(Luận văn) nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến khả năng phát sinh callus từ bao phấn cây dưa chuột (cucumis sativus l ) in vitro

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƯỜNG  CHÂU THỊ VƯỢNG lu an va n NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ to CÂY DƯA CHUỘT (CUCUMIS SATIVUS L.) IN VITRO p ie gh tn ĐẾN KHẢ NĂNG PHÁT SINH CALLUS TỪ BAO PHẤN d oa nl w an lu nf va Ngành: Công nghệ sinh học z at nh oi lm ul Người hướng dẫn: TS Nguyễn Minh Lý z m co l gm @ an Lu Đà Nẵng – 2018 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả khóa luận lu an Châu Thị Vượng n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực Khóa luận tốt nghiệp Khoa Sinh – Môi trường, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Đà Nẵng, học hỏi nhiều kiến thức lý thuyết thực hành thí nghiệm phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật, qua thân tơi trưởng thành tư duy, bố trí tiến hành các nghiên cứu khoa học Để hồn thành Khóa luận tốt nghiệp này, ngồi nỡ lực của thân, tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tận tình hướng dẫn, giúp đỡ mặt khoa học của TS Nguyễn Minh Lý Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô thuộc khoa Sinh- Môi trường lu an truyền dạy cho nhiều kiến thức phát triển kĩ thực hành thí n va nghiệm q trình tơi thực đề tài Khố luận tn to Tơi xin gửi lời cảm ơn đến các thành viên nhóm nghiên cứu, ln Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn gia đình, bạn bè ln đợng p ie gh giúp đỡ chia sẻ kinh nghiệm thời gian tơi thực khóa luận w viên, khích lệ vật chất lẫn tinh thần để tơi có thể đạt kết tốt oa nl Xin trân trọng cảm ơn d Đà Nẵng, tháng năm 2018 lu nf va an Sinh viên thực z at nh oi lm ul z Châu Thị Vượng m co l gm @ an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .3 lu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU an TỔNG QUAN VỀ CÂY DƯA CHUỘT .4 1.1 n va Nguồn gốc phân loại dưa chuột .4 1.1.2 Giá trị dinh dưỡng 1.1.3 Giá trị kinh tế p ie gh tn to 1.1.1 Các giống dưa chuột lai sử dụng sản xuất w 1.1.4 d oa nl 1.2 VAI TRÒ CỦA CÂY ĐƠN BỘI TRONG CHỌN GIỐNG CÂY TRỒNG Giá trị đơn bội 1.2.2 Phương pháp tạo đơn bội nf va an lu 1.2.1 z at nh oi lm ul 1.3 CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HIỆU QUẢ NUÔI CẤY BAO PHẤN 11 Ảnh hưởng điều kiện sinh trưởng kiểu gen mẹ .11 1.3.2 Ảnh hưởng giai đoạn phát triển bao phấn 12 1.3.3 Ảnh hưởng việc xử lí vật liệu trước nuôi cấy 12 1.3.4 Ảnh hưởng điều kiện sau nuôi cấy .12 1.3.5 Ảnh hưởng thành phần môi trường nuôi cấy 13 z 1.3.1 m co l gm @ an Lu 1.4 NGHIÊN CỨU VỀ KỸ THUẬT NUÔI CẤY BAO PHẤN Ở DƯA CHUỘT ĐƠN BỘI VÀ CÁC CÂY TRONG HỌ BẦU BÍ .14 n va ac th si iv 1.4.1 Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy bao phấn giới 14 1.4.2 Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy bao phấn Việt Nam 17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 ĐỐI TƯỢNG, THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU .19 2.1 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu .20 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 20 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 lu an Phương pháp thu nụ dưa chuột 20 2.3.2 Phương pháp