(Luận văn) nhân dòng và thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa anthocyanidin reductase của cây chè (camellia sinensis)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH lu an n va GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) p ie gh tn to NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN d oa nl w ll u nf va an lu oi m LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z at nh z m co l gm @ an Lu THÁI NGUYÊN - 2018 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH lu an n va CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) p ie gh tn to NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE nl w Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học d oa Mã số: 8420201 ll u nf va an lu oi m LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z at nh z gm @ Người hướng dẫn khoa học: TS Huỳnh Thị Thu Huệ TS Hoàng Thị Thu Yến m co l an Lu THÁI NGUYÊN - 2018 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả lu an n va Dương Trung Thành p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Huỳnh Thị Thu Huệ - Phòng đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam; TS Hồng Thị Thu Yến - Khoa Cơng nghệ Sinh học Trường Đại học Khoa học - người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu để tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn thầy cô tập thể cán Khoa Công nghệ Sinh học, lu cảm ơn lãnh đạo Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên cán an n va công tác Viện Nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm Khoa học Công Tôi xin chân thành cảm ơn Cử nhân Phạm Thị Hằng - Phòng đa dạng gh tn to nghệ Việt Nam giúp đỡ tơi q trình thực đề tài p ie sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ oa nl học w Việt Nam, tận tình dẫn giúp đỡ tơi hồn thành đề tài nghiên cứu khoa d Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Dương an lu Trung Dũng – Khoa Nông học – Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên u nf va giúp đỡ thời gian thu thập vật liệu nghiên cứu làm đề tài ll Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè m oi đồng nghiệp cổ vũ, động viên suốt thời gian qua z at nh Tác giả z l gm @ m co Dương Trung Thành an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU lu Lý chọn đề tài an Mục tiêu đề tài va n Nội dung nghiên cứu gh tn to Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ie 1.1 SƠ LƯỢC VỀ CÂY CHÈ p 1.1.1 Nguồn gốc, lịch sử phát triển chè nl w 1.1.2 Đặc điểm sinh học chè d oa 1.1.3 Giá trị chè an lu 1.2 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT VÀ NGHIÊN CỨU CHÈ TRÊN THẾ GIỚI u nf va VÀ VIỆT NAM 1.2.1 Tình hình sản xuất chè giới Việt Nam ll oi m 1.2.1.1 Tình hình sản xuất chè giới z at nh 1.2.1.2 Tình hình sản xuất chè Việt Nam 11 1.2.2 Tình hình nghiên cứu chè giới Việt Nam 14 z 1.3 CATECHIN VÀ ANTHOCYANIDIN REDUCTASE Ở CHÈ 16 @ l gm 1.3.1 Catechin tác dụng catechin 16 m co 1.3.2 Cơ chế sinh tổng hợp catechin chè 19 1.3.3 Anthocyanidin reductase gen ANR quy định tổng hợp anthocyanidin an Lu reductase 20 n va ac th si iv Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Vật liệu nghiên cứu 23 2.1.1 Nguyên liệu 23 2.1.2 Hóa chất 23 2.1.3 Thiết bị 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Phương pháp tách chiết RNA tổng số 24 2.2.2 Điện di RNA tổng số 25 lu 2.2.3 Tổng hợp cDNA 26 