Nhận dạng và đánh giá mức độ đa dạng di truyền loài râu hùm (tacca chantrieri andré) ở vqg ba vì bằng kỹ thuật sinh học phân tử

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP TRỊNH THỊ THÙY LINH NHẬN DẠNG VÀ ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ ĐA DẠNG DI TRUYỀN LOÀI RÂU HÙM (Tacca chantrieri André) Ở VQG BA VÌ BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS VŨ ĐÌNH DUY TS HÀ BÍCH HỒNG Hà Nội, 2022 i CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Đề tài nghiên cứu “Nhận dạng đánh giá mức độ đa dạng di truyền loài Râu hùm (Tacca chantrieri André) VQG Ba Vì kỹ thuật sinh học phân tử” Đây đề tài nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học TS Vũ Đình Duy TS Hà Bích Hồng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực, chưa công bố cơng trình khác Nếu nội dung nghiên cứu không trùng lặp với cơng trình nghiên cứu cơng bố, tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm tuân thủ kết luận đánh giá luận văn hội đồng khoa học Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Người cam đoan Trịnh Thị Thùy Linh ii LỜI CẢM ƠN Đề tài nghiên cứu tơi thực phịng thí nghiệm Viện Sinh thái Nhiệt đới, Trung tâm Nhiệt đới Việt – Nga Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, trường Đại học Lâm nghiệp Qua đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Viện tạo điều kiện để công việc chuyên môn đề tài tiến hành thuận lợi Khi thực đề tài, nhận động viên giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, bạn bè đồng nghiệp Sự ủng hộ mặt tinh thần dẫn, góp ý, chia sẻ kinh nghiệm, tài liệu vô quý báu khiến thực cảm kích, biết ơn Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Đình Duy TS Hà Bích Hồng, người thầy tận tình hướng dẫn tơi q trình hồn thiện luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn góp ý, dẫn, chia sẻ kinh nghiệm cán nghiên cứu thuộc Viện Sinh thái Nhiệt đới, Trung tâm Nhiệt đới Việt - Nga Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, trường Đại học Lâm nghiệp giúp đỡ tơi nhiều q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn cán sở đào tạo sau Đại học trường Đại học Lâm nghiệp tận tâm truyền đạt kiến thức cho tơi suốt khóa học Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy làm việc giảng dạy khoa Công nghệ sinh học tạo điều kiện giúp đỡ trình học tập Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình người thân ln bên tôi, động lực để vượt qua khó khăn để hồn thành luận văn Đề tài hỗ trợ đề tài cấp sở (2021-2022) viện Sinh thái Nhiệt đới, Trung tâm Nhiệt đới Việt – Nga Chủ nhiệm TS Vũ Đình Duy Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Học viên Trịnh Thị Thùy Linh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi NHỮNG TỪ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Nghiên cứu đặc điểm sinh học trạng phân bố loài thuộc chi Râu hùm (Tacca) 1.2 Mã vạch ADN ứng dụng định loại loài chi Râu hùm7 1.3 Một số thị phân tử dùng phân tích đa dạng di truyền quần thể loài thực vật 11 1.4 Nghiên cứu đa dạng di truyền loài chi Râu hùm 15 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Nội dung nghiên cứu 16 2.2 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 16 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu: Loài Râu hùm phân bố tự nhiên VQG Ba Vì, Hà Nội 16 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 16 2.2.3 Hóa chất, trang thiết bị dụng cụ nghiên cứu 17 2.2.4 Phương pháp điều tra ngoại nghiệp 17 2.2.5 Nghiên cứu phịng thí nghiệm 17 2.2.6 Phương pháp xử lý số liệu 20 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Xác định trình tự nucleotide vùng gen lục lạp (matK) gen nhân (ITS- iv rDNA) khả nhận diện loài Râu hùm VQG Ba Vì 22 3.1.1 Tách chiết ADN tổng số tinh ADN từ 30 mẫu mơ (lá) lồi Râu hùm 22 3.1.2 Nhân vùng gen nhân (ITS) vùng gen lục lạp (matK) kỹ thuật PCR cho loài Râu hùm VQG Ba Vì 24 3.1.3 Trình tự nucleotide hai vùng gen (ITS matK) lồi Râu hùm VQG Ba Vì 27 3.1.4 Đặc điểm ADN loài Râu hùm VQG Ba Vì dựa trình tự nucleotide số vùng gen ITS-rDNA matK 28 3.2 Đánh giá mức độ đa dạng di truyền lồi Râu hùm VQG Ba Vì thị phân tử ISSR 36 3.2.1 Thực phản ứng PCR-ISSR cho lồi Râu hùm VQG Ba Vì 36 3.2.2 Xác định mức độ đa dạng di truyền cho lồi Râu hùm VQG Ba Vì 37 3.2.3 Xác định hệ số tương đồng di truyền khoảng cách di truyền cá thể Râu hùm VQG Ba Vì 40 3.2.4 Xây dựng phát sinh chủng loại cá thể Râu hùm VQG Ba Vì 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ……………………………………………45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự thông tin cặp mồi nghiên cứu 18 Bảng 2.2 Trình tự nucleotide 20 thị ISSR sử dụng nghiên cứu 19 Bảng 3.1 Giá trị OD hàm lượng ADN 30 mẫu Râu hùm 23 Bảng 3.2 Thành phần nucleotide lồi Râu hùm dựa trình tự ITS 29 Bảng 3.3 Khoảng cách di truyền mẫu nghiên cứu 14 loài chi lấy Genbank sở phân tích vùng gen ITS 30 Bảng 3.4 Thành phần nucleotide lồi Râu hùm dựa trình tự matK 32 Bảng 3.5 Khoảng cách di truyền mẫu nghiên cứu 15 loài chi lấy Genbank sở phân tích vùng gen matK 33 Bảng 3.6 So sánh khả phân biệt loài Tacca dựa vùng gen ITS matK 35 Bảng 3.7 Giá trị PIC, tỷ lệ phân đoạn DNA đa hình lồi Râu hùm phân tích với 15 thị ISSR 38 Bảng 3.8 Thông số đa dạng di truyền quần thể Râu hùm phân tích với 15 thị phân tử ISSR 40 Bảng 3.9 Bảng hệ số tương đồng 30 mẫu Râu hùm nghiên cứu 41 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Đa dạng đặc điểm sinh sản loài Tacca (Zhang et al., 2011) Hình 3.1 Kết kiểm tra DNA tổng số 30 mẫu loài Râu hùm gel agarose 1% 22 Hình 3.2 Kiểm tra DNA tổng số sau tinh đại diện cho 30 mẫu Râu hùm gel agarose 1% 22 Hình 3.3 Kết kiểm tra điện di sản phẩm PCR đoạn gen ITS gel Agarose 1,5% (M: DNA ladder; 1-30: thứ tự mẫu Râu hùm) 25 Hình 3.4 Sơ đồ đại điện peak giải trình tự vùng gen ITS-rDNA 30 mẫu Râu hùm 26 Hình 3.5 Kết kiểm tra điện di sản phẩm PCR đoạn gen matK gel Agarose 1,5% (M: DNA ladder; 1-30: thứ tự mẫu Râu hùm) 26 Hình 3.6 Sơ đồ đại điện peak giải trình tự vùng gen matK 30 mẫu Tacca sp 27 Hình 3.7 Mối quan hệ họ hàng mẫu nghiên cứu với loài chi sở phân tích trình tự nucleotide vùng gen nhân (ITS) phương pháp ML Các số nhánh giá trị bootstrap 31 Hình 3.8 Mối quan hệ họ hàng mẫu nghiên cứu với loài chi sở phân tích trình tự nucleotide vùng gen lục lạp (matK) phương pháp ML Các số nhánh giá trị bootstrap 34 Hình 3.9 Hình ảnh điện di cặp mồi ISSR đa hình gel agarose 1,5% (số 130 ký hiệu mẫu; M- thang ADN ladder) 37 Hình 3.10 Mối quan hệ di truyền 30 mẫu Râu hùm VQG Ba Vì 43 Hình 3.11 Tọa độ khơng gian (PCoA) 30 mẫu Râu hùm VQG Ba Vì 43 vii NHỮNG TỪ VIẾT TẮT ADN Axit deoxyribonucleit (Deoxyribonucleic acid) bp Cặp bazơ (base pair) CR Loài nguy cấp EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid Genbank Ngân hàng gen quốc tế NCBI Trung tâm thông tin công nghệ sinh học quốc gia (National Center for Biotechnology Information) PCR Phản ứng chuỗi polymerase (Polymerase Chain Reaction) SSR Trình tự lặp đơn giản (Simple Sequence Repeats) ISSR UV Ánh sáng tử ngoại VU Loài nguy cấp Quần thể BV VQG Ba Vì, Hà Nội MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Thống kê từ Danh lục mầm giới cho thấy Chi Râu hùm (Tacca, họ Râu hùm Taccaceae) có 19 lồi giới (http://apps.kew.org/wcsp/home.do) Ở Việt Nam, có lồi: Râu hùm (Tacca chantrieri), Ngải rợm (T integrifolia), Râu hùm chân vịt (T palmata), Củ nưa (T leontopetaloides), Hồi đầu (T plantaginea), Râu hùm lớn (T subflabellata) Râu hùm khánh hòa (T khanhhoaensis), phân bố nơi đất ẩm ven suối tầng tán rừng nhiệt đới ẩm Trong số đó, loài Râu hùm lớn Ngải rợm nguồn dược liệu quan trọng xếp vào bậc nguy cấp (VU A1a,c,d) Lá loài Râu hùm lớn sử dụng làm rau ăn, củ chứa hàm lượng diosgenin tương đối cao, nguyên liệu bán tổng hợp loại thuốc Corticoid (Võ Văn Chi, 2012) Loài Ngải rợm dân gian sử dụng làm thuốc chữa số bệnh viêm dày hành tá tràng, sưng đau vịm họng; dùng ngồi để trị mụn nhọt lở ngứa (Vũ Thị Quỳnh Chi, 2018) Các nghiên cứu giới cho thấy, hợp chất taccasuboside A-D, taccasuboside C taccaoside D phân lập từ loài Râu hùm lớn đánh giá tác dụng gây ức chế dòng tế bào ung thư HL-60 (ung thư máu), SMMC-7721 (ung thư gan), A549 (ung thư phổi), MCF-7 (ung thư vú), SW480 (ung thư đại tràng) (Yokosuka et al., 2004; Li et al., 2011) Một số nghiên cứu trước cung cấp liệu ban đầu liên quan đến phân bố, hình thái, phân loại đặc điểm sinh thái học số loài thuộc chi Ở Việt Nam có cơng trình cơng bố liên quan đến thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài Râu hùm, Râu hùm lớn Hồi đầu (Vũ Thị Quỳnh Chi cs, 2015ab,c, 2016a,b; Pham Hai Yen et al., 2016a,b); chưa có cơng trình cơng bố theo hướng di truyền phân tử loài chi Râu hùm Các nghiên cứu chưa cung cấp đầy đủ liệu về: đặc điểm vật hậu; tuyển chọn xuất xứ khảo nghiệm loài vùng sinh thái khác nhau; thiếu sở liệu nhân giống vơ tính; giá trị nguồn gen đặc điểm di truyền Vì vậy, cần thực nghiên cứu bổ sung liệu cịn thiếu số lồi Râu hùm, nhằm xây dựng sở liệu hoàn chỉnh từ đặc điểm sinh học sinh thái, trạng phân bố, điều kiện thích nghi, khả gây trồng phát triển, định hướng bảo tồn loài ứng dụng vào thực tiễn Nghiên cứu, đánh giá tiềm di truyền xây dựng sở liệu phân tử yêu cầu cấp bách để trì tiến hóa, nhân giống, bảo tồn khai thác bền vững loài Việt Nam Trong năm gần đây, marker phân tử DNA chứng minh phương pháp tiếp cận mạnh mẽ nghiên cứu biến đổi di truyền, nhận dạng phân tử, phát sinh loài lập đồ di truyền loài chi Râu hùm (Zhao et al., 2011; Ardiyani et al., 2014) Hơn nữa, có số marker sử dụng đánh giá đa dạng cấu trúc di truyền loài Râu hùm, bao gồm đánh giá đa dạng di truyền cấu trúc quần thể (Ardiyani et al., 2014), phát sinh lồi tiến hóa, nguồn gốc tiến hóa, xây dựng đồ di truyền (Zhao et al., 2011) Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu đặc điểm di truyền phân tử số loài chi Râu hùm Việt Nam Vườn Quốc gia (VQG) Ba Vì nằm cách thủ Hà Nội 60 km phía Tây với tổng diện tích tự nhiên 10.814,6 Đây diện tích rừng điển hình Việt Nam (Lê Anh Vinh, 2011) VQG Ba Vì có khu hệ động vật, thực vật phong phú đa dạng Trong có nhiều lồi động thực vật q cần bảo vệ, bảo tồn, phát triển nguồn gen (Nguyễn Hải Hà Nguyễn Thị Hải Ninh, 2014) Hai loài Râu hùm Râu hùm lớn ghi nhận có phân bố VQG Ba Vì (Nguyễn Tập cs, 2006) Tuy nhiên đến loài chưa điều tra cách có hệ thống trạng phân bố, kiểm kê số lượng đánh giá đặc điểm phân tử lồi VQG Ba Vì nói riêng Việt Nam nói chung AAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATGCGAATTT TTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAACATCCT CTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAGAGCAT TTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGTTCTTC AAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTAATTCT GTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATCTTACC TTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACCACATA GAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCCTTCTGTTTTTGGGGTT ATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAATAAAATG CTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAGATACC ATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTAAATTT TGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCCATTTA TCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAAATTTT TCTCA >BV05 [organism= Tacca chantrieri] CCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGA ATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAA ATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACG AATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAAC ATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAG AGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGT TCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTA ATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATC TTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACC ACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTG GGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATC AAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAG ATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTA AATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCC ATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAA ATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV06 [organism= Tacca chantrieri] CCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGA ATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAA ATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACG AATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAAC ATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAG AGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGT TCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTA ATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATC TTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACC ACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTG GGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATC AAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAG ATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTA AATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCC ATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAA ATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV07 [organism= Tacca chantrieri] GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAG AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT ACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAAT CAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV08 [organism= Tacca chantrieri] TCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGAAT AGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAAAT AAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACGAA TTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAACAT CCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAGAG CATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGTTC TTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTAAT TCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATCTT ACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACCAC ATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTGGG GTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATCAA ATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAGAT ACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTAAA TTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCCAT TTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAAAT TTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTATCGA AT >BV09 [organism= Tacca chantrieri] TCACTAACACATTTAACTTATGTGTCAGATATAGTAATACCTCATCCT ATTCATCTGGAAATCTTGGTTCAAATCCTTCAATGTTGGACCCAAGAT GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAG AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT GCGAATTTTTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAAT AAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTAT CGAATAAAGTA >BV10 [organism= Tacca chantrieri] GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCCATTTATGCTATTTCAAAAA AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT GCGAATTTTTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCCTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAAT AAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTAT CGAATAAAGTATATACTTCGGATTTCGTGTGCTAGAACTTTGGCTCGT AAACATAAAAGTACGTCACGCGCTTTTTTGCAAAGATTAGGTTCGGG ATTATTAGAAGAATTCTTTACGGAAG >BV11 [organism= Tacca chantrieri] TGTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAAT TGGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAA GAAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAA TACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGAT TAACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAA TAGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTAT GGTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAA GTAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAG ATCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAA CCACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTT TGGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAA TCAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATT AGATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGC TAAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGC CCATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAG AAATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV12 [organism= Tacca chantrieri] GATGTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTA ATTGGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAA AAGAAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTG AATACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACG ATTAACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAA AATAGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCT ATGGTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAA AAGTAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGG AGATCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTC AACCACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTT TTTGGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGA ATCAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAAT TAGATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAG CTAAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGG CCCATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATA GAAATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV13 [organism= Tacca chantrieri] CGAGATGTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATC CTAATTGGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTT CAAAAGAAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTAT TTGAATACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTT ACGATTAACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGG AAAAATAGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGA CCCTATGGTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAG GAAAAGTAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAA TGGAGATCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGG TCTCAACCACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTC TGTTTTTGGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTA AGGAATCAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAG AAATTAGATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTAT AAAGCTAAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAAT CTGGGCCCATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGAT CTATAGAAATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGA TTTTGTATCGAATAAAGTATATACTTCGGATTTCGTGTGCTAGAACTT TGG >BV14 [organism= Tacca chantrieri] TTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGAATAG TTCCATTACTTCGAATAAATCCATTTATGCTATTTCAAAAAAAAATAA AAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATGCGAATTT TTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAACATCCT CTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAGAGCAT TTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGTTCTTC AAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTAATTCT GTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATCTTACC TTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACCACATA GAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCCTTCTGTTTTTGGGGTT ATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAATAAAATG CTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAGATACC ATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTAAATTT TGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCCATTTA TCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAAATTTT TCTCA >BV15 [organism= Tacca chantrieri] CCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGA ATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAA ATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACG AATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAAC ATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAG AGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGT TCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTA ATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATC TTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACC ACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTG GGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATC AAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAG ATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTA AATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCC ATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAA ATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV16 [organism= Tacca chantrieri] CCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGA ATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAA ATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACG AATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAAC ATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAG AGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGT TCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTA ATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATC TTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACC ACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTG GGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATC AAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAG ATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTA AATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCC ATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAA ATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV17 [organism= Tacca chantrieri] GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAG AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT ACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAAT CAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV18 [organism= Tacca chantrieri] TCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGAAT AGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAAAT AAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACGAA TTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAACAT CCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAGAG CATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGTTC TTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTAAT TCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATCTT ACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACCAC ATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTGGG GTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATCAA ATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAGAT ACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTAAA TTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCCAT TTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAAAT TTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTATCGA AT >BV19 [organism= Tacca chantrieri] TCACTAACACATTTAACTTATGTGTCAGATATAGTAATACCTCATCCT ATTCATCTGGAAATCTTGGTTCAAATCCTTCAATGTTGGACCCAAGAT GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAG AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT GCGAATTTTTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAAT AAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTAT CGAATAAAGTA >BV20 [organism= Tacca chantrieri] GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCCATTTATGCTATTTCAAAAA AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT GCGAATTTTTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCCTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAAT AAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTAT CGAATAAAGTATATACTTCGGATTTCGTGTGCTAGAACTTTGGCTCGT AAACATAAAAGTACGTCACGCGCTTTTTTGCAAAGATTAGGTTCGGG ATTATTAGAAGAATTCTTTACGGAAG >BV21 [organism= Tacca chantrieri] TGTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAAT TGGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAA GAAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAA TACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGAT TAACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAA TAGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTAT GGTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAA GTAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAG ATCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAA CCACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTT TGGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAA TCAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATT AGATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGC TAAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGC CCATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAG AAATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV22 [organism= Tacca chantrieri] GATGTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTA ATTGGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAA AAGAAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTG AATACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACG ATTAACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAA AATAGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCT ATGGTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAA AAGTAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGG AGATCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTC AACCACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTT TTTGGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGA ATCAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAAT TAGATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAG CTAAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGG CCCATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATA GAAATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV23 [organism= Tacca chantrieri] CGAGATGTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATC CTAATTGGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTT CAAAAGAAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTAT TTGAATACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTT ACGATTAACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGG AAAAATAGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGA CCCTATGGTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAG GAAAAGTAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAA TGGAGATCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGG TCTCAACCACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTC TGTTTTTGGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTA AGGAATCAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAG AAATTAGATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTAT AAAGCTAAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAAT CTGGGCCCATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGAT CTATAGAAATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGA TTTTGTATCGAATAAAGTATATACTTCGGATTTCGTGTGCTAGAACTT TGG >BV24 [organism= Tacca chantrieri] TTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGAATAG TTCCATTACTTCGAATAAATCCATTTATGCTATTTCAAAAAAAAATAA AAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATGCGAATTT TTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAACATCCT CTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAGAGCAT TTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGTTCTTC AAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTAATTCT GTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATCTTACC TTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACCACATA GAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCCTTCTGTTTTTGGGGTT ATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAATAAAATG CTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAGATACC ATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTAAATTT TGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCCATTTA TCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAAATTTT TCTCA >BV25 [organism= Tacca chantrieri] CCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGA ATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAA ATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACG AATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAAC ATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAG AGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGT TCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTA ATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATC TTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACC ACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTG GGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATC AAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAG ATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTA AATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCC ATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAA ATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV26 [organism= Tacca chantrieri] CCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGA ATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAA ATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACG AATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAAC ATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAG AGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGT TCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTA ATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATC TTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACC ACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTG GGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATC AAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAG ATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTA AATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCC ATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAA ATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV27 [organism= Tacca chantrieri] GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAG AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT ACGAATTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAAT CAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGG >BV28 [organism= Tacca chantrieri] TCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATTGGAAT AGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAGAAAAT AAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAATACGAA TTTTTATTAGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATTAACAT CCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAATAGAG CATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATGGTTC TTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAGTAAT TCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGATCTT ACCTTGTCAATTTTTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAACCAC ATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTTGGG GTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGGAATCAA ATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTAGAT ACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCTAAA TTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCCCAT TTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGAAAT TTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTATCGA AT >BV29 [organism= Tacca chantrieri] TCACTAACACATTTAACTTATGTGTCAGATATAGTAATACCTCATCCT ATTCATCTGGAAATCTTGGTTCAAATCCTTCAATGTTGGACCCAAGAT GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCTATTTATGCTATTTCAAAAG AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT GCGAATTTTTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCTTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAAT AAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTAT CGAATAAAGTA >BV30 [organism= Tacca chantrieri] GTTCCTTCTTTGCATTTATTGCGATTCTTTCTCCACGAATATCCTAATT GGAATAGTTCCATTACTTCGAATAAATCCATTTATGCTATTTCAAAAA AAAATAAAAGATTTTTTCGATTTCTATATAATTCTTATGTATTTGAAT GCGAATTTTTATTCGTTTTTTTTCGTAAACAATCTTCTTATTTACGATT AACATCCTCTGGAGTCTTTCTTGAGCGAACGTATTTCTATGGAAAAAT AGAGCATTTTATACTAGCGTGCCTTAATTATTTTCAGGAGACCCTATG GTTCTTCAAGGAACCTTTCATGCATTATGTTCGATATCAAGGAAAAG TAATTCTGTCTTCAAAAGGAACTCATCTTCGGATGAGGAAATGGAGA TCTTACCTTGTTAATTTCTGGCAATATTATTTTCAATATTGGTCTCAAC CACATAGAATTCATATAAACCTATTATCAAATAATTCCTTCTGTTTTT GGGGTTATCTTTCAAGTGTACTAATAAATCATTCGGTAGTAAGAAAT AAAATGCTAGAAATTTTTTTTTTAATGGATACTGTTACTAAGAAATTA GATACCATAGTTTCGGTTATTCCTCTTATTCGATCATTGTATAAAGCT AAATTTTGTACTGTATGTGGACATCCTATTAGTAAGCCAATCTGGGCC CATTTATCAGATTGGGATATTATTTATCGATTTGGTCGGATCTATAGA AATTTTTCTCATTACCATAGTGGATCCTCAAAAAAAAAGATTTTGTAT CGAATAAAGTATATACTTCGGATTTCGTGTGCTAGAACTTTGGCTCGT AAACATAAAAGTACGTCACGCGCTTTTTTGCAAAGATTAGGTTCGGG ATTATTAGAAGAATTCTTTACGGAAG PHỤ LỤC 03 - Ảnh điện di 15 mồi ISSR 30 mẫu Râu hùm 3.2.1 Thực phản ứng PCR-ISSR cho lồi Râu hùm VQG Ba Vì Kết đáp ứng cho công việc đánh giá mức độ đa dạng di truyền loài Râu hùm, xác định mối quan hệ di truyền cá thể loài