Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, xét nghiệm và kết quả một số phác đồ điều trị hội chứng rối loạn sinh tủy tại Bệnh viện Bạch Mai và Viện Huyết học Truyền máu Trung ương

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN QUANG HẢO NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, XÉT NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH TỦY TẠI BỆNH VIỆN BẠCH MAI VÀ VIỆN HUYẾT HỌC TRUYỀN MÁU TRUNG ƯƠNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI *** -NGUYỄN QUANG HẢO NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, XÉT NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ MỘT SỐ PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH TỦY TẠI BỆNH VIỆN BẠCH MAI VÀ VIỆN HUYẾT HỌC TRUYỀN MÁU TRUNG ƯƠNG Chuyên ngành : Huyết học Truyền máu Mã số : 9720107 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS VŨ MINH PHƢƠNG HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Sau đại học Trường Đại học Y Hà Nội Đảng ủy, Ban Lãnh đão Viện Huyết học Truyền máu Trung ương, Ban Giám đốc Bệnh viện Bạch Mai tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin cảm ơn Bộ môn Huyết học Truyền máu Trường Đại học Y Hà Nội, Trung tâm Huyết học Truyền máu Bệnh viện Bạch Mai, Khoa Bệnh máu tổng hợp Khoa Di truyền - SHPT, Viện Huyết học Truyền máu Trung ương tận tình giúp đỡ tơi trình học tập thực đề tài Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Minh Phƣơng, Phó Giám đốc Trung tâm Huyết học Truyền máu Bệnh viện Bạch Mai, Phó chủ nhiệm Bộ mơn Huyết học Truyền máu Trường ĐH Y Hà Nội, người Thầy tận tình bảo, đóng góp ý kiến q báu tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận án tiến sĩ y học Tôi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới Ban Giám đốc, lãnh đạo đơn vị lâm sàng xét nghiệm toàn thể cán nhân viên Trung tâm Huyết học Truyền Máu, Bệnh viện Bạch Mai quan tâm, động viên, giúp đỡ suốt trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Bạch Quốc Khánh, Viện trưởng Viện Huyết học Truyền máu Trung ương, TS Vũ Đức Bình Trưởng Khoa bệnh máu tổng hợp, Phó viện trưởng Viện Huyết học Truyền máu Trung ương, TS Dương Quốc Chính Trưởng Khoa Di truyền – SHPT PGS TS Nguyễn Hà Thanh, Trưởng môn Bộ môn Huyết học Truyền máu Trường Đại học Y Hà Nội, Phó viện trưởng Viện Huyết học Truyền máu Trung ương quan tâm, động viên, giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới anh chị em đồng nghiệp Khoa Huyết học Lâm sàng, Bệnh viên Trung ương Thái Nguyên quan tâm, chia sẻ, động viên, hỗ trợ tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tôi xin cảm ơn tất người bệnh gửi gắm lòng tin đội ngũ thầy thuốc Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình: Bố, Mẹ, vợ, u q, anh em bạn bè, đồng nghiệp động viên, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hồn thành luận án Một lần tơi xin cảm ơn tất cả! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Nghiên cứu sinh Nguyễn Quang Hảo LỜI CAM ĐOAN Tơi Nguyễn Quang Hảo, nghiên cứu sinh khóa 35 Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Huyết học Truyền máu, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS Vũ Minh Phƣơng Công trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Ngƣời viết cam đoan Nguyễn Quang Hảo CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt Abnormal localization of Khu trú bất thường tế bào immature precursors đầu dòng chưa trưởng thành AML Acute myeloid leukemia Bệnh lơ xê mi cấp dòng