an 2.2.4 Nhân gen ANR kĩ thuật PCR 26 va n 2.2.5 Tinh sản phẩm PCR 28 gh tn to 2.2.6 Tách dòng gen ANR 29 ie 2.2.7 Xác định trình tự gen 32 p 2.2.8 Xử lí số liệu phần mềm chuyên dụng 33 nl w 2.2.9 Thiết kế vector biểu 33 d oa 2.3 Sơ đồ nghiên cứu 34 an lu Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 u nf va 3.1 Khuếch đại gen ANR từ mẫu chè nghiên cứu 35 3.2 Tạo dòng gen, xác định phân tích trình tự gen mã hóa anthocyanidin ll oi m reductase 37 z at nh 3.3 Thiết kế vector biểu vi khuẩn mang gen ANR 45 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 z gm @ KẾT LUẬN 48 KIẾN NGHỊ 48 l m co TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 an Lu n va ac th si v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Nghĩa tiếng Việt Từ viết Nghĩa tiếng Anh tắt lu an n va Anthocyanidin reductase Anthocyanidin reductase cDNA DNA bổ sung Complementary DNA DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxide C Catechin Catechin CsANR Gen ANR chè ANR gene of Camellia sinensis DNA Axit Deoxiribonucleic Deoxyribonucleic Acid dNTP dNTP Deoxynucleoside triphosphate Đtg Đồng tác giả et al EC Epicatechin Epicatechin p ie gh tn to ANR Epicatechin-3-O-gallate Epicatechin-3-O-gallate w Axit etylene diamin tetraaxetic Ethylene Diamine Tetraacetic oa nl EDTA ECG d Acid lu Epigallocatechin Epigallocatechin EGCG Epigallocatechin-3-O-gallate Epigallocatechin-3-O-gallate EtBr Ethidium Bromide Ethidium Bromide GC Gallocatechin Kb Kilô bazơ LAR Leuacoanthocyanidin reductase LB Môi trường LB NAD Nicotinamid adenine dinucleotide Nicotinamid adenine dinucleotide NADP Nicotinamid adenine dinucleotide Nicotinamid adenine dinucleotide ll u nf va an EGC m oi Gallocatechin z at nh Kilo base z Leuacoanthocyanidin reductase @ m co l gm Luria Bertani phosphate an Lu phosphate n va ac th si vi ORF Khung đọc mở Open reading frame PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp Polymerase Chain Reaction lu Primer F Mồi xuôi Primer forward Primer R Mồi ngược Primer reverse RNA Axit Ribonucleic Ribonucleic Acid RNase Enzyme phân hủy RNA Ribonuclease TAE TAE Tris Acetate EDTA Taq Vi khuẩn chịu nhiệt Thermus aquaticus UTR Vùng không dịch mã untranslated region an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Diện tích, suất, sản lượng chè giới giai đoạn 2010 - 2016 Bảng 1.2 Diện tích, suất, sản lượng số nước giới năm 2016 10 Bảng 1.3 Tình hình diện tích, suất, sản lượng chè Việt Nam năm gần 13 lu Bảng 1.4 Thành phần amino acid CsANR 21 an Bảng 2.1 Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 26 va n Bảng 2.2 Chu trình nhiệt thực phản ứng tổng hợp cDNA 26 gh tn to Bảng 2.3 Trình tự đoạn mồi sử dụng nhân gen ANR 27 ie Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR nhân gen ANR 27 p Bảng 2.5 Thành phần phản ứng tạo đầu sẳn phẩm PCR 29 oa nl w Bảng 2.6 Thành phần phản ứng ghép nối đoạn gen ANR vector pJET1.2 29 d an lu Bảng 2.7 Thành phần phản ứng cắt plasmid 32 u nf va Bảng 3.1 Kết kiểm tra nồng độ RNA tổng số 36 Bảng 3.2 Sự sai khác trình tự nucleotide gen ANR chè Trung du xanh với ll oi m trình tự cơng bố Genbank 41 z at nh Bảng 3.3 Sự sai khác trình tự amino acid gen mã hóa anthocyanidin reductase giơng chè Trung du xanh với trình tự cơng bố z m co l gm @ Genbank 44 an Lu n va ac th si viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức tổng