vào mẫu 20 2.3.3 Bố trí thí nghiệm xử lí thống kê 21 n va 2.3.1 tn to ie gh CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 26 p 3.1 CÔNG THỨC KHỬ TRÙNG MẪU NỤ HOA 26 oa nl w 3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA KIỂU GEN DƯA CHUỘT ĐẾN KHẢ NĂNG PHÁT SINH CALLUS 27 d 3.3 ẢNH HƯỞNG CỦA KÍCH THƯỚC NỤ HOA DƯA CHUỘT ĐẾN KHẢ NĂNG PHÁT SINH CALLUS 28 an lu nf va 3.4 ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN THU MẪU VÀ THỜI GIAN XỬ LÝ LẠNH ĐẾN HIỆU QUẢ TẠO CALLUS 29 lm ul 3.4.1 Ảnh hưởng thời gian thu mẫu đến hiệu tạo callus từ nuôi 3.4.2 z at nh oi cấy in vitro bao phấn dưa chuột 29 Ảnh hưởng thời gian xử lý lạnh đến hiệu tạo callus từ nuôi z cấy in vitro bao phấn dưa chuột 30 @ Ảnh hưởng nồng độ 2,4-D đến hiệu tạo callus từ nuôi cấy co 3.5.1 l gm 3.5 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG (ĐHST) ĐẾN SỰ PHÁT SINH CALLUS ĐƠN BỘI VÀ TÁI SINH CÂY 31 m in vitro bao phấn dưa chuột .31 an Lu n va ac th si v Ảnh hưởng nồng độ 2,4-D KIN đến hiệu tạo callus từ 3.5.2 nuôi cấy in vitro bao phấn dưa chuột 33 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh từ callus bao phấn 3.5.3 dưa chuột 34 Kết khảo sát ảnh hưởng KIN NAA đến khả tái 3.5.4 sinh từ callus bao phấn dưa chuột 36 3.6 ẢNH HƯỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN HIỆU QUẢ TẠO CALLUS TỪ NUÔI CẤY IN VITRO BAO PHẤN DƯA CHUỘT 38 lu an 3.6.1 Điều kiện nhiệt độ .38 3.6.2 Điều kiện ánh sáng 38 n va KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 Kiến nghị 41 gh tn to Kết luận .41 p ie DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO .42 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si vi DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : Dichlorophenoxylacetic acid BAP : 6-Benzylaminopurine ĐHST : Điều hòa sinh trưởng KIN : Kinetin MS : Murashige Skoog (1962) NAA : α-Naphthaleneacetic acid SH : Schenk Hildebrandt (1972) TDZ : Thidiazuron lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si vii DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu Tên bảng bảng 1.2 Thành phần dinh dưỡng ăn 100 dưa cḥt Trang (Theo“Bảng thành phần hóa học thức ăn Việt Nam - 2007”) Tình hình sản xuất dưa chuột của số nước giới 1.3 giai đoạn 2012-2016 (Nguồn FAOSTAT 2018) lu an 1.4 Điều kiện nuôi cấy bao phấn một số thuộc họ bầu bí 16 2.1 Đặc điểm giống dưa cḥt sử dụng thí nghiệm 19 2.2 (Nguồn: East West Seed Lucky Seed) Các côngCông thức ty khử trùng 21 3.1 Hiệu của công thức khử trùng mẫu nụ hoa 26 va Sự ảnh hưởng của kích thước nụ hoa dưa chuột đến khả n 3.2 27 Sự ảnh hưởng của thời gian thu mẫu đến khả phát sinh 3.3 30 callus p ie gh tn to phát sinh callus Sự ảnh hưởng của 2,4-D KIN đến phát sinh callus 33 Ảnh hưởng của BAP đến khả tái sinh từ callus 35 nf va bao phấn dưa chuột Ảnh hưởng của KIN đến khả tái sinh từ callus bao lm ul phấn dưa chuột 36 z at nh oi 3.9 32 an 3.8 Sự ảnh hưởng của 2,4-D đến phát sinh callus lu 3.7 phát sinh callus d 3.6 31 oa 3.5 Sự ảnh hưởng của tiền xử lý lạnh (40C đến khả nl w 3.4 Sự ảnh hưởng của điều kiện nhiệt độ đến khả tạo 38 callus từ bao phấn dưa chuột Sự ảnh hưởng của điều kiện ánh sáng đến khả tạo z 39 m co l gm callus từ bao phấn dưa chuột @ 3.10 an Lu n va ac th si viii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 3.1 Tên hình Hình callus phát sinh từ bao phấn Trang 26 Callus sau tuần nuôi cấy (A) Giống dưa chuột HMT 356 (B) 3.2 27 Giống dưa chuột F1 Nhật Sự ảnh hưởng của kích thước nụ hoa dưa chuột đến khả 3.3 29 phát sinh callus sau tuần nuôi cấy Callus phát sinh môi trường MS có bổ sung 0,33 mg/l 2,4-D 3.4 31 0,22 mg/l KIN, nụ hoa xử lý (4 C) ngày Sự tăng trưởng kích thước của callus 3.5 32 lu Callus phát sinh môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l 2,4-D an 3.6 34 va 0,2 mg/l KIN quan sát kính hiển vi Thanh ngang tỷ lệ n mm tn to Tái sinh rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung 3.7 35 ie gh BAP 1,0 mg/l, ngang tỉ lệ mm Tái sinh rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung p 36 BAP 1,0 mg/l, ngang tỉ lệ mm w 3.8 Rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung BAP 1,0 nl 36 oa 3.9 d mg/l tái sinh trở lại mô sẹo; ngang tỉ lệ mm lu Tái sinh rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung 37 an 3.10 Tái sinh rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung 37 lm ul 3.11 nf va KIN 4,0 mg/l; ngang tỉ lệ mm KIN 4,0 mg/l; ngang tỉ lệ mm z at nh oi 3.12 Tái sinh rễ từ callus sau tuần nuôi cấy môi trường bổ 37 sung KIN 4,0 mg/l; ngang tỉ lệ mm z Callus sau 3,4,5 tuần nuôi cấy với điều kiện nuôi cấy thích hợp @ 3.13 nhiệt đợ 320C ngày sau 250C các ngày 250C m co l gm quá trình ni cấy, tối hồn tồn 39 an Lu n va ac th si MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Cây dưa chuột (Cucumis sativus L.) mợt loại có giá trị kinh tế trồng phổ biến nhiều nơi giới, chúng sử dụng chủ yếu dạng tươi, có thể dùng để chế biến mợt số loại ăn, mợt phần bảo quản chế biến cho mục đích sử dụng lâu dài [10] Ngoài ra, dưa cḥt cịn có giá trị mợt vị thuốc q, dưa cḥt có chứa hàm lượng vitamin C cao mợt số men có lợi kích thích tiêu hố tốt cho sức khỏe Nhiều sản phẩm chế biến sau thu hoạch từ dưa cḥt dưa cḥt muối, đóng hợp ưa chuộng lu an giới Đối với Việt Nam dưa cḥt cịn mợt sản phẩm có giá trị xuất cao, n va sản phẩm từ dưa chuột Việt Nam xuất sang nhiều thị trường rộng tn to lớn như: Hoa Kỳ, Hàn Quốc, Đài Loan, Trung Quốc, Nhật Bản, Singapo… [10] Tính gh chung tháng đầu năm 2017 giá trị xuất dưa cḥt đạt 20 nghìn USD [2] p ie Các tiêu chuẩn các quy định hình thức, chất lượng dưa chuột dùng xuất cao, bên cạnh yếu tố suất giống dưa chuột dùng cho oa nl w mục đích cần đáp ứng yêu cầu khắt khe khác độ dày cùi, màu sắc vỏ, kích thước quả, thời gian bảo quản, hàm lượng chất [13].Thời gian d an lu gần đây, có nhiều cố gắng cơng tác chọn giống trồng, bộ giống nf va dưa cḥt của nước ta cịn hạn chế, giống dùng cho tiêu thụ nợi địa lm ul suất chất lượng thấp, giống dùng cho chế biến ít, hầu hết giống nhập nội từ Nhật Bản, Liên Bang Nga, Thái Lan…[2] z at nh oi Dưa chuột rau ăn ngắn ngày Ở nước ta có thể trồng nhiều vụ năm, cho thu hoạch nhiều đợt, suất trung bình đạt xấp xỉ 17 tấn/ha tương z đương với suất trung bình tồn giới Trồng điều kiện nhà che phủ @ gm nylông ứng dụng công nghệ cao Hà Nội, suất đạt tới 120 tấn/ha, l 1/3 suất dưa cḥt nước ngồi điều kiện tương tự [13] Mặc dù m co rau đa dụng, trồng phổ biến, song suất chất lượng dưa cḥt nước ta cịn thấp, mợt phần cịn sử dụng nhiều giống địa phương, đợ đồng không cao, an Lu mẫu mã kém; giống lai nhập nợi có tính chống chịu yếu với sâu bệnh hại môi n va ac th si 32 yếu để kích thích phân bào sinh trưởng của mô sẹo Mỗi chất riêng lẻ hoặc kết hợp với cho hiệu phát sinh callus khác Sử dụng giống dưa chuột, khử trùng mẫu Cồn 700 30 giây; Javen phút, nụ hoa có kích thước 11- 16 mm để thí nghiệm Kết ảnh hưởng của chất ĐHST thể bảng 3.5 Bảng 3.5 Sự ảnh hưởng 2,4-D đến phát sinh callus STT Nồng độ 2,4-D Tỉ lệ phát sinh (mg/l) callus (%) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 (%) 68,57 a 58,57 b 64,28 a 52,85 b 21,42 c 17,14 c lu ĐC CT1 CT CT CT CT CT Đường kính callus (mm) tuần tuần 5tuần (mm) an n va tn to 3,5 2,8 3,9 3,2 2,3 2,1 7,8 5,2 6,4 6,7 4,1 4,3 10,5 7,6 9,3 8,5 6,7 7,5 p ie gh Chú thích: Dấu “–”: khơng có tượng phát sinh callus d oa nl w nf va an lu 10.5 7.6 lm ul 7.8 9.3 8.5 6.7 6.4 3.9 2.8 z at nh oi 5.2 3.5 2.3 2.1 tuần gm @ tuần 4.3 4.1 3.2 z tuần 7.5 6.7 l Hình 3.5: Sự tăng trưởng kích thước callus m co Qua bảng kết bảng 3.5 cho ta thấy nồng độ 2,4 D từ 0,5 – cho tỷ lệ bao phấn tạo callus Theo Đặng Thị Mai thành công việc tạo callus đơn bội an Lu dưa chuột môi trường MS có bổ sung 1,5mg/l 2,4-D [2] Nhưng thí nghiệm n va ac th si 33 cho phát sinh callus cao mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l 2,4-D có thể khác kiểu gen điều kiện ngoại cảnh trồng giống Callus thu nhỏ gọn, màu vàng nhạt, kết khối Sử dụng 2,4 D nồng đợ 0,5 mg/l cho thí nghiệm sau Trong q trình thí nghiệm nhận thấy 2,4 D ảnh hưởng đến tỷ lệ bao phấn tạo callus mà ảnh hưởng đến tăng trưởng của callus Tuỳ thuộc vào nồng độ 2,4-D bổ sung vào mơi trường khác tốc đợ tăng trưởng callus khác Sự tăng trưởng đường kính callus nhanh nhất, cụ thể đường kính tăng từ 3,510,5 mm bổ sung 0,5 mg/l 2,4-D Khi bổ sung nồng độ 2,4-D từ 1,5 mg/l đến 2,5 mg/l tốc đợ tăng trưởng của callus chậm dần Bổ sung 2,4-D nồng độ 0,5 mg/l 1,5 mg/l cho tốc độ tăng trưởng callus tăng dần lu an 3.5.2 Ảnh hưởng nồng độ 2,4-D KIN đến hiệu tạo callus từ va n nuôi cấy in vitro bao phấn dưa chuột to gh tn Dựa theo kết của thí nghiệm trước, thí nghiệm tiến hành sử dụng 2,4 D nồng độ 0,5 mg/l nồng độ KIN bổ sung vào môi trường 0; 0,2; ie p 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9;1,0 Theo dõi cơng thức thí nghiệm thu kết nl w thể bảng 3.6.: d oa Bảng 3.6 Sự ảnh hưởng 2,4-D KIN đến phát sinh callus Nồng độ KIN (mg/l) 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 nf va an lu z at nh oi lm ul z Tỷ lệ bao phấn tạo callus c 44,29 (%) 75,71 d 68,57 d 32,85 b 45,71 c 24,28 a - l gm @ STT Đối chứng CT CT CT CT CT CT CT CT CT m co Chú thích: Dấu “–”: khơng có tượng phát sinh callus an Lu n va ac th si 34 lu Hình 3.6 Callus phát sinh mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l 2,4-D an 0,2 mg/l KIN quan sát kính hiển vi Thanh ngang tỷ lệ mm va n Kết cho thấy bổ sung 2,4 D kết hợp với KIN vào mơi trường tạo callus có tn to hiệu cao so với sử dụng 2,4 D Môi trường tạo callus hiệu từ nuôi gh cấy bao phấn dưa cḥt MS có bổ sung 3% sucrose, 0,8% agar, pH = 5,75 p ie 0,5 mg/l 2,4-D 0,2- 0,3 mg/l KIN (cảm ứng tạo callus 75,71% 68,57% với callus w thu màu vàng nhạt) Với nồng độ KIN từ 0,7 mg/l trở lên, bao phấn không oa nl tạo callus Kết thu khác với thí nghiệm trước d Theo kết nghiên cứu của Nguyễn Thị Thanh Dung năm 2007 cho thấy lu an kết hợp mg/l 2,4-D với mg/l KIN cho hiệu tạo callus cao dưa hấu nf va Tuy nhiên, nghiên cứu của H.G Ashok Kumar giống dưa chuột Calypso lm ul Green Long cho thấy tạo callus môi trường có bổ sung mg/l 2,4-D hoặc mg/l 2,4-D + mg/l BAP cho kết tốt z at nh oi 3.5.3 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh từ callus bao phấn dưa chuột z @ gm BAP chất điều tiết sinh trưởng có tác dụng tích cực việc kích thích l phân chia tế bào, kéo dài thời gian sinh trưởng của mô phân sinh làm hạn chế m co già hóa của tế bào Trong tái sinh từ callus nhân giống in vitro, BAP có vai trò nhân chất lượng chồi an Lu đặc biệt quan trọng việc kích thích hình thành chồi non, định hệ số n va ac th si 35 Bảng 3.7 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh từ callus bao phấn dưa chuột Nồng độ chất KTST Tỷ lệ mô sẹo tạo rễ (%) Màu sắc, số lượng, kích thước rễ (mm) (mg/l) 47,61 a 27,46 b 77,77 c 41,26 d 23,80 e - 0,5 BAP 1,0 BAP 1,5 BAP 2,0 BAP 2,5 BAP Màu trắng, 1-3 rễ, dài 5-10 Màu trắng,1-2 rễ, dài 3-6 Màu vàng, 4- rễ, dài 10Màu trắng, 2-3 15 rễ, dài 6-10 Màu trắng,1- rễ, dài 3-6 Khơng tạo rễ lu Chú thích: Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa an thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 n va Môi trường nuôi cấy bổ sung BAP (1,0 mg/l) cho tỷ lệ tạo rễ đạt cao chiếm gh tn to Đối với phương án đối chứng không bổ sung BAP mẫu tạo rễ (47,61%) p ie 77,77% Rễ thu màu vàng, 4-5 rễ, dài 10-15 mm Ở môi trường nuôi cấy bổ sung BAP (2,5 mg/l) callus không tạo rễ Cịn mơi trường có bổ sung BAP oa nl w (1,5 mg/l) đạt giá trị trung bình 47,61 % d Qua đó, mơi trường MS có bổ sung 1,0 mg/l BAP cho hiệu tạo rễ đạt nf va an lu cao z at nh oi lm ul z @ Hình 3.7 Tái sinh rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung gm m co l BAP 1,0 mg/l, ngang tỉ lệ mm an Lu n va ac th si 36 Hình 3.8 Tái sinh rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung BAP 1,0 mg/l, ngang tỉ lệ mm lu an n va tn to Hình 3.9 Rễ từ phôi sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung BAP 1,0 mg/l ie gh tái sinh trở lại mô sẹo; ngang tỉ lệ mm p 3.5.4 Kết khảo sát ảnh hưởng KIN NAA đến khả tái sinh nl w từ callus bao phấn dưa chuột d oa Kinetin thường sử dụng nuôi cấy tế bào thực vật để kích thích nf va auxin thấp hơn) an lu hình thành callus (kết hợp với auxin) tái tạo các mơ chồi từ callus (có nồng đợ Bảng 3.8 Ảnh hưởng KIN NAA đến khả tái sinh từ callus bao lm ul phấn dưa chuột Tỷ lệ callus tạo rễ Màu sắc, số lượng, kích thước KTST (mg/l) (%) rễ (mm) 60,71 a Màu trắng, 4-5 rễ, dài 20-25 1,0 KIN + 0,01 NAA 19,04 b 2,0 KIN + 0,02 NAA 35,71 c 3,0 KIN + 0,03 NAA 47,61 d Màu trắng, 3-4 rễ, dài 12-17 4,0 KIN + 0,04 NAA 77,38 e Màu trắng, 5-7 rễ, dài 25-30 5,0 KIN + 0,05 NAA 5,95 f Màu trắng, 1-2 rễ, dài 7-12 z at nh oi Nồng độ chất z gm @ Màu trắng, 1-3 rễ, dài 10-15 m co l Màu trắng, 3- rễ, dài 10-15 an Lu n va ac th si 37 Chú thích: Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p