(Luận văn) nghiên cứu tác động của all trans retinoic acid lên sự biểu hiện các gen trong con đường tín hiệu egf và jak stat của tế bào gốc ung thư dạ dày

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC –––––––––––––––––––– MAI VĂN LINH lu an va n NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA ALL TRANS RETINOIC gh tn to ACID LÊN SỰ BIỂU HIỆN CÁC GEN TRONG CON ĐƯỜNG p ie TÍN HIỆU EGF VÀ JAK/STAT CỦA TẾ BÀO GỐC UNG THƯ d oa nl w DẠ DÀY nf va an lu lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z at nh oi z m co l gm @ an Lu THÁI NGUYÊN – 2019 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC –––––––––––––––––––– MAI VĂN LINH lu an NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA ALL TRANS RETINOIC va n ACID LÊN SỰ BIỂU HIỆN CÁC GEN TRONG CON ĐƯỜNG gh tn to TÍN HIỆU EGF VÀ JAK/STAT CỦA TẾ BÀO GỐC UNG THƯ p ie DẠ DÀY d oa nl w nf va an lu Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 lm ul z at nh oi LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z @ m co l gm Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Phú Hùng an Lu THÁI NGUYÊN – 2019 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố công trình Mọi kết thu khơng chỉnh sửa, chép từ nghiên cứu khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả lu Mai Văn Linh an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực đề tài nghiên cứu Khoa Công nghệ Sinh học – Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên, em nhận giúp đỡ, giảng dạy truyền đạt kiến thức thầy khoa, phịng ban nhà trường Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy giáo - TS Nguyễn Phú Hùng, Thầy định hướng khoa học, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt suốt trình em học tập, tiến hành lu nghiên cứu hoàn thành luận văn an n va Em xin cảm ơn thầy cô cán Khoa Công nghệ Sinh học tn to phận Đào tạo sau đại học - Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên ie gh tận tình dạy dỗ, bảo giúp đỡ suốt trình em học tập p trường nl w Đề tài luận văn nhận hỗ trợ kinh phí từ đề tài cấp Bộ, mã số d oa B2017 - TNA - 48 an lu Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè anh chị nf va lớp Cao học K11 ln cổ vũ, động viên em hồn thành tốt trình học Thái Nguyên, tháng 10 năm 2019 z at nh oi lm ul tập nghiên cứu khoa học Tác giả z l gm @ m co Mai Văn Linh an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề lu Mục tiêu nghiên cứu an n va CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU tn to 1.1 Tổng quan ung thư ung thư dày gh 1.1.1 Khái quát ung thư tế bào gốc ung thư p ie 1.1.2 Tổng quan ung thư dày 1.2 All-trans retinoic acid (ATRA) 13 nl w d oa 1.2.1 Retinoids all-trans retinoic acid (ATRA) 13 an lu 1.2.2 Thụ thể ATRA 16 nf va 1.2.3 Retinoids điều trị 17 1.3 Con đường tín hiệu EGF 19 lm ul 1.4 Con đường tín hiệu JAK/STAT 22 z at nh oi 1.5 Khái quát apoptosis 25 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 z @ 2.1 Vật liệu nghiên cứu 26 l gm 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 26 co 2.3 Phương pháp nghiên cứu 27 m 2.3.1 Phương pháp nuôi cấy tăng sinh tế bào 2D 27 an Lu 2.3.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào 3D xử lí tế bào với ATRA 27 n va 2.3.3 Phương pháp tách chiết RNA tổng số tổng hợp cDNA 28 ac th si iv 2.3.4 Phân tích biểu gen chủ chốt đường tín hiệu EGF Realtime PCR 28 2.3.5 Phân tích biểu gen chủ chốt đường tín hiệu JAK/STAT Realtime PCR 29 2.3.6 Phân tích biểu gen chủ chốt đường apoptosis Realtime PCR 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết nuôi cấy tăng sinh tế bào nuôi cấy tạo tumorsphere 31 3.1.1 Kết nuôi cấy tăng sinh tế bào điều kiện 2D 31 3.1.2 Ni cấy tạo tumorsphere 3D xử lí tumorsphere với ATRA 31 lu an 3.2 Kết tách chiết RNA tổng số 33 n va tn to 3.3 Tác động ATRA lên biểu gen thuộc đường tín hiệu EGF 34 p ie gh 3.3.1 ATRA ức chế biểu gen GAB2, NUP62, RPS6KA5 EGFR 34 oa nl w 3.3.2 Tác động ATRA lên biểu gen CBL, EPS8, BCAR1, NCK2 SHC1 38 d 3.4 Ảnh hưởng ATRA lên biểu gen thuộc đường tín hiệu JAK/STAT 40 an lu nf va 3.4.1 ATRA ức chế biểu gen STAT1 STAT3 40 z at nh oi lm ul 3.4.2 