qt catechin 16 Hình 1.2 Các đường sinh tổng hợp catechin chè 19 Hình 1.3 Cấu trúc khơng gian chiều protein CsANR 22 Hình 2.1 Chu kỳ nhiệt thực phản ứng nhân gen ANR 27 Hình 2.2 Sơ đồ vector tách dịng pJET 1.2 29 lu Hình 2.3 Sơ đồ vector biểu pET-32a(+) 33 an va Hình 2.4 Sơ đị thí nghiệm nhân dòng thiết kế vector biểu gen mã n hóa anthocyanidin reductase chè 34 gh tn to Hình 3.1 Kết điện di kiểm tra sản phẩm tách chiết RNA tổng số 36 p ie Hình 3.2 Kết nhân gen ANR từ cDNA mẫu chè Trung du xanh nhiệt độ khác 37 oa nl w Hình 3.3 Hình ảnh điện di tách plasmid mẫu chè Trung du xanh 37 d Hình 3.4 Hình ảnh điện di kiểm tra có mặt sản phẩm PCR lu an plasmid pJET1.2 38 u nf va Hình 3.5 Kết phân tích trình tự gen CsANR2 phân lập từ mẫu chè xanh 41 ll m oi Hình 3.6 So sánh trình tự amino acid suy diễn CsANR2 từ giống chè z at nh Trung du xanh với trình tự cơng bố 43 Hình 3.7 Hình ảnh điện di kiểm tra có mặt gen ANR plasmid z gm @ pET32a(+) 46 Hình 3.8 Kết cắt kiểm tra plasmid pET32a(+)_ANR NcoI l m co XhoI 46 Hình 3.9 Kết PCR kiểm tra plasmid pET32a(+)_ANR 47 an Lu n va ac th si 41 CsANR2 GU944768 AY641729 HM003282 GU992400 810 820 830 840 850 860 870 880 | | | | | | | | | | | | | | | | CAATACCAGTGTTCCCGAGCTAGCCAAGTTCCTCAACAAAAGATATCCAGAGTACAATGTCCCTACTGATTTTGGAGATT GC CsANR2 GU944768 AY641729 HM003282 GU992400 890 900 910 920 930 940 950 960 | | | | | | | | | | | | | | | | TTCCATCAAAAGCGAAGTTGATCCTCTCGTCTGAGAAGCTTACCAAAGAGGGATTCAGTTTCAAGTATGGGATCGAAGAA A T T.T CsANR2 GU944768 AY641729 HM003282 GU992400 970 980 990 1000 1010 | | | | | | | | | | TTTTACGATCAATCTGTGGAGTACTTCAAGGCTAAGGGGATTTTGAAGAATTGA A A A .G T A lu an Hình 3.5 Kết phân tích so sánh trình tự gen CsANR2 phân lập từ va n mẫu chè Trung du xanh với số trình tự Genbank p ie gh tn to Bảng 3.2 Sự sai khác trình tự nucleotide gen ANR chè Trung du xanh với trình tự cơng bố Genbank T T T C C C A C C C G A A A A A G A A A G G G A C C C T G T co G T C d oa 118 GU944768 AY641729 HM003282 GU992400 T nl 99 ScANR2 w Vị trí 162 A 223 G 267 G G 356 T C 531 T T T 541 T T T 567 T T T nf va A z an lu 120 z at nh oi lm ul l gm @ m an Lu n va ac th si 42 lu an n va A A T A A 603 A A T A A 612 A A A A G 667 C C C T C 717 C C C T C 776 C C C T C 803 A A G A A 804 T T C T T 906 C C C T C 909 G G G T G C C C T C T T A T T T T T G T C C T C p ie gh tn to 587 d oa 977 nl 912 w 911 nf va C an lu 992 lm ul Kết phân tích trình tự nucleotide gen mã hóa CsANR2 giống z at nh oi chè nghiên cứu với trình tự cơng bố đăng ký ngân hàng GenBank (mã số GU944768, AY641729, HM003282, GU992400) cho thấy gen CsANR2 bảo thủ chè Hệ số tương đồng di truyền giống chè z gm @ dao động từ 99 – 99,7% Trình tự nucleotide gen ANR mẫu chè nghiên cứu so sánh với trình tự mang mã số GU944768 có vị trí sai khác (bàng 3.2) với l co hệ số tương đồng 99,7%; có vị trí sai khác so với trình tự mang mã số m AY641729 với hệ số tương đồng 99,1%; có 10 vị trí sai khác so với trình tự an Lu n va ac th si 43 mang mã số HM003282 với hệ số tương đồng 99% có vị trí sai khác so với trình tự mang mã số GU992400 với hệ số tương đồng 99,2% Tương tự, kết phân tích trình tự amino acid CsANR2 có hệ số tương đồng di truyền cao giống chè dao động từ 95,7 - 99,5% thể hình 3.6 bảng 3.3 10 20 30 40 50 60 70 80 90 | | | | | | | | | | | | | | | | | | CsANR2VN