Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân giống cây hoàn ngọc trắng (pseuderanthemum palatiferum (nees) radlk ) bằng kỹ thuật in vitro

TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LÂM NGHIỆP ===***=== KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên đề tài: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HỒN NGỌC TRẮNG (Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk.) BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 7420201 Giảng viên hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Văn Việt ThS Đoàn Thị Thu Hương Sinh viên thực hiện: Triệu Thị Thắm Mã SV: 1753070550 Khóa học: 2017- 2021 Hà Nội, tháng 5/2021 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp – Trường Đại học Lâm Nghiệp, hướng dẫn tận tình thầy giáo, tơi tích lũy thêm kiến thức rèn luyện kỹ thực hành, thực tập vô quý báu Tôi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp tạo điều kiện cho thực đề tài khóa luận tốt nghiệp: Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân giống Hoàn ngọc trắng (Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk.) kỹ thuật in vitro Để có kết ngày hôm nay, xin cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình thầy Bộ mơn Cơng nghệ tế bào, Viện Công nghệ sinh học Lâm Nghiệp Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Văn Việt ThS Đoàn Thị Thu Hương hướng dẫn giúp đỡ tơi tận tình suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp Cuối xin cảm ơn bạn bè người thân động viên, chia sẻ giúp đỡ tơi hồn thành đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2021 Sinh viên thực Triệu Thị Thắm i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH v ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan Hoàn ngọc trắng 1.1.1 Nguồn gốc hệ thống phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái phân bố 1.2 Giá trị dược liệu Hoàn ngọc trắng 1.2.1 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm 1.2.2 Cây Hoàn ngọc trắng hỗ trợ điều trị ung thư, ức chế phát triển khối u 1.2.3 Cây Hoàn ngọc trắng chữa bệnh tiểu đường, huyết áp cao 1.2.4 Tác dụng bảo vệ gan 1.2.5 Tác dụng chữa bệnh đường tiêu hóa, lở loét 1.3 Giá trị dinh dưỡng Hoàn ngọc trắng 1.4 Giá trị kinh tế Hoàn ngọc trắng 1.5 Tình hình nghiên cứu Hoàn ngọc trắng 1.5.1 Trên giới 1.5.2 Trong nước 10 1.5.3 Một số nghiên cứu nhân giống in vitro loài họ 12 Chương 2.MỤC TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 15 2.1.1 Mục tiêu chung 15 2.1.2 Mục tiêu cụ thể 15 2.2 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu 15 2.3 Địa điểm thực tập, thời gian làm KLTN 15 2.4 Nội dung nghiên cứu 16 ii 2.5 Phương pháp nghiên cứu 16 2.5.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro Hoàn ngọc trắng 16 2.5.2 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh in vitro Hoàn ngọc trắng 17 2.5.3 Nghiên cứu ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ in vitro Hoàn ngọc trắng 18 2.5.4 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng 19 2.5.5 Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm 19 2.6 Phương pháp thu thập xử lí số liệu 20 2.6.1 Phương pháp thu thập số liệu 20 2.6.2 Phương pháp xử lý số liệu 21 Chương 3.