tủy ANC Absolute neutrophil count Số lượng bạch cầu trung tính BM Bone marrow Tủy xương CCUS Clonal cytopenia of Giảm tế bào đơn dịng có ý nghĩa undetermined significance chưa xác định Clonal hematopoiesis of Quá trình tạo máu đơn dịng tiềm indeterminate potential khơng xác định CI Clinical improvement Cải thiện lâm sàng CML Chronic myeloid leukemia Bệnh bạch cầu mạn dòng tủy CMV Cytomegalovirus Cytomegalovirus CR Complete remission Đáp ứng hoàn toàn Del Deletion Mất đoạn DNA Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic EMA Erythroid Maturation Agents Tác nhân tăng trưởng hồng cầu ELN European leukemia net Mạng lưới ung thư máu Châu Âu EPO Erythropoietin Erythropoietin FDA Food and Drug Administration Cục Quản lý Thực phẩm Dược ALIP CHIP phẩm Hoa Kỳ FISH G – CSF Fluorescence In Situ Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ Hybridization Granulocyte-colony stimulating Các yếu tố kích thích tạo cụm tế bào factors dòng hạt Từ viết tắt Tiếng Anh GM – CSF Granulocyte macrophage Tiếng Việt Các yếu tố kích thích tạo cụm tế bào - colony stimulating factors dòng hạt – đại thực bào GVHD Graft-Versus-Host Disease Bệnh ghép chống chủ HCRLST Myelodysplastic Syndrome Hội chứng Rối loạn sinh tủy HI Hematologic improvement Cải thiện huyết học HIV Human Immunodeficiency Vi rút suy giảm miễn dịch người Virus HR Hazard ratio Tỷ suất ngẫu nhiên HBG Hemoglobin Huyết sắc tố ICUS Idiopathic cytopenia of Giảm tế bào vơ có ý nghĩa chưa undetermined significance xác định IHA Autoimmune hemolytic anemia Thiếu máu tan máu tự miễn IPSS-R Revised International Stage Hệ thống tiên lượng quốc tế sửa đổi System ITP Immune thrombocytopenia Giảm tiểu cầu miễn dịch purpura IWG International Working Group Khối hồng cầu KHC LDH Nhóm làm việc quốc tế Lactate dehydrogenase Lactate dehydrogenase LXMCDT Acute myeloid leukemia Lơ xê mi cấp dòng tủy MDS Hội chứng rối loạn sinh tủy Myelodysplastic syndromes MDS – EB MDS with excess blasts MDS – MDS Multilinaeage dysplasia MLD MDS – RS MDS with ring sideroblast Hội chứng rối loạn sinh tủy với tăng tế bào non Hội chứng rối loạn sinh tủy với loạn sản đa dòng Hội chứng rối loạn sinh tủy với nguyên hồng cầu sắt vòng Từ viết tắt MDS – Tiếng Anh MDS Single lineage dysplasia Hội chứng rối loạn sinh tủy với loạn sản đơn dòng SLD MDS – U Tiếng Việt MDS Unclassifiable Hội chứng rối loạn sinh tủy phân loại Hội chứng tăng sinh tủy MPN Myeloproliferative neoplasms NCCN National comprehensive cancer Mạng lưới Ung thư Quốc gia network NGS Next generation sequencing Giải trình tự hệ Nhiễm sắc thể NST ORR Overall response rate Tỉ lệ đáp ứng tổng thể OS Overal survival Thời gian sống thêm toàn PB Peripheral blood Máu ngoại vi PFS Progession free survival Thời gian sống bệnh không tiến triển PLT Plaletet Tiểu cầu PR Partial remission Đáp ứng phần RNA Ribonucleic acid SHPT Sinh học phân tử SLBCTT Số bạch cầu trung tính SLTC Số lượng tiểu cầu STTX Sinh thiết tủy xương WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Lịch sử phát bệnh 1.2 Đặc điểm dịch tễ 1.3 Cơ chế bệnh sinh Hội chứng rối loạn sinh tủy 1.4 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng 1.4.1 Đặc điểm lâm sàng 1.4.2 Đặc điểm cận lâm sàng 1.5 Chẩn đoán hội chứng rối loạn sinh tủy 19 1.5.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán tối thiểu 19 1.5.2 Chẩn đoán phân biệt 21 1.5.3 Phân loại Hội chứng rối loạn sinh tủy theo WHO 2016 22 1.6 Yếu tố tiên lượng 24 1.6.1 Hệ thống chấm điểm tiên lượng quốc tế IPSS 24 1.6.2 Hệ thống tiên lượng quốc tế sửa đổi IPSS-R 26 1.7 Điều trị 27 1.7.1 Điều trị hỗ trợ 27 1.7.2 Điều trị thuốc giảm methyl hóa 32 1.7.3 Thuốc điều hòa miễn dịch 35 1.7.4 Các liệu pháp điều trị cường độ cao 36 1.7.5 Liệu pháp điều trị tế bào gốc 36 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Đối tượng nghiên cứu 37 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 37 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 38 2.2 Phương pháp nghiên cứu 39 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 39 2.2.2 Các biến số nghiên cứu 39 2.2.3 Các tiêu chuẩn sử dụng nghiên cứu: 42 2.2.4 Vật liệu kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 50 2.2.5 Các phác đồ sử dụng nghiên cứu 54 2.2.6 Qui trình nghiên cứu 55 2.2.7 Sơ đồ nghiên cứu 58 2.2.8 Phân tích xử lí số liệu 58 2.3 Đạo đức nghiên cứu 59 2.4 Sai số nghiên cứu biện pháp khắc phục sai số 60 2.4.1 Sai số 60 2.4.2 Biện pháp khắc phục sai số 60 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 61 3.1 Đặc điểm nhóm bệnh nhân nghiên cứu 61 3.1.1 Đặc điểm tuổi giới 61 3.1.2 Đặc điểm phân bố thể bệnh 62 3.2 Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng nhóm bệnh nhân nghiên cứu 63 3.2.1 Đặc điểm lâm sàng 63 3.2.2 Đặc điểm cận lâm sàng 64 3.2.3 Đặc điểm yếu tố tiên lượng 70 3.3 Kết điều trị 73 3.3.1 Kết điều trị 73 3.3.2 Các yếu tố liên quan 77 3.3.3 Các tác dụng khơng mong muốn q trình điều trị 94 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 96 4.1 Đặc điểm nhóm bệnh nhân nghiên cứu 96 Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 96 Zhao P, Qin J, Liu W, et al Genetic alterations in 47 patients with a novel myelodysplastic syndrome diagnosis at a single center Oncol Lett 2019;18(5):5077-5084 doi:10.3892/ol.2019.10853 97 Valent P, Orazi A, Steensma DP, et al Proposed minimal diagnostic criteria for myelodysplastic syndromes (MDS) and potential pre-MDS conditions undefined Published 2017 Accessed July 13, 2019 /paper/Proposed-minimal-diagnostic-criteria-for-syndromes-ValentOrazi/6cafcee4bec7baf8a1f76db3e8c085524731737a 98 Valent P, Horny HP Minimal diagnostic criteria for myelodysplastic syndromes and separation from ICUS and IDUS: update and open questions Eur J Clin Invest 2009;39(7):548-553 doi:10.1111/j.13652362.2009.02151.x 99 Valent P, Horny HP, Bennett JM, et al Definitions and standards in the diagnosis and treatment of the myelodysplastic syndromes: Consensus statements and report from a working conference Leuk Res 2007;31(6):727-736 doi:10.1016/j.leukres.2006.11.009 100 SH S, E C, NL H, et al WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Accessed October 25, 2020 https://publications.iarc.fr/Book-And-Report-Series/Who-ClassificationOf-Tumours/WHO-Classification-Of-Tumours-Of-HaematopoieticAnd-Lymphoid-Tissues-2017 101 Lại Thị Thanh Thảo, Huỳnh Hồng Hoa Báo cáo trường hợp rối loạn sinh tủy điều trị Decitabine bệnh viện Chợ Rẫy Y học thành phố Hồ Chí Minh 2015;4:1 102 Jabbour E, Short NJ, Montalban-Bravo G, et al Randomized phase study of low-dose decitabine vs low-dose azacitidine in lower-risk MDS and MDS/MPN Blood 2017;130(13):1514-1522 doi:10.1182/blood2017-06-788497 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 103 Nguyễn Anh Trí Một số đặc điểm lâm sàng, xét nghiệm thể bệnh HCRLST nguyên phát theo tiêu chuẩn xếp loại WHO-2001 Y học Việt Nam 2008;334:402-409 104 Pomeroy C, Oken MM, Rydell RE, Filice GA Infection in the myelodysplastic syndromes Am J Med 1991;90(3):338-344 105 Sekeres MA The Epidemiology of Myelodysplastic Syndromes Hematology/Oncology Clinics of North America 2010;24(2):287-294 doi:10.1016/j.hoc.2010.02.011 106 Phrommin S, Tantiworawit A, Rattanathammethee T, et al Chromosomal Abnormalities in Myelodysplastic Syndrome Patients in Upper Northern Thailand Asian Pac J Cancer Prev 2020;21(3):639645 doi:10.31557/APJCP.2020.21.3.639 107 Papaemmanuil E, Gerstung M, Malcovati L, et al Clinical and biological implications of driver mutations in myelodysplastic syndromes Blood 2013;122(22):3616-3627; quiz 3699 doi:10.1182/ blood-2013-08-518886 108 Shen L, Kantarjian H, Guo Y, et al DNA Methylation Predicts Survival and Response to Therapy in Patients With Myelodysplastic Syndromes JCO 2010;28(4):605-613 doi:10.1200/JCO.2009.23.4781 109 TRIANTAFYLLIDIS I, CIOBANU A, STANCA O, LUPU AR Prognostic Factors in Myelodysplastic Syndromes Maedica (Bucur) 2012;7(4):295-302 110 Gonzalez-Porras JR, Cordoba I, Such E, et al Prognostic impact of severe thrombocytopenia in low-risk myelodysplastic syndrome Cancer 2011;117(24):5529-5537 doi:10.1002/cncr.26173 111 Wu J, Zhang L, Yin S, Wang H, Wang G, Yuan J Differential Diagnosis Model of Hypocellular Myelodysplastic Syndrome and Aplastic Anemia Based on the Medical Big Data Platform Complexity 2018;2018:1-12 doi:10.1155/2018/4824350 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 112 Haferlach T, Nagata Y, Grossmann V, et al Landscape of genetic lesions in 944 patients with myelodysplastic syndromes Leukemia 2014;28(2):241-247 doi:10.1038/leu.2013.336 113 Meletis J, Viniou N, Terpos E Novel agents for the management of myelodysplastic syndromes Med Sci Monit 2006;12(9):RA194-206 114 Bejar R, Stevenson K, Abdel-Wahab O, et al Clinical Effect of Point Mutations in Myelodysplastic Syndromes New England Journal of Medicine 2011;364(26):2496-2506 doi:10.1056/NEJMoa1013343 115 Makishima H, Yoshizato T, Yoshida K, et al Dynamics of clonal evolution in myelodysplastic syndromes Nat Genet 2017;49(2):204212 doi:10.1038/ng.3742 116 Nybakken GE, Bagg A The genetic basis and expanding role of molecular analysis in the diagnosis, prognosis, and therapeutic design for myelodysplastic syndromes J Mol Diagn 2014;16(2):145-158 doi:10.1016/j.jmoldx.2013.11.005 117 Itzykson R, Thépot S, Quesnel B, et al Prognostic factors for response and overall survival in 282 patients with higher-risk myelodysplastic syndromes treated with azacitidine Blood 2011;117(2):403-411 doi:10.1182/blood-2010-06-289280 118 Montalban-Bravo G, Garcia-Manero G Myelodysplastic syndromes: 2018 update on diagnosis, risk-stratification and management Am J Hematol 2018;93(1):129-147 doi:10.1002/ajh.24930 119 List A, Ebert BL, Fenaux P A decade of progress in myelodysplastic syndrome with chromosome 5q deletion Leukemia 2018;32(7):14931499 doi:10.1038/s41375-018-0029-9 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 120 Rajkumar S, Greipp PR, Jacobus S, et al Lenalidomide plus high-dose dexamethasone versus lenalidomide plus low-dose dexamethasone as initial therapy for newly diagnosed multiple myeloma: an open-label randomised controlled trial Lancet Oncol 2010;11(1):29-37 doi:10.1016/S1470-2045(09)70284-0 121 Santini V, Schemenau J, Levis A, et al Can the revised IPSS predict response to erythropoietic-stimulating agents in patients with classical IPSS low or intermediate-1 MDS? Blood 2013;122(13):2286-2288 doi:10.1182/blood-2013-07-512442 122 Saba H, Rosenfeld C, Issa JP, et al First Report of the Phase III North American Trial of Decitabine in Advanced Myelodysplastic Syndrome (MDS) Blood 2004;104(11):67 doi:10.1182/blood.V104.11.67.67 123 Greenberg PL, Sun Z, Miller KB, et al Treatment of myelodysplastic syndrome patients with erythropoietin with or without granulocyte colony-stimulating factor: results of a prospective randomized phase trial by the Eastern Cooperative Oncology Group (E1996) Blood 2009;114(12):2393-2400 doi:10.1182/blood-2009-03-211797 124 Zamora-Pérez E, Lopez-Karpovitch X Factores predictivos de respuesta hematológica en adultos síndrome mielodisplásico (SMD) tratados ciclosporina A (CSA) Gac Med Mex 2015;151(3):345 125 Park S, Grabar S, Kelaidi C, et al Predictive factors of response and survival in myelodysplastic syndrome treated with erythropoietin and GCSF: the GFM experience Blood 2008;111(2):574-582 doi:10.1182/ blood-2007-06-096370 126 Naqvi K, Garcia-Manero G, Sardesai S, et al Association of Comorbidities With Overall Survival in Myelodysplastic Syndrome: Development of a Prognostic Model JCO 2011;29(16):2240-2246 doi:10.1200/JCO.2010.31.3353 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 127 Jädersten M, Malcovati L, Dybedal I, et al Erythropoietin and granulocyte-colony stimulating factor treatment associated with improved survival in myelodysplastic syndrome J Clin Oncol 2008;26(21):3607-3613 doi:10.1200/JCO.2007.15.4906 128 Benton C, Khan M, Sallman D, et al Prognosis of patients with intermediate risk IPSS‐R myelodysplastic syndrome indicates variable outcomes and need for models beyond IPSS‐R American journal of hematology Published online 2018 doi:10.1002/ajh.25234 129 Kantarjian H, Issa JPJ, Rosenfeld CS, et al Decitabine improves patient outcomes in myelodysplastic syndromes: results of a phase III randomized study Cancer 2006;106(8):1794-1803 doi:10.1002/ cncr.21792 130 Lee BH, Kang KW, Jeon MJ, et al Comparison between 5-day decitabine and 7-day azacitidine for lower-risk myelodysplastic syndromes with poor prognostic features: a retrospective multicentre cohort study Sci Rep 2020;10(1):39 doi:10.1038/s41598-019-56642-1 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục PHIẾU THU THẬP THÔNG TIN BỆNH NHÂN Họ tên:……………………………………………………………… Mã bệnh nhân:………… …………… Mã số lưu trữ:………………… Tuổi:…… Giới:…… Địa chỉ:………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… SĐT liên hệ:…………………………………………… …………… Thời điểm chẩn đoán:…………………………………… …………… Chẩn đoán:……………………………………………………….…… Phác đồ điều trị:……………………………….…………… ………… 10 Còn sống/ Đã tử vong: …………… (Nếu tử vong thời điểm nào) 11 Thời gian sống thêm tồn bộ:…….… tháng 13 Tái phát/ Khơng tái phát:……… (Nếu tái phát thời điểm nào) 14 Thời gian tái phát:….…… tháng 15 Đặc điểm lâm sàng: Thiếu Xuất Nhiễm máu huyết trùng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Gan to Lách to Sút cân Hạch ngoại vi Bệnh kèm Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 16 Đặc điểm cận lâm sàng: Tủy xương Ngoại vi HBG SLTC SLBCTT (g/L) (G/L) (G/L) Blast NV (%) SLTBT (G/L) Blast TX RLHC RLBC RLTC (%) 17 Xét nghiệm di truyền: Đa tổn Karyotype Thêm NST Mất NST thương Bất thường khác Kết FISH del(5q) del(7q) del(20q) TET2 Kết qu ả 18 Diễn biến đợt điều trị Đợt điều trị Chỉ số Mã bệnh Mã bệnh Mã bệnh Mã bệnh Mã bệnh án án án án án HBG (g/L) SLTC (G/L) SLBCTT (G/L) Blast NV (%) Blast TX (%) RLHC RLBC RLTC Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục MỘT SỐ HÌNH ẢNH SINH THIẾT TỦY XƢƠNG CỦA BỆNH NHÂN HCRLST Hình ảnh rối loạn tế bào máu ngoại vi (Ha Thi N 79 tuổi, Hà Nội) Hình ảnh Alip sinh thiết tuỷ xương (Ha Thi N 79 tuổi, Hà Nội) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Một số hình ảnh tế bào rối loạn hình thái tủy đồ (Doan Thi T 79 tuổi, Lai Châu) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục MỘT SỐ HÌNH ẢNH KARYOTYPE TẾ BÀO TỦY XƢƠNG CỦA BỆNH NHÂN HCRLST del(5q) Bệnh nhân Ly Thi H 76 tuổi, Hà Nội; bất thường del(5q) Bệnh nhân Nguyen Thi Hong H 56 tuổi, Phú Thọ; đa tổn thương NST Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục MỘT SỐ HÌNH ẢNH FISH TẾ BÀO TỦY XƢƠNG CỦA BỆNH NHÂN HCRLST Bệnh nhân Ly Thi H 76 tuổi, Hà Nội; bất thường del(5q) Bệnh nhân Nguyen Van D 61 tuổi, Nam Định; bất thường del(20q) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục MỘT SỐ HÌNH ẢNH NGS CỦA BỆNH NHÂN HCRLST Bệnh nhân Chu Van L 72 tuổi, Bắc Giang; đột biến gen DNMT3A: c.2185C>T, p.R729W Bệnh nhân Le Thi K 75 tuổi, Lào Cai; đột biến gen TET2: c.3732_3733delCT, p.Y1245Lfs*22 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục PHƢƠNG PHÁP THỰC HIỆN KỸ THUẬT PHÂN TÍCH NST VÀ FISH TẠI KHOA DI TRUYỀN – SHPT, VIỆN HUYẾT HỌC – TRUYỀN MÁU TRUNG ƢƠNG Phương pháp thực kỹ thuật phân tích NST - Ngày 1: Nuôi cấy tế bào - Dịch tủy xương nuôi cấy vòng 24 tủ ấm 37oC - Môi trường nuôi cấy bao gồm ml RPMI 1640, 1,5 ml Marrow Max Bone, 1,5 ml huyết thai bê (FBS) - Ngày 2: Thu hoạch tế bào - Chuẩn bị dung dịch nhược trương KCl 0,075M để tủ ấm 37 oC trước thu hoạch - Chuẩn bị dung dịch Carnoy II theo tỉ lệ Methanol : Acid Acetic =3:1 - Cho 50 µl Colcemid vào ống nuôi cấy, trộn để tủ ấm 10 phút - Ly tâm với tốc độ 1000 vòng/phút phút, hút bỏ dịch giữ lại 1-2 ml dịch cặn - Thêm 6-8 ml dung dịch KCl 0,075M sau trộn đều, để tủ ấm vòng 25 phút - Bổ sung vào ống nuôi cấy 1-2 ml dung dịch Carnoy II, trộn đều, ly tâm 1000 vòng/phút phút, hút bỏ dịch - Thêm vừa đủ 8-10 ml Carnoy II, trộn để nhiệt độ phòng 10 phút - Ly tâm 1000 vòng/ phút phút, hút bỏ dịch nổi, giữ lại 12ml dịch cặn - Lặp lại thao tác rửa Carnoy II khoảng lần Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an - Cuối pha loãng dịch cặn thành huyền dịch theo tỉ lệ 1:10 để nhỏ tiêu - Sau nhỏ tiêu bản, tiến hành nhuộm Giemsa để đọc sơ băng G để phân tích Karyotype bệnh nhân Phương pháp thực kỹ thuật FISH Kỹ thuật lai huỳnh quang ngun tắc sử dụng đoạn dị có gắn huỳnh quang nhằm đánh dấu bất thường, sở xác định bất thường có tế bào tương bào bệnh lý Kỹ thuật tiến hành cụ thể sau: - Ngày - Kiểm tra lam, chọn lam sạch, ghi tên tuổi mã số lam - Nhỏ huyền dịch lên lam kính (Huyền dịch thu hoạch từ dịch tủy xương trực tiếp sau lấy mẫu sau nuôi cấy 24 giờ) - Đánh dấu vùng tế bào có mật độ phù hợp bút kim cương - Chuẩn bị máy lai FISH: Bật máy 30 phút trước sử dụng - Xịt nước vào giấy thấm giữ ẩm - Cài đặt máy chế độ: 75oC/5 phút 37oC/20h - Chuyển Probe hóa chất FISH khỏi tủ -20oC, rã đơng nhiệt độ phịng Vortex spin nhẹ - Mix Probe hóa chất FISH theo tỉ lệ: 1µl Probe + 7µl LSI Buffer + 2µl nước cất / lam - Votex spin nhẹ - Nhỏ 10µl dd Probe vào vùng đánh dấu, gắn lamen 22x22 (mm) - Dán kín xung quanh vùng lai keo dán Cement Rubber - Đăt lam vào máy lai FISH, khởi động máy Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn