Nghiên cứu họ nhái bầu microhylidae ở khu bảo tồn thiên nhiên pù luông, tỉnh thanh hóa

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn khơng trùng lặp với khóa luận, luận văn, luận án cơng trình nghiên cứu cơng bố Ngƣời cam đoan Lê Văn Quế i LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc chân thành tới TS Đậu Quang Vinh, ngƣời tận tình dạy bảo, hƣớng dẫn tạo điều kiện thuận lợi nhất, giúp đỡ chia khó khăn suốt thời gian thực hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy, Cô Bộ môn Sinh học, Ban chủ nhiệm khoa KHTN Trƣờng Đại Học Hồng Đức - Thanh Hố Tơi xin cảm ơn giúp đỡ Phòng Quản lý sau đại học Ban lãnh đạo Trƣờng Đại Học Hồng Đức - Thanh Hố tạo điều kiện cho tơi suốt thời gian học tập làm nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo Phòng giáo dục đào tạo Thành phố Sầm Sơn; Lãnh đạo nguyên lãnh đạo hai nhà trƣờng THCS Quảng Minh THCS Bắc Sơn, thành phố Sầm Sơn; HĐSP trƣờng THCS Quảng Minh Thành phố Sầm Sơn tạo điều kiện cho tơi q trình học tập Tơi xin chân thành cảm ơn quan tâm giúp đỡ tất anh, chị em bạn lớp K12 Cao học Động vật học Cuối cùng, muốn tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến tất ngƣời thân gia đình, ln sát cánh bên tơi, quan tâm, động viên tạo điều kiện để hồn thành luận khố học! Tác giả Lê Văn Quế ii MỤC LỤC M ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học Chƣơng 1: TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Sơ lƣợc nghiên cứu lƣỡng cƣ Việt Nam 1.2 Nghiên cứu LC Thanh Hóa KBTTN Pù Luông 1.3 Sơ lƣợc nghiên cứu Họ nhái bầu Microhylidae 1.4 Điều kiện tự nhiên, xã hội Khu BTTN Pù Luông 1.4.1 Điều kiện tự nhiên 1.4.2 Điều kiện kinh tế - xã hội 10 1.4.3 Hiện trạng sử dụng đất tài nguyên rừng 11 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 13 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Khảo sát thực địa 13 2.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu phịng thí nghiệm 14 2.2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu hình thái phân loại 15 2.2.4 Phƣơng pháp phân tích di truyền 17 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 17 2.3.1 Địa điểm 17 2.3.2 Thời gian thực 18 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 3.1 Danh sách thành phần loài Họ nhái bầu Khu BTTN Pù Luông 19 3.2 Phân bố lồi thuộc Họ nhái bầu tỉnh Thanh Hóa 19 3.3 Đặc điểm hình thái, phân loại lồi thuộc Họ nhái bầu Pù Lng 20 iii 3.3.1 Sơ lƣợc giống Vietnamophryne Poyarkov, Suwannapoom, Pawangkhanant, Aksornneam, Duong, Korost, and Che, 2018 21 3.3.2 Vietnamophryne orlovi Poyarkov, Suwannapoom, Pawangkhanant, Aksornneam, Duong, Korost, and Che, 2018 - Nhái Lùn Ðông Bắc 21 3.3.3 Microhyla fissipes Boulenger, 1884 - Nhái bầu hoa 30 3.3.4 Microhyla heymonsi Vogt, 1911- Nhái bầu hây môn 32 3.3.5 Microhyla pulchra (Hallowell, 1861) - Nhái bầu vân 36 3.4 Các lồi lƣỡng cƣ có giá trị bảo tồn Khu BTTN Pù Luông 39 3.5 Áp lực đe dọa đến loại Họ nhái bầu KBTTN Pù Luông 39 3.5.1 Hoạt động làm ruộng bậc thang nƣơng rẫy 40 3.5.2 Tác động từ hoạt động du lịch 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 Phụ lục P1 iv DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng Danh sách thành phần loài Họ Nhái bầu Pù Luông 19 Bảng Phân bố loài thuộc họ Nhái bầu tỉnh Thanh Hóa 20 Bảng 3 So sánh