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro Hoàn ngọc trắng 22 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh in vitro Hoàn ngọc trắng 24 3.3 Kết ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ in vitro Hoàn ngọc trắng 28 3.4 Kết ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng 30 3.5 Kết ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ BIỂU iii DANH MỤC VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Viết đầy đủ BAP N6 -benzylaminopurine CTTN Cơng thức thí nghiệm ĐC ĐHST Điều hòa sinh trưởng IBA indole -3- butyric acid MS Môi trường Murashige Skoog (1962) NAA TB Đối chứng α – naphthaleneacetic acid Trung bình iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro Hoàn ngọc trắng 17 Bảng 2.2 Ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh in vitro Hoàn ngọc trắng 18 Bảng 2.3 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ in vitro Hoàn ngọc trắng 18 Bảng 2.4 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng 19 Bảng 2.5 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm 20 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro Hoàn ngọc trắng 22 Bảng 3.2 Ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh in vitro Hoàn ngọc trắng 24 Bảng 3.3 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ in vitro Hoàn ngọc trắng 28 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng 31 Bảng 3.5 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm 32 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây Hoàn ngọc trắng [18] Hình 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro Hoàn ngọc trắng 23 Hình 3.2 Mẫu Hồn ngọc trắng khử trùng cơng thức CT3 sau tuần nuôi cấy 24 Hình 3.3 Ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến hệ số nhân nhanh chồi in vitro Hoàn ngọc trắng 25 Hình 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến tỷ lệ chồi hữu hiệu in vitro Hoàn ngọc trắng 25 Hình 3.5 Chồi Hồn ngọc trắng cơng thức mơi trường nhân nhanh khác sau tuần nuôi cấy 27 Hình 3.6 Ảnh hưởng chất ĐHST đến chiều dài trung bình rễ in vitro Hồn ngọc trắng 28 Hình 3.7 Ảnh hưởng chất ĐHST đến số rễ trung bình/cây in vitro Hồn ngọc trắng 29 Hình 3.8 Chồi Hoàn ngọc trắng giai đoạn rễ sau tuần nuôi cấy công thức môi trường 30 Hình 3.9 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng 31 Hình 3.10 Cây Hồn ngọc sau huấn luyện bầu ngày công thức T2 T3 32 Hình 3.11 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến tỷ lệ sống Hoàn ngọc trắng 33 Hình 3.12 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm 33 Hình 3.13 Cây Hồn ngọc trắng trồng công thức ruột bầu RB3 trước sau tuần trồng 34 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Hoàn ngọc trắng (Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk.) loài dược liệu gần gũi với người dân Việt Nam Từ thời xưa theo kinh nghiệm dân gian, Hồn ngọc trắng có tác dụng khôi phục sức khỏe cho người ốm yếu, mệt mỏi, suy nhược thần kinh, làm việc sức, khủng hoảng tinh thần thể lực, chữa cảm cúm, rối loạn tiêu hóa, viêm loét đại tràng, dày, trĩ nội, xơ gan cổ trướng, viêm đường tiết niệu, viêm thận, chấn thương, đau mắt đỏ, mắt trắng, đau không rõ nguyên nhân, rối loạn đường tiêu hóa, vết thương chảy máu, viêm mũi, dày,… Những năm gần nhà khoa học nghiên cứu thành phần dược học Hồn ngọc trắng từ sản xuất chế phẩm hỗ trợ phòng chống khối u dược phẩm có hoạt lực cao điều trị bệnh như: viêm nhiễm, loại ung thư, tăng cường hệ miễn dịch gan,… Cây Hồn ngọc trắng có nhiều tác dụng nên bị khai thác mức, diện tích trồng nước nhỏ Cây Hoàn ngọc trắng nằm danh mục loài dược liệu tập trung phát triển quy mô lớn chủ yếu nhân giống giâm hom thời gian dài, suất thấp, chất lượng khơng đồng Do đó, việc áp dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro giúp tăng suất chất lượng có vai trị quan trọng cơng tác nhân giống phát triển Hoàn ngọc trắng Nhận thức giá trị dược liệu Hoàn ngọc trắng việc phát triển loài vấn đề cấp thiết Vì vậy, tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân giống Hồn ngọc trắng (Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk.) kỹ thuật in vitro” Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan Hoàn ngọc trắng 1.1.1 Nguồn gốc hệ thống phân loại Cây Hoàn ngọc trắng thuộc họ Ơrơ (Acanthaceae), có tên gọi khác khỉ, Xuân hoa, nhật nguyệt, tu lình, trạc mã, mặt quỷ, nội đồng, lay gàm, dièng tòn pièng (Dao), nhần nhéng (Mường)… nhà khoa học phát năm 1990, giống mọc sâu vườn quốc gia Cúc Phương Tên khoa học: Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk Bộ: Lamiales Họ: Acanthaceae Chi: Pseuderanthemum Lồi: P.palatiferum Hình 1.1 Cây Hồn ngọc trắng [18] 1.1.2 Đặc điểm hình thái phân bố Cây Hoàn ngọc trắng thuộc bụi, cao từ - m, loài sống nhiều năm Khi non thân trơn nhẵn, màu xanh mềm, thân già hóa gỗ màu nâu, phân thành nhiều mảnh Lá đơn mọc đối, màu xanh mặt lá, mặt xanh đậm, mặt nhạt, không bền, ngả vàng rụng, dài từ 12 - 17 cm, rộng từ - 3,5 cm, gốc thuôn, đầu nhọn, mép nguyên Lá mềm, bên có nhiều dịch nhầy, nhớt Cụm hoa mọc kẽ đầu cành, hoa lưỡng tính Mùa hoa từ tháng đến tháng âm lịch Hoa có màu trắng pha tím, đài tách rời nhau, cánh chia môi, môi thùy, mơi thùy, thùy có chấm tím, tràng hoa hợp có ống hẹp dài Chỉ nhị ngắn đính hỗng tràng,nhị 4, có nhị kép, bao phấn màu tím Quả nang chứa hạt Hoàn ngọc trắng thuộc loại ưa ẩm, ưa sáng chịu bóng, cịn nhỏ Cây trồng sinh trưởng mạnh mùa xuân hè, mùa thu đơng có tượng nửa rụng Cây Hồn ngọc trắng trồng khoảng năm tuổi có quả, tái sinh tự nhiên chủ yếu từ hạt Hiện nay, Hoàn ngọc trắng phân bố số tỉnh đồng sơng Hồng: Thái Bình, Nam Định, Hưng Yên, Hải Dương, Bộ phận Hoàn ngọc trắng dùng làm dược liệu rễ, dùng tươi phơi khô.[18] 1.2 Giá trị dược liệu Hoàn ngọc trắng 1.2.1 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm Các nhà khoa học nghiên cứu chiết xuất methanol từ Hoàn ngọc trắng đưa số kết quả: Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) E.coli 200µg/ml, chưa thấy có tác dụng Pseudomonas aeruginosa MIC Hoàn ngọc trắng Bacillus Subtilis Staphy lococus aureus 200 µg/ml Lá Hoàn ngọc trắng cao (chiết xuất hoàn toàn từ lá) có tác dụng kháng nấm kháng loại vi khuẩn gồm: Vi khuẩn gram dương (Streptococcus pyogenes, Bacillus subtilis, Staphyllococcus aureus), vi khuẩn gram âm (Escherichia coli, Psseudomonas aeruginosa), nấm mốc (Pyricularia oryzae, Rhezoctonia solani, Aspergillus niger, Fusarium oxysporum) nấm men (Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae) [18] 1.2.2 Cây Hoàn ngọc trắng hỗ trợ điều trị ung thư, ức chế phát triển khối u Một hoạt chất axit pomolic hóa giải MDR (khối u kháng thuốc điều trị) Các axit pomolic tác động lên tế bào ung thư theo chế áp đảo protein Bcl – Bcl – xl từ làm suy yếu DC R2 R3 R4 Hình 3.8 Chồi Hồn ngọc trắng giai đoạn rễ sau tuần nuôi cấy công thức môi trường 3.4 Kết ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng Các in vitro hoàn chỉnh đạt tiêu chuẩn đưa nhà lưới để huấn luyện tạo điều kiện cho tự dưỡng hồn tồn thích nghi dần với điều kiện tự nhiên 30 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng Số sống (%) Sau Ra bầu huấn sau ngày luyện CTTN Số ngày huấn luyện (ngày) Số huấn luyện (cây) T0 30 51,11 37,78 T1 30 71,11 64,44 T2 30 97,78 87,78 T3 10 30 100 98,89 Đặc điểm Nhỏ, thân thấp, yếu Thân thấp, yếu Thân cao, khỏe Thân cao, khỏe 120 100 80 Sau huấn luyện 60 Ra bầu sau ngày 40 20 T0 T1 T2 T3 Hình 3.9 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống Hoàn ngọc trắng Từ bảng 3.4 thấy cơng thức T0 khơng huấn luyện, tỷ lệ sống sau huấn luyện bầu sau ngày cho tỷ lệ thấp ( 51,11%; 37,78%) Nguyên nhân nuôi môi trường nhân tạo với điều kiện vật lý (ánh sáng, nhiệt độ,…) đầy đủ chất dinh dưỡng, đưa trồng trực tiếp vào bầu điều kiện tự nhiên khiến bị sốc nhiệt dẫn tới tỷ lệ sống thấp Công thức T3 thời gian huấn luyện 10 ngày, sau huấn luyện có tỷ lệ sống đạt kết cao (100%), bầu sau ngày đạt 98,89% Thời gian huấn luyện dài cứng cáp, khỏe mạnh, rễ phát triển đầy đủ để tự dưỡng 31 T2 T3 Hình 3.10 Cây Hồn ngọc sau huấn luyện bầu ngày công thức T2 T3 3.5 Kết ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm Sau thời gian huấn luyện đủ cứng cáp đủ tiêu chuẩn chuyển vườn ươm Giá thể yếu tố định sống phát triển con, trồng vào bầu chứa giá thể gồm đất, cát có tỷ lệ thành phần khác Thí nghiệm bố trí với công thức bảng 3.5 theo dõi tiêu tỷ lệ sống, chiều cao TB chất lượng Bảng 3.5 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm Thành phần giá thể Tỷ lệ sống Chiều cao Chất lượng ruột bầu (%) TB (cm) Đất tầng B 76,67 2,38 + RB1 25% cát vàng + 75% 91,11 3,42 ++ RB2 đất 50% cát vàng + RB3 98,89 4,27 +++ 50% đất 75% cát vàng + 25% 85,56 3,02 ++ RB4 đất 100% cát vàng 46,67 2,73 + RB5 Ghi chú: (+): phát triển kém, thân mảnh; (++): phát triển chậm, CTTN xanh tốt; (+++): phát triển nhanh, xanh tốt 32 Tỷ lệ sống (%) 120 100 80 60 40 20 Tỷ lệ sống (%) RB1 RB2 RB3 RB4 RB5 Hình 3.11 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến tỷ lệ sống Hoàn ngọc trắng Chiều cao trung bình (cm) Chiều cao trung bình (cm) RB1 RB2 RB3 RB4 RB5 Hình 3.12 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm Kết cho thấy tỷ lệ sống có Sig nhỏ 0,05 nên tiêu sinh trưởng có sai khác cơng thức thí nghiệm, nên ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trưởng Hoàn ngọc trắng vườn ươm Từ bảng 3.5 cho thấy: Đất tầng B tầng tích lũy vật chất ( sét chất dinh dưỡng) rửa trôi từ tầng đưa xuống chất hòa tan từ nước ngầm tầng Nhưng độ xốp nước nên cơng thức RB1 tỷ lệ sống không cao (76,67%), chiều cao trung bình đạt 2,38 cm, phát triển kém, thân mảnh 33 Công thức RB5 thành phần ruột bầu 100% cát vàng, cát thoát nước tự khiến cho dễ bị nước Cát không giữ chất dinh dưỡng lâu xung quanh rễ Vì vậy, công thức tỷ lệ sống thấp (46,67%), chiều cao TB 2,73 cm, phát triển kém, thân mảnh Kết thí nghiệm cho thấy công thức RB3 tỷ lệ cát vàng : đất (50 : 50) cho tỷ lệ sống tốt (98,89%), chiều cao trung bình mức cao công thức khác (4,27 cm), chất lượng phát triển nhanh, xanh tốt Đây công thức phù hợp cho Hoàn ngọc trắng sinh trưởng phát triển tốt Hình 3.13 Cây Hồn ngọc trắng trồng công thức ruột bầu RB3 trước sau tuần trồng 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Công thức khử trùng tạo mẫu phù hợp với Hoàn ngọc trắng khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% thời gian phút (98,89% mẫu 97,78% mẫu nảy chồi) - Trong giai đoạn nhân nhanh in vitro Hồn ngọc trắng cơng thức: MS + 0,7 mg/l BAP + 0,3 mg/l Kinetin + 0,1 mg/l NAA + 30 g/l đường saccharose + 6g/l agar cho hệ số nhân nhanh chồi cao (5,33 lần) - Giai đoạn rễ tạo Hoàn ngọc trắng hoàn chỉnh sử dụng công thức: MS + 0,5 mg/l NAA + 20 g/l đường saccharose + g/l agar cho chất lượng rễ tốt - Thời gian huấn luyện 10 ngày cho tỷ lệ sống sau huấn luyện cao (100% ) bầu sau ngày đạt 98,89% - Giá thể thích hợp cho thích nghi phát triển Hoàn ngọc trắng in vitro vườn ươm là: 50% cát vàng + 50% đất, cho tỷ lệ sống 98,89% Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn nên chưa thể nghiên cứu sâu chế độ bón phân, lượng nước tưới ngồi vườn ươm Vì vậy, kiến nghị cần tiếp tục nghiên cứu thêm nội dung để bổ sung vào quy trình nghiên cứu 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Huỳnh Kim Diệu, Đàm Thùy Nga (2018), “Khả tác động tăng trọng phòng bệnh cho vịt Xuân hoa (Pseuderanthemum palatiferum)” , Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 54(Số chuyên đề: Nơng nghiệp), 18-22 Bùi Thị Bích Hằng, Nguyễn Thanh Phương (2020), “Ảnh hưởng chất chiết từ Hoàn ngọc (Pseuderanthemum palatiferum (Wall.) Radlk) lên tăng trưởng đáp ứng miễn dịch cá tra (Pangasianodon hypophthalmus)”, Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 56 (3), Tr 101 -111 Nguyễn Thị Phương Khanh (2011), “Nuôi cấy tạo rễ Hoàn ngọc ( Pseuderanthemum Bracteatum) điều kiện in vitro để thu nhận Betulin - hợp chất thứ cấp”, Luận văn thạc sĩ sinh học, Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh – Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên PGS.TS Dương Tấn Nhựt (2011), Công nghệ sinh học thực vật: Nghiên cứu ứng dụng, Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp, Tập Quách Ngô Diễm Phương, Vũ Thị Bạch Phượng, Giống Hối Khoánh, Trần Ngọc Trung, Bùi Văn Lệ (2014), “Nghiên cứu nuôi cấy rễ Bán tự mốc (Hemigraphis glaucescens C B Clarkc) làm nguồn nguyên liệu thu nhận Betulin”, Tạp chí Sinh học, 36(1se): 145- 151 Nguyễn Thị Thảo (2018), “ Bước đầu nghiên cứu khả nhân giống Hồn ngọc (Pseuderanthemum palatiferum) ni cấy in vitro”, Khóa luận tốt nghiệp, Đại học Lâm Nghiệp Tiếng Anh Kannika Inchab, Pairat Khonsung, Natthakarn Chiranthanut, Puongtip Kunanusorn , Ampai Panthong, and Seewwaboon Sireeratawong (2019), “Evaluation of Anti-inflammatory, Analgesic, and Antipyretic Activities of Pseuderanthemum palatiferum ”, CMU J Nat Sci (2019) Vol 18 (3) Nhung Thi Tuyet Tran, Hoang Ngo Phan, Sanh Du Nguyen (2014), “Somatic embryogenesis from Hoan ngoc ( Pseuderanthemum palatiferum (Ness) Radlk) leaf callus”, Science & Technology Development, Vol 17, No.T2 – 2014 P.Padee, S.Nualkaew, C.Talubmook, S.Sakuljaitrong (2010), “Hypoglycemic effect of a leaf extract of Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk in normal and streptozotocin – induced diabetic rats”, Journal of Ethnopharmacology, Volume 132, Issue 2, Pages 491 – 496 10 Parirat Khonsung, A Panthong, N Chiranthanut, S Intahphuak (2011), “ Hypotensive effect of the water extract of the leaves of Pseuderanthemum palatiferum”, Journal of Natural Medicines, Volume 65, Article number: 551 11 Phimphan Komonrit, Ratana Banjerdpongchai (2018), “Effect of Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk fresh leaf ethanolic extract on human breast cancer MDA-MB-231 regulated cell death”, Tumor Biology 12 Somsak Nualkew, Peerawit Padee, Chusri Talubmook (2015), “Hypoglycemic activity in diabetic rats of stigmasterol and sitosterol-3-Oβ-D-glucopyranoside isolated from Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk leaf extract”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol.9 (20), pp 629 – 635 13 Supaporn Pamok, Supap Saenphet, Usanee Vinitketkumnuen, Kanokporn Saenphet, (2012), “Antiproliferative effect of Moringa oleifera Lam and Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk extracts on the colon cancer cells”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 6(1), pp 139 – 145 14 Thao Nguyen Phuong (2015), “The Research On Direct Shoot Regeneration Of Pseuderanthemum Palatiferum”, International University 15 Tran Bao Huy, Nguyen Thi Lien Phuong, Bui Kim Nga, Dr Huynh Ngoc Oanh, Dr Nguyen Huu Hieu (2019), “ Enzyme – Assisted Extraction of Triterpenoid Saponins from Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk Dry Leaf Powder and Bioactivities Examinatoin of Extracts”, ChemistrySeclect 16 Truc Cong Ho, Anley Teferra Kiddane, Saravana Periaswamy Sivagnanam, Jin – Seok Park, Yeon – Jin Cho, Andane Tilahun Getachew, Thanh – Tuyen Thi Nguyen, Gun – Do Kim, Byung – Soo Chun, (2020), “Green extraction of polyphenolic-polysaccharide conjugates from Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk.: Chemical profile and anticoagulant activity”, International Journal of Biological Macromolecules, Volume 157, 15 August 2020, Pages 484 – 493 Tài liệu web 17 https://thaythuocvietnam.vn/tac-dung-cua-cay-hoan-ngoc-doi-voi-suc-khoe/ 18 https://metaherb.vn/duoc-lieu/cay-hoan-ngoc 19.https://suckhoehiendai.com/tanu-gold-va-tanu-green-giai-phap-huu-hieudanh-cho-benh-nhan-hoa-xa-tri/ 20 https://nuoitrong123.com/gia-tri-dinh-duong-cua-cay-hoan-ngoc.html PHỤ BIỂU Phụ biểu Kiểm tra tỷ lệ mẫu đoạn thân Hồn ngọc trắng có thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% khác Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent CT * mausach CT 11 Total 360 100.0% 0.0% Total N Percent 360 CT * mausach Crosstabulation mausach maunhiem mausach Count 29 61 % within CT 32.2% 67.8% Count 13 77 % within CT 14.4% 85.6% Count 89 % within CT 1.1% 98.9% Count 90 % within CT 0.0% 100.0% Count 43 317 % within CT 11.9% 88.1% Chi-Square Tests Value df 100.0% Total 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 360 100.0% Asymp Sig (2-sided) 000 000 Pearson Chi-Square 57.971a Likelihood Ratio 64.933 Linear-by-Linear 51.626 000 Association N of Valid Cases 360 a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 10.75 Phụ biểu Kiểm tra tỷ lệ mẫu tái sinh đoạn thân Hồn ngọc trắng có thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% khác Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent CT * mautaisinh 330 100.0% 0.0% Total N Percent 330 CT * mautaisinh Crosstabulation mautaisinh khongtaisinh taisinh Count 28 62 % within CT 31.1% 68.9% Count 16 74 % within CT 17.8% 82.2% CT Count 88 % within CT 2.2% 97.8% Count 52 11 % within CT 13.3% 86.7% Count 54 276 Total % within CT 16.4% 83.6% Chi-Square Tests Value df 100.0% Total 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 60 100.0% 330 100.0% Asymp Sig (2-sided) 000 000 Pearson Chi-Square 27.987a Likelihood Ratio 31.988 Linear-by-Linear 17.000 000 Association N of Valid Cases 330 a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 9.82 Phụ biểu Kiểm tra ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến hệ số nhân nhanh chồi in vitro Hoàn ngọc trắng Test of Homogeneity of Variances Hesonhanchoi Levene df1 df2 Sig Statistic 4.217 18 005 ANOVA Hesonhanchoi Sum of df Mean Squares Square Between Groups 52.888 6.611 Within Groups 3.574 18 199 Total 56.462 26 F Sig 33.291 000 Phụ biểu Kiểm tra ảnh hưởng tổ hợp chất ĐHST đến tỷ lệ chồi hữu hiệu in vitro Hoàn ngọc trắng Test of Homogeneity of Variances Ty le choi huu hieu Levene df1 df2 Sig Statistic 1.835 18 136 ANOVA Ty le choi huu hieu Sum of df Squares Between Groups 19486.414 Within Groups 569.529 18 Total 20055.944 26 Mean Square 2435.802 31.641 F Sig 76.984 000 Phụ biểu Kiểm tra ảnh hưởng chất ĐHST đến chiều dài trung bình rễ in vitro Hồn ngọc trắng Test of Homogeneity of Variances chieu dai re TB Levene Statistic df1 df2 Sig 3.490 10 050 ANOVA chieu dai re TB Between Groups Within Groups Total Sum of Squares df Mean Square F Sig 21.696 5.424 68.803 000 788 22.484 10 14 079 Phụ biểu Kiểm tra ảnh hưởng chất ĐHST đến số rễ trung bình/cây in vitro Hoàn ngọc trắng Test of Homogeneity of Variances So re TB Levene Statistic 6.671 df1 df2 10 Sig .007 ANOVA So re TB Between Groups Within Groups Total Sum of Squares df Mean Square F Sig 50.438 12.609 2243.664 000 056 10 006 50.494 14 Phụ biểu Kiểm tra ảnh hưởng chất ĐHST đến tỷ lệ chồi rễ in vitro Hoàn ngọc trắng Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent CT * tylechoirare 450 100.0% Total N Percent 0.0% 450 CT * tylechoirare Crosstabulation tylechoirare 00 1.00 Count 67 23 R0 % within CT 74.4% 25.6% Count 22 68 R1 % within CT 24.4% 75.6% Count 17 73 CT R2 % within CT 18.9% 81.1% Count 89 R3 % within CT 1.1% 98.9% Count 11 79 R4 % within CT 12.2% 87.8% Count 118 332 Total % within CT 26.2% 73.8% 100.0% Total 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 450 100.0% Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2-sided) Pearson Chi-Square 149.280a Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 000 150.363 000 101.368 000 450 a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 23.60 Phụ biểu Kiểm tra ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến tỷ lệ sống Hoàn ngọc trắng Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent CT * tylesong 450 RB2 RB3 CT RB4 RB5 5.00 Total 100.0% 0.0% Total N Percent 450 CT * tylesong Crosstabulation tylesong khongtai taisinh sinh Count 21 69 % within CT 23.3% 76.7% Count 82 % within CT 8.9% 91.1% Count 89 % within CT 1.1% 98.9% Count 13 77 % within CT 14.4% 85.6% Count 48 42 % within CT 53.3% 46.7% Count 91 359 % within CT 20.2% 79.8% Chi-Square Tests Value df 100.0% Total 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 90 100.0% 450 100.0% Asymp Sig (2-sided) 000 000 Pearson Chi-Square 91.105a Likelihood Ratio 91.653 Linear-by-Linear 23.921 000 Association N of Valid Cases 450 a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 18.20