Ảnh hưởng ATRA đến điều hòa biểu gen GAB1, GAB2, SRC PPP2CA 41 3.5 Ảnh hưởng ATRA lên biểu gen củ trình apoptosis 43 3.5.1 ATRA tác động lên biểu gen ức chế apoptosis 44 z 3.5.2 ATRA ảnh hưởng đến biểu gen thúc đẩy apoptosis 46 gm @ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 l m co Kết luận 48 Kiến nghị 48 an Lu TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 n va ac th si v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT lu an n va Từ viết đầy đủ AML Acute myeloid leukemia ATRA All trans retinoic acid BMDCs Bone marrow derived Dendritic cells CSC Cancer stem cells EGF Epidermal growth factor EGFR Epidermal growth factor receptor ErbB Erythroblastic Leukemia Viral Oncogene Homolog GSCs Gastric stem cells H pylori Helicobacter pylori JAK Janus kinases RA Retinoic acid RAR Retinoic acid receptor RXR Retinoid X receptor p ie gh tn to Từ viết tắt Signal transducer and activator of transcription (proteins) nl w STAT Tumor – Node - Metastasis d oa TNM nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 2.1 Mã số cặp mồi gen đường tín hiệu EGF 29 Mã số cặp mồi gen đường tín hiệu JAK/STAT 29 Bảng 2.2 Bảng 2.3 Mã số cặp mồi gen đường apoptosis 30 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang lu an Ước tính số ca mắc ung thư năm 2018 Hình 1.2 Ước tính số lượng tử vong ung thư năm 2018 Hình 1.3 Phân loại ung thư biểu mô dày theo Lauren Hình 1.4 Cấu tạo tuyến dày 11 Hình 1.5 Mơ hình nhuộm Lgr5 mơ ung thư dày 12 Hình 1.6 Các hệ retinoids 15 Hình 1.7 Sự chuyển hóa Vitamin A thể 15 Q trình hoạt động tín hiệu RA 16 n va Hình 1.1 p ie gh tn to oa nl w Hình 1.8 21 Hình 1.10 Con đường tín hiệu JAK/STAT 23 Hình 1.11 Một đường JAK/STAT ung thư 24 Hình 3.1 Hình ảnh ni cấy tăng sinh tế bào sau ngày nuôi cấy 31 Hình 3.2 Ni cấy tạo tumorsphere xử lý với ATRA 32 Hình 3.3 Kết xác định hàm lượng RNA tổng số 34 Hình 3.4A Mức độ biểu gen GAB2, NUP62, RPS6KA5, EGFR 35 Hình 3.4B Mức độ biểu gen EPS8, BCAR1, CBL, NCK2, SHC1 38 Hình 3.5A Mức độ biểu gen STAT3, STAT1 40 Hình 3.5B Mức độ biểu gen GAB1, SRC, GAB2, PPP2CA 42 Hình 3.6A Mức độ biểu gen ức chế apoptosis Hình 3.6B Mức độ biểu gen thúc đẩy apoptosis d Con đường tín hiệu họ thụ thể EGFR Hình 1.9 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu 44 n va 46 ac th si MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Ung thư dày dạng ung thư phổ biến Theo ước tính Tổ chức Y tế Thế giới (http://gco.iarc.fr/), năm 2018 có 1.033.701 bệnh nhân ung thư dày (chiếm 5,7%, tổng số ca ung thư mới), 782.685 ca tử vong ung thư dày (chiếm 8,2%, tổng số ca tử vong ung thư) Ung thư dày thống kê dạng ung thư phổ biến thứ nguyên nhân gây tử vong thứ nhóm ung thư Có 769.728 (74,5%) ca ung thư dày phát nước châu lu Á Tỉ lệ ung thư dày cao thống kê Hàn Quốc, Mông Cổ, Nhật an n va Bản Trung Quốc Việt Nam xếp thứ 10 thống kê nước có tỉ lệ tn to ung thư dày nhiều giới với tỉ lệ 15,9 ca mắc ung thư dày 100.000 dân số gh p ie Các tế bào gốc ung thư dày nguyên nhân gây khối u dày w Các tế bào gốc ung thư dày, gọi “tế bào khởi nguồn” oa nl ung thư dày, có nguồn gốc chủ yếu từ tế bào gốc dày tế d bào gốc định hướng dày [4], [27] Các tế bào gốc ung thư dày có lu nf va an có nguồn gốc từ tế bào sinh dưỡng bị biến đổi [6] Giống với tế bào gốc thông thường, tế bào gốc ung thư dày có chứa lm ul marker sinh học đặc trưng CD44, ALDH,… [4] Đây thị điều trị z at nh oi phân tử quan trọng để xác định tế bào gốc ung thư dày nghiên cứu z All trans retinoic acid (ATRA) chất chuyển hóa từ vitamin A, thuộc @ gm nhóm retinoid, có tác dụng điều hồ tăng trưởng, biệt hóa q trình co l apoptosis tế bào ATRA biết đến chất có khả ức chế m tế bào gốc nhiều dạng ung thư khác [53] Hiện nay, ATRA an Lu sử dụng điều trị bệnh Lơ-xê-mi cấp dòng tủy (AML), sử dụng n va nhiều thử nghiệm lâm sàng để điều trị ung thư Tuy nhiên, ảnh hưởng ac th si ATRA lên tế bào gốc ung thư cấp độ phân tử chưa hiểu rõ Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cu ti: ăNghiờn cu tỏc ng ca all trans retinoic acid lên biểu gen đường tín hiệu EGF JAK/STAT tế bào gốc ung th d dyă Mc tiờu nghiờn