(Tiểu luận) bước đầu khảo sát quy trình chiết xuất cao giàu alcaloid từ vỏ cây thừng mực lá to (holarrhena antidysenterica (l ) wall )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC  TRẦN NGỌC ÁNH BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO GIÀU ALCALOID TỪ VỎ CÂY THỪNG MỰC LÁ TO (Holarrhena antidysenterica (L.) Wall.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2021 h ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC  TRẦN NGỌC ÁNH BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO GIÀU ALCALOID TỪ VỎ CÂY THỪNG MỰC LÁ TO (Holarrhena antidysenterica (L.) Wall.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: QH2016.Y NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN VĂN TÀI ThS LÊ ANH TUẤN HÀ NỘI - 2021 h LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp hồn thành khoa Hóa Thực vật - Viện Dược liệu Trung Ương Với lòng biết ơn sâu sắc em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Trường Đại Học Y Dược - Đại Học Quốc Gia Hà Nội Viện Dược liệu tạo điều kiện thuận lợi cho em thực khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến TS Nguyễn Văn Tài ThS Lê Anh Tuấn định hướng, quan tâm giúp đỡ em hoàn thành đề tài Đồng thời em chân thành cảm ơn TS Lê Thành Nghị, CN Phùng Như Hoa tất thầy cô, anh chị bạn Khoa Hóa Thực Vật Viện Dược liệu tận tình giúp đỡ, động viên, truyền đạt kinh nghiệm quý báu trình xây dựng, triển khai bước phân tích kết suốt trình em thực đề tài đơn vị Bên cạnh đó, em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô truyền đạt kiến thức quý báu suốt năm theo học trường Những kiến thức không giúp em có kiến thức hồn thành khóa luận mà cịn hành trang cho em vững bước chặng đường tương lai Cuối em xin gửi lời biết ơn đến gia đình, bạn bè ln động viên khích lệ em học tập sống Em xin chân thành cảm cảm ơn! Hà Nội, tháng 05 năm 2021 Sinh viên Trần Ngọc Ánh h DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng Anh Diễn giải ACN Acetonitril Acetonitril o Độ Celcius C Dung môi : dược liệu DM/DL EtOAc Ethyl Acetat Ethyl Acetat EtOH Ethanol Ethanol MeOH Methanol Methanol HPLC High Perfomance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography SKĐ Sắc kí đồ tt:tt Thể tích : thể tích kl:tt Thin layer chromatography Khối lượng : thể tích TLC Sắ c ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo h MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Thừng mực to 1.1.1 Tổng quan thực vật học 1.1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.1.2 Phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học Thừng mực to 1.1.2.1 Alcaloid 1.1.2.2 Chất nhựa 1.1.2.3 Chất gôm 1.1.2.4 Các chất vô 1.1.3 Tác dụng dược lý Thừng mực to 1.1.3.1 Tác dụng chống tiêu chảy 1.1.3.2 Tác dụng kháng khuẩn 1.1.3.3 Tác dụng điều trị tiểu đường 1.1.3.4 Tác dụng khác 1.1.4 Một số sản phẩm Thừng mực to 1.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập, tinh chế, định tính, định lượng Conessin từ dược liệu 1.2.1 Chiết xuất alcaloid toàn phần từ vỏ thân Thừng mực to 1.2.2 Phân lập Conessin từ alcaloid toàn phần 1.2.3 Một số phương pháp định tính, định lượng Conessin 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tượng, nguyên liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 12 2.1.1 Đối tượng 12 2.1.2 Nguyên vật liệu, dụng cụ, thiết bị 12 2.1.3 Hóa chất, dung môi 12 h 2.2 Phương pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Khảo sát quy trình chiết xuất, làm giàu alcaloid từ vỏ Thừng mực to 13 2.2.1.1 Khảo sát quy trình chiết xuất cao tổng 13 2.2.1.2 Khảo sát quy trình làm giàu alcaloid từ cao tổng 15 2.2.2 Định lượng alcaloid phương pháp HPLC 15 2.2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng alcaloid xác định tạp chất phương pháp HPLC 15 2.2.2.2 Thẩm định phương pháp phân tích 16 2.2.2.3 Xây dựng đường chuẩn công thức 16 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 17 3.1 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu 17 3.2 Khảo sát phương pháp chiết số lần chiết 20 3.3 Khảo sát loại dung môi chiết 23 3.4 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ DM/DL 28 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO h DANH MỤC BẢNG Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với dược liệu không làm ẩm NH3 19 Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với dược liệu có làm ẩm NH3 19 Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to (PP1) 21 Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to (PP2) 22 Bảng Phần trăm khối lượng cao tổng 23 Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPA 25 Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPB 26 Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPC 26 Bảng Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPD 27 Bảng 10 So sánh hiệu suất trung bình chiết xuất cao tổng phương pháp 27 Bảng 11 Hiệu suất chiết với tỷ lệ MD/DL: 30/1; 24/1; 24/1 30 Bảng 12 Hiệu suất chiết với tỷ lệ MD/DL: 10/1; 8/1; 8/1 31 Bảng 13 Hiệu suất chiết với tỷ lệ MD/DL: 7/; 5/1; 5/1 31 Bảng 14 So sánh hiệu suất chiết tỷ lệ MD/DL 31 h DANH MỤC HÌNH Hình Ảnh Thừng mực to lúc hoa Hình Ảnh cành mang hoa Thừng mực to Hình Conessin Hình Isoconessimin Hình Holadysenterin Hình Kurchessin Hình Sản phẩm chứa cao vỏ thân Thừng mực to Hình Ảnh TLC so sánh alcaloid từ dịch chiết MeOH chất chuẩn Conessin 17 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ Sơ đồ chiết xuất cao tổng 33 h MỞ ĐẦU Với vị trí địa lý gần vành đai nhiệt đới, Việt Nam có hệ sinh thái thực vật phong phú Theo số tài liệu nghiên cứu: nước ta có 12.000 lồi thực vật bậc cao thuộc 2.500 chi 300 họ Trong có 4.000 lồi thực vật sử dụng làm thuốc chữa bệnh [1] Trải qua hàng ngàn năm tồn phát triển loài người Nhân dân Việt Nam nhân dân nhiều nước khác giới tích lũy, lưu truyền kinh nghiệm phòng, chữa bệnh cỏ Tuy nhiên thuốc phần lớn phụ thuộc vào kinh nghiệm dân gian mà chưa nghiên cứu kỹ để có sở khoa học việc sử dụng chúng Xu hướng sử dụng thuốc có nguồn gốc thảo dược ngày tăng Việt Nam nước khác giới Hướng nghiên cứu tìm hợp chất, làm giàu hợp chất có hoạt tính sinh học từ dược liệu nhiều nhà khoa học quan tâm Cây Thừng mực to mọc hoang ven triền núi nhiều nơi nước ta số nước khu vực Đông Nam Á Từ lâu nhân dân sử dụng vỏ để chữa lỵ amip Tuy nhiên, sản phẩm từ dược liệu thường có chất lượng khơng ổn định Vì nên việc điều chế cao chiết có chất lượng đảm bảo đánh giá hàm lượng hoạt chất cao cần thiết để bào chế thuốc có hiệu Với mong muốn góp phần xác định hàm lượng thành phần hợp chất alcaloid vỏ thân Thừng mực to kiểm soát chất lượng sản phẩm thực đề tài: “Bước đầu khảo sát nghiên cứu quy trình chiết xuất cao giàu alcaloid từ vỏ Thừng mực to’’ với mục tiêu: - Xây dựng quy trình chiết xuất cao giàu alcaloid từ vỏ Thừng mực to - Xác định hàm lượng alcaloid cao h CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Thừng mực to 1.1.1 Tổng quan thực vật học 1.1.1.1 Vị trí phân loại Tên khoa học: Holarrhena antidysenterica (L.) Wall., thuộc họ Trúc đào - Apocynaceae Tên thông thường: Thừng mực to Tên khác: Mức hoa trắng, Mộc hoa trắng, Sừng trâu, Mộc vài (Tày), Xi chào (K’ Ho), Hồ liên Tên nước ngoài: Coneru (Anh), Vatsaka (Sanskrit) [21] 1.1.1.2 Phân bố Thừng mực to phân bố rải vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Châu Á Châu Phi Cây tìm thấy Myanmar, Malaysia, Nam Trung Quốc, Việt Nam, Srilanka, Pakistan, Nepal Ở nước ta Thừng mực to mọc hoang tỉnh miền núi trung du Cao Bằng, Bắc Giang, n Bái, Lạng Sơn, Hịa Bình, Gia Lai, Kon Tum, tập trung nhiều Đắk Lắk Nghệ An [3,4,7,8,10] 1.1.1.3 Đặc điểm thực vật Thừng mực to thân gỗ, có chiều cao lên đến 13m chu vi thân lên đến 1,1m Cành non dẹt, nhẵn bóng Cành già trịn nhẵn, màu nâu nhạt, có nốt sần nhỏ màu trắng Lá mọc đối xứng, có cuống ngắn, khơng có mọc kèm, hình bầu dục đầu tù hay nhọn, đáy tròn nhọn, dài 12 - 15 cm, rộng - cm, mặt bóng, màu xanh lục nhạt, mặt có lơng nhỏ mịn gân rõ Hoa màu trắng, thơm, mọc kẽ hay đầu cành, dài -10 cm; đài răng, có lơng lưng; tràng cánh trịn đầu, ống tràng dài cm, thắt họng, nhị đính gần phía gốc ống tràng, nhị có lơng, bao phấn hẹp, vịi nhụy dày h Khối lượng cao thu PP1 khảo sát thống kê bảng sau: Bảng 5: Phần trăm khối lượng cao tổng Chiết hồi lưu với dung môi MeOH S S T T Lượng dược liệu đem chiết Khối lượng cao tổng sau lần chiết (g) Phần trăm (%) Khối lượng cao tổng sau lần chiết (g) Phần trăm (%) Khối lượng cao tổng sau lần chiết (g) Phần trăm (%) (g) 2,06 0,248 51,56 0,372 77,34 0,434 90,23 2,01 0,236 51,30 0,356 77,39 0,415 90,21 2,03 0,250 51,54 0,377 77,73 0,439 90,52 Trung bình 0,245 51,47 0,368 77,48 0,429 90,32 Bàn luận: Số liệu từ bảng cho thấy tổng khối lượng cao tổng trung bình sau lần chiết 0,429g, chiếm 90,32 ± 0,03% so với khối lượng cao thu sau lần chiết Khảo sát phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC) (Hình 8) cho thấy lượng alcaloid lần lần không đáng kể Kết luận: Từ kết khảo sát trên, số lần chiết xuất phù hợp lần liên tiếp 3.3 Khảo sát loại dung mơi chiết Dung mơi có ảnh hưởng lớn tới hàm lượng hoạt chất chiết được, việc khảo sát loại dung mơi chiết quan trọng Hiện sử dụng MeOH hỗn hợp EtOH - H2O sản xuất  Chiết hồi lưu với dung môi MeOH (PPA) 23 h - Nguyên liệu: Cân xác khoảng 2g dược liệu xay nhỏ dạng bột thô, độ ẩm 4,95 ± 0,02 % làm ẩm NH3, sau dàn tơi làm khô - Dung môi: 52ml MeOH - Tỷ lệ dung môi/dược liệu: 10/1; 8/1; 8/1 (ml/g) tương ứng cho lần chiết thứ nhất, thứ hai lần thứ - Điều kiện: nhiệt độ 85 oC thời gian tương ứng giờ; - Lọc dịch chiết, bỏ phần bã Gộp dịch chiết, đem cô quay áp suất giảm sấy tủ sấy hút chân không đến khối lượng không đổi  Chiết hồi lưu với dung mơi Ethanol 70% (PPB) - Ngun liệu: Cân xác khoảng 2g dược liệu xay nhỏ dạng bột thô, độ ẩm 4,95 ± 0,02 % làm ẩm NH3, sau dàn tơi làm khơ - Dung môi: 52ml Ethanol 70% - Tỷ lệ dung môi/dược liệu: 10/1; 8/1; 8/1 (ml/g) tương ứng cho lần chiết thứ nhất, thứ hai lần thứ - Điều kiện: nhiệt độ 85 oC thời gian tương ứng giờ; - Lọc dịch chiết, bỏ phần bã Gộp dịch chiết, đem cô quay áp suất giảm sấy tủ sấy hút chân không đến khối lượng không đổi  Chiết hồi lưu với dung môi Ethanol 50% (PPC) - Nguyên liệu: Cân xác khoảng 2g dược liệu xay nhỏ dạng bột thô, độ ẩm 4,95 ± 0,02 % làm ẩm NH3, sau dàn tơi làm khô - Dung môi: 52ml Ethanol 50% - Tỷ lệ dung môi/dược liệu: 10/1; 8/1; 8/1 (ml/g) tương ứng cho lần chiết thứ nhất, thứ hai lần thứ 24 h - Điều kiện: nhiệt độ 85 oC thời gian tương ứng giờ; - Lọc dịch chiết, bỏ phần bã Gộp dịch chiết, đem cô quay áp suất giảm sấy tủ sấy hút chân không đến khối lượng không đổi  Chiết hồi lưu với nước (PPD) - Nguyên liệu: Cân xác khoảng 2g dược liệu xay nhỏ dạng bột thô, độ ẩm 4,95 ± 0,02 % - Dung môi: 104ml nước - Tỉ lệ dung môi/dược liệu: 20/1; 16/1; 16/1 (ml/g) tương ứng cho lần chiết thứ nhất, thứ hai lần thứ - Điều kiện: nhiệt độ 85 0C thời gian tương ứng giờ; - Lọc dịch chiết, bỏ phần bã Gộp dịch chiết, đem cô quay áp suất giảm sấy tủ sấy hút chân không đến khối lượng không đổi Với phương pháp thực chiết xuất lần, lần với 2g dược liệu xay nhỏ sấy khô Xác định lượng cao tổng thu phương pháp cân Tính hiệu suất thu phương pháp Bảng 6: Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPA Khối lượng dược liệu đem chiết (g) Khối lượng cao tổng (g) Hiệu suất (%) 2,06 0,434 22,16 2,01 0,415 21,72 2,03 0,439 22,75 STT PPA 22,21 ± 0,01 Trung bình 25 h Bảng 7: Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPB Khối lượng dược liệu đem chiết (g) Khối lượng cao tổng (g) Hiệu suất (%) 2,02 0,421 24,68 2,01 0,465 24,33 2,06 0,458 23,40 STT PPB Trung bình 24,13 ± 0,02 Bảng 8: Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPC Khối lượng dược liệu đem chiết (g) Khối lượng cao tổng (g) Hiệu suất (%) 2,03 0,432 22,39 2,07 0,451 22,92 2,04 0,427 22,02 STT PPC Trung bình 22,44 ± 0,03 26 h Bảng 9: Hiệu suất chiết cao tổng từ vỏ thân Thừng mực to với phương pháp chiết PPD Khối lượng dược liệu đem chiết (g) Khối lượng cao tổng (g) Hiệu suất (%) 2,02 0,459 23,90 2,05 0,450 23,09 2,07 0,461 23,43 STT PPD Trung bình 23,47 ± 0,02 Bảng 10: So sánh hiệu suất trung bình chiết xuất cao tổng phương pháp STT Phương pháp Hiệu suất trung bình (%) PPA 22,21 ± 0,01 PPB 24,13 ± 0,02 PPC 22,44 ± 0,03 PPD 23,47 ± 0,02 Bàn luận: Thông thường, EtOH MeOH cho dung mơi có khả chiết kiệt hàm lượng chất dược liệu Tuy nhiên quy mơ lớn, MeOH ứng dụng nhiều độc hại EtOH dung môi thông dụng rẻ tiền độc hại nên thường sử dụng Các dung môi EtOH 70%, EtOH 50% chí H2O hay sử dụng cơng nghiệp tùy theo mục đích nhu cầu cụ thể Vì tiến hành khảo sát thêm dung môi để so sánh - Chiết hồi lưu với dung môi MeOH (PPA): 27 h Phương pháp thu cao tổng với hiệu suất trung bình 22,21 ± 0,01% Là phương pháp có hiệu suất chiết tương đối cao, hàm lượng Conessin khảo sát phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC) lớn Tuy nhiên, lượng tạp nhiều, gây khó khăn cho bước phân lập - Chiết hồi lưu với dung môi Ethanol 70% (PPB): Phương pháp thu cao tổng với hiệu suất trung bình 24,13 ± 0,02% Là phương pháp có hiệu suất chiết cao nhất, lượng Conessin khảo sát phương pháp sắc kí mỏng (TLC) lớn - Chiết hồi lưu với dung môi Ethanol 50% (PPC): Phương pháp thu cao tổng với hiệu suất trung bình 22,44 ± 0,03% Hiệu suất chiết cao, hàm lượng Conessin khảo sát phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC) thấp Mặc dù dung mơi có giá thành thấp hơn, nhiên hiệu chiết xuất không cao - Chiết hồi lưu với nước (PPD): Phương pháp thu lượng cao tổng với hiệu suất trung bình 23,47 ± 0,02% Khảo sát phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC) cho thấy lượng tạp nhiều Mặc dù tỷ lệ DM/DL gấp lần so với phương pháp hiệu suất trung bình không cao nhiều (cao 1,26% so với chiết MeOH) Kết luận: Từ kết ta thấy Ethanol 70% dung mơi thích hợp để lựa chọn chiết mặt kinh tế, khả thu hồi, tái sử dụng hiệu suất chiết Dung môi dùng cho khảo sát 3.4 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ DM/DL (ml/g) Tỷ lệ DM/DL (ml/g) ảnh hưởng lớn đến hiệu suất chiết Nếu sử dụng q dung mơi không chiết kiệt hoạt chất Tuy nhiên sử dụng nhiều dung mơi lãng phí kéo dài thời gian thu hồi dung môi, thời gian sấy cao 28 h Do cần lựa chọn tỷ lệ DM/DL thích hợp Chúng tơi thiết kế thí nghiệm để so sánh kết khối lượng cao tổng thu chiết dược liệu phương pháp chiết hồi lưu với tỷ DM/DL khác nhau:  Tỷ lệ DM/DL: 30/1; 24/1; 24/1 - Nguyên liệu: Cân xác khoảng 2g dược liệu xay nhỏ dạng bột thô, độ ẩm 4,95 ± 0,02 % làm ẩm NH3, sau dàn tơi làm khô - Dung môi: 156 ml Ethanol 70% - Tỷ lệ dung môi/dược liệu: 30/1; 24/1; 24/1 (ml/g) tương ứng cho lần chiết thứ nhất, thứ hai lần thứ - Điều kiện: nhiệt độ 85 0C thời gian tương ứng giờ; - Lọc dịch chiết, bỏ phần bã Gộp dịch chiết, đem cô quay áp suất giảm sấy tủ sấy hút chân không đến khối lượng không đổi  Tỷ lệ DM/DL: 10/1; 8/1; 8/1 - Nguyên liệu: Cân xác khoảng 2g dược liệu xay nhỏ dạng bột thô, độ ẩm 4,95 ± 0,02 % làm ẩm NH3, sau dàn tơi làm khơ - Dung mơi: 52 ml Ethanol 70% - Tỷ lệ dung môi/dược liệu: 10/1; 8/1; 8/1 (ml/g) tương ứng cho lần chiết thứ nhất, thứ hai lần thứ - Điều kiện: nhiệt độ 85 0C thời gian tương ứng giờ; - Lọc dịch chiết, bỏ phần bã Gộp dịch chiết, đem cô quay áp suất giảm sấy tủ sấy hút chân không đến khối lượng không đổi  Tỷ lệ DM/DL: 7/1; 5/1; 5/1 29 h - Nguyên liệu: Cân xác khoảng 2g dược liệu xay nhỏ dạng bột thô, độ ẩm 4,95 ± 0,021% làm ẩm NH3, sau dàn tơi làm khơ - Dung môi: 34 ml Ethanol 70% - Tỷ lệ dung môi/dược liệu: 7/1; 5/1; 5/1 (ml/g) tương ứng cho lần chiết thứ nhất, thứ hai lần thứ - Điều kiện: nhiệt độ 85 0C thời gian tương ứng giờ; - Lọc dịch chiết, bỏ phần bã Gộp dịch chiết, đem cô quay áp suất giảm sấy tủ sấy hút chân không đến khối lượng không đổi Với phương pháp thực chiết xuất lần, lần với 2g dược liệu xay nhỏ sấy khô Xác định lượng cao tổng thu phương pháp cân Tính hiệu suất phương pháp Bảng 11: Hiệu suất chiết với tỷ lệ MD/DL: 30/1; 24/1; 24/1 Khối lượng dược liệu đem chiết (g) Khối lượng cao tổng (g) Hiệu suất (%) 2,03 0,484 25,08 2,07 0,479 24,34 2,03 0,473 24,51 STT Tỷ lệ DM/DL: 30/1; 24/1; 24/1 Trung bình 24,64 ± 0,03 30 h Bảng 12: Hiệu suất chiết với tỷ lệ MD/DL: 10/1; 8/1; 8/1 Khối lượng dược liệu đem chiết (g) Khối lượng cao tổng (g) Hiệu suất (%) 2,02 0,421 24,68 2,01 0,465 24,33 2,06 0,458 23,40 STT Tỷ lệ DM/DL = 10/1; 8/1; 8/1 Trung bình 24,13 ± 0,02 Bảng 13: Hiệu suất chiết với tỷ lệ MD/DL: 7/; 5/1; 5/1 Khối lượng dược liệu đem chiết (g) Khối lượng cao tổng (g) Hiệu suất (%) 2,08 0,269 13,60 2,04 0,257 13,25 2,03 0,271 14,05 STT Tỷ lệ DM/DL: 7/; 5/1; 5/1 13,63 ± 0,01 Trung bình Bảng 14: So sánh hiệu suất chiết tỷ lệ DM/DL STT Tỷ lệ DM/DL Hiệu suất trung bình (%) 30/1; 24/1; 24/1 24,64 ± 0,03 10/1; 8/1; 8/1 24,13 ± 0,02 7/; 5/1; 5/1 13,63 ± 0,01 31 h Bàn luận: Khi chiết dược liệu với tỷ lệ DM/DL tăng hiệu suất chiết tăng Tuy nhiên tăng tỷ lệ DM/DL: 30/1; 24/1; 24/1 tức gấp lần so với tỷ lệ DM/DL: 10/1; 8/1; 8/1 hiệu suất không tăng đáng kể (chỉ tăng 0,51%) Kết luận: Vì tỷ lệ DM/DL chúng tơi lựa chọn DM/DL: 10/1; 8/1; 8/1 32 h KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận: Sau thực đề tài: “Bước đầu khảo sát nghiên cứu quy trình chiết xuất cao giàu alcaloid từ vỏ Thừng mực to’’, chúng tơi tìm quy trình chiết xuất cao tổng từ vỏ Thừng mực to phương pháp đánh giá khối lượng cắn thu (bằng phương pháp cân) sơ bán định lượng alcaloid (bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC)): - Kích thước dược liệu: xay nhỏ dạng bột thô (1 - mm) - Xử lý dược liệu: làm ẩm NH3 - Dung môi chiết: EtOH 70% - Tỷ lệ DM/DL (ml/g): 10/1; 8/1; 8/1 - Thời gian chiết lần chiết liên tiếp mẫu dược liệu là: 2h; 2h; 2h - Nhiệt độ chiết: 850C - Hiệu suất trung bình: 24,13 ± 0,02% Sơ đồ 1: Quy trình chiết xuất cao tổng 33 h Đề xuất: - Tiếp tục nghiên cứu quy trình định lượng alcaloid phương pháp HPLC - Tiếp tục nghiên cứu quy trình làm giàu alcaloid từ cao tổng - Khảo sát tính ổn định triển khai quy mô lớn 34 h TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Như, Nguyễn Tập & Trần Toàn; (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Bộ Y tế (2007), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm, Tập 1, Nxb Y học, Hà Nội, 146-199 Võ Văn Chi (2001), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Cơng nghệ, Hà Nội Phạm Hồng Hộ (2000), Cây cỏ Việt nam Nhà xuất Trẻ tập II, Tr 683-692 Phạm Thanh Kỳ, Chu Đình Kính, Phí Tùng Lâm (2006), “Phân lập nhận dạng conessin norconessin vỏ Mức hoa trắng thu hái Hải Dương”, Tạp chí dược liệu, 11 (1), 6-8 Phí Tùng Lâm (2005), Nghiên cứu dược liệu Mức hoa trắng thu hái Chí Linh, Hải Dương, Luận văn Thạc sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội, Tr 182-184 Trần Huy Thái, Phùng Tuyết Hồng, Nguyễn Quang Hưng (2007), “Một số kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh thái khả nhân giống, phát triển Mộc hoa trắng (Holarrhena pubescens Wall.ex G.Don) Việt Nam”, Tạp chí Dược học, 373, 19-23 h Trần Huy Thái, Nguyễn Quang Hưng, Phan Văn Kiệm, Châu Văn Minh, Nguyễn Hải Đăng, Nguyễn Xuân Cường (2006), “Các hợp chất alcaloid steroid từ vỏ Mộc hoa trắng (Holarrhena pubescens Buch Harm) Wall.ex.G.Don”, Tạp chí Dược học, 362, 24-27 10 Viện dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập II, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, HN, Tr 325 - 329, 721 - 726 11 Lưu Minh Xư (1973), Nghiên cứu thuốc chữa lỵ amip Holamin, khoá luận tốt nghiệp dược sĩ đại học Tiếng Anh 12 Akhtar P., et al (2011), “Development of Quality Standards of Holarrhenaantidysenterica (Linn.) Bark”, Recent Research in Science and Technology, (1), 73-80 13 Ali KM, Chatterjeea K, Dea D, Janaa K, Beraa TK, Ghosha D Inhibitory effect of hydro-methanolic extract of seed of Holarrhena Antidysenterica on alpha-glucosidase activity and postprandial blood glucose level in normoglycemic rat Journal of Ethnopharmacology.2011; 135: 194–196 14 Chakraborty A., Brantner A H (1999), “Antibacterial steroid alkaloids from the stem bark of Holarrhena pubescens”, J Ethnopharmacol., 68 (1-3), 339-344 15 Garg S., Bhutani K.K (2008), “Chromatographic Analysis of Kutajarista – an Ayurvedic Polyherbal Formulation”, Phytochemical Analysis, 19, 323 - 328 16 Gopal V., Chauhan M G., “Suppliment to Cultivation and Utilization of Medicinal Plants,” ed by Handa S S., Kaul M K., Regional Research Laboratory, Jammu-Tawi, 2006 h 17 Houghton P J., Dias Diogo M L (1996), “The conessine content of Holarrhena pubescens from Malawi”, Pharmaceutical Biology, (34), 305-307 18 Kaur A.D., Ravichandran V., Jain P.K., Agrawal R.K (2008), “Highperformance thin layer chromatography method for estimation of conessine in herbal extract and pharmaceutical dosage formulations”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 46, 391 - 394 19 Kuma N., Singh B., Bhandari P., Gupta A P., Kaul V K (2007), “Steroidal Alkaloids from Holarrhena antidysenterica (L.), Wall”, Chemical & Pharmaceutical Bulletin 55 (6), 912 - 914 20 Lalla J K., Hamrapurkar P D., Parikh M K (2002), “Simple and Rapid TLC Method for Identification of Holarrhena antidysenterica Wall Bark and its substituent Wrightia tinctoria R P Bark”, Journal of Planar Chromatography - Modern TLC, (15), 226 - 229 21 Mrinal, N S (2018) A Review on Pharmacological Aspects of Holarrhena antidysenterica Scholars Academic Journal of Pharmacy, (12), 488-492 22 Sarker S.D., Latif Z., Gray A.I (2006), Natural Products Isolation, Second Edition, Humana Press, New Jersey, 27-46, 77-117, 275-297 23 Umashanker KPd, Chandra S, Sharma J Antidiabetic Efficacy Of Ethanolic Extract of Holarrhena Antidysenterica Seeds in Streptozotocin - Induced Diabetic Rats and Its influence on certain Biochemical Parameters Journal of Drug Delivery & Therapeutics 2012; 2(4); 159162 24 Waksmundzka H M., Sherma J., Kowalska T (2008), Thin Layer Chromatography in Phytochemistry, CRC Press, Florida, 3-15 h