Nghiên cứu môi trường tạo rễ và giá thể trồng thích hợp cho cây lan ascocenda suksamran sunlight in vitro

TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP - TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGHIÊN CỨU MƠI TRƢỜNG TẠO RỄ VÀ GIÁ THỂ TRỒNG THÍCH HỢP CHO CÂY LAN Ascocenda suksamran Sunlight IN VITRO LÊ THỊ MỸ TIÊN AN GIANG, THÁNG NĂM 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP - TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGHIÊN CỨU MÔI TRƢỜNG TẠO RỄ VÀ GIÁ THỂ TRỒNG THÍCH HỢP CHO CÂY LAN Ascocenda suksamran Sunlight IN VITRO LÊ THỊ MỸ TIÊN DSH173288 GV HƢỚNG DẪN TS NGUYỄN THỊ MỸ DUYÊN AN GIANG, THÁNG NĂM 2021 LỜI CẢM ƠN Ai nói: “Khơng có đơn độc đỉnh thành cơng” khơng có thành cơng mà khơng có giúp đỡ hay hỗ trợ dù hay nhiều, dù trực tiếp hay gián tiếp ngƣời khác Đúng vậy, trình học tập thực đề tài “Nghiên cứu môi trƣờng tạo rễ giá thể trồng thích hợp cho lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro” đạt kết thành công nhƣ hôm điều nhờ vào nhiều quan tâm, giúp đở nhiệt tình thầy cơ, tạo điều kiện vật chất tinh thần từ gia đình bạn bè để hoàn thành đề tài Em xin bày tỏ kính trọng với lịng biết ơn sâu sắc em xin gửi đến Quý Thầy Cô Trƣờng Đại học An Giang, đặc biệt Thầy Cô Bộ môn Công nghệ Sinh học trƣờng lời cảm ơn chân thành tạo điều kiện để em hồn thành chƣơng trình Đại học Đặc biệt, em xin cảm ơn cô Nguyễn Thị Mỹ Duyên, ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ tận tình truyền đạt kiến thức quý báu cho em suốt khoảng thời gian thực đề tài Nếu khơng có lời hƣớng dẫn dạy bảo em nghĩ báo cáo em khó hồn thiện đƣợc Tiếp theo, em xin trân trọng cảm ơn với Thầy Cô quản lí phịng thí nghiệm, Thầy Cơ khoa Nơng nghiệp - Tài Nguyên Thiên Nhiên nói chung Bộ mơn Cơng nghệ Sinh học nói riêng nhiệt tình việc truyền đạt vốn kiến thức bổ ích nhƣ giúp đỡ em nhiều suốt bốn năm học tập trƣờng Lời sau cùng, em xin kính chúc Quý Thầy Cô dồi sức khỏe, niềm tin, vững bƣớc tiếp tục sứ mệnh trồng ngƣời cho hệ mai sau Trân trọng ! An Giang, ngày 15 tháng năm 2021 Ngƣời viết Lê Thị Mỹ Tiên i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƢƠNG LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 MỘT SỐ ĐẶC TÍNH VỀ HỌ LAN ORCHIDACEAE 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Kỹ thuật trồng loài thuộc giống Vanda Ascocenda 2.2 GIỚI THIỆU VỀ LAN Ascocenda suksamran Sunlight 2.2.1 Vanda 2.2.2 Ascocentrum 2.3 TỔNG QUAN VỀ KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ 2.3.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3.2 Ứng dụng nuôi cấy mô – tế bào thực vật 2.3.3 Ƣu điểm nuôi cấy mô - tế bào thực vật 2.3.4 Hạn chế nhân giống in vitro 2.3.5 Các giai đoạn nhân giống in vitro 2.3.6 Môi trƣờng nuôi cấy điều kiện nuôi cấy 2.4 SỰ THUẦN DƢỠNG CÂY CẤY MÔ 13 2.4.1 Kỹ thuật dƣỡng cấy mô 13 2.4.2 Trong môi trƣờng tự nhiên nhà lƣới 13 2.5 CÁC GIÁ THỂ RA CÂY LAN IN VITRO 15 2.6 NHỮNG NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN VỀ NHÂN GIỐNG LAN IN VITRO 16 2.6.