cu ỏnh giá tác động ATRA lên phiên mã gen đường tín hiệu phân tử EGF JAK/STAT tế bào gốc ung thư dày, ảnh hưởng ATRA lên biểu gen apoptosis Nội dung nghiên cứu lu an Nội dung 1: Nuôi cấy tế bào điều kiện 3D để hình thành nên va n tumorsphere từ tế bào gốc ung thư dày to gh tn Nội dung 2: Phân tích tác động ATRA lên hình thành tăng p ie trưởng tumorsphere w Nội dung 3: Phân tích biểu gen đường tín oa nl hiệu EGF phương pháp Realtime PCR tế bào xử lý d không xử lý với ATRA lu nf va an Nội dung 4: Phân tích ảnh hưởng ATRA lên biểu gen đường tín hiệu JAK/STAT phương pháp Realtime PCR lm ul Nội dung 5: Phân tích tác động ATRA lên biểu gen z at nh oi apoptosis phương pháp Realtime PCR z m co l gm @ an Lu n va ac th si 46 3.5.2 ATRA ảnh hưởng đến biểu gen thúc đẩy apoptosis Trong nghiên cứu này, gen chứng minh có chức thúc đẩy trình apoptosis phân tích bao gồm: CASP9, FOX3, IL2 p53 Kết hình 3.6B cho thấy: ATRA làm tăng biểu tất gen thúc đẩy apoptosis chọn để nghiên cứu mức độ phiên mã so với mẫu đối chứng FOXO3, caspase-9 (được mã hóa gen CASP9) p53 (hay tp53) protein tham gia hoạt hóa apoptosis thông qua đường nội sinh (phụ thuộc ti thể) Caspase-9 (CASP9) mã hóa gen CASP9, caspase khởi tạo trình apoptosis nội sinh [63] Yoo cộng (2007) lu an biểu CASP9 thường bị ức chế tế bào ung thư dày [93] n va Trong nghiên cứu này, nhận thấy tế bào MKN45, CASP9 tăng cộng nghiên cứu trước kết luận: suy giảm hoạt động gh tn to cường biểu mức độ phiên mã xử lí với ATRA Hơn nữa, Mueller ie CASP9 làm tăng cường ngưỡng apoptosis gây cisplatin [67] Điều p gợi ý sử dụng ATRA loại thuốc hỗ trợ điều trị ung d oa nl w thư hóa trị nf va an lu z at nh oi lm ul z gm @ m co l Hình 3.6B Mức độ biểu gen thúc đẩy apoptosis (so sánh với đối chứng (DC), (n = 3, *p < 0,05) Gen FOXO3 mã hóa cho protein FOXO3, thuộc họ protein Forkhead an Lu box (FOX) Sự kích hoạt FOXO3 dẫn đến apoptosis, ngừng chu kỳ tế bào, n va ngược lại, bất hoạt FOXO3 tăng cường sống tế bào tăng sinh tế bào ac th si 47 [18] Sự suy giảm hoạt động FOXO3 ghi nhận nhiều loại tế bào ung thư khác [25] Trong nghiên cứu này, xác định hoạt động FOXO3 tăng cường mức độ phiên mã tế bào gốc ung thư MKN45 xử lí với ATRA Ở tế bào ung thư bạch cầu (APL), Sakoe Y cộng (2010) nhận thấy kết tương tự, FOXO3A tăng cường biểu điều trị ATRA [75] Nghiên cứu Sakoe FOXO3A phân tử quan trọng gây apoptosis điều trị ATRA APL Tp53 hay p53 protein liên kết DNA làm dừng chu kỳ tế bào căng thẳng gen [35], gen thúc đẩy apoptosis có ý nghĩa quan trọng lu ung thư Cơ p53 cản trở tăng sinh tế bào có DNA bị hỏng [71] an n va 50% số bệnh ung thư người phát có đột biến gen làm tổn hại lệ lớn đột biến thay đổi biểu thay đổi gen khác ảnh gh tn to trực tiếp đến chức p53, phần lớn khối u cịn lại có tỷ p ie hưởng đến chức protein p53 [84] Nhiều nghiên cứu ATRA tăng cường hoạt động p53 tế bào ung thư tụy, ung thư nl w máu ung thư hắc sắc tố [57], [94], [98] Trong nghiên cứu này, kết d oa phân tích biểu p53 mức độ phiên mã cho thấy, ATRA làm tăng cường an lu hoạt động gen p53 tế bào ung thư MKN45 nf va Interleukin (IL2), interleukin, đóng vai trò quan trọng tăng lm ul cường biểu phân tử tiền apoptosis tế bào T [58] Như vậy, IL2 chất thúc đẩy apoptosis tiềm Fan cộng (2017) z at nh oi ATRA làm tăng biểu IL2 tế bào ung thư phổi [29] Trong kết nghiên cứu này, nhận thấy tế bào MKN45 z xử lí với ATRA có gia tăng biểu gen IL2, biểu IL2 tăng gấp @ gm khoảng lần so với tế bào đối chứng khơng xử lí với ATRA co l Như vậy, ATRA tác động đến trình apoptosis tế bào gốc ung m thư dày MKN45 thông qua tác động suy giảm biểu gen ức chế gen thúc đẩy apoptosis: CASP9, FOXO3, IL2, p53 an Lu apoptosis: AKT1, NUP62, BCL2, MAPK1 tăng cường hoạt động n va ac th si 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đã nuôi cấy thành công tumorsphere 3D tế bào ung thư MKN45 để phục vụ cho trình thử tác động ATRA Đã ATRA ức chế hình thành tăng trưởng tumorsphere ATRA làm giảm hoạt động đường tín hiệu EGF cách điều hòa giảm biểu gen GAB2, NUP62, RPS6KA5 lu EGFR, không ảnh hưởng lên gen EPS8, BCAR1, CBL, an n va NCK2 SHC1 đường