Microsoft Word 7456 doc BỘNÔNGNGHIỆPVÀPHÁTTRIỂNNÔNGTHÔN VIỆNCƠĐIỆNNÔNGNGHIỆP VÀCÔNG NGHỆSTH BÁOCÁOTỔNGKẾTĐỀTÀICẤPBỘ NGHIÊNCỨUSẢNXUẤT MỘT SỐCHẾPHẨM SINHHỌC,HOÁHỌC SỬDỤNGTRONGBẢOQUẢNRAUQUẢ, HOATƯƠI Chủn[.]
Tìnhhìnhnghiêncứucôngnghệsảnxuấtchếphẩmsinhhọcdùngtrongbảoquảnq u ả
Trênthếgiớivấnđềnghiêncứucôngnghệbảoquảnrauquả,hoatươiđãđượcc á c nướcđ ặcbiệtquantâm.Chotớinayđãcó rấtnhiềucôngtrìnhnghiêncứuvềcôngnghệbảoquảnr a u , quảtươi,trongđóc ó nhiềuc ô n g t r ì n h nghiêncứucôngnghệsảnxuấtcácchếphẩmsinhhọc khôngđộchạichobảoquảnrauquả,hoatươinhằmthaythếcác hoáchấtdiệtnấm,diệtkhuẩnđa ngđượcsửdụngrộngr ãi hiệnnay.
Sựsốngcủarauquảtiếptụccảsaukhithuháivàchếtdầntheohiệntượnggiàhoátựnhiên. Nguyênnhânchínhlàdotácđộngcủasựtraođổichất,sựpháhuỷcủacácvisinhvậtvàcáctácđộ nghoá- líthểhiệncụthểquabayếutốchính:Sựtraođổichấttrongquátrìnhpháttriểncủavisinhv ậtsốn gtrênbềmặtr a u q u ả,hiệntượnghôhấpcủatổchứcthựcvậtvàhiệntượngbayhơi.Tấtcảcácbi ệnphápbảoquảnđềunhằmbảođảmvàduytrìchấtlượngrauquảsauthuhoạchđềuhướngtớivi ệcngăncảnsựpháttriểncủavisinhvật,giảmcườngđộhôhấpvàhạnchếsựbốchơicủarauquả.
Jeffries.Pvàcộngsự[43]đãnghiêncứuvàchothấyrằngsauthuhoạch,cácloạirauthườn gbịthốihỏngdonhiềuvisinhvậtkhácnhaubaogồmnhiềuloạivikhuẩnv à nấmmốc.Tácnhânv ikhuẩngâythốihỏngrauphổbiếnnhấtl à c á c vikhuẩnn h ư:Erwinacarotonowa,cácloàiPse udomonas,Corynebacterium,Xanthomonascampestrisvàvikhuẩnlactic.Nhữngvikhuẩn nàyđãtấncôngmạnhmẽởtấtcảcácloạirau.Cácloạinấmmốcthườnggâythốihỏngởcácloạiq uảnhư:Asperigllus,Cladosporium,BotritisCinerea,c á c loàikhácn h a u củachiAltenaria,
Aspergillus,Cladosporium,Colletotrichum,Phomopsis,nấmFusariumgâybệnhthốihỏng ở quảvải,nấmPenicillium,Phoma,Phytophthora,Pithyumvà Rhizopusg â ybệnhthốihỏn gở cam,Ceratocystisfimbriata,Rhizoctoniasolani,Sclerotonisclerotonum,nấmmốcgâyb ệnhthốihỏngởxoàinhưColleotrichumgleossproilos.Nhữngloàinấmnàyđãgâynhiềutổnth ấtchoc á c l o à i quảk h á c nhau.Nhiềuloàinấmmốcđãđivàomôcủathựcvậtthôngquacáctổn thươngcơhọc.Bêncạnhcáctổnthấtvềkinht ế,mộtsốloàinấmđãsinhcácđộct ốc ò n gọilàc á c mycotoxin.Jimenez.Mvàcộngsự[47]chothấycácmycotoxinthườngnhiễmtrêncácloạir auquảchủyếugồmc á c độct ốcủachiFusariumnhưFumonisin,c á cTrichothecen,c á c độc tốcủachiAspeglliusnhưochratoxinA,cácđộctốcủachiPenicilliumnhưPatulin.Cácđộctố nấmmốcnàylànguyênnhângâycácbệnhngộđộccấptínhvàmãntính,mộtsốđộct ốcó khảnăn ggâyungthưgan,ungthưthận,ungthưthựcquảnảnhhưởngđếnsứckhoẻcủangườitiêudùng.Thêmvàođó,cácloạirauquả thườngnhiễmcácvikhuẩngâybệnh,virusvàkísinhtrùngvàlànguyênnhâncủac á c vụbùng phátcácdịchbệnhnguyhiểm. Đểgiảmsựthốihỏngvàhạnchếtácdụngcóhạichosứckhoẻcủaconngười,việcsửdụng cácchếphẩmvisinhvậtđốikhángcókhảnăngứcchếcácvikhuẩnv à nấmmốcgâybệnhnóitr ênđãđượcBộnôngnghiệpMỹ,cộngđồngChâuâuvàc á c nướcnhưNhật,Canadav.v… nghiêncứuvàứngdụng.Trongtựnhiên,nhiềuloàivisinhvậtcókhảnăngứcchếsinhtrưởngvà pháttriểncủacácloàivisinhvậtkhácvàchúngthườngđ ư ợ cgọilàvisinhvậtđốikháng.Hiệnt ượngđốikhángđượcquans á t ở nhiềunhómvisinhvậtkhácnhaubaogồmnấm,v i khuẩn,xạ khuẩn cóthểtrựctiếp(competition,antibiosis)hoặckhôngtrựctiếp.Việcsửdụnghiệntượn gđốikhángnàytrongcôngtácbảoquảnđượcgọilàbiệnphápbảoquảnsinhhọcbằngvisinhvậ tđốikháng[28].Phươngphápnàyđãđượcsựquantâmvàđầutưrấtl ớncủanhiềuphòngthínghi ệmt r ê n thếgiớitrongnhiềuthậpkỷqua.Trongquầnthểvisinhv ật,mỗil o à i đềuphảiđấutran hsinhtồnsuốtcảquátrìnht i ếnhóadướicáchìnhthứckhácnhau vàrấtlinhhoạt.Visinhvậtc óthểthay thếc á c tácnhâncạnhtranhcủachúngbằngcáchnhânlênvớisốlượnglớnbằngcạn htranhvềmôitrườngdinhdưỡngvàkhônggiansống,hoặcc ó thểhìnhthànhcácchấtđặchiệuh aykhôngđặchiệutrongquátrìnhchuyểnhoávậtchất,nhằmứcchếsinhtrưởngvàpháttriểncủa visinhvậtkhác.Cácchấtkhôngđặchiệucóthểlàcácaxíthữucơ,rượu,enzym,khángsinhhoặc cáchợpchấtkhác.
[74,75]đãc h o thấynấmmenCandidaoleophilacótácdụngứcchếmộtsốloàinấmmốcgâyt hốihỏngtrênquảnhưAspergillusniger,A.flavus.Penicilliumdigitatum,P.expansum.C andidaoleophilal àc á c nấmmensốngt r ê n lá,nóthườngtồnt ạitựnhiêntrênnhiềuloạiquảc am,lê,táo,đào,càchua KhuẩnlạcC.oleophilacóhìnhtròn,màutrắngkem,bóngnhẫy.Chủ ngC.olepophilacóthểpháttriểntốttrongđiều kiệnhiếukhí,ởnhiệtđộthích hợptừ10-32 0 C,pHcủamôitrườngtừ6,5-7,2,thời giannuôicấytừ40-
62giờ.NhữngnghiêncứucủaYehudavàcộngsự[78]chothấyc á c enzymengoạibàocủaC. oleophilanhưexoglucanase,endoglucanase,proteasec ó khảnăngphânhuỷthành tếbàonấ mmốcvàcáctácgiảnàyđãnghiêncứutácdụngcủasựbiểuhiệnquámứcgenexoglucanaseđ ượctiếtbởiCandidaoleophilađốivớisựphòngchốngsinhhọccủanấmPeniciliumdigtatum. Lợidụngnhữngđặctínhquýb áu nàyc ủanấmmenCandidaoleophila,c ác nhàkhoahọcMỹ( Wilson,CharlesL.v à cộngsự,Torres,R vàcộngsự[75,71]đ ãnghiêncứut ạochếphẩmbảoq uảnquảgồmmàngbaoănđượcvànấmmenCandidaoleophilanhằmtạorachếphẩmsinhhọc khôngđộchạic h o bảoquảnmộtsốloạiquảtươinhưl ê , đào,táo.
Candidasakecũnglàmộtt r o n g nhữngchủngn ấmmenc ó khản ăngứ cchếc á c nấmm ốctrênquả.Candidasakelànấmmenthườngđượctìmthấyởbia,rượu, cácloạihoa,c á c loạir a u , c á c loạinấmăn,d ịchhoaquả.Khuẩnl ạccủaCandidas a k e cóm àutrắnghoặcmàukem,nảymầmtừnhiềuphía,cósợinấmgiả.Nhữngnghiênc ứucủaVinasA lmenarv à cộngsự[73]chothấy,chủngCandidasakecóthểpháttriểntốtởmôitrườngpH=6,5 nuôicấylắccóthôngkhí,nhiệtđộtừ1 0 C–34 0 C,thờigiannuôicấytừ20–
50giờ.Saukhinuôicấy,cácnấmmenđượctáchkhỏimôitrườngnuôicấybằngkỹthuậtkếttủal ytâmhaylọc.Sinhkhốinấmmenc ó thểđượcbảoquảnbằngđôngl ạnhhayv ớis i l i c a g e l Z a n e l l a A v à cộngs ựđãnghiêncứuvàchothấychủngCandidasakecóhoạttínhchitinasecó khảnăngphânhuỷmàngtếbàonấmmốc[79].Hoạtt í n h chitinasecũngđãđượcchứngminhở chủngCryptococuslaurenticcótínhđốikhángvớinấmmốcPenicilliumexpansumt r ê nqu ảlê[69].ChínhnhờhoạttínhchitinasenàymàCandidasakeđãđượccácnhàkhoahọcMỹsửdụ ngđểphòngchốngnấmmốcgâythốihỏngquảtáo[68].
Vera.Mvàcộngsựđãnghiênc ứutácdụngứ cchếvikhuẩnvànấmmốcColleotrichumgleospo roinosg â ythốihỏngxoàibằngn ấmmenRhodotorulaminuta[62].Rhodotorulaminutalàn ấmmenthườngtìmthấyở cácloạiquả,dịchhoaquả.KhuẩnlạccủaRhodotorulaminutac óhì nhtròn,màuđỏ.Patino-
Vera.Mv à cộngsựđãnghiênc ứuthànhcôngc ô n g nghệsảnxuấtchếphẩmnấmmenRhodo torulaminutatrênmôitrườngrẻtiềnởquimôpilot[62].
LawrenceP.vàcộngsựđãcho thấyvikhuẩnBaccillussubtilisđốikhángcókhảnăngng ănchặnsựnảymầmcủamộtsốnấmgâythối[57].ChếphẩmBaccillussubtilisđốikhángđãđự ợctriểnkhaiởmộtsốnướcđangpháttriểnđểphòngchốngmộtsốbệnhởquảtrongbảoquản[46 ].MộtsốnghiêncứuchothấychủngBacilluslicheniformiscókhảnăngphòngchốngmốcxan htrênquảtáo[41].
Hiệnnaytrênthếgiới,hais ảnphẩmsinhhọclàA s p i r e củahãngEcogen,Langhorn,U SAchứanấmmenđốikhángCandidaoleophilaI-182vàchếphẩmBio-
Save110củahãngEcoScinse,Worcestes,USAchứavikhuẩnđốikhángPseudomonassyrin gaehiệnnayđãđượcđăngkíchấtlượngvàcôngnhậnl à chếphẩmsinhhọcantoànchobảoquả nsauthuhoạchđốivớimộtsốloạiquảnhưtáo,đào,cam,quýtởMỹ[42,28,68].
Bảoquảnquảbằngsửdụngc á c visinhvậtđốikhángl à mộttrongnhữngphươngphápsi nhhọcrấtcóhiệuquả,trânhđượcngộđộchoâchấtvẵnhiễmmôitrường.Chínhbởinhữngư u điểmnàymàt r ê n thếgiớiđãc ó nhiềucôngtrìnhnghiênc ứuđểt ạor a c á c chếphẩmnấmme nđốikhángdùngtrongb ảoquảnquả.Việcphânlậpvàđịnhloạiđượccácchủngnấmmencókh ảnăngđốikhángvớicácloàinấmmốctrênquảlàrấtquantrọngtrongviệctạoracácchếphẩmnấ mmenđốikháng.Cácchủngnấmmenthườngđượcđịnhloạitheocácđặcđiểmhìnhtháivà g ầnđâyl à địnhloạit h e o trìnht ựgen.Cácphươngphápd ựatrênphenotypebaogồmcácphản ứnglênmenhàngloạtcácloạiđườngvàđặcđiểmpháttriểntrêncácnguồncacbonvànitơvàcá chợpchấtchuẩnđoánkhácđãđượcBarnetJ.A.P.K.W pháttriển[26].Tuynhiêncáctínhchấtnàycóthểthayđổitheođiềukiệnpháttriểnv à đôikhic á c loàiđượcxácđịnhbằngc á c đặctí nh sinhl ý duynhấtmànóđượckiểmsoátbằngmộtg e n đ ơnđộc.Ngượclại,kỹthuậts i n h họcphânt ửđượcxemnhưlàphươngphápthaythếchophươ ngpháptruyềnthốngvìnóphântíchgenomemộtc á c h độcl ậpvớitrạngtháisinhlýcủatếbàov àđãđượcFernadez-
Espinarpháttriển[34].TrìnhtựnucleotitcủavùngD1,D2nằmởđầu5’củagen26Svàkhuếchđạ iPCRcủavùngrDNAvàhạnchếcủagen5,8SrRNAvàcácvùngliềnkềITS1vàITS2làphươngph ápphânt ửthườngđ ư ợ csửdụngh i ệnnayđểđịnhloạinấmmen[34].Nhữngkỹthuậtnàycóđộl ặplạicaovànhanhhơncácphươngphápthôngthườngdựatrêncácđặctínhsinhlývàđặctínhh ìnhthái.
ChủngnấmmenCandidaoleophilavàC sakecókhảnăngứcchếnấmmốcg â y thốihỏ ngquảnhờcóhoạttínhenzymengoạibàonhưprotease,chitinase,… cókhảnăngphânhuỷthànht ếbàon ấmmốct r ê n quả.Đâylàc ơsởđểt ạocácchếphẩmnấmme nđốikhángdùngtrongbảoquảnquả.Vìvậy,nhiềunhàkhoahọct r ê n thếgiớiđãsửdụngkỹthu ậtđộtbiếnnhằmnângcaohoạttínhđốikhángthôngquahoạttínhchitinasecủacácchủngnấm mentựnhiên.
C a n d i d a rồichọnc á c độtbiếnthểc ó khẳnăngđềkhángvớic á c đồngđẳngglucosenhằmh oànthiệnsựtạoisoamylAcetatcủachủngnày[52].NhàkhoahọcNhậtBảnKozoochivàcộngs ựđãsửdụngkỹthuậtribosomeđểnângcaosảnlượngcácsảnphẩmtraođổichấtthứcấp,tron gđócócácenzymtừvisinhvật[53].KỹthuậtribosomedựatrênhiệntượngđộtbiếngenrpsLm ãhoáchoproteinS12củaribosomt ừđósựbiểuhiệngencủavisinhvậtc ó thểbiếnđổimộtc á c h mạnhmẽb ằngsựđiềuchỉnhc á c proteincủaribosomhayribosomRNA(rRNA)hậuquảdẫnđ ếnhoạthoácácgenkhônghoạtđộng.Bằngkỹthuậtribosom,tácgiảKozoOchiđãchứngminhr ằngcácđộtbiếnthểđềkhángv ớiSteptomycinđãchosảnlượngα- amylasevàproteasec a o h ơn20-
30%sov ớichủnghoangd ại[49].C á c tácgiảđãchothấyrằngđộtbiếngenrpoBđãlàmnâng sảnlượngcácenzymngoạibàonhưamylasevàproteaselên1,5đến2lầnsovớichủnghoangd ại.
Cácnấmmenđốikhángthườngđượcsửdụngkếthợpvớimàngbaoănđượcđểbảoquảnq uảtươi.Màngbaoănđượclàcácvậtliệusinhhọcnhư:protein,lipid,v à cácpolysacharides.M àngbaoănđượccótácdụngkéodàituổithọvànângcaochấtlượngcủaquả.Tuynhiênkhảnăn gnângcaotuổithọcủarauvàquảcủamàngb a o p h ụthuộcvàot h à n h phầnhoáhọccủachún g,c ấutrúccủamàng,độd à y củamàng,quytrìnhtạomàng,cácchấtnhũhoákhácnhauvàchấtl àmmềmdẻocómặttrongmàngvàđiềukiệnbảoquản.Hiệuquảcủamàngbaoănđượcđểkéodà ituổithọcủaquảcũngphụthuộcvàosinhlýcủaquảvàsựcómặtcủacácchấtbaonhưsápongl ênbềmặtcủaquả[24,70].
Màngbaokhôngănđượclàcácmàngbaolàmtừpolymertổnghợp.Thuậnlợic h í n h củ amàngb a o ă nđượcs o vớim à n g baopolymertổnghợph o á họctruyềnthốnglànócóthểdù ngđượccùngvớicácsảnphẩmđượcđónggói.Màngbaoănđượccũngcóchứcnăngnhưchấtm angcủacáctácnhânkhángkhuẩnvàcácchấtchốngoxyhoá.
Tìnhhìnhnghiêncứucôngnghệsảnxuấtchếphẩmsinhhọcdùngtrongbảoquảnq u ả
ỞViệtNam,việcnghiêncứucácbiệnphápbảoquảnbằngphươngphápsinhhọcc ò n rấ tmớimẻ.Trongnhữngnămvừaqua,PGS.TSNguyễnThuỳChâuvàcộngsựởphòngvisinhVi ệnCơĐiệnNôngNghiệpvàCôngNghệSauThuHoạchđãbướcđầunghiênc ứumứcđộnhiễm nấmmốctrênmộtsốloạiquả.Kếtquảnghiêncứusơbộchothấy,cácloàiAspergillusvàRhizo puslànhữngloàinấmmốcchínhnhiễmtrênthanhlong,nấmFusariumvàPenicilliumlànhữn gloàinấmmốcchínhg â y thốihỏngở quảvải.Tạiđâyđãbướcđầuphânlậpvàtuyểnchọnc á c c hủngB a c i l l u s subtilisđốik h á n g c ó khảnăngứ cchếsựp h á t triểncủacácnấmFusariu mv à Peniciliumg â ythốihỏngquảvải.MộtsốchủngnấmmenthuộcchiCandidacũngđãđượ cphânlậpvàtiếnhànhxácđịnhkhảnăngđốikhángvớicácnấmA s p e r g i l l u s gâythốihỏng thanhlong.Tuynhiênhoạttính đốikhángcủacácchủngphânlậpđượccònrấtthấpvàchưaổnđ ịnh.
Tìnhhìnhnghiêncứusảnxuấtchếphẩmcompositdùngtrongbảoquảnrauq u ảtươi
Tìnhhìnhnghiêncứuvàứngdụngtrênthếgiới
Trênthếgiới,cácloạiquảđượcnghiêncứuvàápdụngkỹthuậtbảoquảnquảbằngchếph ẩmt ạomàngcompositphổbiếnh i ệnn a y gồmc ó : t á o , quảc ó múi,chuối,đào,bơ,dứa,nh o,hồng.Cácloạiraugồmcó:dưachuột,càchua,khoailang,dưacácloại[54,63].Dựatheotính chấttựnhiênvốncócủasápquảmàxuhướngnghiênc ứutrướcđâychủyếusửdụngl i p i d vàn hựac â y đểlàmthànhphầnt ạomàng.Khibổsungthànhphầnnàysẽđạtđượchiệuquảchốngm ấtnướcvàtăngđộb ó n g lángcủavỏquả.Cácsảnphẩmtạomàngmộtthànhphầnhiệnnayíts ửdụngmàđãchuyểnsangviệcchếtạosảnphẩmdạngcompositcó ít nhất2 thànhphần.Vậtliệ ucompositđãđượcquan tâmnghiêncứunhiềunhằmkếthợpcáctính chấtc ó l ợicủac á c vậtliệukhácnhauđểcảitiếnc á c chứcnăngnhưđộthấmk h í , độbóng,đ ộ bền,tínhdẻo,mứcđ ộbổsungdinhdưỡngv à c á c h thứctrìnhbàyc h ếphẩm[54,63].Trongquátrìnhnày,nhấtthiế tphảic ó chấtdẻohóa,trongđóphổbiếnnhấtlàcácpolyol.Lợiíchcủachấtdẻohóalàlàmg i ảms ốl ượngc á c cầu hydrol i ê n k ếtgiữacácphântửpolymelàmchomàngmềmd ẻokhôngb ịgiòn,nhưngnhược điểmlớnkèmtheolàlạilàmtăngtínhthẩmthấuhơinước.
Trướcđây,trongquát r ì n h tạovậtl i ệucomposit,thườngphảisửdụngc á c dungmôi h ữuc ơđểhòat a n cácvậtliệugốclipidvànhựa.Hiệnnay,nghiênc ứusảnxuấtchếphẩmtạom àngđãcónhiềucảitiến,đólàviệcsửdụngcácchấtsápvànhựaở dạngnhũtươngnước.Lợiíchc ủadạngnhũtươngnướcsovớidạngdungmôihữucơkhôngnhữngantoàntrongsảnxuấtvàsửd ụng,màcònkhôngđòihỏiphảilàmkhôrauquảtrướckhiphủmàng[56].Phươngphápnhũhóa vìvậytrởnênr ấtquantrọngtrongquátrìnhsảnxuấtchấttạomànghiệnnay.Phươngphápnày cóthểápdụngkhônghạnchếchobấtcứloạichấtsáphaynhựanào.Ngoàiracònchophépbổsu ngmộtsốchấtbảoquảnchochínhchếphẩmkhitồntrữ,hoặcchấtdiệtnấmđểtránhchoquảkhỏi bịnấmmốcgâythốikhisửdụngtrongbảoquản.Thôngthườngc á c chấtnàykhônghòat a n tro ngnướcmàcũngphảinhũtươnghóa.Cácphụgiakháccũngcóthểbổsungdễdàngtheocáchtư ơngtự.
Cáct á c độngcủamàngphủt ớisựbiếnđổichấtlượngv à h ì n h thứccủar a u quảluônluô nđượcnghiêncứu,khảosáttrongmọithửnghiệmvềhiệuquảcủacácchấttạomàng.Cácchỉtiê ukhảosátvềcơlý,cảmquanthườnggồm:màusắcquả,độcứng,sựxuấthiệncáctổnthươngvề sinhlý,visinhvậttrongbảoquản,sựmấtnước.Cácchỉtiêuchấtlượngphổbiếnnhấtlàxácđịnh nồngđộkhíO2vàCO2b ê ntrongquả,mộtsốloạikhíhaythànhphầncủadịchquảđặctrưngchohi ệntượnghôhấpyếmkhí.Cácchỉtiêudinhdưỡngcũngthườngđượcchúýkhảosát. b) Kỹthuậtsảnxuất:
Trướchếtcóthểphânbiệthailoạimànglàloạiănđược(edible)vàmàngbìnhthường.Mà ngănđượcchứacácthànhphầnchủyếulàpolymesinhhọcvàcácphụg i a thựcphẩmđượcp hépsửdụngtrongthựcphẩm.Ngayviệcbổsungthêmchấtbảoquảnthìcũngphảil à nhữngchấ tđượcphépdùngtrongcôngnghiệpthựcphẩm,vídụ:nisin,lysozyme,sorbat,benzoat.Loạim àngbìnhthường(khôngă nđược)chủyếulàc á c polymetổnghợp,hoặcl à loạiă nđượcnhưng chứac á c phụgiakhôngđượcphépdùngtrựctiếpt r o n g thựcphẩmnhưchấtdiệtnấm:imazali l,thiabendazol,cácloạiparaben.Mộtsốloạipolyethylenđượccoilà"ănđược”.
Tổnghợpsốliệutừnăm2000đến2006từtấtcảcácchếphẩmtạomàngđãthươngmạihoá rộngrãitrênthếgiới,cóthểnhậnthấychúngchỉbaogồmchủyếuc á c chất:s á p carnauba,s á p ong,s á p candelilla,nhựaPEoxihóa,nhựacánhkiến,dẫnxuấtnhựathông,casein,dẫnxuấtx enlulô[38,39,63].Chúngt a dễdàngt ì m thấythànhphầncácchấttạomàngđóvàcảmộtsốp hụgiatrongnhiềupatentcủaMỹ,trongnhiềubàibáo,thậmchítrênnhiềutrangwebgiớithiệus ảnphẩmcủacáccôngtynướcngoài.Tuynhiên,c h ú n g t a khôngt ì m thấythànhph ầnchitiết,t ỷlệcủachúngđểcóthểápdụngxemliệucácthànhphầnđócóápdụngphùhợpvớic á c loạira uquảcủaViệtNamhaykhông.
Vềkỹthuậtphachếchếphẩmtạomàng,trướcđâychủyếusửdụngphươngphápđồngthể hóađểt ạoracácchếphẩmdạngthểgelhoặccolloid.Thànhphầnc h í n h làcácpolymeloạihy drophilicnhưcacboximetilxenlulô(CMC),hidroxipropilmethilxenlulô(HPMC),c h i t o s a n , pectin,casein,zein.Cácphụg i a chủyếulàchấtdẻohoá,estecủamộtsốaxitbéo.Gầnđ ây,phươngphápphachếchủđạolàtạovậtliệucompositdạngcolloid- lipidvàvinhũtươnghoá.Đốivớichếphẩmlàmtừsáphaycácloạinhựa,đểtạorađượcmàng mỏngtrênquảthìsápđóphảiởdạngvinhũtương.Nhũtươngsápthườngchứasáp,chấtnhũ hoávànước.Loạivànồngđộchấtnhũhoácóvaitròrấtquantrọngảnhhưởngtrựctiếpđếnkícht hướchạt,độtrong,màus ắccủas ảnphẩmnhũtương.Vềnguyênt ắckíchthướchạtnhũquyếtđị nhtínhchấtcủasảnphẩmchấttạomàngphủ.Kíchthướccàngnhỏcàngtốt.Việcthiếtlậpđược chếđộcôngnghệtạovinhũkíchthướcnhỏlàviệcrấtkhó,phụthuộcvàođiềukiệnphảnứng,bả nchấtsáp,chấtnhũhoá.Phụthuộcvàonhiệtđộnóngchảymàngườitachiarahaiquátrìnhnhũh oáởápsuấtkhôngkhívàá p suấtcao.Phươngphápnhũhoáápsuấtthườngchỉá p dụngchonhữ ngloạisáp/ nhựacónhiệtđộnóngchảynhỏhơnnhiệtđộsôicủanước.Đốivớiloạicóđộnóngchảycaohơn ,phảisửdụngápsuấtcao.Phươngphápá p suấtc a o c h o sảnphẩmcókíchthướchạtnhỏvànhi ềuưuđiểmkhác.Hiệnnaychỉcóítcơsởnghiênc ứuvàsảnxuấtá p dụngphươngphápnhũhoá này.Côngt y Deco,Cerexagric ủaMỹđãsảnxuấtvàthươngmạinhiềuchếphẩmbằngphương phápt ạovinhũá p suấtcao.Lợiíchcủaphươngphápnhũhoáápsuấtcaolàcóthểlàmnhũtươn ghoá đượccácloạisáp/nhựacónhiệtđộnóngchảytrên100 o C,nhưngcũngrấthiệuquả đểnhũhoácácloạicónhiệtđộnóngchảythấphơn. c)Cácsảnphẩmcompositthươngmại:
Tạitrangweb:htpt:// www.cexagri.com,côngtyDeco,Cerexagri(Mỹ)giớithiệugần30sảnphẩmmàngphủdùngc honhiềuloạirauquảkhácnhau.Mộtsốsácsảnphẩmnàyc ó tên:AppleLustr®,PremiumAppl eLustr®,DecoLustr®,DecoCitrusL u s t r ® , CitrusL u s t r ® , PNPL251,PineappleLustr ®,SweetPotatoLustr®,vegetableLustr®.Nhiềunhấtlàcácsảnphẩmdùngchoquảcómúivà táo.Mỗisảnphẩmđềuc ó chỉdẫncáchsửdụng,thànhphầnc h í n h Cácloạipolymelàthànhp hầnchínhtrongc á c sảnphẩmcủahọgồm:cánhkiến,nhựaP E , nhựacây,sápcarnauba,sápo ng,dầukhoáng,parafin.Tấtnhiên,họkhôngcôngbốtỷlệvàhàmlượngcácthànhphần.
CôngtyAgricoatIndustriesLtd.củaAnhđãgiớithiệusảnphẩmcótênsemperfreshtạitr angwebhtpt:// www.agricoat.co.uk.Sảnphẩmnàyđãđượcchấpthuậnsửdụngt ạinhiềunướcnhưMỹ,EU,N hậtBản,NamPhi,Úc,TrungQuốc.T h à n h phầnchínhcủasemperfreshlàCMCvàsucroest ecủacácaxitbéo.
Nutri-Save,Nu-CoatFo,Ban-seel,brilloshine,snow-
PacRite(AmericanmachineryCorp.)dùngchotáo,lêcàchua,dưachuột,ớtchuông,đ ào,mận.
Fresh-Core(Agri-TechInc.)dùngchotáo,lê,cà,càchua,dưachuột;
PrimafreshWax(S.C.Johnson)dùngchotáo,quảcómúi,quảvỏcứng;
Shield-Brite(PaceIntl.Shield-Brite)dùngchotáo,quảcómúi,quảcứng;
Sta- fresh(FoodMachineryCorp.)dùngchot á o , quảcómúi,quảcứng,càchua,dứa,càch ua,dưachuột;
FreshWax(FreshMarkCorp.)dùngchodứa,khoailang,càchua,dưachuột;
BrogdexCo.dùngchotáo,dưa,chuối,bơ,đuđủ;
FreshSealTM(PlanetPolymertechnologies)dùngchobơ,xoài,đuđủ;
SealTM,AgriCoat(MantroseBradshawZinsserGroup)dùngchocàrôt,ớt,hành,lê,b ơ;
Tìnhnghiêncứuvàứngdụngtrongnước
Từcácnghiêncứuvềbaogóikhíquyểnđiềuchỉnh(MA)tạiViệtNamtrongvòng6năm quachothấycôngnghệbảoquảntheonguyêntắcMAlàhiệuquảđốivớimộtsốrauquảtươiở ViệtNam[2,4].Hiệuquảcôngnghệlàrõràngvìđượcchứngminhkhắpthếgiới.Nhưngkhók hănđểmởrộngcôngnghệởViệtNamvẫnc ò n rấtnhiều,chưalàmchủđượccôngnghệsảnxu ất.Tấtcảcácvậtliệumàngđềumuatừnướcngoài.Côngnghệyêucầutuyệtđốivềđiềukiệnlạn h,nếukhônghiệuquảsẽrấtthấp.Vấnđềtiềnxửlýcũngrấtquantrọngkhôngthểbỏqua.Tuyvậy, hướngđitheoMAlàrấtchínhxácvànhiềutriểnvọng.Chúngtôitiếnhànhnghiênc ứuđềtàinà ychínhlàcũngđitheohướngMA,nhưngvớicácht i ếpc ậnkhácl à côngnghệtạomàngngaytrê nquảbằngvậtliệucomposit.