tiêu hình thái lồi Nhái lùn Đơng bắc 23 v DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1 Bản đồ Khu BTTN Pù Lng Hinh Một số hoạt động nghiên cứu 15 Hinh 2 Hình biểu diễn kí tự thể số 16 Bảng Danh sách thành phần lồi Họ nhái bầu Pù Lng 19 Bảng Phân bố lồi thuộc họ Nhái bầu tỉnh Thanh Hóa 20 Bảng 3 So sánh tiêu hình thái lồi Nhái lùn đơng bắc 23 Hình Màu sắc sống bảo quản lồi Nhái lùn đơng bắc 26 Hình Phân bố sinh cảnh sống loài Nhái lùn đơng bắc 27 Hình 3 Cây phát sinh giống Nhái lùn Việt Nam 30 Hình Màu sắc sống loài bảo quản loài Microhyla fissipes 31 Hình Phân bố lồi Nhái bầu hoa Pù Lng 32 Hình Màu sắc sống loài bảo quản loài Microhyla heymonsi 34 Hình Phân bố lồi Nhái bầu hây mơn Pù Lng 35 Hình Màu sắc sống bảo quản loài loài Microhyla pulchra 37 Hình Phân bố lồi Nhái bầu vân Pù Lng 39 Hình 10 Một số tác động lên lƣỡng cƣ Pù Luông 41 vi CHỮ VIẾT TẮT, KÝ HIỆU IUCN Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế KBTTN Khu Bảo tồn thiên nhiên LC Lƣỡng cƣ SÐVN Sách Ðỏ Việt Nam VQG Vƣờn Quốc gia vii MỞ Đ U Lý chọn đề tài Khu BTTN Pù Lng đƣợc thành lập từ năm 1999, có diện tích phân khu bảo vệ nghiêm ngặt 17.171,53 vùng đệm 9.009,6 Ðộ cao khu bảo tồn thiên nhiên từ 60 đến 1.667 m Khu BTTN Pù Luông bao gồm hai dãy núi chạy song song theo hƣớng Tây Bắc - Ðông Nam, ngăn cách với vùng thung lũng Rừng nguyên sinh loại rừng nhiệt đới thƣờng xanh theo mùa Kết đợt khảo sát thực vật gần Pù Luông cho thấy, khu hệ thực vật đa dạng với 1.109 lồi thực vật có mạch đƣợc xác định Về khu hệ động vật, kết điều tra bƣớc đầu xác định đƣợc 84 loài thú (gồm 24 loài dơi), 162 loài chim, 55 lồi cá, 28 lồi bị sát 28 lồi ếch nhái, 158 loài bƣớm, 96 loài thân mềm cạn đƣợc ghi nhận khu đề xuất BTTN Pù Luông Các nghiên cứu trƣớc khu bảo tồn thiên nhiên Pù Luông tập trung chủ yếu vào thành phần loài; nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái; chƣa có mơ tả hình thái, di truyền loài lƣỡng cƣ thuộc Họ nhái bầu Từ lý chọn đề tài “Nghiên cứu Họ nhái bầu Microhylidae Khu BTTN Pù Lng, tỉnh Thanh Hóa” Đây vấn đề cần thiết, có ý nghĩa khoa học thực tiễn Mục tiêu nghiên cứu Xác định danh sách thành phần lồi, đặc điểm hình thái, di truyền số loài gặp thuộc Họ nhái bầu Microhylidae Khu BTTN Pù Lng, tỉnh Thanh Hóa Nội dung nghiên cứu - Khảo sát thực địa thu thập mẫu vật loài thuộc Họ nhái bầu Microhylidae; - Phân tích tiêu hình thái lồi thuộc Họ nhái bầu Microhylidae; - Định loại mẫu vật xác định thành phần loài thuộc Họ nhái bầu Microhylidae; - Xác định đặc trƣng hình thái số loài thuộc Họ nhái bầu Microhylidae Ý nghĩa khoa học Cung cấp dẫn liệu thành phần loài Nhái bầu Khu BTTN Pù Lng từ làm sở khoa học cho công tác quản lý bảo tồn khai thác bền vững nhóm động vật Chƣơng 1: TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Sơ lƣợc nghiên cứu lƣỡng cƣ Việt Nam Theo Nguyen et al (2009), nghiên cứu LC Việt Nam có lịch sử lâu đời nhƣng phát triển mạnh vào giai đoạn cuối kỷ XIX, cuối kỷ XX đặc biệt năm đầu kỷ XXI Vào nửa đầu kỷ 20 có cơng trình đáng ý Bourret R (1942) mơ tả 171 lồi phân lồi LC Đây đƣợc coi tài liệu đầy đủ LC vùng Đông Dƣơng (Việt Nam, Lào Campuchia) nửa đầu kỷ XX [42] Nửa sau kỷ XX, có nhiều cơng trình nghiên cứu tác giả nƣớc thực Số lƣợng loài LC ghi nhận Việt Nam tăng lên nhanh