tín hiệu mức độ phiên mã tn to ATRA điều hòa giảm hoạt động đường tín hiệu ie gh JAK/STAT, thơng qua điều hịa giảm biểu gen GAB1, p GAB2, SRC, STAT1 STAT3 mức độ phiên mã oa nl w Ở đường apoptosis, ATRA làm giảm biểu gen ức d chế apoptosis: AKT1, NUP62, BCL2, MAPK1 tăng cường biểu lu nf va an gen thúc đẩy apoptosis: CASP9, FOX3, IL2, P53 mức độ phiên mã Kết luận chung: ATRA ức chế sinh trưởng phát triển tế bào lm ul ung thư dày MKN45 thơng qua điều hồ làm giảm biểu gen chủ z at nh oi chốt hai đường tín hiệu EGF, JAK/STAT thúc đẩy trình apoptosis z gm @ Kiến nghị l Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng ATRA lên biểu gen m co thuộc đường tín hiệu EGF, JAK/STAT, apoptosis mức độ protein an Lu n va ac th si 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Akulapalli S (2009), History of Cancer, Ancient and Modern Treatment Methods, doi: 10.4172/1948-5956.100000e2 Alam S.M., Rajendran M., Ouyang S., Veeramani S., Zhang L., Lin M.F (2009), “ novel role of Shc adaptor proteins in steroid hormoneregulated cancers”, Endocr Relat Cancer, 16(1), pp 1-9 Ali R.Y., Kamran B.L., Peivand B., Maryam R., Zahra K (2018), “Risk Factors for Gastric Cancer: A Systematic Review”, Asian Pac J lu Cancer Prev, 19(3), pp 591–603 an va Arisi M F, Starker R.A., Addya S., Huang Y., Fernandez S.V (2014), n “All transretinoic acid (ATRA) induces re-differentiation of early tn to gh transformed breast epithelial cells”, Int J Oncol, 44, pp 1831–42 p ie Avalle L., Camporeale A., Camperi A., Poli V (2017), “STAT3 in cancer: A double-edged sword”, Cytokine, 98, pp 42–50 nl w d oa Barker N., Huch M., Kujala P., van de Wetering M., Snippert H.J., van an lu Es J.H., et al (2010), “Lgr5+ve stem cells drive self-renewal in the lm ul pp 25–36 nf va stomach and build long-lived gastric units in vitro”, Cell Stem Cell, 6, z at nh oi Barrett A., Pellet-Many C., Zachary I.C., Evans I.M., Frankel P (2013), "p130Cas: a key signalling node in health and disease", Cell Signal, 25(4), pp 766–77 z gm @ Bhardwaj A., Singh S., Srivastava S.K., Arora S., Andrews J., Grizzle co l W.E., Singh A.P (2014), “Restoration of PPP2CA expression reverses epithelial-to-mesenchymal transition and suppresses prostate tumour m n va 110(8), pp 2000-10 an Lu growth and metastasis in an orthotopic mouse model”, Br J Cancer, ac th si 50 Bocanegra M., Bergamaschi A., Kim Y.H , Miller M.A., Rajput A.B , Kao J., Han W., Jeffrey S.S., Huntsman D.G , Pollack J.R (2010), “Focal amplification and oncogene dependency of GAB2 in breast cancer”, Oncogene, 29(5), pp 774-9 10.Bonnet D., Dick J.E (1997), “Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell”, Nat Med, 3, pp 730–7 11.Borovski T., De Sousa E., Melo F., Vermeulen L., Medema J.P (2011), “Cancer stem cell niche: the place to be”, Cancer Res, 71, pp 634–9 lu an 12.Breitman T.R., Selonick S.E., Collins S.J (1980), “Induction of n va differentiation of the human promyelocytic leukemia cell line (HL-60) 13.Bruck N., Vitoux D., Ferry C., Duong V., Bauer A., de Thé H., et al (2009), p ie gh tn to by retinoic acid”, Proc Natl Acad Sci USA, 77, pp 2936–40 “A coordinated phosphorylation cascade initiated by nl w p38MAPK/MSK1 directs RARalpha to target promoters”, EMBO J, 28, d oa pp 34–47 an lu 14.Bullock T.L., Clarkson W.D., Kent H.M., Stewart M (1996) "The 1.6 nf va angstroms resolution crystal structure of nuclear transport factor lm ul (NTF2)", J Mol Biol, 260(3), pp 422–31 z at nh oi 15.Cabodi S., Tinnirello A., Bisaro B., Tornillo G., del Pilar CamachoLeal M., Forni G., Cojoca R., Iezzi M., Amici A., Montani M., Eva A., Di Stefano P., Muthuswamy S.K., Tarone G., Turco E., Defilippi P z gm @ (2010), "p130Cas is an essential transducer element in ErbB2 l transformation", FASEB J, 24(10), pp 3796–808 m co 16.Carlos L.A, Jeffrey A.E (2014), “ERBB receptors: From oncogene Cancer Cell, 25(3), pp 282–303 an Lu discovery to basic science to mechanism-based cancer therapeutics”, n va ac th si 51 17.Chen T., Yang K., Yu J., Meng W., Yuan D., Bi F., Liu F., Liu J., Dai B., Chen X., Wang F., Zeng