MEAQPTAPKAACVVGGTGFVAATLIKLLLEKGYAVNTTVRDPGNQKKTSHLLALKGSGNLKIFRADLTDEQSFDAPVAGCDLVFHVATPV lu GU944768 an T va AY641729 T n HM003282 to T gh tn GU992400 ie Vị trí bám NAD NADP 100 p 110 120 130 140 150 160 170 w 180 oa CsANR2VN nl | | | | | | | | | | | | | | | | | | NFASEDPENDMIKPAIQGVVNVLKACAKVGTVKRVILTSSAAAVSINKLNGTGLVMDESHWTDTEFLNSAKPPTWGYPLSKTLAEKAAWK d GU944768 lu an A AY641729 nf va A HM003282 lm ul A GU992400 A 200 z at nh oi 190 270 210 220 230 240 250 260 @ CsANR2VN z | | | | | | | | | | | | | | | | | | FAEENNINLITVIPTLMAGPSLTADVPSSIGLAMSLITGNEFLINGLKGMQMLSGSISISHVEDVCRAHVFVAEKESASGRYICCAVNTS gm GU944768 AY641729 co l .S m HM003282 GU992400 an Lu F F V n va ac th si 44 280 290 300 310 320 330 | | | | | | | | | | | | | CsANR2VN VPELAKFLNKRYPEYNVPTDFGDFPSKAKLILSSEKLTKEGFSFKYGIEEFYDQSVEYFKAKGILKN GU944768 I AY641729 I HM003282 F I G V GU992400 I Hình 3.6 So sánh trình tự amino acid suy diễn CsANR2 từ giống chè Trung Du xanh với trình tự cơng bố ) Trình tự amino acid thay đổi CsANR2 so với trình tự cơng bố; ( Dấu ( ) gốc amino vùng liên kết chất bảo thủ lu an n va Bảng 3.3 Sự sai khác trình tự amino acid gen mã hóa anthocyanidin tn to reductase ở giơng chè Trung du xanh với trình tự cơng bố gh Genbank ScANR2 p ie Vị trí 75 A T T T A V A A A A F F F F V L L F L S S F S S N N S F S I I I V G V V A d oa nl 181 w 119 GU944768 AY641729 HM003282 GU992400 lu 268 N 304 S S 321 F I 326 V V 331 A A nf va z at nh oi lm ul N A gm S @ 259 z L an 223 co l Kết so sánh trình tự amino acid CsANR2 hình cho thấy, m amino acid quy định chức CsANR2 chè có tính bảo thủ cao an Lu CsANR2 chè Trung du xanh với trình tự cơng bố Kết sánh ra: n va ac th si 45 Trình tự amino acid enzyme ANR giống chè Trung du xanh khác với trình tự mang mã số GU944768 vị trí (75, 119, 321) thể bảng 3.3 với hệ số tương đồng 99,1% Trình tự amino acid enzyme ANR giống chè Trung du xanh khác với trình tự mang mã số AY641729 vị trí (75, 119, 268, 321) thể bảng 3.3 với hệ số tương đồng 98,8% Trình tự amino acid enzyme ANR giống chè Trung du xanh khác với trình tự mang mã số HM003282 vị trí (75, 119, 223, 259, 304, 321, 326, lu an 331) thể bảng 3.3 với hệ số tương đồng 97,6% va n Trình tự amino acid enzyme ANR giống chè Trung du xanh khác tn to với trình tự mang mã số GU992400 vị trí (119, 181, 321) thể bảng ie gh 3.3 với hệ số tương đồng 99,1% p Sự sai khác có ảnh hưởng đến hoạt tính CsANR2 cần oa nl w phải có nghiên cứu sâu d 3.3 THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN VI KHUẨN MANG GEN ANR lu nf va an Từ vector tách dòng pJET chứa gen ANR phân lập từ giống chè xanh, tiến hành cắt vector tái tổ hợp hai enzyme giới hạn lm ul NcoI XhoI Đồng thời, phản ứng cắt NcoI XhoI tiến hành z at nh oi với vector pET32a(+) Tiếp theo, thực phản ứng lai đoạn gen ANR với vector pET32a (+) mở vòng điều kiện 22oC Vector z pET32a(+) có kích thước 5.900 bp, gen ANR kích thước 1.014 bp, vector tái tổ @ gm hợp có kích thước khoảng kb Sản phẩm q trình lai biến nạp l vào tế bào E.coli DH10B Sau biến nạp sốc nhiệt, dịch tế bào ni m co đĩa LB có bổ sung ampicillin nhằm chọn lọc tế bào mang gen an Lu thị kháng kháng sinh Kết biến nạp cho thấy số khuẩn lạc mọc bề mặt đĩa Các khuẩn lạc mọc riêng rẽ, có kích thước đồng Theo lý n va ac th si 46 thuyết, gen kháng ampicillin nằm vector khuẩn lạc có khả phát triển môi trường kháng sinh khuẩn lạc chứa vector vector tái tổ hợp Để khẳng định chắn khuẩn lạc mang gen mong muốn, tiến hành tách plasmid cắt kiểm tra enzyme giới hạn Chúng lựa chọn 10 khuẩn lạc đĩa biến nạp ni mơi trường LB có bổ sung kháng sinh điều kiện 37oC, nuôi lắc 200 vịng/phút, qua đêm Sau đó, dịng tế bào tách plasmid kiểm tra gel agarose 0,8% Kết điện di kiểm tra plasmid thể hình 3.7 lu an n va p ie gh tn to oa nl w Hình 3.7 Hình ảnh điện di kiểm tra có mặt gen ANR plasmid pET32a(+) d nf va an lu (-): vector pET32a(+) khơng mang đoạn chèn, – 10: 10 dịng plasmid tách chiết lm ul Kết điện di cho thấy, 10 dịng thu có dịng số 01 có z at nh oi kích thước cao đối chứng vector pET32a(+) khơng mang đoạn chèn Vì vậy, chúng tơi tiến hành kiểm tra dịng plasmid enzyme giới hạn PCR với cặp mồi nhân đoạn gen ANR Plasmid tiếp tục tiến hành phản z ứng cắt kiểm tra hai enzyme giới hạn NcoI XhoI Sản phẩm phản @ m co l gm ứng cắt điện di kiểm tra gel agarose 0,8% (Hình 3.8) an Lu n va ac th si 47 Hình 3.8 Kết cắt kiểm tra plasmid pET32a(+)_ANR NcoI XhoI lu M: maker 1kb, 1: sản phẩm cắt enzyme giới hạn an Kết điện di hình 3.8 cho thấy, plasmid sau cắt hai enzyme va n tạo hai băng đậm rõ nét với kích thước khoảng 5900 bp 1000 bp ie gh tn to tương đương với kích thước pET32a(+) gen ANR dạng thẳng Để khẳng định chắn hơn, chúng tơi tiến hành PCR kiểm tra dịng p plasmid cặp mồi nhân gen ANR Sản phẩm PCR điện di kiểm d oa nl w tra gel agarose 0,8% (Hình 3.9) nf va an lu z at nh oi lm ul Hình 3.9: Kết PCR kiểm tra plasmid pET32a(+)_ANR z M: maker kb, (+): sản phẩm PCR từ đối chứng dương plasmid @ từ plasmid pET32a(+)_ANR m co l gm pJET1.2_ANR, (-): sản phẩm PCR đối chứng âm H2O, 1: sản phẩm PCR an Lu n va ac th si 48 Kết điện di cho thấy, sản phẩm PCR thu cho băng đậm, rõ nét có kích thước khoảng 1000 bp tương đương với kích thước đoạn gen ANR Như vậy, tạo dòng biến nạp vào E coli DH10B mang plasmid pET32a(+)_ANR Vector tái tổ hợp dùng cho mục đích biểu gen mong muốn lu an n va to p ie gh tn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN nl w Gen ANR khuếch phản ứng PCR từ khuôn cDNA d oa mẫu chè Trung Du xanh, kích thước sản phẩm PCR thu khoảng 1.0kb an lu Đã tạo dòng gen ANR vector pJET1.2, xác định phân tích nf va trình tự gen mã hóa anthocyanidin reductase từ mẫu chè nghiên cứu Gen ANR lm ul có ORF 1014 nucleotide, mã hóa 337 amino acid Trình tự gen ANR từ mẫu z at nh oi chè nghiên cứu so với trình tự cơng bố có hệ số tương đồng di truyền 99 - 99,7%, trình tự amino acid suy diễn CsANR2 có độ tương đồng cao so với trình tự cơng bố Genbank (95,7- 99,5%), khơng có khác biệt trình tự z gm @ amino acid vùng quy định chức so với trình tự cơng bố Đã tạo dịng vi khuẩn E.coli mang vector biểu gen ANR m co KIẾN NGHỊ l (pET32a(+)_ANR) an Lu n va ac th si 49 Kết nghiên cứu đặt vấn đề cần nghiên cứu sâu đa hình trình tự nucleotide đơn (các SNPs) gen ANR chè nghiên cứu biểu gen ANR lu an n va to gh tn TÀI LIỆU THAM KHẢO Hoàng Văn Chung, (2012), “Nghiên cứu tuyển chọn đầu dòng oa nl w Trần Quang Anh (2005) , “Trà sức khỏe”, Báo sức khỏe đời sống p ie TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT d số biện pháp kỹ thuật nhân giống, trồng mới chè Shan vùng núi cao tỉnh an lu Bắc Kạn”, Luận án tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp, Trường Đại học Nơng Lê Tất Khương, Hồng Văn Chung (1999) Giáo