chóng Đáng ý đƣợc tổng kết cơng trình danh lục lồi lƣỡng cƣ, bị sát Việt Nam tác giả nhƣ Nguyễn Văn Sáng, Hồ Thu Cúc (1996), lƣỡng cƣ có 82 lồi Đây coi đợt tu chỉnh tƣơng đối đầy đủ LC nƣớc ta thời kì Thời gian có hàng loạt cơng trình nghiên cứu lƣỡng cƣ Việt Nam đƣợc liên tục công bố nhƣ [20] Năm 1997, Hoàng Xuân Quang, Lê Nguyên Ngật nghiên cứu LC khu vực Nam Đông (Thừa Thiên - Huế) [16]; Hồng Xn Quang, Ngơ Đắc Chứng, (1999) [15]; Nguyễn Văn Sáng, Hoàng Xuân Quang (2000) nhiều tác giả khác [19] Nghiên cứu tổng quan ếch nhái tác giả Hồ Thu Cúc (1999) thống kê đƣợc 100 loài Việt Nam [4] Năm 2001, Nguyễn Văn Sáng khảo sát khu hệ LCBS núi Kon Ka Kinh, tỉnh Gia Lai [18] Năm 2003, hàng loạt loài lƣỡng cƣ đƣợc công bố cho khoa học: Bain mô tả sáu loài thuộc giống Rana: Rana bacboensis R megatympanum ( Nghệ An), R banaorum R morafkai (Gia Lai), R daorum R hmongorum (Lào Cai) [34] Năm 2004, Orlov et al (2004) mơ tả lồi Philautus supercornutus khu hệ Thừa Thiên-Huế, Đà Nẵng, Quảng Nam [43]; Bain R H and Nguyen Q T (2004): mô tả loài cho giống Mycrohyla: M marmorata, M khó phân hủy, chất thải vệ sinh Nếu không quản lý, xử lý cách nguồn chất thải di vào môi trƣờng, theo khe suối nhỏ, tích tụ lâu ngày nguồn gây nhiễm độc hại tác động lên lồi lƣỡng cƣ Đặc biệt chu trình sinh sản loài lƣỡng cƣ giai đoạn trứng ấu trùng bắt buộc sống môi trƣờng nƣớc tự nhiên Nếu bị ô nhiễm đe doạ đến tồn phát triển loài 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đã xác định đƣợc Họ nhái bầu Khu BTTN Pù Lng có lồi, giống Microhyla có lồi, giống Vietnamophryne có lồi, mơ tả đặc điểm hình thái phân tích sai khác hình thái lồi Trong đó, ghi nhận vùng phân bố Vietnamophryne orlovi cho khu vực Bắc Trung Bộ Đã phân tích đặc điểm hình thái phân loại lồi thuộc Họ Nhái bầu Khu BTTN Pù Lng, có lồi định danh phƣơng pháp hình thái Microhyla fissipes, Microhyla heymonsi Microhyla pulchra có sai khác so với mô tả tác giả trƣớc đây; 01 loài Vietnamophryne orlovi đƣợc định đƣợc danh phƣơng pháp sinh học phân tử Theo Danh lục Đỏ IUCN (2021) có lồi, bậc LC (ít quan tâm) Có lồi đặc hữu Việt Nam Vietnamophryne orlovi Kiến nghị Đối với loài Vietnamophryne orlovi cần tiến hành nghiên cứu thêm về, âm sinh học so với loài giống để làm sở đề xuất giải pháp đánh giá tình trạng bảo tồn đề xuất giải pháp bảo tồn loài thời gian tới 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Văn Anh (2015), Nghiên cứu Lưỡng cư, Bò sát hai Khu bảo tồn thiên nhiên Sốp Cộp Copia, tỉnh Sơn La, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội Phạm Văn Anh, Lê Nguyên Ngật (2012), “Dẫn liệu thành phần thức ăn số loài lƣỡng cƣ Khu bảo tồn thiên nhiên Xuân Liên, tỉnh Thanh Hóa”, Báo cáo khoa học Hội thảo quốc gia lưỡng cư bò sát Việt Nam, lần thứ 2, Nxb Đại học Vinh, tr 30-37 Bộ Khoa học Công nghệ (KH&CN) Viện KH&CN Việt Nam, 2007 Sách Đỏ Việt Nam (Phần Động vật), NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Hà Nội Hồ Thu Cúc (1999), “Kết chƣơng trình hợp tác quốc tế nghiên cứu khu hệ ếch nhái (Amphibia, Anura) Việt Nam”, Tuyển tập cơng trình nghiên cứu, Nxb Nông Nghiệp, tr 154-161 Phạm Thế Cƣờng, Hoàng Vãn Chung, Nguyễn Quảng Trƣờng, Chu Thị Thảo, Nguyễn Thiên Tạo (2012), “Thành phần lồi Bị sát ếch nhái khu bảo tồn thiên nhiên Xuân Liên, tỉnh