình thái chuyển gen 37 om l.c 2.2.10 Phƣơng pháp tách chiết ADN tổng số 38 2.2.11 Xác định có có mặt gen chuyển gen PCR 39 Lu an 2.2.12 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm xử lý số liệu 41 n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng Thành phần môi trƣờng nuôi cấy vi khuẩn LB (Bertani, 1951) Môi trƣờng Thành phần Hàm lƣợng (g/l) Môi trƣờng LB lỏng Tryptone 10 Yeast Extract NaCl 10 Tryptone 10 Yeast Extract NaCl 10 Agar Môi trƣờng LB đặc lu an va Dịch lỏng tạo dịch Môi trƣờng ½ MS n huyền phù vi khuẩn to tn gh p ie d oa nl w fu an nv a lu oi m ll at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng Thành phần môi trƣờng nuôi cấy Thành phần Loại môi trƣờng Tạo chồi in vitro MS + 30g/l sucrose + 7g/l Agar MS + 30g/l sucrose + 15mg/l Riboflavin Nhân nhanh & tạo đa chồi + 0,5mg/l BAP + 0,2mg/l NAA+ 6,5g/l Agar MS* + 20g/l Sucrose + 100ml Nƣớc dừa + 3mg/l Tạo vật liệu nhận gen BAP + 0,5mg/l NAA +100 µM AS + 2,4g/l Gelrite lu an 10g/l Tryptone + 5g/l Yeast Extract + 10g/l NaCl va Nuôi cấy vi khuẩn A n + 7g/l Bactor Agar + 50 mg/l Kanamycin + 50 to tumefaciens tạo khuẩn lạc tn mg/l Rifamycin 10g/l Tryptone + 5g/l Yeast Extract + 10g/l NaCl gh Tạo dịch huyền phù vi MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l + 50 mg/l Kanamycin + 50 mg/l Rifamycin oa nl w p ie khuẩn Đồng nuôi cấy NAA + 100 µM AS + 2,4g/l Gelrite d a lu MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA + 15 mg/l Riboflavin + 400 mg/l Cefotaxim oi sinh chồi MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l m ll Tái sinh chọn lọc phát NAA + 400 mg/l Cefotaxim + 2,4g/l Gelrite fu an nv Diệt khuẩn tái sinh chồi at nh + 150 mg/l Kanamycin + 2,4g/l Gelrite ½ MS + 15 g/l Sucrose + mg/l IBA + mg/l z z Ra rễ chọn lọc om l.c gm @ NAA + g/l Agar + 50 mg/l Kanamycin an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng Danh mục trang thiết bị cần thiết TT Máy móc, trang thiết bị, vật tƣ TT Máy móc, trang thiết bị, vật tƣ Máy lọc nƣớc 17 Đèn tia cực tím treo tƣờng Máy sản xuất nƣớc cất lần 18 Máy điều hòa nhiệt độ Nồi hấp vô trùng 19 Máy hút ẩm Tủ sấy vô trùng 20 Máy lắc gia nhiệt Cân phân tích 21 Quạt thơng gió gắn tƣờng Bình tam giác 250 ml, 350 ml lu an Cân kỹ thuật 500 ml; bình trụ thủy tinh rễ; 22 va đĩa petri vô trùng n to Máy khuấy từ gia nhiệt Tủ đựng hóa chất dự trữ bảo quản 23 tn gh Bếp gas, nồi đun, loại cốc p ie Máy đo pH để bàn đong, ống đong, bình định mức, 24 pipet, bình chứa, thìa đong, ống oa nl w hút, … d Tủ lạnh sâu -80 oC, Tủ lạnh sâu - a lu 20 oC; Tủ mát oC, Tủ ổn nhiệt Máy nghiền mẫu 26 Máy đo nồng độ quang phổ 27 Bộ chạy điện di fu có gắn máy lắc 25 an nv oi m ll 10 Tủ an toàn sinh học cấp Bộ panh, kéo, dao cấy, que cấy at khuẩn, đèn cồn nh 11 Máy ảnh 13 Giàn ni phịng nuôi 29 14 Giá xếp môi trƣờng 30 Tủ hút khí độc 15 Giá úp chai lọ 31 Máy bơm, hệ thống tƣới, che sáng 16 Thiết bị kiểm tra nhiệt độ, độ ẩm 32 Các loại vật tƣ mau hỏng khác z 28 @ z 12 Ghế ngồi + Xe đẩy om l.c gm Máy ly tâm an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU Ảnh hƣởng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin Trong chọn lọc chồi Sau tuần: lu Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần) SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 1250 250 10 1222 244.4 5.3 50 1084 216.8 17.2 75 903 180.6 60.3 100 667 133.4 38.8 150 229 45.8 14.2 an va n to tn gh ANOVA Source of Variation SS Between Groups 152848.3 Within Groups 543.2 p ie d oa nl w MS F P-value F crit 1.40366E1350.647717 28 2.620654148 30569.66 24 22.63333333 a lu 153391.5 29 fu an nv Total df oi m ll at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Sau tuần Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần) lu