trình chè Nxb Nông z at nh oi nghiệp, Hà Nội lm ul nf va Lâm Thái Nguyên, Đại học Thái Nguyên Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Thu Phương, Hoàng Văn Chung, Hoàng Thị Thu Yến (2010) Bước đầu nghiên cứu đa dạng di truyền z gm @ số dòng chè shan (Camellia sinensis var assamica (Mast) Pierre sec Phamh) kỹ thuật RAPD Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thái co Nguyễn Minh Hùng, Đinh Thị Phòng (2004) Đánh giá tính đa hình RAPD m l Ngun 63: 149 -157 an Lu genome số giống chè Tạp chí cơng nghệ sinh học 2: 109-116 n va ac th si 50 Trần Đình Long, Mai Hồng Thạch, Hoàng Tuyết Minh (1997) Chọn giống trồng NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Đỗ Văn Ngọc (2000) Giống chè, kỹ thuật trồng chăm sóc NXB Nơng Nghiệp, Viện nghiên cứu chè, Phú Thọ Đỗ Ngọc Qũy, Lê Thất Khương (2000) Giáo trình chè sản xuất chế biến tiêu thụ.NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Hữu Thọ (2003) Nghiên cứu xác định khu vực địa lý tiềm vùng dẫn địa lý chè Tân Cương Sở Khoa học Công nghệ Thái lu Nguyên, Thái Nguyên an 10 Nguyễn Hữu Thọ, Bùi Thị Minh Hòa, Đinh Ngọc Lan, Nguyễn Mạnh va n Thắng, Dương Thu Hoàng (2008) Nghiên cứu chuỗi giá trị ngành chè nằm to thị trường, Báo cáo kết đề tài nghiên cứu khoa học cấp bộThái p ie gh tn đưa giải pháp nâng cao tính cạnh tranh chè Thái Nguyên Nguyên nl w 11 Trần Đức Trung (2009) Nghiên cứu đa dạng di truyền giống/ dòng d oa chè (Camellina sinensis (L.)O Kuntze) Việt Nam thị hình thái an lu thị phân tử microsatellite(SSR) Luận văn Thạc sĩ, Trường Đại học nf va Bách khoa Hà Nội lm ul 12 Lương Văn Vượng, Phạm Huy Thông, Lê Văn Đức, Lê Hồng Vân (2013) z at nh oi Kỹ thuật sản xuất chế biến chè xanh NXB Nơng nghiệp, Hà Nội 13 Hồng Thị Thu Yến, Nguyễn Văn Tuấn, Hoàng Thị Ngà (2012) Nghiên cứu đa dạng di truyền genome số dòng chè (Camellia sinensis) trồng z xã Tân Cương – Thành phố Thái Nguyên kỹ thuật RAPD Tạp chí gm @ Khoa học Công nghệ Thái Nguyên 96: 139 -143 l co 14 Hoàng Thị Thu Yến, Dương Thị Nhung, La Quang Thương, Hà Thị Loan m (2014) Nghiên cứu thị SSR số giống/dòng chè trồng Thái an Lu Ngun Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thái Nguyên 120: 13-19 n va ac th si 51 TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 15 Adhami VM, Malik A, Zaman N, Sarfaraz S, Siddiqui IA, Syed DN, Afaq F, Pasha FS, Saleem M, Mukhtar H (2007), “Combined inhibitory effects of green tea polyphenols and selective cyclooxygenase-2 inhibitors on the growth of human prostate cancer cells both in vitro and in vivo”, Clinical Cancer Research,13(5), 1611–1619 16 Ashihara H., Deng W W., Mullen W., Crozier A (2010), "Distribution and biosynthesis of flavan-3-ols in Camellia sinensis seedlings and expression lu an of genes encoding biosynthetic enzymes", Phytochemistry, 71 (5-6), 559- va n 566 H (2015), “Expression of Key Structural Genes of the Phenylpropanoid p ie gh tn to 17 Chen C, Wei K, Wang L, Ruan L, Li H, Zhou X, Lin Z, Shan R & Cheng w Pathway Associated with Catechin Epimerization in Tea Cultivars”, Front oa nl Plant Sci, 8(702) d 18 Chen D, Wan SB, Yang H, Yuan J, Chan TH, Dou QP (2011), “EGCG, lu nf va an green tea polyphenols and their synthetic analogs and prodrugs for human cancer prevention and treatment”, Adv Clin Chem, 53,155–177 lm ul 19 Erba D, Riso P, Bordoni A, Foti