Thanh Hoá”, Hội thảo Quốc gia Lưỡng cư Bò sát Việt Nam lần thứ 2, Nxb Ðại học Vinh, tr: 112-119 Lê Trung Dũng (2015), Nghiên cứu lưỡng cư, bò sát khu bảo tồn thiên nhiên Mường Nhé, tỉnh Ðiện Biên, Luận án tiến sĩ Sinh học, Tr.111, Ðại học Sƣ phạm Hà Nội Lê Trung Dũng, Nguyễn Quảng Trƣờng, Nguyễn Lân Hùng Sơn (2018), Lƣỡng cƣ Bò sát Khu bảo tồn thiên nhiên Mƣờng Nhé, Nxb, Nông nghiệp, Hà Nội, 140tr Mai Thị Đức (2019), Nghiên cứu đặc điểm hình thái di truyền lồi Ếch Cây Đầu To Polypedates megacephalus Hallowell, 1861 khu vực đảo Mê ven biển huyện Tĩnh Gia, tỉnh Thanh Hóa, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Hồng Đức 44 Đồng Thanh Hải, Trần Ngọc Thông, Mai Văn Chuyên, Thảo A Tung (2017), “Đặc điểm khu hệ Bò sát-Ếch nhái khu bảo tồn loài hạt trần q Nam Động, tỉnh Thanh Hóa”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triền Nông thôn, tr 99-106 10 Lê Thị Hoa (2019), Nghiên cứu số đặc điểm sinh học, sinh thái học Chẫu Hylarana guentheri (Boulenger, 1882) xã Kiên Thọ, huyện Ngọc Lặc, Tỉnh Thanh Hóa, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Hồng Đức 11 Phan Thị Hoa (2015), Nghiên cứu LC, BS quần ðảo Cù Lao Chàm Bán đảo sơn Trà, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trƣờng Ðại học Sƣ phạm Hà Nội 12 Hoàng Thị Nghiệp (2012), Khu hệ LC BS vùng An Giang Ðồng Tháp, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trƣờng ÐHSP Huế – Ðại học Huế 13 Hoàng Văn Ngọc (2011), Nghiên cứu LC, BS ba tỉnh Thái Nguyên, Tuyên Quang, Hà Giang, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trƣờng ÐHSP Hà Nội 14 Hồng Xn Quang (1993), Góp phần điều tra nghiên cứu ếch nhái, Bò sát tỉnh Bắc Trung Bộ (Trừ Bò sát biển) Luận án PTS Sinh học, 207 trang, Hà Nội 15 Hồng Xn Quang, Ngơ Đắc Chứng (1999), Về khu phân bố ếch nhái, bò sát Nam Đông - Bạch Mã - Hải Vân, Tuyển tập công trình Hội thảo Đa dạng sinh học Bắc Trường Sơn (lần thứ 2), NXB Đại học Quốc gia, Hà Nội: 33 – 36 16 Hoàng Xuân Quang, Lê Nguyên Ngật (1997), “Kết điều tra bổ sung ếch nhái bò sát khu vực Nam Đông – Bạch Mã – Hải Vân”, Thông báo khoa học (các ngành khoa học tự nhiên), số 16, Vinh 1997 17 Hoàng Xuân Quang, Hoàng Ngọc Thảo, Ngơ Đắc Chứng (2012), Ếch nhái, bị sát Vườn Quốc gia Bạch Mã, Nhà xuất Nông nghiệp 45 18 Nguyễn Văn Sáng (2001), “Kết khảo sát khu hệ bò sát, ếch nhái núi Kon Ka Kinh, tỉnh Gia Lai”, Tuyển tập cơng trình nghiên cứu sinh thái học tài nguyên sinh vật, Nxb Nơng nghiệp, tr 342-348 19 Nguyễn Văn Sáng, Hồng Xn Quang (2000), Tạp chí sinh học, 22 (15), 15-23 Hà Nội 20 Nguyễn Văn Sáng, Hồ Thu Cúc (1996), Danh lục bò sát ếch nhái Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 21 Nguyễn Văn Sáng, Hồ Thu Cúc, Nguyễn Quảng Trƣờng (2005), Danh lục ếch nhái bị sát Việt Nam, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội 22 Phạm Hồng Thái (2014), Nghiên cứu lưỡng cư, bò sát khu bảo tồn thiên nhiên Bà Nà – Núi Chúa, Thành phố Đà Nẵng, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 23 Nguyễn Kim Tiến (2007), “Kết bƣớc đầu thành phần lồi lƣỡng cƣ, bị sát xã Cẩm Lƣơng-Cẩm Thủy-Thanh Hóa”, Báo cáo khoa học sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 2, Viện khoa học công nghệ Việt Nam NXB Nông nghiệp, Hà Nội, Trang 603 – 607 24 Phùng Minh Tiến (2019), Nghiên cứu đặc điểm hình thái họ Cóc mày Khu bảo tồn thiên nhiên Pù Luông, tỉnh Thanh Hóa, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Hồng Đức 25 Nguyễn Kim Tiến, Nguyễn Thị Dung, Hoàng Thị Ngân, Trƣơng Do Tự (2011), “Thành phần loài Lƣỡng cƣ, Bị sát khu BTTN Pù Hu Thanh Hóa”, Báo cáo khoa học sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 4, Viện khoa học công nghệ Việt Nam, NXB Nông nghiệp Hà Nội, tr 404-410 26 Nguyễn Kim Tiến, Hoàng Ngọc Hùng (2015), “Thành phần loài lƣỡng cƣ, bò sát Khu bảo tồn thiên Pù Hu, huyện Quan Hóa, tỉnh Thanh Hóa”, Tạp chí Khoa học, Trƣờng Đại học Hồng Đức, số 19, tr 73-80, 2014 27 Cao Tiến Trung, Lê Thị Thu, Dƣơng Thị Trang (2012), “Nghiên cứu đặc điểm dinh dƣỡng mối quan hệ với sâu hại loài Lƣỡng cƣ hệ 46 sinh thái đồng ruộng xã Triêu Dƣơng, Tĩnh Gia, Thanh Hóa, vụ đơng 2011”, Báo cáo khoa học Hội thảo quốc gia lưỡng cư bò sát Việt Nam lần thứ 2, Nxb Đại học Vinh, tr 274-278 28 Nguyễn Hà Vi (2019), Nghiên cứu thành phần lồi lưỡng cư, bị sát huyện Nga Sơn, tỉnh Thanh Hóa , Luận văn thạc sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Hồng Đức 29 Đậu Quang Vinh (2014), Nghiên cứu khu hệ lưỡng cư, bò sát Khu Bảo tồn thiên nhiên Pù Hoạt, tỉnh Nghệ An, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Sinh thái tài nguyên Sinh vật, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 30 Đậu Quang Vinh, Trịnh Thị Hồng, Lê Đình Phƣơng, Ngơ Văn Bình (2020), “Đa dạng thành phần loài lƣỡng cƣ (amphibia) Khu bảo tồn thiên nhiên Pù Lng, tỉnh Thanh Hóa”, Tạp chí khoa học, Tập 49 - Số 2A/2020, tr 70-78 31 Đậu Quang Vinh, Thiều Thị Huyền, Lê Đình Phƣơng, Phùng Minh Tiến, Ông Vĩnh An (2020), “Ghi nhận phân bố hai lồi thuộc họ cóc bùn Megophryidae Bonaparte, 1850 (Amphibia: Anura) khu vực Bắc Trung Bộ”, Tạp chí khoa học, Tập 49 - Số 1A/2020, tr 71-77 32 Đậu Quang Vinh, Nguyễn Kim Tiến, Nguyễn Thị Thảo Hƣơng (2016), “Ghi nhận loài thuộc Họ Ếch (Rhacophoridae) Khu BTTN Pù Lng, tỉnh Thanh Hóa”, Hội thảo Quốc gia Lưỡng cư Bò sát Việt Nam lần thứ ba, NXB KHTN & CN, tr 25-31 33 Lƣu Quang Vinh, Lị Văn Oanh, Hồng Thị Tƣơi, Vilay Phimpasone (2020), “Chi nhận loài ếch (Amphibia: Anura: Rhacophoridae) khu bảo tồn loài hạt trần q, Nam Động, tỉnh Thanh Hóa” Tạp chí Nơng nghiệp Phát triền Nông thôn, tr 186-191 34 Bain R H., Athrop A., Murphy R W., Orlov N., and Ho T C (2003), “Cryptic Species of a Cascade Frog from Southeast Asia: Taxonomic Revisions and Descriptions of Six New Species”, The American Museum Of Natural History, Number 3417: 60 pp 47 35 Bain R H and Nguyen Q T (2004), “Three New Species of NarrowMouth Frogs (Genus: Microhyla) from Indochina, with Comments on Microhyla annamensis and Microhyla palmipes”, Copeia, 2004(3), pp 507– 524 36 Birdlife International and MARD (2004), Sourcebook of Existing and Proposed Protected Areas in Vietnam, Second Edition 37 Bourret R (1942), Les Batraciens de l’Indochine, Institut Oce’anographique de l’Indoch, Ha Noi 38 Frost, Darrel R (2021), Amphibian Species of the World: an Online Reference Version 6.1 (Date of access) Electronic Database accessible at https://amphibiansoftheworld.amnh.org/index.php American Museum of Natural History, New York, USA doi.org/10.5531/db.vz.0001 39 IUCN (2021), The IUCN Red List of Threatened Species Version 20211 https://www.iucnredlist.org Downloaded on [day month year] Downloaded on 13 May 2021 40 Hoang, C.V., Nguyen, T.T, Luu V.Q., Nguyen, T.Q & Jiang, J (2019), “A new species of Leptobrachella Smith 1925 (Anura: Megophryidae) from Thanh Hoa Province, Vietnam”, Raffles Bulletin of Zoology, 67: 536–556, 2019 DOI: 10.26107/RBZ-2019-0042 41 Le N N., Pham V A (2009), “A survey of science Amphibians & Reptiles in the Xuan Lien Nature Reserve, Thanh Hoa Province”, Journal of Science of HNUE, 54(6), pp 90-100 42 Nguyen S V., Ho C T., Nguyen Q T (2009), Herpetofauna of Vietnam, Edition Chimaira, Frankfurt am Main 43 Orlov N., Ho T C., and Nguyen Q T (2004), “A new species of the genus Philautus from central Vietnam (Anura: Rhacophoridae)”, Russian Journal of Herpetology, Vol 11, No 1, pp 51 – 64 44 Pham T C., Nguyen Q T., Hoang V C., and Ziegler T (2016), “New records and updates list of amphibians from Xuan Lien Nature Reserve, 48 Thanh Hoa Province, Viet Nam”, Herpetology Notes, volume 9: 31 – 41 45 Poyarkov N A., Suwannapoom C., Pawangkhanant P., Aksornneam A., Duong V T., Korost D V & Che J (2018), “A new genus and three new species of miniaturized microhylid frogs from Indochina (Amphibia: Anura: Microhylidae: Asterophryinae)”, Zoological Research 38(3):1-26 46 Zheng Zhang, Scott Schwartz, Lukas Wagner, and Webb Miller (2000), "A greedy algorithm for aligning DNA sequences", J Comput Biol 2000; 7(12),203-14 49 Phụ lục Phụ lục Các trình tự phân tích ADN >MH004404.1 Vietnamophryne orlovi isolate ZMMU_A5821 12S ribosomal RNA gene, partial sequence; tRNA-Val gene, complete sequence; and 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; mitochondrial TGCAAGTCTCCGCACACCCGTGAGAAAGCCCTTACACCTCCC CCAAGACAAGGAGCTGGTATCAGGCACAGAACTCTTGCCCACAAC ACCTAGCTACGCCACCCCCTCAAGGGTACTCAGCAGTGATAAACA TTGTCCATAAGCGCCAGCTTGACTCAGTCAAAGTAATTACAGAGCC GGCTAATCCGGTGCCAGCCGCCGCGGCTATACCGTCAGGCTCAAG TTGATACACACCGGTGTTAAGCGTGATTAAAGTACTCCTTAAATTA AAGTTAAACTCAAACCAAGTTGTGACACACTTGTTCTCCTGAAACC CAAAACGAAAGTTACTTTAACCTAACCACTTGAATCCACGACAGC TAGAATACAAACTGGGATTAGGTACCCCACTATGCCTAGCCATAA AATATTAACTCACATCTAAACCACCGGGGAATTACGAGCCCAAGC TTAAAACCCAAAGGACTTGACGGTGTCCCACCCATCTAGAGGAGC CTGTTCTATAATCGATTCTCCCCGATATACCTCACCACTTTTAGCCA CAGCCTGTATACCTCCGTCGCAAGCTTACCATATGAACGAACTTAG TGAGCCAAAAGATCACCATCTACACGTCAGGTCAAGGTGCAGCCA ACGAAGCGGAAAGAAATGGGCTACAATTTCTAACATAGAACAAAC GAAAAACTACATGCAATACAGTAATGAAGGCGGATTTAGTAGTAA AAAGAAATCAGAGAGTTCTTTTTAACTAGGCACTGGGACGCGTAC ACACCGCCCGTCACCCTCTTCAAATGCAATCTCAACGTCAATAACA CTAAATAGCACCCCAGAAGAGGCAAGTCGTAACACGGTAAGCGTA CTGGAAAGTGCGCTTGGCTCAACAAAATGTAATTTACCATAAAAT ATCTTGCTTACACCAAGAAAAAATTTGTTACACCAAATCATTTTGA GCCAAAAACCTAGCCCGATTCACCCACATACCACCCTCTCCTCCAC CACTCACCATAAAACATTTTTTCATCTTAGTAAAGGCGATTAAAAG GAAATTAGAAGCTTTATATCTAGTACCGCAAGGGAAAAGTGAAAT P1 AACAATGAAATACCACTAAGCACAACAAAGCAAAGATTTAACCTT GTACCTTTTGCATCATGGTCTTACAAGTCTAACCAAGCAAAATGAA CTTTAAGTTTGACCCCCCGAAACTAGACGAGCTACTTCAAAACAGC TCATCGAGCCAACCCGTCCCTGTTGCAAAAGAGTGGGAAGATTTTC AAGTAGAGGTGATAAACCTACCGAGCCTAGAGATAGCTGGTTACC CAGAAAAAAGGATATTAGTCCCACCTTAAATCTCCCTATTACCCAT ATAATACACCAACAGATTTAAAGAGCTATTCAAATACGTACAACT TTAATTTGAAATAGGTTACAACTACACACAGCTATGAGATTCAATA CGATCAGTTGGCCTACTAGCAGCCATCTTTTATAAAGCGGTTAAGC TACATCGCACTAAACATTAATCCCAATCAACACTCAAAACCCTTCA TTAGTACTGAGTGACTCCATAACTCTATGGAAAACCTTCTGTTAGA ACTAGTAACAAGAAATAGACTTCTCCAACAATGTAAGTGTAACCC AAAATGAACCAATCATTGGCACTCACCGTTCATGAATACATAGTAT TAACACAACATGAAAACCCTACTAACTCAAACGTTAACCTTACAC CAGAACCTTTCAGGAAAGATTAAAAAACATGGAAGGAACTCGGCA AATAATAACCCCGCCTGTTTACCAAAAACATCGCCTCCTGTTACCT ATAGGAGGTCCAGCCTGCCCAGTGAACTAAATTAAACGGCCGCGG TACCCTAACCGTGCAAAGGTAGCACAATCACTTGTTCTTTAAATAA GGACTAGTATGAACGGCATCACGAGGGTTATACTGTCTCCCCTGTT CAATCAGTGAAACTAATCCCCCCGTGAAGAAGCGGGGATACTTTT ATAAGACGAGAAGACCCCATGGAGCTTTAAACCCAGTATCACTTG CATCCATTTCACCATATTAATAAGCAAACCTGACTACTAGTTTTTG GTTGGGGTGACCACGGAGCAAAACAAAACCTCCATGACGAATAGA ACTACTTCTAATCAAAGAGCTACAACTCGCAGAATCAACATATTG ACTAAAATTGACCCAATAATTTTGAACAACGAACCAAGTTACCCT GGGGATAACAGCGCAATCCATTTCAAGAGCCCCTATCGACAAATG GGTTTACGACCTCGATGTTGGATCAGGGTGTCCAAGTGGTGCAGCC ACTACTAAAGGTTCGTTTGTTCAACGATTAAA P2 >MH004406.1 Vietnamophryne occidentalis isolate ZMMU_A5822 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; mitochondrial AAAAGCAGCCATCTTTTATAAAGCGTTAAAGCTACATCGCAC TAAACACTAATCCCCAATCAATACTCAAAACCCCTCATTAGTACTG AGTGACTCCATAACTCTATGGAAAACCTTCTGTTAGAACTAGTAAC AAGAAATAGACTTCTCCAACAATGTAAGTGTAACCCAAAATGAAC CAATCATTGGCGCTCACCGTTTATGAATATATAGTATTAACACAAC ATGAAAACCCCACTAACCCAAACGTTAACCTTACACTAGAACCTTT CAGGAAAGATTAAAAAACATGGAAGGAACTCGGCAAATAATAAC CCCGCCTGTTTACCAAAAACATCGCCTCCTGTTACCCATAGGAGGT CCAGCCTGCCCAGTGAACTAAATTAAACGGCCGCGGTACCCTAAC CGTGCAAAGGTAGCACAATCACTTGTTCTTTAAATAAGGACTAGTA TGAACGGCATCACGAGGGTTATACTGTCTCCCCTGTTCAATCAGTG AAACTAATCCCCCCGTGAAGAAGCGGGGATACTTTTATAAGACGA GAAGACCCCATGGAGCTTTAAACCCAGTATCACTTGCATCTATTAC ACCACATTAATAAGCAACCTGACTACCAGTTTTTGGTTGGGGTGAC CGCGGAGCAAAATAAAACCTCCATGACGAATAGAACTACTTCTAA TCAAAGAGCTACAACTCGCAGAATCAACATATTGACTAAAATTGA CCCAATAATTTTGAACAACGAACCAAGTTACCCTGGGGATAACAG CGCAATCCATTTCAAGAGCCCCTATCGACAAATGGGTTTACGACCT CGATGTTGGATCAGGGTGTCCAAGTGGTGCAGCCACTACTAAAGG >MH004403.1 Vietnamophryne inexpectata isolate ZMMU_A5820 12S ribosomal RNA gene, partial sequence; tRNA-Val gene, complete sequence; and 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; mitochondrial TGCAAGTCTCCGCACACCCGTGAGAAAGCCCTTACACCTCCC CCAAGACAAGGAGCTGGTATCAGGCACAGAACTCTTGCCCACAAC ACCTAGCTATGCCACCCCCTCAAGGGTACTCAGCAGTGATAGACA TTGTTTATAAGCGCCAGCTTGACTCAGTCAAAGTAATAACAGAGCC GGCTAATCCGGTGCCAGCCGCCGCGGCTATACCGTTAGGCTCAAG P3 TTGACACACATCGGTGTTAAGCGTGATTAAAGTACTTCTAGATTAA AGTTAAACTTAAACCAAGTTGTGATACGCTTGTTCTTCAGAAACCC AAAACGAAAGTTACTTTAACAAACCACTTGAATCCACGACAGCTA GGATACAAACTGGGATTAGGTACCCCACTATGCCTAGCCATAAAA TATTAACTTACATCCAAACCACCCGGGAATTACGAGCCCAAGCTTA AAACCCAAAGGACTTGACGGTGTCCCACCCACCTAGAGGAGCCTG TTCTATAATCGATTCCCCCCGATTTACCTCACCACTTTTAGCCAACA GCCTGTATACCTCCGTCGCAAGCTTACCATATGAACGAACTTAGTG AGCTAAAAGATCACCACCTACACGTCAGGTCAAGGTGCAGCCAAC AGAGCGGAAAGCAATGGGCTACAATTTCTAAAATAGAATAAACGA AAGACTACATGCAACACAGTCATGAAGGCGGATTTAGTAGTAAAA AGAAATCAGAGAGTTCTTTTTAACTAGGCACTGGGACGCGTACAC ACCGCCCGTCACCCTCTTCAAATGCAATCTCAATGTCAATAACATC AAATCGCACTACAGAAGAAGCAAGTCGTAACACGGTAAGCGTACT GGAAAGTGCGCTTGGCTTAACAAAATGTAATTTATCCCAAAATATC TCGCTTACACCGAGAATAAACTTGCTACACCAAGTCATTTTGAGCC AAAAACCCAGCCCATTCACCCCATACTTAACCCCATACTTCATTCC CCCCCCCAAAACATTCTCACATCTTAGTAAAGGCGATTAAAAAGA AATTAGGAGCTTTATATTCAGTACCGCAAGGGAAGAGTGAAATAA TAATGAAATACTATTAAGCACAACAAAGCAAAGATTTAACCTTGT ACCTTTTGCATCATGGTCTTACAAGTCCAATCAAGCAAAATGAACC TTAAGTTTGCCCCCCCGAAACTAGACGAGCTACTTCAAAACAACCC ATCGAGCCAACCCGTCTCTGTTGCAAAAGAGTGGGAAGATTTTCA AGTAGAGGTGATAAACCTATCGAGCCTAGAGATAGCTGGTTACTC AGAAAAAAGGATGTTAGTCCTACCTTAAACATTTTTATTAAACTTA TAATACATCAACAGATTTAAAGAGCTATTCAATAAGGGTACAGCT TTATTTTGAAATAGGATACACCCTACTCTACAGGGTATTGGAAACT AACATGACTAGTTGGCCTACAAGGAGCCAAAGAAATAGACTTCTC CAACAATGTAAGTGTAAGCCAAAATGAACCAATCATTGGCACTCA P4 CCGTTCATGAGCATAAAGTAATAACACAACACGAAAACCCTACTA ACCCAAACGTTAACCTTACACTAGAACTTTTCAGGAAAGATTAAA AAACATGGAAGGAACTCGGCAAATAATAACCCCGCCTGTTTACCA AAAACATCGCCTCCCGTCACTCATGGGAGGTCCAGCCTGCCCAGT GAATTATATTAAACGGCCGCGGTACCCTAACCGTGCAAAGGTAGC ACAATCACTTGTTCTTTAAATAAGGACTAGTATGAACGGCATTACG AGGGTTACACTGTCTCCCCTGTTCAATCAGTGAAACTAATCCCCCC GTGAAGAAGCGGGGATACTTTTATAAGACGAGAAGACCCCATGGA GCTTAAAACTCAGTATCACTTGCATTATTACACCACATGAACTGGC AAACCTGACTACTAGTTTTTGGTTGGGGTGACCGCGGAGCAAAAT AAAACCTCCACGACGAATGGAACTAACTTCTAATCAAAGAGCTAC AACTCGCAGAATCAACATATTGACTAAAATTGACCCAATAATTTTG AACAACGAACCAAGTTACCCTGGGGATAACAGCGCAATCCATTTC AAGAGCCCCTATCGACAAATGGGTTTACGACCTCGATGTTGGATC AGGGTGTCCAAGTGGTGCAGCCACTACTGAAGGTTCGTTTGTTCAA CGATTAAA >MG682554.1 Siamophryne troglodytes isolate ZMMU_NAP06552 12S ribosomal RNA gene, partial sequence; tRNA-Val (trnV) gene, complete sequence; and 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; mitochondrial AGCCATAAAATATTAACTTACACAAAAACCGCCAGGGGATT ACGAGCCCAAGCTTAAAACCCAAAGGACTTGACGGTGCCCCACCC ATCTAGAGGAGCCTGTTCTATAATCGATTATCCCCGATCTACCTCA CCACTTTTAGCCTACCAGTCTGTATACCTCCGTCGCAAGCTTACCC TATGAACGAATAATAGTGAGCTAAAAGATTACATATCTACACGTC AGGTCAAGGTGCAGCCAACGAAATGGGAAGAAATGGGCTACAATT TCTAATAATAGAATAAACGGAAAACTGCCTGCAATACAGTCACAA GGCGGATTTAGTAGTAAAAAGAAAATAGAGAGTTCTTTTTAACTA GGCACTGGGACGCGTACACACCGCCCGTCACCCTCTTCAAACGAA CTAAAAATGTTAGTAACACCATACAACGCCCCAGAAGAGGCAAGT P5 CGTAACACGGTAAGCGTACTGGAAAGTGCGCTTGGTCTAACAAAA TATAGTTTAACCAAAACATCTCGCTTACACCGAGAAAACATTCGTG ACACTTGAATTATTTTGAGCTAAAAATTAAGCCCCTCCCCACCCGA TTTATTACACTACATCACACCACACCCACTAAAACATTCTATCATC TAAGTAAAGGCGATTAAAAAGAAGTTAGGAGCTTTATAACCAGTA CCGCAAGGGAAAAGTGAAATAGAAATGAAATAAACCTAAAGCAC ATTAAAGTAAAGACTAAACCTTGTACCTTTTGCATCATGGTCTTAC AAGTCCAACCAAGCAAAACGAATCTTAAGTTTGACCCCCCGAAAC TAAGCGAGCTACTTCAAAACAGCCTTAAGGGCAAACCCGTCTCTG TTGCAAAAGATTGGGAAGATTTTCAAGTAGAGGTGATAAACCTAC CGAGCCTAGAGATAGCTGGTTATTCAGAAAAAGGATATTAGTCCT ACCTTAAATCTTTAAGTAACCTTTATTACCCCTTTAGAATTAAGAG CTATTCAAATAAGGTACAGCCTATTTGAAAAAGGATACAACCTAC ACTATGGGGTAATGACACTTAAACATGACTAAGTGGGCCTAAAAG CAGCCCACATGGAATATATAGAAAACCTTCTGTTAGAACTAGTCC ACAAGAAAAAGAATTTCTCCAACAAATGTAAATGTAAGCCGAAAT GAACTAATCATCGGCACTTATCGTTAATGAACCTAAAGCAATAAC CCAACAAGAAAAACTTACTAATAACAAACGTTAACCTTACACTAG AACTTTTCTGGAAAGATTAAAAATATAGGAAGGAACTCGGCAAAT ACTAGCCCCGCCTGTTTACCAAAAACATCGCCTCCTGAAAACCTCA TAGGAGGTCCAGCCTGCCCAGTGACTTAAGTTAAACGGCCGCGGT ACCCTAACCGTGCGAAGGTAGCACAATCACTTGTTCTTTAAATAAG GACTAGTATGAATGGCATCACGAGGGCTATACTGTCTCCCACATTT AATCAGTGAAACTAATCCCCCCGTGAAGAAGCGGGGATACAAATA TAAGACGAGAAGACCCCATGGAGCTTTAAACTCAGTATCACATGC TAATGCTACATCAAATAAACAAGCAAATCTGACTACTAGTTTTCGG TTGGGGTGACCACGGAGTAAAAAAAAACCTCCATGACGAAAGGA ACTCACACTCCTAATCAAAGAGCTACAACTCGCAGAATCAACATA TTGACCAAAATGACCCAATTTTTGAACAACGAACCAAGTTACCCTG P6 GGGATAACAGCGCAATCCATTTTAAGAGCCCCTATCGACAAATGG GTTTACGACCTCGATGTTGGATCAGGGTATCCCAGTGGTGCAGCCG CTACTAAAGGTTCGTTTGTTCAACGATTAAA P7