Khoa học Nông nghiệp / Công nghệ sinh học nông nghiệp, thủy sản DOI: 10.31276/VJST.65(5).64-69 Vi nhân giống dâu tây Mỹ thơm (Fragaria ananassa “pajaro”) phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Trịnh Ngọc Ái1*, Trần Thị Thúy Liểu1, Hồ Tuấn Kiệt1, Thái Nhật Quang1, Lê Văn Thức2, Nguyễn Minh Hiệp2, Nguyễn Tiến Dũng3* Trường Đại học Trà Vinh Viện Nghiên cứu Hạt nhân, Viện Năng lượng Nguyên tử Việt Nam Trường Đại học Nông Lâm, Đại học Thái Nguyên Ngày nhận 12/9/2022; ngày chuyển phản biện 15/9/2022; ngày nhận phản biện 11/10/2022; ngày chấp nhận đăng 14/10/2022 Tóm tắt: Nghiên cứu thực nhằm đánh giá ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng vi nhân giống dâu tây Mỹ thơm (Fragaria ananassa “pajaro”) Mẫu ngó dâu tây Mỹ thơm khử trùng dung dịch NaOCl với nồng độ khác (1, 3%) 20 phút Mẫu đỉnh sinh trưởng tách nuôi cấy môi trường MS (Murashige Skoog) có chứa 0,3 mg/l BAP (6-benzylaminopurine) tuần, sau chuyển sang mơi trường nhân chồi MS có chứa BAP (0, 0,1, 0,3 0,5 mg/l) kinetin (6-furfurylaminopurin) mức 0, 0,1, 0,2 0,3 mg/l kết hợp riêng lẻ Các mẫu chồi tái sinh sau tuần nuôi cấy chuyển sang môi trường tạo rễ 1/2 MS có chứa nồng độ NAA (0, 0,1, 0,3, 0,5, 0,7 1,0 mg/l) BAP (0, 0,1, 0,3 0,5 mg/l) riêng lẻ kết hợp Kết cho thấy, khử trùng nồng độ 3% NaOCl 20 phút cho tỷ lệ mẫu nhiễm thấp (10%) tỷ lệ tái sinh mẫu cao (80%) Mơi trường MS có chứa 0,3 mg/l BAP 0,1 mg/l kinetin đạt số chồi cao (16,2 chồi/mẫu) Mơi trường 1/2 MS có chứa 0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP tạo 14,4 rễ/chồi chiều dài rễ đạt dài (9,1 cm) Ngược lại, mô sẹo quan sát rõ mẫu nuôi cấy mơi trường MS có bổ sung nồng độ NAA (0,3-1,0 mg/l) kết hợp với BAP Giá thể phân chuồng ủ hoai với nấm Trichoderma mụn dừa (1:1:1 v/v/v) xem phù hợp cho trình ngơi giống dâu tây Mỹ thơm Từ khố: dâu tây Mỹ thơm, nuôi cấy đỉnh sinh trưởng, α-naphthaleneacetic acid, 6-benzylaminopurine Chỉ số phân loại: 4.6 Đặt vấn đề Cây Dâu tây (Fragaria ananassa L.) hay gọi dâu đất, chi thực vật hạt kín lồi thực vật có hoa thuộc họ hoa hồng (Rosaceae) Dâu tây loại trồng tiêu thụ phổ biến có hương thơm khả kháng ơxy hóa cao pelargonidin, axit ellagic, ellagitannin [1] Dâu tây cịn loại trái chứa calo, với nguồn vitamin, khoáng chất dồi nên mang lại nhiều lợi ích cho sức khỏe, làm giảm hàm lượng cholesterol, hạ huyết áp, phòng chống ung thư [2] Chính vậy, việc phát triển giống dâu tây xem hoạt động hấp dẫn thu hút nhiều nhà vườn Giống dâu tây Mỹ thơm trồng phổ biến có khả thích nghi tốt với điều kiện khí hậu (có khả chịu nhiệt lên đến 40°C), có giá trị kinh tế cao, dễ trồng chăm sóc, sau 100-120 ngày gieo trồng, cho quanh năm, chất lượng tốt, suất cao Dâu tây nhân giống ngó hạt, nhiên, trồng hạt tỷ lệ nảy mầm thấp, tạo không đồng đều, thời gian sinh trưởng kéo dài Đặc biệt phương pháp nhân giống truyền thống không cung cấp đủ giống cho thị trường S Karhu K Hakala (2002) [3] rằng, dâu tây nhân giống kỹ thuật nuôi cấy mô cho số lượng thân bò nhiều hơn, thời gian nở hoa dài suất cao so với nhân giống theo phương pháp truyền thống Bên cạnh đó, dâu tây dễ bị nhiễm số bệnh từ mẹ, đặc biệt virus Strawberry mottle virus (SMoV) Strawberry mild yellow edge virus (SMYEV), làm ảnh hưởng đến suất chất lượng [4] Một số loài virus làm giảm 80% suất dâu tây [5] Vì thế, phương pháp nhân giống truyền thống trở nên không phù hợp việc kháng lại tác nhân gây bệnh Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng nhằm mục đích loại bỏ vi khuẩn, virus [6], thơng qua ni cấy đỉnh sinh trưởng, q trình phân chia tế bào tích cực làm giảm phân hóa mô mạch [7] Sau tách ra, mô đỉnh sinh trưởng ni cấy phát triển thành hoàn chỉnh, đồng mặt di truyền bệnh Một yếu tố quan trọng định thành cơng q trình vi nhân giống dâu tây loại nồng độ chất điều hòa sinh trưởng sử dụng [8] BAP dùng phổ biến vi nhân giống dâu tây [9, 10] K.A Quiroz cs (2017) [11] cho biết, mơi trường ni cấy có bổ sung BAP làm gia Tác giả liên hệ: Email: ngocai@tvu.edu.vn, dungnt@tuaf.edu.vn * 65(5) 5.2023 64 Khoa học Nông nghiệp / Công nghệ sinh học nông nghiệp, thủy sản Micropropagation of strawberry (Fragaria ananassa “pajaro”) by meristem culture method Ngoc Ai Trinh1*, Thi Thuy Lieu Tran1, Tuan Kiet Ho1, Nhat Quang Thai1, Van Thuc Le2, Minh Hiep Nguyen2, Tien Dung Nguyen3* Tra Vinh University Dalat Nuclear Research Institute, Vietnam Atomic Energy Institute Thai Nguyen University of Agriculture and Forestry Received 12 September 2022; accepted 14 October 2022 Abstract: Experiments were carried out to examine the effects of different combinations of plant growth regulators in vitro micropropagation of strawberry plants Specimens were sterilised by a different concentration of sodium hypochlorite - NaOCl (1, 2, and 3%) for 20 mins A meristem was separated and cultured on Murashige and Skoog (MS) containing 0.3 mg/l BAP for weeks Initial shoots were transferred to MS with various concentrations of BAP (0, 0.1, 0.3, and 0.5 mg/l) and kinetin (0, 0.1, 0.2, and 0.3 mg/l) in either single or combination After weeks of culture, the regenerated shoots were transferred on 1/2 MS with different concentrations of NAA (0, 0.1, 0.3, 0.5, 0.7, and 1.0 mg/l) and BAP (0, 0.1, 0.3, and 0.5 mg/l) in either single or combination The results showed that the lowest percentage of contamination (10%) and the highest percentage of regeneration (80%) response were achieved on MS media by sterilisation with 3% NaOCl for 20 mins The highest shoot proliferation per explant (16.2 shoots/explant) was reached on MS with 0.3 mg/l BAP plus 0.1 mg/l kinetin 1/2 MS media with 0.1 mg/l NAA plus 0.1 mg/l BAP induced 14.4 roots per shoot and produced the longest roots (9.1 cm) However, the higher concentration of NAA (0.3-1.0 mg/l) or in combination with BAP resulted in callus formation The plantlets, thus developed, were hardened and successfully established in soil containing organic fertiliser: Trichoderma: coconut peat (1:1:1 v/v/v) tăng 3-6 chồi/mẫu cấy Mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BAP tối ưu cho trình tái sinh chồi dâu tây Sweet Charlie [12] Bên cạnh đó, kinetin có khả gây tăng sinh tế bào trình hình thành chồi [13] Kết nghiên cứu F Haddadi cs (2010) [14] cho thấy, cytokinin auxin đóng vai trị hình thành chồi rễ Các chồi tạo từ chồi giống dâu tây Camarosa mơi trường MS có bổ sung µM TDZ µM BAP cho số chồi cao (14 chồi/mẫu) Trên mơi trường MS có bổ sung µM NAA µM IBA xem phù hợp cho cho trình hình thành rễ (6 rễ/mẫu) Trong nghiên cứu này, tập trung vào ảnh hưởng nồng độ auxin cytokin khác (BAP, kinetin NAA) lên tạo chồi rễ in vitro dâu tây Mỹ thơm Bên cạnh đó, giá thể phân hữu đánh giá đến tỷ lệ sống nhằm xây dựng quy trình nhân giống dâu tây bệnh Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng Ngó dâu tây Mỹ thơm từ trưởng thành 4-12 tháng tuổi, có chiều dài 10-15 cm lấy Trang trại trồng dâu tây Ichigo, Đà Lạt, Lâm Đồng Thời điểm thu ngó trước sáng sau chiều Ngó sau cắt quấn vào khăn giấy ẩm bảo quản túi nilon để vận chuyển phịng thí nghiệm bảo quản nhiệt độ 12oC để phục vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng NaOCl đến tỷ lệ tái sinh mẫu cấy: Ngó rửa vịi nước chảy mạnh phút, sau lắc dung dịch xà phòng (1-2 giọt xà phòng 100 ml nước) phút, tiếp tục rửa vòi nước cho xà phòng rửa lại lần nước cất Sau lắc mẫu cồn 70% phút, tiếp tục lắc dung dịch NaClO (1, 3%) 20 phút rửa lại lần nước cất vô trùng Mẫu cắt bỏ phần thân, giữ lại phần đỉnh phía khoảng 1-2 cm Mẫu đặt kính hiển vi soi nổi, sau dùng pank dao cấy để loại bỏ bao phủ bên ngồi gặp mơ phân sinh (đỉnh sinh trưởng có hình dạng mái vịm - hình 1) Sau đó, dùng dao mổ cắt theo gốc đỉnh sinh trưởng đặt vào môi trường MS có bổ sung 0,3 mg/l BAP, 30 g/l sucrose, g/l agar, pH 5,8 Keywords: Fragaria ananassa “pajaro”, meristem culture, α-naphthaleneacetic acid (NAA), 6-benzylaminopurine (BAP) Classification number: 4.6 Hình Mẫu đỉnh sinh trưởng tách từ ngó dâu tây Mỹ thơm 65(5) 5.2023 65 Khoa học Nông nghiệp / Công nghệ sinh học nông nghiệp, thủy sản Ảnh hưởng nồng độ BAP kinetin lên khả nhân chồi: Mẫu đỉnh sinh trưởng tái sái sinh sau tuần chuyển sang mơi trường MS có bổ sung 30 g/l sucrose, g/l agar, BAP (0, 0,1, 0,3 0,5 mg/l) kinetin (0, 0,1, 0,2 0,3 mg/l) kết hợp riêng lẻ, pH 5,8 Thí nghiệm bố trí lần lặp lại, lần lặp lại chứa 12 mẫu cấy Sau tuần nuôi cấy tiến hành thống kê tiêu: - Số chồi trung bình (chồi/mẫu): Tổng số chồi tái sinh/số mẫu ni cấy - Chiều cao trung bình chồi (cm): Dùng thước đo từ cổ đến chóp cao - Số trung bình (lá): Đếm tổng số thân tính từ thật đến xanh Ảnh hưởng nồng độ NAA BAP lên khả tạo rễ: Chồi sau tuần tái sinh (5-6 lá) chuyển sang mơi trường tạo rễ 1/2 MS có bổ sung 30 g/l đường, g/l agar, NAA (0, 0,1, 0,3, 0,5, 0,7 1,0 mg/l) BAP (0, 0,1, 0,3 0,5 mg/l) riêng lẻ kết hợp, pH 5,8 Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với lần lặp lại, lần lặp lại chứa 12 mẫu cấy Sau tuần nuôi cấy tiến hành thống kê tiêu: Kết bàn luận Ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng NaOCl đến tỷ lệ tái sinh mẫu cấy Sự lây nhiễm mẫu nuôi cấy in vitro từ nhiều nguồn khác trở ngại lớn cho thành cơng q trình ni cấy mơ Khử trùng mẫu xem điều kiện tiên đánh giá thành công tái sinh in vitro Trong nghiên cứu này, tập trung đánh giá hiệu tác nhân khử trùng lên trình tái sinh đỉnh sinh trưởng giống dâu tây Mỹ thơm nồng độ NaOCl khác (1, 3%) 20 phút (bảng 1) Kết cho thấy, nồng độ NaOCl thấp (1%) tỷ lệ mẫu nhiễm cao (chiếm 30%) tỷ lệ tái sinh mẫu thấp (65%) Khi tăng nồng độ NaOCl lên 2% tỷ lệ mẫu nhiễm giảm (20%) tăng tỷ lệ mẫu tái sinh (78%) Mẫu vô trùng tái sinh cao công thức NaOCl 3%, tỷ lệ mẫu nhiễm thấp (10%) tỷ lệ mẫu tái sinh đạt 80% (bảng 1) Bảng Ảnh hưởng nồng độ NaOCl đến tỷ lệ tái sinh mẫu cấy Nồng độ NaOCl (%) Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) Tỷ lệ mẫu tái sinh (%) - Chiều dài trung bình rễ (cm): Đo từ cổ rễ đến đỉnh sinh trưởng chóp rễ dài 30±11,2a 65±13,7b 20±11,2ab 78±32,6a - Chiều cao trung bình (cm): Dùng thước đo từ cổ rễ đến chóp cao 10±13,7b 80±11,2a - Số rễ trung bình/mẫu (rễ): Tổng số rễ/số mẫu ni cấy - Số trung bình (lá): Đếm tổng số thân tính từ thật đến xanh Đánh giá khả sống: Cây nuôi cấy môi trường rễ sau tuần dùng để Bịch mơ đặt nhiệt độ phịng ngày trước trồng vào giá thể Cây dâu tây Mỹ thơm có khoảng 10 rễ, chiều cao trung bình 4-5 cm, khoảng 10 thật chuyển sang nhà lưới để thích nghi với điều kiện bên 3-4 ngày Cây trồng vào giá thể phân hữu (phân chuồng ủ hoai với nấm Trichoderma mụn dừa theo tỷ lệ 1:1:1 v/v/v trước sử dụng) Theo dõi thống kê tỷ lệ sống sau tuần Tỷ lệ sống (%) tính số sống/ tổng số Điều kiện thí nghiệm Thí nghiệm thực phịng ni cấy mơ tế bào thực vật Mơi trường khử trùng nồi autoclave nhiệt độ 121oC, thời gian 20 phút, áp suất atm Nhiệt độ phịng ni cấy 22-25oC Cường độ chiếu sáng 15002000 lux Thời gian chiếu sáng 16 sáng/8 tối Phân tích thống kê Số liệu ghi nhận xử lý thông kê Excel SAS 9.4 65(5) 5.2023 Ghi chú: chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, p=0,05 NaOCl xem chất khử trùng hiệu quả, có khả chống lại vi khuẩn, nấm virus NaOCl tiêu diệt vi sinh vật thông qua chế hoạt động peroxide phân tử chlorua ion kết hợp với phân tử protein gây chết sinh học sinh vật [15] Nhìn chung, tất nồng độ NaOCl sử dụng để vô trùng bề mặt mẫu ảnh hưởng đáng kể đến trình tái sinh mẫu Trong đó, nồng độ NaOCl 3% xem phù hợp cho q trình vơ trùng mẫu dâu tây Mỹ thơm Ảnh hưởng nồng độ BAP kinetin đến khả nhân chồi Để tối ưu môi trường nhân chồi, mẫu đỉnh sinh trưởng sau tuần tái sinh chuyển sang môi trường MS có chứa nồng độ BAP (0, 0,1, 0,3 0,5 mg/l) kinetin (0, 0,1, 0,2 0,3 mg/l) kết hợp riêng lẻ Hiệu trình nhân chồi quan sát rõ sau tuần nuôi cấy Kết cho thấy, kết hợp BAP kinetin cho hiệu nhân chồi tốt Cụ thể, mơi trường MS có bổ sung 0,3 mg/l BAP 0,1 mg/l kinetin cho số chồi cao (16,2 chồi/mẫu), ngược lại mơi trường có kinetin cho số chồi thấp nhất, trung bình 2,3 chồi/mẫu (từ 2,2 đến 2,4), BAP có số chồi trung bình 8,1 chồi/mẫu (từ 6,8 đến 10,7), cao so với đối chứng (bảng 2, hình 2) 66 Khoa học Nơng nghiệp / Công nghệ sinh học nông nghiệp, thủy sản Bảng Ảnh hưởng nồng độ BAP kinetin đến khả nhân chồi giống dâu tây Mỹ thơm sau tuần BAP (mg/l) Kinetin (mg/l) Số chồi/mẫu (chồi) 0 1,8±1,1 0,1 0,3 0,5 Số lá/chồi (lá) Chiều cao chồi (cm) 9,1±2,8a 3,7±0,8ab 10,7±4,5cd 5,9±1,1cde 1,6±0,3f 6,9±3,1e 5,3±1,3cde 1,7±0,4f 6,8±2,8e 5,0±2,1e 2,8±0,6de 0,1 0,1 14,0±7,7 6,9±2,0 3,7±1,0ab 0,1 0,2 12,2±9,2bcd 6,5±1,7bc 3,8±1,2a 0,1 0,3 9,5±6,4de 6,4±1,8bc 4,0±1,1a 0,3 0,1 16,2±12,7a 5,9±1,4bcde 3,3±0,7bc 0,3 0,2 15,6±11,3ab 5,8±1,6cde 3,0±0,7cde 0,3 0,3 14,4±9,0abc 6,2±2,0bcd 2,7±0,6e 0,5 0,1 15,3±9,0ab 5,6±1,7cde 2,7±0,6e 0,5 0,2 14,6±9,9ab 5,6±1,4cde 2,8±0,6de 0,5 0,3 13,5±7,1 5,5±1,6 3,0±0,7cde 0,1 2,4±1,4f 9,6±1,9a 3,2±0,7cd 0,2 2,3±1,6f 8,8±2,5a 3,0±0,7cde 0,3 2,2±1,7f 8,8±2,0a 2,7±0,8e f abc abc b cde Theo số liệu bảng 2, nồng độ chất điều hoà sinh trưởng tỷ lệ nghịch với số hình thành tỷ lệ thuận với chiều cao chồi Kinetin xem phù hợp cho trình hình thành chiều cao chồi dâu tây Mỹ thơm so với BAP Thật vậy, mơi trường ni cấy có chứa 0,1 mg/l BAP có số 5,9 lá/chồi chiều cao chồi 1,6 cm, ngược lại, mơi trường có chứa 0,1 mg/l kinetin có số 9,6 lá/chồi chiều cao chồi 3,2 cm Tuy nhiên, có kết hợp BAP kinetin, chiều cao chồi tăng lên đáng kể, cụ thể môi trường MS có bổ sung 0,1 mg/l BAP 0,3 mg/l kinetin có chiều cao chồi cao 4,0 cm Trong ni cấy mơ, chất điều hịa sinh trưởng thực vật thành phần môi trường quan trọng việc xác định đường phát triển tế bào thực vật Cytokinin BAP kinetin có vai trị việc làm giảm ưu chồi ngọn, kích thích hình thành chồi nách chồi bất định nuôi cấy đỉnh sinh trưởng chuối [16] Tầm quan trọng BAP M.K Biswas cs (2007) [17] nhấn mạnh nghiên cứu nhân giống dâu tây, theo BAP có vai trị quan trọng trình tái sinh dâu tây Kết tương tự báo cáo Fragaria indica Andr [18], đu đủ [19] Eucalyptus grandis [20] Ghi chú: chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, p=0,05 Ảnh hưởng nồng độ NAA BAP đến khả tạo rễ Hình Ảnh hưởng nồng độ BAP kinetin (KN) đến trình hình thành chồi dâu tây Mỹ thơm sau tuần nuôi cấy (A) Đối chứng; (B) 0,1 mg/l BAP; (C) 0,3 mg/l BAP; (D) 0,5 mg/l BAP; (E) 0,1 mg/l BAP + 0,1 mg/l KN; (F) 0,1 mg/l BAP + 0,2 mg/l KN; (G) 0,1 mg/l BAP + 0,3 mg/l KN; (H) 0,3 mg/l BAP + 0,1 mg/l KN; (I) 0,3 mg/l BAP + 0,2 mg/l KN; (J) 0,3 mg/l BAP + 0,3 mg/l KN; (K) 0,5 mg/l BAP + 0,1 mg/l KN; (L) 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l KN; (M) 0,5 mg/l BAP + 0,3 mg/l KN; (N) 0,1 mg/l KN; (O) 0,2 mg/l KN; (P) 0,3 mg/l KN Các chồi nhỏ sau tuần nuôi cấy chuyển sang môi trường 1/2 MS có chứa nồng độ NAA (0, 0,1, 0,3, 0,5, 07 1,0 mg/l) BAP (0,1, 0,3 0,5 mg/l) kết hợp riêng lẻ Kết sau tuần ni cấy cho thấy có khác biệt đáng kể cơng thức thí nghiệm (bảng 3) Ở công thức không bổ sung NAA BAP, chiều cao đo khoảng 5,3 cm, có 13,1 lá/cây, 7,6 rễ/mẫu chiều dài rễ trung bình 5,4 cm (bảng 3) Khi bổ sung NAA (0,1 đến 1,0 mg/l) vào mơi trường ni cấy, số rễ trung bình/mẫu tăng đáng kể, dao động 11,8-18,0 rễ/mẫu Tuy nhiên, gia tăng nồng độ NAA có xu hướng làm giảm dần chiều dài rễ (2,2-6,1 rễ), chiều cao (2,6-4,7 cm) số lá/cây (10,0-12,0 lá) so với không bổ sung nồng độ thấp NAA (0,1 mg/l) Ngoài ra, việc bổ sung NAA 0,3-1,0 mg/l cịn tạo mơ sẹo cao mẫu ni cấy (bảng 3, hình 3C-3F) Ở công thức bổ sung riêng lẻ BAP (0,1-0,5 mg/l) cho thấy, mẫu nuôi cấy gia tăng chiều cao cây, dao động 5,3-5,8 cm, cao công thức bổ sung riêng lẻ NAA kết hợp với NAA Tuy nhiên, kết thống kê cho thấy, số lá/cây, số rễ/mẫu lại thấp đáng kể so với cơng thức cịn lại (bảng 3, Hình 3V-3X) Khi bổ sung kết hợp NAA với BAP cho thấy, môi trường 0,1 mg/l NAA kết hợp với BAP (0,1, 0,3 0,5 mg/l) xem phù hợp cho trình hình thành rễ khơng hình thành mơ sẹo giống dâu tây Mỹ thơm Trong đó, kết hợp 0,1 mg/l NAA 0,5 mg/l BAP cho kết tốt với chiều cao đạt 5,4 cm, 11,2 lá/cây, 12,6 rễ/mẫu rễ dài 4,2 cm (bảng 3, hình 3I) 65(5) 5.2023 67 Khoa học Nơng nghiệp / Công nghệ sinh học nông nghiệp, thủy sản Bảng Ảnh hưởng NAA BAP đến trình hình thành rễ giống dâu tây Mỹ thơm sau tuần nuôi cấy NAA (mg/l) 0,1 0,3 0,5 0,7 1,0 0,1 0,1 0,1 0,3 0,3 0,3 0,5 0,5 0,5 0,7 0,7 0,7 1,0 1,0 1,0 0 BAP (mg/l) 0 0 0 0,1 0,3 0,5 0,1 0,3 0,5 0,1 0,3 0,5 0,1 0,3 0,5 0,1 0,3 0,5 0,1 0,3 0,5 Số rễ/mẫu (rễ) 7,6±1,2de 11,8±2,2bc 18,0±7,4a 15,4±2,4ab 13,2±9,3bc 12,6±2,7bc 14,4±2,3abc 14,1±3,4abc 12,6±2,0bc 15,7±4,5ab 13,7±6,0bc 13,4±6,0bc 10,9±2,6cd 12,1±2,0bc 13,2±4,7bc 15,4±2,1ab 12,9±1,9bc 10,9±2,8cd 13,3±3,0bc 16,2±3,4ab 13,2±4,1bc 6,7±1,7e 5,8±1,0e 5,3±1,5e Chiều dài rễ (cm) 5,4±1,0bc 6,1±3,0b 3,7±0,6defg 2,6±1,0fg 2,4±0,4g 2,2±0,5g 9,1±3,7a 8,0±2,6a 4,2±1,2cdef 3,4±1,0efg 3,1±0,7efg 2,7±0,9fg 8,7±3,7a 3,0±1,0efg 2,2±0,5g 2,9±0,6efg 2,8±0,8fg 2,9±0,9efg 2,2±0,6g 2,6±0,4fg 2,3±0,4g 4,5±0,8cde 4,1±1,0cdef 5,1±1,1bcd Số lá/cây (lá) 13,1±1,6ab 12,0±1,2abcd 11,0±0,9bcdef 11,0±1,1bcdef 12,2±1,3abc 10,0±2,5defg 12,7±1,1abc 11,9±2,0abcd 11,2±1,9bcdef 11,1±1,1bcdef 11,1±3,9bcdef 7,0±1,9h 13,3±1,4a 12,0±3,9abcd 10,6±0,9cdefg 11,2±2,0bcdef 12,4±1,7abc 12,3±1,4abc 11,7±1,2abcde 11,3±1,7abcde 10,9±1,8cdef 8,9±1,3g 9,2±1,2fg 9,8±1,6efg Chiều cao (cm) 5,3±0,6abcd 4,7±1,1bcdefg 3,9±0,6ghijk 3,3±0,8klm 3,5±0,7ijkl 2,6±1,0m 4,8±1,0bcdef 4,6±1,0bcdefg 5,4±1,2ab 4,1±0,7fghijk 3,3±0,5klm 2,9±0,9lm 4,7±0,6bcdefg 4,9±1,0abcde 3,5±0,7jkl 3,9±0,8ghijk 4,3±0,4efghij 4,4±0,9cdefgh 5,3±0,9abc 3,8±0,7hijkl 2,4±1,1m 5,8±0,9a 5,7±1,0a 5,3±1,3abcd Mô sẹo ++ ++ ++ ++ + + ++ + + + + + ++ - Ghi chú: chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, p=0,05; +: mơ sẹo nhỏ; ++: mơ sẹo to; -: khơng hình thành mô sẹo M Ikeuchi cs (2013) [21] báo cáo rằng, việc bổ sung auxin cytokinin ngoại sinh cảm ứng tạo mơ sẹo lồi thực vật khác Tuy nhiên, q trình cảm ứng mơ sẹo nồng độ auxin cytokinin cân Khi nồng độ auxin cao cytokinin hình thành rễ, ngược lại tái sinh chồi Mẫu nuôi cấy bắt đầu hình thành rễ sau tuần ni cấy mơi trường khơng có bổ sung chất điều hồ sinh trưởng, khơng hình thành mơ sẹo Số rễ trung bình mơi trường cảm ứng tạo rễ 14,4 rễ/mẫu chiều dài rễ trung bình cao 9,1 cm tìm thấy cơng thức 0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP, đó, số trung bình/mẫu tìm thấy cao (13,3 lá) công thức 0,5 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP, chiều cao trung bình lớn cơng thức 0,l mg/l BAP (5,8 cm) (bảng 3) Kết nghiên cứu I.D Bhatt U Dhar (2000) [18] cho thấy, mơi trường có chứa μM NAA có khoảng 97% rễ hình thành giống dâu tây Ấn Độ, đồng thời nồng độ NAA cao, số rễ hình thành Tóm lại, mơi trường có chứa BAP NAA sản sinh mơ sẹo, gây ức chế khéo dài rễ mơ sẹo bao phủ chồi ức chế hình thành rễ từ chồi Với mơi trường khơng bổ sung auxin cytokinin, mẫu cấy trung bình có 7,6 rễ/mẫu, chiều dài trung bình rễ đạt 5,4, số trung bình 13,1 chiều cao trung bình 5,3 cm Tuy nhiên, số lá/cây khơng có khác biệt ý nghĩa thống kê so với cơng thức có bổ sung 0,5 mg/l NAA +0,1 mg/l BAP (bảng 3) S.C Debnath (2005) [22] rằng, môi trường MS khơng có hormone tạo rễ thích hợp cho dâu tây ngó Kết tương tự tìm thấy nghiên cứu A.Y ElKichaoui (2014) [23], theo mơi trường MS khơng chứa chất điều hồ sinh trưởng tạo số lượng rễ, chiều dài rễ chiều cao cao Đánh giá khả sống giống dâu tây Mỹ thơm Hình Ảnh hưởng NAA BAP đến trình hình thành rễ giống dâu tây Mỹ thơm sau tuần nuôi cấy (A) Đối chứng; (B) 0,1 mg/l NAA; (C) 0,3 mg/l NAA; (D) 0,5 mg/l NAA; (E) 0,7 mg/l NAA; (F) mg/l NAA; (G) 0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP; (H) 0,1 mg/l NAA + 0,3 mg/l BAP; (I) 0,1 mg/l NAA + 0,5 mg/l BAP; (J) 0,3 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP; (K) 0,3 mg/l NAA + 0,3 mg/l BAP; (L) 0,3 mg/l NAA + 0,5 mg/l BAP; (M) 0,5 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP; (N) 0,5 mg/l NAA + 0,3 mg/l BAP; (O) 0,5 mg/l NAA + 0,5 mg/l BAP; (P) 0,7 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP; (Q) 0,7 mg/l NAA + 0,3 mg/l BAP; (R) 0,7 mg/l NAA + 0,5 mg/l BAP; (S) 1,0 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP; (T) 1,0 mg/l NAA + 0,3 mg/l BAP; (U) 1,0 mg/l NAA + 0,5 mg/l BAP; (V) 0,1 mg/l BAP; (W) 0,3 mg/l BAP; (X) 0,5 mg/l BAP 65(5) 5.2023 Cây nuôi cấy môi trường tạo rễ sau tuần chuyển để Sau tuần dưỡng giá thể có khoảng 64% mẫu sống sinh trưởng Cây bắt đầu ngó sau tháng nhà lưới tiếp tục theo dõi để đánh giá trình phát triển (hình 4) Nghiên cứu F Haddadi cs (2010) [14] cho thấy, giá thể chứa perlite, vermiculite cocopeat (tỷ lệ 2:1:2 v/v/v) có 90% sống tưới với dung dịch Hoagland kích thích q trình hình thành ngó J.J Medina cs (2007) [24] thành công dâu tây giá thể có chứa than bùn, đá trân châu (1:1 v/v) giữ màng polypropylene với 90% độ ẩm tuần Sau đó, chuyển sang chậu có chứa than bùn, đất cát đá trân châu (7:2:1 v/v/v) tuần 68 Khoa học Nông nghiệp / Công nghệ sinh học nơng nghiệp, thủy sản Hình Cây dâu tây Mỹ thơm nuôi cấy mô trồng giá thể phân chuồng ủ hoai với nấm Trichoderma mụn dừa (1:1:1 v/v/v) (A); chuyển sang chậu lớn sau tuần dưỡng (B); ngó sau tháng (C) Kết luận Từ kết nghiên cứu cho thấy, ngó dâu tây Mỹ thơm khử trùng 3% NaClO 20 phút cho hiệu tái sinh cao tỷ lệ mẫu nhiễm thấp nhất; số chồi tái sinh tốt tìm thấy mơi trường MS có bổ sung 0,3 mg/l BAP 0,1 mg/l kinetin với 16,2 chồi/mẫu Chồi dâu tây Mỹ thơm tạo rễ tốt mơi trường 1/2 MS có bổ sung 0,1 mg/l NAA + 0,1 mg/l BAP với 14,4 giá thể phân chuồng ủ hoai với nấm Trichoderma mụn xơ dừa (tỷ lệ 1:1:1 v/v/v) phù hợp cho q trình ngơi giống dâu tây Mỹ thơm (64%) Tuy nhiên, để hồn thiện quy trình nhân giống cần tiếp tục thử nghiệm giá thể khác xơ dừa phân hữu để tối ưu q q trình ngơi cho dâu tây Mỹ thơm TÀI LIỆU THAM KHẢO [10] A.J Passey, et al (2003), “Adventitious shoot regeneration from sevencommercial strawberry cultivars (Fragaria x ananassa Duch.) using a range of explanttypes”, Plant Cell Rep., 21(5), pp.397-401 [11] K.A Quiroz, et al (2017), “Meristem culture and subsequent micropropagation of Chilean strawberry (Fragaria chiloensis (L.) Duch.)”, Biological Research, 50(1), DOI: 10.1186/s40659-017-0125-8 [12] S Knyazev, et al (2021), “Fundamental and applied research in biology and agriculture: Current issues, achievements and innovations”, International Scientific and Practical Conference, EDP Sciences, 254, DOI: 10.1051/ e3sconf/202125404004 [13] S.M Jain, S.J Ochatt (2010), Protocols for In Vitro Propagation of Ornamental Plants, Humana Press, 589, 414pp [14] F Haddadi, et al (2010), “Micropropagation of strawberry cv Camarosa: Prolific shoot regeneration from in vitro shoot tips using thidiazuron with N6benzylamino-purine”, HortScience, 45(3), pp.453-456 [15] L Pauling (1955), “The stochastic method and the structure of proteins”, American Scientist, 43(2), pp.285-297 [1] N.S Nehra, et al (1994), “Effect of in vitro propagation methods on field performance of two strawberry cultivars”, Euphytica, 76, pp.107-115 [16] P Madhulatha, et al (2004), “Influence of liquid pulse treatment with growth regulators on in vitro propagation of banana (Musa spp AAA)”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 76, pp.189-192 [2] Afrin, et al (2016), “Promising health benefits of the strawberry: A focus on clinical studies”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 64(22), pp.4435-4449 [17] M.K Biswas, et al (2007), “Multiple shoots regeneration of strawberry under various colourIlluminations”, American - Eurasian Journal of Scientific Research, 2(2), pp.133-135 [3] S Karhu, K Hakala (2002), “Micropropagated strawberries on the field”, Acta Hortic., 567, pp.321-324 [18] I.D Bhatt, U Dhar (2000), “Micropropagation of Indian wild strawberry”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 60, pp.83-88 [4] R.R Martin, I.E Tzanetakis (2013), “High-risk strawberry viruses by region in the United States and Canada: Implications for certification, nurseries, and fruit production”, Plant Disease, 97(10), pp.1358-1362 [19] R.A Cononer, R.E Litz (1978), “In vitro propagation of papaya a (Carica papaya L.)”, Hort Sci., 13, pp.241-242 [5] JR Thompson, W Jelkman (2003), “The detection and variation of strawberry mottle virus”, Plant Disease, 87(4), pp.385-390 [20] L.L.D Silva (1990), In vitro Propagation of Adults Eucalyptus Grandis Hill Ex Maiden from Epicormic Shoots, Thesis, Universidade Federal De Vicosa, 60pp [6] E Seemüller, F Merkle (1984), “Eliminierung von phytophthora fragariae durch meristemkultur”, Gartenbauwissenschaft, 49(5-6), pp.227-230 [21] M Ikeuchi, et al (2013), “Plant callus: Mechanisms of induction and repression”, The Plant Cell, 25(9), pp.3159-3173 [7] R García-Gonzáles, et al (2010), “Plant tissue culture: Current status, opportunities and challenges”, Cienc Inv Agr., 37(3), pp.5-30 [22] S.C Debnath (2005), “Strawberry sepal: Another explant for thidiazuroninduced adventitious shoot regeneration”, In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant, 41, pp.671-676 [8] E Ambros, et al (2021), “Effect of antioxidants and growth regulators on shoot organogenesis in the apical meristem culture of Fragaria × ananassa (Duchesne ex Weston) Duchesne ex Rozier”, Proceedings of Universities Applied Chemistry and Biotechnology, 11(4), pp.549-560 [9] M Ashrafuzzaman, et al (2013), “Micropropagation of strawberry (Fragaria ananassa) through runner culture”, Bangladesh Journal of Agricultural Research, 38(3), pp.467-472 65(5) 5.2023 [23] A.Y ElKichaoui (2014), “In vitro propagation of strawberry (Fragaria x annanasa Duch.) through organogenesis via runner tips”, Ann Pl Sci, 3(3), pp.619-627 [24] J.J Medina, et al (2007), “Field performance characterization of strawberry (Fragaria × ananassa Duch.) plants derived from cryopreserved apices”, Sci Hort., 113(1), pp.28-32 69