F., Xu H., Hu J., Mo X (2012), “Identification and expansion of cancer stem cells in tumor tissues and peripheral blood derived from gastric adenocarcinoma patients”, Cell Res, 22(1), pp 248-58 18.Chiacchiera F., Simone C (2010), “The AMPK-FoxO3A axis as a target for cancer treatment”, Cell Cycle, 9(6), pp 1091-6 19.Chow K.H., Factor R.E., Ullman K.S (2012), “The nuclear envelope environment and its cancer connections”, Nat Rev Cancer, 12(3), pp lu 196–209 an 20.Chu P.Y., Liou J.H., Lin Y.M., Chen C.J., Chen M.K., Lin S.H., Yeh va n C.M., Wang H.K., Maa M.C., Leu T.H., Chang N.W., Hsu N.C., Yeh to tn K.T (2012), “Expression of EPS8 correlates with poor survival in oral ie gh squamous cell carcinoma”, Asia Pac J Clin Oncol, 8, pp 77–81 p 21.Dai Y., Qi L., Zhang X., Li Y., Chen M., Zu X (2011), "CrkI and nl w p130Cas complex regulates the migration and invasion of prostate d oa cancer cells”, Cell biochem funct, 29 (8), pp 625-9 an lu 22.D'Ambrosio D.N., Clugston R.D., Blaner W.S (2011), “Vitamin A nf va Metabolism: An Update”, Nutrients, 3(1), pp 63–103 lm ul 23.Damien B., Julie G., Caroline G., Christine V (2018), “Efficiency of All-Trans Retinoic Acid on Gastric Cancer: A Narrative Literature z at nh oi Review”, Int J Mol Sci, 19(11), pp 3388-93 24.Ding C.B., Yu W.N, Feng J.H, Luo J.M (2015), “Structure and z function of Gab2 and its role in cancer (Review)”, Mol Med Rep, 12(3), l gm @ pp 4007–14 co 25.Du W.W., Fang L., Yang W., Wu N., Awan F.M., Yang Z., Yang B.B m (2017), “Induction of tumor apoptosis through a circular RNA an Lu enhancing Foxo3 activity”, Cell Death Differ, 24(2), pp 357-370 n va ac th si 52 26.Edelman M.J., Smith R., Hausner P., Doyle L.A., Kalra K., Kendall J., Bedor M., Bisaccia S (2005), “Phase II trial of the novel retinoid, bexarotene, and gemcitabine plus carboplatin in advanced non-smallcell lung cancer”, J Clin Oncol, 23, pp 5774–8 27.Egeblad M., Nakasone E.S., Werb Z (2010), “Tumors as organs: complex tissues that interface with the entire organism”, Dev Cell, 18(6), pp 884–901 28.Emira B., Hamidreza M.A (2018), “ “Do We Know Jack” About JAK? A Closer Look at JAK/STAT Signaling Pathway”, Front Oncol, 8, pp lu 287-92 an 29.Fan X.Y., Wang P.Y., Zhang C., Zhang Y.L., Fu Y., Zhang C., Li va n Q.X., Zhou J.N., Shan B.E., He D.W (2017), “All-trans retinoic acid to tn enhances cytotoxicity of CIK cells against human lung adenocarcinoma ie gh by upregulating MICA and IL-2 secretion”, Sci Rep, 7(1), pp 16481-9 p 30.Fatemeh A., Azam B., Tahereh N., Sepideh A.B (2014), “Retinoids nl w and their biological effects against cancer”, Int Immunopharmacology, d oa 18(1), pp 43–9 an lu 31.Fenoglio-Preiser C.M., Carneiro F., Correa P., et al (2000), Tumours of lm ul 37-67 nf va the Stomach, World Health Organization Classification of Tumours, pp 32.Groner B., von Manstein V (2017), "Jak Stat signaling and cancer: z at nh oi Opportunities, benefits and side effects of targeted inhibition", Molecular and Cellular Endocrinology, 451, pp 1–14 z 33.Han S., Fukazawa T., Yamatsuji T., Matsuoka J., Miyachi H., Maeda @ l gm Y., et al (2010), “Anti-tumor effect in human lung cancer by a combination treatment of novel histone deacetylase inhibitors: SL142 co m or SL325 and retinoic acids”, PLoS One, 5(11), pp 1–11 n va generation”, Cell, 144(5), pp 646-74 an Lu 34.Hanahan D., Weinberg R.A (2011), “Hallmarks of cancer: the next ac th si 53 35.Harris S.L., Levine A.J (2005), “The p53 pathway: positive and negative feedback loops”, Oncogene, 24(17), pp 2899-908 36.Hata A.N., Engelman J.A (2015), “The BCL2 Family: Key Mediators of the Apoptotic Response to Targeted Anticancer Therapeutics”, Cancer Discov, 5(5), pp 475-87 37.Hazawa M., Lin D.C., Kobayashi A., Jiang Y.Y., Xu L., Mohamed M.S., Hartono N.M, Meguro H.M., Horike S I, Koeffler H.P., Wong R.W (2018), ”ROCK-dependent phosphorylation of NUP62 regulates p63 nuclear transport and squamous cell carcinoma proliferation”, EMBO Rep, 19(1), pp 73-88 lu an 38.He Y.Z., Liang Z., Wu M.R., Wen Q., Deng L., Song C.Y., Wu B.Y., n va Tu S.F., Huang