P, Biagim PL, Testolin G (2005), z at nh oi “Effectiveness of moderate green tea consumption on antioxidative status and plasma lipid profile in humans”, Journal of Nutritional Biochemistry, z 16 (3), 144–149 @ gm 20 Eungwanichayapant P D., Popluechai S (2009), "Accumulation of catechins biosynthesis", Plant Physiol Biochem, 47 (2), 94-97 m co l in tea in relation to accumulation of mRNA from genes involved in catechin an Lu n va ac th si 52 21 Gargouri M, Manigand C, Maugé C, Granier T, Langlois d'Estaintot B, Cala O, Pianet I, K B, Chaudière J & Gallois B (2009), “Structure and epimerase activity of anthocyanidin reductase from Vitis vinifera”, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 65(9) 989–1000 22 Harbowy M E., Balentine D A (1997), “Tea chemistry”, Critical Reviews ill Plant Sciences, 16 (5), 415-480 23 Jankun J, Selman SH, Swiercz R, Skrzypczak-Jankun E (1997), “Why drinking green tea could prevent cancer”, Nature, 387-561 lu 24 Khan N, Afaq F, Saleem M, Ahmad N, Mukhtar H (2006), “Targeting an multiple signaling pathways by green tea polyphenol (−)-epigallocatechin- va n 3-gallate”, Cancer Research, 66 (5), 2500–2505 Tagashira M., Muranaka A., Uchiyama M., Kanda T., Maeda-Yamamoto p ie gh tn to 25 Kirita M., Honma D., Tanaka Y., Usui S., Shoji T., Sami M., Yokota T., M "Cloning of a novel O- methyltransferase from Camellia sinensis and oa nl w synthesis of o-methylated EGCG and evaluation of their bioactivity", J Agric Food Chem, 58 (12), 7196-7201 d an lu 26 Kondo K, Kurihara M, Miyata N, Suzuki T, Toyoda M (1999), nf va “Scavenging mechanisms of (−)-epigallocatechin gallate and (−)- lm ul epicatechin gallate on peroxyl radicals and formation of superoxide during 863 z at nh oi the inhibitory action”, Free Radical Biology and Medicine, 27 (7–8), 855- 27 Lee M J., Lambert J D., Prabhu S., Meng X., Lu H., Maliakal P., Ho C z gm @ T., Yang C S (2004), "Delivery of tea polyphenols to the oral cavity by green tea leaves and black tea extract", Cancer Epidemiol Biomarkers co l Prev, 13 (1), 132-137 m 28 Liu M, Tian HL, Wu JH, Cang RR, Wang RX, Qi XH, Xu Q & Chen XH an Lu (2015), “Relationship between gene expression and the accumulation of n va ac th si 53 catechin during spring and autumn in tea plants (Camellia sinensis L.)”, Hortic Res 2, 15011 29 Lu YP, Lou YR, Xie JG, Yen P, Huang MT, Conney AH (1997), “Inhibitory effect of black tea on the growth of established skin tumors in mice: effects on tumor size, apoptosis, mitosis and bromodeoxyuridine incorporation into DNA”, Carcinogenesis, 18 (11), 2163–2169 30 Luximon-Ramma A, Neergheen VS, Bahorun T, Crozier A, Zbarsky V, Datla KP, Dexter DT & Aruoma OI (2006), “Assessment of the lu polyphenolic composition of the organic extracts of Mauritian black teas: an a potential contributor to their antioxidant functions”, Biofactors, 27(1-4), va n 79-91 optimizing health”, American Journal of Clinical Nutrition, 71 (6 Suppl), p ie gh tn to 31 Mukhtar H, Ahmad N (2000), “Tea polyphenols: prevention of cancer and 1698S–1702S nl w 32 Nance CL, Shearer WT (2003), “Is green tea good for HIV-1 d oa infection?”, Journal of Allergy and Clinical Immunology, 112 (5), 851– an lu 853 nf va 33 Pang Y, Abeysinghe IS, He J, He X, Huhman D, Mewan KM, Sumner lm ul LW, Yun J & Dixon RA (2013), “Functional characterization of z at nh oi proanthocyanidin pathway enzymes from tea and their application for metabolic engineering”, Plant Physiol 161(3) 1103-1116 34 Punyasiri PA, Abeysinghe SB & Kumar V (2005), “Preformed and z @ induced chemical resistance of tea leaf against Exobasidium vexans l gm infection”, J Chem Ecol 31(6), 1315-1324 co 35 Rani A., Singh K., Ahuja P S., Kumar S (2012), "Molecular regulation m of catechins biosynthesis in tea [Camellia sinensis (L.) O Kuntze]", Gene, an Lu 495 (2), 205-210 n va ac th si 54 36 Rani A., Singh K., Sood P., Kumar S., Ahuja P S (2009), "p-Coumarate:CoA ligase as a key gene in the yield of catechins in tea [Camellia sinensis (L.) O Kuntze]", Funct Integr Genomics, (2), 271-275 37 Sang S, Tian S, Wang H, Stark RE, Rosen RT, Yang CS & Ho CT (2003), “Chemical studies of the antioxidant mechanism of tea catechins: radical reaction products of epicatechin with peroxyl radicals”, Bioorg Med Chem, 11(16), 3371-3378 38 Singh K., Rani A., Kumar S., Sood P., Mahajan M., Yadav S K., Singh B., Ahuja P S (2008), "An early gene of the flavonoid pathway, flavanone lu an 3-hydroxylase, exhibits a positive relationship with the concentration of va n catechins in tea (Camellia sinensis)", Tree Physiol, 28 (9), 1349-1356 S (2009), "Differential display mediated cloning of anthocyanidin ie gh tn to 39 Singh K., Rani A., Paul A., Dutt S., Joshi R., Gulati A., Ahuja P S., Kumar p reductase gene from tea (Camellia sinensis) and its relationship with the nl w concentration of epicatechins", Tree Physiol, 29 (6), 837 - 846 oa 40 Thirugnanasambantham K, Mularidaran S, Mandal AK (2014), d “Molecular cloning, computational and expression analysis of lu nf va an anthocyanidin reductase in tea (Camellia sinensis)”, Appl Biochem Biotechnol, 174 (1), 130 - 145 lm ul 41 Wang YC & Bachrach U (2002), “The specific anti-cancer activity of 131-143 z at nh oi green tea (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG)”, Amino Acids, 22(2), 42 Wang YS, Gao LP & Shan Y (2012), “Influence of shade on flavonoid z 16) l gm @ biosynthesis in tea (Camellia sinensis (L.) O.Kuntze)”, Sci Hort 141(7– m co 43 Wu ZJ, Li XH, Liu ZW, Xu ZS & Zhuang J (2014), “De novo assembly and transcriptome characterization: novel insights into catechins an Lu biosynthesis in Camellia sinensis”, BMC Plant Biol, 14(277) n va ac th si 55 44 Xie DY, Sharma SB, Paiva NL, Ferreira D & Dixon RA (2003), “Role of anthocyanidin reductase, encoded by BANYULS in plant flavonoid biosynthesis”, Science, 299(5605) 396-399 45 Yang CS, Wang ZY (1993), “Tea and cancer: review”, Journal of the National Cancer Institute, 85 (13), 1038–1049 46 Yang D., Liu Y., Sun M., Zhao L., Wang Y., Chen X., Wei C., Gao L., Xia T (2012), "Differential gene expression in tea (Camellia sinensis L.) calli with different morphologies and catechin contents", J Plant Physiol, 169 (2), 163-175 lu an 47 Zhen YS, Chen ZM, Cheng SJ & Chen ML (2002), “Tea bioactivity and n va therapeutic potential”, London: Taylor & Francis tn to Tài liệu internet ie gh 48 Các thành phần hóa học chè p http://chemvn.net/chemvn/showthread.php?t=1274 nl w 49 Giá trị chè oa http://bannhanong.vietnetnam.net d 50 Lịch sử chè lu nf va an wwww.Wikipedia the free encyclopedia The history of tea z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si