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 16 ii 2.6.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 17 CHƢƠNG 19 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 19 3.2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.2.1 Vật liệu 19 3.2.2 Trang thiết bị phịng thí nghiệm 20 3.2.3 Dụng cụ thí nghiệm 20 3.2.4 Môi trƣờng nuôi cấy hóa chất 20 3.2.5 Điều kiện nuôi cấy 20 3.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.3.1 Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy đến tạo rễ lan Ascocenda suksamran Sunlight 20 3.3.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu giá thể ảnh hƣởng đến thích nghi lan Ascocenda suksamran Sunlight 22 3.3.3 Xử lý số liệu 23 CHƢƠNG 24 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy đến tạo rễ lan Ascocenda suksamran Sunlight 24 4.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu giá thể ảnh hƣởng đến thích nghi lan Ascocenda suksamran Sunlight 30 CHƢƠNG 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 5.1 KẾT LUẬN 32 5.2 KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤC LỤC 36 PHỤC LỤC 37 iii DANH SÁCH BẢNG Tên bảng Bảng Bảng Bảng Bảng Bảng Thành phần thành phần tự chọn môi trƣờng nuôi cấy Chiều cao (cm) chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight sau 14 tuần cấy Số chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight sau 14 tuần cấy Chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight tạo rễ hồn chỉnh sau 16 tuần ni cấy Ảnh hƣởng giá thể lên thích nghi sinh trƣởng lan vƣờn ƣơm Trang 24 25 27 30 iv DANH SÁCH HÌNH Tên hình Trang Hình Ascocenda suksamran Sunlight Hình Cụm chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight 19 Hình Giá thể trồng 20 Hình Lan Ascocenda suksamran Sunlight tạo rễ hồn chỉnh 22 Hình Sự tạo rễ chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight sau 14 tuần nuôi cấy 29 Hình Sự tạo rễ chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight sau 16 tuần ni cấy 29 Hình Cây lan Ascocenda suksamran Sunlight trồng vào chậu sau tuần 31 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT IAA Indole-3-acetic acid NAA Naphthalene Acetic Aicd IBA Indole butyric acid EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid Cs Cộng Ctv Cộng tác viên MS Murashige Skoog SH Schenk R U Hildebrandt A C RE Robert Ernst G Gam L Lít Mg Miligram Ml Mililit Mm Milimet Cm Centimet ND Nƣớc dừa C Chuối vi CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Mỗi lồi hoa chứa ẩn vẻ đẹp, sức quyến rũ riêng Hoa lan loài hoa biểu tƣợng cho đẹp giàu sang, niềm hạnh phúc, hoa đem đến cho ngƣời gặp nhiều may mắn sống loài hoa lan đƣợc nhiều ngƣời lựa chọn tƣợng trƣng cho sinh sôi nảy nở phong thủy Một loài lan đƣợc nhiều ngƣời yêu thích Ascocenda, sở hữu vẻ đẹp tinh tế hình dáng lẫn màu sắc Ascocenda chi phong lan lai giống Asocentrum Vanda Các chậu treo Ascocenda dùng trang trí giàn treo vƣờn, ban cơng, cửa sổ, cầu thang… góp phần làm tƣơi không gian quán cafe, nhà hàng, khách sạn, trang trí nội thất văn phịng hay làm q tặng… Vừa để trang trí đẹp, vừa để giải trí tinh thần Vì việc đầu tƣ phát triển nhân nhanh loại giống lan việc làm cần thiết Với mục đích nhân nhanh số lƣợng lớn lan Ascocenda suksamran Sunlight đáp ứng nhu cầu nguồn giống cho thị trƣờng Kỹ thuật nhân giống in vitro đƣợc tiến hành nghiên cứu đƣa vào áp dụng thực tiễn sản xuất Ƣu điểm kỹ thuật cho hệ số nhân lớn, đồng kiểu hình, giúp thu hoạch đồng loạt, tính di truyền ổn định, chất lƣợng giống tốt Bên cạnh đó, yếu tố khơng phần quan trọng định đến thành cơng qui trình nhân giống nuôi cấy mô việc đƣa mô vƣờn ƣơm với tỷ lệ sống cao Do đó, đề tài “Nghiên cứu mơi trƣờng tạo rễ giá thể trồng thích hợp cho lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro” đƣợc thực nhằm nhân nhanh loài lan nghiên cứu loại giá thể thích hợp cho việc lan nuôi cấy mô cho tỷ lệ sống cao để cung cấp giống cho thị trƣờng hoa lan tỉnh 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Xác định mơi trƣờng thích hợp cho việc tạo rễ chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro Xác định giá thể thích hợp cho việc đƣa lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro trồng vƣờn ƣơm 1.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Khảo sát nồng độ NAA nƣớc dừa đến khả tạo rễ phát triển chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro Khảo sát nồng độ NAA dịch chuối đến khả tạo rễ phát triển chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro Khảo sát loại giá thể than củi, vỏ thơng, dớn đến thích nghi phát triển lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro dừa có khác biệt thống kê số rễ nhiều nghiệm thức (A2, A3) khơng có bổ sung chuối nƣớc dừa Ở nghiệm thức A4, số rễ cao đạt 3,2 rễ, nhƣng khơng có khác biệt thống kê với nghiệm thức A5, A7 có số rễ tƣơng đồng 2,7 rễ Xét chiều dài rễ, nghiệm thức A7, chiều dài dài trung bình 43,3 mm Đến thời điểm 16 tuần sau cấy, chiều cao chồi nghiệm thức A5 cao nhất, nhƣng khơng có khác biệt thống kê với nghiệm thức A7 Bên cạnh đó, số nghiệm thức A4 đạt cao (6,5 lá) nhƣng khơng có khác biệt với nghiệm thức A5 A7 Nhƣ vậy, ảnh hƣởng nồng độ NAA tạo rễ nhiều dài Nồng độ mg/L NAA bổ sung chuối mg/L NAA bổ sung nƣớc dừa có tƣơng tác nâng cao hiệu tạo rễ tốt, hình thái rễ dài, to khỏe, chồi cao (Hình A5, A7) Sau 16 tuần nuôi cấy môi trƣờng A5 A7 tạo rễ hồn chỉnh tốt nghiệm thức cịn lại Số rễ, dài rễ, chiều cao, số tƣơng đối tốt ổn định Sau 16 tuần nuôi cấy nghiệm thức A5 (môi trƣờng MS bổ sung mg/L NAA + 100 g/L chuối) đạt số rễ 2,7 rễ, chiều dài rễ 38,6 mm, chiều cao 7,5 cm có 5,8 nghiệm thức A7 (môi trƣờng MS bổ sung mg/L NAA + 150 mL/L nƣớc dừa) chồi đạt số rễ đạt 2,7 rễ, chiều dài rễ đạt 43,3 mm, chiều cao 6,8 cm có 6,2 (Bảng 4) Hầu hết giống lan thích hợp với mơi trƣờng có bổ sung nƣớc dừa Kết tƣơng đồng với Vijayakumar et al (2012) nhân giống in vitro lan Dendrobium sp sử dụng 15% nƣớc dừa Huang cộng (2001) cho thấy kết bổ sung 150 ml/L nƣớc dừa phù hợp cho trình nhân chồi rễ đối tƣợng lan Vân Hài lai (Paphiopedilum philippinese x Paphiopedilum Susan Booth) Kết nghiên cứu Vũ Quốc Luận cộng (2014) sau 90 ngày nuôi cấy, cho thấy hàm lƣợng bột chuối 100 g/L cho vào mơi trƣờng SH có bổ sung 0,5 mg/l BA, 0,5 mg/l NAA, 30 g/l sucrose, g/l agar, g/l than hoạt tính, pH = 5,8 chồi lan vân hài (paphiopedilum callosum) phát triển tốt chiều dài (4,60 cm), chiều dài rễ (4,37 cm) Hiện chƣa thấy công bố nghiên cứu sử dụng NAA + chuối NAA + nƣớc dừa trình tạo rễ chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight, nhƣng có nghiên cứu cơng bố sử dụng độc lập 0,1-1 mg/L NAA 0,1-1 mg/L IBA thích hợp cho tạo rễ in vitro hoa lan Miltonia sp., với tỉ lệ tạo rễ 100% nhƣ nghiên cứu Phan Xuân Huyên cộng (2015) Theo nghiên cứu Nguyễn Thị Sơn cộng (2014) môi trƣờng RE + 10g sucrose + 6g agar + 0,3g than hoạt tính + 0,5 αNAA/L mơi trƣờng tối ƣu giai đoạn tạo hoàn chỉnh giống lan Dendrobium officinale Kimura et Migo với tỷ lệ rễ đạt 100%, số rễ trung bình 4,51 rễ/chồi; chiều dài rễ trung bình 3,19 cm sau 30 ngày nuôi cấy Các nghiên cứu cho thấy nồng độ 28 NAA đƣợc sử dụng nhân giống in vitro loại khác khác nhau, có loại thích hợp nồng độ thấp, có loại thích hợp nồng độ cao Nhƣ sau kết thúc thí nghiệm tạo rễ hồn chỉnh nhận thấy ngồi chất điều hịa sinh trƣởng auxin NAA chuối nƣớc dừa nguồn chất hữu có vai trị quan trọng việc tạo rễ hoàn chỉnh lan Ascocenda suksamran Sunlight Đồng thời, xác định đƣợc nghiệm thức A5 (môi trƣờng MS có bổ sung mg/L NAA + 100 g/L chuối) nghiệm thức A7 (mơi trƣờng MS có bổ sung mg/L NAA + 150 mL/L nƣớc dừa) hai mơi trƣờng thích hợp để giúp mẫu lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro tạo rễ hoàn chỉnh Tuy nhiên, xét hiệu kinh tế môi trƣờng có bổ sung hữu chuối nƣớc dừa sử dụng chuối để giảm đƣợc chi phí cho mơi trƣờng ni cấy Hình Sự tạo rễ chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight sau 14 tuần ni cấy Hình Sự tạo rễ chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight sau 16 tuần nuôi cấy (A1: MS; A2: MS + 0,5 mg/L NAA; A3: MS + mg/L NAA; A4: MS + 0,5 mg/L NAA +100 g chuối; A5: MS + mg/L NAA +100 g chuối; A6: MS + 0,5 mg/L NAA +150 mL nước dừa; A7: MS + mg/L NAA +150 mL nước dừa) 29 4.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu giá thể ảnh hƣởng đến thích nghi lan Ascocenda suksamran Sunlight Khả thích nghi sinh trƣởng cấy mô Ascocenda suksamran Sunlight giai đoạn vƣờn ƣơm sau tuần trồng chăm sóc giá thể đƣợc thể Bảng Do lan Ascocenda loại lan đơn thân, dài, bẹ xếp sát ôm lấy thân nên lấy tiêu chiều cao chiều dài Kêt thí nghiệm cho thấy, đem vƣờn ƣơm với giá thể khác tỷ lệ sống 100% (phụ lục 2) lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro tạo rễ hồn chỉnh có chồi to khỏe, rễ nhiều dài, trồng dễ thích nghi hấp thụ dinh dƣỡng phát triển tốt nên tỷ lệ sống cao Bảng Ảnh hƣởng giá thể lên thích nghi sinh trƣởng lan vƣờn ƣơm Nghiệm thức Chiều cao dài Tuần Tuần Tuần Số Tuần Tuần Tuần Đặc điểm hình thái B1 11,2 11,7 11,7 4,5b 5,5 5,5 Lá nhỏ, xanh nhạt; rễ ít, ngắn, khơ nƣớc B2 10,7 11,0 11,1 6,3a 6,0 5,3 Lá to, xanh; rễ dài, phát triển a B3 11,1 11,1 11,3 5,8 6,5 6,3 Lá to, xanh đậm;rễ nhiều, dài, phát triển tốt B4 11,3 11,0 11,1 5,7a 5,8 6,3 Lá to, xanh đậm; rễ to, nhiều, phát triển tốt B5 11,2 11,7 12,0 5,3ab 5,7 5,7 Lá to, dài, xanh đậm; rễ to nhiều, khỏe tốt Mức ý nghĩa ns ns ns * ns ns Cv (%) 15,6 14,6 14,4 14,6 17,0 17,8 Chú thích: Trong nhóm giá trị trung bình, trị số có ký tự kèm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê *: khác biệt có ý nghĩa mức 5%, ns: khơng có khác biệt B1: Than; B2: Vỏ thông; B3: Dớn; B4: Dớn + vỏ thông; B5: Dớn + than 30 Kết thí nghiệm cho thấy sau tuần, xét chiều cao chiều dài nghiệm thức khơng có khác biệt thống kê Xét số tuần có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Ở nghiệm thức B2 có số đạt cao 6,3 (Bảng 5) Ở tuần tuần số nghiệm thức khơng có khác biệt thống kê (Bảng 5) Quan sát đặc điểm hình thái bên ngồi sau tuần trồng giá thể có dớn (B3, B4, B5) có số nhiều hơn, to, xanh đậm; rễ to, nhiều phát triển tốt trồng giá thể than (B1) vỏ thông (B2) Do giá thể than (B1) giá thể vỏ thông (B2) không giữ ẩm tốt làm cho thiếu nƣớc phát triển, thấy rõ héo nƣớc khô số lá, rễ ngắn sau tuần trồng Khi phối trộn giá thể nghiệm thức B4 dớn (50%) + vỏ thông (50%) nghiệm thức B5 dớn (50%) + than (50%) phát triển tốt nhiều, xanh đậm, rễ to khỏe (Bảng 5, Hình 8) Điều cho thấy giá thể dớn giữ ẩm tốt thích hợp cho sinh trƣởng giai đoạn đầu điều kiện vƣờn ƣơm Kết tƣơng đƣơng với kết Nguyễn Văn Việt (2017) đƣa trồng với loại giá thể (xơ dừa, dớn trắng, vỏ thơng) dùng dớn trắng đƣợc xử lý ngày nƣớc làm giá thể trồng lan Dendrobium lituiflorum Lindley cho tỷ lệ sống cao đạt tới 93,33% sau tuần theo dõi Phan Xuân Huyên cộng (2015) trồng vụn xơ dừa dớn thích hợp cho sinh trƣởng chuyển Miltonia sp giai đoạn vƣờn ƣơm Nhƣ vậy, giá thể dớn giá thể dớn phối trộn (dớn + vỏ thông, dớn + than) tỷ lệ 1:1 thích hợp cho lan Ascocenda suksamran Sunlight giai đoạn vƣờn ƣơm Hình Cây lan Ascocenda suksamran Sunlight trồng vào chậu sau tuần (B1: Than; B2: Vỏ thông; B3: Dớn; B4: Dớn + vỏ thông; B5: Dớn + than.) 31 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Sau tháng khảo sát việc tạo rễ lan Ascocenda suksamran Sunlight loại môi trƣờng tháng đem trồng vƣờn ƣơm với loại giá thể khác nhau, có kết rút đƣợc kết luận nhƣ sau: Hai mơi trƣờng thích hợp để giúp chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight in vitro tạo rễ hoàn chỉnh nghiệm thức A5 (môi trƣờng MS + mg/L NAA + 100 g/L chuối) A7 (môi trƣờng MS + mg/L NAA + 150 mL/L nƣớc dừa) Chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight phát triển tốt, tạo rễ nhiều, rễ to khỏe sau 16 tuần ni cấy Có thể sử dụng môi trƣờng bổ sung chất hữu chuối thay cho nƣớc dừa để giảm chi phí cho môi trƣờng nuôi cấy Khi chuyển Ascocenda suksamran Sunlight in vitro trồng điều kiện vƣờn ƣơm giá thể dớn giá thể dớn phối trộn (dớn + vỏ thông, dớn + than) tỷ lệ 1:1 thích hợp cho sinh trƣởng giai đoạn vƣờn ƣơm với tỷ lệ sống đạt 100% 5.2 KIẾN NGHỊ Nên sử dụng nƣớc dừa chuối thành phần môi trƣờng nuôi cấy việc tạo rễ lan Ascocenda suksamran Sunlight giúp chồi lan phát triển tạo rễ tốt Ngoài nƣớc dừa chuối cịn nhiều nguồn hữu khơng xác định khác nên khảo sát để xác định khả thích nghi phát triển chồi lan Ascocenda suksamran Sunlight Qua thí nghiệm lan Ascocenda suksamran Sunlight loại giá thể cho tỷ lệ sống 100% sau tuần trồng Do thời gian thực chuyên đề ngắn nên cần thời gian dài để quan sát thêm tình trạng thích nghi để chọn giá thể tốt 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Bá Bổng (1995) Nhân giống nuôi cấy mô An Giang: Khoa học công nghệ môi trƣờng An Giang Bùi Chí Bửu & Nguyễn Thị Lang (2007) Chọn giống trồng phương pháp truyền thống phân tử Hồ Chí Minh: Nhà xuất Nơng Nghiệp Burnet G., Ibrahim R K (1973) Tissue culture of Citrus peel and its potential for flavonoid synthesis, Z Pflanzenphysiol 69:152-162 Dƣơng Công Kiên (2002) Nuôi cấy mô thực vật Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Dƣơng Cơng Kiên (2003) Ni cấy mơ thực vật (II) Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Dƣơng Cơng Kiên (2006) Giáo trình ni cấy mơ (III) Thành phố Hồ Chí Minh: Tủ sách Đại học Khoa học Tự Nhiên Debergh Pierre (2006) Ứng dụng công nghệ nuôi cấy mô nghiên cứu sản xuất hoa – kiểng Đồng Sông Cửu Long Bài giảng – Đại học Cần Thơ George Edwin F (1993) Plant Propagation by Tissue Culture (Parts 1) – 2nd Editiion Exegetics Ltd., England George Edwin F (1996) Plant Propagation by Tissue Culture (Parts 1) – 2nd Editiion Exegetics Ltd., England Griffis JL.,Hennen G., Oglesby R.P (1983) Establishing tisue cultured plant in soil, Comb Proc Intl Plant Prop Soc, 33, 618 – 622 Huỳnh Văn Thới (2005) Cẩm nang nuôi trồng kinh doanh phong lan Hồ Chí Minh Nhà xuất Trẻ Thành phố Hồ Chí Minh Huang L C., Lin C J., Kuo C I., Huang B L., Murashige T (2001) Paphiopedilum cloning in vitro, Sci Hort 91: 111-121 Kaur Saranjeet & Bhutani K.K (2012) Organic growth supplement stimulants for in vitro multiplicationof Cymbidium pendulum (Roxb.) Sw Hort Sci (Prague), 39 (1), 47–52 https://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:UdYOJiMDya0J Lê Văn Hồng (2008) Giáo trình cơng nghệ ni cấy mô tế bào thực vật Hà Nội: NXB Khoa Học Kỹ Thuật Lê Văn Hịa, Nguyễn Bảo Tồn & Đặng Phƣơng Trâm (1999) Sinh lý thực vật Cần Thơ: Đại Học Cần Thơ M O Islam, M Akter & A K M A Prodhan (2011) Effect of potato extract on in vitro seed germination and seedlinggrowth of local Vanda roxburgii orchid J Bangladesh Agril Univ, (2), 211–215 33 Miller D 1983 Weaning and growing on of micropropagated plants, Comb Proc Intl Plant Prop Soc, 33, 253 – 256 Nguyễn Cơng Nghiệp (2004) Trồng hoa lan Hồ Chí Minh: Nhà xuất Trẻ Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Phạm Kim Ngọc, Trần Văn Minh Nguyễn Thị Phƣơng Thảo.(2009) Cơ sở Công nghệ Sinh học- tập 3Công nghệ sinh học Tế Bào Hà Nội: NXB GD Việt Nam Nguyễn Văn Việt (2017) Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro nhân giống lan Hoàng thảo kèn (Dendrobium lituiflorum Lindlye) Tạp chí khoa học cơng nghệ lâm nghiệp, số Nguyễn Bảo Tồn (2010) Giáo trình ni cấy mơ tế bào thực vật Khoa nông nghiệp - Trƣờng Đại học Cần Thơ Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2006) Nhân giống lan Dendrobium anosmum phương pháp nuôi cấy mô Đề tài nghiên cứu khoa học, trƣờng Đại học An Giang Nguyễn Văn Sinh (2018) Môi trường đơn nuôi cấy mô thực vật Truy cập từ https://visitech.vn/moi-truong-don-trong-nuoi-cay-mo-thuc-vat50462/ Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2016) Bài giảng nuôi cấy mô tế bào thực vật An Giang, Đại học An Giang Nguyễn Đức Lƣợng & Lê Thị Thủy Tiên (2002) Công nghệ tế bào Hồ chí Minh: Nhà xuất Đại học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Kiều Tiên, Lê Hồng Giang & Nguyễn Bảo Toàn (2009) Nghiên cứu hiệu benzyl adenin, napthalene acetic acid thành phần hữu không xác định sinh trưởng giống lan Aranda ni cấy in vitro Tạp chí Khoa học (11), 18-27 Nguyễn Thị Sơn, Từ Bích Thủy, Đặng Thị Nhàn, Nguyễn Thị Lý Anh, Hoàng Thị Nga, Nguyễn Quang Thạch (2014) Nhân giống in vitro lan Dendrobium officinale kimura et migo (Thạch hộc thiết bì) Tạp chí Khoa học Phát triển, 12(8): 1274-1282 Overbeek van J., Conklin M E & Blakeslee A F (1941) Factors in coconut milk essential for growth and development of very young Datura embryos Science 94: 350-351 Phan Xuân Huyên, Hoàng Văn Cƣờng, Nguyễn Thị Phƣợng Hoàng (2015) Nghiên cứu nhân giống in vitro hoa lan Miltonia sp Tập chí khoa học Phát triển, 13 (7), 1128-1135 34 Phan Xuân Huyên, Nguyễn Trung Ái, Nguyễn Thị Lang, Nguyễn Thị Diệu Hƣơng, Ðinh Văn Khiêm Dƣơng Tấn Nhựt (2004) Phục tráng nhân nhanh giống Ðịa lan (Cymbidium sp.) ni cấy đỉnh sinh trƣởng Tạp chí Sinh học, 26(1): 48 - 54 Pocock S (1983) Procedures and problems associated with the transfer of tissue cultured plants, Comb Proc Intl Plant Prop Soc, 33, 316 – 320 Rajkumar Kishor, P.S Sha Valli Khan, G.J Sharma (2005) Hybridization and in vitro culture of an orchid hybrid Ascocenda „Kangla‟ Trần Hợp (1998) Phong Lan Việt Nam Nhà xuất nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh, 703 tr Trần Văn Huân (2004) Kỹ thuật nuôi trồng cấy lan Hà Nội: Nhà xuất Mỹ Thuật Hà Nội Vũ Quốc Luận, Trịnh Thị Hƣơng, Nguyễn Phúc Huy, Đỗ Khắc Thịnh, Dƣơng Tấn Nhựt (2014) Ảnh hưởng chất bổ sung hữu lên trình sinh trưởng phát triển chồi lan vân hài (paphiopedilum callosum) ni cấy in vitro Tạp chí khoa học Công nghệ, 52 (1), 49-62 Vũ Thị Phan, Khuất Thị Hải Ninh & Nguyễn Thị Thơ (2018) Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Trầm tím (Dendrobium nestor) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Lâm Nghiệp, (1), 38-44 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng & Lê Hồng Điệp (2005) Công nghệ sinh học tế bào (tập hai) Hà Nội: NXB Giáo Dục Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm & Hồng Minh Tấn (2007) Sinh lí thực vật Hà Nội: NXB Giáo Dục Vijayakumar S., Rajalkshmi G and Kalimuthu K (2012) Propagation of Dendrobium aggregatum through the culture of immature seeds from green capsules Lankesteriana, 12(2): 131 - 135 35 PHỤC LỤC Bảng : Thành phần môi trƣờng MS (Murashire Skoog, 1962) STT Nhóm Hóa chất Thành phần mơi trƣờng(mg/l) Lấy từ dung dịch mẹ (ml) Đa lƣợng MS1 NH4NO3 1.650 100 KNO3 1.900 MgSO4.7H2O 370 Đa lƣợng MS2 CaCl2 330 100 Đa lƣợng MS3 KH2PO4 170 100 Fe EDTA FeSO4.7H2O 27,8 10 Na2EDTA 37,3 H3PO3 6.2 MnSO4 22.3 ZnSO4.7H2O 11.5 Na2MoO4.2H2O 0.25 CuSO4.2H2O 0.025 KI 0.83 CoCl2 0.025 Pyridoxine 0.5 Niccotinic 0.5 Thiamine HCl 0.4 Glycine 0.2 100 Vi lƣợng Vitamine Chất hữu Myo-Inositol Chất điều hòa sinh trƣởng NAA, IAA Thành phần khác BA, Kinetin Thạch g/l Đƣờng 20g/l Than hoạt tính 1g /l 36 PHỤC LỤC Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng đến tạo rễ lan Ascocenda suksamran Sunlight Bảng pt1: Phân tích ANOVA chiều cao lan sau tuần cấy Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng Cv (%) Độ tự Tổng bình phương 35 41 Trung bình Giá trị F bình phương 15.78333333 2.63055556 3.99 P 0.0038 23.09000000 0.65971429 38.87333333 16.68962 Bảng pt2: Phân tích ANOVA chiều cao lan sau tuần cấy Nguồn Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F biến động phương bình phương Nghiệm 14.05619048 2.34269841 3.42 thức Sai số 35 23.97166667 0.68490476 Tổng 41 38.02785714 Cv (%) 16.91424 Bảng pt3: Phân tích ANOVA chiều cao lan sau tuần cấy Nguồn Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F biến động phương bình phương Nghiệm 13.70476190 2.28412698 3.09 thức Sai số 35 25.86666667 0.73904762 Tổng 41 39.57142857 Cv (%) 17.14459 Bảng pt4: Phân tích ANOVA chiều cao lan sau 10 tuần cấy Nguồn Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F biến động phương bình phương Nghiệm 13.89285714 2.31547619 2.91 thức Sai số 35 27.87500000 0.79642857 Tổng 41 41.76785714 Cv (%) 17.47412 P 0.0092 P 0.0155 P 0.0209 37 Bảng pt5: Phân tích ANOVA chiều cao lan sau 12 tuần cấy Nguồn Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F biến động phương bình phương Nghiệm 16.75000000 2.79166667 3.90 thức Sai số 35 25.08333333 0.71666667 Tổng 41 41.83333333 Cv (%) 15.87303 Bảng pt6: Phân tích ANOVA chiều cao lan sau 14 tuần cấy Nguồn Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F biến động phương bình phương Nghiệm 21.15476190 3.52579365 5.86 thức Sai số 35 21.04166667 0.60119048 Tổng 41 42.19642857 Cv (%) 14.18968 Bảng pt7: Phân tích ANOVA chiều cao lan sau 16 tuần cấy Nguồn Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F biến động phương bình phương Nghiệm 26.52571429 4.42095238 8.09 thức Sai số 35 19.11833333 0.54623810 Tổng 41 45.64404762 Cv (%) 12.00825 Bảng pt8: Phân tích ANOVA số lan sau tuần cấy Nguồn Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F biến động phương bình phương Nghiệm 7.33333333 1.22222222 2.82 thức Sai số 35 15.16666667 0.43333333 Tổng 41 22.50000000 Cv (%) 14.62846 P 0.0044 P 0.0003 P