R., Li Y.H (2015), “Overexpression of EPS8 is tn to associated with poor prognosis in patients with acute lymphoblastic gh leukemia”, Leuk Res, 39, pp 575-81 p ie 39.Helm C.W., Lorenz D.J., Meyer N.J., Rising W.W., Wulff J.L.R w (2013), “Retinoids for preventing the progression of cervical intra- oa nl epithelial neoplasia”, Cochrane Database Syst Rev, 6, pp CD003296 d 40.Hoffmann W (2012), “Stem cells, self-renewal and cancer of the lu an gastric epithelium”, Curr Med Chem, 19, pp 5975–83 nf va 41.Hsu S.L., Lin Y.F., Chou C.K (1993), “Retinoic acid biphasically lm ul regulates the gene expression of hepatitis B virus surface antigen in z at nh oi human hepatoma Hep3B cell”, J BiolChem, 268, pp 23093–7 42.Humar B., Fukuzawa R., Blair V., Dunbier A., More H., Charlton A., et al (2007), “Destabilized adhesion in the gastric proliferative zone and z cancer”, Cancer Res, 67(6), pp 2480-9 l gm @ c-Src kinase activation mark the development of early diffuse gastric 43.Ismael R., Kathleen S., Jaime A.E., Helga W., Patricia G., Bruno N., co m Marcelo G., Alejandro H.C., Juan C.R, Carolina B (2015), “Molecular an Lu classification of gastric cancer: Towards a pathway-driven targeted n va therapy”, Oncotarget, 6(28), pp 24750–79 ac th si 54 44.Itziar P.M., Alexandre G., Umamaheswar D., Simon C.W., Alexander S (2017), “EGF receptor signaling, phosphorylation, ubiquitylation and endocytosis in tumors in vivo”, eLife, 6, pp e31993 45.Jackson C.B., et al (2007), “Augmented gp130-mediated cytokine signalling accompanies human gastric cancer progression”, J Pathol, 213, pp 140–51 46.Janssens V., Goris J., Van Hoof C (2005), “PP2A: the expected tumor suppressor”, Curr Opin Gen Dev, 15(1), pp 34-41 47.Japanese Gastric Cancer Association (2011), Japanese classification of lu gastric carcinoma, 3rd English ed Gastric Cancer 14, pp 101-12 an 48.Jatiani S.S., Baker, S.J., Silverman L.R (2010), "JAK/STAT Pathways va n in Cytokine Signaling and Myeloproliferative Disorders: Approaches to gh tn for Targeted Therapies", Genes & Cancer, 1(10), pp 979–93 49.Judd L.M., Menheniott T.R., Ling H., Jackson C.B., Howlett M., p ie Kalantzis A., Priebe W., Giraud A.S., “Inhibition of the JAK2/STAT3 nl w pathway reduces gastric cancer growth in vitro and in vivo”, PLoS One, d oa 9(5), pp e95993 an lu 50.Kinoshita Y., Kalir T., Rahaman J., Dottino P., Kohtz D.S (2012), nf va “Alterations in nuclear pore architecture allow cancer cell entry into or lm ul exit from drug-resistant dormancy”, Am J Pathol, 180(1), pp 375-89 51.Klampfer L (2008), “The role of signal transducers and activators of z at nh oi transcription in colon cancer”, Front Biosci, 13, pp 2888–99 52.Lai A.Z., Durrant M., Zuo D., Park M (2012), “Met Kinase-dependent z Loss of the E3 Ligase Cbl in Gastric Cancer”, J Biol Chem, 287(11), l gm @ pp 8048–59 53.Lara L., Thaísa C.M., Diego M., Jéssica N.A., Isabela S.L, Camila co m X.A., Julieta G., Vivian N.S (2019), “Modulation of all-trans retinoic an Lu acid-induced MiRNA expression in neoplastic cell lines: a systematic n va review”, BMC Cancer, 19, pp 866-72 ac th si 55 54.Lee I.O., et al (2010), “Helicobacter pylori CagA phosphorylation status determines the gp130-activated SHP2/ERK and JAK/STAT signal transduction pathways in gastric epithelial cells”, J Biol Chem, 285, pp 16042–50 55.Lee S.H., Jeong E.G., Nam S.W., Lee J.Y., Yoo N.J (2007), “Increased expression of Gab2, a scaffolding adaptor of the tyrosine kinase signalling, in gastric carcinomas”, Pathology, 39(3), pp 326-9 56.Leung W.K., Ng E K W., Sung J J Y (2009), Tumors of the stomach, Textbook of Gastroenterologyogy, pp 10261053 lu an 57.Li J., Orr B., White K., Belogortseva N., Niles R., et al (2009), “Chmp n va 1A is a mediator of the antiproliferative effects of all-trans retinoic acid 58.Liao W., Lin J.X., Leonard W.J (2011), “IL-2 Family Cytokines: New Insights into the Complex Roles of IL-2 as a Broad Regulator of T p ie gh tn to in human pancreatic cancer cells”, Mol Cancer, 8, pp 7-15 nl w helper Cell Differentiation”, Curr Opin Immunol, 23(5), pp 598-604 d oa 59.Manning B.D., Toker A (2017), “AKT/PKB Signaling: Navigating the an lu Network”, Cell, 169(3), pp 381-405 nf va 60.Matsumura T., Sugimachi K., Takahashi Y., Uchi R., Sawada G., Ueda lm ul M., & Kurashige J (2014), “Clinical significance of GAB2, a z at nh oi scaffolding/docking protein acting downstream of EGFR in human colorectal cancer”, Annals of surgical oncology, 2(4), pp.743-9 61.McColl K.E.L., (2006), “Cancer of the gastric cardia”, Best Practice & z gm @ Research Clinical Gastroenterology, 20(4), pp 687-96 l 62.McDonald S.A., Greaves L.C., Gutierrez-Gonzalez L., et al (2008), m co “Mechanisms of field cancerization in the human stomach: the 134, pp 500–10 an Lu expansion and spread of mutatedgastric stem cells”, Gastroenterology, n va ac th si 56 63.McIlwain D.R., Berger T., Mak T.W (2013), “Caspase functions in cell death and disease”, Cold Spring Harb Perspect Biol, 5(4), pp a008656 64.Meissl K., Macho-Maschler S., Müller M., Strobl B (2017), “The good and the bad faces of STAT1 in solid tumours”, Cytokine, 89, pp.12–20 65.Mélissa L.C, Julie D., Salma I., Aude P.C., Peter M.S., Louise L (2011), “Nck2 promotes human melanoma cell proliferation, migration and invasion in vitro and primary melanoma-derived tumor growth in vivo”, BMC Cancer, 11, pp 443-50 66.Messina J.L., Yu H., Riker A.I., Munster P.N., Jove R.L., Daud A.I lu an (2008), "Activated Stat-3 in Melanoma", Cancer Control, 15(3), pp n va 196–201 tn to 67.Mueller T., Voigt W., Simon H., Fruehauf A., Bulankin A., Grothey higher threshold for apoptosis and cisplatin resistance in testicular p ie gh A., Schmoll H.J (2003), “Failure of activation of caspase-9 induces a nl w cancer”, Cancer Res, 63(2), pp 513-21 d oa 68.Nathan B., Yu-Jui Y.W (2010), “Retinoid Pathway and Cancer an lu Therapeutics”, Adv Drug Deliv Rev, 62(13), pp 1285–98 nf va 69.Nguyen P.H., Giraud J., Staedel C., Chambonnier L., Dubus P., lm ul Chevret E., & Soubeyran I (2016), “All-trans retinoic acid targets z at nh oi gastric cancer stem cells and inhibits patient-derived gastric carcinoma tumor growth”, Oncogene, 35(43), pp 5619-28 70.Ohtsu A., (2008), “Chemotherapy for metastatic gastric cancer: past, z D.J., Hrstka R., Candeias M., Bourougaa l 71.Powell gm @ present, and future”, Journal of Gastroenterology, 43, pp 256-64 K., Vojtesek m co B., Fåhraeus R (2008), “Stress-dependent changes in the properties Cycle, 7(7), pp 950-9 an Lu of p53 complexes by the alternative translation product p53/47”, Cell n va ac th si 57 72.Pu X., Storr S.J., Ahmad N.S., Rakha S.A., Green A.R., Ellis I.O., Martin S.G (2018), “High nuclear MSK1 is associated with longer survival in breast cancer patients”, J cancer re clin oncol, 144(3), pp 509-17 73.Reyes D., Ballaré C., Castellano G., Soronellas D., Bagó J.R., Blanco J., Beato M (2014), “Activation of mitogen- and stress-activated kinase is required for proliferation of breast cancer cells in response to estrogens or progestins”, Oncogene, 33(12), pp 1570-80 74.Reyskens K.M., Arthur J.S (2016), “Emerging Roles of the Mitogen lu and Stress Activated Kinases MSK1 and MSK2”, Front Cell Dev Biol, an 4, pp 56-62 va n 75.Sakoe Y., Sakoe K., Kirito K., Ozawa K., Komatsu N (2010), to gh tn “FOXO3A as a key molecule for all-trans retinoic acid-induced granulocytic differentiation and apoptosis in acute promyelocytic p ie leukemia”, Blood, 115(18), pp 3787-95 nl w 76.Schonthal A.H (2001), “Role of serine/threonine protein phosphatase d oa 2A in cancer”, Cancer Lett, 170, pp 1-13 an lu 77.Schreiber S., Rosenstiel P., Hampe J., Nikolaus S., Groessner B., nf va Schottelius A., Kühbacher T., Hämling J., Fölsch U.R., Seegert D lm ul (2002), “Activation of signal transducer and activator of transcription (STAT) in human chronic inflammatory bowel disease”, Gut, 51, pp z at nh oi 379–85 78.Sever R., & Brugge J.S (2015), “Signal transduction in cancer”, Cold z Spring Harbor perspectives in medicine, 5(4), pp a006098 @ gm 79.Simon E., Petke D., Boger C., Behrens H.M., Warneke V., Ebert M., co l Röcken C (2012), “The spatial distribution of LGR5+ cells correlates m with gastric cancer progression”, PLoS One, pp 7:e35486 n va cancer”, Curr Med Chem, 19, pp 5965–74 an Lu 80.Singh S.R (2012), “Stem cell niche in tissue homeostasis, aging and ac th si 58 81.Stemmermann G.N., Fenoglio-Preiser C.M (2008), Gastric Cancer: Pathology, Principles and practice of gastrointestinal oncology, pp 257-74 82.Su L., Qiao W., Zheng-Ming C., Wen-Jin S (2001), “The effect pathway of retinoic acid through regulation of retinoic acid receptor a in gastric cancer cells”, World Journal of gastroenterology, 7(5), pp 662–6 83.Summy J.M., Gallick G.E (2006), “Treatment for advanced tumors: SRC reclaims center stage”, Clin Cancer Res, 12(5), pp 1398-401 lu 84.Toledo F., Wahl G.M (2006), “Regulating the p53 pathway: in vitro an n va hypotheses, in vivo veritas”, Nat Rev Cancer, 6(12), pp 909-23 (2012), “Helicobacter pylori infection recruits bone marrow-derived cells that participate in gastric preneoplasia in mice”, Gastroenterology, p ie gh tn to 85.Varon C., Dubus P., Mazurier F., Asencio C., Chambonnier L., et al w 142, pp 281–91 oa nl 86.Wang H., He H., Meng H., Cui Y., Wang W (2018), “Effects of Grb2- d associated binding protein 2-specific siRNA on the migration and lu nf va an invasion of MG-63 osteosarcoma cells”, Oncol Lett, 15(1), pp 926-30 87.Washington K., (2010), “7th Edition of the AJCC Cancer Staging lm ul Manual: Stomach”, Annals of Surgical Oncology, 17, pp 3077-9 z at nh oi 88.Wen Q., Jiao X., Kuang F., Hou B., Zhu Y., Guo W., Sun G., Ba Y., Yu D., Wang D., Zhang F., Qiao H.C., Wang S., Tang S., Qiao H z (2019), “FoxO3a inhibiting expression of EPS8 to prevent progression @ gm of NSCLC: A new negative loop of EGFR signaling”, EbioMedicine, co l 40, pp 198-209 roles of the Gab/DOS docking Cell n va Communication and Signaling, 7(1), pp 22-8 proteins”, an Lu pathological m 89.Wöhrle F.U., Daly R.J., Brummer T (2009), “Function, regulation and ac th si 59 90.Wong R.S (2011), “Apoptosis in cancer: from pathogenesis to treatment”, J Exp Clin Cancer Res, 30(1), pp 87-92 91.Yakisich J.S (2012), “Challenges and limitations of targeting cancer stem cells and/or the tumour microenvironment”, Drugs Ther Stud, 2(1), pp e10 92.Yang Y.C., Wang S.W., Hung H.Y., et al (2007), “ Isolation and characterization of human gastric cell lines with stem cell phenotypes”, J Gastroenterol Hepatol, 22, pp 1460–8 93.Yoo N.J., Lee S.H., Jeong E.G., Lee SH (2007), “Expression of lu phosphorylated caspase-9 in gastric carcinomas”, APMIS, 115(4), pp an 354-9 va n 94.Zhang H., Rosdahl I (2004), “Expression profiles of p53, p21, bax and to tn bcl-2 proteins in all-trans-retinoic acid treated primary and metastatic ie gh melanoma cells”, Int J Oncol., 25, pp 303-10 p 95.Zhang H., Zhou L., Zhou W., Xie X., Wu M., Chen Y., Hu Y., Du J., nl w He Y., Li Y (2019), “EPS8-mediated regulation of multiple myeloma d oa cell growth and survival”, Am J Cancer Res, 9(8), pp 1622-34 an lu 96.Zhang S., Huang S., Deng C., Cao Y., Yang J., Chen G., Zhang nf va B., Duan C., Shi J., Kong B., Friess H., Zhao N., Huang C., Huang lm ul X., Wang L., Zou X (2017), “Co-ordinated overexpression of SIRT1 and STAT3 is associated with poor survival outcome in gastric cancer z at nh oi patients”, Oncotarget, 8(12), pp 18848-60 97.Zhen Y., Guanghui L., Xiefu Z (2014), “Knockdown of EGFR inhibits z growth and invasion of gastric cancer cells”, Cancer Gene Ther, l gm @ 21(11), pp 491-7 98.Zheng A., Mantymaa P., Saily M., Savolainen E., Vahakangas K., co m Koistinen P (2000), “p53 pathway in apoptosis induced by all-trans- n va 103, pp 135-42 an Lu retinoic acid in acute myeloblastic leukaemia cells”, Acta Haematol, ac th si 60 99.Zheng Y., Zhang C., David R.C., Mohamed A.S., Nicole S.D., Adrian P., Lorne T., Stephen A.T., Rod W.H., Karen C., Anna Y.D., Rick B., James W.D, Gingras A.C, Roger J.D., Tony P (2013), “Temporal regulation of EGF signaling networks by the scaffold protein Shc1”, Nature, 499(7457), pp 166-71 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si