BỘ LAO ĐỘNG THƯƠNG BINH XÃ HỘI TRƯỜNG CAO ĐẲNG Y TẾ HÀ NỘI BÀI GIẢNG CÁC XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC TRUYỀN MÁU (QUYẺN 1) (SÁCH ĐÀO TẠO CAO ĐANG KỸ THUẬT Y HỌC) CHỦ BIÊN TS PHẠM QUANG VINH GS TSKH ĐÔ TRUNG P[.]
BỘ LAO ĐỘNG THƯƠNG BINH XÃ HỘI TRƯỜNG CAO ĐẲNG Y TẾ HÀ NỘI BÀI GIẢNG CÁC XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC TRUYỀN MÁU (QUYẺN 1) (SÁCH ĐÀO TẠO CAO ĐANG KỸ THUẬT Y HỌC) CHỦ BIÊN: TS PHẠM QUANG VINH GS TSKH ĐƠ TRUNG PHẤN Trình độ đào tạo : Cao đẳng Ngành đào tạo : Kỹ thuật xét nghiệm y học Mã Ngành : XN05 Tên môn học : Huyết học Hà Nội - 2021 T Bộ LAO ĐỘNG THƯƠNG BINH XÃ HỘI TRƯỜNG CAO ĐẴNG Y TÉ HÀ NỘI BÀI GIẢNG CÁC XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC TRUYỀN MÁU (QUYẾN 1) (SÁCH ĐÀO TẠO CAO ĐANG KỸ THUẬT Y HỌC) CHỦ BIÊN: TS PHẠM QUANG VINH GS TSKH ĐỎ TRUNG PHẤN Tham gia biên soạn TS Phạm Quang Vinh - Chủ biên GS TSKH Đồ Trung Phấn - Chủ biên Thư ký Ths Hà Thị Nguyệt Minh CN Phùng Thị Phương Chiêm Hà Nội - 2021 Lời nói đâu Trong nhũng năm qua, với bùng nổ khoa học kỹ thuật, y học giói nước phát triển mạnh, chất lượng chuẩn đoán điều trị bệnh nâng lên rõ rệt Đe phục vụ cho công tác giáng dạy trường, biên soạn sách Huyết học - Truyền máu” để phục vụ cho đối tượng cao đẳng kỹ thuật y học, sách gồm phần lý thuyết thực hành Mỗi thực hành có phần: Mục tiêu, nguyên lý kỹ thuật, chuẩn bị trang thiết bị hoá chất sinh phẩm, tiến hành kỹ thuật có ảnh hình minh họa, đánh giá kết quá, sai sót gặp, câu hỏi lượng giá Tất cá nhằm thực phương pháp giảng dạy tích cực Bộ giáo dục Đào tạo Sách không đáp ứng cho nhu cầu đào tạo, học viên có trình độ cao đẳng kỳ thuật làm việc labo Huyết học - Truyền máu từ tuyến trung ương tới tuyến sở mà cần thiết cho thầy thuốc thực hành bệnh viện Trong q trình biên soạn khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong bạn học viên độc giả góp ý Xin chân thành cám ơn! TM nhóm biên soạn Chủ biên GS TSKH Đỗ Trung Phấn DANH MỤC CHỦ VIẾT TẮT BC Bạch cầu EDTA Ethylene Diamine Tetraacetate ELISA Enzyme Linlzed Immuno Storbent Assay (thử nghiệm miễn dịch gắn men) HBV Hepatitis B Virut (virut viêm gan B) Hb Hemoglobine HCL Hồng cầu lưới HCN Hồng cầu có nhân HCV Hepatis c Virut (virut viêm gan C) HIV Human Immunodeficiency Virut (virut gây suy giám miễn dịch người) 10 MCH Mean corpuscular Hemoglobine 11 MCHC Mean corpuscular Hemoglobine Concentration 12 MCV Mean corpuscular Volume 13 MID Mixed cell 14 Pit Platelet 15 TBCN Te bào có nhân MỤC LỤC Bài Hình thái dịng hồng Cầu Bài Hình thái dịng bạch cầu 26 Bài Thiếu máu tan máu 53 Bài 64 Bài Lơxêmi kinh Đếm số lượng hồng cầu 72 Bài Đếm số lượng bạch cầu 80 Bài Đếm số lượng hồng cầu lưới 87 Bài Định lượng