an va n to SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 1250 250 10 1084 216.8 29.7 50 806 161.2 72.7 75 348 69.6 127.3 100 209 41.8 15.7 150 0 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between 3.68069EGroups 254801.77 50960.35333 1245.974409 28 2.620654148 Within Groups 981.6 24 40.9 tn gh Total 255783.37 29 p ie Sau tuần oa nl w Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần d nv a lu Sum 1250 945 555 166 111 fu an Average 250 189 111 33.2 22.2 Variance 87.5 37.5 3.7 7.7 oi m ll SUMMARY Groups Count 10 50 75 100 150 z z 51052.22 545.6 24 22.73333333 255806.7 29 F crit 2.620654148 an P-value 3.2045E2245.698827 31 Lu 255261.1 F om MS l.c df gm SS @ Total at nh ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Trong chọn lọc rễ Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) SUMMARY Groups 10 50 75 Count 5 5 lu an va n Sum 141 0 Average 28.2 0 Variance 14.7 0 df MS F 994.05 270.4897959 16 3.675 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 2982.15 Within Groups 58.8 P-value 6.46736E14 F crit 3.238871517 to tn Total 3040.95 19 gh p ie Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) oa nl w Sum 876 0 Average 175.2 0 Variance 41.7 0 fu an nv oi m ll SS df MS F 115106.4 38368.8 166.8 16 10.425 115273.2 19 at nh 3680.460432 P-value F crit 6.41224E23 3.238871517 z z om l.c gm @ Total a lu ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Count 5 5 d SUMMARY Groups 10 50 75 an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) SUMMARY Groups 10 50 75 Count 5 5 Sum 1191 0 Average 238.2 0 Variance 31.7 0 SS df MS F 212772.15 126.8 16 212898.95 19 ANOVA lu an va n to Source of Variation Between Groups Within Groups tn gh p ie Total 70924.05 8949.40694 P-value F crit 5.28E-26 3.238872 7.925 d oa nl w fu an nv a lu oi m ll at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Ảnh hƣởng tuổi vật liệu đến khả biến nạp gen Đoạn thân Anova: Single Factor SUMMARY Groups 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày lu an va n to tn ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups gh p ie Total Count 5 5 Sum 230 336 286 202 Average 46 67.2 57.2 40.4 Variance 34 51.2 99.2 6.8 SS df MS F 2133.4 764.8 16 2898.2 19 Average 39.2 62.4 52 37.6 Variance 9.2 20.8 34 4.8 P-value F crit 6.87E711.1333 14.87727 05 9.005937 47.8 oa nl w Mảnh Anova: Single Factor d SUMMARY Groups 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày Sum 196 312 260 188 fu an nv a lu Count 5 5 oi m ll nh SS df MS 2044 275.2 16 681.3333 17.2 Total 2319.2 19 at ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups z z F @ om l.c gm 39.6124 P-value F crit 1.24E07 9.005937 an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Ảnh hƣởng thời gian tiền nuôi cấy Đoạn thân Anova: Single Factor SUMMARY Groups 24 48 72 lu an va n to ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups tn gh Total Count 5 5 Sum 207.3 263.3 323.3 223.3 Average 41.46 52.66 64.66 44.66 Variance 9.503 63.268 48.023 25.578 SS df MS F 1602.4 585.488 16 534.1333 36.593 14.5966 2187.888 19 P-value F crit 7.66E05 9.005937 p ie oa nl w Mảnh Anova: Single Factor d Sum 183.3 233.3 293.3 186.6 fu an Average 36.66 46.66 58.66 37.32 Variance 27.723 16.668 19.868 18.912 oi m ll at nh z 1588.834 529.6112 332.684 16 20.79275 1921.518 19 F P-value F crit @ gm 25.47095 2.48E-06 9.005937 an Lu MS om df l.c SS z Total Count 5 5 nv ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups a lu SUMMARY Groups 24 48 72 n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Xác định mật độ tế bào vi khuẩn A tumefaciens Anova: Single Factor SUMMARY Groups 0,1 0,3 0,5 0,7 lu an va n to tn ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups gh p ie Total Count 5 5 Sum 50 66 101 50 Average 10 13.2 20.2 10 Variance 2.5 0.7 1.7 SS df MS F P-value F crit 346.95 115.65 42.44036697 7.64E-08 3.238872 43.6 16 2.725 390.55 19 d oa nl w fu an nv a lu oi m ll at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Ảnh hƣởng thời gian nhiễm khuẩn Đoạn thân Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups Count 10 15 20 lu an va n to tn SS df MS F P-value F crit 32333.33 8083.333 577.381 8.9E-12 3.47805 140 10 14 32473.33 14 gh ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups p ie Mảnh oa nl w Total Sum Average Variance 0 250 83.33333 25.33333 400 133.3333 20.33333 350 116.6667 20.33333 300 100 d Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) Sum Average Variance 0 210 70 43 420 140 73 290 96.66667 32.33333 260 86.66667 49.33333 fu oi m ll at nh Count 3 3 an nv z z 7810 395.3333 10 39.53333 31635.33 14 F crit 197.5548 1.81E-09 3.47805 an P-value Lu 31240 F om MS l.c df gm SS @ Total a lu SUMMARY Groups 10 15 20 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy Đoạn thân Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 24 213 71 48 415 138.3333 24.33333 72 437 145.6667 20.33333 96 411 137 28 120 303 101 16 ANOVA lu an va n to tn gh Source of Variation Between Groups Within Groups p ie Mảnh df 12108.27 183.3333 10 18.33333 12291.6 14 d oa nl w Total SS Pval MS F ue F crit 4.37E3027.067 165.1127 09 3.47805 a lu SUMMARY Groups 24 48 72 96 120 Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) Sum 228 427 446 417 306 fu an nv Count 3 3 Variance 16.33333 26.33333 21 oi m ll Average 76 142.3333 148.6667 139 102 at nh ANOVA z z Pval ue 1.7E09 2946.567 147.3333 11933.6 10 14 14.73333 199.9932 3.47805 an F crit Lu 11786.27 F om MS l.c df gm SS @ Source of Variation Between Groups Within Groups Total n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình thái thân giai đoạn in vitro Số lóng trung bình Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row lu an Sum 10.13 11.13 9.7 10.94 Average 3.376667 3.71 3.233333 3.646667 Variance 0.004633 0.0012 0.004233 0.004633 MS F va n to SS df 0.454967 0.0294 Total 0.484367 11 tn ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups P-value F crit 3.26E0.151656 41.26682 05 4.066181 0.003675 gh p ie oa nl w Chiều dài lóng trung bình Anova: Single Factor d SUMMARY a lu fu an Sum 2.67 3.18 2.55 oi m ll Count 3 nv Groups Row Row Row 3.1 ANOVA Source of Variation Between Groups SS df 0.0971 0.06326 0.16036 z z 4.092729 P-value 0.04926 F crit 4.06618 om l.c an Lu 11 F gm MS 0.03236 0.00790 @ Within Groups Total 0.019733 at Average 0.89 1.06 0.85 1.03333 nh Row Varianc e 0.0039 0.0028 0.0052 n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Chiều cao chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row lu ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups an va n to tn gh Total Sum 8.53 9.55 8.76 9.35 Average 2.843333 3.183333 2.92 3.116667 Variance 0.000933 0.002633 0.0063 0.001033 SS df MS F 0.231492 0.077164 28.31702 0.0218 0.002725 0.253292 11 P-value F crit 0.00013 4.066181 p ie oa nl w Chiều dài trung bình d Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row ANOVA Source of SS Variation Between 31.634625 Groups Within 1.3948 Groups Total 33.029425 fu an nv a lu Sum Average Variance 15.86 5.286666667 0.487033333 23.57 7.856666667 0.046433333 20.54 6.846666667 0.021033333 29.28 9.76 0.1429 oi m ll at nh MS 10.544875 0.17435 F z df P-value z 7.6927E4.066181 06 60.48107256 om l.c gm @ 11 F crit an Lu n va ac th Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn si C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn