(Luận văn) nghiên cứu phân tích thành phần cấu trúc một số hợp chất phân lập từ cây hoàng tinh hoa trắng (disporopsis longifolia craib) bằng các phương pháp hóa lí hiện đại

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG THỊ HOẠT NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN lu CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ an n va CÂY HOÀNG TINH HOA TRẮNG (DISPOROPSIS tn to LONGIFOLIA CRAIB) BẰNG CÁC PHƯƠNG PHÁP p ie gh HĨA LÍ HIỆN ĐẠI d oa nl w an lu ll u nf va LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên-2020 n va ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG THỊ HOẠT NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN lu CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ an n va CÂY HOÀNG TINH HOA TRẮNG (DISPOROPSIS tn to LONGIFOLIA CRAIB) BẰNG CÁC PHƯƠNG PHÁP p ie gh HĨA LÍ HIỆN ĐẠI oa nl w Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 44 01 18 d an lu ll u nf va LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC oi m z at nh NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS KHIẾU THỊ TÂM z m co l gm @ an Lu n va Thái Nguyên-2020 ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn si i LỜI CẢM ƠN Đề tài hoàn thành phịng thí nghiệm Hóa học, khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến cô giáo hướng dẫn đề tài khoa học TS Khiếu Thị Tâm - Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi tốt nhất, động viên giúp đỡ suốt trình thực đề tài nghiên cứu Tơi xin gửi lịng biết ơn chân thành tới tất thầy cô giáo, người lu đem lại cho kiến thức bổ trợ, vơ có ích năm học an n va vừa qua tn to Tôi xin trân trọng cảm ơn tới Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo trường gh Đại học khoa học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Hóa học cán p ie nhân viên phịng thí nghiệm tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ thực nl w đề tài khoa học oa Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới tồn thể gia đình, d bạn bè người thân ln quan tâm, giúp đỡ, động viên, khích lệ tơi an lu suốt q trình học tập nghiên cứu ll u nf va oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Một số phương pháp hóa lý dùng để phân tích cấu trúc hợp chất hữu 1.1.1 Phương pháp phổ hồng ngoại IR 1.1.2 Phổ khối lượng MS (Mass spectrometry) 1.1.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR (Nuclear Magnetic Resonance) 1.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nước thành phần hóa học hoạt lu an tính sinh học chi Disporopsis 10 n va 1.2.1 Giới thiệu chi Disporopsis 10 1.2.3 Ứng dụng chi Disporopsis y học cổ truyền 11 ie gh tn to 1.2.2 Đặc điểm thực vật chi Disporopsis 10 p 1.2.4 Các nghiên cứu thành phần hóa học chi Disporopsis 11 nl w 1.3 Tình hình nghiên cứu nước nước Hoàng tinh hoa oa trắng (Disporopsis longifolia Craib) 16 d 1.3.1 Đặc điểm thực vật 16 an lu va 1.3.2 Ứng dụng Hoàng tinh hoa trắng y học cổ truyền 17 u nf 1.3.3 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học Hoàng tinh hoa trắng 18 ll 1.4 Hợp chất terpenoid 18 oi m z at nh 1.4.1 Khái niệm terpenoid 18 1.4.2 Phân loại terpenoid 18 z 1.4.3 Hoạt tính sinh học terpenoid 19 @ gm Chương THỰC NGHIỆM 20 m co l 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 an Lu 2.2.1 Phương pháp xử lý chiết mẫu 20 n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si iii 2.2.2 Phương pháp khảo sát, phân tách tinh chế hợp chất từ mẫu thực vật 21 2.2.3 Phương pháp phân tích cấu trúc 22 2.3 Hóa chất thiết bị 23 2.4 Quy trình phân lập hợp chất tự nhiên từ Hoàng tinh hoa trắng 23 2.5 Dữ liệu phổ hợp chất phân lập 25 2.5.1 Hợp chất DL1: β-sitosterol 25 2.5.2 Hợp chất DL2: oleanolic acid 25 2.5.3 Hợp chất DL3: -amyrin acetate 26 lu an 2.5.4 Hợp chất DL4: neoilexonol acetate 26 n va Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 tn to 3.1 Khảo sát cặn chiết ethylacetate SKLM 27 gh 3.2 Các hợp chất phân lập từ cao chiết ethylacetate 28 p ie 3.2.1 Hợp chất β-sitosterol (DL1) 28 w 3.2.2 Hợp chất oleanolic acid (DL2) 30 oa nl 3.2.3 Hợp chất -amyrin acetate (DL3) 33 d 3.2.4 Hợp chất neoilexonol acetate (DL4) 36 lu va an KẾT LUẬN 42 u nf TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 ll PHỤ LỤC 46 