huyết sắc tố 93 Bài Đo tốc độ máu lắng 97 Bài 10 Nhận định hình thái loại bạch cầu 101 Bài 11 Định công thức bạch cầu phổ thông 107 Bài 12 Đo thể tích khối hồng cầu 112 Bài 13 Xét nghiệm tế bào nước tiểu 116 Bài 14 Huyết đồ 125 BÀI 1: HÌNH THÁI DỊNG HỊNG CẢU Thời gian LT: Mục tiêu học tập Kiên thức Mơ tả đặc điểm hình thái hồng cầu giai đoạn để hiểu trình phát triển bình thường dịng hồng cầu Trình bày cấu trúc hồng cầu trưởng thành bình thường Liệt kê số dạng bất thường hồng cầu Năng lực tự chủ trách nhiệm Thể tính tích cực học tập, tự học, tìm kiếm thơng tin, tổng họp kiến thức nhằm phát triển lực cho thân Các giai đoạn phát triển dòng hồng cầu: -Ệpr Promyẻlocyte Proerythroblast J Bas hilic erythịroblast BasoAhilic myelocyte Eosinophilic myelocyte Neutrophilic myelocyte & Metamyelocyte Normoblast Polychromatophilic x'-' erythrocyte Erythrocyte Band & Basophil Neutrophil Eosinophil Hình Sơ đồ phát triển dòng hồng cầu trình sinh máu 1.1 Nguyên tiền hồng cầu (proerythroblast): tế bào sớm dòng hồng cầu, phân chia từ CFE-U (đon vị tạo cụm hồng cầu- ngun bào máu), có đường kính 15-30 pm, hình trịn bầu dục, nhân chiếm 8/10 tế bào, lưới màu nhân thơ, khối chất nhiễm sắc dày đặc, có 1- hạt nhân, xung quanh nhân có liềm sáng ngăn cách nhân nguyên sinh chất Bào tương ưa base mạnh, bào tương khơng có hạt, có - già túc Te bào có khả phân bào mạnh Trong tủy xương tế bào chiếm khoảng 0- 0.5% tổng số tế bào tủy Hình Nguyên tiền hồng cầu 1.2 Nguyên hồng cầu ua bazo’ (basophilic erythroblast): Được phân chia từ nguyên tiền hồng cầu, kích thước nhân nhỏ hơn, khối nhiễm sắc dày đặc, bắt màu tím đỏ, nhân có đường nứt hình nan hoa xe đạp hay hình bàn cờ, khơng có hạt nhân Ngun sinh chất ưa baso, màu xanh da trời Giai đoạn tế bào phân chia mạnh, chiếm 1- 7% tế bào tủy Hình Nguyên hồng cầu ưa bazơ 1.3 Nguyên hồng cầu đa sac (polychromatophilic erythroblast): Kích thước 9-12 |im, khơng có khả phân chia, biệt hóa thành nguyên hồng cầu ưa acid hồng Cầu lưới Bào tương có màu huyết sắc tố pha trộn với màu ưa base Nhân tế bào nhỏ dần, nằm trung tâm bào tương, lưới màu nhân bắt đầu đơng vón lại tạo nên hình ảnh "cục" đặn (khối chất nhiêm sắc thô) Chiếm 3- 14% tế bào tủy người bình thường Hình Nguyên hồng cầu đa sắc 1.4 Nguyên hồng cầu ưa acid (Acidophylic erythroblast): có đường kính 8- pm Nhân trịn nhỏ, lưới màu thơ nằm tế bào bắt màu tím sẫm Bào tương ưa base giảm, huyết sắc tố hình thành làm cho ngun sinh chất có màu đỏ hồng gần giống màu hồng cầu trưởng thành Chiếm 10- 20% tế bào tủy * • (■ © Hình Ngun hồng cầu ưa acid 1.5 Hồng cầu lưới (Reticulocyte): Là hồng cầu đặc biệt chuyển từ hồng cầu có nhân thành hồng cầu trưởng thành khơng nhân, cịn lại vết tích nhân dạng hạt lưới Khi nhuộm xanh cresyl thấy lưới sợi có hạt bắt màu xanh đen, cịn gọi hình hạt dây Te bào non hạt lưới nhiều Trong máu ngoại vi bình thường có 0,5- % tủy có 1- 1,5% Ở trẻ sơ sinh tỷ lệ cao hơn.số lượng hồng cầu lưới tăng nhiều hay tùy thuộc vào khả sinh máu tủy xương Trong trường họp tan máu tỷ lệ tăng cao Hình Hồng cầu lưới 1.6 Hồng cầu trưởng thành (Erythrocyte): Hồng cầu lưới sau ribosom trở thành hồng cầu trưởng thành Các hồng cầu có kích thước 7-8 ụm, có hình đĩa lõm mặt thuận lợi cho vận chuyển trao đổi khí, bắt màu hồng nhạt Trên tiêu nhuộm giemsa hồng cầu có hình trịn, bắt màu hồng, trung tâm nhạt màu Hình 7: Hồng cầu trưởng thành Q trình biệt hóa tồn dịng hồng cầu 3-5h Hồng cầu lưới giải phóng vào tuần hồn sau -2h Cấu trúc hồng cầu trưởng thành yếu tố ảnh hưởng đến đòi sổng hồng cầu: 2.1 Cấu trúc hồng cầu trưởng thành: Tnn VÌAVƯ Hình 8: Thiết đồ hồng cầu Hồng cầu có hình đĩa lõm mặt, có đường kính trung bình 7,5 pm, chiều dày pm trung tâm 2,5 |im ngoại vi Hồng cầu tế bào có hình dạng cấu trúc đặc biệt Hồng cầu khơng có nhân bào quan, cấu trúc hồng cầu gồm hemoglobin khung tế 10 Băng kiểm Phương pháp vi lượng Các bước tiến hành STT Tiêu chuẩn phải đạt A Chuẩn bị Mặc áo Blu, đội mũ, găng tay, đeo trang y tế Trang phục đầy đủ Chuẩn bị dụng cụ phương tiện Phương tiện đầy đủ, xếp theo thứ tự theo yêu cầu họp lý B Tiíỉn hành Kiểm tra đối chiếu mầu máu với phiếu xét nghiệm Tên, tuổi, địa Lắc máu trước làm - Lấy máu vào ống vi tích : mao dẫn máu vào ống đến khoảng 3/4 ống vi thể tích (nếu dùng máu mao mạch Máu hồ Lấy máu tỷ lệ mẫu máu với phiếu xét nghiệm ống vi thể tích tráng heparin) - Lau máu phía ngồi ống vi thể tích Bịt kín đầu khơng dính máu đất sét hay chất matis - Đe ống vào rãnh có đánh số máy ly tâm vi thể tích Đầu kín (5-7mm) Đế tế bào hồng cầu lắng xuống bịt kín chạm vào mặt vách mặt phang - Ly tâm 10.000 vòng/ phút X phút Đo kết quả: Đo thước đọc vi Thể tích hồng cầu Gắn chất matis có ý nghĩa số bệnh tích c Kết thúc Ghi kết vào phiếu xét nghiệm, sổ Ghi xác 10 lưu Thu dọn dụng cụ, tháo găng, rửa tay Ngăn nắp, vị trí 114 Đạt Khơngđạt BÀI 13: XÉT NGHIỆM TẾ BÀO NƯỚC TIỂU Thời gian TH: tiết Mục tiêu học tập - Kiến thúc Trình bày nguyên tắc xét nghiệm tìm tế bào nước tiểu - Kỹ Thực kỳ thuật tìm tế bào nước tiểu thành thạo, xác - Năng lực tự chủ trách nhiệm Thể có lực, tự chủ để thực kỹ thuật xét nghiệm huyết học Nguyên lý Nước tiểu binh thường có số tế bào biểu mơ, tinh thể thấy xuất nhiều hồng cầu, bạch cầu, trụ cầu bệnh lý Dụng cụ, hóa chất - Kính hiển vi - Máy ly tâm - Pipette Pasteur - Lam kính, kính 115 Quy trình kỹ thuật Thường lấy nước tiểu vào buổi sáng sau bỏ phần đầu STT Các bước tiến hành Tiêu chuẩn Ỷ nghĩa phải đạt A Chuẩn bị An toàn cho người Trang phục đầy đủ theo yêu cầu làm xét nghiệm Chuẩn bị dụng cụ phương Giúp tiến hành Dụng cụ, phương tiện đầy đủ, xếp theo thứ tự tiện thuận lợi họp lý Mặc áo Blu, đội mũ, găng tay, đeo trang y tế B Tiến hành Kiểm tra đối chiếu với phiếu Tránh lẫn Kiểm tra mầu với phiếu xét nghiệm xét nghiệm bệnh nhân Lắc ống tiếu, cho vào Làm tăng độ tập ống nghiệm khoảng ml, ly trung tế bào Đủ số lưọng, tốc độ , thời nhầm gian tâm 2000 vòng/ phút vịng tối thiểu phút Nếu khơng ly tâm để lắng 1-2 Đổ phần trên, hút giọt Chuẩn bị để quan cặn, nhỏ lên lam kính Đậy sát tế bào nước tiểu Làm kỳ thuật kính lên giọt cặn cho lan Đặt lên kính hiển vi đọc Quan sát Tìm vi trường nhiều tế bào vật kính X 10 X 40 vi trường Kiếm tra khoảng 20 - 30 vi Quan sát, tìm kỳ tế Nhận định tế bào nước tiểu trường, số vi trường khơng bào hon 10 Nhận định kết Gợi ý tìm nguyên nhân gây bệnh Nhận định tế bào, cặn nước tiểu thận c Kết thúc Ghi kết vào phiếu xét Để lưu trả kết Ghi xác nghiệm, sổ lưu 10 Thu dọn dụng cụ, tháo găng, Sạch sẽ, gọn gàng rủa tay 116 Ngăn nắp vị trí Lưu ý: Có thể nhuộm cặn lắng nước tiểu thuốc nhuộm Sternheimer -malbin Nhận định kết 4.1 Tế bào - Hồng cầu (ít) : HC/ vi trường (+) : 5- 10 HC / vi trường (++) : 10 -20 HC / vi trường (+++) : > 50 HC/ vi trường - Bạch cầu (ít) : 10 BC / vi trường (+) : 10-20 BC / vi trường (++) : ưên 20 BC / vi trường (+++) : ưên 50 BC / vi trường - Tinh trùng - Tế bào biểu mơ niệu đạo: Tế bào to hình đa diện, nhân rõ - Tế biểu mô bàng quang: Tế bào to bình vợt, nh©n rõ - Tế bào biểu mơ thận: Tế bào to trung bình, hình bầu dục, nhân ưòn rõ 4.2 Trichomonas Trong bệnh viêm âm đạo Ký sinh trùng xâm nhập vào bàng quang lần vào nước tiểu 4.3 Trụ niệu cấu tạo bới chất nhầy, tế bào máu qua ống thận, đọng lại mang khuân ống thận Dựa vào thành phần cấu tạo người ta chia hai loại trụ 4.3.1 Trụ khơng có tế hào - Trụ ưong: Cịn gọi trụ thấu quang, hình dài, bờ nhẵn, ưong suốt Nước tiểu bình thường thải 3000 trụ vòng 12 Trụ tăng lao động nặng, sốt, sau gây mê ether Gặp nhiều nghĩ viêm thận Vi trụ tan ưong nước nên gặp ưong nước tiểu loãng - Trụ sáp (trụ kéo): Ngắn to trụ ưong, óng ánh chiết quang nhiều, màu xám thường có vết nứt Người ta cho nằm lâu ống thận nên bị khô nên tạo thành trụ sáp Hiếm gặp - Trụ xơ: Màu vàng nhạt, ưông có nhiều sợi ghép lại kéo dài, thường gặp frong viêm thận cấp - Trụ mỡ: Do bào tương tế bào thoái hoá, mỡ ưong máu tiết bệnh nhân tiểu lipid lắng đọng lại tạo thành Thường gặp ưong thận nhiễm mỡ 4.3.2 Trụ tế bào 117 - Trụ hạt: giống trụ mặt có hạt to nhỏ bám lên, tế bào hạt cholesterol tế bào thoái hoá tạo thành Thường gặp viêm thận cấp - Trụ biểu mơ: Cịn gọi trụ liên bào gồm nhũng tế bào ống thận tạo thành - Trụ bạch cầu: bạch cầu hạt thoái hoá tạo thành, thường đứt thành đoạn ngắn Biểu tình trạng viêm, nhiếm khuẩn, gặp viêm cầu thận - Trụ hồng cầu gọi trụ máu: Do hồng cầu kết tụ, bờ trụ thường lởm chớm không Biểu tinh trạng chảy máu thận, viêm thận cấp tính, đợt tiến triển cũa viêm thận mạn tính Khi đọc vật kính X 10, trụ đánh sau: : trụ : trụ /100 vi trường : trụ / vi trường : 10 trụ / vi trường : 100 trụ / vi trường 4.4 Cặn tinh thể - Sulfat calci: hình kim dài, hoa thị, khơng màu - Calcium oxalat: Hình phong bì, hình tám góc, hình củ lạc thường nhỏ Tan HCL Nước tiểu đục, cặn lắng màu trắng Nguyên nhân dùng nhiều thức ăn có oxalat, đái tháo đường, xơ gan, rối loạn thần kinh, sạn, sỏi thận - Carbonat calci: Hình cầu, hình hạt khơng màu tan acid CH3COOH 30% cho bọt - Cặn phosphat: Hình chừ nhật, dương xỉ, hình Kích thước 30 - 50pm Khơng màu, chiết quang - Amorphous urat (urat vơ thể): thường hột màu gạch , bị hịa tan bới sức nóng tan NaOH đậm đặc Xuất nagy sau tiểu gặp sốt cao, suy tim, hay có sỏi urat - Acid uric: Hình thoi, mũi giáo, hoa thị, hình sao, màu vàng hay nâu đến không màu Gặp bệnh lý nặng thận phản ứng toan nước tiểu - Amonium urat: Hình cầu gai, xương rồng, hình bó kim, kích thước 20pm, màu vàng Tác dụng với HC1 tạo thành acid uric - Huppuric acid: Hình lăng trụ hay đìa móng, khơng màu đến màu vàng Tan CH3COOH 30% ether - Calcium phosphat: Hình tam giác, hình hạt, góc nhọn, chụm thành hoa thị Tan ưong acid CH3COOH 30% Nước tiểu đục màu sữa nhiều chất điện giải người bị suy nhược thần kinh 118 - Tyrosin: Hình kim nhỏ, khơng màu, tan HC1 Hiếm gặp Gặp suy dinh dưỡng, bệnh gan cấp tính, nơn nhiều thai nghén - Triple phosphate: Hình nắp quan tài, hình lăng trụ, hình lơng chim, hình tan HC1 đậm đặc CH3COOH 30% 4.5 Các tạp chất khác - Do lấy nước tiểu không kỹ thuật - Dụng cụ bẩn, tiêu bẩn - Sợi chất nhầy - Lông, sợi bông, bọt khí Những điều cần ý - Phải ghi rõ ràng loại mẫu, cách lấy mầu: Mầu lấy tự nhiên, mẫu lấy qua đặt sonde, mẫu lấy đầu, hay cuối bãi, mẫu lấy sau phẫu thuật đường tiết niệu - Vệ sinh trước lấy mẫu nước tiểu - Dụng cụ lấy mầu phải đảm bảo khô, - Mầu xét nghiệm phái đưa đến labo sau lấy, để lâu hồng cầu, bạch cầu, tế bào biểu mô trụ giảm vi khuẩn men tăng Tốt vịng - Ln ln nhớ điều tra kinh nguyệt gây sai sót nghiêm trọng hồng cầu, tế bào biểu mơ vi khuẩn ánh hướng đến kết xét nghiệm trọng sau hành kinh vài ngày - Ống nước tiểu phải đậy nút kín để tránh đổ vãi lần tạp khuẩn Bảng kiểm Tiêu chuẩn Các bước tiến hành STT Đạt phải đạt A Chuẩn bị Mặc áo Blu, đội mũ, găng tay, đeo trang y tế Chuấn bị dụng cụ phương tiện An toàn cho người làm xét nghiệm Dụng cụ, phưong tiện đầy đủ, xếp theo thứ tự họp lý B Tiến hành Kiểm tra đối chiểu với phiếu Kiểm tra mẫu xét nghiệm với phiếu xét nghiệm Lắc ống tiếu, cho vào Đủ số lưọng, tốc ống nghiệm khoảng mí, ly độ, thời gian tâm 2000 vòng/ phút vòng tối thiểu phút Nếu 119 Khơng đạt khơng ly tâm để lắng 1-2 Đổ phần trên, hút giọt Làm kỹ thuật cặn, nhỏ lên lam kính Đậy kính lên giọt cặn cho lan Đặt lên kính hiển vi đọc vật kính xio X 40 trường Kiểm tra khoảng 20 - 30 vi Để có số lượng đủ trường, số vi trường khơng hon 10 Nhận định kết Tìm vi tin cậy Nhận định tế bào, cặn nước tiểu c Kết thúc Ghi kết vào phiếu xét Ghi nghiệm, sổ lưu xác 10 Thu dọn dụng cụ, tháo găng, Ngăn nắp rủa tay vị trí Một số hình ảnh cặn nước tiểu Tế bào bạch cầu, hồng cầu Hình ánh trụ hồng cầu 120 Trụ tế bào bì Hình ảnh trụ tể bào Hình 1: Hình ảnh số tế bào cặn lắng nước tiểu Tế bào biểu mơ thận Hình ảnh trụ sáp 121 Acid uric ,Aimominsim mmtt Hình 2: Hình ảnh số tinh cặn lẳng nước tiểu Calci oxalat Hypuric acid 122 Tinh thể tyrosin Calcium phosphat Calcium phosphat Hình 4: Hình ảnh số tinh thể, tế bào cặn lắng nước tiểu 123 BÀI 14: HUYẾT ĐÒ Thời gian TH: 15 Mục tiêu học tập - Kiên thúc Trình bày nguyên tắc làm huyết đồ - Kỹ Thực kỳ thuật huyết đồ thành thạo Nhận định số huyết đồ bình thường bệnh lý - Năng lục tự chủ trách nhiệm Thể có lực, tự chủ để thực kỹ thuật xét nghiệm huyết học Nguyên tắc Nhiều tình trạng sinh lý bệnh lý thể phản ánh qua số lượng, hình thái thành phần tế bào máu Huyết đồ tổng kết tồn biểu nên giúp ích nhiều cho lâm sàng chẩn đốn bệnh lý Các thơng số cần thiết gồm: - Số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu - Hematocrit - Lượng huyết sắc tố - Tỷ lệ phần trăm hồng cầu lưới - Công thức bạch cầu, đặc điểm hình thái tế bào hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, độ tập trung tiểu cầu - Các số hồng cầu: MCV, MCH, MCHC Dụng cụ - thuốc thử 2.1 Dụng cụ - Dụng cụ lấy máu tĩnh mạch - Dụng cụ dùng đếm số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu - Dụng cụ đo thể tích khối hồng cầu, kéo lam, nhuộm Wright - Dụng cụ định lượng huyết sắc tố - Kính hiển vi quang học 124 2.2 Thuốc thử - Dung dịch pha loãng để đếm hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu - Thuốc nhuộm giemsa - Nước cất - Dầu cedar Quy trình kỹ thuật Các bưó’c tiến hành STT Ý nghĩa Tiêu chuẩn phái đạt A Chuẫn bị Mặc áo Blu, đội mũ, An toàn cho Trang phục đầy đủ găng tay, đeo trang y người làm xét theo yêu cầu tế nghiệm Chuấn bị dụng cụ Giúp tiến hành phưong tiện thuận lợi Dụng cụ, phương tiện đầy đủ, xếp theo thứ tự họp lý B TiíIn hành - Kiểm tra đối chiếu mẫu Tránh nhầm lẫn Kiểm tra mẫu với máu với phiếu xét nghiệm bệnh nhân phiếu xét nghiệm - Tính số lượng hồng cầu, bạch - Đêm xác với sai số