KếtquảnghiêncứusảnxuấtvàứngdụngcácchếphẩmtạomàngdạngcompositvàởViệtNamcórấtít.ViệnKhoahọcvàKỹthuậtHạtnhâncónghiênc ứukiểmsoáttrọnglượngphânt ửpolymersinhhọcbằngsửlýchiếuxạ[10].ViệnNghiêncứuCâyănquảmiềnNamđãt ạoram ộtchếphẩmdạngcompositvớicácthànhphầnchínhl à t i n h bộtchuối,methylxenlulo,gelatin vàparafincùngmộtsốphụgianhưchấtdẻohoá(PEG400,PG,TEA,PVA)thửnghiệmtrênquả chuối,thanhlong,xoàivàđãchỉrahiệuứngchậmchínbiểuhiệntrêncả3loạiquả[15].Cáckếtq uảtheot h ô n g báochỉl à bướcđầuvớiquymôphòngthínghiệmvàchođênnaychưathấycókết quảmới.Vớithànhphầnnhưcôngbốthìchếphẩmcókhả nănglàmchậmchíndochứacáchợpchấtpolysacharitvàprotein.Mặtkhác,docóthànhphần sápparafinnênmàngcũngcókhảnăngchốngmấtnước.
Cácnghiêncứukhácchủyếusửdụngchitosanlàmchấttạomàng.Nguyênlýcủakỹthu ậtnàylàphadungd ịchchitosantrongaxit(thườnglàaxitaxetic)tạothànhdịchgelcolloidrồibô il ê n quảhoặcdúngquảvào,khikhôt ạothànhmàngt r ê n quả.NhómnghiêncứucủaViệnCô ngnghiệpthựcphẩmđãsửdụngdungdịchchitosantạomàngtrênquảcàchua[14].Nhómngh iêncứucủaViệnCơđiệnnôngnghiệpvàCôngnghệsauthuhoạchsửdụngchitosanđểbảoquản camvàgầnđâythửnghiệmt r ê n quảthanht r à Huế[6].N h ó m nghiêncứuĐạihọcNôngl â m T p HCMsửdụngchitosanbảoquảnquảbưởiNămr o i [ 8 ] C á c kếtquản ê u t r ê n chỉdừn glạiởquymôthửnghiệmnhỏ.
Chúngtôicũngđãnghiênc ứuc h i tiếtvềhoạtt í n h khángvisinhvậtcủachitosanvàản hhưởngcủatrọnglượngphântửvàphânbốtrọnglượngphântửvàmứcđộđêaxêtilhóatớihoạtt ínhđó[13,14].Tácdụngkhángvikhuẩnvànấmmốccủachitosanđãđượckhẳngđịnh,nhưnghi ệuứngchủyếuchỉthểhiệnrõtrongcácthínghiệminvitrokhitáchriêngvisinhravànuôicấytro ngmôitrườngnhântạo.H i ệuứngthểhiệnrấtyếutrêncácmẫuquảthực.Mộtsốnghiêncứuc ủanướcngoàicũngchokếtquảtươngtự.Sựkếthợppolymesinhhọcchitosan,CMCvớimộtsố polymetổnghợpnhưPVA,PEOcũngđãđ ư ợ cchúngt ô i phốichếtạomàngbảoquản.Tuynhi êncácnghiêncứunàymangtínhchấtcơbảnmàchưatriểnkhaiứngdụngvàosảnxuất.
ViệnKHCNViệtN a m đãchàobán“côngnghệbảoquảnrauquảtươibằngchếphẩmsinhhọct ừchitosan”tạichợTechmart.Họsẵnsàngcungc ấpc ảthiếtbịphachếdungdịchchitosan.Vớin hữngtàiliệutổnghợpg ầnđâynhất,chúngtôiđượcbiếtc á c nghiêncứuứngdụngchitosanvàdẫ nxuấtcủan ó vớimụcđíchbảoquảnrauquảtrênthếgiớivàtrongnướccó rấtnhiều.Hiệuứnglu ônluôncó,nhưnghiệuquảđềuchưađạtmứcsửdụngđượcchosảnxuất.Đólàlýdochođếnna ymớichỉcóduynhấtmộtsảnphẩmđượcthươngmạitrênthếgiới,đólàNutri-
Save(NovaChem,Canada).Điềuthúvịlàsảnphẩmn à y chỉlàmộtdẫnxuấtcủachitosan:N ,O-carboxymethylchitosanmàkhôngphảichitosannguyênthuỷ[33].
Vìnhữnglýdocònhạnchếtrongnghiêncứucôngnghệ,nênviệcnghiêncứu,thiếtkếchết ạothiếtbịtrongcôngnghệsảnxuấtchếphẩmbảoquảndạngmàngphủt ạiViệtN a m cũngchưa đượctriểnkhai.Mộts ốí t c ơsởnghiênc ứuđãnhậpthiếtbịcụcbộcóquymônhỏtrongphòngthí nghiệmvớimụctiêunghiêncứucôngnghệhoáhọcnóichung.ChođếnnaytạiViệtNam,mộtdâ ychuyềnđồngbộchuyênmônhoátrongsảnxuấtchếphẩmtạomàngcompositlàchưacó.
Cơsởkhoahọcvàđặcđiểmcôngnghệcủac h ếphẩmcompositdùng trongbảoquảnq u ảtươi
Khácvớikỹthuậttúifilmchấtdẻo,trongđómộtlôquảhoặctừngquảđượcđựngtrongtú i,phươngphápkỹthuậtphủmàngl à t ạoramộtdịchlỏngdạngcompositởdạngcolloidhoặcn hũtươngrồiphủlênbềmặttừngquả(hoặcrauănquả,rauăncủ)riêngrẽbằngcáchphun,dúng, xoa,lăn.Khidịchlỏngkhôđitạoramộtl ớpmàngmỏnggầnnhưtrongsuốttrênquả.Nhờt í n h chấtb á n thấmđiềuchỉnhkhívàhơinướccủamàngmàquảđượcgiữtươilâuhơn.Màngphủlà mgiảmtổnthấtkhốilượngv à l à m chậmsựnhănnheocủaquảdohạnchếquátrìnhmấtnước.M àngphủcóthểtạoravùngvikhíquyểnđiềuchỉnhxungquanhquảdođól à m t ha y đổisựt r a o đổikhívớikhôngkhíxungquanh.Nhưvậy,vềbảnchấtk ỹthuậtmàngbánthấmcũnglàmộtdạn gcủaphươngphápMA.
Làmgiảmtraođổikhí(giảmO2,tăngCO2)dẫntớilàmchậmquátrìnhchính a y già hoá;
Cácthànhphầnvàtínhchấtquantrọngcủachếphẩmcompositdùng trongbảoquảnq u ảtươi
Chếphẩmtạomàngcóthểđượcphachếtừnhiềunguyênliệukhácnhaugồmnhựac â y , sápthựcvật,sápđộngv ật,polysaccharít,proteinvàmộtsốí t polymetổnghợp.Thựct ế,đasốc ácchếphẩmđ ề ul à vậtliệucompositgồmí t nhấthaithànhphầntạomàngtrởlêncóbổsungth êmcácphụgiachẳnghạnchấtdẻohóa,chấthoạtđộngbềmặt,chấtchốngbọt,chấtnhũhóavàch ấtbảoquảnđểgiữchếphẩmđượclâu.
Lipiddùngtrongchếphẩmthườnglànhữngchấtsáphoặcdầutựnhiên.Vídụ:sápcarnau batừlácọở Brazil,sápcámgạo,sápong.Cũngcóthểlàsáptổnghợpnhưparafinvàpolyethyl enlànhữngsảnphẩmtinhluyệndầumỏ.Chấtnhựatựnhiênnhưcánhkiến,nhựacây.ChâuÂu vàMỹchophépdùnghainguyênliệunàyl à m phụg i a thựcphẩm.Chếphẩmt ạomànglàlipid vànhựac ó ư uđiểmlàl à m giảmmấtnướcnhưngchúnglạicónhượcđiểmlàdễgâyrahiệntượnghôhấpyếmkhídoứcchế traođổikhí,nhấtlàđốivớicánhkiếnvànhựacây.
Vậtliệucarbohydrátthườngsửdụnglàmch ấtt ạomànggồm:xenlulovàc á c dẫnxuấtt ừxenlulo,tinhbột,pectin,alginate,carrageenanvàchitosan.Nhữngloạivậtliệunàyk é m t á c dụngchốngmấtnướcchorauquả,nhưngc ó tínhthẩmthấukhíkháchậmnêncótácdụnglàmc hậmchínquả.
Proteinđểlàmmàngthựcphẩmcóthểtáchchiếttừngô(zein),lúamỳ(gluten),đỗtương, colagen(gelatin),hoặctừsữa(casein).Cũngnhưpolysaccharit,proteinkhôngcókhảnăngch ốngmấtnướccaonhưmànglipid,nhưngsựtraođổikhílạirấtthuậnlợichoviệclàmchậmqu átrìnhchínmàkhônggâyrahiệntượnghôhấpyếmkhí.Dovậyngườitathườngkếthợpcácthà nhphầnnhựavớiproteinh a y vớipolysaccharit[24].
Nhưvậy,chếphẩmtạomàngđượclàmtừcácthànhphầntựnhiên,khôngđộchại,trongn hiềutrườnghợplà nhữngchấtdinhdưỡng.K h i phachế,t ù y theoloạiquảmàchúngtasẽchọn loạinguyênliệukhácnhauđểđảmbảohiệuquảbảoquảnv à yếutốantoànthựcphẩm.
Ưun h ượcđiểmc ô n g nghệvàtínhantoànt h ựcphẩmcủac h ếphẩm compositsinhhọc
Vềbảnchất,côngnghệt ạomàngb ềmặtgiốngphươngphápbaogóikhíquyểnđiềuchỉn h(MA),tứclàcóthểđạtđượchiệuquảbảoquảncủaphươngphápđó.Ngoàiracòncócácưuđiể mnổibậtsauđây[24]:
Côngnghệnàyc ó nhượcđiểmđặctrưngthườnggặpkhisửdụngphươngphápMAvàCAdosựhìnhthànhđiềukiệnyếmkhí,nhấtlàkhibảoquảnởnhiệtđộthường,dẫntớisựthayđổi mùivị,mầusắc,sựkháclạtrênbềmặt(hiệntượngdính,trơn).Phươngphápnàykhôngthíchh ợpchobảoquảncácloạirauănlá. c)TínhATTPcủachếphẩmtạomàng:
Cácpolymethiênnhiênvàtổnghợp,cácloạisápvànhựacâysửdụngtrongsảnxuấtchế phẩmt ạomàngđềuđượcphépcủaCơquanQuảnl ý thựcphẩmvàthuốccủaMỹ(FDA)vàC ơq uanQuảnl ý a n toànthựcphẩmcủaEU(EUFSA).FDAchophépsửdụngcácloạisápvàcác chấttạomàngnhưlàphụgiathựcphẩmhoặc“đượccoilàa n toàn”.Tấtcảthànhphầnsửdụngđ ềuthuộcdanhmục“En u m b e r ” c á c phụgiathựcphẩmcủaEU.Vídụ:estenhựathôngc ó sốE445,sáponglàE901,sápcarnaubalàE903,cánhkiếnđỏlàE903,parafinlàE905,PEoxyh óalàE914,HPMCl à E463.C á c phụgiakháctrongthànhphầncủachếphẩmcũngluônđượcc húýchọnvàthaythếbằngnhữnghợpchấtantoàn,đượcphépsửdụngtrongthựcphẩm.Víd ụ,trướcđâymorpholineđ ư ợ cphépsửdụngt ạiMỹd ù n g t r o n g q u á trìnhtạonhũtương,như ngE U khôngchophép.Nayđãđượcđềnghịsửdụngdungdịchamonia(E515)đểthaythế.Ch ấtnhũhóaphổbiếnlàoleat[63].
Tìnhhìnhnghiêncứusảnxuấtchấthấpphụethylend ù n g trongbảoquảnr a u quảtư ơi
Ethylen, nguồn hình thành và con đường sinh tổng hợpethylen
Ethylenlàmộtchấtkhíđượcsảnsinhtrongtấtcảcáctếbàocủathựcvậtvàđ ư ợ c v ậnc h u y ểnt r o n g t h ựcv ậtb ằngp h ươngp h á p k h u y ếcht á n E t h y l e n l à m ộtl o ạip h y t o h o o c m o n , n ó l à m ộtk í c h t h í c h t ốở t h ểk h í r ấtq u a n t r ọngc h o c â y c ối, đ ư ợ cp h á t h i ệnđ ầ ut i ê n v à o n ăm1 9 0 1 d o n h à k h o a h ọcN g a D N N e l i u b o v
N ó g i a tăngsựloạibỏkhíCO2vàtiêuthụkhíO2,thamgiavàonhiềugiaiđoạntrongs ựp h á t t r i ểnc ủacâyv à đ ư ợ cx e m l à h o o c m o n k i ểms o á t s ực h í n c ủar a u q u ả.E t h y l e n đượcchếtạotrựctiếptừacide-1-aminocyclopropane (ACC)[13].
Vềcấutạohóahọcethylen(CH2=CH2)làmộtcacbuahydrođơngiảnđầutiêncủadãycac buahydrochưanoc ó trọnglượngphânt ử28,05,nhẹhơnkhôngkhíở điềukiệnsinhlýhọcvàdễ cháynổởđiềukiệnoxi.Trongđiềukiệnthườngethylenl à chấtkhíkhôngmàu,cómùietenhẹ. Nhiệtđộđôngđặclà–181 0 Cvànhiệtđộsôil à –
103 0 C.Ethylencóthểbịoxyhóathànhethylenoxitvàethylenoxittiếptụcbịhydrathóathành ethylenG l y c o l Ở hầuhếtc á c môthựcvậtethylenhoànt o à n bịo x y hóathànhCO2[36]
Ethylenđượchìnhthànhdohoạtđộngsinhlýcủarauquả.Trongquátrìnhbảoquản,đặcbi ệtở giaiđoạnchín,hàmlượngethylenđượcsinhraphụthuộcvàođặcđiểmsinhlýcủaquả.Cácq uảhôhấpđộtbiến(climacteric)trongqúatrìnhchín,sảnsinhraethylencựcđại,cácquảkhôngcó đỉnhhôhấp,ethylensảnsinhraíthơn.[2]
Ngoàiraethylencònđượchìnhthànhtừhoạtđộngsốngcủavikhuẩn(Steptomyces,Pse udomonas,…),c á c loạinấmở t r ê n bềmặtquảvàcảtrongmôitrườngbảoquảnquả.
Ethylenđượcchếtạotrựctiếptừacide-1- aminocyclopropane(ACC).Bướccuốicùngtrongtiếntrìnhtạosinhtổnghợpcủaethylennơitr áicâyđượcthựchiệndosựxúctáccủaenzymemangtênACCoxydase(ACCO).Lúcmớisinh,e nzymenàychứamộtvịtríhoạtđộnggồmmộtionđơnnguyêntửFe(II),nối2histidinevới1aspar tate.Ngườitavẫnchưarõcơchếcủaphảnứngnày,nhưnghọngờrằngởcácgiaiđoạnđầuACCv àoxygenđượcgắnvàoFeđểthànhmộtphứcchấtbậcbaFe/ACC/
O2.Sauđó,cóthểcósựthamgiacủanhữngchấtoxydehóamạnhnhưFe(III)OH,Fe(V)= O,…OxigiữvaitròquantrọngtrongquátrìnhchuyểnACCthànhethylen.Nồngđộoxithấpsẽngănc ảnquátrìnhchuyểnACCthànhethylendonókìmhãmhoạttínhcủaACCoxidase.Đ âychínhl à cơs ởchoviệcbảoquảnnôngsảntrongm ô i trườngkín(thiếuoxy)haytrongđiềukiệnkhíquy ểnđiềuchỉnh(điềuchỉnhthànhphầnkhínhưCO2,O2, )cótácdụngkhángethylenđểkéodài quátrìnhchínvàgiàhóacủarauquả[23].
Tácdụngvàhạnchếcủaethylen
Ethylenlàmộthoocmonsinhtrưởngvìvậynócórấtnhiềutácdụngđốivớithựcvật.Hiệuứ ngsinhlícủaethylenthểhiệntrongkhoảngnồngđộ1đến100ppm. Đốivớisựchíncủaquả:vớicácquảcóhôhấpđộtbiếnnhưxoài,chuối,càchua,táo,… khixửlýethylencótácdụngthúcđẩyquátrìnhchínnhanhhơn,cònởcácquảkhôngcóhôhấpđột biếnthìhiệuquảxửlýethylenđểthúcchínkhôngrõ[65].
Từtácdụngnày,ngườitađãứngdụngethylenngoạisinhnhưlàmộttácnhânthúcđẩyqu átrìnhchínnhanhcủaquả[15,23].Nhưngethylenởdạngkhírấtkhóápdụngvìvậyngườitaphả isửdụngcácchấtcótácdụngtươngtựnhưethylen,trongsốnhữnghợpchấtđó,hợpchấtet hr e l làhợpchấtđượcứngdụngnhiềunhất.Quảsauthuhoạchđượcxửlývớiethrelsẽchínnhanhh ơnvàđồngloạthơn,mãquảđẹpđồngđều,tỷlệquảthốihỏngrấtthấp.
Cũngcó thểứngdụngEthylenởgiaiđoạntrướcthu hoạchđểđẩymạnhcác t á c dụngc óí c h sauthuhoạch.SảnphẩmhóahọcEthylenEthaphonđãđượcứngdụngtrênđồngruộng.Et haphoncóthểđẩymạnhcáctácdụngcóíchnhưđốivớicácquảvỏmọng(táo,dâutây),sựpháttriể nmàu(táo),sựtăngmàuxanh(quảcómúi)sựkíchthíchhoa(dứa)vàcóthểkíchthíchcácnhánhv ớicácthựcvậttrongchậu(câykhôvàcâyphonglữ)[23]
- Ethylenvớisựrụnghoa,l á , cành:Ethylenđ ư ợ cxemnhưhoocmonchínhgâynênsựr ụnghoa,lá,cành.Việcethylenlàmrụngcánhhoavàrụngquảnonlàmộttácđộngxấuvìnólàm giảmhiệuquảkinhtếđốivớingườitrồnghoacũngnhưtrồngc á c loạirauquả.Tuynhiên,trongt hựctếc ó nhiềucâytrồngc ầnđượcl à m rụngláđểkíchthíchsựrahoavàdễdàngchothuhoạc h.Trongtrườnghợpnàytácdụngcủaethylentrởnêncólợi.
- Ethylenvàsựngủnghỉcủacủgiống,hạtgiống:khiđặtethylenvàohạtgiốngngũcốcthìe thylenlàmmấtmiêntrạnghạtgiốngvànảymầmbắtđầu.Ethylenlàmtăngtốcđộnảymầmcủa mộtsốloạicủnhưkhoaitâyvàcácloạicănhành.Vìvậyviệcsửdụngc á c chấttươngtựe t h y l e n đểphávỡsựngủnghỉcủahạtgiống,c ủgiốngđểtrồngvàođúngthờivụsẽgiúpnôngdânđỡv ấtvảtrongviệct hu háivàt i ê u thụsảnphẩm.
- Ethylenvàsựrahoa,sựphânhóagiớitính:Ethylencũngkhởiđầutạohoaởnhữngloàicâ y,chẳnghạnở c â y xoài,…
Vìvậy,trongnôngnghiệpngườit a sửdụngethrelđểlàmchodứa,xoàirahoatráivụnhằmđeml ạihiệuquảkinhtếcao.
- Ethylencảmứngrarễvàlônghút:ethylencảmứngsựhìnhthànhrễphụởlá,thân,thâ nhoavàthậmchílàcácrễkhác.Phảnứngấyđòihỏinồngđộethylenc a o khôngbìnhthường(1 0l).E h t y l e n cũngl à chấtđiềuhòadươngtínhchosựhìnhthànhlônghútrễởmộtsốloài,đặc biệtđượcnghiêncứutốtởArabidopsis.
- Ethylenkíchthíchsựtiếtnhựamủcủacâycaosu.Khibôiethreldướidạngmỡlênvết cạoởcâycaosuđãlàmgiatăngsảnlượngmủ(đưanăngsuấtlên100%)màkhôngảnhhưởngcó hạiđếnsựtáitạomủcủacây.Vàchấtlượnggỗcâycaosusauthờig i a n khaitháchếtmủ,nếuđ ượcbôie t h r e l liêntụcở giaiđoạncuốicủanhiệmkỳkhaithácmủtốthơnsovớikhôngsửdụn gethrel.
Ngoàicáchiệuquảs i n h lítr ên , ethylencòncó tác độngsinhlý lênrấtnhiềuquátrình khácnhư:tínhhướngđộng,l à m tăngtínhthấmcủamàng,tăngsựvậnchuyểnvậtchất,… 2.2.2.2 Hạnchếcủaethylen
Bêncạnhcáctácđộngsinhlýcólợithìethylencũnggâykhôngíttrởngạichosảnxuấtnô ngnghiệp,đặcbiệtlàtrongviệcbảoquảnc ác sảnphẩmsauthuhoạchnhưrau,hoaquả,…
Saukhithuháicácsảnphẩmrauquảvẫntiếptụcquátrìnhsốngcủachúngvàsảnsinhraet hylen.Đốivớicácloạiquảhôhấpbộtphátthìtốcđộtổnghợpethylensauthuhoạchlàcựcđại,lư ợngethylensảnsinhrasẽthúcđẩyquátrìnhchínnhanhhơn.Dođóthờigianbảoquảnquảbịrútng ắnnênkhôngthểvậnchuyểnquảđixa.Điềunàysẽgâykhókhănchoviệcmởrộngthịtrườngtớin hữngvùngxanơisảnxuất.C ò n đốivớic á c loạirau,hoamẫnc ảmvớiethylent h ì liềulượngn hỏcủaethylenđượctổnghợpradochínhbảnthânchúnghoặcdovisinhvậtxâmnhiễmsẽ làmchochúngbịhéo,rụng,… làmgiảmchấtlượngdođógâythiệthạilớn[45,77,61].Ảnhhưởngxấucủaethylenđốivớirau quảlàdo:
- Kíchthíchsựxuấthiệnvàgâyhạicủacácvisinhvậtgấythốihỏng.Cácnhàhóasinhngườ iMỹđãxácđịnhđượcmốiquanhệnàyvàchorằng:cótới50%thiệthạitrênquảlàcóliênquantớ iethylen.
- Làmgiảmgiátrịcảmquancủasảnphẩm:ethylenlàmmấtmàuxanhcủarauquảnhưlà mphânhủychlorophyl;làmrụnghoavàlá,làmmấtmàumạnhởc ar ot v à nướckhoaitây,tạođ ốmnâu,đỏởrauriếp,làmhoahéo,khôngnở,…
- Ethylenlàmtăngtốcđộgiàcủalá:Ethylenvàxytokininthamgiasựgiàhóacủalá.Ethy lenđưatừngoàivàođãtăngtốcđộgiàcủalá.Tăngtổnghợpethylenthìc ò n cóthểlàmcholám ấtdiệplụctốvàmàusắcphaiđi.Cácchấtứcchếsinhtổnghợpethylenvàứcchếtácđộngcủaeth ylensẽlàmchậmquátrìnhgiàhóa.
Điềukhiểnvàứcchếsựtổnghợpethylen
Thôngthườngnôngdânthuhoạchkhiquảcònxanh,saukhivậnchuyểnđếnnhữngnơic ầnthiết,rauquảđượcl à m chínbằngphươngphápphunkhíethylen.Đốivớinhữngchuyếnhàn gvậnchuyểndàingày,rauquảđượclàmlạnhđểgiảmthiệthạivàlàmchậmquátrìnhchín.Tu ynhiên,trênthựctếcómộtvàitrởngạisaukhithuhoạch:quảđượcthuhoạchtrướckhichíncó thểgiảmmùivịvàchấtlượngvàquảđượcvậnchuyểntrongthờigiandàidướiđiềukiệnbảoquả nlạnhcũngcókhuynhhướnggiảmchấtlượng.Vìvậy,cầnphảiđiềukhiểnđượcsựsinhtổnghợ pethylenđểchủđộngtrongcôngtácbảoquảnrauquả[2].
Lượngethylentạoracóthểđượcđiềukhiểnbằngcách“đóng’’hoặclàmgiảmsựtạoethy lentrongquả,theomộtsốcáchsauđây:
- ỨcchếsựbiểuhiệncủagenACCsynthase.ACC(1-aminocyclopropane-1- carbonxynicaxid)ACCsynthaselàenzymchịutráchnhiệmchuyểnhóaS- adenosylmethiomine(SAM)thànhACC;t ừbướcthứ2 t ớibướccuốicùngtrongquátrìnhsin htổnghợpethylen.Sựbiểuhiệncủaenzymebịcảntrởkhimộtantisensehoặcmộtđoạncủabảns aogensynthaseđượcchuyểnvàotronggenomecủathựcvật.
- ChuyểngenACCdiaminase.Genmãhóachoenzymnàynhậnđượctừmộtv i khuẩnđ ấ t(Pseudomonaschlororaphis)khônggâybệnh.Vikhuẩnn à y c ó khảnăngchuyểnACCthà nhmộtphântửkhác,nhờvậygiảmlượngACCcóthểnhậnđượcđểtạoethylen.
- ChuyểngenSAMhydrolase.Phươngp h á p n à y cũngtươngt ựnhưACCdiaminas e,bằngcáchgiảmtiềnchấtcủaethylen.Trongtrườnghợpnày,SAMđượcchuyểnhóathành homoserine,genmãhóachoenzymen à y đượcphânl ậptừthểthựckhuẩnE.ColiT3.
- ỨcchếsựbiểuhiệncủagenAC C oxidase.ACCoxidasel à e n z y m xú c t á c c h o sựo xihóaACCthànhethylen,bướccuốicùngtrongconđườngsinhtổnghợpethylen.Thôngquac ôngnghệanti- sense,giảmsựđiềukhiểngenACCoxidasedẫnđếnứcchếsựhìnhthànhethylen,dođólàmchậ msựchíncủaquả.
Khiethylenc ó t í n hiệubắtđầuchoviệcchínquả,việcl à m chậmquátrìnhc h í n cóthể đạtđượcbằngcáchbiếnđổithụthểcủaethylen.Ứcchếhoạttínhcủapolygalacturonase;Enzy mpolygalacturonase(PG)c h ịutráchnhiệmchophângiảip e c t i n , chấtduytrìđộcứngchot hànhtếbàothựcvật.Việcphângiảipecinxảyralúcbắtđầuquátrìnhchín,làmchomềmquả. 2.2.3.3 Cơchếchungkìmhãmethylennộisinh
Cónhiềuchấtkìmhãmsựtổnghợpethylenhayhoạtđộngcủaethylennộisinh.Cácchấtnà ykhácnhauởkhảnăngkìmhãmethylenvàcóthểliênquanđếnsựkíchthíchtổnghợpethylen. Đểkhửnguồnhìnhthànhethylenn ộisinhcóthểdùngcácchấtAOA,AVG,CO2,Rhizob itoxin,Co 2+…
Cácchấtnàykhácnhauở vịtrítácđộngt r o n g conđườnghìnhthànhethylennộisinhnhưngkế tquảchunglàchúngđềungănkhôngc h o ethylenđượchìnhthành[55].
Cácchấtkìmhãmsựhoạtđộngcủaethylennộisinhcóthểlàcácionkimloạinặngnhưbạ c(Ag-+),diazocyclopentadien(DACP),1-methylcyclopropan(1-MCP),2,5– norbornadiene(2,5-NBD)
[45].Khikhôngcómặtcácchấtnày,ethylensẽkếthợpvớiphầntửchấtnhậnvàhìnhthànhmột phứchợp.Phứchợpnàytrởnênhoạthoávàgâyrahàngloạtcácphảnứngtrảlờitrongmộtdâych uyềnphảnứng.Sơđồcơchếtácđộngcủachấtkhángethylenđượcthểhiệnởhìnhsau:
Khiethylenđãđượchìnhthànhrangoàimôitruờngthìviệcsửdụngcácchấtkìmhãmqu átrìnhtổnghợpethylenhayngăncảnsựhoạtđộngcủaethylennộisinhsẽkhôngcòntácdụng.L úcnàymuốnlàm giảmtácđộngxấucủaethylenthìbiệnphápduynhấtlàdùngcácchấthấpphụ ethylen.C á c chấthấpphụethylennhưKMNO4,O3,AR3,VT4 khixửl í chúngvớiethylen,c húngsẽphảnứngngayvớiethylenvàphânhủyethylentrướckhiethylenkịpgâyr a nhữngtácđ ộngt í c h cựccủamình.Dođóhạnchếđượcnhữngtácđộngsinhlícóhạicủaethylentớirauhoa quả.
Cácloạichấtkìmhãmtổnghợpethylen
KhíCO 2 :ReidM.đãchứngminhrằngCO2làmộtchấtứcchếcạnhtranhđốivớitấtcảc á c phản ứngsinhtrưởngcủaethylen.Nóngănc ảnsựtổnghợpethylenở t á o , c à chua, quảkiwi,quảdâ utâyvàquảlê.Tácgiản à y cũngchứngminhrằng20%CO2ở20 0 Cđãứcchếmạnhquátrìnhtổn ghợpethylenởcácquảhôhấpbộtphátnhưt á o “GrannySmith”v à quảlêtàu“Fuerte”nhưngk hôngl à m t h a y đổihàml ượngACC.Quađóchothấynồngđ ộ CO2ngăncảnq u á trìnhchuy ểnhoáACCthànhethylenđượcxúctácbởiACC.CO2ởnồngđộcaocònứcchếvếtthương- nhântốkíchthíchhoạtđộngACCsynthaseởmôtáo,tuynhiên,sựhoạtđộngcủanóphụthuộcv à o nồngđộvàphươngphápx ửl í T ừ10%và60%CO2ngănc ảnhoạtđộngcủaACCSynthase nhưngvẫnduytrìhàmlượngACCtrongmô,trongkhi10%CO2cóảnhhưởngđếnsựtíchluỹM ACC.Kếtquảnghiênc ứuchothấykhicómặt10%CO2,ACCkhôngđượcchuyểnhoáthànhet hylenmàđượcchuyểnhoángaythànhMACCđếnnỗiACCtựdokhôngđượctíchluỹtrongm ô[65].
- AOAv à AVG :AVGvàA O A k ì m h ãm sựtổnghợpethylennộisinhdonóchặnđứng sựbiếnchuyểnACCthànhethylennhưngảnhhưởngứcchếcủacácchấtnàykhôngkéodàihơn khicómặtmộtlượngACCthíchhợp.Vìvậy,tínhnhạycảmcủacáchệthốngtổnghợpethylenv ớicácchấtứcchếACCSynthasephụthuộcvàolượngACCđãđượctạoratừtrướctrongcácmô vàtốcđộtiêuthụACCtrongquátrìnhtổnghợpethylen.Điềuđóchobiếtrằng:môchứamộtlư ợnglớnACCvàtốcđộtổnghợpethylenthấpthìmấtnhạycảmvớisựứcchếcủaAOAhayAVG[ 67]
- Rhizobitoxin :RhizobitoxinlàmộtphytotoxinđượctạorabởivikhuẩnR h i z o b i u m japonicumởnốtsầncâyhọđậu.RhizobitoxinứcchếquátrìnhtổnghợpmethioninởSamo neliatyphimurium,ngăncảnkhoảng75%sựtổnghợpethylenởc á c câylúamiếnsinhtrưởng sángvàmôtáogià.Rhizobitoxincònứcchếmàuxanhở c á c môlámớiở nhiềuloàithựcvậtvà gâyr a triệuchứngvàngláở mộtsốcây.[67]
Acetaldehytlàthànhphầnchấtthơmđ ư ợ ctổnghợpt ựnhiêntrongquátrìnhc h í n củaq uả,dướiđiềukiệnyếmkhí.CácthínghiệmcủaJennyJoblingvàcschỉrar ằngacetaldehytcók hảnăngứcchếquátrìnhtổnghợpethylen,donócókhảnăngứ cchếtrựctiếphoạtđộngcủaAC Coxidaza,mộtenzimcầnthiếttrongconđườngsinhtổnghợpethylen,dođócókhảnăngngă ncảnquátrìnhchíncủaquả[45].
SAl à mộthợpchấtphenolicđiềukhiểnnhiềuquátrìnhsinhtrưởngvàpháttriểncủathực vậtnhưsựnảymầm,sựchuyểnđộngcủalỗkhíkhổng,sựphânhóagiớitínhvàlàmgiảmsứcđề khángvớibệnhtật.SAcóthểlàmgiảmquátrìnhchínở mộtsốq u ảnhưchuối,lê,táo,kiwi….d oSAứ cchếsựchuyểnh ó a ACCthànhethylen.NhưvậySAcũnglàmộtchấtứcchếquátrìnhsi nhtổnghợpethylenvàdođóngăncảnđượcsựchíncủaquả[45]
4dinitrophenol(DNP)vàcacbonylcyanidem- chlorophenylhydrazone(CCCP)cũngđượcbiếtlàgâynhiễuquátrìnhchuyểnhoáACCthành ethylenvàdođónóngăncảnsựtạothànhethylen[35]
Chúngtabiếtrằng,ethylenlàchấtkíchthíchsựchíncủarauquả,sựgiàhoácủacáccơq uanvàtoàncây.Dođóvấnđềsửdụngcácchấtchốnglạitácdụngcủaethylen(khángethylen)sẽ cótácdụngngượclạilàmchậmsựchínvàgiàhóacủar a u quả.Đâychínhlàmụcđíchcủavi ệckéodàithờigianbảoquảnsauthuhoạch.Trongbảoquảnrauquảtươi,ethylenlàmộttrongn hữngtácnhângâythiệthạilớntrongbảoquản,đặcbiệtlàđốivớic ác s ảnphẩmrauquảtươicó dạnghôhấpđộtbiếnnhưquảchuối,bơ,xoài…[65]
IonAg +l à chấtđốikhángr ấtc ó h i ệulựcc h o e t h y l e n T r o n g mộtdịchchiếtthựcvật ngườitanhậnthấyrằngliênkếtethylenbịgiảm,chứngtỏAg +đ ãtấncôngv à o vịtríliênkếtcủa
C2H4vànóhìnhthànhmộtphứcdiethylenthựcsựdođónó cót á c dụngnhưmộtchấtkhángethylen.Ag +th ườngphảnứngvớinhóm
Sunfuhydrilquađóảnhhưởngđếnsựtraođổichấtcủacâyvàsựtổnghợpethylen.IonAg +đ ãkết hợpvớichấtnhậnethylen,khingănchặnvùngchấtnhậnethylen,Ag +ứ cchếquátrìnhtăngtựxú ctácC2H4vàtăngsựkéotheocủahàmlượngACCdođóđìnhchỉsựtăngquátrìnhtổnghợpC2H4
.Cũngvậy,cácquảtrướckhichín,Ag +trong môứcchếC2H4dođókéodàithờigianbảoquảncủa quả[77].
HợpchấtcóchứaAg +đượ csửdụngthươngmạihiệnnaylàthiosunphatbạc(STS).Ngườit athườngxửlíSTSđểchốnglạisựhéocủahoacắtvàsựrụngcánhhoagâyrabởiethylen,bởivìở mộtsốhoa,nhưhoacẩmchướng,xửlíhoatrướcvớiSTScóthểlàmdừnghẳnsựsảnsinhraet hylentrướckhicánhhoabịhéo[67].Sựtăngcácsảnphẩmcacbondioxide,ethylencũnghoànt oànđượcngănlạisaukhixửl í trướcbằngSTSdođógiúpg i ữđượchoalâuhơn.Tuynhiên,việc sửdụngSTSvẫncònmộtvàinhượcđiểmđánglưuý,đólà:
- Dungd ịchSTSkhôngđ ư ợ cbềnvữngnếuđểq u á l â u C ó thểxảyr a hiệntượngkếtti nh,cómùilưuhuỳnh,màuđenvàhiệuquảcủaSTSsẽgiảm.
- Sựtíchluỹionbạctrongnướcvàđất,nơingườitaloạibỏdungdịchSTSsaukhisửdụngn ó.CácionAg +nà y đ ư ợ ctíchluỹnhiềuc ó thểảnhhưởngđ ế nmôitrườngvàsứckhoẻcủaconn gười.Dođó,cầnphảicóbiệnphápthuhồilạibạctừdungdịchSTSloạibỏvàtìmkiếmcáchợpc hấtkháccóưuviệthơnSTS.
Hợpchấtnàykhôngđộc,khôngcómùi,cótácdụngứcchếcácphảnứngcủaethylentron gcáchoacắt,thựcvậtcóhoađểtrongchậuvàcácloạiquả.Dođónóđượcứngdụngrấtrộngrãi trongbảoquảnrauhoaquả.Việcứngdụng1-
MCPtrongquảcàchuađãngăncảnsựtổnghợpethylentrongquátrìnhchín donóứ cchếmạ nhsựtănghoạtđộngcủac á c enzimt r o n g c o n đườngsinhtổnghợpethylen,ACSvàACO[67 ].
MCPtrên chuốiđểngănchặnquátrìnhchíncủaquảChuốiđãthuhoạchở độtrưởngthànhchỉs auvàingàyb ảoquảnở điềukiệnthườnglàchín.Tuynhiênkhiứngdụng1-
MCPtrongbảoquảnchuối,nócótácdụngbảovệchuốitránhsựtácđộngcủaethylen.Sựthayđổ idiễnratrongquátrìnhc h í n củachuốinhưsựtổnghợpchấtthơm,vàsựpháttriểnmàusắccũn gđãbịlàmgiảmbởi1-MCPvàdođókéodàithờigianbảoquảncủachuối.
MCPcònđượcứngdụngđểbảoquảncácloạihoacắt,Vídụ,xửlíhoacẩmchướngvới3nl/ llàđủđểngănc ảnphảnứngl à m h é o hoadoethylengâyra;haytronghoamõmchó,vàpenstem on,xửlí1-MCPở nồngđộ20nl/lđãngăncảnsựrụnghoadoethylengâyra.
MCPởtáo“Cortland”còngiúpduytrìchấtlượngcủatáo,tránhcácvếthỏngtrênbềmặtquảtron gbảoquảnTuynhiên,ảnhhưởngcủa1-MCPcóthểbịảnhhưởngbởinhiệtđộ[44].
DACPl à mộtchấthoạtđộngy ếu,cókhảnăngngănc ảnvịtrínhậnethylentrongthựcvật.Trongđậucovevàtáo,DACPngăncảnhoạtđộngcủaethylen.Dođóc ó thểsửdụngDACPnh ưmộtchấtkhángethylenđểlàmg i ảmq u á trìnhc hí n c á c loạiquảtrongquátrìnhbảoquản.
Ngoàicácchấtt r ê n t h ì c á c i o n kimloạikhácnhưC u + ,Co 2+ ,Hg 2+ ,2,5– norbornadiene(2,5-NBD)cũnglàchấtkhángethylenrấthữuhiệu.2,5-
Sửdụngcácchấtoxyhóaethylenlàmộttrongcáccách cóthểgiúpchoviệck é o dàit hờig ia n bảoquảncác sảnphẩmrauquả.Cácchấtoxyhóaethylenmạnhnhư:ozon(O3),thuố ct í m (KMnO4),t i a cựct í m ( U V ) sẽo x y hóangayl ậpt ứcethylentrướckhichúnggâyr anhữngtácđộngxấu.
- Ozon :L à t á c nhânoxihoámạnh,dễbịphânhóa.Đâychínhl à t á c nhânthanhtrùngd iệtkhuẩntriệtđểvànhanhchóng.Quantrọnghơnn ữa,ozoncònrấtnhạyphânhuỷethylenpháts inhtrongquátrìnhsinhdưỡngtựnhiêncủarauquả,tránhđượchiệntượngtácđộngngượctrởlại (chốngquátrìnhchínnhanh,mauhéocủarauquả).
Cơchếtácđộngcủaozonlàdoozonoxihoángaykhiethylenvừatạothànhv à tạor a c á c s ảnphẩmkhôngc ó tácdụngtươngt ựethylentrướckhiethylenk ịpg â y racáctácđộngsinh lítớirauquả.Phảnứngcủaozonvớiethylennhưsau:
- KMnO 4 :làhydritcủaaxitmanic,thuốcnàycótácdụnghạnchếsinhtrưởngcủacácloạ iraunhưkhoaitây,càrốt,hànhvàmộtsốraucủkhác.KMnO4cókhảnăngchốngnảymầm,ti ệtmầm.Ngoàira,còncótácdụngdiệtkhuẩn,ngănchặnsựhìnhthànhethylen.Ngườitathườn gphunKMnO4ởngoàiđồngtrướckhithuhái3-4 tuần.[23].
CơchếtácđộngcủaKMnO4cũnggiốngnhưozon,nóoxihoáethylenvàdođóngănchặnđượcản hhưởngxấucủaethylent ớirauquả.KMnO4phảnứngvớiethylentheophươngtrìnhsau:
Zeolit :Zeolitlàvậtliệuvimaoquản,xốpnhẹcódunglượngtraođổiionlớnvàcókhảnănghấpp hụkỳdiệu.Zeolitcókhảnăngtáchkhímộtcáchchínhxácvàchọnlọc,nhữngkhíZeolitc ó thểt á c h đượcnhư:CO,CO2,SO2,H2S,N2,Freon.Khảnănghấpphụcủazeolitquyếtđịnhchủyếub ởihệthốngmaoquản.Zeolitcókhảnănghấpphụmộtcáchchọnlọc.
Zeolitc ó khảnănghydrathóavàdehydrathóamàkhôngảnhhưởngđếnđộbềncấutrúc.T ínhchấttrữnhiệtvàhấpphụnướclàdo‘’cấutrúctổong’’củanóvàdiệntíchbềmặttrongcao.Ng oàira,zeolitcòncótácdụngkiểmsoátmùi,điềunàyr ấtcólợivớiloạihôhấpyếmkhí.
(ActivatedCarbon)Thanhoạttínhlàmộtchấtliệuxốp,cór ấtnhiềulỗlớnnhỏ.Dướikínhhiển viđiệntử,mộthạtthantrônggiốngnhưmộttổkiến.Vìthế,diệntíchtiếpxúcbềmặtcủanórấtrộn gđểhấpthucáctạpchất
- Nhômo x i t : Nhôm o x i t làloạichấthấpphục ó hoạttínhc a o Ngườit a sảnxuấtnhô moxitở3 dạngnhômoxitkiềm,acidvàtrungt ín h đểt á c h cácloạihợpchấtkhácnhau,vìvậy khidùngnhômoxitđểcókếtquảlặptốt,cầnphảikiểmsoátđượctỷlệnướctrongnhômđểđảmb ảođượchoạtđộcủanó.[23].
Tìnhhìnhnghiêncứusảnxuấtchếphẩmdùngtrongbảoquảnhoahồng,hoacúc
Tìnhhìnhsảnxuấthoatrênthếgiới
Ngàynaysảnxuấthoatrênthếgiớiđangpháttriểnmạnhmẽ.Diệntíchtrồnghoatrênthế giớingàymộttăngcao.RiêngởchâuÁdiệntíchtrồnghoavàokhoảng134nghìnha;trongđón hữngnướcc ó diệnt í c h trồnghoal ớnhơnc ảlà:TrungQuốc(3000ha),ẤnĐộ(65.000ha),Th áiLan(5.452ha)[16].
Ngoàira,cácnướctrồnghoalớnnhư:HàLan,Pháp,Bungari… vànhiềunướckhácởvùngnhiệtđớiđãpháttriểnnghềtrồnghoavàtrởthànhcácnướccóg i á t rịxuấtkhẩuhoatươirấtcao.TheoRemandoT.J[66],giátr ịhoatươitrênthịtrườngthếgiớiđạtk hoảng50tỉUSDởkhuvựcbánbuôn.ChâuÂu,NhậtBảnvàMĩhàngnămtiêuthụmộtlượngh oalớn,giátrịđạtkhoảng17,18tỉUSD.Trênthếgiớikhoảng15quốcgiac ó giátrịt i ê u d ù n g h o a tươilớnkhoảng16,61USD/người/ năm,đólàcácnướcnhư:NaUy,ThuỵSĩ,ThuỵĐiển,ĐanMạch,Đức,Úc,…
TìnhhìnhsảnxuấthoaởViệtNam
HoađượctrồngtừrấtlâuđờiởViệtNam.Ngàynay,hoalàmộtnhucầuvănhóatinhthầnc ủasốđôngngườiViệtNam,đặcbiệtlàlớptrẻ.Trướcđây,hoađượctrồngở cácthànhphốlớn:Hà Nội,N a m Định,HảiPhòng,Huế,ĐàNẵng,ThànhphốHồChíMinh,ĐàLạt,…
Ngàynay,hoatươiđượctrồngởhầuhếtcácthịtrấn,thịxãtrongnước.Diệntíchtrồnghoacảnư ớctavàokhoảng1500havàtậptrunghầuhếtởcácthànhphốlớnnhư:
HàNội:500ha,VĩnhPhúc:300h a , NamĐịnh:390ha,HảiPhòng:320ha,TPHồChíMi nh:200ha,ĐàLạt:75ha
Vềchủngloạihoa,ngoàimộtsốloạinhư:trà,cúc,đào,huệ,lan,phầnlớnhoatrồngởViệt NamcónguồngốcchâuÂu(ônđớivàánhiệtđới)nhưhoahồng,cúc,layơn,hoaloakèn,… [16].
Sảnxuấthoatrướcđâyở ViệtNamc h ủy ếudựavàokinhnghiệmcủacácnghệnhânvớic ácgiốngcũcóchấtlượnghoathấp.Khoảngtừ1994trởlạiđây,mộtsốc ơquannghiêncứunhưT rườngĐạihọcNôngn g h i ệpI - HàNội,ViệnDi
TruyềnNôngnghiệp,Trungt â m nghiêncứuRauquả,TrườngĐạihọcNôngl â m T h à n h p hốHồChíMinh,TrườngĐạihọcĐàLạt,… đãđẩymạnhnghiêncứutrênnhữnglĩnhvựchoavàcâycảnh.
HiệnnayởViệtNamđãcómộttậpđoàngiốnghoakháphongphúvàkĩthuậttrồnghoađãc ónhữngbướctiếnbộvượtbậcsovớitrướcnăm1990.TuynhiênsảnxuấthoaởViệtNamvẫncò nlạchậusovớitrênthếgiớivàkhuvực,chủyếulàdocácnguyênnhânsau:
- Cáckĩthuậttrồngtrọt,bảovệthựcvật,bảoquảnvàvậnchuyểncònrấtlạchậu,dựavàoki nhnghiệmlàchính.
- Cơsởkĩthuậtphụcvục h o sảnxuấthoa:c ơsởnhângiống,nhàkính,nhàlướicònsơsài, chưađượcđầutưđúngmức.
- Việct ổchức,đàotạocánbộgiảngdạyvànghiêncứu,c á n bộkĩthuậtchoc á c vùnghoa chưađượcquantâm.
Cùngvớisựtănglêncủađôthịhoá,côngnghiệphoá,đờisốngcủanhândânt a ngàycàngt ănglênthìnhucầucủahoacâycảnhcũngtăngđángkể.
Phươngphápbảoquảnhoacắtsauthuhoạch 28
Cácphươngphápbảoquảnhoacắtđềuhướngvàomụctiêulàmchohoatươi,bềnhơntrongs uốtquátrìnhthuhoạch,vậnchuyển,phânphốiđếntayngườitiêudùng.
Hiệnnay,phươngphápb ảoquảnhoathôngdụngnhấtlàdùngnhiệtđộthấpứ cchếhoạtđộ ngsinhlýcủahoasauthuhoạch.Đâylàmộtphươngpháptốiưuchohoacắt.Tuyvậy,đểxácđịn hđượcnhiệtđộthấptốithíchchohoacắtbảoquảnlàmộtvấnđềquantrọng,đốivớihoahồngđỏ Pháp-cúcĐàiLoan,nhiệtđộtốithíchc h o bảoq uảnlạnhlà2-
5 0 C.Hoac ắtc ó nguồngốcô n đớithườngcó nhiệtđộtốithíchchobảoquảnthấphơnsovớiho acắtnhiệtđớivàánhiệtđới.Hoacắtởgiaiđoạnnụthườngcầnnhiệtđộthấphơnsovớihoacắtđã nởmộtphầnhayhoàntoàn
[32] Đểtránhcácxốcvềnhiệtđộcóthểgâyrahỏnghoacắt,việclàmlạnhsơbộnhanhhoacắttr ướcbảoquảncũngnhưnângnhiệtđộcủahoacắtsaubảoquảnlạnhcũngđượct i ếnhànhmộtc á c h cẩnthận,đặcbiệtl à h o a nhiệtđới,nơic ó nhiệtđộkhôngkhítươngđốicao.
Sửdụngphươngpháplạnhkhôhaylạnhướttùythuộcvàotừngloạihoa.Trừmộtsốloạih oathíchhợpchobảoquảnlạnhướtnhư:đồngtiền,mõmchó,mộtsốloàithíchhợpvớibảoquản lạnhkhônhư:cúc,hồnghaylayơnđềucótuổithọbảoquảncaohơnsovớibảoquảnlạnhướt. Ởnhiệtđộthấp,ethylenesinhítvàhoạtđộngsinhlýyếu.Tuyvậy,ngaycảởnhiệtđộthấpe thylenesinhratừhoacắtcũngđủđểgâyhỏnghoadotíchluỹnhiều,hoahỏngdoethylencònphụt huộcvàothờigianlưutrữ.Việcchốngtácđộngcủaethylencóthểthựchiệnđượcbằngcách x uađuổiethylenrakhỏiphòngbảoquản,hoacắtc ó thểđểxanguồnsinhethylen,ứcchếsảnsin hethylen,khôngn ê n bảoquảnhoađãnởvớihoachưanở,hoacũngkhôngnênbảoquảncùngv ớiquảchínvàrauvìđólànơisinhrakhíethylen.Sựtồntạicủacácsảnphẩmthối,cácthùngchứ abẩntrongphòngbảoquảncầnphảitránhvìchúnglànguồnsinhrakhíethylenlớn.Sựứcchếsả nsinhethylenecủahoahoặcngăncảntác độngcủaethylenenộisinhtrongbảoquảnhoacắtcóth ểđạtđượcbằngnhiệtđộthấpvàbằngxửlýhoáchấtđặcbiệt[37].
Mộtsốyếutốảnhhưởngđếnchămsóchoasauthuhoạch 29
Mộttrongnhữngvấnđềquantrọngcủaxửlýhoacắtđólàxácđịnhthờiđiểmthuhoạchthích hợp.Nóichunghoacóthểđượcthuhoạchởdạngnụhoặcdạnghoađãpháttriểnđầyđủ,tuỳthuộcv àoloại,loàivàđôikhilàmụcđíchcủangườichơihoa.
Rấtnhiềuloạihoacóthờiđiểmthuhoạchphùhợplàởgiaiđoạnnụvàsẽtiếptụcnởsauđó. Trongt r ườnghợpnàythờigiansinhtrưởngđ ư ợ crútngắn,mậtđộđónggóisảnphẩmtănglên, giảmnhữngthốihỏngcơhọc,giảmthểtíchbaogói,khảnăngbịhéocũnggiảm.Mộtvídụđiểnhì nhvềloạinàylàhoalayơn,chúngđư- ợ cthuháikhinụbắtđầuchớmnở.Hoacúclàloạichỉthuhoạchsaukhihoađãnởhoàntoàn,tron gkhihoamõmchólạiphảit h u hoạchở giaiđoạntrunggian.Hoathuhoạchđểbánởtạichỗthườ ngđượcthuhoạchởgiaiđoạnpháttriểnmuộnhơnsovớihoathuhoạchđểvậnchuyểnđixa(xuất khẩu).
Tấtcảc á c h o a cắtđềuhôhấpv à thảiranhiệt.Khinhiệtđộtăng,hôhấplạiđượckíchthích ,vìvậychấtdinhdưỡngdựtrữbịtiêuhaonhiềuhơn.Đồngthờivớiquátrìnhnàylàtốcđộmấtnư ớctănglênvàquátrìnhhéohoaxảyra.Mộttrongnhữngbiệnphápkhắcphụchiệntượngnàyđể duytrìtốtchấtlượngcũngnhưthời giancắmlọl à phảihạnhiệtđộcủakhốihoa.Nhiệtđộphùhợpđểbảoquảnh o a hồngđỏPháp- cúcĐàiLoanlàtừ2-5 0 C[37].
Cácchấttraođổinhưtinhbột,đườngtrongcành,lávàcánhhoalàcầnthiếtchoquátrìnhn ởhoacũngnhưđểhoađượctươilâu.Khihoađượctrồngtrongđiềukiệncanhtácđảmbảothìl ượngchấtdinhdưỡngdựtrữrấtcao.
Chấtlượngcũngnhưđộbềncủahoacắttănglênrấtnhiềukhicànhhoađượcc ắmtrongdu ngdịchcóchứađườngsacharoza.Việcnàyphảiđượcthựchiệntrongmôitrườngcónhiệtđộth ấp,nhưngdungd ịchcắmhoaphảic ó nhiệtđộấ m43 o C(110 o F).Kíchthước(độnở)cũngnhưm àusắccủahoacũngđượctănglênkhibổsungđườngvàodungdịch,đườnglàmchohoasẽnởt ohơnvàcóthờigiancắmlọl â u hơn.Đườngcònlàmộtthànhphầnquantrọngtrongdungdịch giữnướcởgiaiđoạnphânphốicũngnhưởgiaiđoạnbánlẻvàcắmhoaởgiađình[40].
Hầuhếtmôthựcvậtchứaí t nhấtl à 95%nước,tuỳtừngloại.H o a cắtcól á rộnghoặcnhiề ulásẽbịmấtnướcvàhéorấtnhanh.Đểhạnchếsựmấtnướctrongbảoquảnhoađặcbiệtlàbảoquả nlâudàicầnphảiđảmbảođộẩmtươngđốiởmức95%.Ở nhiệtđộthấp,tốcđộmấtnướcgiảmđi v à h ầuhếtc á c loạihoađềut á i hyđrathoá(thuỷhoá)hoàntoànsaukhivậnchuyển.Thườngt hìcànhhoasẽtựhấpthunướcmiễnlàchúngkhôngbịtắcởmôxylem.Mạchxylemcóthểbịtắcb ởicácnguyênnhânnhưtắcmạchdobọtkhí,vikhuẩn,sinhlývàchấtlượngnước
Ethylenelàchấtứcchếsinhtrưởng,g â y t á c độngxấuđếntuổithọhoacắt.Ethylenetha mgiavàonhiềuquátrìnhsinhlý,sinhhóa,xúctiếnquátrìnhgìahóacủahoacắtnhư:tăngcườn gsựhôhấp,tănghoạttínhcủanhiềuenzimthủyphân,l à m mấtkhoảnggianbào;giảms ựhấpth ụd i n h dưỡngcủah o a cắt,giảmdựtrữsaccarozavàphângiảidiệplụctrongthân,lá,hoa[18]. ẢnhhưởngcủaEthyleneđếntuổithọsauthuhoạchcủahoacắtnhưsau:ứcchếnởcủanụh oa(hoac ẩmchướng,hoahồng),g â y rụngl á (câyhoahồng),g â y rụngcánhhoa(hoahồng,ho aloakèn),làmtópcànhhoa(cẩmchướng).
Ethyleneđượcsảnsinhởtấtcảcáccơquancủacây:lá,thân,rễ,hoa.Tốcđộsảnsinhethyl enecókhácnhauởcáccơquankhácnhaucủahoa,tùythuộcvàođộg i à củahoa.Hoaởgiaiđoạ nnụcótốcđộsảnsinhethylenethấpnhưhoahồng,cẩmchướng.Đốivớic ác loạihoacắtnàycó thểgâyn ởnhânt ạosauthuhoạch.Ngaytrongmộthoac ẩmchướng,cácbộphậnnhưvòinhụyv àcánhhoacó tốcđộsảnsinhethylenecaohơncácbộphậnkhác.Ởhầuhếthoacắt,khihoađãthu phấn,thụt i n h thìcũnglàlúctốcđộsinhsảnethylenelàlớnnhất.tínhmẫncảmcủahoacắtvới ethylenecũngk h á c n h a u ở cácloàihoa,thậmchíở c á c giốngtrongcùngmộtloài:hoahồng, hoacẩmchướng,hoaloakèntrắng, lànhữngloàihoarấtmẫncảmvớiethylene.Tuynhiên,tí nhmẫncảmtrêncònphụthuộcvàotuổisinhlýcủahoalúcthuhoạchv à c â n bằngphytohoo cmonv à c á c yếut ốkhácnhư:sựcânbằngnước,nhiệtđộbảoquản,
[19].Ởnhiệtđộthấp,ethylenesảnsinhítvàhoạtđộng sinhlýyếu.Tuyvậy,ngaycảởnhiệtđộthấpethyleneđượcsinhratừhoacắtcũng đủgâyranhữngthốihỏngdotíchlũynhiều.
Việcchốngl ạitácđộngcủaethylenec ó thểđạtđượcbằngcáchxuađuổiethyleneraphỏi phòngbảoquản,hoacắtcóthểđượcgiữxanguồnsảnsinhethylene,ứcchếsựsảnsinhvàtácđộ ngcủaethylene.Khôngnênbảoquảnchunghoađãnởvớihoachưanởvìhoađãnởđãcóbaophấ nchínhlànguồnsảnsinhlớnethylen.
Quátrìnhgiàhoácủahoadiễnrarấtnhanhkhichúngtiếpxúcvớidùlàmộtlượngrấtnhỏet hylene.Ngoàirahoacũngtổnghợpethylenekhihoágià.Ethylenec ò n liênquanđếnquátrìn hgiàhoásớm(prematuresenescence)ởmộtsốloạihoa,vàg â y rụnghoaở mộtsốloạihoakhác. Ethylenevớinồngđột r ê n 100ppb(partsperbillion- phầntỷ)trongmôitrườngcóthểgâythốihỏngchohoa,vìvậycầnphảitránhtuyệtđối.Khuvực bảoquảnvàxửlýhoacầnphảiđượcthiếtkếđểkhôngbịônhiễmvớiethyleneđồngthờiphảicós ựthônggióphùhợpđểloạibỏethylenedohoatổnghợpra.
Xửlýhoavớithiosulfatebạccũnglàmgiảmhiệuứngcủaethylene(kểcảnộisinhvàng oạisinh).Bảoquảnlạnhcókhảnănglàmgiảmsựtổnghợpethylenecũngnhưđộnhạycảmcủah oavớiethylene.HiệnnaytạiÚc,ngườitađangthửnghiệmá p dụngởquymôthươngmạichất 1-MCP(1- methylcyclopropen)ởnồngđộ20ppmtrênhoa.Chấtnàycótácdụngứcchếcácthụcảmethyle necủahoa.
Kỹthuậtquảnlýhoasauthuhoạch 31
Hệthốngthuhoạchvàmarketinghoathườngp h ụthuộcvàoloạihoa,ngườitrồng,khuvự ctrồngvàhệthốngmarketing.Chúngbaogồmcácbước:thuhoạch,phânloại,bó,bọclót,đón ggói,làmlạnhvàvậnchuyển.Thườngthì50%giáthànhsảnxuấthoaphátsinhở giaiđoạnthuh oạchvàphânphốihoađếnt ay ngườit iê u dùng.Tốtnhấtl à nênphânloại,đónggóingaytạil ú c t h u hái(trênvườnhoa)rồichuyểntrựctiếpđếnhệthốnglàmlạnh.
Nêncắthoabằngkéohoặcdaosắc,vàkhôngbaogiờđượcđặthoasaukhicắtl ê n trênđấtv ìđâylàmộttrongnhữngnguycơgâynhiễmsinhvậtgâybệnhlênhoa.Tốtnhấthoaphảiđượcthu hoạch,phânloạivàđónggóiở nơikhôráo.Khicầnhydrathoá(thuỷhoá)hoanênsửdụngdungd ịchbảoquản.Nếukhôngcóđiềukiệndùngchấtbảoquảnthìdùngmộtbìnhnướcsạchcùngvớic hấtdiệtkhuẩn.Với nướccứngvàloạihoakhóhydrathoáthìcầnbổsungvàobìnhmộtlượngaxitcitricvừađủđểaxi thoáđượcdungdịchnước.Ngoàiracũngcóthểbổxungmộtlượngđườngthíchhợpvàodung dịch.
Nếuhoabịhéothìkhôngđượcsửdụngđườngtrongdungdịchkhitáihyđrathoá.Hoahé ocầnphảiđượcđặttrongnướcloạiioncóchứachấtsáttrùng.Ngoàirac ó thểbổsungchấtlàmư ớt(chấtnhũhóa)vớilượng0,01-0,1%,nướccóthểđượcaxíthoábằngaxítcitric,8- hydroxyquinolinexitrat(8-HQC)hoặcsulphatnhômđể chỉnhpHcủanướcxuốnggần3,5.Quátrìnhtáihyđrathóacầnphảiđượcthựchiệntrongphòngl ạnh,tuynhiênnhiệtđộcủadungdịchphảivàokhoảng43 o C.
"Pulsing"nghĩalàcắmh o a vừamớithuhoạchvàomộtdungdịchđặcbiệttrongmộtthời giantươngđốingắn(từvàigiâyđếnvàigiờ)đểkéodàithờigianbảoquảnvàđộbềnc ắml ọcủaho a.Đườngl à thànhphầnc h í n h t r o n g dungdịchpulsing,nồngđộphùhợptrongkhoảng2- 20%,tuỳthuộcvàotừngloạihoa.Ngườit a cũngcóthểbổsungthiosulphatbạcvàodungdịch pulsingcủamộtsốloạihoađểl à m g i ảmả nhh ưởngcủaethylene.Hoac ó thểđượcđặttrongd ungdịchpulsing trongmộtthờigianngắnởnhiệtđộấm(10phútở21 o C),hoặctrongmộtthờigian lâuở nhiệtđộl ạnh(20giờở 2 o C).Pulsingvớithờigianrấtngắn(10giây)trongdungd ịchAgN
O3đãchứngt ỏlàc ó hiệuquảtốttrênmộtsốl o ạihoa.HoacúcT r u n g quốcvàcâydươngxỉđu ôichồnđãcócácđápứngtốtkhipulsingbằngdungdịchcóchứa1000ppmnitratbạc.Mộtsốloại hoalạibịtổnthươngởnồngđộnàynhưnglạiđápứngtốtvớinồngđộ100-200ppm.
Hầuhếthoađượccắtở giaiđoạnnụ,c á c nụn à y c ầnphảiđượclàmchon ởtrongdungdịc hnởhoatrướckhiđembán.Cácdungdịchnởhoacầnphảicóchấtsáttrùngvàđường.Lácủamộ tsốloạihoac ó thểbịtổnthương(đặcbiệtl à h o a hồng)nếuhàmlượngđườngquácao.Việcl àmnởhoaphảiđượctiếnhànhởnhiệtđộấ m(21- 27 o C),độẩ mtươngđốikhôngc a o l ắm(60-80%)vàcườngđộánhsángtươngđốicao(2100-4200lux).
Dungdịchcắmhoa 32
Dungd ịchcắml ọthườngc ó chứađườngở nồngđột h ấp(0,5-
2%),mộthoáchấtđểgiữchopHcủadungdịchởmứcthấp,vàmộtchấtsáttrùng.Hoaphảiluôn đượcc ắmtrongdungdịchnày.Cácchấtbảoquảncungcấptrênthịtrườngcóthểt h e o khối lượnglớn,hoặclàmthànhgóinhỏđủhoàtrongmộtlítdungdịch.
Mộtdungdịchcắmlọphổbiếncóchứa0,5-2%đườngăn,mộtchấtsáttrùng(HQC- hydroxy-quinoline- citrate,hoặchỗnhợpchấtamonbậcbốn)vàkhoảng300ppmaxítxitric.Trongtrườnghợpn à y cảHQCv à axítxitricđềuc ó t á c dụngl à m giảmpHcủadungdịch.Đôikhimộtsốhoáchấtk háccũngđượcphốihợpbổ sungvàodungdịch,chẳnghạnnhư(nhômsunphát,hydroxytnhôm,phènchua- cácchấtnàycótácdụnglàmlắngcáctiểuphầnlơlửngtrongnướcđồngthờilàmgiảmpH),ch ấtgiảiphóngclochậm(đâylàchấtsáttrùngtốt,nhưnglạicókhảnănggâyđộctrênmộtsốđốitượ ng),vàchấtđiềuhoàsinhtrưởng6-benzyladeninecũngđ- ượcsửdụng.Nhữnghoáchấttrênchỉđượcsửdụngở nồngđộkhuyếnc á o chophép.
Dungdịchxửlýhoasauthuhoạch 33
Cónhiềubướcxửlývàhoáchấtđượcsửdụngvớihoacắt.Trướckhisửdụngc á c chếphẩ mxửlýsauthuhoạchởquymôlớn,nêncócácđánhgiáthửnghiệmvàsosánh
Cóbathànhphầnc h í n h l à chấtl à m axíthoádungdịch,chấtdinhdưỡng,vàchấtsáttrùn g.
NướckiềmhoặcnướccópHcaothườnggâytáchạivớihoacắt,nướcnàysẽkhódichuyể ntrongcànhhoa,vàvìvậyhoasẽkhônghấpthụđủn ước.Việcbổsungmộtvàimuốikhoángđãc hứngtỏcóhiệuquảtốttrongmộtsốtrườnghợp,tuynhiênnướcđãloạiionđãchứngtỏlàtốthơn sovớiviệcdùngnướcmáy.
Việclàmthayđổiđộaxítlàmộttrongbathànhphầnquantrọngnhấtcủachấtbảoquảnh oa,độpHphùhợpchohoavàokhoảng3,2-3,5.Nướccứngcầnđượcbổsungthêm300- 500ppmaxítcitric,ngoàiralượngsunphatnhôm,8-HQChoặc8-
-Chất dinh dưỡng(nguồn năng lượng) Đãcónhiềunghiêncứucôngbốvềkhảnăngứngdụngcủađườngsucroselàmtăngtuổith ọc ắml ọcủahoacắt.Goszcynska,D.M;Halevy,A H;RemandoT J [37,40],66]đãchỉrarằn gđườngngoạisinhcókhảnăngduyt rì c ấutrúcvàtínhb á n thấmcủamàngt ếbàohoahồngtro ngquátrìnhbảoquản.Bởivậy,hạnchếđượcsựròrỉ,haohụtmấtchấtdinhdưỡngtrongquátrình bảoquảnvàcắmlọ.Nhưvậy,cóthểnóirằngsucroseđượcsửdụngnhưlàmộtchấtthẩmthấugiú píchtrongquátrìnhnởcủabôngvàlàchấtnềnchoquátrìnhhôhấpvàsinhtổnghợpmàngtếbào Hơnnữa,xửlýhoacắtbằngsucrosecũngđónggópvàoviệctrìhoãnquátrìnhgiàhóacủahoa,k éodàithờigianbảoquản.T u y nhiên,việcsửdụngkếthợpvớic á c yếutốkhácsẽchokếtquảtốt hơn.
Nồngđộđườngtuỳthuộcvàomụcđíchcủadungdịchsửdụng.Nếuhoađãbịh é o và đan gđ ượ ccắmtrongdungdịchhydrathoáthìkhôngđượcbổsungđườngvàodungdịch.Dungdị chpulsingvàdungdịchnởhoacầnphảicónồngđộđường tươngứngvớitừngloạihoaxửlý.Nhìnchungdungdịchbảoquảnhoaphảicó0,5-2%đường.
Mộtsốchấtsáttrùngcókhảnăngdiệttoànbộcácvisinhvậttrongnước.ChấtHQC,HQSn goàiviệccótácdụngđiềuchỉnhpHcòncótácdụngnhưlàmộtchấtsáttrùng,khángnấm,kháng khuẩnđónggóptrongquátrìnhkéodàituổithọcắmlọcủahoacắtChúngc ó t á c dụngngănn gừasựsinhtrưởngnhanhcủav i khuẩn,nhưngkhôngdiệtkhuẩnHQSđượcsửdụngđơnlẻsẽcó ảnhhưởngrấtnhỏđếntuổithọcắmlọcủahoacắtmàcầnphảicósựkếthợpsửdụngvớicácyếut ốkhácnhưđườngsucrosevàSTSthìhiệuquảmớithựcsựtốt.Nhómtácgiảcũngchỉrarằngxửl ýhoacắtbằngdungdịchcóchứađườngsucrosevớinồngđộ100g/lkếthợpvới200mg/ lHQStrong16giờđãảnhhưởngđángkểđếnviệckéodàituổithọcắmlọcủahoacắt(KazuoI.) [50].
20,mộthỗnhợpamônbậc4,làmộtchấtsáttrùngtốt,tuynhiênchấtn à y cóthểgâyđộctrênm ộtsốloạihoa(gâymấtmàucànhhoa,giảmđờisốngcắmlọ).Chấtnàyc ó thểđượcdùngở mức 200ppmtrongxửl ý h o a cẩmchướng,hoac ú c
ChấtsáttrùnghiệuquảnhấtlàNitratbạc(AgNO3),đượcdùngtrongcácxửlýnhúngnha nhở nồngđộ100-
1000ppm,hoặcc ó thểđượcsửdụngnhưl à mộtthànhphầncủadungdịchbảoquản(25- 50ppm).Đâylàloạihoáchấtkháđắt,haydínhvếtvàoquầnáo,làmđenda.Trongtrườnghợpsử dụngnitratbạcthìcầnphảidùngnướcđãloạiion(LiJ.L.,YuH.L.)[58].
Hypochloritl à mộttrongnhữngchấtsáttrùngtốtnhất,chúngl à t h à n h phầnc h í n h c ủathuốctẩydùngtronggiađìnhhaydungdịchchlorinhoánướcbểbơi.Hầuhếtc á c loạihoađề ucóthểchịuđ ư ợ cchlorinở nồngđộthấp(20-50ppm)trongdungdịchbảoquản.
- 0,47gamaxítcitric,0,94g a m chấtt ẩytrắng(giaven5 % ) trong1 l í t nước, hoặc:
- 0,28gama x í t c i t r i c , 0,19gam8-HQCtrong1 l í t nước.Trongtrườnghợp loạihoakhóhydrathoáthìdùngdungdịchsau:
- 0,28gamaxítcitric,0,19gam8-HQCvàthêm0,19gamTriton-X100,không đượcđểhoatrongdungdịchnàyquá3giờ.
Pulsingđườngcóthểkéodàiđượcđờisốngcắmlọcủarấtnhiềuloạihoa.Nhữngkếtquảtuy ệtvờiđãthuđượctrênloạihoacụmnhưhoalayơn,hoamõmchó,hoahuệ,đâylàloạihoacầnnhiều dinhdưỡng,nănglượngtrongquátrìnhnởhoa.Chocácloạihoanóichungcóthểdùngdungdịchc óchứa1%đường.Chúýlàbấtcứkhinàosửdụngđườngđềuphảicóchấtsáttrùngtrongdungdịchc ùngvớichấtaxíthoá.Cũngcóthểchỉđơn giảnbổsungthêmđườngvàodungdịchbảoquảnhoathườngdùng.
Quátrìnhgiàhóacủahoadiễnrarấtnhanhkhichúngtiếpxúcvớidùlàmộtlượngrấtnhỏet hylen.Ngoàirahoacũngtổnghợpethylenkhihóagià.Ethylenvớinồngđộtrên100ppbtrong môitrườngcóthểgâythốihỏngchohoa,vìvậycầnphảitránhtuyệtđối.XửlýhoavớiSTScũngl àmgiảmhiệuứngcủaethylen(kểcảnộisinhvàngoạisinh).Bảoquảnlạnhcókhảnănglàmgiả msựtổnghợpethylencũngnhưđộnhạyc ảmcủahoavớie t h y l e n HiệuquảcủaSTSphụthuộ cvàonồngđộSTS,thờigianxửlývànhiệtđộxửlý.Kếtquảnghiêncứuchothấyxửlýhoahồngc ắtbằngdungdịchpulsingcóchứa120g/lsucrose,200mg/ lHQStrong10giờsaukhixửlýbằngSTSởnồngđộ0,2mMtrong2giờcóthểduytrìchấtlượng củahoatrong10ngàyvàkéodàituổithọcắmlọcủahoađược13ngày[58].
Chuẩnbịdungdịchgốc:Hoàt a n 136,77gamSTSkhant r o n g mộtl í t nước(dùngống đongsạchvàbằngnhựa).Hoàtan35,09gamnitratbạctrong1lítnướcv à o mộtbìnhkhác.Từ từrótdungdịchnitratbạcvàodungdịchSTS,khuấynhanhtrongquátrìnhrót,bổsungthêm6,22 gamPhysan-20vàodungdịch.Đâygọilàdungdịchgốc,đượcbảoquảntrongbìnhtốimàu.
- DungdịchPulsingnhanh:l ấy30gamdungd ịchgốchoàt r o n g 1 l í t nước.C ắmhoatr ongdungdịchnàytừ10đến20phútởnhiệtđộphòng,ngaylậptứcsaukhixửlýhoaphảiđượcrử asạchcácdưlượngvàcắmtrongdungdịchbảoquảnítnhấtlàmộtgiờ.
- DungdịchPulsingchậm:Hoà7,5gamdungdịchgốctrong1lítnước.Hoađượccắmtr ongdungdịchnàytrongmộtgiờởnhiệtđộphònghoặcquađêmtrongbuồnglạnh.Dungdịchn àybổsungthêm10%đườngxửl ý q u a đêmtrongbuồnglạnhđãchứngtỏrấthiệuquảđốivớiho acẩmchướng.
Xửlýnitratbạcchỉtrongvòng10giây,đâylàbướcxửlýrấtcóhiệuquảđốivớimộtsốloạ ihoa.Nồngđột h ườngdùnglà100-
1000ppm,dungdịchnàyphảiđượcphabằngnướccấtđãloạiion.Trongquátrìnhphah a y x ửl ý vớidungdịchn à y c ầnđeogăngt a y caosuvàdungd ịchc h ỉnênphađủdùngtạithờiđiểmđó.Dungdịchcầnphảiđượctránhánhnắngtrựctiếp,tránhcácvậtchấthữucơrơivàotrongbìnhn hằmgiữhoạtđộcủadungdịchởmứccaonhất[58].
Dung d ịch cắm l ọ (bảoquản) Đâylàdungdịchdùngđểcắmhoatrongsuốtthờigianchơihoa,kểc ảở nhữngnơibánlẻ. Hoà0,28gamaxítxitric,0,187gam8-HQChoặc8-
Tìnhhìnhnghiêncứuchếphẩmbảoquảnhoacắttrongvàngoàinước Phần2.VẬTLIỆUVÀPHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU
Nghềsảnxuấthoađãmanglạilợiíchtolớnchonềnkinhtếcácnước,nhiềunướctrênthế giớiđãpháttriểnmạnhnghềtrồnghoanhư:HàLan,Pháp,NhậtBản,…
Giátrịnhậpkhẩuhoacủathếgiớinăm1995là6,5tỷUSD.Cónướcchuyênxuấtkhẩumộtloạiho aphonglan,hàngnămthutới4-5tỷUSD(TháiLan).
Cũngxuấtpháttừđiềuđómàviệcbảoquảnhoacắtđãđượccác nhànghiênc ứuquantâ mnhiềuhơn:Trongnghiênc ứucủaKazuoI.,KokeiK.,R i e G.,1998[50]đãnghiêncứucủaviệ cảnhhưởngpHđếnchấtlượngvàtuổithọbảoquảnhoahồnggiốngChistianDior.Điềuchỉnhp Htrongnướclọc,nướcmưa,nướcmáyđềuảnhhưởngđếntuổithọcủahoahồng,pHtốiưutro ngnướcmáylà5vànướcmưal à 4,đãcảithiệnchấtlượngvàtuổithọcủahoahồng:láxanh,ho anởtươi,đườngkínhbônglớn;nấm,khuẩnpháttriểnchậm.
Năm2000,L i J L , Y u H L , KuangL.H.,WenS.C.,YiM.C[58]đãnghiênc ứuảnhh ưởngcủanhiệtđộthấpcókếthợpvớiđườngmíatrongviệcbảoquảnhoatươiđãchứngminhđư ợc:Nhữngloạihoađượcbảoquảnở nhiệtđộ0 0 Ct r o n g 2 tuầnchohoavẫntươi,nhưngcácloại hoađượcbảoquảnở0 0 Ctrong2tuầncókếthợpvớiviệcdùngnướcmíacũngc ó chấtlượnghoa rấttốt.Điềuđóđ ư ợ cchứngminhr õ bởithínghiệmbảoquảnhoatươivớiđiềukiệnnhiệtđộnhư t r ê n nhưngl à m giảmbớtlượngđườngmíađãlàmmàusắchoabịnhạtđirấtnhiều.
TácgiảKazuoI.,KokeiK.,RieG.,1998[50]đãnghiêncứutuổithọbảoquảnhoalayơnđ ượcbảoquảnở5 0 C,độẩm85%,saukhinhúngtrongdungdịchgồm:8Hydroxylquinoline,Ag
NO3,AL2(SO4)3,acidcitric,đườngsaccarozatrong24giờ,kếtquảsau4ngàybảoquảnchấtlư ợnghoavẫngiữnguyên.Việcnhúnghoatrongdungdịchhoáchấtkhôngchỉlàmtăngchấtlượn gmàcòntăngtuổithọcủahoatừ9,28ngàylên11,5ngày.
J.M.Belde[76],chothấytuổithọcủahoahồngcắmtrongdungdịch:đườngs a c c a r o z a vàc hấttrừkhuẩn(50mg/ lítsodiumdiclosoyanate)đểtrong18giờsauđógiữkhôtrongđiềukiệnlạnh1 0 Cthìt ăngtuổith ọthêm4 ngàysov ớiđốichứng.Nếucắmhoatrongnướckhoảng5giờtrướckhibảoquảnvàđ embảoquảnlạnhở1 0 Cthìhoasẽtươihơnsovớiđốichứng.Saukhikếtthúcquátrìnhbảoquảnlạ nhthìgiữhoaở điềukiệnlạnhkhôcótuổithọc a o hơnsov ớibảoquảnở điềukiệnlạnhướt,việcx ửlýchấtkhángethylenetrướcvàsaubảoquảnlàmtuổithọcủahoatăng3-4ngày.
+Nhiệtđộtừ25-27 0 C:tỷlệhoanởlà1,79cm/ngày. Ảnhhưởngcủacácchấtdinhdưỡngkhácnhauđếntuổithọbảoquảncủahoahồngl à : tro ngdungdịchc ó chứa1,5%đườngsaccaroza+ 300ppma x i t c i t r i c thìtuổithọbảoquảnlà4 ngày;còndungdịchchứa1,5%đườngsaccaroza+300ppmaxitcitric+60ppmkinetinthìtuổit họbảoquảnlà6ngày.
Năm1998,tácgiảM.K.PapademtrionandNarendraK.Dadlani[59]đãá p dụngxửlýet hylenengoạisinh(10ml/ lít)trong2 4 giờở 20 0 C,đốivớihoahồngtrong4giaiđoạnnởkhácnhauthấygiảm7%tuổithọc ủahoa,trongđónụbénhấtảnhhưởngnặngnhất.Xửlýhoabằngethephan(5ml/ bông)haydungdịchethylenenồngđộ50mg/lítvà100mg/ lítsẽgâyhạihơnvớiviệcxửlýethylene trựctiếp:nụnởsớm,l á mọcnhanh,thânchậmp h á t triển.B ảoquảnhoat r o n g dungdịch8-
ViệcnghiêncứucácbiệnphápkỹthuậttrướcvàsauthuhoạchhoacắtởViệtN a m cònl àmộtviệcmớimẻ,ítđượcnghiêncứuvàcôngbố.Từnăm1994BộmônSinhlýthựcvật,Trườn gĐạihọcNôngnghiệpI,HàNộidoGS.TSNguyễnQuangThạchchủtrìđãbắtđầuthửnghiệm ảnhhưởngcủaethylenkíchthíchvàkìmhãmsựgiàhoácủamộtsốhoacắt,quátrìnhchíncủam ộtsốloạiquả.[13]
Năm1998,ThS.NguyễnMạnhKhải(TrườngĐạihọcNôngnghiệpI)đãbướcđầuđềcập đếnvấnđề:Ethylenmộtchấtsảnsinhraethylenđãđượcsửdụngđểtìmhiểuảnhhưởngcủanóđ ếnđếnsựgiàhoávàhỏngcủahoacắt.Mộtsốchấtkhángethylentrựctiếpvàgiánt i ếpnhưthiosu nfatbạc(STS),GA3đãđượcsửdụngđểbảoquảnmộtsốloạihoacắtnhư:hồng,cúc,cẩmchướn g,layơn,loakèn.Cáckếtquảnghiêncứuđãchothấy,ở nồngđộethylenrấtthấp(0,0125%)đãph áhuỷ nhanhchóngcácloạih o a c ắtsau2 ngàybảoquản.Dođó,việcsửdụngc á c biệnphápnhằmchố nglạisựsảnsinhvàtácđộngcủaethylentrongquátrìnhbảoquảnhoacắtlàmộtviệcrấtcóýnghĩ a[12].
Khinghiêncứuvềảnhhưởngcủac h ếphẩmdinhdưỡngvàchấtkíchthíchsinhtrưởngđế nhoacúcvàngĐàiloan,TS.ĐặngVănĐông(Việnnghiêncứurauquả)chobiết:GA3tácđộn gmạnhởgiaiđoạnsinhtrưởngdinhdưỡng,cònSpray-N-
Theot á c giảHoàngMinhTấn,NguyễnQuangThạch:khisửdụngThiosunphatbạc0,5 ppmcótácdụngrõrệtnhấtđốivớihoacúcNhật,tuổithọcủahoakéodàihơn4ngàysovớiđốich ứng[7].
TrầnHạnhPhúcchothấy:Ethylenelàmtóp,rụngcànhhoa,làmrụngl á , l à m mấtmàuxanhcủ alá,mấtmàusắcsặcsỡcủacánhhoa,ứcchếnụhoanở.BằngcáchbổsungThiosunfatbạc0,5- 1ppmvàodungdịchcắmhoahaynhúngcuốnghoacắtvàodungd ịchtrêntrướcbảoquảnlạnhc óthểnângcaotuổithọcủahoacắt2lầnsovớiđốichứng[13].
Hoasaukhicắtbịmấtnguồndinhdưỡng,đểduytrìdinhdưỡngnuôicànhsửdụngc á c du ngdịchGlucoza,Sacarozatrongthờigianbảoquản.Sửdụngchấtứ cchếnấmbệnhđểgiảmcáct áchạicủavisinhvậtnhư:muốiForinatNatri+Limonatgốc-8-
OH.SửdụngchấtkhángEthylennhưThiosunfatBạcphunvàocành,lá.Bảoquảntrongphòng 2-5 0 C,Rh85-90%(VĩnhPhúc)[21].
Xửl ý hoahồngs a u thuhoạchbằng20%Sacaroza,pH=4trong24giờở 6-
10 0 C.BaogóibằngPEcóđộdày0,01mm,bảoquảnở2 0 Ctrong10ngày,tỉlệthốihỏngnhỏhơn 30%.Dungdịchcắmlọhưởngthụchứa200ppmAgNO3,2%Sacaroza,100ppmGA3vàpH=4. Tuổithọcắmlọđạt5,5ngày[17]. ĐốivớihoacúcNhậtkhisửdụngThiosulphatBạcc ó t á c dụngrõr ệtnhất,tuổithọcủaho acúckéodàihơn4ngàysovớiđốichứng[5].
HoacúcvàngĐàiloanxửl ý vớidungdịchđườngSacaroza2%,AgNO315ppmvàpH=3,5 sauđóbảoquảnở2 0 C,RH-90%đạtkếtquảtốtnhất[9].
Quả
Cácthínghiệmvớic a m HưngYênđượctiếnhànhtrongn ăm2006,2007và2008.CamH àmYênmuat ừhuyệnHàmYêntỉnhTuyênQuangtrongtháng12năm2007tớitháng1/2008.Q uảđượcthuháitạivườn,đựngtrongsọtnhựarồichởvềphòngthínghiệmtrongngày.Đốivớica mHàmYên,việcthuháivàvậnchuyểnt h e o đặthàng.Việcxửlýchếphẩmvàđưavàobảoqu ảnđượctiếnhànhtrongvòng48giờsaukhithuháiđốivớicamHưngYênvà72giờđốivớicam HY.
BưởipomelotrồngtạiĐôngTảo,KhoáiChâu,HưngYênđượcsửdụngtrongnghiênc ứ utháng12/2006đến1/2007.Quảđượct h u h á i tạivườn,đựngtrongsọtnhựarồichởvềphòngt hínghiệmtrongngày.Việcxửlýchếphẩmvàđưavàobảoquảnđượctiếnhànhtrong48giờsauk hithuhái.
QuảxoàiCátChutrồngtạihuyệnCáiBè,TiềnGiang,muaquảtheohợpđồngvớithương nhântạichợđầumốiNamHàNội.ĐốivớiqủaxoàitrồngtạiLongAn,thumuatạivườncủacác hộnôngdânởLongAn.Thờigiantừthuháiđếnkhixửl ý bảoquảntrongkhoảng60-
90giờ.ĐốivớiqủaxoàitrồngtạiLongAn,thumuat ạivườncủacác hộnôngdânở LongAn.Q uảđượcchọnkĩvềđộđồngđềukíchthướcvàchấtlượng.Khốilượngquảkhácnhaut h e o từngđ ợtthínghiệm.C ác thínghiệmtrênquảxoàiđượcthựchiệntrong2006,2007và2008.Quảcóđộ chínkhim u a l à 1-
2(độchín1 khivỏquảbắtđầuxuấthiệnsựbiếnmàusangmàusángtrắng;độchín2khiquảbắtđầ ucóvếtvàngvỏquả).
Thanhlongđ ư ợ ct h u muatạivườnthanhlongcủac á c hộnôngdânt ạitỉnhBìnhThuậ n.Quảđ ư ợ cchọnkĩvềđộđồngđềukíchthướcvàchấtlượng.Khốilượngquảkhácnhautheotừ ngđợtthínghiệm.
VớithínghiệmnhỏmuaquảtheohợpđồngvớithươngnhântạichợđầumốiLongBiênHàNội.Quảđượcchọnkĩvềđộđồngđềukíchthướcvàchấtlượng.Thínghiệmvớiquymô200kgv à1tấnmuatạivườnvảitrườngĐHNôngnghiệpIHàNộivàhuyệnLụcNgạn(BắcGiang).Thời giantừthuháiđếnkhixửlýbảoquảntrongkhoảng5giờ.Quảđượcchọnkỹvềđộđồngđềukícht hước,độchínvàchấtlượng.Khốilượngquảkhácnhautùytheotừngđợtthínghiệm.
Chuốiđượcmuat h e o buồngt ạivườnở VănGiangHưngYên,chọnbuồngđúngđộc h í n t h u hoạch,bỏnảicuống.Thờigiantừkhithuháiđếnkhix ửlýbảoquảnlà5giờ.Cácthínghi ệmđượcthựchiệntạiViệnNghiêncứurauquả,trườngĐHNôngnghiệpIHN.Thínghiệmđượ cthựchiệnvàonăm2006,2007.
Rauănquả
Càchuađượctiếnhànhthínghiệmnhiềul ầntrongnăm2006và2007.Càc h u a muat ại HàNội(HàNội,HảiDương)vớihaigiốngkhácnhau(PhápvàPerfect89).Quảcóđộchínkhác nhautừđộ2đếnđộ3.Thờigiantừlúcthuháitớilúcxửlýbảoquảntrongvòng24giờ.
Dưachuộtđ ư ợ ctiếnhànhthínghiệmn h i ềul ầntrongn ăm2006và2007.Nguyênliệ udưalaimuatạiHưngYên,dưatamuatạiVĩnhPhúc,HảiPhòng.Thờigiantừlúcthuháitớilúcx ửlýbảoquảntrongvòng24giờ.
Muat ạivườnthựcnghiệmcủaV i ệnnghiênc ứurauquả,chọnquảđồngđề uvềkíchthư ớc,độchín.ViệcthựchiệnthínghiệmđượcthựchiệntạiphòngchếbiếncủaViệnnghiêncứurau quả.Thínghiệmđượcthựchiệnvàonăm2006
Hoa
Phươngp h á p phânlậpnấmmốcgâythốih ỏngquảcam,xoài,v ải, thanhlong
Cân1gmẫuvỏquảcắtnhỏchovàoốngnghiệmchứa9mlnướccấtvôtrùng.L ắctrong30p húttrênmáyminishaker,đểlắngởnhiệtđộphòng.Hút30-
5ngày.Khicáckhuẩnlạcxuấthiện,táchriêngtừngkhuẩnlạcvàđưavàocácốngnghiệmchứam ôitrườnggiữgiốngđãđượcthanhtrùng. Địnhloạicácloàinấmmốcgâythốihỏngquảcam,xoài,vải,thanhlongtheoc á c khó aphânloạisau:1/
Barnett.H.L:Illustratedgeneraofimperfectfungi,CommonwelthAgriculturalBureaux197 1[25],2/RaperandFennel:2/ thegenusAsperrgillus,Williamsa n d Wilkins,Baltimore1965[64],3/
4.1.3 Phươngphápphânlậpnấmmenđốikháng( Candidasake,Candidaoleophila,R hodotorulaminuta)có khảnăngứcchếcácnấmmốcgâythốihỏngcam,xoài,thanhlon g
Cân1gmẫuvỏquả,cắtnhỏchovàoốngnghiệmchứa9mlnướccấtvôtrùng.L ắctrong30 phúttrênmáyminishaker,đểlắng.Hút1mldịchphaloãngở2nồngđộ10 -2v à 10 -
3rahộppetrivôtrùng.Phânphốimôitrườngmalt- thạchlêncáchộpp e t r i chứadịchmẫu,lắcđềusaochodịchmẫuhoàđềutrongmôitrường.N uôicấy ở30 o Ctrong2-
4.1.4 Phươngpháptuyểnchọnchủngnấmm e n đốikhángnấmmốcgâythốihỏngcam, vải,xoài,thanhlong
Việcx á c địnhvàtuyểnchọnc á c chủngnấmmenđãphânl ậpđượcc ó khảnăngứcchếc ácnấmmốcgâythốihỏngquảđượctiếnhànhtheophươngphápsau:
Môitrườngmaltthạchđượcphânphốirac á c hộppetrivôtrùng.L ấy1 đầuquecấysinhk hốiloàinấmmốcgâythốihỏngquảcam,xoài,vải,thanhlongtừốngthạchnghiênggiữgiống,c ấychấmđiểmvàogiữahộppetri.Sauđólấy1đầuquec ấysinhkhốinấmm e n c ầnthửkhảnăn gđốikhángtrongốngthạchnghiêng,cấytrùmlê n t r ê n n ấmm ốcvừac ấytrướcđó.Cáchộpt h ạchchứac á c vis i n h vậttrên đượcnuôiở28 o C,theodõisựpháttriểncủacácnấmmốc,nấmmenđượcnuôicấy từngàythứ3đếnngàythứ7-8,nếunấmmốckhôngmọcđượcởcáchộppetrisau3-
7 ngàythìđươccoilàchủngnấmmenc ó khảnăngứ cchếnấmmốcgâythốihỏngquảtừmứcđộ yếu,trungbìnhvàmạnh.
4.1.5 Phươngphápđịnhloạic á c chủngnấmm e n Candidaoleophila,Candidasakevà Rhodotorulaminutađố ikhángdùngtrongbảoq u ảncam,xoài,vải,thanhlong Đểđịnhloạic á c chủngn ấmmenCandidaoleophila,CandidasakevàRhodotorulami nutađốikhángdùngtrongbảoquảncam,xoài,vải,thanhlongchúngtôiđãtiếnhànhgiảitrìnhtự đoạngenITS1,5.8SrRNA,ITS2và26SrRNAcủac á c chủngn ấmmenphânlậpđượcv à sửdụ ngphầnmềmFASTAđểsosánhvớitrìnhtựcácđoạngennàycủachủngnấmmentrongngânhà nggenthếgiới.
4.1.5.1 Thiếtkếcặpmồitheotrìnhtựcủađoạng e n ITS1,5.8SrRNA,ITS2và26SrRNAcủ acácchủngCandidaoleophilavàCandidasakeđãcôngbốtrongngânhànggenquốctế
CặpmồiđểtáchdòngđoạngenITS1,5.8SrRNA,ITS2và26SrRNAc ủachủngCandid aoleophilacótrìnhtựnhưsau
CặpmồiđểtáchdòngđoạngenITS1,5.8SrRNA,ITS2và26SrRNAc ủachủngCandid asakecótrìnhtựnhưsau
CặpmồiđểtáchdòngđoạngenITS1,5.8SrRNA,ITS2và26SrRNAc ủachủngRhodot urolaminutacótrìnhtựnhưsau:
4.1.5.2 Phươngpháptách chiếtADNtổngsốcủacácchủngnấmmenphânlập đượctheoMolecularcloningcủaSambrookvàcs oTáchchiếtDNA oĐịnhlượngDNAbằngquangphổkế oĐiệndikiểmtraDNAhệgentrêngelagaroza1% oTiếnhànhphảnứngchuỗipolymeraza( P C R )đểnhânbảnđoạngenITS1,5.8Sr RNA,ITS2và26SrRNAcủachủngCandidaoleophilavàCandidasakephânlậpđ ược oBiếnnạpsảnphẩmghépgen(plasmittáitổhợp)bằngsốcnhiệtvàoE.coliDH5 oTáchchiếtDNAplasmittừE.coliDH5oXửlýD
DNAplasmitlượnglớn oGiảitrìnht ựđoạngenITS1,5.8SrRNA,ITS2và26SrRNAcủachủngCandidaphânl ập đượcvàXửl ý kếtquảbằngphầnm ềmPC/
4.1.6 Phươngphápphânlậpvikhuẩn Pseudomonassyringaecó khảnăngứcchếcácn ấmmốcgâythốihỏngcam,vảithiều
Cân1gmẫuvỏquảcắtnhỏchovàoốngnghiệmchứa9mlnướccấtvôtrùng.L ắctrong30p húttrênmáyminishaker,đểlắngởnhiệtđộphòng.Hút30-
5ngày.Khixuấthiệnc á c khuẩnl ạcđ iểnhìnhc ủaPseudomonassyringaethìtáchriêngtừn gkhuẩnlạcvàđưavàocácốngnghiệmchứamôitrườnggiữgiốngđãđượcthanhtrùng.
4.1.7 Phươngpháptuyểnchọnchủngvikhuẩnđ ố ikhángn ấmmốcgâythốihỏngquảc am,vảithiều
Dịchhuyềnphùcủacác chủngvikhuẩnvànấmmốcđượcchuẩnbịvớimậtđộtếb à o tươngđư ơnglà6x10 6t ếbào/ml.0,2mldịchhuyềnphùnấmmốcđượcthêmvà trangđềutrênđĩathạchchứamôitrườngmalt.2giờsaukhithêmdịchhuyềnphùnấmmốc,đục 1lỗcóđườngkínhdmmởtâmcủađĩathạch,bềdàylớpthạchlà8mm.Nhỏvàomỗilỗ100
5ngàynếunấmmốckhôngpháttriểnởxungquanhl ỗnhỏdịchhuyềnphùnấmmenthìchủngvi khuẩnđemphânt í c h cókhảnăngứcchếchủngnấmmốckiểmtra. Đốivớic á c chủngvikhuẩncókhảnăngứcchếnấmmốcthuđượcsaukhituyểnchọnsơbộ,c ó th ểđánhgiákhảnăngđốikhángcủachúngđốivớitừngloạinấmmốctheophươngpháp2.
Phươngpháp2: M ô i trườngthạchthườngđượcphânphốir a c á c hộpp e t r i vôtrùng.L ấ y1 đầuquec ấysinhkhốinấmmốct ừốngth ạchnghiênggiữgiống,c ấychấmđiểmvàogiữah ộppetrisauđólấy1đầuquecấysinhkhốivikhuẩncầnthửkhảnăngđốikhángtrongốngthạchn ghiêng,c ấytrùml ê n t r ê n nấmmốcvừacấytrướcđó.Cáchộpthạchchứacácvisinhvậttrênđ ượcnuôiở28 o C,trong2-
3ngày.T h e o dõisựpháttriểncủacácnấmmốc,vikhuẩntrongđĩahộplồngnuôicấy.Nếunấ mmốckhôngmọcđượcởcáchộppetrinuôicấythìcóthểkếtluậnvikhuẩnđó cókhảnăngứcchếnấmmốcgâythốihỏngquả.
4.1.8 PhươngphápsửdụngkỹthuậtđộtbiếnbằngtiaUVvàkỹthuậtribosomđ ể nâng caohoạttínhđốikhángcủacácchủngnấmm e n Rhdotorulaminuta,Candidasake , Cand idaoleophilavà chủngvikhuẩn Pseudomonassyringaeđố ivớicácl o à i nấmmốcgâyth ốihỏngxoài,thanhlong,cam,vảithiều.
[27].Hỗndịchchủng(vikhuẩnhaynấmmen)cầnđộtbiếnsaukhinuôicấycóchứa10 6CFU/ mlđượctrảilênmôitrườngrắncóchứamôitrườngPDA(đốivớinấmmen)vàmôit r ườngLBG ( đốivớivikhuẩn)Hoạthóachủngđãchọnđếnđúngthờiđiểmgiữaphalogarit.Đổdịchvừahoạ thóavào2ốngfancol,mỗiốngchứa10mldịch.L i t â m dịchtrên7000v/ phútở 4 o Ctrong15phút.Bỏdịch,lấycặn(tếbàokếttủa).Tếbàokếttủatrongcácốngfacolđược phaloãngvớinướcc ấtvôtrùngchođếnkhic ó độhấpphụl à 1,0.
(đoở bướcsóng515nm).Hỗndịchtếbàokếttủavừaphaloãngđượcđổrahộplồng.Tiếnhànhg âyđộtbiếnchủngtheophươngphápsau:
Sửdụngchấtđồngđẳngvới2-deoxy- glucoseđểphânlậpcácđộtbiếnthểcókhảnăngđềkhángvới2-deoxy- glucose.Sựđềkhángvới2-deoxy- glucoseđãđượcsửdụngđểphânlậpcácđộtbiếnthểcủachủngnghiêncứu.Cáchlàmnhưsau:
Hút500lhỗndịchtếbàochủngđãđượcxửlýbằngtiaUVrồichovào15mlmôitrườngn ướcchiếtkhoaitâydextroza(đốivớinấmmen)hoặcmôitrườngLBG( đốivớivikhuẩn)c ó bổ sung2-deoxy-glucoseở cácnồngđộ0,1mg/ml,1mg/ml,10mg/ml,20mg/ml,30mg/ ml,40mg/ml,50mg/ml,60mg/ml.Sauđól ắcthậtđều hỗnhợptrênrồiđổrahộplồngcóchứamôitrườngthạchPDA(đốivớinấmmen)hoặcmôitrườ ngthạchLBG(đốivớivikhuẩn).Nuôic ấycácchủngnàyở30 o C.Saut ừngngàychúngtôiqua nsátcáchộplồngnuôicấyc á c chủngtrên.Khinàot r ê n đĩathạchthấyxuấthiệnc ác khuẩnl ạc điểnhìnhthìbắtcác khuẩnlạcn à y vàhòatanchúngv à o 0 , 1 mlnướcc ấtv ô trùngtrongống ependorfđểl à m c á c thínghiệmtiếptheo.
Nhữngđộtbiếnthểđãđượcsànglọcbằngkhản ăngđềkhángvới2deoxyglucozanhưđã n ê u trênđượctiếnhànhxácđịnhkhảnăngmởrộngphổkhángcácloàinấmmốcgâythốihỏngt rêncam,xoài,vải,thanhlongnhưA.niger,P.digitatum,Fusariumproliferatum.
TiếnhànhtheoKozoOchi[53].SaukhixửlýchủngnghiêncứubằngtiaUVnhưđãnêutr ên,tiếnhànhchọnlọcc á c độtbiếnthểc ó khảnăngđềkhángvớistreptomycin
Sửdụngc h ấtkhángsinhStreptomycinđểphânl ậpc á c độtbiếnthểc ó khảnăngđềkhá ngvớiStreptomycin.SựđềkhángvớiStreptomycinđãđượcsửdụngđểphânl ậpcácđộtbiếnth ểc ó khảnăngmởrộngphổkhángc á c nấmmốcgâythốihỏngtrênquả.Cáchlàmnhưsau:
Hút500lhỗndịchtếbàochủngđãđượcxửl ý bằngtiaUV(đểkíchhoạtribosom)đượcc hovào15mlmôitrườngnướcchiếtkhoaitâydextroza(đốivớinấmmen)hoặcmôitrườngLBG (đốivớivikhuẩn)cóbổsungStreptomycinởcácnồngđộ0,1mg/ml,1mg/ml,10mg/ml,20mg/ ml,30mg/ml,40mg/ml,50mg/ml,60mg/ ml.SauđólắcthậtđềuhỗnhợptrênrồiđổrahộplồngcóchứamôitrườngPDA(đốivớinấmme n)hoặcmôitrườngthạchLBG(đốivớivikhuẩn).Nuôicấycácchủng đãxửlýở30 o C.Sautừngngàyquansátcáchộplồngnuôicấycácchủngtrên.Khi nàotrên đĩathạchthấyxuấthiênc á c khuẩnlạcnấmmen hoặcvikhuẩnđiểnhìnhthìtáchriên gchúngracácốngependorfcóchứamôitrườngdinhdưỡngđểlàmcácthínghiệmtiếptheo.
Nhữngđộtbiếnthểsauđóđãđượcsànglọckhảnăngmởrộngphổkhángcácloàinấmmốcg âythốihỏngt r ê n cam,xoài,v ải,thanhlongnhưA.niger,P.digitatum,Fusariumproliferatu m.
60 0 C,sauđócholòngtrắngtrứnghoặcproteinđậutươnghòat a n tránhkếttủaở 80 0 Csauđón â n g n h i ệtl ê n 85 0 Clắc30phút,đểởnhiệtđộphòng15-
TỷlệCMCthayđổitừ7gđến10g,tỷlệsữathayđổitừ5gđến10g, tỷlệlòngtrắngtrứngtha yđổitừ30gđến35g,tỷlệproteinđậutươngthayđổitừ35gđến40g,tỷlệdầuănthayđổitừ5gđến 9g,tỷlệglycerolthayđổitừ5gđến10g,tỷlệsápongthayđổitừ6gđến6,5g.Sựthayđổicủacáct hànhphầnnguyênl i ệutạomàngbaokhácnhausẽchođộdàycủamàngkhácnhauthíchhợpch obảoquảntừngloạiquảnhưcam,soài,vải,thanhlong.Chúngtôiđãtiếnhànhphachế27công thứcmàngbaoă nđượcđểt ì m r a c á c côngthứcthíchhợpđểbảoquảncam,xoài,vải,thanhlon g. Đốivớiquảthanhlong,chúngtôiđãt ậptrungnghiêncứuphachếcác công thứcCT25,C T26,C T 27vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủanấmmenCandidas a k e trêncáccôngthứcmàng baonày. Đốivớiquảxoài,chúngtôiđãtậptrungnghiêncứuphachếcáccôngthứcCT4 , CT5,CT 6vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủanấmmenRhodoturolaminutatrêncác côngthứcmàngb aonày. Đốivớiquảvải,chúngtôiđãtậptrungnghiêncứuphachếcáccôngthứcCT17,CT18,C T19vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủavikhuẩnPseudomonassyringaetrêncáccôngthứcmàn gbaonày. Đốivớiquảcam,chúngtôiđãtậptrungnghiêncứuphachếcáccôngthứcCT8,CT9,CT1 0vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủanấmmenCandidaoleophilatrênc á c côngthứcmàngbao này.
4.1.9 Phươngphápkiểmt r a khảnăngsốngsótc ủanấmmen,vikhuẩntrênc á c côngt hứcmàngbao
Thanhlong,xoài,cam,vảithiềuđượcbảoquảntheolôthínghiệmở phươngpháptrên.K i ểmt r a mậtđộnấmmen,vikhuẩnt r ê n 1gvỏquảt h e o phươngphápphânl ậpnấmmen,vikhu ẩnnêuở t r ê n saucácthờig i a n bảoquảnlà10ngày,20ngày,30ngày.Mẫuđốichứnglàmẫuđư ợckiểmtramậtđộnấmmen,vikhuẩntrên1gvỏquảngaysaukhixửlýchếphẩmnấmmenvàm àngbao. n n
Thànhviêncủahộiđồngcảmquangồm10người,6ngườinữvà4ngườinam,tuổit ừ30trở l ê n , c ó sứckhoẻtốt,thuộcchuyênngànhcôngnghệthựcphẩmvàcôngnghệsauthuhoạch.
Cácchỉtiêucảmquanđượcđánhgiáđốivớicácloạiquảđượcbảoquảnbằngnấmmenđố ikhángvàmàngbaoănđượcgồm: màusắcquả,độcứngcủaquả,độtươivỏquả,độngonngọtcủaquả
Quansátvàđánhgiáhìnhthứcbênngoàitheotínhchấtcảmquantheohướngmứcđộtươi mớivàc h ấpnhậntiêudùng.Đánhgiábêntrongbằngc á c h bổdọc(thanhlong,xoài,vảithiều) haybổngang(cam)quảđểquansátmàusắcvàtổchứcmôquảcủaphầnthịtvàruộtbêntrongcũn gnhưngửivàănthử.Lậphộiđồngcảmquangồm5-
7người,c ó phiếuc ảmquan,đánhg i á chấtlượngtheocácmức:Tốt,Khá,Kém,Xấu(hưhỏng, khôngđánhgiáđược).
Xửlýthốngkêtheotàiliệu"Ứngdụngxácsuấtthốngkêy,sinhhọc"củaLêKhánhTrai- HoàngKhánhNhư,NhàxuấtbảnKhoahọckỹthuật,1979.
4.1.12 Phươngphápthửnghiệmbảoquảnt h a n h long,xoài,cam,vảithiềubằngnấm m e n C.sake ,nấmm e n Rhodotorulaminuta,n ấmm e n Candidaoleophilavà vikhuẩn P seudomonassyringaek ếthợpvớimàngbaoănđượcở quymôphòngthínghiệm
Thanhlongđượcchial à m 4 l ô : 1/lôt h í nghiệmđượcbảoquảnở nhiệtđộthường,2/ lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3 / lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường,4/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
Lôthínghiệmđượcxửl ý bằngnấmmenCandidasakeđốikhángvàmàngb a o ănđược. Cáchlàmnhưsau:bôimộtlớpmỏnghỗndịchnấmmenđốikhánglênbềmặtquả.Đểr á o quả.B ô i tiếpdịchmàngb a o ă nđượcl ê n bềmặtquả.Đểr á o quả.Mẫuđốichứngđượcchialàm2lô; 1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,2/ lôbảoquảnở nhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửl ý bằngnấmm e n đốikhángvà màngbaoă nđược.Thínghiệmđượclặplại9lầnvới3công thứcmàng baoănđượckhácnhaugồmcôngthứcsố25,số26vàsố27,thínghiệmchomỗiloạicôngthức màngbaođượclặplại3lần.Thờigiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12năm2006đếntháng8nă m2007.Tiếnhànhtheodõicácchỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcquả,cácchỉtiêuphântíchv àđánhgiác ảmquan về:mứcđộmốcmọctrênquả,độcứngcủaquả,màusắcquả,vịcủaquả,tỷl ệthốihỏng.
4.1.12.2 BốtríthínghiệmđánhgiáhiệuquảbảoquảnxoàibằngchếphẩmnấmmenRho dotorulaminutađốikhángkếthợpvớimàngbaoă nđượcở quim ô phòngthínghiệm
Xoàiđượcth u muat ạivườncủatỉnhLongAnvàkhôngxửlý bằngbấtkỳc á c hoáchấtbả oquảnnàokhác.
Xoàiđượcchialàm4lô:1/lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộthường,2/ l ô thínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường4/ lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
Lôthínghiệmđ ư ợ cxửl ý bằngnấmmenRhodotorulaminutađốikhángvàmàngb a o ă nđược.C á c h l à m n h ưsau:b ô i mộtl ớpmỏnghỗndịchnấmmenđốikhánglênbềmặtquả.Đểráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.Mẫuđốichứngđượcchi alàm2lô;1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,
2/ lôbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửlýbằngnấmmenđốikhángvàmà ngbaoă nđược.Thínghiệmđượcl ặplại9 l ầnvới3 côngthứcmàngbaoă nđượckhácnhaugồ mcôngthứcsố4,số5 vàsố6,thínghiệmchomỗiloạicôngthứcmàngbaođượclặplại3lần.Thờ igiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12n ăm2006đếntháng8 năm2007.Tiếnhànhtheod õ i c á c chỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcquả,c á c chỉtiêuphântíchvàđánhgiác ảmqu an vềđộc ứngcủaquả,màusắcquảvàvịcủaquả.
Khốilượngmẫu:mỗilô50quảchođợtthínghiệmđầutiênvà100quảcho2 đợtthínghiệmtiếptheo.
Lôthínghiệmđ ư ợ cxửl ý bằngnấmmenCandidaoleophilađốikhángvàmàngbaoăn được.Cáchlàmnhưsau:bôimộtlớpmỏnghỗndịchnấmmenhoặcvikhuẩnđốikhánglênbề mặtquả.Đểráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.L ô đốichứngk hôngxửlýbằngnấmmenđốikhángvàmàngb a o ănđược.Thínghiệmđượclặplại9lầnvới3 côngthứcmàngbaoănđượckhácnhaugồmcôngthứcsố8,số9vàsố10,thínghiệmchomỗiloạ icôngthứcmàngb a o đ ư ợ cl ặplại3 lần.Thờigiant i ếnhànhthínghiệmt ừtháng.12n ăm2 0
0 6 đếntháng6 năm2 0 0 8 Tiếnhànhtheodõicácc h ỉt i ê u khốilượng,s ốlượng,màusắcquả, cácchỉtiêuphântíchvàđánhgiácảmquanvềđộcứngcủaquả,màusắcquảv à vịcủaquả.
4.1.12.4 Bốt r í t h í n g h i ệmđánhgiáhiệuquảbảoquảc a m bằngchếphẩmv i khuẩnP seudomonassyringaeđốikhángkếthợpvớimàngbaoănđượcởquimôphòngthínghiệm
Camđượcchialàm4lô:1/lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộthường,2/ l ô thínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường4/ lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
LôthínghiệmđượcxửlýbằngvikhuẩnPseudomonassyringaeđốikhángvàmàngbaoă nđ ư ợ c.Cáchl à m nhưsau:bôimộtl ớpmỏnghỗnd ịchv i khuẩnđối khánglênbềmặtquả.Đểráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.M ẫuđốichứngđượcchialàm2lô;1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,2 / lôbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửlýbằngvikhuẩnđốikhángvàmà ngbaoă nđược.Thínghiệmđượcl ặplại9 l ầnvới3 côngthứcmàngbaoănđượckhácnhaugồ mcôngthứcsố8,số9vàsố10,thínghiệmcho mỗiloạicôngthứcmàngbaođượclặplại3lần.Thờigiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12n ă m2006đếntháng8 năm2007.Tiếnhànhtheod õ i c á c chỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcqu ả,c á c chỉtiêuphântíchvàđánhgiác ảmqu an vềđộcứngcủaquả,màusắcquảvàvịcủaquả.
Vảithiềuđượcchial à m 4 l ô : 1 / l ô t h í nghiệmđ ư ợ cbảoquảnở nhiệtđộthường,2/ lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3 / lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường4/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
LôthínghiệmđượcxửlýbằngvikhuẩnPseudomonassyringaeđốikhángvàmàngbaoă nđ ư ợ c.Cáchl à m nhưsau:bôimộtl ớpmỏnghỗnd ịchv i khuẩnđốikhánglênbềmặtquả.Để ráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.Mẫuđốichứngđượcchialà m2lô;1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,2 / lôbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửlýbằngnấmmenđốikhángvàmà ngbaoă nđược.Thínghiệmđượcl ặplại9 l ầnvới3 côngthức màngbaoănđượckhácnhaugồmcôngthứcsố17,số18vàsố19,thínghiệmchomỗiloạicôngth ứcmàngbaođượclặplại3lần.Thờigiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12n ăm2006đếntháng
8 năm2007.Tiếnhànhtheod õ i c á c chỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcquả,c á c chỉtiêuph ântíchvàđánhgiác ảmqu an vềđộcứngcủaquả,màusắcquảvàvịcủaquả.
HỗndịchnấmmenCandidaoleophila,C.sake,Rhodotorulaminutat h uđượcsaunuôic ấychìmsụckhíởhệthốnglênmenđượctạochếphẩmđểbảoquảnquảbằnghaicách:
- Tạochếphẩmở dạnglỏng:hỗndịchnấmmenđ ư ợ cbổsung5%đườnglactoza,khuấy đềurồibảoquảnởnhiệtđộ10 0 C.
20 0 C.Khisửdụngđểbảoquảnquả,cứ100gsinhkhốinấmmenđ ư ợ chòatanvào1 l í t nướccất v à sửdụnghỗndịchnàyđểphủđềulênbềmặtquả.
60 0 C,sauđócholòngtrắngtrứnghoặcproteinđậutươnghòat a n tránhkếttủaở 80 0 Csauđón â n g n h i ệtl ê n 85 0 Clắc30phút,đểởnhiệtđộphòng15-
Phươngp h á p x á c địnhđộnhớt:Tươngt ựphươngphápxácđịnhđộnhớtmiêutảởph ần4.2.1.2(a)
Thờigiankếtthúcbảoquản:10/12/2008 Đốitượngbảoquản:giốngthanhlongBìnhThuậnKhốilư ợngbảoquản:500kg
Trongđó:Côngthứcthínghiệm:500kgCôngthứ cđốichứng:100kg
Phủ chế phẩm nấm men C sake
Phủ chế phẩm màng bao Để ráoqủa CT27 Để khô Đóng thùng cacton
Bảo quản thanh long ở nhiệt độ thường
Bảo quản thanh long ở chế độ kho lạnh (nhiệt độ 10 0 C)
Dạngquả:quảcóhìnhdạngtựnhiên,bóngláng,khoangmũikhôngsâuquá4 cm.
Saukhiphủbằngchếphẩmn ấmmenC.sake,thanhl o n g đ ư ợ ctiếptụcphủchếphẩmmà ngbaoCT27bằngcáchsửdụngchổinhúngdungdịchmàngbaoquétnhẹtrêntoànbộbềmặtq uả.Đểráoquả.
Chúý: chếphẩmmàngbaoCT27trướckhisửdụngphảiđượcđunnónglên85 0 Clắcđềus auđóđểnguộiđếnnhiệtđộphòng.
4.1.17 PhươngphápthửnghiệmbảoquảncamVinhHưngYênbằngchếphẩm C.oleop hilak ếthợpvớichếphẩmmàngbaoănđượcởquymô1tấn
Bốtrímôhìnhbảoquản Địađiểmt r i ểnkhai:XómTrungĐình,thônĐôngT ảoĐông,xãĐôngTảo,KhoáiChâu ,HưngYên Đợ t I
Thờigianbắtđầubảoquản:26/11/2007Thờigia nkếtthúcbảoquản:20/2/2008 Đốitượngbảoquản:giốngcamvinhHưngYênKhốilượn gbảoquản:1tấn
Trongđó:Côngthứcthínghiệm:900kgCôngthứ cđốichứng:100kg Đợ t II
Thờigianbắtđầubảoquản:28/11/2008Thờigia nkếtthúcbảoquản:20/2/2009 Đốitượngbảoquản:giốngcamvinhHưngYênKhốilượn gbảoquản:1tấn
Trongđó:Côngthứcthínghiệm:900kgCôngthứ cđốichứng:100kg
PhủchếphẩmnấmmenCandidaol eo ph il a đốikháng Đểráoquả PhủchếphẩmmàngbaoCT10 Đểráoquả Bảoquảncamởnhiệtđộthường
Trạngtháiquả:cứngchắc,khôngcóvếtdập,sâysátMàusắcvỏ quả:màuvàngđều
Camđ ư ợ cphủbằngc á c h sửdụngchổinhúngc h ếphẩmCandidaoleophila quétnhẹtrêntoànbộbềmặtquả.Đểráoquả.
Saukhiphủbằngchếp h ẩmnấmmenC.oleophila,t h a n h l on g đượctiếptụcphủchếphẩ mmàngbaoCT27.Đểráoquả.
Chúý: chếphẩmmàngbaoCT10trướckhisửdụngphảiđượcđunnónglên85 0 Clắcđềus auđóđểnguộiđếnnhiệtđộphòng.
Cams a u khiphủchếphẩmnấmmenđốikhángvàchếphẩmmàngbao,để khôbềmặt,sauđóbảoquảnởnhiệtđộthường
PhươngphápphânlậpvikhuẩnPseudomonassyringaecókhảnăng ứcchếcácnấmmốcgâythốihỏngcam,vảithiều
Cân1gmẫuvỏquảcắtnhỏchovàoốngnghiệmchứa9mlnướccấtvôtrùng.L ắctrong30p húttrênmáyminishaker,đểlắngởnhiệtđộphòng.Hút30-
5ngày.Khixuấthiệnc á c khuẩnl ạcđ iểnhìnhc ủaPseudomonassyringaethìtáchriêngtừn gkhuẩnlạcvàđưavàocácốngnghiệmchứamôitrườnggiữgiốngđãđượcthanhtrùng.
Phươngpháptuyểnchọnchủngvikhuẩnđốikhángnấmmốcgâythốihỏngq u ảcam,vảithiều PhươngphápsửdụngkỹthuậtđộtbiếnbằngtiaUVvàkỹthuậtribosomđ ể nâng caohoạtt í n h đ ố ik h á n g c ủac á c chủngnấmmen
Dịchhuyềnphùcủacác chủngvikhuẩnvànấmmốcđượcchuẩnbịvớimậtđộtếb à o tươngđư ơnglà6x10 6t ếbào/ml.0,2mldịchhuyềnphùnấmmốcđượcthêmvà
Rhdotorulaminuta,Candidasake,Candidaoleophila vàchủngvi 47 khuẩnPseudomonassyringaeđốivớicácloàinấmmốcgâythốihỏng xoài,t ha nh long, cam,vảithiều
5ngàynếunấmmốckhôngpháttriểnởxungquanhl ỗnhỏdịchhuyềnphùnấmmenthìchủngvi khuẩnđemphânt í c h cókhảnăngứcchếchủngnấmmốckiểmtra. Đốivớic á c chủngvikhuẩncókhảnăngứcchếnấmmốcthuđượcsaukhituyểnchọnsơbộ,c ó th ểđánhgiákhảnăngđốikhángcủachúngđốivớitừngloạinấmmốctheophươngpháp2.
Phươngpháp2: M ô i trườngthạchthườngđượcphânphốir a c á c hộpp e t r i vôtrùng.L ấ y1 đầuquec ấysinhkhốinấmmốct ừốngth ạchnghiênggiữgiống,c ấychấmđiểmvàogiữah ộppetrisauđólấy1đầuquecấysinhkhốivikhuẩncầnthửkhảnăngđốikhángtrongốngthạchn ghiêng,c ấytrùml ê n t r ê n nấmmốcvừacấytrướcđó.Cáchộpthạchchứacácvisinhvậttrênđ ượcnuôiở28 o C,trong2-
3ngày.T h e o dõisựpháttriểncủacácnấmmốc,vikhuẩntrongđĩahộplồngnuôicấy.Nếunấ mmốckhôngmọcđượcởcáchộppetrinuôicấythìcóthểkếtluậnvikhuẩnđó cókhảnăngứcchếnấmmốcgâythốihỏngquả.
4.1.8 PhươngphápsửdụngkỹthuậtđộtbiếnbằngtiaUVvàkỹthuậtribosomđ ể nâng caohoạttínhđốikhángcủacácchủngnấmm e n Rhdotorulaminuta,Candidasake , Cand idaoleophilavà chủngvikhuẩn Pseudomonassyringaeđố ivớicácl o à i nấmmốcgâyth ốihỏngxoài,thanhlong,cam,vảithiều.
[27].Hỗndịchchủng(vikhuẩnhaynấmmen)cầnđộtbiếnsaukhinuôicấycóchứa10 6CFU/ mlđượctrảilênmôitrườngrắncóchứamôitrườngPDA(đốivớinấmmen)vàmôit r ườngLBG ( đốivớivikhuẩn)Hoạthóachủngđãchọnđếnđúngthờiđiểmgiữaphalogarit.Đổdịchvừahoạ thóavào2ốngfancol,mỗiốngchứa10mldịch.L i t â m dịchtrên7000v/ phútở 4 o Ctrong15phút.Bỏdịch,lấycặn(tếbàokếttủa).Tếbàokếttủatrongcácốngfacolđược phaloãngvớinướcc ấtvôtrùngchođếnkhic ó độhấpphụl à 1,0.
(đoở bướcsóng515nm).Hỗndịchtếbàokếttủavừaphaloãngđượcđổrahộplồng.Tiếnhànhg âyđộtbiếnchủngtheophươngphápsau:
Sửdụngchấtđồngđẳngvới2-deoxy- glucoseđểphânlậpcácđộtbiếnthểcókhảnăngđềkhángvới2-deoxy- glucose.Sựđềkhángvới2-deoxy- glucoseđãđượcsửdụngđểphânlậpcácđộtbiếnthểcủachủngnghiêncứu.Cáchlàmnhưsau:
Hút500lhỗndịchtếbàochủngđãđượcxửlýbằngtiaUVrồichovào15mlmôitrườngn ướcchiếtkhoaitâydextroza(đốivớinấmmen)hoặcmôitrườngLBG( đốivớivikhuẩn)c ó bổ sung2-deoxy-glucoseở cácnồngđộ0,1mg/ml,1mg/ml,10mg/ml,20mg/ml,30mg/ ml,40mg/ml,50mg/ml,60mg/ml.Sauđól ắcthậtđều hỗnhợptrênrồiđổrahộplồngcóchứamôitrườngthạchPDA(đốivớinấmmen)hoặcmôitrườ ngthạchLBG(đốivớivikhuẩn).Nuôic ấycácchủngnàyở30 o C.Saut ừngngàychúngtôiqua nsátcáchộplồngnuôicấyc á c chủngtrên.Khinàot r ê n đĩathạchthấyxuấthiệnc ác khuẩnl ạc điểnhìnhthìbắtcác khuẩnlạcn à y vàhòatanchúngv à o 0 , 1 mlnướcc ấtv ô trùngtrongống ependorfđểl à m c á c thínghiệmtiếptheo.
Nhữngđộtbiếnthểđãđượcsànglọcbằngkhản ăngđềkhángvới2deoxyglucozanhưđã n ê u trênđượctiếnhànhxácđịnhkhảnăngmởrộngphổkhángcácloàinấmmốcgâythốihỏngt rêncam,xoài,vải,thanhlongnhưA.niger,P.digitatum,Fusariumproliferatum.
TiếnhànhtheoKozoOchi[53].SaukhixửlýchủngnghiêncứubằngtiaUVnhưđãnêutr ên,tiếnhànhchọnlọcc á c độtbiếnthểc ó khảnăngđềkhángvớistreptomycin
Sửdụngc h ấtkhángsinhStreptomycinđểphânl ậpc á c độtbiếnthểc ó khảnăngđềkhá ngvớiStreptomycin.SựđềkhángvớiStreptomycinđãđượcsửdụngđểphânl ậpcácđộtbiếnth ểc ó khảnăngmởrộngphổkhángc á c nấmmốcgâythốihỏngtrênquả.Cáchlàmnhưsau:
Hút500lhỗndịchtếbàochủngđãđượcxửl ý bằngtiaUV(đểkíchhoạtribosom)đượcc hovào15mlmôitrườngnướcchiếtkhoaitâydextroza(đốivớinấmmen)hoặcmôitrườngLBG (đốivớivikhuẩn)cóbổsungStreptomycinởcácnồngđộ0,1mg/ml,1mg/ml,10mg/ml,20mg/ ml,30mg/ml,40mg/ml,50mg/ml,60mg/ ml.SauđólắcthậtđềuhỗnhợptrênrồiđổrahộplồngcóchứamôitrườngPDA(đốivớinấmme n)hoặcmôitrườngthạchLBG(đốivớivikhuẩn).Nuôicấycácchủng đãxửlýở30 o C.Sautừngngàyquansátcáchộplồngnuôicấycácchủngtrên.Khi nàotrên đĩathạchthấyxuấthiênc á c khuẩnlạcnấmmen hoặcvikhuẩnđiểnhìnhthìtáchriên gchúngracácốngependorfcóchứamôitrườngdinhdưỡngđểlàmcácthínghiệmtiếptheo.
Nhữngđộtbiếnthểsauđóđãđượcsànglọckhảnăngmởrộngphổkhángcácloàinấmmốcg âythốihỏngt r ê n cam,xoài,v ải,thanhlongnhưA.niger,P.digitatum,Fusariumproliferatu m.
60 0 C,sauđócholòngtrắngtrứnghoặcproteinđậutươnghòat a n tránhkếttủaở 80 0 Csauđón â n g n h i ệtl ê n 85 0 Clắc30phút,đểởnhiệtđộphòng15-
TỷlệCMCthayđổitừ7gđến10g,tỷlệsữathayđổitừ5gđến10g, tỷlệlòngtrắngtrứngtha yđổitừ30gđến35g,tỷlệproteinđậutươngthayđổitừ35gđến40g,tỷlệdầuănthayđổitừ5gđến 9g,tỷlệglycerolthayđổitừ5gđến10g,tỷlệsápongthayđổitừ6gđến6,5g.Sựthayđổicủacáct hànhphầnnguyênl i ệutạomàngbaokhácnhausẽchođộdàycủamàngkhácnhauthíchhợpch obảoquảntừngloạiquảnhưcam,soài,vải,thanhlong.Chúngtôiđãtiếnhànhphachế27công thứcmàngbaoă nđượcđểt ì m r a c á c côngthứcthíchhợpđểbảoquảncam,xoài,vải,thanhlon g. Đốivớiquảthanhlong,chúngtôiđãt ậptrungnghiêncứuphachếcác công thứcCT25,C T26,C T 27vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủanấmmenCandidas a k e trêncáccôngthứcmàng baonày. Đốivớiquảxoài,chúngtôiđãtậptrungnghiêncứuphachếcáccôngthứcCT4 , CT5,CT 6vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủanấmmenRhodoturolaminutatrêncác côngthứcmàngb aonày. Đốivớiquảvải,chúngtôiđãtậptrungnghiêncứuphachếcáccôngthứcCT17,CT18,C T19vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủavikhuẩnPseudomonassyringaetrêncáccôngthứcmàn gbaonày. Đốivớiquảcam,chúngtôiđãtậptrungnghiêncứuphachếcáccôngthứcCT8,CT9,CT10vàđánhgiákhảnăngsốngsótcủanấmmenCandidaoleophilatrênc á c côngthứcmàngbao này.
Phươngphápkiểmtrakhảnăngsốngsótcủanấmmen,vikhuẩntrên cáccôngthứcmàngbao
Thanhlong,xoài,cam,vảithiềuđượcbảoquảntheolôthínghiệmở phươngpháptrên.K i ểmt r a mậtđộnấmmen,vikhuẩnt r ê n 1gvỏquảt h e o phươngphápphânl ậpnấmmen,vikhu ẩnnêuở t r ê n saucácthờig i a n bảoquảnlà10ngày,20ngày,30ngày.Mẫuđốichứnglàmẫuđư ợckiểmtramậtđộnấmmen,vikhuẩntrên1gvỏquảngaysaukhixửlýchếphẩmnấmmenvàm àngbao. n n
Phươngphápđánhgiácảmquan
Thànhviêncủahộiđồngcảmquangồm10người,6ngườinữvà4ngườinam,tuổit ừ30trở l ê n , c ó sứckhoẻtốt,thuộcchuyênngànhcôngnghệthựcphẩmvàcôngnghệsauthuhoạch.
Cácchỉtiêucảmquanđượcđánhgiáđốivớicácloạiquảđượcbảoquảnbằngnấmmenđố ikhángvàmàngbaoănđượcgồm: màusắcquả,độcứngcủaquả,độtươivỏquả,độngonngọtcủaquả
Quansátvàđánhgiáhìnhthứcbênngoàitheotínhchấtcảmquantheohướngmứcđộtươi mớivàc h ấpnhậntiêudùng.Đánhgiábêntrongbằngc á c h bổdọc(thanhlong,xoài,vảithiều) haybổngang(cam)quảđểquansátmàusắcvàtổchứcmôquảcủaphầnthịtvàruộtbêntrongcũn gnhưngửivàănthử.Lậphộiđồngcảmquangồm5-
7người,c ó phiếuc ảmquan,đánhg i á chấtlượngtheocácmức:Tốt,Khá,Kém,Xấu(hưhỏng,khôngđánhgiáđược).
Phươngphápxửlýthôngkêsốliệu
Xửlýthốngkêtheotàiliệu"Ứngdụngxácsuấtthốngkêy,sinhhọc"củaLêKhánhTrai- HoàngKhánhNhư,NhàxuấtbảnKhoahọckỹthuật,1979.
4.1.12 Phươngphápthửnghiệmbảoquảnt h a n h long,xoài,cam,vảithiềubằngnấm m e n C.sake ,nấmm e n Rhodotorulaminuta,n ấmm e n Candidaoleophilavà vikhuẩn P seudomonassyringaek ếthợpvớimàngbaoănđượcở quymôphòngthínghiệm
Thanhlongđượcchial à m 4 l ô : 1/lôt h í nghiệmđượcbảoquảnở nhiệtđộthường,2/ lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3 / lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường,4/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
Lôthínghiệmđượcxửl ý bằngnấmmenCandidasakeđốikhángvàmàngb a o ănđược. Cáchlàmnhưsau:bôimộtlớpmỏnghỗndịchnấmmenđốikhánglênbềmặtquả.Đểr á o quả.B ô i tiếpdịchmàngb a o ă nđượcl ê n bềmặtquả.Đểr á o quả.Mẫuđốichứngđượcchialàm2lô; 1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,2/ lôbảoquảnở nhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửl ý bằngnấmm e n đốikhángvà màngbaoă nđược.Thínghiệmđượclặplại9lầnvới3công thứcmàng baoănđượckhácnhaugồmcôngthứcsố25,số26vàsố27,thínghiệmchomỗiloạicôngthức màngbaođượclặplại3lần.Thờigiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12năm2006đếntháng8nă m2007.Tiếnhànhtheodõicácchỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcquả,cácchỉtiêuphântíchv àđánhgiác ảmquan về:mứcđộmốcmọctrênquả,độcứngcủaquả,màusắcquả,vịcủaquả,tỷl ệthốihỏng.
4.1.12.2 BốtríthínghiệmđánhgiáhiệuquảbảoquảnxoàibằngchếphẩmnấmmenRho dotorulaminutađốikhángkếthợpvớimàngbaoă nđượcở quim ô phòngthínghiệm
Xoàiđượcth u muat ạivườncủatỉnhLongAnvàkhôngxửlý bằngbấtkỳc á c hoáchấtbả oquảnnàokhác.
Xoàiđượcchialàm4lô:1/lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộthường,2/ l ô thínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường4/ lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
Lôthínghiệmđ ư ợ cxửl ý bằngnấmmenRhodotorulaminutađốikhángvàmàngb a o ă nđược.C á c h l à m n h ưsau:b ô i mộtl ớpmỏnghỗndịchnấmmenđốikhánglênbềmặtquả.Đểráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.Mẫuđốichứngđượcchi alàm2lô;1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,
2/ lôbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửlýbằngnấmmenđốikhángvàmà ngbaoă nđược.Thínghiệmđượcl ặplại9 l ầnvới3 côngthứcmàngbaoă nđượckhácnhaugồ mcôngthứcsố4,số5 vàsố6,thínghiệmchomỗiloạicôngthứcmàngbaođượclặplại3lần.Thờ igiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12n ăm2006đếntháng8 năm2007.Tiếnhànhtheod õ i c á c chỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcquả,c á c chỉtiêuphântíchvàđánhgiác ảmqu an vềđộc ứngcủaquả,màusắcquảvàvịcủaquả.
Khốilượngmẫu:mỗilô50quảchođợtthínghiệmđầutiênvà100quảcho2 đợtthínghiệmtiếptheo.
Lôthínghiệmđ ư ợ cxửl ý bằngnấmmenCandidaoleophilađốikhángvàmàngbaoăn được.Cáchlàmnhưsau:bôimộtlớpmỏnghỗndịchnấmmenhoặcvikhuẩnđốikhánglênbề mặtquả.Đểráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.L ô đốichứngk hôngxửlýbằngnấmmenđốikhángvàmàngb a o ănđược.Thínghiệmđượclặplại9lầnvới3 côngthứcmàngbaoănđượckhácnhaugồmcôngthứcsố8,số9vàsố10,thínghiệmchomỗiloạ icôngthứcmàngb a o đ ư ợ cl ặplại3 lần.Thờigiant i ếnhànhthínghiệmt ừtháng.12n ăm2 0
0 6 đếntháng6 năm2 0 0 8 Tiếnhànhtheodõicácc h ỉt i ê u khốilượng,s ốlượng,màusắcquả, cácchỉtiêuphântíchvàđánhgiácảmquanvềđộcứngcủaquả,màusắcquảv à vịcủaquả.
4.1.12.4 Bốt r í t h í n g h i ệmđánhgiáhiệuquảbảoquảc a m bằngchếphẩmv i khuẩnP seudomonassyringaeđốikhángkếthợpvớimàngbaoănđượcởquimôphòngthínghiệm
Camđượcchialàm4lô:1/lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộthường,2/ l ô thínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường4/ lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
LôthínghiệmđượcxửlýbằngvikhuẩnPseudomonassyringaeđốikhángvàmàngbaoă nđ ư ợ c.Cáchl à m nhưsau:bôimộtl ớpmỏnghỗnd ịchv i khuẩnđối khánglênbềmặtquả.Đểráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.M ẫuđốichứngđượcchialàm2lô;1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,2 / lôbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửlýbằngvikhuẩnđốikhángvàmà ngbaoă nđược.Thínghiệmđượcl ặplại9 l ầnvới3 côngthứcmàngbaoănđượckhácnhaugồ mcôngthứcsố8,số9vàsố10,thínghiệmcho mỗiloạicôngthứcmàngbaođượclặplại3lần.Thờigiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12n ă m2006đếntháng8 năm2007.Tiếnhànhtheod õ i c á c chỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcqu ả,c á c chỉtiêuphântíchvàđánhgiác ảmqu an vềđộcứngcủaquả,màusắcquảvàvịcủaquả.
Vảithiềuđượcchial à m 4 l ô : 1 / l ô t h í nghiệmđ ư ợ cbảoquảnở nhiệtđộthường,2/ lôthínghiệmđượcbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,3 / lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộthường4/lôđốichứngbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C,
LôthínghiệmđượcxửlýbằngvikhuẩnPseudomonassyringaeđốikhángvàmàngbaoă nđ ư ợ c.Cáchl à m nhưsau:bôimộtl ớpmỏnghỗnd ịchv i khuẩnđốikhánglênbềmặtquả.Để ráoquả.Bôitiếpdịchmàngbaoănđượclênbềmặtquả.Đểráoquả.Mẫuđốichứngđượcchialà m2lô;1/lôbảoquảnởnhiệtđộthường,2 / lôbảoquảnởnhiệtđộlạnh10 0 C.Cácmẫuđốichứngkhôngxửlýbằngnấmmenđốikhángvàmà ngbaoă nđược.Thínghiệmđượcl ặplại9 l ầnvới3 côngthức màngbaoănđượckhácnhaugồmcôngthứcsố17,số18vàsố19,thínghiệmchomỗiloạicôngth ứcmàngbaođượclặplại3lần.Thờigiantiếnhànhthínghiệmtừtháng12n ăm2006đếntháng
8 năm2007.Tiếnhànhtheod õ i c á c chỉtiêukhốilượng,sốlượng,màusắcquả,c á c chỉtiêuph ântíchvàđánhgiác ảmqu an vềđộcứngcủaquả,màusắcquảvàvịcủaquả.
HỗndịchnấmmenCandidaoleophila,C.sake,Rhodotorulaminutat h uđượcsaunuôic ấychìmsụckhíởhệthốnglênmenđượctạochếphẩmđểbảoquảnquảbằnghaicách:
- Tạochếphẩmở dạnglỏng:hỗndịchnấmmenđ ư ợ cbổsung5%đườnglactoza,khuấy đềurồibảoquảnởnhiệtđộ10 0 C.
20 0 C.Khisửdụngđểbảoquảnquả,cứ100gsinhkhốinấmmenđ ư ợ chòatanvào1 l í t nướccất v à sửdụnghỗndịchnàyđểphủđềulênbềmặtquả.
Phươngpháptạomàngbaoănđược
60 0 C,sauđócholòngtrắngtrứnghoặcproteinđậutươnghòat a n tránhkếttủaở 80 0 Csauđón â n g n h i ệtl ê n 85 0 Clắc30phút,đểởnhiệtđộphòng15-
Phươngphápxácđịnhtínhchấtcủacácmàngbaoănđược
Phươngp h á p x á c địnhđộnhớt:Tươngt ựphươngphápxácđịnhđộnhớtmiêutảởph ần4.2.1.2(a)
Thờigiankếtthúcbảoquản:10/12/2008 Đốitượngbảoquản:giốngthanhlongBìnhThuậnKhốilư ợngbảoquản:500kg
Trongđó:Côngthứcthínghiệm:500kgCôngthứ cđốichứng:100kg
Phủ chế phẩm nấm men C sake
Phủ chế phẩm màng bao Để ráoqủa CT27 Để khô Đóng thùng cacton
Bảo quản thanh long ở nhiệt độ thường
Bảo quản thanh long ở chế độ kho lạnh (nhiệt độ 10 0 C)
Dạngquả:quảcóhìnhdạngtựnhiên,bóngláng,khoangmũikhôngsâuquá4 cm.
Saukhiphủbằngchếphẩmn ấmmenC.sake,thanhl o n g đ ư ợ ctiếptụcphủchếphẩmmà ngbaoCT27bằngcáchsửdụngchổinhúngdungdịchmàngbaoquétnhẹtrêntoànbộbềmặtq uả.Đểráoquả.
Chúý: chếphẩmmàngbaoCT27trướckhisửdụngphảiđượcđunnónglên85 0 Clắcđềus auđóđểnguộiđếnnhiệtđộphòng.
4.1.17 PhươngphápthửnghiệmbảoquảncamVinhHưngYênbằngchếphẩm C.oleop hilak ếthợpvớichếphẩmmàngbaoănđượcởquymô1tấn
Bốtrímôhìnhbảoquản Địađiểmt r i ểnkhai:XómTrungĐình,thônĐôngT ảoĐông,xãĐôngTảo,KhoáiChâu ,HưngYên Đợ t I
Thờigianbắtđầubảoquản:26/11/2007Thờigia nkếtthúcbảoquản:20/2/2008 Đốitượngbảoquản:giốngcamvinhHưngYênKhốilượn gbảoquản:1tấn
Trongđó:Côngthứcthínghiệm:900kgCôngthứ cđốichứng:100kg Đợ t II
Thờigianbắtđầubảoquản:28/11/2008Thờigia nkếtthúcbảoquản:20/2/2009 Đốitượngbảoquản:giốngcamvinhHưngYênKhốilượn gbảoquản:1tấn
Trongđó:Côngthứcthínghiệm:900kgCôngthứ cđốichứng:100kg
PhủchếphẩmnấmmenCandidaol eo ph il a đốikháng Đểráoquả PhủchếphẩmmàngbaoCT10 Đểráoquả Bảoquảncamởnhiệtđộthường
Trạngtháiquả:cứngchắc,khôngcóvếtdập,sâysátMàusắcvỏ quả:màuvàngđều
Camđ ư ợ cphủbằngc á c h sửdụngchổinhúngc h ếphẩmCandidaoleophila quétnhẹtrêntoànbộbềmặtquả.Đểráoquả.
Saukhiphủbằngchếp h ẩmnấmmenC.oleophila,t h a n h l on g đượctiếptụcphủchếphẩ mmàngbaoCT27.Đểráoquả.
Chúý: chếphẩmmàngbaoCT10trướckhisửdụngphảiđượcđunnónglên85 0 Clắcđềus auđóđểnguộiđếnnhiệtđộphòng.
Cams a u khiphủchếphẩmnấmmenđốikhángvàchếphẩmmàngbao,để khôbềmặt,sauđóbảoquảnởnhiệtđộthường
4.1.17 chếphẩmC.sakekếthợpvớichếphẩmmàngbaoănđượcởq u y mô 54500kg Phươngphápt h ửnghiệmbảoquảncamVinhHưngY ê n bằngchếphẩmC.oleophilakếthợpvớichếphẩmmàngbaoănđượcởquymô
Cácphươngphápnghiêncứud ùn g trongcôngnghệsảnxuấtchếphẩmhoá họcchobảoquảnmộtsốrau,quả,hoatưoi
4.2.1.1 Phươngphápnghiêncứuxâydựngquytrìnhtạochếphẩm a) Phươngpháptạothểkeocolloid[31,80]: Ápdụngđ ố ivớicánhkiếnđỏ,hydroxipropylmethylxenlulo(HPMC)vàc á c loạipolys acharitkhác.Đểt ạothểkeoHPMC,chomộtlượngkhôngquá5%trongthểtíchnướcrồiđunnó ngđến80 o C.Khuấyđềuchođếntạothểkeohoàntoàn.Từdungdịchkeo5%nàycóthểphalo ãngthànhcácdungdịchnồngđộnhỏhơnbằngc á c h tươngtự. Đểphadungd ịchkeocánhkiếnđỏvớinước,cầnthiếtbổsungthêmNaOHhayNH4OHđể tạopHkiềm. b) Phươngphápnhũhóaápsuấtthường"nướctrongdầu":
Phươngpháp"nướctrongdầu"chủyếuápdụngđểtạonhũtươngđốivớisápongvàparafi nlànhữngloạisápcóđiểmnóngchảythấphơnnhiềusovớinhiệtđộsôicủanước.Côngđoạnđầ utiênlàlàmchảysápcùngvớichấtnhũhóatrongmộtbìnhchođếntậnkhihỗnhợptrởthànhchất lỏngđồngnhất.Khuấyvàbổsungkiềmv à o hỗnhợp.Duytrìnhiệtđộở khoảng105 o C.B ổsun gnướcnóngvàohỗnhợpđangkhuấy.Tốcđộbổsungnướclúcđầuphảirótrấttừtừđểchonướcc óthểthâm nhậpvàosápchảy.Khuấytốcđộc a o l à cầnthiếtc h o phươngpháp"nướctrongdầu".Lúcđầu hỗnhợpcóđộnhớtcaokhibổsunglượngnướcít,nhưngsauđóđộnhớtsẽgiảmrấtnhanhkhicó thêmnướcbổsung.Đâylàđiểmbiếnđổi,tạiđónhũtươngchuyểntừ"nướct r o n g dầu"thành nhũt ương"dầutrongnước".Sauđ iểmchuyểnđổinày,nướccóthểbổsungnhanh. c) Phươngphápnhũhóaápsuấtcaogiántiếp:
Phươngphápnhũhóaápsuấtc a o bắtbuộcc h o nhữngloạis á p c ó nhiệtđộnóngchảyc aohơn110 o C.Nồiphảnứngphảicókhảnăngchịuđượcápsuấttới30psi.Yêucầunhiệtđộtron gkhoảng120đến135 0 C.Nồiphảnứngcầncóđồnghồđoápsuấtvànhiệtkếđonhiệtđộbêntrong Thiếtbịkhuấycóthểquaytốcđộ75v/ pvớivậtliệucóđộnhớtlêntới5.000cp.Nồiápsuấtcũngphảicóbộphậncấpnhiệtv à khảnăn gl à m nguộinhanh.Quantrọnghơnl à nồic ó thểchophépc ấpnướcnóngkhiđangởtrạngthá iápsuấtcao.
Phươngphápnhũhóaápsuấtcaogiántiếptươngtựphươngphápnhũhoáápsuấtcaotr ựctiếptrựctiếpngoạitrừviệcchỉchomộtphầnnướcvàonồiphảnứngba n đầu.Lượngnước banđầunàyđủđểt ạoranhũtươngđặcc ó tới55-
75%chấtrắn.Saukhinhũh o á đạtđược30phútt h ì bổsungt h ê m nướcv à o nồiphảnứng.Lư ợngnướcnàyphảic ó nhiệtđộtốithiểu85 0 Cđểt ạođượcnhũtươngcókíchthướchạtnhỏvàtro ng.Saukhiphaloãng,nếunhiệtđộhạxuốngthấphơnnhiệtđộ nhũh o á thìcầnđunnóngtrởlạit ớinhiệtđộnhũhoávàduytrìt h ê m khoảng10phúttrướckhilà mnguộinhanh.
Xácđịnhđộnhớttươngđốitheonguyênt ắc:Đothờigianchảycủacùngmộtthểtíchdungdịch(t 1)vớimộtchấtchuẩn– nước(t2)trêncùngmộtthiếtbịchảy.Dựav ào độnhớtcủachấtchuẩntínhrađộnhớttươngđốic ủadungdịch.Cụthể,đothờigianchảycủa100mlchếphẩmcompositvàcủanướct r ê n phễucó đườngkínhốngchảylà5mm,thuđượcthờigian chảycủanướclàt2vàthờig i a n chảycủachế phẩmlà t1.Đ ộ nhớtcủachếphẩmsẽđượct í n h theocôngthức:
0,001Ns/m) η=ηchuẩnx(t1/t2) (Độnhớtcủanướclàηchuẩn b) Xácđịnhkhốilượngriêng:
Xácđịnhkhốilượngriêngcủachếphẩmcomposittheophươngphápc â n vàđothểtích. LấyV(ml)dungdịchchếphẩmcompositđemcân,thuđượckhốilượngm (gam).Từđótínhkh ốilượngriêngtheocôngthức:D=m/v(g/ml). c) Xácđịnhđộbềnnhiệt:
SửdụnghaichếphẩmcompositHPMC-sápongvàHPMC- carnauba.Xácđịnhđộbềnnhiệtcủachếphẩmthôngquakhảosátsựthayđổiđộnhớtởcácnhiệt độkhácnhauvàđộnhớtkhinhiệtđộtrởvềg i á trịb a n đầu.Chuẩnbị20ốngnghiệmvà15bìnht amgiácthủytinhV%0mLchịunhiệtcónút.Chiacácốngnghiệmvàbìnhthành5nhóm,m ỗinhóm4ốngvà3bình.Xửlýnhiệtcácchếphẩm ởcác nhiệtđộkhácnhau:50,60,70,80và90 o Ctrongthờigian 60phút.Các chế phẩmtrong ốngnghiệmsaukhixửl ý đượcbảoquảnở nhiệtđộPTNđểquansátkhảnăngtáchl ớp.C á c chếphẩmtrongbìnht a m giácđượcxácđịnhđộnhớttạinhiệtđộxửlývàsaukhiđểngu ội24giờ.Sựthayđổiđộnhớtđượcxửlýđểđánhg i á mứcđộổnđịnhnhiệtcủachếphẩm.
Lấychếphẩmcompositphủlêntấmkínhphẳngvàlênquả.Sauđótheo dõithờigiank hôtrongđiềukiệnphòngthínghiệm.Thờiđiểmkhôđượctínhkhikhốilượngkhôngthayđổi. Tạocáctấmmàngbằngcáchđổkhuôntrêncácbảnthủytinhtrungtínhđãt ạogờ.Nếumàngkhó bóckhỏik í n h thìc ó thểsửdụngbảnvậtl i ệukhácđểtạokhuôn,vídụcácđĩapetrichấtdẻo.Các hthứhailànhúngcáctấmnhựađãbiếtkíchthứcvàodungdịchchếphẩmrồiđểkhô. b)Phươngphápxácđịnhđộdàycủamàng: ĐokhốilượngriêngDcủamàngsaukhiphủvàđểkhô(g/ cm 3 ).ĐodiệntíchbềmặtSđượcphủ(cm 2 ).Tínhkhốilượngmcủamàngphủtrêndiệntíchđó(g ).Từđútớnhđộdàycủamàngtheocụngthức:d=m/D.S10 3(àm) c) Phươngphápxácđịnhđộphủ:
Phươngphápxácđịnhđộphủ””.SửdụngchếphẩmcompositHPMC– s á p o n g nồngđộchấtkhô10%.Tiếnhànhthínghiệmtrên9tấmnhựacứngkíchcỡlà5x6cmch ialàm3lô,mỗilô3tấmđánhsốthứtựtừ1đến9.Cânkhốilượngcáctấmtrướckhiphủmàng.Tiế nhànhphủmànglêncáctấmtheo3 phươngpháp:1-quétbằngchổisơn;2-nhúng;3- phunbằngsúngbắnsơngắnvớimáynénkhítrongthờigian2giây.Đểcáctấmkhôtựnhiênrồi cânkhốilượngcáctấmđểtínhtoánkếtquảvềđộdàyvàđộphủ. d) Phươngphápxácđịnhđộbámdínhcủachếphẩm:
Phươngphápcắtxácđịnhđộbámdínhcủamàng.Chuẩnbị27t ấmnhựacứngk í c h c ỡlà5cmx
6 c m chialàm9 lô,mỗil ô3 tấmcóđánhsốthứtựtừ1-27.NhúngcáctấmvàochếphẩmHPMC- sápong10%chấtkhô.Đểkhôtựnhiên,rồiđặt3lôởcácnhiệtđộkhácnhau:5,12và30 0 Ctrong t hờigian1,2và3tuần.Saukhilấymẫuđểyênởđiềukiệnphòngthínghiệm24giờrồikhảosátđ ộbámdínhcủamàngtrêncáctấmtheoTCVN2097. e)Xácđịnhđộbềncủamàngphụthuộcvàonhiệtđộmôitrường:
Xửl ý c á c mẩumàngở nhiệtđộkhácnhau.Dùngnhữngmẩumàngđãcắthoặcmàngđan gcốđịnhtrênkhuônđổ.Xácđịnhđộbámdínhvàđộphủ. f) Xácđịnhtínhchấtthẩmthấuhơinướccủamàngtrênquả:
Xácđịnhgiántiếptheophươngphápg i ảmkhốilượngt ựnhiêncủaquả.Coisựmấtnướcc ủaquảkhôngphủmànglà100%.Tínhthấmhơinướccủamàngcaothìtỷlệmấtnướccaovàng ượclạiquảchỉbịmấtnướcnhỏkhicómàngcảnthấmnhiều.Chọn10quảc ó kích thướcđềunh auđểc ó diệntích b ềmặttươngđốinhưnhau.Saukhixửl ý visinhvậtnhưnhauđượcđểkhôtro ngkhôngkhírồiphủmàng.Bảoquảntrongđiềuk i ệnphòngthínghiệm.S a u mộtthờigianđem c â n lại khốilượng.Sựmấtnướccủaquảởcôngthứcthứiđượctínhtheocôngthức:Mi=(Mi2-Mi1)/
Ni(trongđóMi2vàMi1làkhốilượngbanđầuvàcuốicùng,Nil àsốquả,vớii=0làcôngthứcđốichứn g). g) Xácđịnhtínhchấtthẩmthấukhíôxyvàcarbonicquamàngtrênquả:
XácđịnhnồngkhíO2vàCO2bênngoàitheophươngphápxácđịnhcườngđộhôhấpquả.Xá cđịnhnồngđộkhíbêntrongquảc ó múitheophươngphápdoHagenmaierđềxuấttrênhệthống sắckýCLAURUS500(PerkinElmer).SửdụngcộtnhồiCTRI(Altech,Deerfield,IL).
10cungcấp.Cấygiốngt r ê n môitrườngPDAở 25 0 Ctrong7 ngày.Bàot ửđượct h u bằngc á c h trángnướccấttrênmặtthạch.Dungdịchbàot ửđượcc h o thêmT w e e n 80(0,05%)đểtạot hểhuyềnphùđồngđều.Dịchnàycónồngđộ10 5-106bào tử/ml.
Cấynấmmốclênquảcam:CamsánhHàmYênđượcrửasạch,đểkhôvàsáttrùngbềmặtq uảbằngdungdịchethanol70%.Đục4 l ỗt r ê n mặtquảcamxungquanhcuốnghoặc6lỗtheođ ườngxíchđạocủaquả.Dùngdụngcụđụclỗcóđườngkính4mmtạoramộtlỗtrònởlớpcùicủaq uả.CấynấmmốcPenicilliumdigitatumv à ot ừngl ỗcủaquảc a m bằngcáchnhỏ1 giọt(kho ảng2 5 microlit)dịchhuyềnphùbàotửnấmmốcPenicilliumdigitatum.Đểkhô24giờsẽxửlýt huốcdiệtnấm(methylparaben,thiabendazolhayimazalil).Ủ chobàot ửnảymầmvàpháttriể n trongt ủmôitrường(nhiệtđộ23–25 0 C,độẩ m80– 85%).Mẫuđốichứngl à quả camcócấynấmPenicilliumdigitatumnhưngkhôngxửlýthuốcdiệtnấm
Sápongđểđạtnồngđộcuốicùnglà500và1.000ppm.Tươngt ựvớithiabendazol(TBZ)l à 30 0và500ppm.K ếthợpbổsung3 0 0 p p m TBZvới200ppmIM.Xửlýnấmmốcbằngcáchqu étchếphẩmcóchứachấtchốngnấmlênmặtcáclỗđãcấygiống.Kiểmtrahàngngàycáclỗcấy giống.Đếmv à ghilạisốlỗcónấmmốcpháttriểntrênmỗiquả.Tínhphầntrămlỗbịmốctừngn gày.Côngthứctính:%lỗbịmốc=(sốlỗbịmốc/tổngsốlỗmốcởĐC)x100. b) Bốt r í t h í nghiệmx ác địnhảnhhưởngc ủanồngđộchếphẩmt ớikhảnăngbảoquảnquả:
CamgiốngVinhtrồngtạiHưngYên.Thờigianthựchiệnt ừ12/2007đến1/2008.Chếph ẩm:CompositHPMC-
Sápong,hàmlượngchấtkhô:0,7,10,15,20%tươngứngvớicáccôngthứcĐC,CT1,CT2,CT3vàCT4.Camthuhoạchtạivườnvàongày26/11/2007.R ửasạch,xửlýchốngnấmbằngnướ cnóng.Đểk h ô trongphòngthínghiệmvàápdụngchếphẩmtheophươngpháplaubằnggăngt ayHDPEl ê n quả.T h e o c á c h này,đigăngvào2 tay.Hút0,25mlchếphẩmbằng xilanhnhựarồinhỏvàolòngbàntaytráiđãđigăng.Dùnghaibàntayxoađềuvàkỹlênmặtquả. Đểkhôtựnhiênrồiđưavàobảoquảntheotừnglô.Mỗicôngthức20quả,lặplại3lầnlà60quả.L ượngchếphẩmápdụngchomỗiquảtrungbìnhđạt0,25ml/quả,tươngđương1,4lít/ tấnquả.Tổngsốquảchothínghiệmlà300quả.Theodõikhảnăngmấtkhốilượngtựnhiênbằngc áchlấymẫuhàngtuần.Đánhgiáchấtlượngcảmquankhikếtthúcthínghiệm7tuần. c) BốtríthínghiệmđánhgiáhiệuquảbảoquảnquảcamHàmYên:
Loạicomposit1chứaHPMCvớinhựacánhkiếnđỏ,composit2chứaHPMCvớisápong. Cảhaicóhàmlượngchấtkhô15%.Quảđượcrửabằngnướcsạchrồiđượcxửlýdiệtnấmmốcbằ ngdungdịchTBZ300ppmvàImazalin200ppmở52oCtrongt h ờig i a n 2,5p h ú t Sauđóđể quảk h ô t ựnhiênrồidùngchổis ơnquétc h ếphẩml ê n bềmặtquả.Mỗiquảs ửdụngkhoảng0, 4m l chếphẩm.C a m HàmYênđượcbốtríngẫunhiênthành3côngthức,mỗicôngthức80quả chiađôithành2thínghiệmsongsong.Côngthức1 (CT1)sửdụngchếphẩmt ạomàngcomposi t1;c ô n g thức2 (CT2)sửdụngchếphẩmcomposit2;côngt h ức3 làđốichứng(ĐC)khôngs ử dụngchếphẩm.C á c côngthứcthínghiệmđ ượ cxếpvàocáchộpcartontrángnhũtươngparafi n-EVAvàbảoquảnởđiềukiệnPTN. d) Bốt r í thínghiệmđánhg i á h i ệuquảbảoquảnc a m HưngYênvàsosánhhiệuquảbảoquả nvớichếphẩmnhậpkhẩuBQE-15:
CamgiốngVinhtrồngt ạiĐôngT ảo,KhoáiC h â u , HưngYên.Thínghiệmđượcbốtrí ngẫunhiênthành3côngthức,mỗicôngthức80quảchiađôithành2thínghiệmsongsong.Côn gthức2(CT2)sửdụngchếphẩmtạomàngcompositHPMC-
15;c ô n g thứcđốichứng(ĐC)khôngsửdụngchếphẩm.Bảoquảntrongđiềukiệnmôitrường củaPTNvàocuốinăm2007đếnđầunăm2008. e) Bốtríthửnghiệmđánhgiáhiệuquảbảoquảncamvàbưởiquimôlớntạicơsởsảnxuất:
CamgiốngVinhvàbưởiPomelotrồngtạiHưngYênthuháitạivườnởxãôngT ảo,Khoá iChâu,HưngYên.Khốilượng:c a m 5 0 0 k g ; bưởi200quả;ChếphẩmcompositHPMC– Sápong(10%).ChếphẩmBQE-
15đểsosánh;Saukhiápdụngchếphẩm,camđượcxếpvàocácsọttre.Đáysọtphíatrongc ó lót mộtl ớpmútmỏng.Bưởiđượcxếpdànđềut r ê n nềnnhà.B ảoquảnở đ iềukiệnthườngtháng1 2/2006và1/2007;Hìnhthứcvàchấtlượngquảbảoquảnđượcđánhgiáthôngquat ỷlệthốihỏn gcủaquảtrongqúatrìnhbảoquảnvàđánhgiácảmquanquảsauthờig i a n bảoquản. f) BốtrímôhìnhbảoquảncamHưngYên:
- CamVinhtrồngt ạixãĐôngTảo,KhoáiChâu,HưngYênsốl ượng1.000kg.
- Địađiểm:HộgiađìnhôngLêKếCứu,ĐôngTảo,KhoáiChâu,HưngYên.
- Chếphẩmtạomàngbềmặt:CompositHPMC–Sápong,15%chấtkhô. g) Bốtríthửnghiệmđánhgiáhiệuquảbảoquảnquảxoài:
Giốngxoàicátchu,trồngởCáiBè(TiềnGiang).Quảđượcrửasạchtrongnướcmáyrồixửl ýnướcnóng55 o Ctrongthờigianlà5phút.Tổngsốquảchothínghiệmnàylà400quả,chiathành 4côngthức,mỗicôngthức100quả.Mỗicôngthứcchiathành3lôthínghiệmsongsong(lặplại 3lần).Bảoquảntrongđiềukiệnphòngthínghiệmvớinhiệtđộtrongkhoảngtừ20đến30 o C,độẩ mkhôngkhítừ60đến85%.Thờigianlấymẫuphântíchtheođịnhkỳ3ngàylấymẫumộtlầnđểp hântíchcácchỉtiêuhoálý.
- CT1:SửdụngchếphẩmcompositHPMC- sápcarnauba(tỷlệtươngứnglà1:9).Hàmlượngchấtkhôlà10%.
Khốilượngquả60kg,trungbình7quả/ kg.Loạibỏnhữngquảthốihỏng,dậpxước,khuyếttật,chọnnhữngquảkíchthướcđềunhau.Lậ p3côngthức,mỗicôngthức60quả.L ặplại3 lần,trongđó30quảtheod õ i c á c chỉt i ê u khốil ượng,sốlượng,màusắc;30quảcònlạitheodõicácchỉtiêuphântíchvàđánhgiácảmquan.Áp dụngchếphẩmtheophươngphápdúngquả.Xếpquảtrongcácrổnhựavàphânchiathành3côn gthứckhácnhauvềthànhphầntạomàng:
- CT1:Chếphẩmcomposit1(HPMC-Sápong),10%chấtkhô.
- CT2:Chếphẩmcomposit2(HPMC-Carnauba),10%chấtkhô.
- ĐC:Nướccất(khôngsửdụngchếphẩmtạomàng). i)Phươngphápphântíchcácchỉtiêucơlý,sinhlý,sinhhóarauquả
CườngđộhôhấpđượcxácđịnhbằnglượngO2hấpphụhoặclượngCO2tạoracủamộtđơ nvịtrọnglượngrauquảtrongmộtđơnvịthờigian.Vídụ:đơnvịđocườngđộhôhấplàm gCO2/kg.h.Sửdụngmáyđoô xyvàcarbonicICA-
PSM,Mỹ).PhântíchmàudựatrêncácchỉsốL,a,bvà∆Eđođượctrênmáy.
Rauquảvàc á c sảnphẩmcủar a u quả.Xácđịnhhàmlượngaxitascorbic.Phần1.Phươ ngphápchuẩn- TCVN6427-1:1998(tươngđươngISO6557/1:1986). k)Phươngphápđánhgiácảmquan:
Quansátvàđánhgiáhìnhthứcbênngoàitheotínhchấtcảmquantheohướngmứcđộtươ imớivàchấpnhạntiêudùng.Đánhgiábêntrongbằngcáchbổdọc(dưachuột,xoài)haybổngan g(quảcómúi)quảđểquansátmàusắcvàtổchứcmôquảcủaphầnthịtvàruộtb ê n trongcũngnh ưngửiv à ă nthử.L ậphộiđồngc ảmquangồm5-
7n g ười,có phiếuc ảmquan,đánhgi á chấtlượngtheohìnhthứcchođiểm.ThangHedonicsca le,trongđóchấtlượngc ảmquanđượcđánhgiáthịhiếubằngc á c h chođiểmtừ1 đến9.Điểm9tươngđươngvớimứccaonhất,điểm1làmứcthấpnhất,điểm5tươngứngvớimứctrungbìn h.Tổnghợpphiếu,lậpbảngthốngkêđiểmđốivớitừngmẫu.
- LàmthựcnghiệmđểtổnghợpZeolitt h e o phươngphápkếttinhthủynhiệt(hydrother mal)g e l aluminosilicatc ó t h à n h phầntươngứng,ở nhiệtđộvàá p suấtt h í c h hợp.
- Ghih ì n h c ấut r ú c t i n h thể:t h e o phươngphápkínhh i ểnviđiệnt ửquét(SE M).L à m thựcnghiệmchuẩnbịmẫuđ ể g h i ả nhgồmc á c bước:rửasạchmẫubằngethanol,p hântánmẫu,sấykhô,phủlênbềmặtmẫuđãphântánmộtlớpvàngcựcmỏng.Mẫuđượcghiảnh trênJSM–5300củahángJeol-Nhật
- TẩmAgv à o zeolittheophươngpháp:SửdụngdungdịchAgNO3.Sấyv à trộnzeolitd ạnghạtvàodungdịchAgNO3t h e ot ỷl ệthíchhợp.LoạiNO3 -để thusảnphẩm. b) Hoànthànhchếphẩm:
- PhốitrộnZeolitdạnghạtvớicácthànhphầnkhác,thửnghiệmtrênđốitượngr a u quảđ ểđánhgiákhảnănghấpphụethylencủachếphẩm.Tìmđượccôngthứcphốichếthíchhợp.Lựa chọnbaogóichosảnphẩm.
Thínghiệmđ ư ợ cthựchiệnt r ê n quảchuối,chuốiđượcthuhoạchởđộchín85%v à o bu ốisángvàlàms ạchsơbộ,chọnquảđồngđềuvềk í c h thước,chuốiđượcxếpngẫunhiênvàohộ pnhựacógắnsetom,sauđóđượcbảoquảnởnhiệtđộphòng.Kiểmtrasựảnhhưởngcủazeoli t-
Agtớisựhấpphụkhíbằngcáchđonồngđộethylen,nồngđộCO2trongthờigianbảoquảnsẽđán hg iá đ ư ợ ct ỷlệnàochokếtquảtốtnhất. ĐC(đốichứng):KhôngsửdụngchếphẩmVT4CT1:VT4
Ag10%CT3:THT,KMnO4,Zeolit-
Ag15% b) ĐánhgiáảnhhưởngcủaBộtAl2O3tớikhảnănghấpphụethylencủacàchua ĐC:khôngsửdụngVT4
CT1:70%THT+20%KMnO4+10%Zeolit-Ag
AgCT3:75%Bộtnhômoxit+15%KMnO4+10%Zeolit-Ag c) ĐánhgiáảnhhưởngcủaCu2Otớikhảnănghấpphụethylencủaquảxoài ĐC:khôngsửdụngchếphẩmVT4
CT1:70%Bộtnhômoxit+20%KMnO4+10%Zeolit-Ag
Ag+2%Cu2OCT3:70%Bộtnhômoxit+17%KMnO4+10%Zeolit-
DochếphẩmVT4ởdạngbộtnênvậtliệubaogóikhôngnhữngđảmbảođộthấmkhítốtc ònđảmbảođộkín,khảnănghútẩm.Thựctếcónhiềulọaigiấydễhútẩ mnhưgiấyb á o , giấybả n,giấyximăng, tuynhiênkhảnănghútkhícủasảnphẩmbêntronggiấysẽbịhạnchế.Vìvậych úngtôilựachọncácloạigiấykếthợpđượccả3yếutốtrên.Đểđánhgiávậtliệubaobìtốtchúng tôiđãđokhảnănghấpphụethylentheo10TCN299-97.
CT2:giấybánPE+giấythấmkhí1mm e) Thửnghiệmcácdạngchếphẩmkhácnhauđểtăngkhảnăngứngdụngvàothựct ế
Chếphẩmởdạngbộtyêucầuvềđộkíncũngnhưbaobìcaonênđềtàiđãchếtạochếphẩmởd ạngviêntrêncơsởthànhphầncơbảnnhưởdạngbột.Chếphẩmdạngviêncầnđộkếtdínhcaovìvậ ytrongthànhphầncóthêmPolystyrenvớitỷlệthíchhợp.Thửnghiệm2dạngchếphẩmnàytrênđ ậuđỗvàđokhảnănghấpphụkhícủachếphẩm f) BốtríthínghiệmđánhgiáảnhhưởngcủanồngđộchếphẩmVT4đếnthờigianbảoquảnqu ảvàrau
BốtrícáccôngthứcvớicácnồngđộchếphẩmVT4khácnhau,theodõiđánhg i á sựthay đổicácchỉtiêulýhoátrongquátrìnhbảoquản.Thínghiệmbốtríởđiềukiệnthườnghoặcđiềuk i ệnlạnhtuỳt h e o t ừngloại.Ngoàicácc h ỉt i ê u vậtlý,kếthợptheodõicácchỉtiêuhóasinhcủaq uảtrongquátrìnhbảoquản. g)Bốtríthínghiệmđánhgiáảnhhưởngcủanhiệtđộkếthợpvớisửdụngchếphẩmtrongmôitrư ờngbảoquảnquảvải
Thínghiệmđượcbốtrínhưsau: ĐC1:khôngsửdụngchếphẩmVT4ởnhiệtđộphòng ĐC2:khôngsửdụngchếphẩmVT4ởnhiệtđộlạnh
Thínghiệmđượclặplại3lần,vàtheodõicácchỉtiêu hóalýtrongthờigianbảoquản. h) Bốtríthínghiệmđánhgiásựthayđổicủađộẩmtrong quátrìnhbảoquản Đểđánhg i á sựthayđổiđộẩ mtrongbìnhthínghiệm,c á c bìnhthínghiệmđượcgắnvớit hiếtbịGeminiDataLoggers.Máylà m việcl iê n tụct ro ng thờigianthínghiệm,kếtquảđược chươngtrìnhhóa,ghinhậnvàxửlýquamạngmáytínhkếtnối.Thínghiệmđượcthựchiệnvớiqu ảchuối. i) Bốtríthínghiệmđánhgiáảnhhưởngcủathànhphầnkhíethylentớithờigianbảoquản Đểkiểmtraảnhhưởngcủathànhphầnkhítrongmôitrườngbảoquản,chúngtôithựchiện b ơmkhớethylenchuẩnvớinồngđộ1 , 10,100à l / l v à o cácbìnhkíntrongđócóbốtríquảxoài.Thínghiệmđươcthựchiệnởnhiệtđộphòng22–
4.2.2.3 PhươngphápthửnghiệmbảoquảnvảithiềuBắcGiangbằngchếphẩmhấpphụet hylenởquymô1tấn Đốitượngbảoquản:VảiLụcNgạnKhốilượ ngbảoquản:1100kg
Trongđó:Côngthứcthínghiệm:1000kgCôngthứ cđốichứng:100kg
VảiđưavàobảoquảnlàvảiLụcNgạnthuhoạchđúngvụ.Saukhilựachọnloạibỏnhữngq uảthốihỏng,r ửavàđểkhô.L ấymẫungẫunhiên,mỗicây20kg.Xếpđốngrồibuộc2kg/ túm.SauđóbốtrívảivàocáctúiPE,đựngtrongthùngxốpc ó nắp.
Côngthứcthínghiệm:c ó đặtc á c góichếphẩmVT4á p dụngcho1,5g/kgnguyênliệu CôngthứcĐốichứng:KhôngđặtcácgóiVT4
Saukhiđóngthùngxốpcácthùngđượcđặttrongkholạnh,nhiệtđộđượchạt ừtừtrongv òng8giờxuốngnhiệtđộ8 0 C.
Trongquát r ì n h bảoquản,k i ểmtranhiệtđộk ho lạnhthườngxuyên.Saukhikếtthúcth ínghiệmchúngtôitiếnhànhphântíchcácchỉtiêuhoálý
4.2.2.4 Phươngphápxácđịnhv à phântíchcác chỉtiêucơlý, sinhlý,sinhhoáv à cảmq uancủarauquả
-Tươngtựnhưcủachếphẩmcomposit(bổsung2phươngpháp) a) Xácđịnhhàmẩ mcủamôitrườngt i ểukhíh ậutrongbình:XácđịnhbằngmáyGemini DataLoggers(Anh).Kếtquảđượcchươngtrìnhhoátrongs u ốtquátrìnhbảoquảnghinhậnvàx ửlýquamạngmáytínhgắnkết b) Phươngphápxácđịnhnồngđộethylen:Đohàmlượngethylenbằngphươngpháps ắckýkhí(GC)–3800(Mỹ).Kếtquảtínhhàmlượngethylentheocôngthức
4.2.3.1 Phươngphápnghiêncứuxâydựngquytrìnhtạochếphẩm a) Xácđịnhảnhhưởngcủalượngnướccắmđếnchấtlượngvàtuổithọcắmlọcủahoatrướ cvàsaubảoquảnlạnh:Hoađượccắmvàonướcởcácmựckhácnhau:3,0;4,0;5,0;6,0;7,0cm.C ứsau24hđánhgiámộtlầnchỉtiêuvềlávàngvàxácđịnhtuổithọcắmlọ.Bốtríthínghiệm10bôn ghoa/côngthức,nhắclại3lần. b) XácđịnhảnhhưởngcủapHdungdịchc ắmhoađếnchấtlượnghoa:Hoađượccắmvào cácdungdịchcópHkhácnhau:2,0;2,5;3;3,5;4,0;4,5;5,0;5,5;6,0và6,5.Cứsau24giờmộtlần, theodõichỉtiêuvềlávàngvàxácđịnhtuổithọcắmlọ.Bốtríthínghiệm10bônghoa/ côngthức,nhắclại3lần. c) Xácđịnhảnhhưởngcủanhiệtđộbảoquảnhoađếncườngđộhôhấp,chấtlượngvàtuổit họhoa:Hoathuháicùngđiềuki ệnđượcbảoquảnkhôở c á c nhiệtđộ:0;2;6;8;10;15và25 o C.Sa uđóxácđịnhcườngđộhôhấpvàđánhgiácácchỉt i ê u vềchấtlượngvàtuổithọcủahoahàngng ày.Thínghiệmđượclặplại3lần. d) Xácđịnhảnhhưởngcủađộẩmtrongkhobảoquảnđếnchấtlượngvàtuổithọhoa:Hoa thuhoạchcùngmộtđiềukiệnđượcbảoquảnkhôở2 o Cvớicácđộẩm60,70,80,90%.S a u đóđá nhg i á c á c chỉtiêuvềchấtlượngvàtuổithọcủahoahàngngày.Thínghiệmđượclặplại3lần. e) Xácđịnhảnhhưởngcủanhiệtđộlàmlạnhhoatrướckhibaogóiđếnchấtlượnghoas aubảoquản:Hoathuhoạchđượclàmlạnhởcácchếđộlạnhkhácnhau:khônglàmlạnh,2,5,10v à15 o Ctrongkhoảng5 giờ.BaogóibằngmàngLDPE0,01mm,10bông/ bó.Đóngtronghộpcartoncóđụclỗthônggióở2đáyhộp,lỗcóđườngkính6cm,đóng10bó/ thùng.Bảoquảnkhôở 2 o C,độẩ m70-
80%.Đánhg i á cácchỉtiêuvềchấtlượngvàtuổithọcủahoahàngngày.Thínghiệmđượclặp l ại3lần. f) Xácđịnhảnhhưởngcủanồngđộdungdịchđườngtrướcbảoquảnđếnchấtlượngvàtu ổithọcủahoa:Hoathuhoạchđượccắm24giờtrongc á c dungd ịchđườngSacaroza:0,5;1,0;2, 0;3,0;4,0;5,0;6,0;7,0và8,0%ở25 o C.Bảoquảnkhôở 20 o C,độẩ m80-
90%.Cácchỉtiêu vềchấtlượngvàtuổithọcủaho a đượcđánhgiáhàngngày.Thínghiệmđượ clặplại3lần. g) XácđịnhảnhhưởngcủaAl2(SO4)3,MnSO4,AgNO3,GA3,8 Hydroxylquinolinev àTrixtonX100đếnt h ờig i a n bảoquảnv à tuổit h ọcủahoa:Hoathuhoạchđượccắm24giờở
25 0 Ctrongdungdịchsaccaroza6%đốihoahồngv à 1 % đốihoac ú c , pH=4vớinồngđ ộ c á c chấtkhácnhau.L à m l ạnhsơbộ5 0 CtrướckhibóvàbaogóibằngmàngLDPE0,01mm.Đóngh ộpcactonnhưởtrênvàbảoquảnkhôở20 0 C,độẩmkhôngkhíRH-
90%.Cácchỉtiêuvềchấtlượngv à tuổithọcủachúngđượcđánhgiáhàngngày.Thínghiệmđư ợclặplại3lần.
- Xácđịnhh i ệuquảcủachếphẩmBQH,BQCtrongb ảoquảnh o a hồngv à hoacúc:Sử dụngchếphẩmBQHđểbảoquảnhoahồngvàBQCđểbảoquảnhoac ú c Cảhaichếphẩmđều chứacácthànhphầngiốngnhaulàSaccaroza,AgNO3,8Hydroxylquinoline,Al2(SO4)3,Mn
SO4,T w e e n 20vàGA3nhưngc ó nồngđộkhácnhau.Nồngđộcủahaichếphẩmđãđượcxácđịn hsaukhitiếnhànhcácnghiêncứubằngcácphươngphápnêuởcácmụctrên.Hoađượccắmtron gdungdịchbảoquảntrong5 g i ờở 25 o C.S a u đól à m lạnht ới5 o C.B ó 10bông/ bó,b a o góibằngmàngLDPE0,01mm,đónghộpcacton.Bảoquảnkhôở2 0 Cđộẩm80- 90%.Cá c chỉtiêu vềchấtlượngvàtuổithọcủachúngđượcđánhgiáhàngngày.Thínghiệmđư ợclặpl ại3lần.
L H đểc ắml ọhưởngthụhoahồngvàC L C đểc ắml ọhưởngthụh o a c ú c Cảhaichếphẩmđề uchứacácthànhphầngiốngnhaulàSaccaroza,GA3và8Hydroxylquinolinenhưngc ó nồng độkhácnhau.Nồngđộcủah a i chếphẩmđãđượcxácđịnhsaukhitiếnhànhcácnghiêncứubằn gc á c phươngphápnêuở cácmụctrên.H o a saukhibảoquảnlạnhđược(mụca)đượccắm24h trongdungdịch
CLHvàCLCở20 0 C.Đánhgiácácchỉtiêuvềchấtlượngvàtuổithọcủahoa.Thínghiệmđượclặ plại3lần. b) Phươngphápxácđịnhcácchỉtiêuchấtlượnghoa
- Phươngphápxácđịnhcườngđộhôhấpbằngphươngpháphở:Đặthoavàobìnhchứah oa.KhôngkhíđượclàmsạchCO2vàtạpchấttrướckhiđivàobìnhchứahoa.LượngCO2dohoahô hấpthảirat á c dụngvớiBa(OH)2.ChuẩnđộnồngđộBa(OH)2bằngHCltrướcvàsauchukỳhôh ấpsẽtínhđượclượngCO2.Tínhkếtquảcườngđộhôhấp(mgCO2/ kg.h)theophươngtrìnhđãcó.
- Phươngphápxácđịnhtuổithọcắmlọcủahoasaukhibảoquản:Hoađượcc ắmtron gcáclọvớiđộngậpnướccủacáccànhhoalà5cm.Điềukiệnphòngbảoquảnc ầnthoáng,nhiệtđ ộ25 o C,độẩ m60-
80%,ánhsánglà4200lux.Tuổithọhoađượctínhtừlúcbắtđầucắmđếnkhicónhữngdấuhiệuh oặcđồngthờicómộtsốdấuhiệusau:Hoabắtđầuhéo,hoarụngcánh,hoabịphaihoặcbiếnmầu, cánhhoabắtđầubịtóplại.
- Chấtlượngc ảmquanhoa:Đượcx á c địnhdựav à o trạngtháihoanởh a y khôngnở. Nếuhoanởthìxếploạitheotừnglớpcánhbịhéo.Cụthểđượcphânloạitheocáctiêuchuẩntro ngbảngdướiđây.
Mộttrongnhữngnguyênnhânchínhgâythốihỏngquảlàdosựtácđộngcủahệvisinhvậtt rongđóchủyếulàdonấmmốcgâynên.Chúngtôiđãtiếnhànhphânl ậpc á c chủngn ấmmốcg â y thốihỏngqủat ừc á c mẫuxoài,thanhlong,cam,vảithiềuđượcthuthậptừcáctỉnhHưngY ên,HàGiang,HàNội,NinhThuận.Kếtquảđượctrìnhbàyởbảng2.
Bảng2.Mứcđộnhiễmcácloàinấmmốcgâythốihỏngquảxoàithanhlo ng,cam,vảithiều
A.niger Penicillium Rhizopus Fusarium Mucor Botritis cinerea A.flavus
Kếtquảbảng2chothấyhầuhếtcácmẫuxoài,thanhlong,cam,vảithiềuphânt í c h đãbịn hiễmcácloàinấmmốc.Trong100mẫuxoàiphântíchmứcđộnhiễmA.n i g e r l à50%,Fusar iuml à20%,c ò n c á c chủngn ấmP en ic i ll i um , Rhizopus,M u c o r l à10%.Trong100mẫu thanhlongp h â n t í c h mứcđộnhiễmA.nigerl àc a o nhất,c h i ếm50%,mứcđộnhiễmA fla vusl à 40%,Penicilliuml à 10%.Trong100mẫuc a m phântíchmứcđộnhiễmA.nigerlàcaon hất30%,mứcđộnhiễmRhizopus,Mucor,Pennicilliumđềulà20%.Trong100mẫuvảiphântíc h,mứcđộnhiễmA n i g e r là40%,Mucorlà30%,Penicillium,Botritiscinerea,Fusariu mđềulà10%.
Chúngtôiđãtiếnhànhphânl ậpcácloàinấmmenCandidasppt ừcácmẫuquảcàchua,lê, cam.Kếtquảđượcthểhiệnởbảng3.
Kếtquảở bảng3 chothấytổngsốchủngnấmmenCandidaspp.phân lập đượclà67chủngtrêntổngsố300mẫuquả,chiếmtỉlệ22,3%.Trongđó,tỉlệchủng nấmmenCandidaspp.phânlậptrênlêđạtcaonhấtchiếm24,4%,tiếpđếnlàtrêncàchuachiế m22,7%,ởtrêncamlà19,5%.
Bảng4:Khảnăngứcchếnấmmốc A.nigergây thốihỏngquảthanhlongcủacácchủ ngnấmmen Candidaspp
Sốchủng Candi daspp.phân lập được
Kếtquảbảng4chothấycácchủngCandidaspp.phân lậpđượccókhảnăngứ cchếnấ mA.nigergâythốihỏngthanhlongởcácmứcđộkhácnhau.Có56chủngCandidaspp.c ó khả năngứ cchếnấmA n i g e r ởmứcđộyếu,chỉứcchếnấm
A.nigersau3 ngàynuôic ấys au đón ấmA.nigerlạimọclại.C ó 9 chủngCandidaspp.có khản ăngứcchếnấmA.nigerởmứcđộtrungbình,chỉứcchếnấmA.nigersau9ngàynuôic ấy,sa uđónấmA.nigerlạimọclại.Có2chủngCandidaspp.có khảnăngứcchếnấmA.nigerhoànto àn,sau7-
10ngàynấmA.nigervẫnkhôngmọcl ại.Từkếtquảnày,chúngtôiđãtuyểnchọn2chủngCandi daspp.có khảnăngứcchếmạnhnấmA.nigergâythốihỏngthanhlongđểphụcvụchonhữngn ghiêncứut i ếptheo.HaichủngnàyđượcđặttênlàCandidaspp.Đ N15,Candidaspp.LM5
Hình2:Nấmmốc A.nigerb ịứcchếhoàntoànbởinấmmen Candidaspp Địnhloạichủngnấmmen Candidaspp.Đ N15 ĐặcđiểmhìnhtháicủachủngCandida spp ĐN15
Khuẩnlạchìnhtròn,màut r ắnghơivàng.T ếbàohìnhcầu,liênkếtvớinhauthànhcụm.
Trìnht ựđoạngenmãhóarRNAITSvà2,5scủachủngCandidaspp.ĐN15đãđượcxácđị nhthôngc ảhaichiều.T r ì n h t ựnàyđượcsosánhvớitrìnhtựg e n rRNAITSvà2,5Scủacácch ủngCandidasakecósẵntrongNgânhàngdữliệugenQuốctế.Sửdụngchươngtrìnhfastađểtì m kiếmcáctrìnhtựtươngđồngđãđượcc á c tácgiảkháccôngbốvàsosánhvớitrìnhtựthunhậ nđược.
KếtquảtrìnhtựmộtđoạngenmãhóarRNAITSvà2,5scủachủngCandidaspp.ĐN15có99,00%nucleotittươngđồngvớitrìnhtựgenrRNAITSvà2,5scủachủngCandidasakeđăng trênngânhànggenQuốctế.
IDCsVn_ITS PRELIMINARY;DNA;7 0 8 BP.
TCCTGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGACCCTGCGGAAGGAT CATTAAAGTTTGCTTAATTGCATTACACATGTTTTTTTAGAGAACTTGCTTGCAAGAACACTAAT AATTTACTTAGTCAACAAATAAAAATATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATC GATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATATGAATTGCAGATTTTCGTGAATCTTCGAATC TTTGAACGCACATTGCGCCCTGTGGTATTCCACAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCTCCCT CAAACCTCTGGTTTGGCGTTGAGTGATACTCGGTTTACTTGAAAAACATGAAAAGCATAACTAT TAGGTTTTACCAACTCGTTATACTAATCTACAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTAACCGCT GAACTTAAGCATATCAATTAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGGCTCAGTAACGGCGA GTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGCGTAAGCCGAGTTGTAATTTGAAGATGGCTAC TTTGGTAATGGCTCTTGTCTATGTTCCTTGGAACAGGACGTCACAGAGGGTGAGAATCCCGTGC GATGAGATGTCCATTACCGTGTAAAGTGCTTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCT A
Kếtquảđịnhtênbằngphươngphápsinhhọcphântửnàyhoàntoànphùhợpvớikếtquảph ânloạidựatrêncácđặcđiểmvềhìnhtháisinhlý,sinhhóanêutrên.Saukhikếthợpcảhaiphương phápphânloạitheokhóaphânloạicủaBergeyvàx á c địnhtrìnhtựđoạngenmãhóarRNAITS và2,5SchúngtôikhẳngđịnhrằngchủngCandida.sppĐN15chínhxácthuộcloàiCandidasak e.
Vìvậychúngtôicó thểkếtluậnrằngchủngCandidasakeĐN15đốikhángc ó khảnăn gứcchếnấmmốcgâythốihỏngquảthanhlongnhưAspergillusniger
Vớimụcđíchnângcaokhảnăngứcchếnấmmốcgâythốihỏngthanhlongcủac á c chủ ngn ấmmenC.saketựnhiên,chúngtôiđãsửdụngkỹthuậtđộtbiếnbằngtiaUV,chọnlọcc á c th ểđộtbiếnbằngviệcsửdụngchấtkhángtraođổi2-deoxy- glucose(DG)theophươngphápcủaBok,S.H.vàcộngsự[27]vàsửdụngkhángsinhStreptomy cinđểchọnlọcc á c độtbiếnthểt h e o kỹthuậtribosomt h e o phươngphápcủaKozoOchi[53].Cácthểđộtb i ếnthuđ ư ợ ctừchủngC.saketựnhiênđượcsànglọcdựavàođườngkínhứcchếnấ mmốcgâythốihỏngquảthanhlong.Kếtquảtuyểnchọnc á c thểđộtb i ếnc ó khảnăngứ cchến ấmmốcgâythốihỏngquảthanhlongđượcthểhiệnởbảng5.
Sốđộtbiếnthểcóđư ờngkínhứcchếnấm mốc>5cm ĐộtbiếnbằngtiaUV
Kếtquảởbảng6chothấy,đãthuđược75độtbiếnthểkhixửlýchủngC.saketựnhiênbằn gtiaUVvàkỹthuậtribosom.Từ75thểđộtbiếnthuđược,chúngtôiđãchọnrađược4thểđộtbiến cóđườngkínhứcchếnấmmốcA.niger,P.digitatum>5cm. Đểtiếnhànhsửdụngc á c chủngnấmmenđộtbiếnnàyl à m chếphẩmbảoquảnquảcầnti ếnhànhthửnghiệmđộantoànsinhhọccủacácchủngđộtbiếnnày.Vìthờigianvàkinhphíeoh ẹpnênchúngtôikhôngtiếnhànhthửnghiệmtínhant o à n củacácchủngđộtbiếnnàyvàcũngk hôngsửdụngcácchủngđộtbiếnnàylàmchếphẩmnấmmenđốikhángchob ảoquảnquả.Nhữ ngkếtquảvềviệctạoc á c chủngđộtbiếnc ó khảnăngđốikhángvớinhiềuloàinấmmốcg â y thố ihỏngquảt r ê n đâylàcơsởkhoahọccho việchoànthiệncôngnghệsảnxuấtchếphẩmnấmm enđốikhángchobảoquảnthanhlongtrongthờigiantới.
2.4 Nghiêncứucôngnghệnuôicấychìmsụckhínấmmenchủng Candidasake ĐN15đốikhángquymô1000l/mẻ
Chúngtôiđãtiếnhànhnuôic ấychủngCandidasakeĐN15đốikhángtrên3 môitrường khácnhau:môitrườngmalt,môitrườngr ỉđườngvàmôitrườngrỉđườngcóbổsungcácmuốik hoángvilượng.Kếtquảđượctrìnhbàyởbảng6dướiđây.
Kếtquảở bảng6 chot h ấyt r ê n môitrườngmaltmậtđột ếb à oC sakeđạtđượcc a o n hấtl à 1,1.10 9CFU/ ml.T r ê n môitrườngr ỉđườngc ó bổsungmuốikhoángmậtđộtếbàoC.sakeĐN15làkhácao, đạt5,5.10 8CFU/ ml.Từkếtquảnàychúngtôinhậnthấymôitrườngnướcchiếtmaltlàmôitrườngthíchhợpnhấtc hosựpháttriểncủaC.sakeĐN15.Tuynhiên,thànhphầncủamôitrườngrỉđườngcóbổsungcá cmuốikhoángcógiárẻhơnnhiềusovớithànhphầncủamôitrườngmalt.Vìvậy,chúngtôiđãlự achọnmôitrườngrỉđườngcóbổsungcácmuốikh oá ng đểt i ếnhànhnhânnuôichủngC.sak eĐN15ởquimôlớn.
Chúngt ô i đãt i ếnhànhnuôic ấychủngCandidasakeĐN15đốikhángtrênmôitrườngr ỉđườngc ó bổsungc á c muốikhoángvilượngở c á c nhiệtđộkhácnhau.Kếtquảđượctrìnhbà yởbảng7dướiđây.
Bảng7:Mậtđộtếbàocủachủngnấmmen C.sakeĐN15khinuôicấyở cácnhiệtđộkhácnhau
STT Nhiệtđộ( 0 C) Mậtđộtếbàonấmmen C.sake Đ N15(CFU/ml)
Kếtquảở bảng7 chothấymậtđột ếbàoCandidasakeĐN15t ạothànhđạtc a o nhấtlà5,3 10 8CFU/ mlkhinuôicấyởnhiệtđộ30 0 Ctrênmôitrườngrỉđườngc ó bổsungmuốikhoáng.Ngoài30 0 C mậtđộtếbàoC.sakeĐN15giảmdần.Kếtquản à y chothấynhiệtđộthíchhợpđểnuôicấyĐN15C.sakelà30 o C.
Bảng8:Mậtđộtếbàocủachủng CandidasakeĐ N15khinuôicấyởcác pHkhácnhau
Kếtquảởbảng8chothấymậtđộtếbàoC.sakeĐN15đạtcaonhấtlà5,7.10 8CFU/ mltrênmôitrườngrỉđườngcóbổsungmuốikhoángcópH=6,5ở30 o C.Khip H caohơnhoặcth ấphơn6,5,thìmậtđộtếbàoC.sakeĐN15giảmdần.Điềunàyc h o t h ấymậtđột ếbàoC sake ĐN15đạtc a o nhấtở 30 0 Ctrongmôitrườngr ỉđườngcóbổsungcác muốikhoángcópHlà6,5 KếtquảcủachúngtôicũngphùhợpvớikếtquảcủaVinasAlmenarvàcộngsựkhicáct á c giản àycôngb ốpHt h í c h hợpchosựpháttriểncủaCandidasakelà6,5[73].
MậtđộtếbàoC.sak eĐ N15(CFU/ml) Độoxyh ò a t a n (
Mậtđột ếbàoC.sa keĐN15(CFU/ ml)
Kếtquảbảng9 chot h ấykhiđiềukhiểnđộoxyhòatantrongsuốtquátrìnhnuôic ấychìms ụckhíl à 100%,mậtđột ếb à oC.sakeĐN15c a o nhấtthuđượcl à 5,5.10 8CFU/ mltạithờiđiểm48h.Khiđộoxyhòatantácđộngtrongquátrìnhnuôi cấy,giảmtừgiờthứ12xuốngcòn90%ởthờigiancònlạicủaquátrìnhlênmen,mậtđột ếb à o
C.sakeĐN15giảmxuốngcòn2,2.10 8CFU/ mlt ạithờiđiểm48h.Đ iềunàychothấyC.sakeĐN15làchủnghiếukhíc a o vàcầnoxytrongquá trìnhl ê n mentạosinhkhối.KếtquảnàycũngchothấythờigiannhânnuôiCandidasakeởhệt hốngnuôicấychìmsụckhíthíchhợpnhấtlà48giờ.AbadiasM.vàcộngsựcôngbốkhinuôicấ ychìmsụckhíởvậntốc400vòng/phút,độthôngkhílà150l/ giờ,vớimôitrườngr ỉđ ư ờ ngc ó ure,mậtđộCandidasakeđạtc ựcđạikhoảng8x10 8C F U / m lsau30giờ[22]
Mậtđộtếbào CandidasakeĐ N15dịchnổisaulitâm(CFU/ ml)
Trongkhuônkhổcủađềtàichúngtôiđãtiếnhành3đợtsảnxuấtthửnghiệmđểkhảosátc ácthôngsốvềnuôicấychìmsụckhívàthuhồisinhkhốinấmmentừchủngCandidasakeĐN1 5trênhệthốngnuôicấychìmsụckhíquimô1000l/ mẻ.Kếtquảchúngtôiđãthuđược240kgsinhkhốiCandidasakeĐN15
Bảng11.Chỉtiêuchấtlượngcủachếphẩm CandidasakeĐ N15dùngtrong bảoquảnthanhlong
Mậtđộcácvisinhvậtgâybệnh(salmon ella,shigela,E.coli) 0 0
Chúngtôiđãnghiêncứucáccôngthứctạomàngbaoănđượckhácnhaudùngđểbảoquả nthanhlong.Màngbaoănđượccóthànhphầnlà:CMC,wheyprotein,g l y c e r o l , axitlac tic,dầuăn,nướcionhoá,lòngtrắngtrứnggàphốitrộntheocáctỉl ệkhácnhauđượccáccôngth ứctạomàngbaokhácnhau.Từcáccôngthứcmàngb a o ănđượckhảosát,chúngtôiđãchọnđư ợc3côngthứcmàngbaoCT25,CT26v à CT27đểthửnghiệmứngdụngchobảoquảnthanhlo ng.
Saukhitìmđượccôngthứctạomàngbao,chúngtôitiếnhànhbảoquảnthanhlongbằngc ác cô ngthứctạomàngb a o n à y kếthợpvớichếphẩmn ấmmenC.sakeđốikhángnhằml à m t ănghi ệuquảbảoquản.T h í nghiệmđ ư ợ ctiếnhànhtrêngiốngthanhlongBìnhThuậntheophương phápmiêutảởphần4.1.9.SauđókiểmtrakhảnăngsốngsótcủachủngC.sakeĐN15trêncáccô ngthứcmàngbaotạic á c thờiđiểmbảoquảnkhácnhau.Kếtquảđượctrìnhbàyởbảng13.
Bảng13.Khảnăngsốngsótcủanấmmen C.sakeĐN15trêncáccôngt hứcmàngbaokhácnhau
Côngthứcmàngbao Mậtđộtếbàonấmmen C.sakeĐ N15(CFU/ml)
Kếtquảởbảng13chothấy,khảnăngsốngsótcủaC.sakeĐN15ởtấtcảcáccôngthứcgiảmdầnk hithờigianbảoquảntăng.Ởmàngbaocôngthức27,mậtđộtếbàocủaC.sakeĐN15sau10ng ày,20ngày,30ngàybảoquảnlàcaonhất.CácthànhphầncótrongmàngbaoCT27đềukhông ảnhhưởngđếnkhảnăngpháttriểncũngnhưc á c tínhchấttựnhiêncủachủngC s a k e ĐN15.
Từkếtquảt r ê n chúngt ô i đãchọncôngthức2 7 gọit ắtlàCT27đểsảnxuấtmàngbaoă nđượcc hobảoquảnthanhlong.
CMC(5g),Wheyprotein(3g),glycerol(15g),axitlactic(5ml),dầuăn(4g),lòngtrắn gtrứnggà(19g),nướcionhoá(550ml)
Màusắc:Trắngngà;pH:6 ± 0,2;Độnhớt:198± 15cp;T ỷtrọng:1,09(g/ mL);Hàmlượngchấtkhô:21± 1,0(%);Độhoàt a n t r o n g nước:100%;Mùi:thơmnhẹcủasữ a.
3 Kếtquảnghiêncứucôngn g h ệsảnx u ấtchếphẩm Rhodotorulaminutađố ikhángđểb ảoquảnquảxoài
Sốchủng Rhodoto rulaspp.phân lậpđ ược
Kếtquảởbảng14chothấytổngsốchủngnấmmenRhodotorulaspp.phânl ậpđượclà 121chủngtrêntổngsố300mẫuquả,chiếmtỉlệ40,3%.Trongđó,tỉlệchủngRhodotorulaspp.p hânlậptrêntáođạtcaonhấtchiếm48,3%,tiếpđếnlàtrênl ê chiếm45,8%,trênthanhlonglà2 5,2%.
Bảng15:Khảnăngứcchếnấmmốc A.nigergây thốihỏngxoàicủanấmm e n Rhod otorulaspp.phân lậpđược
Cácchủng Rhodot orulaspp.phân lập được
Kếtquảbảng15chothấycácchủngRhodotorulaspp.phânlậpđượccókhảnăngứcchế nấmA.nigergâythốihỏngxoàiởcácmứcđộkhácnhau.Có95chủngRhodotorulaspp.c ókhả năngứ cchếnấmA.nigerởmứcđộyếu,chỉứcchếnấmA n i g e r sau3ngàynuôicấysauđónấ mA.nigerlạimọclại.Có25chủngRhodotorulaspp.cókhảnăngứcchếnấmA.nigerởmứcđột rungbình,chỉứcchếnấmA.nigersau9 ngàynuôicấy,sauđónấmA n i g e r lạimọcl ại.C ó 1 chủngRhodotorulaspp.c ókhảnăngứcchếnấmA n i g e r hoàntoàn,sau7-
10ngàynấmA n i g e r vẫnkhôngmọclại.Từkếtquảtrên,chúngtôiđãtuyểnchọnchủngRho dotorulaspp.cókhảnăngứcchếmạnhnấmA.nigergâythốihỏngxoàiđểphụcvụchonhữngn ghiêncứutiếptheo.ChủngnàyđượcđặttênlàRT7
Rhodotorula spp Địnhloạichủngnấmmen Rhodotorulaspp.RT7 ĐặcđiểmhìnhtháicủachủngRhodotorula spp RT7
Khuẩnlạccómàuhồngdacam,nhẵnvàpháttriểnnhanhsau2ngàynuôicấyt r ê n môitr ườngmalt.Tếbàohìnhcầuhoặchìnhthondài,khôngcósợinấmvàsợinấmgiả,blastoconidiaở dạngmộttếbào.
TrìnhtựđoạngenmãhóarRNAcủachủngRhodotorulaspp.RT7đãđượcxácđịnhthông cảhaichiều.TrìnhtựnàyđượcsosánhvớitrìnhtựgenrRNAITScủac á c chủngRhodotorula spp.cósẵntrongNgânhàngdữliệugenQuốctế.Sửdụngchươngt r ì n h fastađểt ì m kiếmc á c trìnhtựtươngđồngđãđ ư ợ cc á c t á c giảkháccôngbốvàsosánhvớitrìnhtựthunhậnđược.
KếtquảtrìnhtựmộtđoạngenmãhóarRNAITScủachủngRhodotorulaspp.RT7có99, 00%nucleotittươngđồngvớitrìnhtựgenrRNAITScủachủngRhodotorulaminutađăngtr ênngânhànggenQuốctế.
IDRmVn_ITS PRELIMINARY;DNA;5 9 0 BP.
TCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAATGAATTTTAGGACGTTCTTTTTAGAAGTCCGAC CATTTCATTTTCTTACACTGTGCACACACTTCTTTTTACACACACTTTTAACACATTAGTATAAGA ATGTAATAGTCTCTTAATTGAGCATAAACAAAAATAAAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTC TCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAATTGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATC ATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCACTCTTTGGTATTCCGAAGAGTATGTCTGTTTGAGTATCAT GAAACTCTCAAACCCCCTATTTAGTAATGAAATGGGCGTGGGCTTGGATTATGGTTGTCTGTCG GCGTAATTGCCGGCTCAACTGAAATACACGAGCAACCTTATTGAAATAGACGGTTTGACTTGGC GTAATAATTATTTCGCTAAGGACGTCTTCTTCAAATATAAGAGGTGCTTCTAATGCGCTTTATAG CACTTTAAGCTTTAGATCTCAAATCAGTCAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGC GGAGGAAAAGG
Kếtquảđịnhtênbằngphươngphápsinhhọcphântửnàyhoàntoànphùhợpvớikếtquảph ânloạidựatrêncácđặcđiểmvềhìnhtháisinhlý,sinhhóanêutrên.Saukhikếthợpcảhaiphương phápphânloạitheokhóaphânloạicủaBergeyv à x á c địnhtrìnhtựđoạngenmãhóarRNA18S ,chúngtôikhẳngđịnhrằngchủngRhodotorulaspp.RT7chínhxáclàloàiRhodotorulaminuta
3.3 Kếtquảsửdụngkỹthuậtđộtbiếnvàk ỹt h u ậtribosomđểnângcaokhảnăngứcchến ấmmốcgâythốihỏngquảxoàicủachủngnấmmen Rhodotorulaminuta
Vớimụcđíchnângcaokhảnăngứcchếcácloàinấmmốcgâythốihỏngxoàicủacácchủn gRhodotorulaminutatựnhiên,chúngtôiđãđộtbiếncácchủngRhodotorulaminutatựnhiênb ằngtiaUVvàchọnlọccácthểđộtbiếnbằngviệcsửdụngchấtkhángtraođổi2-deoxy- glucose(DG)theo phươngphápcủaBokS.H v à cộngsự[27]vàđộtbiếncácchủngRhodoto rulaminutatựnhiênbằngtiaUVđể kíchhoạtribosomrồichọnlọcc ác thểđộtbiếnbằngkhángsinhSteptomycintheo phươngph ápcủaKozoOchi[53]CácthểđộtbiếnthuđượctừchủngRhodotorulaminutatựnhiênđượcs à n g lọcdựavàokhảnăngứ cchếnấmmốcg â y thốihỏngxoài.Kếtquảtuyểnchọncácthểđộtbiế nđượcthểhiệnởbảng16.
Sốđộtbiếnthểcó đườngkínhứcc h ếnấ mmốc3cm và5cm Độtbiếnbằngti aUV 20 8 1
Kếtquảbảng16chothấy,trong69thểđộtbiếnthuđượccó4thểđộtbiếncó đườngkínhứcchếnấmmốcgâythốihỏngquảxoài>5cm. Đểtiếnhànhsửdụngc á c chủngnấmmenđộtb i ếnnàyl à m chếphẩmbảoquảnquảcần tiếnhànhthửnghiệmđộantoànsinhhọccủacácchủngđộtbiếnnày.Vìthờigianvàkinhphíeo hẹpnênchúngtôikhôngtiếnhànhthửnghiệmtínhant o à n củacácchủngđộtbiếnnàyvàcũng khôngsửdụngcácchủngđộtbiếnnàylàmchếphẩmnấmmenđốikhángchob ảoquảnquả.Nh ữngkếtquảvềviệctạoc á c chủngđộtb i ếncó khảnăngđốikhángvớinhiềuloài nấmmốcg â y thốihỏngtr ên quảt r ê n đâyl à c ơsởkhoahọcchoviệchoànthiệncôngnghệs ảnxuấtchếphẩ mnấmmenđốikhángchobảoquảnxoàitrongthờigiantới.
Chúngtôiđãt i ếnhànhnuôicấyRhodotorulaminutaRT7trên3 môitrườngkhácnhau:m ôitrườngmalt,môitrườngrỉđườngvàmôitrườngr ỉđườngcóbổsungcácmuốikhoángvilượn g.Kếtquảđượctrìnhbàytrongbảng17dướiđây.
Môitrườngrỉđườ ng+muốikhoáng Môitrườngrỉ đường
Kếtquảởbảng17chothấymậtđộtếbàoRhodotorulaminutaRT7đạtđượccaonhấttrên môitrườngmaltlà2,0.10 9CFU/ ml.Trênmôitrườngrỉđường+muốikhoángmậtđộtếbàoRhodotorulaminutaRT7làkhácao
,đạt5,1.10 8CFU/ ml.Từkếtquảnàychúngtôinhậnthấymôitrườngmaltlàmôitrườngthíchhợpnhấtchosựpháttr iểncủanấmmenRhodotorulaminutaRT7.Tuynhiên,thànhphầncủamôitrườngrỉđườngcó bổsungcácmuốikhoángcógiárẻhơnnhiềusovớithànhphầncủamôitrườngmalt.Vìvậy,chún gtôiđãlựachọnmôitrườngrỉđườngcóbổsungkhoángđểtiếnhànhnuôicấynấmmenRhodoto rulaminutaRT7trênhệthốngnuôic ấychìmsụckhíquymô100l/mẻvà1000l/mẻ.
Bảng18:Mậtđộtếbàocủachủng RhodotorulaminutaRT7 khinuôicấyở cácnhiệtđộkhácnhau
STT Nhiệtđộ( 0 C) Mậtđộtếbào Rhodotorulamin utaRT7 (CFU/ml)
Kếtquảởbảng18chothấymậtđộtếbàonấmmenRhodotorulaminutaRT7t ạothànhđạt caonhấtlà5,1.10 8CFU/ mlở30 0 C.Ngoài30 0 CmậtđộtếbàoRhodotorulaminutaRT7giảmdần.Kếtquảnàychothấynh iệtđộthíchhợpnhấtđểnuôicấynấmmenR h o d o t o r u l a minutaR T 7là30 o C.Kếtquảcủach úngt ô i cũngphùhợpvớikếtquảnghiêncứucủaPativoVerakhicáctác giảnàycôngbốnhiệt độthíchhợpchọnpháttriểncủaRhodotorulaminutalà29 0 C±1[62].
Bảng19:Mậtđộtếbàocủachủngnấmmen RhodotorulaminutaRT7 khinuôicấy ởcácmôitrườngcópHkhácnhau
Kếtquảở bảng1 9 chothấymậtđột ếbàoRhodotorulaminutaR T 7tạothànhcaonhất là5,5.10 8CFU/ mltrênmôitrườngrỉđườngcóbổsungmuốikhoángc ó pH= 6,5ở 30 o C.Khip H c a o hơnhoặ cthấphơn6,5-
6,8thìmậtđột ếbàoRhodotorulaminutaRT7giảmdần.Điềun à y c h o thấymôitrườngr ỉđườ ngc ó bổsungcácmuốikhoángcópH=6.5làthíchhợpchonhânnuôiRhodotorulaminutaR
Chúngtôiđãtiếnhànhnuôic ấyRhodotorulaminutaR T 7trênmôitrườngrỉđườngvàmô itrườngrỉđườngcóbổsungcácmuốikhoángvilượng,pH=6,5,nhiệtđộ30 0 C,vànghiêncứuả nhhưởngcủađộoxyhòatantrongquátrìnhnuôicấymậtđột ếbàocủachủngRhodotorulaminu taRT7.Kếtquảđượctrìnhb à y trongbảng20dướiđây.
Bảng20:Ảnhhưởngcủađộoxyhòatanvàthờigiannhânnuôiđếnmật độtếbàocủachủng Rhodotorulaminuta RT7
Thínghiệm1 Thínghiệm2 Độ oxyhòat an(%)
RT7(CFU/ml) Độ oxyhòat an(%)
MậtđộtếbàoR hodotorulamin utaRT7(CFU/ ml)
Kếtquảbảng20chothấykhi điềukhiểnđộoxyhòatantrongsuốtquátrìnhnuôicấychìm sụckhílà100%,mậtđộtêbàoRhodotorulaminutaRT7caonhấtlà5,3.10 8CFU/ mltạithờiđiểm48h.Khiđộoxyhòatanđượctácđộngtrongquátrìnhnuôicấy,giảmtừgiờthứ12 đếngiờthứ24củaquátrìnhnuôicấyxuốngcòn90%vàgi ảmtừgiờthứ30đếngiờthứ48xuốngc òn80%,mậtđột ếb à oRhodotorula minutaRT7thayđổikhôngđángkểsovớikhiđiềukhiểnđộoxyhòatanlà100%.Tuynhiên,k higiảmđộo x y h ò a t a n xuốngc ò n 70%saug i ờthứ48củaquátrìnhnuôicấythìmậtđộtếbào
RhodotorulaminutaRT7giảmnhiều.ĐiềunàychothấyRhodotorulaminutaRT7làchủng hiếukhícaovàcầnoxytrongquátrìnhlênment ạosinhkhối.Độoxyhòatanthíchhợpchonu ôicấyRhodotorulaminutaRT7làtừ8 0 % đến100%.PativoVeravàcộngsựcôngbốmậtđộR hodotorulaminuta đạt
1,2.10 9 CFU/ml khinhânnuôiRhodotorulaminutaởhệthốngnuôicấychìmsục khítronggiờ35giờởmôitrườngMEM[62].
3.5 Hiệuquảt h u hồisinhkhối RhodotorulaminutaRT7 bằngthiếtbịlitâml i ê n tụcqu ymô1000l/mẻ
Mậtđộtếbào Rhod otorulaminutaRT7 (CFU/ ml)dịchnổisauli tâm
Trongkhuônkhổcủađềtàichúngtôiđãtiếnhành3đợtsảnxuấtthửnghiệmđểkhảosátc ácthôngsốvềnuôicấychìmsụckhívàthuhồisinhkhốinấmmentừchủngRhodotorulaminut aRT7trênh ệthốngnuôic ấychìmsụck h í q u i mô1000l/ mẻ Kếtquảchúngt ô i đ ãthuđược216kgsinhkhốiRhodotorulaminutaRT7.
HỗndịchnấmmenRhodotorulaminutaRT7thuđượcsaunuôicấychìmsụckhíởhệthố nglênmenđượctạochếphẩmđểbảoquảnquảbằnghaicáchnhưđãn ê u ởphầnvậtliệuvàphư ơngpháp.ChỉtiêuchấtlượngcủachếphẩmRhodotorulaminutaRT7dùngtrongbảoquảnxoà iđượcthểhiệnởbảng22dướiđây:
Bảng22.Chỉtiêuchấtlượngcủachếphẩm RhodotorulaminutaRT7dùng trongbảoquảnxoài
Mậtđộcácvisinhvậtgâybệnh(Salm onella,Shigela,E.coli) 0 0
Chúngtôiđãnghiêncứucáccôngthứctạomàngbaoănđượckhácnhaudùngđểbảoquản quảxoài.Màngb a o ă nđượcc ó thànhp h ầnlà:C M C , wheyprotein,glycerol,axitlactic,d ầuăn,nướcionhoá,lòngtrắngtrứnggà,phốitrộntheocáctỉl ệkhácnhauđượccáccôngthứctạ omàngbaokhácnhau.Từcáccôngthứcmàngb a o ănđượckhảosát,chúngtôiđãchọnđược3c ôngthứcmàngbaoCT4,CT5vàC T 6 đểthửnghiệmchobảoquảnxoài.
Saukhitìmđượccôngthứctạomàngbao,chúngtôitiếnhànhbảoquảnxoàibằngcáccôn gthứctạomàngbaonàykếthợpvớichếphẩmnấmmenRhodotorulaminutaRT7đốikhángnhằ ml à m t ănghiệuquảbảoquản.T h í nghiệmđ ư ợ ctiếnhànhtrêngiốngxoàiLongAntheophư ơngphápmiêutảởphần4.1.9.SauđókiểmtrakhảnăngsốngsótcủachủngRhodotorulaminu taRT7trêncáccôngthứcmàngb a o tạicácthờiđiểmbảoquảnkhácnhau.Kếtquảđượctrìnhb àyởbảng24.
Bảng24.Khảnăngsốngsótcủanấmmen RhodotorulaminutaRT7 trênc á c côngt hứcmàngbaokhácnhauđểbảoquảnxoài
Côngthứcmàngbao Mậtđộtếbào RhodotorulaminutaRT7 (CFU/ml)
Kếtquảởbảng24chothấy,khảnăngsốngsótcủaRhodotorulaminutaRT7ởt ấtcảcácc ôngthứcgiảmdầnkhithờigianbảoquảntăng.ỞmàngbaocôngthứcCT6,mậtđột ếb à o củaR hodotorulaminutaR T 7sau10ngày,20ngày,30ngàybảoquảnlàcaonhất,cácthànhphầnc ótrongmàngbaođềukhôngảnhhưởngđếnkhảnăngpháttriểncũngnhưcáctínhchấttựnhiênc ủachủngRhodotorulaminutaRT7.TừkếtquảtrênchúngtôiđãchọncôngthứcCT6đểsảnxu ấtmàngbaoă nđượcchobảoquảnxoài.
CMC(8g),Wheyprotein(6g),glycerol(18g),axitlactic(7ml),dầuăn(4g),lòngtrắn gtrứnggà(15g),nướcionhoá(520ml)
Màusắc:Trắngngà;pH:6 ± 0,2;Độnhớt:200± 14cp;T ỷtrọng:1,12(g/ mL);Hàmlượngchấtkhô:23± 1,1(%);Độhoàt a n t r o n g nước:100%;Mùi:thơmnhẹcủasữ a.
Sốmẫu Sốchủngvikhuẩn Pseu domonasspp phânlậpđ ược
Kếtquảở bảng25chot h ấytổngsốchủngvikhuẩnPseudomonassppp h â n l ậpđượclà137chủngtrêntổngsố300mẫuquả,chiếmtỉlệ45,6%.Trongđó,tỉlệchủngPseudomonasspp phânl ậpt r ê n c a m đạtc a o nhấtchiếm65,8%,tiếpđếnl à t r ê n táochiếm37,6%,vàtrênxoài là27,3%.
Chúngtôiđãtiếnhànhxácđịnhkhảnăngứ cchếnấmmốcP.digitatumg â ythốihỏngca m,vảit h i ềucủachủngPseudomonasspp.Kếtquảđượctrìnhbàyở bảng26.
Bảng26:Khảnăngứcchếnấmmốc P.digitatumgây thốihỏngcam,vảithiềucủach ủngvikhuẩn Pseudomonas
Kếtquảbảng26chothấycácchủngPseudomonassyringaephânlậpđượcchỉc ó khảnă ngứcchếnấmP.digitatumởc ác mứcđộyếuvàtrungbình.110 chủngPseudomonassyring aec ókhảnăngứcchếnấmP.digitatum ởmứcđộyếu,chỉứ cchếnấmP.digitatumsau3ngày nuôicấysauđónấmP.digitatumlạimọclại.Còn26chủngPseudomonassyringaec ókhảnăn gứ cchếnấmP.digitatumởmứcđộtrungbình,chỉứcchếnấmP.digitatumsau5 ngàynuôicấy, sauđónấmP.digitatumlạimọclại,có1chủngPseudomonascókhảnăngứcchếnấmP.digit atumhoàntoàn,sau7-
1.T ừkếtquảnày,chúngtôiđãchọnchủngPseudomonasP1đểphụcvụchonhữngnghiêncứut iếptheo. Địnhloạichủng PseudomonasP1 phânlậpđược ĐểđịnhloạichủngPseudomonasP 1 p h â nl ậpđượcchúngtôitiếnhànhxácđịnhcácđặ cđiểmhìnhthái,đặcđiểmsinhlý,sinhhoábaogồmcácphảnứngsau:khảnăngdiđộng;khảnăn gphátquang;khảnăngtạosắctốpyocyanine;khảnăngt ạosắct ốcarotenoids;khảnăngt ạođư ờnglevantừsucrose;khảnăngthuỷphânt i n h bột,gelatin;khảnănglênmenđườngglucose,tr ehalose;khảnăngsửdụngcácaxitaminL-Vanline,-Alanine,DL-Arginine.
Bảng27.Đặcđiểmsinhlý,sinhhoácủachủng PseudomonasP1 đãphânlập Đặcđiểm Kếtquảxácđịnh
P1cócác đặcđiểmsinhlý,sinhhoágiốngvớichủngPseudomonassyringaeđượcmiêutảtro ngkhoáphânloạicủaBergey.Vìvậy,chúngtôikếtluậnchủngPseudomonasP1làPseudo monassyringae.
4.3 Kếtquảsửdụngkỹthuậtđộtbiếnvàk ỹt h u ậtribosomđểnângcaokhảnăngứcchếc ácloàinấmmốcgâythốihỏngcam,vảithiềucủachủngvikhuẩn Pseudomonassyringae
Vớimụcđíchnângcaokhảnăngứcchếcácloàinấmmốcgâythốihỏngcam,vảithiềucủ acácchủngP.SyringaeP1tựnhiên,chúngtôiđãđộtbiếncácchủngvikhuẩnP.syringaetựnhi ênbằngtiaUV,chọnlọcc á c thểđộtbiếnbằngviệcsửdụngchấtkhángtraođổi2-deoxy- glucose[theophươngphápcủaBok,S.H]
[27]v à độtb i ếncá c chủngvikhuẩnP.syringaeP1t ựnhiênbằngtiaUVđểkíchhoạtribosom r ồichọnlọcc á c thểđộtb i ếnbằngkhángs i n h SteptomycintheophươngphápcủaKozoOch i[53].CácthểđộtbiếnthuđượctừchủngvikhuẩnP.syringaetựnhiênđượcsànglọcdựavàok hảnăngứ cchếc á c l o à i nấmmốcgâythốihỏngcam,vảithiều.
Sốđộtbiếnthểcóđư ờngkínhứcchếnấm mốc>3cm và5cm ĐộtbiếnbằngtiaUV
Từ79thểđộtbiếnthuđược,chúngtôiđãchọnrađược4thểđộtbiếncókhảnăngứcchếm ạnhcácloàinấmmốcgâythốihỏngcam,vảithiều. Đểtiếnhànhsửdụngcácchủngvikhuẩnđộtbiếnnàylàmchếphẩmbảoquảnquảc ầntiến hànhthửnghiệmđộan toànsinhhọccủac ác chủngđộtb i ếnnày.Vìthờigianvàkinhphíeohẹ pnênchúngtôikhôngtiếnhànhthửnghiệmtínhantoàncủacácchủngđộtbiếnnàyvàcũngkhôn gsửdụngcácchủngđộtbiếnnàylàmchếphẩmvikhuẩnđốikhángđểbảoquảnquả.Nhữngkết quảvềviệctạocácchủngđộtbiếncókhảnăngđốikhángvớinhiềuloàinấmmốcgâythốihỏngq uảtrênđâylàc ơsởkhoahọcc h o v i ệchoànthiệncôngnghệsảnxuấtchếphẩmvikhuẩnđốikh ángchobảoquảncam,vảithiềutrongthờigiantới.
Chúngtôiđãtiếnhànhnuôic ấychủngv i khuẩnP syringaeP1t r ê n 3 môitrườngkhác nhau:môitrườngMP1,môitrườngcanhthangvàmôitrườngcanhthangbổsungmuốikhoáng. Kếtquảđượctrìnhbàytrongbảng29dướiđây.
Bảng29.Mậtđộtếbàocủachủngvikhuẩn PseudomonassyringaeP1 trêncácmôitr ườngkhácnhau
MôitrườngMP1 Môitrườngcanht hang+muốikhoá ng
Ghichú:MôitrườngMP1gồmcácthànhphầnchính:saccharoza,caon ấmmen,c á c muốikh oáng.
Kếtquảởbảng29chothấymậtđộtếbàoPseudomonassyringaeP1đạtđượcc a o nhấtt r ê n môitrườngMP1l à 2.10 9CFU/ ml.T r ê n môitrườngcanhthangbổsungmuốikhoángmậtđộtếbàoP.syringaeP1làkhácao,đ ạt1,2.10 9CFU/ ml.TừkếtquảnàychúngtôinhậnthấymôitrườngMP1là môitrườngthíchhợpnhấtchosựphátt riểncủaP.syringae.Tuynhiên,thànhphầncủamôitrườngcanh thangbổsungmuốikhoángc ógiárẻhơnnhiềusovớithànhphầncủamôitrườngMP1.Vìvậy,chúngtôiđãlựachọnmôitrườ ngcanhthangb ổsungmuốikhoángđểt i ến hànhnuôicấyP.syringaeP1trênhệthốngnuôicấychìmsụckhíquymô100l/mẻvà1000l/mẻ.
STT Nhiệtđộ( 0 C) Mậtđộtếbào Pseudomonassyr ingaeP1 (CFU/ml)
9CFU/ mlở30 0 C.ởcácnhiệtđộthấphơnhoặccaohơnnhiệtđộnày,mậtđột ếbàoPseudomonassyring aeP1đề uth ấphơn.Vìvậycó thểnóinhiệtđột h í c h hợpchonhânnuôiPseudomonassyringa eP1là30 0 C JounyJ.M.vàcộngsựchothấynhiệtđột h í c h hợpchos ựphátt r i ểncủac á c ch ủngPseudomonassyringaemàc á c tácgiảnàyphânlậplàtừ23 0C đến33 0C, nhiệtđộtốiưulà2
C.Kếtquảcủac h ú n g t ô i chothấychủngPseudomonassyringaeP1l à chủngc ó nhiệtđộp háttriểntốiưucaohơnsovớicácchủngcủaJounyJ.M.vàcộngsựphânl ập[48].
Bảng31.Mậtđộtếbàocủachủng PseudomonassyringaeP1 khinuôicấy ởmôitrườngcócácpHkhácnhau
Kếtquảởbảng31chothấymậtđộtếbàoPseudomonassyringaeP1tạothànhc a o nhấtlà 1,3.10 9CFU/ml trênmôitrườngcanhthangbổsungmuốikhoángcópH
=7 ở 30 o C.KhipHc a o h ơnhoặcthấphơn7,0thìmậtđột ếbàoP.syringaeP1giảmdần.Điềun àychothấypHthíchhợpchonhânnuôiP.syringaelà7.Kếtquả củachúngtôicũngphùhợpvớikếtquảcủaMasahiroOzakivàcộngsựkhicáctácgiảnàycôngb ốpHthíchhợpchonuôicấyP.syringaelà7[60].
MậtđộtếbàoPseudomo nassyringaeP1(CFU/ ml) Độoxy hòatan (%)