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 Proton Nuclear Magnetic resonance Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H CC Column Chromatography Sắc ký cột thường COSY Correlation Spectroscopy Phổ tương tác hai chiều H -1 H DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Phổ DEPT ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Spectrometry Phổ khối ion hóa phun mù điện tử HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết High Resolution - Electron Spray Ionization - Mass Spectrometry Phổ khối phân giải cao ion hóa phun mù điện tử Heteronuclear Single Quantum Coherence Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết 13 C-NMR H-NMR lu an n va tn to p ie gh HR-ESIMS oa nl w HSQC d Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử Inhibitory Concentration 50% IR Infrared Spectroscopy NOESY Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy TLC Thin Layer Chromatography an lu IC50 u nf va Phổ hồng ngoại Phổ NOESY ll oi m Sắc ký mỏng EtOH: ethanol MeOH: Methanol CH2Cl2: dichloromethane z Chloroform an Lu CHCl3: m co l gm @ singlet doublet triplet multiplet broad singlet doublet of doublets triplet of doublets doublet of triplets z at nh s: d: t: m: brs: d: td: dt: n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si v EtOAc: acetate ethyl lu an n va p ie gh tn to DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Phổ hấp thụ hồng ngoại ethyl acetate Hình 1.2 Phổ ESI-MS bovine ubiquitin từ Protea Biosciences Hình 1.3 Hình ảnh lồi D pernyi 11 Hình 1.4 Hình ảnh lồi D aspersa 11 Hình 1.5 Cấu trúc hợp chất flavonoid phân lập từ chi Disporopsis 13 Hình 1.6 Cấu trúc hợp chất steroid phân lập từ chi Disporopsis 14 Hình 1.7 Cấu trúc hợp chất alkaloid phân lập từ chi Disporopsis 15 Hình 1.8 Cấu trúc số hợp chất khác từ chi Disporopsis 16 Hình 1.9 Cây Hồng tinh hoa trắng 17 Hình 1.10 Cấu trúc số terpenoid 19 Hình 2.1 Hình ảnh Hồng tinh hoa trắng thu hái Sơn La 20 Hình 2.2 Quy trình ngâm chiết mẫu Hồng tinh hoa trắng 21 Hình 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao chiết ethylacetate 24 Hình 3.1 Cấu trúc β-sitosterol 28 Hình 3.2 Phổ 1H-NMR DL1 29 Hình 3.3 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) DL1 29 Hình 3.4 Cấu trúc oleanolic acid 30 Hình 3.5 Phổ ESI-MS DL2 31 Hình 3.6 Phổ 1H-NMR DL2 (500MHz, CDCl3) 31 Hình 3.7 Phổ 13C-NMR DL2 (125 MHz, CDCl3) 32 d oa nl w ll u nf va an lu m oi Hình 3.8 Cấu trúc -amyrin acetate 33 z at nh z Hình 3.9 Phổ 1H-NMR DL3 (500MHz, CDCl3) 33 Hình 3.10 Phổ 13C-NMR DL3 (125 MHz, CDCl3) 34 Hình 3.11 Cấu trúc neoilexonol acetate 36 Hình 3.12 Phổ IR DL4 36 Hình 3.13 Phổ 1H-NMR DL4 (500MHz, CDCl3) 37 Hình 3.14 Phổ 13C-NMR DL4 (125 MHz, CDCl3) 38 Hình 3.15 Phổ HSQC giãn DL4 39 Hình 3.16 Phổ HMBC giãn DL4 40 m co l gm @ an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si vi Hình 3.17 Các tương tác phổ HMBC DL4 40 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Các loài thuộc chi Disporopsis .10 Bảng 1.2 Phân loại terpenoid 18 Bảng 3.1 Kết khảo sát sắc ký lớp mỏng cặn ethyacetate .27 Bảng 3.2 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) (ppm) hợp chất DL3 -amyrin acetate 35 lu an Bảng 3.3 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) (ppm) hợp chất DL4 neoilexonol acetate 41 n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN si vii DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục Các phổ β-sitosterol (DL1) I Phụ lục Các phổ oleanolic acid (DL2) IV Phụ lục Các phổ -amyrin acetate (DL3) VIII Phụ lục Các phổ neoilexonol acetate (DL4) XI Phụ lục Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật cao chiết XIX lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN si MỞ ĐẦU Nghiên cứu thành phần hoá học cấu trúc hợp chất hữu phần quan trọng nghiên cứu phân tích hữu biết thành phần cấu trúc định tính, định lượng, khảo sát hoạt tính sinh học tổng hợp hợp chất có hoạt tính sinh học quý cho y dược Để phân lập hợp chất hữu người ta sử dụng phương pháp sắc kí lớp mỏng, sắc kí cột, sắc kí gel, sắc kí khí, sắc kí lỏng hiệu cao Để xác định cấu trúc hợp chất phân lập người ta lu dùng phương pháp phổ đại phổ hồng ngoại, phổ tử ngoại khả kiến, an phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều hai chiều Mỗi phương pháp cho phép va n ta xác định số thông tin khác cấu trúc phân tử hỗ trợ lẫn Cho đến chi Disporopsis, có loài Disporopsis aspera p ie gh tn to việc xác định cấu trúc hợp chất hữu Disporopsis pernyi nghiên cứu thành phần hóa học Những kết oa nl w nghiên cứu ban đầu cho thấy chúng chứa nhiều lớp chất phong phú gồm có d flavonoid, alkaloid, steroid nhiều hợp chất thể hoạt tính sinh an lu học lý thú Điều chứng tỏ chi Disporopsis nguồn tài nguyên triển vọng u nf va cho công tìm kiếm hợp chất có cấu trúc có hoạt tính sinh học ll q phục vụ cho trình tìm kiếm hợp chất làm thuốc m oi Cây Hoàng tinh hoa trắng (Disporopsis longifolia Craib) z at nh thuốc thuộc chi Disporopsis Theo y học dân gian, Hoàng tinh hoa trắng có tác z dụng chữa tỷ vị hư nhược, suy kiệt, mệt mỏi, miệng khô biếng ăn, tinh huyết gm @ bất túc, nội nhiệt, tiêu khát, chữa lao phổi, ho máu, hạ lipid máu làm giảm l xơ cứng mạch vành Tuy nhiên, đến chưa có cơng bố thành phần m co hóa học hoạt tính sinh học lồi Cấu trúc hợp chất phân lập an Lu từ thực vật xác định phương pháp hóa lí đại n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si V lu an n va gh tn to p ie Phổ 1H-NMR giãn oleanolic acid d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN an Lu Phổ 1H-NMR giãn oleanolic acid si VI lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Phổ 13C-NMR oleanolic acid (125 MHz, CDCl3) ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN an Lu Phổ 13C-NMR giãn oleanolic acid si VII lu an n va p ie gh tn to w d oa nl Phổ DEPT oleanolic acid ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN an Lu Phổ DEPT giãn oleanolic acid si VIII Phụ lục Các phổ -amyrin acetate (DL3) 30 29 20 19 12 Ac O 28 14 10 17 26 25 22 13 11 21 18 16 15 27 24 23 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Phổ 1H-NMR -amyrin acetate (500MHz, CDCl3) ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN n va Phổ 1H-NMR giãn -amyrin acetate (500MHz, CDCl3) si IX lu an n va to p ie gh tn Phổ 1H-NMR giãn -amyrin acetate (500MHz, CDCl3) d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Phổ 13C-NMR -amyrin acetate (125 MHz, CDCl3) n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si X lu an n va gh tn to p ie Phổ 13C-NMR giãn -amyrin acetate d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Phổ 13C-NMR giãn -amyrin acetate n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN si XI Phụ lục Các phổ neoilexonol acetate (DL4) lu Phổ IR neoilexonol acetate an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z gm @ Phổ 1H-NMR neoilexonol acetate (500MHz, CDCl3) m co l an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si XII lu an n va to p ie gh tn Phổ 1H-NMR giãn neoilexonol acetate d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ Phổ 1H-NMR giãn neoilexonol acetate an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si XIII lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Phổ 13C-NMR neoilexonol acetate (125 MHz, CDCl3) ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN va Phổ 13C-NMR giãn neoilexonol acetate si XIV lu an n va to p ie gh tn Phổ 13C-NMR giãn neoilexonol acetate d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ Phổ HSQC neoilexonol acetate an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si XV lu an n va ie gh tn to p Phổ HSQC giãn neoilexonol acetate d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Phổ HSQC giãn neoilexonol acetate n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si XVI lu an n va ie gh tn to p Phổ HMBC neoilexonol acetate d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN va Phổ HMBC giãn neoilexonol acetate si XVII lu an n va gh tn to p ie Phổ HMBC giãn neoilexonol acetate d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN va Phổ HMBC giãn neoilexonol acetate si XVIII lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Phổ HMBC giãn neoilexonol acetate ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN si XIX Phụ lục Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật cao chiết lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va http://lrc.tnu.edu.vn ac th Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN si