(Luận văn) nghiên cứu phân lập, tuyển chọn và tạo chế phẩm thô của vi sinh vật sinh enzyme phytase từ đất thuộc địa bàn huyện hòa vang thành phố đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƢỜNG lu LÊ TRẦN DIỆU LINH an n va p ie gh tn to d oa nl w NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ TẠO CHẾ PHẨM THÔ CỦA VI SINH VẬT SINH ENZYME PHYTASE TỪ ĐẤT THUỘC ĐỊA BÀN HUYỆN HÒA VANG – THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Đà Nẵng - năm 2018 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan đề tài: “Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn tạo chế phẩm thô vi sinh vật sinh enzyme phytase từ đất thuộc địa bàn huyện Hòa Vang- thành phố Đà Nẵng” kết nghiên cứu riêng Các số liệu nghiên cứu, kết điều tra, kết phân tích trung thực, chƣa đƣợc cơng bố Các số liệu liên quan đƣợc trích dẫn có ghi nguồn gốc, công bố theo quy định Đà Nẵng, tháng 05 năm 2018 lu an n va p ie gh tn to Lê Trần Diệu Linh d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Em xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô PGS.TS Đỗ Thu Hà ngƣời ln quan tâm tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt nhiều kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho em q trình thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Khoa -Môi trƣờng - Đại học Sƣ PhạmĐại học Đà Nẵng quan tâm tạo điều kiện tốt giúp cho em hồn thành khóa luận lu Cuối cùng, em xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè anh chị an va khóa ln nhiệt tình hỗ trợ, giúp đỡ động viên em suốt thời gian n làm khóa luận tn to ie gh Xin chân thành cảm ơn! p Lê Trần Diệu Linh d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG viii MỞ ĐẦU 1 ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI lu an CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU n va 1.1 AXIT PHYTIC VÀ PHYTATE 1.2.1 Nguốc gốc enzyme phytase gh tn to 1.2 ENZYME PHYTASE ie 1.2.2 Đặc điểm enzyme phytase p 1.2.3 Ứng dụng enzyme phytase nl w 1.3 LÊN MEN XỐP 12 oa 1.3.1 Khái niệm lên men xốp 12 d 1.3.2 Ƣu điểm nhƣợc điểm kỹ thuật lên men xốp 12 lu va an 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU ENZYME PHYTASE TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM 13 u nf 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 ll oi m 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 14 z at nh 1.5 ĐỊNH DANH CÁC CHỦNG VI SINH VẬT BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ 15 z 1.6 ĐẶC ĐIỂM TỰ NHIÊN KHU VỰC NGHIÊN CỨU 16 gm @ 1.6.1 Địa hình đất đai 16 1.6.2 Đặc điểm khí hậu thổ nhƣỡng 16 l m co CHƢƠNG II ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 17 an Lu 2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 17 n va ac th si iv 2.2 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Địa điểm thu mẫu thực địa 17 2.2.2 Địa điểm phạm vi nghiên cứu thí nghiệm 17 2.2.3 Thời gian nghiên cứu 18 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.3.1 Phƣơng pháp lấy mẫu xử lí mẫu đất 18 2.3.2 Phƣơng pháp phân lập vi sinh vật có khả sinh phytase ngoại bào 19 2.3.3 Phƣơng pháp xác định mật độ vi sinh vật (theo phƣơng pháp Koch) 20 2.3.4 Phƣơng pháp xác định hoạt độ enzyme phytase 21 2.3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu đặc điểm ni cấy hình thái chủng tuyển lu chọn 23 an 2.3.6 Giữ giống VSV 24 va n 2.3.7 Định danh vi sinh vật kỹ thuật sinh học phân tử 24 tn to 2.3.8 Phƣơng pháp tạo chế phẩm enzyme phytase 27 gh CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 32 p ie 3.1 PHÂN LẬP CÁC CHỦNG VI SINH VẬT SINH ENZYME PHYTASE 32 w 3.3 ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ NI CẤY CỦA CÁC CHỦNG VI SINH VẬT nl SINH ENZYME PHYTASE TUYỂN CHỌN 38 d oa 3.4 ĐỊNH DANH CÁC CHỦNG VI SINH VẬT SINH ENZYME PHYTASE an lu ĐƢỢC TUYỂN CHỌN 44 va 3.4.1 Nhân trình tự gen 18S rRNA mẫu nấm NM1 NM4 44 u nf 3.4.2 Giải trình tự lập phân loại 45 ll 3.5 KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƢỜNG ẢNH HƢỞNG ĐẾN KHẢ m oi NĂNG SINH ENZYME PHYTASE TRONG QUÁ TRÌNH LÊN MEN XỐP 46 z at nh KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 KẾT LUẬN 57 z @ 2.KIẾN NGHỊ 58 m co l gm TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 an Lu n va ac th si v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to : Colony Foming Unit (Đơn vị khuẩn lạc) CT : Công thức KL : Khuẩn lạc KLTB HSCC : Khối lƣợng trung bình : Hệ sợi chất HSKS : Hệ sợi khí sinh MT : Môi trƣờng NM : Nấm mốc STT : Số thứ tự TB : Trung bình TP : Thành phố VK : Vi khuẩn VSV : Vi sinh vật PSM : Phytase screening media d oa nl w CFU ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc inositol Hình 1.2 Muối phytate liên kết với ion kim loại protein Hình 1.3 Phản ứng xúc tác enzyme phytase Hình 2.1 Mối tƣơng quan nồng độ K2HPO4 với OD 23 Hình 2.2 Chu trình gia nhiệt chƣơng trình chạy PCR 25 Sơ đồ quy trình lên men xốp tạo chế phẩm enzyme lu Hình 2.3 28 an phytase va Một số chủng nấm mốc phân lập đƣợc mơi trƣờng n Hình 3.1 35 PSM gh tn to Một số chủng vi khuẩn phân lập đƣợc môi trƣờng Hình 3.2 35 p ie PSM Hình 3.3 Tỉ lệ % chủng vi khuẩn, nấm mốc có khả sinh 37 nl w phytase mạnh Hình ảnh phân giải acid phytate VK-1 VK-4 oa 38 d Hình 3.4 an lu mơi trƣờng PSM mơi trƣờng 38 ll u nf Khuẩn lạc hình thái tế bào vi khuẩn VK-1 39 m Hình 3.6 Hình ảnh phân giải acid phytate NM-1 NM-4 va Hình 3.5 Chủng nấm mốc NM-1trên mơi trƣờng PDA Cơ quan oi Dịch nuôi cấy lỏng qua 120 nuôi cấy 43 l Thu dịch lỏng nuôi cấy chủng tuyển chọn qua thời gian nuôi cấy m co 44 an Lu Hình 3.11 42 sản chủng nấm mốc NM-4 dƣới kính hiển vi gm Hình 3.10 Chủng nấm mốc NM-4 môi trƣờng quan sinh @ Hình 3.9 sinh sản chủng nấm mốc NM-1 dƣới kính hiển vi z Hình 3.8 41 z at nh Hình 3.7 Kết phản ứng PCR nhân gen mã hóa18S rARN 44 n va ac th si vii mẫu NM1 Kết phản ứng PCR nhân gen mã hóa18S rARN Hình 3.12 45 mẫu NM4 Giản đồ phả hệ chủng nấm NM1, NM4 số chủng Hình 3.13 45 nấm khác Hình 3.14 Giống cấp chủng VK-1 sau ngày nuôi cấy dịch thể 47 Hình 3.15 Sơ đồ quy trình lên men xốp chủng vi khuẩn VK-1 47 Khảo chất thích hợp cho lên men xốp chế phẩm Hình 3.16 48 phytase thơ lu Khảo sát chất thích hợp cho lên men xốp chủng vi an Hình3.17 49 khuẩn VK-1 n va gh tn to Hình 3.18 p ie Hình 3.19 51 phytase chủng VK-1 tuyển chọn Ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh enzyme 53 phytase môi trƣờng xốp chủng VK-1 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng pH mơi trƣờng 54 thích hợp oa nl w Hình 3.20 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme Ảnh hƣởng pH đến khả sinh hoạt tính enzyme d 55 lu Hình 3.21 ll u nf va an phytasecủa cung VK-1 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si viii DANH MỤC BẢNG Số hiệu Tên Bảng bảng Trang Bảng 1.1 Sự phân bố Phytate hạt số trồng Bảng 2.1 Tƣơng quan hàm lƣợng phốt vô OD 700 nm 22 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 25 Bảng 2.3 Mã số trình tự 18S rARN số loài nấm mốc 27 lu Khảo sát ảnh hƣởng nguồn chất lên men đến hoạt tính an Bảng 2.4 29 n va enzyme chủng VSV tuyển chọn tn to Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả Bảng 2.5 29 sinh enzyme phytase chủng VSV tuyển chọn gh p ie Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến q trình sinh enzyme 30 phytase VSV mơi trƣờng bán rắn nl w Bảng 2.6 Khảo sát ảnh hƣởng pH môi trƣờng lên men đến hoạt oa Bảng 2.7 31 d tính enzyme chủng vi sinh vật tuyển chọn lu đƣợc phân lập từ đất xã thuộc H.Hòa Vang -TP.Đà ll Nẵng 33 u nf Bảng 3.1 va an Số chủng vi sinh vật sinh trƣởng môi trƣờng sàng lọc oi m Bảng 3.2 z at nh Khả sinh enzyme phytase số chủng nấm mốc 36 vi khuẩn mơi trƣờng PSM có bổ sung CaCl2 z Đặc điểm ni cấy hình thái chủng VK-2 sinh phytase @ mạnh 39 l gm Bảng 3.3 Đặc điểm hình thái chủng nấm mốc NM-1, NM-4 40 Bảng 3.5 Hoạt độ enzyme chủng MN-1, MN-4 VK-2 qua 42 m co Bảng 3.4 an Lu n va ac th si ix thời gian nuôi cấy dựa so sánh trình tự nucleotide gen mã hóa 18S rARN Kết ảnh hƣởng chất lên men đến khả hoạt Bảng 3.6 49 tính enzyme chủng VK-1 tuyển chọn Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh enzyme phytase Bảng 3.7 51 chủng VK-1 tuyển chọn Ảnh hƣởng thời gian đến trình sinh enzyme phytase Bảng 3.8 52 sinh trƣởng VSV môi trƣờng bán rắn lu Ảnh hƣởng điều kiện pH đến khả sinh hoạt tính an Bảng 3.9 55 n va enzyme phytase p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 61 Tài liệu nƣớc [21] Baharak H., Giti E and Iraj N (2009), “Analysis of phytase producing bacteria (Pseudomonas sp.) from poultry faeces and optimization of this enzyme production”, African Journal of Biotechnology 8(17), pp 4229 – 4232 [22] Barrier-Guillot B., Casado P., Maupetit P., Jondreville C., and Gatel F., (1996), “Wheat phosphorus availability: 1-In vitro study; Factors affecting endogenous phytasic activity and phytic phosphorus content”, J Sci Food Agric, 70, pp 62 - 68 lu Bergey D.H.; Noel R.K.; John G.H (1989), Bergey’s manual of sytematic an [23] va bacteriology, Publisher: Baltimore, MD : Williams & Wilins Bijender S., Satyenarayana T (2011), “Microbial phytases in phosphorus n [24] to 93 – 103 p ie gh tn acquisition and plant grouth promotion”, Physool Mol Biol Plant, 17(2), pp [25] Deliliers L.G., Servida G., Fracchiolla N.S., Ricci C., Borsotti C., Colombo nl w G., et al (2002), “Effects of inositol hexaphosphate (IP6) on human normal an lu 577–587 d oa and leukaemic hematopoietic cells”, British Journal of Haematology, 117, pp [26] Eeckhout W and M de Paepe (1994), “Total phosphorus, phytate-phosphorus va u nf and phytase activity in plant feedstuffs”, Anim Feed Sci Tech 47, pp 19 29 ll [27] Elif D., Eren B., Alev U (2014), “Screening of phytate hydrolysis Bacillus sp m oi isolated from soil and optimization of the certain nutritional and physical z at nh parameters on the production of phytase”, Türk Biyokimya Dergisi [Turkish Journal of Biochemistry–Turk J Biochem], 39(2), pp 206–214 z Findenegg G.R and Nelemans J.A (1993), “The effect of phytase on the gm @ [28] availability of phosphorus from myo-inositol hexaphosphate (phytate) for m co [29] l maize roots”, Plant and Soil, 154, pp 189-196 Hall BG Building phylogenetic trees from molecular data with MEGA Mol an Lu Biol Evol 2013 May; 30(5):1229-35 doi: 10.1093/molbev/mst012 n va ac th si 62 [30] Iqbal T.H., Lewis K.O., & Cooper B.T (1994), “Phytase activity in the human and rat small intestine”, Gut, 35, pp 1233–1236 [31] Idris E.E., Makarewicz O., Farouk A., Rosner K., Greiner R., Bochow H., (2002), et al “Extracellular phytase activity of Bacillus amyloliquefaciens FZB45 contributes to its plant-growth promoting effect”, Microbiology, 148, pp 2097–2109 Katsuhiko Ando (2002), “Identifibioication of Fungi Imperfecti”, Nite [32] Biological Resource Center National Intitutle of technology and Evaluation, pp 13-25 lu Konietzny U., & Greiner R (2003), “Phytic acid: Nutritional impact In B an [33] va Caballero, L Trugo, & P Finglas (Eds.)”, Encyclopaedia of food science and n nutrition, pp 4555–4563 nutrients”, Proc MD Nutr Conf., 46, pp 83-103 ie gh tn to [34] Kornegay E.T (1999), “Application of phytase for retention of nonphosphorus p [35] Kornegay E.T., Denbow D.M., Yi Z., and Ravindran V (1996), “Response of nl w broilers to graded levels of microbial phytase added to maizesoybean-meal d oa based diets containing three levels of non-phytate phosphorus”, Br J Nutr, an lu 75, pp 839-852 [36] Kumar S, Stecher G, Tamura K MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics va u nf Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets Mol Biol Evol 2016 ll Jul;33(7):1870-4 doi: 10.1093/molbev/msw054 m oi [37] Li F, Wang B, Wang L, Cao B Phylogenetic analyses on the diversity of z at nh Aspergillus fumigatus sensu lato based on five orthologous loci Mycopathologia 2014 Oct;178(3-4):163-76 doi: 10.1007/s11046-014-9790-0 z gm @ [38] Loewus F (2002), Biosynthesis of phytate in food grains and seeds In N R Reddy & S K Sathe (Eds.), Food phytates (pp 53–61) Boca Raton, Florida, m co l USA: CRC Press [39] Lopez H.W., Leenhardt F., Coudray C., & Rémésy C (2002), “Minerals and an Lu phytic acid interactions: Is it a real problem for human nutrition”, n va ac th si 63 International Journal of Food Science and Technology, 37, pp 727–739 [40] Maenz D.D and Classen H.L (1998), “Phytase activity in the small intestinal brush border membrane of the chicken”, Poult Sci, 77, pp 557-563 [41] Moushree P.R and Shilpi G (2014), Purification and characterization of phytase from two enteric bacteria isolated from cow dung, Proceedings of 5th International Conference on Environmental Aspects of Bangladesh [42] Oberleas D (1983), 'The role of phytate in zinc bioavailability and homeostasis In G E Inglett (Ed.), Nutritional bioavailability of zinc (pp 145–158) Washington, DC: American Chemical Society lu Pradnya D.G., Kavita P.B., Jayant M.K (2013), “Effect of phytase from an [43] va Aspergillus niger on plant growth and mineral assimilation in wheat n (Triticumaestivum Linn.) and its potential for use as a soil amendment”, to gh tn Journal of the Science of food and agriailture, 93(9), pp 2242-2247 Prasad A.S., Miale A.Jr., Farid Z., Sandstead H.H., & Darbv W.J (1963), ie [44] p “Biochemical studies on dwarfism, hypogonadism and anemia”, Archives of Robert A Samson at al (1984), Introduction Food- Borne Fungi, Institute of d oa [45] nl w Internal Medicine, 111, pp 407 an lu the Royal Netherlands Academy of Arts and Sciences [46] Ravindran V., Bryden W.L., and Kornegay E.T (1995), “Phytates: va u nf Occurrence, bioavailability, and implications in poultry nutrition”, Poult ll Avian Biol, 6, pp 125-143 m Sakamoto K.,VenkatramanG., & Shamsuddin A.M (1993), “Growth oi [47] z at nh inhibition and differentiation of HT-29 cells in vitro by inositol hexaphosphate (phytic acid)”, Carcinogenesis, 14, pp 1815–1819 z Samson RA, Visagie CM, Houbraken J, Hong SB, Hubka V, Klaassen gm @ [48] CH, Perrone G, Seifert KA, Susca A, Tanney JB, Varga J, Kocsubé S, Szigeti l genus Aspergillus Stud 2014 Jun;78:141-73 doi: an Lu 10.1016/j.simyco.2014.07.004 Mycol m co G, Yaguchi T, Frisvad JC Phylogeny, identification and nomenclature of the n va ac th si 64 [49] Zhang YJ, Zhang S, Liu XZ, Wen HA, Wang M A simple method of genomic ADN extraction suitable for analysis of bulk fungal strains Lett Appl Microbiol 2010 Jul;51(1):114-8 doi: 10.1111/j.1472-765X.2010.02867.x lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: MỘT SỐ MÔI TRƢỜNG DINH DƢỠNG SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU Môi trƣờng dịch thể LB (g/l): Pepton-10; NaCl- 5; pH 6,8± 0,2, Môi trƣờng thạch thƣờng LB (g/l): Pepton- 5, NaCl-5 ; Agar-20 Môi trƣờng Jorquera (2008) (g/l): Glucose- 10; Na-phytate- ; CaCl2- 2; NH4NO3- 5; KCl- 0,5; MgSO4.7H2O- 0,5; FeSO4- 0,01; MnSO4- 0,01; khử trùng lần cách 24h, lần 100ºC/15 phút Môi trƣờng sàng lọc chủng sinh phytase (PSM – phytase screening lu an media) (g/l): Glucose- 10; Na-phytate- 4; CaCl2- 2; NH4NO3- 5; KCl- 0,5; n va MgSO4.7H2O- 0,5; FeSO4- 0,01; MnSO4- 0,01; Agar- 20, khử trùng lần Môi trƣờng nuôi xốp với chất ngô vỡ, gạo lức, bột đỗ tƣơng, cám, dung dịch làm ẩm môi trƣờng dịch thể Jorquera không bổ sung chất p ie gh tn to cách 24h, lần 100ºC/15 phút d oa nl w Na- phytate) ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC 2: MỘT SỐ HÌNH ẢNH KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Hình ảnh chủng phân lập lu an va n Hình Các chủng VSV phân lập từ đất môi trƣờng PSM p ie gh tn to d oa nl w va an lu ll u nf Hình Một số chủng nấm mốc phân lập đƣợc oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình Một số chủng vi khuẩn phân lập đƣợc n va ac th si Hình Khuẩn lạc chủng VK-1 VK nuôi cấy môi trƣờng LB lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Hình Chủng nấm mốc MN 1và MN môi trƣờng PDA sau ngày nuôi cấy ll u nf va an lu oi m z at nh Hình Hình ảnh phân giải chủng VSV tuyển chọn môi trƣờng PSM z m co l gm @ an Lu n va ac th si Hình Các chủng VSV tuyển chọn mơi trƣờng dịch thể PSM lu an n va p ie gh tn to w Hình Khảo sát điều kiện mơi trƣờng ảnh hƣởng đến q trình lên men d oa nl xốp chủng vi khuẩn VK-1 ll u nf va an lu oi m z at nh Hình Ly tâm mẫu chế phẩm đo mật độ quang z m co l gm @ an Lu n va ac th si TRÌNH TỰ GEN MÃ HĨA CHO 18S RRNA CỦA CÁC MẪU NM1 VÀ NM4 lu an n va CTTGAATTCGTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAAC AATTCGTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAAC -GTCTAAGTATAAAC M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 AACTTTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATGGTA AAATTTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATGGTA -AAATTTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATGTTA M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TCGTAGGTGACC -TTCCGTAGGGTGAACC CTTCCGTAGGTGAACC CCTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATCAAGCCCCGACT CCTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATCAAGCCCCGACT TACATGCAATCAAGCCCCGACT ACTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATCAAGCCCCGACT p ie gh tn to M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 d oa nl w an lu ATTAGCAAGTGCGGG-CCCTCTGGGTCCAACAGGCCCCGTGTCTAT AAGGATCATTACTGAGTGCGGG-CTGCCTTCGGGCGCCCAACCTCCCACCCGTGA TGCGGAAGGATCATTACCGAGTGAGGG -CCCTCTGGGTCCAACCTCCCACCCGTGTCT -AAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTT TGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTT TGCGGAAGGATCATTACTGAGTGAGGG TCCCTCGGGGCCCAACCTCCCACCCGTGTAT TCCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT TCCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT TCTGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT TCCGGGAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCCCTTGGTGAT *:: : :* : * * * ll u nf va oi m z at nh M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -CTGTACCCTGTTGCTTCGGCG -CTACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAG ATCG TACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTTTCGACG -GCCGCC ACTGTAACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCG TTTACG -GCCGCC ACTG-TACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCGTG GCC ACCG TACCTTGTTGCTTCGGCGAGCCCACCCCCTTTT TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC TCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGC : : * *.:*** M4 -TGGCTACGGCCCGCCGAAGACTAACATTTCAACACTGTCTG z M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 m co l gm @ an Lu n va ac th si -CCCTCTCGGGGGCGAGCCGCCGGGGACTACTGAACTTCATGCCTGAG GGGGAGGCCTTGCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCAACATGAACGCTGTTCT GGGGGG CATCAGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCT GTCT GCCGGGGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTG TCT TCTTAGGGGGGCACAGCGCTCGCCGGAGACACCAACGTGAACACTG-TCT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT CCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAAT * * * * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 AAGTTTGCAGTCTGAGTTTTTAG-TTAAACAATAATTAAAACTTTCAACAACG AGTGATGCAGTCTGAG-TCTGAA-TATAAAATCAGTCAAAACTTTCAACAATG GAAAGTATGCAGTCTGAGTTGATT ATCGTAATCAGTTAAAACTTTCAACAACG GATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATG GATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATG GAAGTTTTGTCGTCTGAGTCGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATG AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC AAGGGTTCGATTCCGGAG-AGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGC * * *** : : *: * **:* *** * * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA -GATCTCTTGGTTCCGGCAT -CGATGAAGA AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG AGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATATAGG ** :* * ***.** *.**.:** lu EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 an n va p ie gh tn to w d oa nl lu ACGCAGCGAAATGCGATAATT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAACTGCGATAAGT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAAGT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAACT AGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAACT AGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTT ACGCAGCGAAATGCGATAATT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTT GCTCTTTCGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT GCTCTTTCGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT GCTCTTTTGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT GCTCTTTCGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATT * *: * **** * *.**:*:* : : **:** * ** * * :.** ll u nf va an M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 m TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGCATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CGCCCCCTGGTATTCCG -GGG TGAACGCACATTG CACCCCCTGGTATTCCG -GGG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG GGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG ** *** * * ** * * ***** * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCT-CAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCTTCCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAG-CACGGCTTGTGTGTTGGGCCCCCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG GGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG GGTATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCT-CAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCG oi M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTCGGGCGGTCCGCTTAACG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTCGGGCGGTCCGCTTAACG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTCGGGGG-TCCGCCTCACG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACTTCAGACCTGGTTGGGTGGTCCGCTTAACG :*** * * **.*:* ** *: * * ** * * * ** M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -ACCCTGGTAACGGGG ACGGGCCCAAAAGGCAGTGG -TCCCC CCCGGGGG ACGGGCCCGAAAGGCAGCGG -TCCCCCTCTCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGG -TCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGG -TCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGG -TCCCC CCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGG GCGTGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTATTGGTGTG GCGTGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTATTGGTGTG GTGTGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTATTGGTGTG GCGAGTACTGTCTGACTGGGCCTTACCTCTTGGTGAGCCGGCGTGCCCTTTACTG-GGTG :.** * ** **** ::* * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CGGCACCATGTCTGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTGT -CGGCACCGTGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGGCTCCGCAACCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTT -CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCTTATGCT CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCC CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCTTATGCC CGTCGGGGAACCAGGACTTTTACCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCC ** * * *.:* * * * *.:* * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG CGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG CGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG CGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAG p ie gh tn to AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 an lu -GTCACCCG CTCCCG-TAGGTCCAGCTGG CAGCTAGCCTCG CAA -GTCACCCG CTCGATTTAGGGCCGGCCGG GCGCCAGCCGACGTCCA -GTCACCTG CTCTGT AGGCCCGGCCGG CGCCAGCCGACACCCAA -GTCACCCG CTCTGT AGGCCCGGCCGG CGCTTGCCGAACGCAAA -GTCACCCG CTCTGT AGGCCCGGCCGG CGCTTGCCGAACGCAAA -GTCACTATTGTACCTTGTTGCTTCGGCGGG CCCGCCAGCGTTGCTGG AATCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA AGTCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA AGTCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA AGTCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATTGGTATTGAGTCGCTAGAGGTGA **.* :* * ** ll u nf va oi m z at nh z CCAATCTTTAACCAGG TTGACCTCGGATCCGGTAGGGATACCCATG-AACTTAAGCAT ACCATTTTTCTTCAGG TTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCAT CTTTATTTTTCTAAGG TTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCAT ACAACCATTCTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCAT TCAATCTTTTTCCAGG TTGACCTCGGATCAGGTAGGGTTCCCCGCTGAACTTAAGCAT CCGCCGGGGGGCGACT -CGCCCCCGGGCCCG TGCCCGCCGGAGACCCCAACATG AATTCTTGGATTGACTCAAGACCAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT AATTCTTGGATTGACTCAAGACCGACTATTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT AATTCTTGGATTGACTCAAGACCAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT AATTCTTGGATTGACTCAAGACCAACTATTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATT * * * ** * :: : m co l gm @ an Lu M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 d oa nl w M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 n va ac th si lu an n va ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTG -C ATCAATAAGCGGAGGAAGA AACCCTGTTCTGAAAGCTTGCAGTCTG AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA AATCAAGAACGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTA *: :.: * * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CTCT-TAACGGCGAGTGAAGCG -GGAGCTCAAATTTGAAATCTGGCTCCTTCGGGGTC CCCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAATCTGGCCCCTCCGGGGTC CTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCCCCTTCGGGGTC CTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCTCCTTCGGGGTC -TCATTACCG -AGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCAC -AGTGTGATTCTTTGCAATCAGTTAAAACTTTCAAC AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGACCTCAAATATTATGTATCGCTCGGCACCTTACGA AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGACCTCAAATATGATGTATCGCTCGGCACCTTACGA AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGATCTCAATAATTATGTGTCGCTCGGCACCTTACGA AACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGACCTCAATTATGATGTGTCGCTCGGCACCTTACGA : : : * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CGAGTTGTAATTTGTAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCCG CGAGTTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCTG CGCGTTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCAGCCCCCG CGCATTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCTG CCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCG GGCCGCCA AATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGA GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT GAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAAT : * : * * * p ie gh tn to M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 nl w d oa lu -TCTAAGTGCTCTGGAACGG -AATGGAGAGGGTGAAAATCCCGTCTGGGATGGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTTGGGCAGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGACGGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGATGGG -TTCGTGGCCGCCG -GGGGCTCTCAGCCCCG -AATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACG TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA G-ACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA * : : : ll u nf va an oi m M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 GTGTCCGCGTCCA -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGCCAG GTGCCCGTGCCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA GTGTCTGCGTCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA GTGTCCGCGCCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA -GGCCCGCGCCCG -CCGGAGACACCACGAA CTCTGTCT CACATTGCGCCCC -CTGGTATTCCGGGGGG CATGCCTG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG * ** : * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 -TTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACC GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT z at nh M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va GATCTAGTGAAAG -TCTGAGTTGATTGTATCCATCGTTT AAAACTTTCAACA TCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAG -CCCGGCT TGTGTGTTGGGCC GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG : *: ** * * :.: : * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -ATGGATCTCTTGGTTCGGCATCATGAAGAAGCAGCGAAATGCGATAACTA -CTCGTCCCCCGG -CTCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGG -AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCTGGCTTCTGCTAGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCCGGCTTTTGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCTGGCTTTTGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCCGGCTTTCGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA * * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CTTTGAAAAGG -CCAAAGCGCACGTGAAATTGTTGAA CTTTGAAAAGAGAGTTAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGCTTG CTTTGAAAAGAGAGTTAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGTTTG CTTTGAAAAGAGAGTTAAAAAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGCTTG GTGTGAAATTGCGAATTCTGAAATCATCAGTCTTTGAAAG -CACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTCGTCTTCCG GGGACTGTCAGTGTCTAACTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA : * : : : : : ie gh tn to KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 p d oa nl w lu -CGACCAGACTCGGCCTCGGGGTTCAGCCAGCATTCGTGCTGGTGTACTTCCCCGGGGCCG CGACCAGACTCGCCCGCGGGGTTCAGCCGGCATTCGTGCCGGTGTACTTCCCCGTGGGCG CGACCAGACTCGCCTCCAGGGTTCAGCCGGCATTCGTGCCGGTGTACTTCCCTGGGGGCG CCATTGGCCC CTCCGTAGGCCC GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTTTCCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTCACCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGATCCAGCGAGTTTTTCACCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTTTCCTTGACCG u nf va an M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -GGCCAGCG TCGGTTCGGGCGGCCGGTCAAAGGCCCCAGGAATGT GGCCAGCG TCGGTTTGGGCGGCCGGTCAAAGGCCCTCGGAATGT GGCCAGCG TCGGTTTGGGCGGCCGGTCAAAGGCTCCCGGAATGT CTGGTATG TCGGGGGGAATGCTCGCTCCAGCGCCATTG -C GGCCGGCG CCCG -GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 -ATCGTCCTCCGGGACGTCTTATAGCCTGGGG TGCAATGCGGCCAGCCTGG ATCACCTCTCGGGGTGTCTTATAGCCGAGGG TGCAATGCGGCCTGCCTGG AGTGCCCTCCGGGGCACCTTATAGCCGGGAG TGCAATGCGGCCAGCCTGG TGCCTCATCCCAACCTGTGTGTGTGGGGGGG CGCTCCCCCTCTCTCCCG -CCGACGCATTTATTTGCAACTTGT TTTTTTCCAGGTGACCTCG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG ll M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1cc AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -ACCGAGGAACGCGCT TCGGCACGGACGCTGGCGTAATGGTTGCAAACGACC ACCGAGGAACGCGCT TCGGCTCGA -ACCGAGGAACGCGCT TCGGCACGGACGCTGGCATAATGGTTGCAAACGACC -GGGGAAGGGGCC CCAACACAAGGGCGGCCGCG GATCAGGTACGATAC CAAG CCCTTTGTACACACCGCCCGTC-CTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TGGCTTTGGGGAGCC TGGCTTTGGGGAGCCGGCGACGGCATCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT TGGCTTTGGGGAGCCGGCAACGGCACCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT TGGCTTTGGGGAGCCGGCAACGGCACCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGTGAACCTGCGGAACC TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGT TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGC - n va KF830076.1 p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC 3: MỘT SỐ HÌNH ẢNH NƠI LẤY MẪU lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si